SELECCIÓN DE UN MÉTODO

ANALÍTICO

CURSO: ANÁLISIS INSTRUMENTAL

PROFESOR: MS QF DAVID RUIDÍAS ROMERO

 Terminología: proceso y técnica analítica

 Características de desempeño de los
instrumentos: parámetros de calidad
Tercera
 Calibración de los métodos instrumentales:
Semana curva de calibración
 Método del estándar externo, adición estándar
y patrón interno

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 Terminología 1
Proceso analítico
Conjunto de operaciones analíticas intercaladas que se realizan entre la muestra y el
resultado.

Técnica analítica
Principio científico adaptado a uno o varios instrumentos, que nos es útil o necesario
para obtener información sobre la composición de la muestra (fluorimetría,
potenciometría etc.)

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 Terminología 2
Método analítico
Adaptación variada de una técnica, para llevar a cabo una medida determinada.
(Pueden existir varios métodos analíticos distintos para determinar el mismo analito
mediante la misma técnica).

Procedimiento analítico
Las instrucciones generales escritas necesarias para utilizar un método.
(Normalmente son normas de carácter oficial Ej. ASTM* D-2914 análisis de en
vino)
Protocolo analítico
Las directrices específicas escritas que recogen los pasos necesarios para desarrollar
el método analítico sin excepción. (Contiene detalles específicos que no recoge el
procedimiento).
*ASTM American Society for Testing & Materials
Ejm: Análisis de sulfas: Técnica por Espectrofotometría. Método de Bratton and
Marshal, Procedimiento, partes.

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 Selección de un método analítico
• La selección de un método analítico
exige definir la naturaleza del
problema analítico, estableciendo:
a) Exactitud y precisión requeridas,
b) Muestra y número disponibles,
c) Intervalo de concentración del
analito,
d) Componentes de la muestra
interferentes en el análisis, y
e) Componentes probables, límites
porcentuales y propiedades de la
matriz.
• Esta información también ha sido
utilizada en la selección del mejor
diseño y los componentes
instrumentales más adecuados.

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 Selección de un método analítico

• El investigador o analista debe

comprender las condiciones acerca
del método de medición, diseño y
los componentes instrumentales
para poder:
a) Seleccionar el instrumento
adecuado para una medición, y

b) Usar efectiva y eficientemente

el instrumento seleccionado.
• «La selección deficiente de un
principio físico en el diseño, o de un
componente; limitará la seguridad,
sensibilidad y utilidad de un
instrumento».

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 Control de variables
Factores que influyen en las
mediciones:
a) Sobre la propiedad que va a
observarse o su medición, y
b) Sobre el funcionamiento seguro del
instrumento.
Se debe considerar entonces:
– Condiciones bajo las cuales se
harán las determinaciones.
– Variables con influencia conocida
sobre las mediciones.
– Variables que deben ser reguladas
y las no reguladas.
«Así todas las variables que afectan el
valor de las propiedades físicas o su
observación, deben ser reguladas o
señalárseles en alguna forma un margen
durante la medición»: Temperatura, presión
atmosférica, ondas sonoras, emanaciones
radiactivas, campos eléctricos o magnéticos.

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 Otros factores y su control
a) Uso de curvas de calibración.
Puede compensar multitud de
factores cuyos efectos no
pueden calcularse con facilidad
o regularse convenientemente.

b) Uso de un testigo.
Puede asumirse que la mayoría
de las influencias perturbadoras
afectan igualmente al testigo y a
la muestra.
• Ejm. en fotometría de absorción
al visible, se utiliza una solución
“Blanco", con la finalidad de
conocer la absorción propia del
material de interés solamente.

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 Características de desempeño de
los instrumentos
Esta tabla proporciona una
lista de Criterios de
desempeño cuantitativos
de varios instrumentos.
Se utilizan para decidir si
un determinado método
instrumental es o no
adecuado para resolver un
problema analítico.
Estas características se
expresan en términos
numéricos que se
denominan parámetros de
calidad.

Criterios numéricos para elegir métodos analíticos

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 Parámetros de calidad
• Para un problema analítico dado,
– Permiten al Químico Farmacéutico reducir la elección de instrumentos
a sólo unos pocos.
– La selección entre estos puede basarse en los criterios cualitativos de
desempeño señalados a continuación:

Otras características a tener en cuenta en la elección del método

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 Precisión
• Para datos analíticos
– Grado de concordancia entre los datos que se obtuvieron de la misma
manera.
– La precisión proporciona una medida del error aleatorio o
indeterminado de un análisis.
– Entre los parámetros de calidad de la precisión se encuentran:

Parámetros de calidad de la
precisión de los métodos analíticos
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 Sesgo
Mide el error sistemático o
determinado del método analítico.
El sesgo se define mediante la
ecuación:
(1)
Donde:
es la media de la población
para la concentración de un analito
en una muestra y es el valor
verdadero.
Para determinar el sesgo hay que
analizar uno o varios materiales de
referencia estándar cuya
concentración de analito se
conozca.

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 Sesgo
• Los resultados de dichos
análisis contendrán tanto
errores aleatorios como
errores sistemáticos,

– Al realizar suficientes análisis

el error aleatorio se reduzca
a un valor próximo a cero.
– La media de 20 o 30 análisis
repetidos puede suponerse,
normalmente, que está libre
de errores aleatorios y,

• Puede ser una buena

estimación de la media de la
población en la ecuación
(1).

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 Sesgo

• Cualquier diferencia entre esta

media y la concentración
conocida de analito del material
estándar de referencia puede
atribuirse a un error.
• En general, al desarrollar un
método analítico, todos los
esfuerzos se dirigen hacia
– la identificación de la fuente
de error y
– a su eliminación o corrección
• mediante el uso de
blancos y la calibración
del instrumento.

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 Sensibilidad
• La sensibilidad de un instrumento o de
un método
– mide su capacidad de discriminar
entre pequeñas diferencias en la
concentración del analito.
• Dos factores limitan la sensibilidad:
– la pendiente de la curva de
calibración y la
– reproducibilidad o precisión del
sistema de medida.
• Dos métodos que tengan igual
precisión, el que tenga mayor
pendiente de la curva de
calibración será el más
sensible.
• Un corolario a esta afirmación
es que si dos métodos tienen
curvas de calibración con igual
pendiente, el más sensible será
aquel que presente la mejor
precisión.
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 Sensibilidad de calibración
• Según la IUPAC,
– Se define como la
pendiente de la
curva de calibración
a la concentración
de interés.
• Como parámetro de
calidad tiene el
inconveniente de
– No tener en cuenta
uno de los factores
que determinan la
sensibilidad, esto es,
la precisión.

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 Sensibilidad analítica γ
γ = m/ss (2)
• Donde:
– m; pendiente de la curva de
calibración y
– ss; desviación estándar de la señal
correspondiente a la concentración
de interés del analito.
• Es relativamente insensible a los
factores de amplificación.
– Al aumentar la ganancia de un
instrumento por un factor de cinco,
– m se incrementará en cinco veces;
– Habrá también un aumento
correspondiente en ss,
– manteniéndose la sensibilidad
analítica prácticamente constante.
• Es independiente de las unidades de la
señal medida (S).
• Es dependiente de la concentración,
– Porque ss varía con ella.

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 Limite de detección
• Concentración o peso mínimo de
analito que pueden detectarse para
un nivel de confianza dado.
• Depende de:
– la relación entre la magnitud de la
señal analítica y el valor de las
fluctuaciones estadísticas de la
señal del blanco.
• a menos que la señal analítica
sea mayor que la del blanco en
un múltiplo k de las variaciones
del blanco debidas a errores
aleatorios, no será posible
detectar con certeza la señal
analítica.
• Cerca al límite de detección, la
mínima señal analítica distinguible se
aproxima a la señal media del blanco
Šbl.
Sm = Sbl + k sbl
cm = (Sm – Sbl)/m
=3
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 Intervalo dinámico
• El intervalo útil de un método
analítico,
– va desde la concentración más
pequeña con la que puede
realizarse medidas cuantitativas
(límite de cuantificación, LOQ)
– hasta la concentración a la que
la curva de calibrado se desvía
de la linealidad (límite de
linealidad, LOL).
• Límite inferior de las medidas
cuantitativas,
– diez veces la desviación
estándar cuando la
concentración del analito es
cero
• (10 sbl).
• = 10
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 Selectividad
• Grado de ausencia de
interferencias debidas a
otras especies
contenidas en la matriz
de la muestra.
– Ningún método
analítico está
totalmente inafectado
por otras especies y,
– Con frecuencia,
• se deben
minimizar los
efectos de estas Selectividad para control de calidad A)fase móvil
interferencias. B)Analito SR 100%, C)Placebo, D)Placebo con 100%
de analito.

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 Calibración de métodos instrumentales
• Todos los métodos instrumentales
excepto dos: gravimétricos y
coulombimétricos, requieren una
calibración,
– Proceso que relaciona la señal
analítica medida con la
concentración del analito.
• Métodos más frecuentemente
utilizados:
Realización y el uso de una curva
de calibración por el método:
1. De estándar externo,
2. De adición estándar y
3. Del patrón interno.

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 Método de estándar externo
• Un estándar o patrón externo se
prepara por separado de la
muestra.
• Procedimiento habitual:
– El analista toma una serie de
muestras (normalmente tres o
cuatro, y posiblemente alguna
más) en las que se conoce la
concentración del analito.
– Las mediciones se realizan en
el instrumento analítico en las
mismas condiciones que las
usadas para las muestras
problema (es decir las
"desconocidas").
– Se establece la gráfica de
calibración,
– Se obtiene la concentración de
analito en cualquier muestra
problema por interpolación.

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 Método de estándar externo
• A menudo se obtienen gráficas
(curva patrón o curva analítica) que
son lineales en un amplio intervalo
de concentración (intervalo útil) lo
cual es deseable, ya que están
menos sujetas a error que las
curvas no lineales.
• Sin embargo, no es raro encontrar
representaciones gráficas no
lineales, las cuales requieren un
elevado número de datos de
calibrado para establecer con
precisión la relación entre la
respuesta del instrumento y la
concentración.
• Se obtiene la ecuación de la curva
de calibrado por el método de
mínimos cuadrados que permite
calcular directamente la
concentración de las muestras.

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 Método de estándar externo

• El éxito del método de estándar

externo depende,
– De la exactitud que tengan la
concentración de los patrones
– De lo que se parezca la
matriz de los patrones a la de
las muestras que se analizan.
• Reproducir la matriz de muestras
complejas suele ser difícil o
imposible y sus efectos dan lugar
a errores por interferencias.
– Para minimizarlas, a menudo,
es necesario separar el
analito del interferente antes
de medir la señal del
instrumento.

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 Método de estándar externo
CURVA DE CALIBRACIÓN VERDE MENTA A 629 nm
0.700

0.600 y = 0.0203x + 0.0047

R² = 1
0.500
Absorbancia

0.400

0.300

0.200

0.100

0.000
0 5 10 15 20 25 30 35
CC (ug/mL)

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 Método de adición estándar
• Especialmente útil para analizar
muestras complejas en las que
la probabilidad de que se
produzcan efectos debidos a la
matriz es considerable.
• Este método puede aplicarse de
diferentes formas.
– Una de las más comunes
implica la adición de diferentes
volúmenes de una solución
patrón a alícuotas de la
muestra con volúmenes
idénticos.
• Este proceso se conoce
como adición de muestras
(spiking).
• Después, cada disolución se
diluye a un volumen fijo
antes de efectuar la medida.

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 Método de adición estándar
• Cuando la cantidad de muestra es
limitada,
– Las adiciones se realizan por
introducciones sucesivas de
incrementos del patrón a un único
volumen medido de la incógnita.
– Las medidas, se toman de la
muestra original y después de cada
adición del patrón en la muestra.
• En la mayoría de las versiones del
método
– La matriz de la muestra es casi
idéntica después de cada adición y
la única diferencia es la
concentración de analito, o la
concentración de reactivo en el
caso de que se añada un exceso
de un reactivo analítico.
– Como los patrones se preparan en
alícuotas de la muestra, todos los
demás componentes de la mezcla
serán iguales.

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 Método de adición estándar

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 Método del patrón interno
• Un patrón interno es
– una sustancia que se añade a todas
las muestras, blancos y patrones de
calibrado en una cantidad fija.
– También puede ser un componente
mayoritario de las muestras y los
patrones pero que está en una
concentración lo suficientemente
elevada como para que se pueda
considerar que es la misma en todos
los casos.
– En este caso el calibrado es una
representación gráfica del cociente
entre la señal del analito y la señal
del patrón interno en función de la
concentración de analito de los
patrones.
– En las muestras, este cociente se
utiliza para determinar la
concentración de analito a partir de la
Cromatrograma del fenobarbital y del estándar interno butobarbital curva de calibrado.

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 Método del patrón interno

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