Tecnicas de Identificacion Bacteriana-1-1

TECNICAS DE IDENTIFICACION
BACTERIANA
ASIGNATURA:
ESTUDIO MICROBIOLOGICO I
DOCENTE:
JHON OTINIANO LIÑAN
INTEGRANTES:
NATALY JARA VASQUEZ

LAURA RUIZ SANDOVAL
IDENTIFICACION BACTERIANA
• Se entiende por identificación microbiana al conjunto de
técnicas y procedimientos que se aplican para establecer la
identidad de un microorganismo. Estas técnicas se utilizan en
diferentes áreas, por ejemplo:
• En el área clínica donde es de capital importancia conocer

cuál es el agente causal de la infección que presenta un
paciente, de manera de poder tratarlo.
• En investigación básica donde se aísla un determinado

microorganismo que debe identificarse para comprobar si se
trata de un microorganismo conocido o de uno nuevo para
poder clasificarlo.
CRITERIOS DE IDENTIFICACIÓN
CRITERIO METODOLOGIA DE EJEMPLO
OBSERVACION MACROSCOPICA Observación e inspección de colonias: Disposición, tamaño. Textura,
forma, pigmentos, etc.
OBSERVACION MICROSCOPICA Tinciones: Formas, agrupación, esporas, capsulas, flagelos, etc.

METABOLISMO Bacterias Bioquímicas: Uso de sustrato(oxidación/fermentación),
producción de metabolitos secundarios, etc.
OTRAS PROPIEDADES Resistencia a antibióticos: Antibiograma y anti biotipos, ribotipos,

fagotipos, estudio de las concentraciones mínimas inhibidoras, estudio
de sinergia y antagonismos, etc.
DIAGNOSTICO
• DIAGNOSTICO DIRECTO:
* Se analiza cualquier tipo de muestra
* Se identifican los microorganismos, antígenos y metabolitos.
• DIAGNOSTICO INDIRECTO:
* La muestra estudiada es siempre la sangre.
* Se identifican los anticuerpos frente a los microorganismos.
METODOS DE IDENTIFICACION MICROBIANA
METODOS BASADOS EN CRITERIOS MORFOLOGICOS:
Los rasgos morfológicos (estructurales) han ayudado a los taxonomistas por muchos
años a clasificar organismos. Los organismos superiores tienen rasgos anatómicos tan
diferentes que pueden ser fácilmente utilizados en su clasificación, pero con respecto a
los microorganismos, éstos lucen bajo el microscopio tan similares que se dificulta su
clasificación.
EN CRITERIO MORFOLÓGICO:
• Los rasgos morfológicos (estructurales) han ayudado a los
taxonomistas a clasificar organismos.
• Bajo el microscopio pueden ser tan parecidos dificultándose su
clasificación, aun cuando la morfología celular dice poco sobre las
relaciones filogenética, sigue siendo útil para la identificación
bacteriana
• Características macroscópicas, en función del tamaño, altura de la
colonia, forma, color, olor, textura y grado de adherencia del medio de
cultivo.
• Por ejemplo: la presencia de endosporas y su localización resulta de
mucha utilidad para la identificación de bacilos espurulados.
METODO BASADO EN TINCION DIFERENCIAL
Un examen microscópico de una lámina teñida por medio de gram o de una tinción
diferencial es útil para obtener una información rápida sobre la calidad de un ambiente
clínico. Por otro lado, un médico también puede obtener suficiente información de un
reporte técnico de laboratorio para comenzar el tratamiento apropiado de un paciente.
METODOS BASADOS EN PRUEBAS BIOQUIMICAS
Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias.
Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar
azúcares, la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la producción de
compuestos coloreados, etc. El tiempo necesario para la identificación de bacterias puede
reducirse considerablemente con el uso de sistemas miniaturizados basados en pruebas
bioquímicas. Estas herramientas que permiten reducir el tiempo del reporte, en primer
lugar fueron elaborados para bacterias de importancia médica, tales como las
enterobacterias. Estos sistemas han sido diseñados para realizar varias pruebas bioquímicas
simultáneamente y permitir la identificación en un tiempo más corto
METODOS BASADOS EN TIPIFICACION DE FAGOS
La interacción entre un virus bacteriano (fago) y su célula bacteriana sensible es
sumamente específica, ya que el proceso de adsorción se encuentra mediado por
receptores específicos tanto en el virus como en la célula bacteriana.
METODOS BASADOS EN ENSAYOS SEROLOGICOS
Los métodos serológicos, implican la utilización de preparaciones de inmunoglobulinas
específicas provenientes del suero o de un reactivo, y que pueden ser de gran utilidad en la
identificación microbiana en muestras puras o en muestras biológicas.
Estos métodos son muy útiles en diversas situaciones:
• SISTEMA MINIATURIZADO BASADO EN PRUEBAS BIOQUÍMICAS
• INMUNOFLUORESCENCIA
• INFECCIÓN VIRAL
• ENSAYO DE ELISA TIPO SANDWICH
METODOS BASADOS EN BIOLOGIA
MOLECULAR
• Modernamente adquiere más importancia el uso de métodos basados en biología
molecular donde, a través de procedimientos y reactivos, se pueden detectar
determinadas secuencias de ADN que son propias de un determinado agente
microbiano.
• El método que se está utilizando ampliamente en los laboratorios de diagnóstico

es el PCR (Polymerase Chain Reaction), que se aplica generalmente para la
identificación de- microorganismos que no pueden ser cultivados por los métodos
convencionales. A través de este método, puede aumentarse la cantidad de ADN
hasta niveles detectables mediante electroforesis o mediante sondas de ADN.
• El PCR SE APLICA GENERALMENTE ÁRA LA IDENTIFICACION DE
MICROORGANISMOS QUE NO PUEDEN SER CULTIVADOS POR METODOS
CONVECIONALES.
PROCESO DEL PCR.
• El proceso de PCR, puede resumirse en 4 etapas, que se repiten un n número de veces:
• 1. Separación de las cadenas de ADN, ello se realiza aumentando la temperatura, la cual rompe los enlaces de
hidrógeno que mantiene unidos a las cadenas de ADN.
• 2. Adición de cadenas cortas de polinucleótidos, denominados cebadores, que se unen por

complementariedad de bases a cada una de las cadenas del fragmento de ADN que se desee amplificar. Uno se
une a la cadena 5’ ---3’ y otro a la cadena 3’—5’.
• 3. Disminución de la temperatura para permitir que los cebadores hibridicen con las cadenas de ADN de la
muestra problema, por complementariedad de bases.
• 4. Adición de la ADN polimerasa, los cuatro nucleótidos (ATP, GTP, TTP, CTP) y demás cofactores, para que
tenga lugar la síntesis de la cadena complementaria.
•
5. Repetición de las etapas 1 a 4.
Este proceso se caracteriza por ser exponencial. En cada ciclo
se duplica la región de ADN ubicada entre los cebadores.
EJEMPLOS
• Bacterias: Borrelia burghdoferi, Vibrio cholerae, Helicobacter pylori,
Stahylococcus aureus, Chlamydea trachomatis, Shigella dysenteriae,
Treponema pallidum, Escherichia coli enterotoxinogénica, Mycobacterium
tuberculosis y Legionella pneumonophilia, Campylobacter jejuni.
• Virus: Parvovirus, Herpes-simplex virus, Rotavirus, Papillomavirus, Virus

del dengue, Virus Varicella-Zoster, Virus de la Rubéola, Adenovirus,
Rhinovirus.
• Protozoarios: Plasmodium falciparium, Toxoplasma gondii, Entamoeba

histolyticum, Pneumocystis carinii, Trypnanosoma cru
Cuando se trabaja con organismos que son causantes de enfermedades en el
hombre, siempre es necesario identificarlos, de modo que se puede establecer
diagnósticos y recomendaciones a los pacientes para una adecuada recuperación.
En el laboratorio de microbiología, la labor de identificación bacteriana es una
actividad que se realiza de manera cotidiana. Por ello es que se deben de trabajar
con procedimientos que sean preciosos en la identificación de bacterias. Ya que la
composición bioquímica de las bacterias varia de acuerdo a cada especie, lo que
resulta en que los mismos reactivos y procedimientos no pueden ser utilizados en
los todas las bacterias para su identificación.
Las técnicas que esta teniendo un buen impacto y un incremento en su uso para la
identificación de bacterias, son las técnicas moleculares.

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• En el área clínica donde es de capital importancia conocer

• En investigación básica donde se aísla un determinado

OBSERVACION MICROSCOPICA Tinciones: Formas, agrupación, esporas, capsulas, flagelos, etc.

OTRAS PROPIEDADES Resistencia a antibióticos: Antibiograma y anti biotipos, ribotipos,

• El método que se está utilizando ampliamente en los laboratorios de diagnóstico

• 2. Adición de cadenas cortas de polinucleótidos, denominados cebadores, que se unen por

• Virus: Parvovirus, Herpes-simplex virus, Rotavirus, Papillomavirus, Virus

• Protozoarios: Plasmodium falciparium, Toxoplasma gondii, Entamoeba

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