REPÚBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA

MINISTERIO DEL PODER POPULAR PARA LA EDUCACIÓN SUPERIOR

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL SUR DEL LAGO
“UNESUR”
PROGRAMA: INGENERÌA DE ALIMENTOS
MATERIA: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS

MÈTO
DOS
BASA
DOS
EN
PRUE
AUTOR:
NINOSKA RIVERA
C.I: 25.310.400

BAS PROFESORA: YOSIBEL MORA

BIOQ
UÌMI SANTA BÁRBARA DE ZULIA, 12 DE FEBRERO DE 2016.

CAS
 INDICE GENERAL DE CONTENIDOS

INTRODUCCION
DESARROLLO
MÉTODOS BASADOS EN PRUEBAS BIOQUÍMICAS
LAS PRUEBAS
IMVIC
ÍNDICE ANALÍTICO DE PERFIL
PRUEBAS RÁPIDAS, CON LECTURA EN MENOS DE 6H
Β-GALACTOSIDASA (ONPG)
AMINOPEPTIDASA: PYR. LA LPIRROLIDONIL-Β-NAFTILAMIDA
LAP
UREASA
INDOL
PRUEBAS LENTAS, CON LECTURA DE 18 A 48H
OXIDO-FERMENTACIÓN
REDUCCIÓN DE NITRATOS
ROJO DE METILO
CIDOMIXTA.
VOGES-PROSKAUER
AGAR HIERRO DE KLIGLER
FERMENTACIÓN DE AZÚCARES
HIDROLISIS DE LA ESCULINA
COAGULASA
FENILALANINA-DESAMINASA
ADNASA
HIDROLISIS DE LA GELATINA
DESCARBOXILASAS
LIPASA
LECITINASA
UTILIZACIÓN DE CITRATO
UTILIZACIÓN DE MALONATO
PRUEBA DE CAMP
PRUEBAS BASADAS EN LA RESISTENCIA A CIERTAS SUSTANCIAS
OPTOQUINA
BACITRACINA
SOLUBILIDAD EN BILIS
CRECIMIENTO EN CALDO HIPERSALINO
REVISION BIBLIOGRAFICA
CONCLUSION
BIBLIOGRAFIA
ANEXOS

INDICE DE CUADROS O TABLAS

MICROORGANISMOS UTILIZADOS EN LAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS

RESULTADOS EXPERIMENTALES
OXIDASA
CATALASA
COAGULASA
INDOL
AGAR CITRATO
VOGUES-PROSKAUER
ROJO METILO
LIA
MIO
TSI.
 INDICE DE ANEXOS

FIGURA 1. PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA LA CARACTERIZACIÓN

FISIOLÓGICA DE BACTERIAS.

FIGURA 2. GALERIAS API 20E (BIOMÉRIEUXMR) PARA LA

CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA RÁPIDA DE ENTEROBACTERIAS.
 INTRODUCCION

Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos

aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos
permiten identificar distintos microorganismos presentes.

Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la

actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en
un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no. Una de la
tareas fundamentales del laboratorio de microbiología es la aplicación de una
metodología precisa que permita la identificación de los microorganismos
implicados en procesos clínicos asociados a infecciones o de aquellos que
tienen relación con el hombre.

Con el objetivo de identificar el agente etiológico responsable del

proceso infeccioso y para conocer las implicaciones patogénicas/patológicas,
la Evolución clínica, y aplicar una terapia antimicrobiana Eficaz, un pilar
fundamental en la práctica de la microbiología clínica lo constituye la
asignación de especie a un aislamiento microbiano.

De manera rutinaria, el laboratorio de microbiología aplica técnicas

fenotípicas que permiten lograr los objetivos expuestos. Estos métodos están
consolidados en los laboratorios de microbiología y en la práctica rutinaria
diaria muestran algunas limitaciones que se observan de manera específica
y más evidente para algún tipo de microorganismos. Los métodos
moleculares permiten soslayar algunas de estas limitaciones, si bien su
implementación no es universal en todos los laboratorios. Este hecho se
debe a un coste más elevado y al grado de especialización que se requiere
para su aplicación, por lo que los métodos moleculares suelen estar
centralizados en laboratorios o centros de referencia. En un futuro cercano el
abaratamiento de los costes permitir· un uso más generalizado en los
laboratorios de microbiología.

Las bacterias no muestran una gran variedad de aspectos

morfológicos y por tanto su identificación requiere además de la información
obtenida en el estudio morfológico, realizar otras determinaciones (fisiología,
comportamiento bioquímico, etc.).
 MÉTODOS BASADOS EN PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para

diferenciar bacterias. Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el
microorganismo es capaz de fermentar azúcares, l presencia de enzimas, la
degradación de compuestos, la producción de compuestos coloreados, etc.
Aun bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies
diferentes con base a pruebas bioquímicas. Por ejemplo, las bacterias
entéricas gram negativas, forman un grupo muy grande y heterogéneo cuyo
hábitat natural es el tracto gastrointestinal de humanos y otros animales. Esta
familia, Enterobacteriaceae, incluye a varios patógenos que causan
síndromes diarreicos. Un gran número de ensayos han sido desarrollados de
manera de identificar rápidamente al patógeno, para que posteriormente el
médico, con base al reporte, indique el tratamiento adecuado, o para que los
epidemiólogos puedan localizar la fuente de la infección.

Existen flujogramas, como el que se describe a continuación para la

identificación bacteriana, mediante pruebas bioquímicas de
microorganismos. Por ejemplo, la presencia de un coco bacilo gram negativo,
facultativo, fermentador de glucosa, oxidasa negativo, nos indica la presencia
de una enterobacteria, para determinar su género podemos seguir el
siguiente esquema.
 Los géneros clínicamente más importantes de la familia
Enterobacteriaceae son: Escherichia, Salmonella, Shigella, Citrobacter y
Enterobacter. El género Escherichia, Enterobacter y Citrobacter fermentan la
lactosa con producción de ácido y gas, a diferencia de los géneros
Salmonella y Shigella que no fermentan la lactosa.

Por otra parte, los medicamentos no estériles y/o productos

cosméticos deben estar exentos de microorganismos patógenos tales como:
Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Salmonella spp. Staphylococcus
aureus. Estos productos deben ser controlados para verificar la ausencia de
estos microorganismos. En la USP se describen los procedimientos a seguir
para la identificación de estas bacterias, que se resumen en procedimientos
de enriquecimiento, aislamiento y pruebas bioquímicas para su identificación
final.

El tiempo necesario para la identificación de bacterias puede reducirse

considerablemente con el uso de sistemas miniaturizados basados en
pruebas bioquímicas. Estas herramientas que permiten reducir el tiempo del
reporte, en primer lugar fueron elaborados para bacterias de importancia
médica, tales como las enterobacterias. Estos sistemas han sido diseñados
para realizar varias pruebas bioquímicas simultáneamente y permitir la
identificación en un tiempo más corto. Cada uno de los ensayos, consta de
tubos miniaturizados que contienen el medio de cultivo que se hidratan al
inocularlos con la suspensión bacteriana pura. Las pruebas se clasifican en
grupos; a cada uno de resultados positivos de los ensayos de se le asigna un
determinado valor numérico, obteniéndose un código que corresponderá a
un determinado género o especie en un texto de la base de datos.

Con fines de control microbiológico, la USP indica cuales son las

pruebas bioquímicas mínimas que se requieren para la identificación de los
microorganismos objetables, pero no descarta que se utilicen sistemas
miniaturizados donde se realizan un número mayor de pruebas bioquímicas.
Existen muchas casas comerciales que producen sistemas miniaturizados
para diferentes tipos de microorganismos además de las enterobacterias.
Cada casa fabricante tiene su propia presentación, cálculos, manuales, etc.
Una limitación de este tipo de método de identificación es la aparición de
cepas mutantes y la adquisición de plasmidios que pueden dar origen a
cepas con características diferentes.

Este tipo de método de identificación también ha sido desarrollado

para la identificación de levaduras y de otros hongos.

Las pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven
a la medicina como apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por
bacterias.

LAS PRUEBAS SON

IMVIC
El IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, rojo de metilo, Voges-
Proskauer y citrato. Su finalidad es identificar un organismo del grupo de los
coliformes. La presencia de estos indica contaminacion fecal.

ÍNDICE ANALÍTICO DE PERFIL

API 20NE Sistema de detección a las 24 horas de incubación.
El Índice Analítico de Perfil (Analytical Profile Index o API) es un
conjunto de pruebas bioquímicas que se concentran en muy poco espacio
mediante el uso de pocillos con el reactivo correspondiente ya preparado
para ser usado.
 Se llenan los pocillos siguiendo las instrucciones del fabricante con la
muestra problema. Se sellan los pocillos que sean obligatorios. Se incuba la
estufa a unos 37 °C normalmente. Posteriormente se comprueba los
resultados pasado el tiempo indicado en la tira.

Los resultados se apuntan por cada prueba bioquímica en el casillero

correspondiente, de manera que al final dará un número de varias cifras. Con
este numero se puede buscar en el libro de referencia de las tiras API, el tipo
de bacteria que se tiene en la muestra.

Son muy útiles, capaces de identificar en poco tiempo la bacteria

problema (actualmente unas 600 especies).

Hay varios modelos dependiendo del uso. Por ejemplo, si la muestra es un

coprocultivo se debería usar una tira de enterobacterias. Se pueden resumir
en los siguientes puntos:
•Sustrato (contenido en el medio de cultivo)
•Enzima o vía metabólica (secretada o en el interior del microorganismo)
•Producto
•Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean)
Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas
de las bacterias objeto de identificación.

Algunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que evalúan la

presencia de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundos
hasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su lectura el
crecimiento del microorganismo con una incubación previa de 18 a 48h; a
este grupo pertenecen la mayoría de las pruebas que detectan componentes
metabólicos o aquellas que determinan la sensibilidad de un microorganismo
a una sustancia dada tras cultivo en medios de identificación que contienen
el sustrato a metabolizar. No obstante, algunas de estas pruebas pueden
realizarse de forma rápida tras incubación de unas 2-6h; en general, se trata
de reacciones enzimáticas cromo génicas o pruebas convencionales
modificadas (hay discos o tabletas comercializados con substratos cromo
génicos para uso individualizado).

PRUEBAS QUE SE UTILIZAN EN LA IDENTIFICACIÓN PRELIMINAR,

CON LECTURA INMEDIATA:
Catalasa. La catalasa es un enzima presente en la mayoría de los
microorganismos que poseen citocromos. Las bacterias que sintetizan
catalasa hidrolizan el peróxido de hidrógeno en agua y oxigeno gaseoso que
se libera en forma de burbujas. El principal objetivo de esta prueba es
separar Micrococacceae (positiva) de Streptococcus spp. y Enterococcus
spp. (negativa).

Oxidasa. Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas

oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema
citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo el cual es reducido
por el oxígeno molecular produciéndose agua o peróxido de hidrógeno según
la especie bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como aceptor final de
electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el
sistema citocromooxidasa solo se encuentra en las bacterias aerobias,
algunas anaerobias facultativas y, excepcionalmente, en alguna microaeròfila
(Vibrio fetus), pero las bacterias anaerobias estrictas carecen de actividad
oxidasa. Asimismo, la presencia de oxidasa va ligada a la producción de
catalasa, ya que Ésta degrada el peróxido de hidrógeno que se produce
como consecuencia de la reducción del oxígeno y cuya acumulación es
tóxica.
Pruebas rápidas, con lectura en menos de 6h:
Hidrolisis del hipurato. Demuestra la capacidad de algunas bacterias
para hidrolizar el hipurato de sodio ha sido benzoico y glicina por la acción de
la enzima hipuricasa. Como indicador de la reacción se utiliza ninhidrina.
Esta prueba se utiliza en la identificación de Campylobacter jejuni, Listeria
monocytogenes, Gardnerella vaginalis y Streptococcus agalactiae.

Β-galactosidasa (ONPG).
Esta prueba demuestra la presencia de la enzima β- galactosidasa. Hay
bacterias que a pesar de poseer enzimas que hidrolizan la lactosa (β -
galactosidasas), no pueden actuar sobre ella porque les faltan las enzimas
extracelulares apropiadas (permeasas). Para conocer si un microorganismo
es productor de β-galactosidasa, basta añadir el compuesto org•nico O-
nitrofenil- β-D-galactopiranosido (ONPG) que es incoloro.

Si la bacteria posee las enzimas hidrolizantes (β-galactosidasa), el

compuesto se transforma enortonitrofenol, un derivado cromo génico de color
amarillo. Todas las bacterias fermentadoras lentas de la lactosa son β –
galactosidasa positivas.

Aminopeptidasa: PYR. La Lpirrolidonil-β-naftilamida

Sirve como sustrato para la detección de pirrolidonil peptidasa. Se
utiliza principalmente en la identificación de Streptococcus pyogenes y
Enterococcus spp. También en la diferenciación de Staphylococcus
lugdunensis de otros estafilocos coagulasa negativa.

LAP.
Se utiliza para la detección de la enzima leucina aminopeptidasa
(LAP) y es una de las pruebas para la identificación de cocos grampositivos
catalasa negativa; diferencia específicamente los géneros Aerococcus y
Leuconostoc de Streptococcus, Enterococcus, Lactococcus, y Pediococcus.

Ureasa.
Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea
formando dos moléculas de amoniaco por acción del enzima ureasa. Esta
actividad enzimática es característica de todas las especies de Proteus y se
usa sobre todo para diferenciar este género de otras enterobacterias que dan
negativo o positivo retardado. La prueba también se utiliza para diferenciar
Physobacter phenylpyruvicus de Moraxella spp. Helicobacter pylori y
Brucella spp. También hidrolizan la urea. Esta prueba puede ayudar en la
identificación de Cryptococcus spp. que produce un resultado positivo
después de una incubación prolongada.

Indol.
Mediante esta prueba se detecta la liberación de indol en un cultivo
bacteriano. Dicha liberación se debe a la degradación del aminoácido
triptófano mediante el enzima triptofanasa.

PRUEBAS LENTAS, CON LECTURA DE 18 A 48H:

Oxido-Fermentación.
Mediante esta prueba se va a determinar si la utilización de los
hidratos de carbono por parte de un microorganismo se realiza por vía
oxidativa (proceso aeróbico, presencia de oxígeno) o por vía fermentativa
(proceso anaeróbico, ausencia de oxígeno).

REDUCCIÓN DE NITRATOS.
Sirve para determinar la capacidad de un organismo de reducir el
nitrato en nitritos. Se utiliza para asignar bacterias a la familia
Enterobacteriaceae, en la diferenciación de Moraxella catarrhalis del género
Neisseria y en la identificación de bacilos grampositivos aerobios.

ROJO DE METILO.
El rojo de metilo es un indicador de pH. Actúa entre pH 4,2 y 6,3
variando desde rojo (pH 4,2) a amarillo (pH 6,3). Mediante esta prueba se
comprueba la capacidad de un microorganismo de producir y mantener
estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa por
la vía de la fermentación •

CIDOMIXTA.
Se utiliza como parte de la identificación a nivel de especie de los
bacilos entéricos gramnegativos.

VOGES-PROSKAUER.
Permite observar si el microorganismo fermenta la glucosa por la vÌa
butanodiolica. Si es así, se forma un producto intermedio (acetona) que
forma un complejo de color rojizo con el α-naftol. Se usa en la identificación a
nivel de especie de bacilos entéricos gramnegativos, Aeromonas spp., y
Vibrio spp.

AGAR HIERRO DE KLIGLER.

Mediante esta prueba se puede determinar:
a. La capacidad de un microorganismo de metabolizar un hidrato de carbono
específico (en este caso glucosa, lactosa o ambas) incorporado en un medio
de crecimiento básico.
b. Producción o no de gases: CO2 e H2 como productos finales del
metabolismo de los hidratos de carbono.
c. Producción de ácido sulfhídrico (SH2).
 El medio de Kligler contiene como hidratos de carbono la glucosa y la
lactosa. Existe otro medio, el triple sugar iron (TSI) que posee un tercer
hidrato de carbono, la sacarosa.

FERMENTACIÓN DE AZÚCARES.
Las bacterias anaerobias o anaerobias facultativas a menudo
fermentan carbohidratos ácidos orgánicos y gas (H2 o CO2). Estos pueden
detectarse incluyendo en el medio un indicador de pH.

HIDROLISIS DE LA ESCULINA.
Hay microorganismos con capacidad de hidrolizar la esculina en
esculetina y glucosa. La esculetina reacciona con una sal de hierro para
formar un compuesto castaño oscuro o negro. El citrato férrico actúa como
indicador de la hidrolisis de la esculina. Si se añade bilis al medio se inhibe el
crecimiento de la mayoría de microorganismos del género Streptococcus
pero no de la especie Streptococcus bovis y tampoco inhibe el crecimiento
de microorganismos de los géneros Enterococcus y Listeria.

COAGULASA.
Permite determinar la capacidad de coagular el plasma por la acción
de la enzima coagulasa. Se utiliza para diferenciar S. aureus (coagulasa
positivo) de otras especies de Staphylococcus. La prueba de la coagulasa en
tubo se puede leer tras incubación de 4h, pero si es negativa debe incubarse
hasta 24h.

FENILALANINA-DESAMINASA.
Esta prueba determina la capacidad de un microorganismo para
desaminar el aminoácido fenilalanina en ácido fenilpirovico por la actividad
enzimática de la fenilalanina desaminasa, con la consiguiente acidez
resultante. Esta actividad enzimática es característica de todas las especies
de los géneros Proteus, Providencia y Morganella por lo que se utiliza para
separar estos tres géneros de otros géneros de enterobacterias.

ADNASA.
Se basa en la capacidad que poseen ciertas bacterias para hidrolizar
enzimáticamente el ADN produciendo una mezcla de mono y polinucleotidos.

HIDROLISIS DE LA GELATINA.
Esta prueba muestra la capacidad de ciertos microorganismos para
hidrolizar la gelatina a péptidos y aminoácidos, mediante la acción de
enzimas específicas denominadas gelatinasas.

DESCARBOXILASAS.
La descarboxilacion es un proceso en el cual las descarboxilasas
atacan el extremo carboxilo de los aminoacidos, formando la correspondiente
amina. Los tres aminoacidos que se ensayan en la identificación de
enterobacterias son arginina, lisina y ornitina.

La descarboxilación de lisina y ornitina da cadaverina y putrescina

(diaminas), mientras que la descarboxilación de arginina da citrulina por
acción de una dehidrolasa. Esta prueba se debe realizar con un tubo control
que contiene el medio base sin aminoácido. Como la descarboxilacion es
una reacción anaeróbica, se debe cubrir el medio con una capa de aceite
mineral estéril. El proceso se produce en dos etapas: por fermentación de la
glucosa se produce una acidificación del medio (pH < 6,0), apareciendo color
amarillo. La acidificación es necesaria para que ocurra la descarboxilacion.
Este último proceso da lugar a la formación de las aminas que elevan el pH
con el consiguiente viraje del indicador a color violeta.
Esta prueba se utiliza tanto en la identificación de bacilos gramnegativos
como de bacilos y cocos grampositivos.

LIPASA.
Se basa en la capacidad que tienen ciertas bacterias de descomponer
las grasas en ácidos grasos y glicerol, por acción de la enzima lipasa.

LECITINASA.
La prueba de la lecitinasa pone de manifiesto la producción de dicha
enzima por determinados microorganismos, capaces de actuar sobre la
lecitina, sustancia orgánica nitrogenada y fosfatada, contenida principalmente
en la yema de huevo.

UTILIZACIÓN DE CITRATO.
Esta prueba sirve para determinar si un microorganismo es capaz de
utilizar citrato como ˙nica fuente de carbono y compuestos amoniacales
como ˙nica fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una
alcalinización del medio. Entre las enterobacterias estas características se
dan en los siguientes géneros: Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter
y algunas especies de Salmonella. Sin embargo, Escherichia, Shigella,
Yersinia, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi son incapaces de crecer
utilizando citrato como única fuente de carbono.

UTILIZACIÓN DE MALONATO.
Pone de manifiesto la capacidad que poseen determinadas bacterias
de utilizar el malonato de sodio como única fuente de carbono, con la
consiguiente liberación del cation, que en presencia de iones agua produce
alcalinidad. Solamente los microorganismos que pueden usar
simultáneamente malonato de sodio como fuente de carbono y sulfato de
amonio como fuente de nitrógeno son capaces de ejercer una acción tampón
produciendo hidroxido de sodio. El aumento de la alcalinidad resultante hace
que el azul de bromotimol cambie de verde a azul. Los microorganismos
malonato negativos que fermentan glucosa hacen que el indicador cambie de
verde a amarillo. Se utiliza en la diferenciación de especies entre las
Enterobacteriaceae. La mayoría de las especies de Enterobacter y Klebsiella
utilizan malonato de sodio.

PRUEBA DE CAMP.
Sirve principalmente para determinar la capacidad de un
microorganismo para producir una proteína conocida como factor CAMP. La
proteína produce un efecto sinérgico con la β-hemolisina de S. aureus sobre
eritrocitos ovinos y bovinos que se observa como un fenómeno lítico en la
intersección de los dos microorganismos cuando se siembran en proximidad.
Como alternativa se puede utilizar el CAMP inverso. En esta prueba la
hemolisis producida por algunos microorganismos se inhibe por la β-
hemolisina de S. aureus (por ejemplo, la producción de fosfolipasa D de
Arcanobacterium haemolyticum o la fosfolipasa E de Rhodococcus spp.)

PRUEBAS BASADAS EN LA RESISTENCIA A CIERTAS SUSTANCIAS

OPTOQUINA.
El clorhidrato de etilhidroxicupreina (optoquina) inhibe a muy baja
concentracion (5 µg/ml o menos) el crecimiento de S. pneumoniae, mientras
que no afecta al crecimiento de otros Streptococcus alfa-hemolíticos.

BACITRACINA.
Esta prueba puede utilizarse como diagnóstico presuntivo en la
identificación de Streptococcus beta hemolítico del grupo A de Lancefield, ya
que, a diferencia de la mayoría de los estreptococos, suelen ser sensibles a
bajas concentraciones de bacitracina.
SOLUBILIDAD EN BILIS.
Se basa en la capacidad de determinadas especies bacterianas de
lisarse en presencia de sales biliares, las más utilizadas de las cuales son el
taurocolato y el desoxicolato de sodio.

Ambas provocan un descenso de la tensión superficial, que, unido a la

actuación de enzimas auto líticos, destruyen la célula. El efecto de esta
enzima auto lítica se pone de manifiesto sobre colonias de S. pneumoniae
crecidas en medios sólidos, en las que se aprecia una umbilicación central, y
también en colonias mucoides.

CRECIMIENTO EN CALDO HIPERSALINO.

Determina la capacidad de algunos microorganismos de desarrollarse
en medios de cultivo con una concentración de cloruro sódico del 6,5%.

MICROORGANISMOS UTILIZADOS EN LAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MICROORGANISMO FAMILIA TINCION FORMA MOVILIDAD

BACILOS
POSEE
ENTEROBACTE CORTOS,
PSEUDOMONA SPP. GRAM - FLAGELOS
R CURVADOS O
POLARES
RECTOS

ENTEROBACTE BACILOS FLAGELOS

SALMONELLA GRAM -
R CORTOS PERÍTRICOS

ENTEROBACTE BASTONCILLO
SHIGUELLA SPP. GRAM - NO TIENE
R S

BACILOS
ENTEROBACTE CORTOS NO FLAGELOS
ESCHERICHIA COLI GRAM -
R ESPORULADO PERÍTRICOS
S
 STAPHYLOCOCCUS
MICROCACEAE GRAM + COCACEA NO TIENE
AUREUS

Resultados Experimentales
Grupo 1: Sebastián Leyton - Carlos Vera
Grupo 2: Yuri Gálvez - David Fuica
Grupo 3: Graciela Quintero - Carolina
Grupo 4: Carolina Iribarra - Jessica Pizarro
Oxidasa

GRUPO GRUPO GRUPO GRUPO

MICROORGANISMO
1 2 3 4

PSEUDOMONA SPP. + + + +

SALMONELLA + + + +

SHIGUELLA SPP. - - - -

ESCHERICHIA COLI + + + +

STAPHYLOCOCCUS
- - - -
AUREUS

Catalasa

GRUPO GRUPO GRUPO GRUPO

MICROORGANISMO
1 2 3 4

PSEUDOMONA SPP. + + + +

SALMONELLA + + + +

SHIGUELLA SPP. - + - +

ESCHERICHIA COLI + + + +
 STAPHYLOCOCCUS
+ + + +
AUREUS

Coagulasa

GRUPO GRUPO GRUPO GRUPO

MICROORGANISMO
1 2 3 4

STAPHYLOCOCCUS
+ + + +
AUREUS

Indol

GRUPO GRUPO GRUPO GRUPO

MICROORGANISMO
1 2 3 4

ESCHERICHIA COLI + + + +

Agar Citrato

GRUPO GRUPO GRUPO GRUPO

MICROORGANISMO
1 2 3 4

ESCHERICHIA COLI - - - -

Vogues-Proskauer

GRUPO GRUPO GRUPO GRUPO

MICROORGANISMO
1 2 3 4

ESCHERICHIA COLI - - - -

Rojo Metilo
 GRUPO GRUPO GRUPO GRUPO
MICROORGANISMO 1 2 3 4

ESCHERICHIA COLI + + + +

LIA

MICROORGANISMO(S)
GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3 GRUPO 4
DETECTADO(S)

DESCARBOXILACIO DESCARBOXILACIO DESCARBOXILACIO DESCARBOXILACIO

SALMONELLA
N DE ORNITINA N DE ORNITINA N DE ORNITINA N DE ORNITINA

DESCARBOXILACIO DESCARBOXILACIO DESCARBOXILACIO DESCARBOXILACIO

SHIGUELLA SPP.
N DE LISINA N DE LISINA N DE LISINA N DE LISINA

MIO

MICROORGANISMO(S)
GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3 GRUPO 4
DETECTADO(S)

PSEUDOMONA
DESCARBOXILACIO DESCARBOXILACIO DESCARBOXILACIO DESCARBOXILACIO
N DE ORNITINA N DE ORNITINA N DE ORNITINA N DE ORNITINA
SPP.

NO DESCARBOXILA NO DESCARBOXILA NO DESCARBOXILA NO DESCARBOXILA

ST. AUREUS
ORNITINA ORNITINA ORNITINA ORNITINA

TSI

MICROORGANISMO(S)
GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3 GRUPO 4
DETECTADO(S)

SALMONELLA GLUCOSA GLUCOSA GLUCOSA GLUCOSA

FERMENTADA FERMENTADA FERMENTADA FERMENTADA

LACTOSA NI LACTOSA NI LACTOSA NI LACTOSA NI

 SACAROSA SACAROSA SACAROSA SACAROSA

FERMENTADAS FERMENTADAS FERMENTADAS FERMENTADAS

PRODUCCION PRODUCCION PRODUCCION PRODUCCION

DE ACIDO DE ACIDO DE ACIDO DE ACIDO

SULFHIDRICO SULFHIDRICO SULFHIDRICO SULFHIDRICO

GLUCOSA GLUCOSA GLUCOSA GLUCOSA

FERMENTADA FERMENTADA FERMENTADA FERMENTADA

SHIGUELLA SPP. LACTOSA NI LACTOSA NI LACTOSA NI LACTOSA NI

SACAROSA SACAROSA SACAROSA SACAROSA

FERMENTADAS FERMENTADAS FERMENTADAS FERMENTADAS

 REVISION BIBLIOGRAFICA

Según el Dr. Guillermo P. os sistemas miniaturizados API son

métodos rápidos que permiten la identificación de microorganismos a través
de la realización de diferentes pruebas bioquímicas. Estos sistemas
consisten en un dispositivo de plástico con varios microtubos que contienen
diferentes medios de cultivo deshidratados o diferentes sustratos de enzimas
de acuerdo al tipo de prueba que se requiere montar.

Entre algunas de las pruebas bioquímicas que pueden realizarse con

estos sistemas están las pruebas de fermentación de carbohidratos, la
determinación de la producción de H2S, la determinación de la hidrólisis de
la gelatina, entre otras .El Índice Analítico de Perfil (API) son un conjunto de
pruebas bioquímicas que se concentran en muy poco espacio mediante el
uso de pocillos con el reactivo correspondiente ya preparado para ser usado.
Se llenan los pocillos siguiendo las instrucciones del fabricante con la
muestra problema.
 CONCLUSION

El presente trabajo de investigación sobre los métodos basados en

pruebas químicas fue de suma importancia, puesto que por medio del mismo
he adquirir conocimientos que antes de realizarlo no poseía, entre ellos
puedo decir que una identificación bacteriana se puede realizar tras el
estudio de las características tintoriales, morfológicas y bioquímicas de los
microorganismos.

La identificación bioquímica se fundamenta en las características

metabólicas específicas de cada microorganismo, en la detección de la
actividad de ciertas enzimas, etc. Al igual que la mayor parte de los seres
vivos, las bacterias son capaces de modificar el ambiente que las rodea,
captando sustancias necesarias para su multiplicación y liberando al medio
productos de desecho, enzimas, exotoxinas, etc. Las interacciones que cada
tipo bacteriano establece con el entorno son propias y características. Esta
especificidad depende del genotipo de la bacteria y se expresa en un
determinado equipo enzimático. Por ello, la caracterización de dichas
enzimas es una herramienta útil para identificación y clasificación bacteriana.
Con este fin, existe en el mercado una gran variedad de medios de cultivo
diseñados no solo para permitir el crecimiento y la multiplicación de los
microorganismos, sino también para inhibir los de algunos (medios
selectivos) o resaltar determinadas características metabólicas (medios
diferenciales).

Asimismo Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos

aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos
permiten identificar distintos microorganismos presentes. Su sistema de
funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía
metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y
que la bacteria al crecer incorpora o no para realizar las pruebas bioquímicas
se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las
exigencias del microorganismo en estudio entre ellas Ureasa, Indol, entre
otras no mencionadas por el momento. La identificación de un aislamiento
bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de
características y diferentes criterios en la evaluación de similitudes.

Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados, llamadas

pruebas bioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividad
de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un
sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer
transforma o no.
 BIBLIOGRAFIA

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/
08_Tema_12_identificaci%C3%B3n.pdf

http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-
clinica-28-articulo-metodos-identificacion-bacteriana-el-laboratorio-90027188

https://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_bioqu%C3%ADmica

https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/
procedimientosmicrobiologia/seimc-procedimientomicrobiologia37.pdf
 ANEXOS

FIGURA 1. PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA LA CARACTERIZACIÓN

FISIOLÓGICA DE BACTERIAS.
 FIGURA 2. GALERIAS API 20E (BIOMÉRIEUXMR) PARA LA
CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA RÁPIDA DE ENTEROBACTERIAS.