UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA

FACULTAD DE CIENCIAS DEL MAR

DOCTORADO EN CIENCIAS EN RECURSOS ACUÁTICOS

Caracterización Funcional y Bioquímica de las

Principales Especies de Macroalgas de Sinaloa

TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE:
DOCTOR EN CIENCIAS EN RECURSOS ACUÁTICOS

PRESENTA:
IDALIA OSUNA RUIZ

DIRECTOR:
DR. MARIO NIEVES SOTO

CODIRECTOR:
DR. MIGUEL ANGEL HURTADO OLIVA

Mazatlán, Sinaloa, México, Septiembre de 2016

 ACTA DE LIBERACIÓN DE TESIS

En la ciudad de Mazatlán, Sinaloa, siendo las _______ horas del día

________________________________se procedió por los abajo firmantes, miembros del
Comité Tutorial avalada por la Coordinación de Posgrado de la Facultad de Ciencias del Mar
de la Universidad Autónoma de Sinaloa, a liberar la Tesis de Grado titulada:

Caracterización Funcional y Bioquímica de las Principales Especies de Macroalgas de

Sinaloa

Presentada por el estudiante (a):

Idalia Osuna Ruíz

Aspirante al Grado de
Doctor en Ciencias en Recursos Acuáticos

Después de intercambiar opiniones los miembros de la Comisión manifestaron su

APROBACIÓN DE LA TESIS, en virtud de que satisface los requisitos señalados por las
disposiciones reglamentarias vigentes.

EL COMITÉ TUTORIAL

Dr. Mario Nieves Soto Dr. Miguel Ángel Hurtado Oliva

Dr. Armando Burgos Hernández Dr. Jaime Lizardi Mendoza

Dr. Enrique Hernández Garibay

RESUMEN

Las macroalgas han sido evaluadas en el mundo como uno de los recursos marinos más
importantes que ha utilizado el hombre, tanto como fuente de alimento, así como para la extracción
de ficocoloides y en años recientes como fuente de diversos compuestos bioquímicos con amplias
aplicaciones biotecnológicas y farmacéuticas. En México, las macroalgas han sido ampliamente
estudiadas, particularmente en el noroeste y sureste, sin que se hayan hecho estudios prospectivos
de las especies de macroalgas que se encuentran en la región sur del Golfo de California y la parte
central del Océano Pacífico, particularmente en Sinaloa. Por esta razón, en esta tesis se realizó la
caracterización funcional y bioquímica de especies de macroalgas que se desarrollan en esta región,
tales como Gracilaria vermiculophylla (Ohmi) Papenfuss, Spyridia filamentosa (Wulfen) Harvey,
Ulva expansa (Setchell) Setchell y Gardner, Rhizoclonium riparium (Roth) Harvey, Caulerpa
sertularioides (S. G. Gmelin) M. A. Howe, Padina durvillaei (Bory Saint-Vicent) y Codium
isabelae (W. R. Taylor) ); estas especies se recolectaron en diversas lagunas de Sinaloa, México;
esto con la finalidad de generar información que permita evaluar la factibilidad de un
aprovechamiento integral sustentable de las macroalgas de esta región como fuente de compuestos
bioactivos de interés comercial.

En el primer capítulo de la tesis, se determinó la composición química proximal,

composición de pigmentos, ácidos grasos y esteroles por cromatografía de líquidos (HPLC) y gases
(CG), respectivamente. La composición bioquímica fue analizada estadísticamente por
componentes principales (CP), seleccionándose algunos de los compuestos de mayor bioactividad.
Los resultados de la composición bioquímica mostraron que las algas rojas G.vermiculophylla y S.
filamentosa analizadas son similares en el contenido de los compuestos seleccionados como
biomarcadores de bioactividad, mientras que las algas verdes C. sertularioides, R. riparium y C.
isabelae mostraron una composición similar, siendo particularmente diferentes en su composición
U. expansa (verde) y P. durvillaei (café). Se demostró que los principales componentes bioquímicos
que contribuyeron en la variación total de la composición entre las especies de macroalgas fueron β-
sitosterol, PUFA, HUFA, 20:4n–6, 20:5n–3, β-caroteno, clorofila a y b, y en menor medida el
fucosterol y 22:6n–3.

En un segundo capítulo de la tesis, se evaluaron los extractos de las mismas especies de las
macroalgas en distintos solventes (hexano, acetona y metanol) para determinar: La actividad
antioxidante en ensayos de DPPH y ABTS a concentraciones de 30 y 3mg/mL; la actividad
antimutagénica contra AFB1 con las cepas TA98 y TA100 de Salmonella typhimurium (ensayo de
Ames) a concentraciones de 0.003-3.0 mg/placa; así como la actividad antiproliferativa a
concentraciones de 12.5 a 100 mg/mL en células de linfoma-B murino. Como antioxidantes, se
determinó en cada extracto la composición de fenoles, flavonoides, clorofilas y carotenoides, los
cuales fueron analizados a través de componentes principales (CP) con la finalidad de obtener la
combinación lineal de estos compuestos y correlacionarlos con los resultados de rendimiento y
capacidad antioxidante. Los mayores rendimientos de extracción se obtuvieron con el empleo de
metanol y los menores rendimientos correspondieron al hexano (6.4 vs 1.4% peso seco), el
rendimiento de los extractos en acetona se correlacionó con los compuestos antioxidantes (e.g.
fenoles y carotenoides). En general los extractos del alga café y algas verdes exhibieron una mayor
actividad antioxidante que las algas rojas, y la mayor capacidad antioxidante se obtuvo para P.
durvillaei, particularmente en el extracto con acetona (EC50 = 16.9 y 1.56 mg/mL, determinados
mediante DPPH y ABTS, respectivamente). Fueron identificados como componentes principales de
antioxidación los flavonoides y las clorofilas, particularmente en los extractos en hexano, con los
cuales se correlacionó la capacidad antioxidante. La mayor actividad antimutagénica (>40% de
inhibición) a la menor concentración probada (0.0003 mg/placa) se observó para los extractos en
acetona de R. riparium. La mayor actividad antiproliferativa se obtuvó en los extractos en acetona
de C. sertularoides, con inhibiciones de 37 y 72% para las concentraciones de 12.5 y 25 μg/mL,
respectivamente.
En el tercer capítulo de la tesis, se determinó el contenido de polisacáridos sulfatados y se
caracterizaron químicamente (en función de su proporción de sulfatos y ácidos úrónicos) y
estructuralmente (FT-IR, proporción de azúcares). Los resultados mostraron que la galactosa fue el
principal azúcar en los polisacáridos de las algas rojas S. filamentosa (54.04%) y G.
vermiculophylla (64.36%), del alga verde C. sertularioides (55.05%). En R. riparium y C. isabelae
el azúcar principal fue arabinosa (60.49 y 39.5%, respectivamente), en U. expansa ramnosa (49.8%)
y en P. durvillaei fucosa (39%). El mayor contenido de sulfatos se presentó en C. sertularioides y
P. durvillaei (22.9 y 20.2%, respectivamente), mientra que G.vermiculophylla mostró el menor
(1.0%).
Las especies de macroalgas que se destacaron por su alto potencial quimioprotector fueron
las algas S. filamentosa, R. riparium y C. sertularioides, aunque el resto de las especies mostraron
componentes bioquímicos tales como ácidos grasos poliinsaturados, esteroles y carotenoides
particulares que pudieran aprovecharse también como fuentes de compuestos bioactivos y/o
nutricionales con importante aplicación en la promoción de la salud, prevención y/o control de
enfermedades en humanos y animales.

Palábras Clave: Ácidos grasos, algas, antioxidantes, carbohidratos sulfatados, compuestos

quimiopreventivos, esteroles, pigmentos.
ABSTRACT

Seaweeds are considered one of the most important marine resources in the world and their
applications have been mainly related to the extraction of phycoloids and as well as a food source.
However, seaweeds have been recently exploited as a source of valuable biochemical compounds
that may be applied in biotechnological and pharmaceutical industries. In Mexico, seaweeds from
the northwest and southwest regions have been extensively studied, but to the best of our
knowledge, seaweeds species from California Gulf and Central Ocean Pacific (particularly in
Sinaloa) have been poorly explored and investigated. Thus, the biochemical and functional
characterization of Gracilaria vermiculophylla (Ohmi) Papenfuss, Spyridia filamentosa (Wulfen)
Harvey, Ulva expansa (Setchell) Setchell and Gardner, Rhizoclonium riparium (Roth) Harvey,
Caulerpa sertularioides (S. G. Gmelin) M. A. Howe, Padina durvillaei (Bory Saint-Vicent) and
Codium isabelae (W. R. Taylor) was conducted in the present study, with the aim of evaluating the
potential for sustainable exploitation of seaweeds from Sinaloa, Mexico as a source of bioactive
compounds of commercial interest.

In the first chapter of this study, the proximate composition of seaweed species was
determined. Also, the pigments, fatty acids, and sterols composition was analyzed by high
performance liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography (CG). The biochemical
composition of seaweeds was statistically analyzed using principal components (PC), by the
selection of the chemical compounds that exhibited the highest bioactivity. Results of biochemical
composition showed that the two red seaweeds species (G.vermiculophylla and S. filamentosa)
analyzed have similar composition of those compounds that were selected as bioactivity
biomarkers; meanwhile, green seaweeds C. sertularioides, R. Riparium, and C. isabelae showed
similar proximate composition, but green seaweed U. expansa and Brown seaweed P. durvillaei
were particularly different in this parameter. The principal biochemical components that contributed
to the total variation of chemical composition among the different seaweed species were β-
sytosterol, PUFA, HUFA, 20:4n–6, 20:5n–3, β-carotene, chlorofila a and b, and in a minor
proportion fucosterol and 22:6n–3.

In the second chapter of this study, seaweed extracts obtained in different solvents (hexane,
acetone and methanol) were evaluated with the aim of determine: Antioxidant activity using the
DPPH and ABTS assays at concentrations of 30 and 3mg/mL; antimutagenic activity against AFB1
using TA98 and TA100 strains of Salmonella typhimurium (Ames test) at concentrations of 0.003-
3.0 mg/plate, and the antiproliferative activity at concentrations of 12.5 to 100 µg/mL in B-cells
lymphoma murine. The composition of antioxidants compounds, such as fenols, flavonoids,
chlorophylls and carotenoids were determined for each seaweed extract, and the results were
analyzed by PC to establish the linear combination of this antioxidant compounds and correlate
them with the results of extraction yield and antioxidant activity. The highest extraction yield was
obtained when methanol was used as extracting solvent, whereas the lowest was obtained using
hexane (6.4 vs. 1.4 % dry weight). The yield obtained after using acetone was correlated with the
the antioxidant compounds evaluated (fenols and carotenoids). In general, brown and green
seaweed extracts exhibited higher antioxidant activity than red seaweeds, and the highest
antioxidant capacity was obtained in P. durvillaei, particularly in the acetone extracts (EC50 = 16.9
and 1.56 mg/mL, as determined by the DPPH and ABTS assays, respectively). The principal types
of antioxidant compounds were flavonoids and chlorophylls, particularly in the hexane extracts
where the antioxidant capacity was correlated. The highest antimutagenic activity (> 40 % of
inhibition) at the lowest concentration tested (0.0003 mg/plate) was observed for the acetone
extracts of R. riparium. Moreover, the highest antiproliferative activity was obtained in the acetone
extracts of C. sertularoides, with inhibition values of 37 and 72 % for concentrations of 12.5 and 25
μg/mL, respectively.

In the third chapter of this study, the composition of sulphated polysaccharides in the
different seaweed species was determined. The results showed that galactose was the main sugar
present in the polysaccharides extracted from red seaweeds S. filamentosa (54.04 %) and G.
vermiculophylla (64.36 %) and also for the green seaweed C. sertularioides (55.05 %). On the other
hand, arabinose was the main sugar in R. riparium and C. isabelae (60.49 and 39.5 %, respectively),
whereas ramnose and fucose were the main sugars found in U. expansa and P. durvillaei (49.8 and
39 %, respectively). The highest sulphate concentration was observed in C. sertularioides and P.
durvillaei (22.9 and 20.2 %, respectively), whereas G. vermiculophylla exhibited the lowest
sulphate concentration (1 %).
Seaweeds species that outstanded for showing a great chemoprotective potential were S.
filamentosa, R. riparium, and C. sertularioides; however, the other seaweed species evaluated also
contain some biochemical components that might make them suitable for further investigation in
order to consider them for exploitation as a source of bioactive compounds with interesting
properties such as health promotion and prevention of illness in humans and animals.

Key Words: Fatty acids, seaweeds, antioxidants, sulfated carbohydrates, chemopreventive

compounds, sterols, pigments.
DEDICATORIA

Iba a quejarme del largo y cansado día,

pero recordé que tengo un hogar al cual regresar,

una familia que abrazar

y un corazón lleno de fuerzas para salir adelante

A mis Padres y Hermanos, por ser pieza clave en mi existencia terrenal

A mis hijas Camila y Sofía, por ser la causa de mis deseos por ser mejor cada día

Aarón, mi Esposo y compañero de vida, el que comparte conmigo las alegrías, pero
además seca mis lágrimas cuando me invade la tristeza y tiene palabras de aliento cuando
la frustración me acompaña. Te amo.
AGRADECIMIENTOS

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) por la beca otorgada

durante mis estudios de posgrado.

Al Programa para el Desarrollo Profesional Docente (PRODEP) por otorgarme una

beca complementaria para realizar estudios de posgrado de alta calidad.

Al Programa de Fortalecimiento de Proyectos de Investigación (PROFAPI) de la

Universidad Autónoma de Sinaloa, por el financiamiento económico para el desarrollo
experimental del proyecto de tesis doctoral (PROFAPI 2013/084 otorgado a Miguel Ángel
Hurtado Oliva; PROFAPI 2013/124 otorgado a Mario Nieves-Soto; PROFAPI 2013/106,
PROFAPI 2014/121, INFR-2012-01-188065 otorgados a Mercedes Marlenne Manzano-
Sarabia).

A la Universidad Autónoma de Sinaloa, particularmente a la Facultad de Ciencias

del Mar (FACIMAR-UAS) por aceptarme en su programa de Doctorado y con ello
permitirme adquirir una formación científica de alta calidad.

Agradezco a la Universidad Politécnica de Sinaloa, por el apoyo e impulso brindado

para la realización y culminación de mis estudios de Doctorado.

A mis Directores de Tesis, Dr. Mario Nieves Soto y Dr. Miguel Ángel Hurtado
Oliva, agradezco por todo el aprendizaje que me llevo de ambos tanto intelectual, como
personal. Gracias por creer en mí y hacerme crecer como profesionista, pero sobre todo por
hacerme crecer como un ser humano consciente de todas las posibilidades que la ciencia
nos brinda. Ha sido un honor y un placer estar bajo su tutela.

A cada uno de los miembros de mi comité de tesis:

Dr. Armando Burgos Hernández, gracias por "meter" en mi cabeza la idea de ir más
allá del plan inicial, ¡creo que resultó bastante bien! Gracias por todo el apoyo y las
facilidades otorgadas para realizar los estudios de bioactividad en el Laboratorio de
Microbiología y Micotoxinas, del Departamento de Investigación y Posgrado en Alimentos
de la Universidad de Sonora (DIPA-UNISON).

Dr. Jaime Lizardi Mendoza, gracias por todo su apoyo, paciencia y enseñanzas.
Gracias por el cálido recibimiento que me brindaron Usted y su equipo de trabajo en el
Grupo de Investigación en Biopolímeros de CIAD-Hermosillo, agradezco las facilidades
otorgadas para realizar la extracción y caracterización de Polisacáridos.

Dr. Enrique Hernández Garibay, cada una de sus observaciones y aportaciones me

hicieron reflexionar en más de una ocasión, respecto de todo lo que aún me falta por
aprender sobre los polisacáridos y las algas, gracias por compartir conmigo su vasta
experiencia en el tema de la química de algas.

Dra. Elena Palacios, M.C. Olivia Arjona López y M.C. Celene Navarro Hurtado,
por las facilidades y asistencia técnica para los análisis de ácidos grasos y esteroles
(Laboratorio de Metabolismo de Lípidos, CIBNOR-La Paz B.C.S). Nunca creí que en tan
poco tiempo pudiera crear tantos afectos, Oly y Celene Uds. saben que las considero unas
grandes amigas y espero que el vínculo que hicimos nunca se pierda.

Al M.C. Guillermo García Olivarria, por las facilidades otorgadas para llevar a cabo
análisis químicos proximales en el Laboratorio de Análisis Generales de DIPA-UNISON.

A la Dra. Marina Ezquerra Brauer y al Dr. Wilfrido Torres Arreola, por las
facilidades otorgadas durante los procesos de extracción de Polisacáridos (Laboratorio de
Procesamiento de Alimentos Marinos, DIPA-UNISON), pero sobre todo por brindarme su
amistad y apoyo incondicional desde mis tiempos estudiantiles en la UNISON.

A la Dra. Carmen María López Saiz, por siempre mostrar disposición a las largas
horas de trabajo durante las pruebas de bioactividad, pero sobre todo porque en ti encontré
a una amiga para toda la vida.

A la Dra. Marlenne Manzano Sarabia, gracias por apoyarme siempre en los

muestreos y por compartir conmigo sus conocimientos y su grata compañía.
 Agradezco cada una de las palabras, espacios de trabajo y apoyo técnico que el
grupo de investigación del Laboratorio de Ecofisiología de Organismos Acuáticos y del
Laboratorio de Microalgas de FACIMAR-UAS, especialmente al Dr. Pablo Piña Valdez y
MC. Alejandra Jasso, recordaré gratamente las conversaciones que sostuvimos en más de
una ocasión al calor de una rica taza de café.

A los chicos y chicas de Laboratorio, compañeros en las jornadas de trabajo y apoyo

incondicional en el trabajo duro a lo largo de estos años: Francisco Flores Cárdenas, Juan
Manuel Flores, Stephanie Navarro Peraza, Lidia Esther Rodríguez Arredondo y Jorge Luis
López Magaña.

A los estudiantes de Ingeniería en Biotecnología de la UPSIN, quienes siempre

fueron mis mejores asistentes y de los cuales aprendo a veces más, de lo que yo puedo
enseñarles: Rolando Inzunza, Jennifer Carrillo, Berenice Loaiza y Evelia Coss.
ÍNDICE

RESUMEN
ABSTRACT
DEDICATORIA
AGRADECIMIENTOS
INTRODUCCIÓN GENERAL ........................................................................................... 1
ANTECEDENTES ................................................................................................................ 6
Las Macroalgas ....................................................................................................................... 6
Características generales ..................................................................................................... 8
Diversidad taxonómica..................................................................................................... 8
Importancia comercial ....................................................................................................... 11
Las macroalgas en México ................................................................................................ 15
Explotación industrial .................................................................................................... 15
Las macroalgas en Sinaloa ................................................................................................ 18
ÁREA DE ESTUDIO.......................................................................................................... 21
Zona Norte ............................................................................................................................ 22
Agiabampo-Bacorehuis ..................................................................................................... 22
Zona Centro .......................................................................................................................... 23
Santa María-La Reforma ................................................................................................... 23
Ceuta .................................................................................................................................. 24
Zona Sur ................................................................................................................................ 25
Mazatlán-Urías .................................................................................................................. 25
Bahía de Mazatlán ............................................................................................................. 25
DESCRIPCIÓN DE LAS ESPECIES DE ESTUDIO ..................................................... 28
Rodophyceae ......................................................................................................................... 28
Gracilaria vermiculophylla (Ohmi) Papenfuss ................................................................. 28
Spyridia filamentosa (Wulfen) Harvey ............................................................................. 28
Chlorophyceae ...................................................................................................................... 30
Ulva expansa (Setchell) Setchell y Gardner ...................................................................... 30
Rhizoclonium riparium (Roth) Harvey .............................................................................. 31
Caulerpa sertularioides (S. Gmelin) M. Howe ................................................................. 32
Codium isabelae W. R. Taylor .......................................................................................... 33
Phaeophycea ......................................................................................................................... 34
Padina durvillaei Bory Saint-Vicent ................................................................................. 34
JUSTIFICACIÓN ............................................................................................................... 36
HIPÓTESIS ......................................................................................................................... 38
OBJETIVOS........................................................................................................................ 39
Objetivo general .................................................................................................................... 39
Objetivos particulares ........................................................................................................... 39
ESTRUCTURA DEL TRABAJO EXPERIMENTAL .................................................... 41
Recolecta y manejo de muestras ........................................................................................... 43
Preparación de las muestras............................................................................................... 43
CAPITULO I. CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE
COMPUESTOS DE INTERÉS COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA
DE SINALOA
INTRODUCCIÓN .............................................................................................................. 45
Biomoléculas de importancia en macroalgas ........................................................................ 45
Composición química proximal ........................................................................................ 46
Ácidos grasos..................................................................................................................... 47
Esteroles ............................................................................................................................ 52
Pigmentos .......................................................................................................................... 54
Carotenoides ................................................................................................................... 55
Carotenos .................................................................................................................... 56
Xantofilas .................................................................................................................... 56
OBJETIVO GENERAL ..................................................................................................... 59
MATERIALES Y MÉTODOS .......................................................................................... 59
Métodos analíticos de composición proximal ...................................................................... 59
Determinación de proteína cruda....................................................................................... 59
Determinación de grasa cruda ........................................................................................... 60
Determinación de humedad ............................................................................................... 60
Determinación de cenizas .................................................................................................. 60
Extracto libre de nitrógeno ................................................................................................ 61
Determinación de compuestos con potencial bioactivo ........................................................ 61
Análisis de ácidos grasos ................................................................................................... 61
Análisis de esteroles .......................................................................................................... 61
Análisis de Pigmentos ....................................................................................................... 62
Análisis estadístico ............................................................................................................... 63
RESULTADOS ................................................................................................................... 64
Composición proximal .......................................................................................................... 64
Ácidos grasos ........................................................................................................................ 67
Esteroles ................................................................................................................................ 67
Pigmentos.............................................................................................................................. 68
Compuestos con potencial bioactivo analizados por componentes principales.................... 71
DISCUSIÓN ........................................................................................................................ 73
CONCLUSIONES .............................................................................................................. 80

CAPÍTULO II. POTENCIAL BIOACTIVO DE MACROALGAS DE LA COSTA DE

SINALOA
INTRODUCCIÓN .............................................................................................................. 82
Las macroalgas como fuentes de compuestos bioactivos ..................................................... 84
Tipos de actividades quimiopreventivas encontradas en las macroalgas .......................... 84
Actividad antioxidante ................................................................................................... 87
Actividad antimutagénica............................................................................................... 88
Actividad antiproliferativa ............................................................................................. 88
OBJETIVO GENERAL ..................................................................................................... 89
MATERIALES Y MÉTODOS .......................................................................................... 89
Obtención de extractos.......................................................................................................... 89
Fitoquímica de extractos ....................................................................................................... 90
Clorofila total y carotenos ................................................................................................. 90
Fenoles solubles totales por el método de Marigo (1973) ................................................. 90
Contenido de flavonoides totales....................................................................................... 91
Identificación de bioactividad en extractos .......................................................................... 91
Actividad de inhibición del radical DPPH ..................................................................... 91
Reducción de Radical ABTS ......................................................................................... 92
Actividad antimutagénica .................................................................................................. 92
Actividad antiproliferativa................................................................................................. 93
Línea celular ................................................................................................................... 93
Ensayo de antiproliferación............................................................................................ 93
Análisis estadísticos ....................................................................................................... 94
RESULTADOS ................................................................................................................... 95
Rendimientos de extracción .................................................................................................. 95
Actividad antioxidante .......................................................................................................... 95
Compuestos fenólicos totales, contenido total de flavonoides, clorofilas y carotenoides . 95
Inhibición de radicales DPPH y ABTS............................................................................... 100
Actividad antimutagénica ................................................................................................... 103
Actividad antiproliferativa .................................................................................................. 106
DISCUSIÓN ...................................................................................................................... 111
CONCLUSIONES ............................................................................................................ 117

CAPÍTULO III. POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA

COSTA DE SINALOA Y SU CARACTERIZACIÓN QUÍMICA-ESTRUCTURAL
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 119
Características quimico-estructurales de poliscáridos sulfatados de macroalgas ............... 120
Polisacáridos sulfatados ...................................................................................................... 121
Ulvanos ........................................................................................................................ 121
Agar .............................................................................................................................. 122
Carragenanos ................................................................................................................ 122
Fucanos o Fucoidán...................................................................................................... 123
Bioactividad relacionada con los polisacáridos presentes en macroalgas .......................... 125
Actividad antitumoral de los polisacáridos de algas ....................................................... 125
Actividad antiviral de los polisacáridos de algas ............................................................ 126
Actividad antiobesidad .................................................................................................... 127
Actividad anticoagulante ................................................................................................. 127
Actividad antibacterial..................................................................................................... 129
OBJETIVO GENERAL ................................................................................................... 130
MATERIALES Y MÉTODOS ........................................................................................ 130
Obtención de polisacáridos ................................................................................................. 130
Caracterización químico-estructural de Polisacáridos ........................................................ 130
Viscosidad intrínseca [ƞ]. ................................................................................................ 130
Identidad química (FTIR). ............................................................................................... 133
Composición química ...................................................................................................... 133
Determinación de carbohidratos totales ....................................................................... 133
 Determinación de contenido de proteínas .................................................................... 133
Determinación de contenido de sulfatos ...................................................................... 133
Determinación de contenido de ácidos urónicos totales .............................................. 133
Composición de azúcares ............................................................................................. 134
RESULTADOS ................................................................................................................. 135
Rendimientos de extracción ................................................................................................ 135
Viscosidad intrínseca .......................................................................................................... 135
Composición quimica ......................................................................................................... 136
Identidad química FTIR ...................................................................................................... 136
Composición de azúcares.................................................................................................... 141
DISCUSIÓN ...................................................................................................................... 143
Polisacáridos de algas verdes .............................................................................................. 144
Polisacárido de Ulva expansa .......................................................................................... 144
Polisacárido de Caulerpa sertularioides ......................................................................... 146
Polisacárido de Rhizoclonium riparium .......................................................................... 147
Polisacárido de Codium isabelae..................................................................................... 148
Polisacáridos de algas rojas ................................................................................................ 149
Polisacárido de Spyridia filamentosa .............................................................................. 149
Polisacárido de Gracilaria vermiculophylla ................................................................... 150
Polisacáridos de algas cafes ................................................................................................ 151
Polisacárido de Padina durvillaei ................................................................................... 151
CONCLUSION ................................................................................................................. 153
CONCLUSIÓN GENERAL............................................................................................. 155
RECOMENDACIONES .................................................................................................. 157
LITERATURA CITADA ................................................................................................. 158
PUBLICACIONES ................................................................................................................i
ANEXOS
Anexo 1. Ensayo de ames, para la determinación de antimutagénesis……………………...ii
Anexo 2. Descripción y curvas de calibración de las técnicas espectrofométricas de análisis
empleadas…………………………………………………………… …………................iii
A2.1.- Determinación de Compuestos Fenólicos Totales (CFT). ..................................... iii
A2.2.- Determinación de flavonoides totales. ..................................................................... v
A2.3.- Determinación de proteína total ............................................................................ vii
A2.4.- Determinación de carbohidratos totales ..................................................................ix
A2.5.- Determinación de sulfatos .......................................................................................xi
A2.6.- Determinación de ácidos urónicos totales ............................................................ xiii
Anexo 3. Descripción de las técnicas empleadas para la determinación de actividad
antioxidante..……………………………………………………………………….............xv
A3.1.- Determinación de Actividad Antioxidante mediante la técnica de DPPH. ............ xv
A3.2.- Determinación de Actividad Antioxidante mediante la técnica de ABTS. ......... xvii
Anexo 4. Inventario de especies y parámetros ambientales in situ en la recolección de
algas……………………………………………………………………………………… xix
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Relaciones evolutivas entre los tres principales reinos, archea, eubacteria y
eucariotes.. ............................................................................................................................ 10
Figura 2. Mapa de Sinaloa en el que se muestran las tres zonas seleccionadas para el
muestreo de macroalgas. ....................................................................................................... 21
Figura 3. Sistema lagunar Agiabampo–Bacorehuis–Río Fuerte Antiguo. ........................... 22
Figura 4. Sistema lagunar Santa María-La Reforma (color verde)....................................... 23
Figura 5. Sistema lagunar de Ceuta (color amarillo). ........................................................... 24
Figura 6. Sistema lagunar Estero de Urías (color rojo). ....................................................... 25
Figura 7. Bahía de Mazatlán. Sitio de muestreo (*) Playa Norte. ........................................ 26
Figura 8. Fotografía de Gracilaria vermiculophylla (Ohmi) Papenfuss. ............................. 29
Figura 9. Spyridia filamentosa (Wulfen) Harvey. . .............................................................. 29
Figura 10. Ulva expansa (Setchell) Setchell y Gardner........................................................ 30
Figura 11. Rhizoclonium riparium (Roth) Harvey................................................................ 31
Figura 12. Caulerpa sertularioides (S. G. Gmelin) M. A. Howe. ........................................ 32
Figura 13. Fotografía de Codium isabelae............................................................................ 33
Figura 14. Padina durvillaei recolectada .............................................................................. 34
Figura 15. Esquema general del trabajo experimental del proyecto de tesis. ....................... 42
Figura 16. Diferencias estructurales entre el colesterol y fitoesteroles de macroalgas. ....... 53
Figura 17. Estructura química de carotenoides.. ................................................................... 58
Figura 18. Agrupación de las algas (factor scores) en relación a la variación de los
componentes bioquímicos seleccionados por su potencial bioactivo. .................................. 72
Figura 19. Etapas durante el desarrollo del cáncer, donde los compuestos
quimiopreventivos ejercen su actividad ................................................................................ 85
Figura 20. Rendimiento de extracción (%) de las especies de macroalgas seleccionadas
utilizando diferentes solventes. ............................................................................................. 96
Figura 21. Componentes principales obtenidos para el total de compuestos antioxidantes
(flavonoides, compuestos fenólicos totales, contenido de clorofila total, clorofila a y
clorofila b, y contenido total de carotenoides) y actividad antioxidante en extractos
hexánicos, acetónicos y metanólicos de las algas seleccionadas. ......................................... 98
Figura 22. Actividad antioxidante de los extractos de las algas seleccionadas y controles
expresados como la concentración (mg/mL) necesaria para eliminar el 50% de los
radicales. ............................................................................................................................. 102
Figura 23. Actividad antimutagénica de los extractos en acetona de C. sertularioides, R.
riparium y S. filamentosa a distintas concentraciones expresada en porcentajes de
Inhibición sobre S. typhimurium TA98 y TA100 ............................................................... 105
Figura 24. Imágenes representativas (20×) de los cambios observados en la morfología de
la línea celular M12.C3.F6 (Linfoma de células-B murino) posterior a 24 horas de
incubación con extractos de algas (100µg/mL) y efecto de la concentración del extracto en
acetona de C. sertularioides................................................................................................ 107
Figura 25. Efecto sobre la proliferación celular de los extractos de macroalgas ................ 110
Figura 26. Estructura le las principales unidades disacáridas repetitivas presentes en
ulvanos; los ácidoa ulvanobiuronicos A3S y B3S, y las ulvanobiosas U3S y U2’S3S .............. 121
Figura 27. Estructura repetitiva de la agarosa. (Tomado de: Manisvasagan et al., 2016). . 122
Figura 28. Carragenanos kappa, lambda e iota de algas rojas ............................................ 123
Figura 29. Unidades de fucosa sulfatada en fucanos de A. nodosum (A) y L. vadosa (B). 124
Figura 30. Potencial bioactivo y potenciales aplicaciones industriales de los polisacáridos
sulfatados de algas verdes, cafés y rojas ............................................................................. 129
Figura 31. Diagrama de flujo de la extracción polisacáridos algales. ................................ 133
Figura 32. Espectros FT-IR de los polisacáridos sulfatados obtenidos de algas verdes. .... 139
Figura 33. Espectros FT-IR de los polisacáridos sulfatados obtenidos de (a) algas rojas y (b)
alga café. ............................................................................................................................. 140
LISTA DE TABLAS

Tabla I. Resumen de mercado e intereses de investigación dirigida a las aplicaciones de las

macroalgas. ........................................................................................................................... 13
Tabla II. Valor comercial de los compuestos bioactivos provenientes de macroalgas. ........ 14
Tabla III. Especies de algas productoras de ficocoloides cultivadas o identificadas como
potencialmente cultivables en América Latina y el Caribe. ................................................. 16
Tabla IV. Especies de macroalgas explotadas comercialmente en México. ........................ 17
Tabla V. Especies de macroalgas de mayor abundancia que han sido reportadas o
identificadas por su importancia comercial o ecológica en Sinaloa. .................................... 19
Tabla VI. Principales ácidos grasos poliinsaturados. ........................................................... 48
Tabla VII. Principales ácidos grasos poliinsaturados en las macroalgas. ............................. 50
Tabla VIII. Composición de ácidos grasos e índice nutricional en algunas macroalgas. ..... 51
Tabla IX. Distribución de pigmentos en las distintas clases de algas................................... 57
Tabla X.Composición proximal (% peso seco) en algas seleccionadas de Sinaloa. ............ 65
Tabla XI. Proporción de ácidos grasos en las macroalgas seleccionadas de Sinaloa. .......... 66
Tabla XII. Proporción de esteroles en macroalgas seleccionadas de Sinaloa. ..................... 69
Tabla XIII. Proporción de pigmentos en las macroalgas seleccionadas de Sinaloa. ............ 70
Tabla XIV. Ponderación de factores (factor loadings, varimax normalizada) de los tres
componentes principales derivados del análisis factorial. .................................................... 72
Tabla XV. Ponderación de factores (factor loadings, varimax normalizada) usando
componentes principales (CP) y correlación de los CP con la capacidad antioxidante y
rendimiento de los extractos en hexano, acetona y metanol de las algas seleccionadas. ..... 97
Tabla XVI.Contenido total de compuestos fenólicos, flavonoides, clorofilas y carotenoides
en los extractos de algas........................................................................................................ 99
Tabla XVII. Actividad antimutagénica de extractos de macroalgas sobre la mutagenicidad
de Aflatoxina B1 en las cepas de S. typhimuriumTA98 y TA 100. .................................... 104
Tabla XVIII. Rendimientos de extracción de polisacáridos de algas seleccionadas. ......... 136
Tabla XIX. Composición química y viscosidad intrínseca de los polisacáridos extraídos del
las algas seleccionadas. ....................................................................................................... 138
Tabla XX. Bandas de absorción IR de mayor importancia en los distintos tipos de
polisacáridos algales. .......................................................................................................... 141
Tabla XXI. Composición en porcentaje relativo de azúcares neutros de los polisacáridos
algales. ................................................................................................................................ 143
INTRODUCCIÓN GENERAL
 INTRODUCCIÓN GENERAL

INTRODUCCIÓN GENERAL

Las macroalgas constituyen uno de los principales componentes de los ecosistemas

bentónicos y se estima que junto con las microalgas producen cerca del 50% de la
fotosíntesis del planeta, desempeñando una función fundamental en la producción de
oxígeno atmosférico (Lobban y Harrison, 1997; Robledo, 1997; Wiencke y Bischof, 2012)
y por tanto, los mayores responsables del mantenimiento de otras formas de vida.

Debido a su diversidad taxonómica y bioquímica, se ha incrementado el número de

investigaciones en la exploración, identificación, purificación y evaluación de compuestos
bioactivos provenientes de macroalgas, lo que ha derivado en la publicación de algunos
artículos científicos donde se considera que diversas especies pueden funcionar como
materia prima importante para la producción de ingredientes nutricionales, funcionales y
terapéuticos alternativos (Laurienzo, 2010; Shalaby, 2011; Stengel et al., 2011; Chojnacka
et al., 2012; Mohamed et al., 2012; Thomas y Kim, 2013; Barbosa et al., 2014; Admassu et
al., 2015; Michalak y Chojnacka, 2015; Remya y Rajasree, 2016; Yu-Qing et al., 2016),
aunado a esto existe la publicación y creación de una base de datos de metabolitos
provenientes de algas (Davis y Vasanthi, 2011), lo que permite inferir, el potencial que este
recurso marino representa para aquellas regiones que cuentan con ecosistemas costeros.

Se calcula que existen alrededor de 27,000 especies descritas de algas en el mundo.

En México se reconocen 2,702 especies, de las cuales 1,600 son marinas y 1,102
dulceacuícolas (CONABIO, 2009).

En México el estudio de los compuestos bioactivos presentes en macroalgas ha sido

dirigido principalmente a la identificación de especies con potencial de ser empleadas como
fuentes de compuestos con actividad antioxidante, antimicrobiana, antimicótica,
antiparasitaria y antiproliferativa de tumores y cáncer. Tal como lo demuestra un estudio
realizado por (Sánchez-Inclán, 2004), en el que se probó la actividad antimicótica de los
extractos en diferentes mezclas de solventes de 37 algas recolectadas en la costa de
Veracruz, donde encontró que el 95% del total de las especies probadas mostró actividad en
contra de por lo menos alguna de las cepas de Aspergillus niger, Rhizopus nigricans y

1
 INTRODUCCIÓN GENERAL

Candida albicans, en este estudio también se encontró variabilidad estacional de la

actividad antimicótica en las algas Digenea simplex, Padina boergesenii, Cymopolia
barbata y Ulva fasciata. Por su parte Freile-Pelegrín y Morales (2004), evaluaron la
actividad antimicrobiana de extractos etanólicos y lipídicos de 21 especies de macroalgas
recolectadas en la costa de Yucatán, de las cuales 18 mostraron actividad contra Bacillus
subtilis, Streptococcus faecalis y Micrococcus luteus. Respecto de la actividad antioxidante
se han estudiado 48 extractos provanientes de macroalgas recolectadas en las costas de
Yucatán y Quintana Roo, encontrando actividades antioxidantes en Avrainvillea
longicaulis, Chondria baileyana y Lobophora variegata similares a algunos antioxidantes
comerciales como el α-tocoferol, ácido ascórbico, butilato hidroxianisole (BHA) y butilato
hidroxitolueno (BHT) (Zubia et al., 2007). En el 44% de extractos orgánicos de 25 algas
recolectadas en el Golfo y Caribe de México, se detectó actividad antiparasitaria de
moderada a alta, siendo Lobophora variegata y Udotea conglutinata las algas en las que se
detectaron la máxima actividad de IC50 de 1.39 y 1.66 µg/mL, respectivamente sobre la
inhibición del crecimiento de Trichomonas vaginalis en líneas celulares de riñón de canino
(MDCK, Madin–Darby canine kidney cells) (Moo-Puc et al., 2008). Se ha detectado
propiedades contra Leishmania in vitro de extractos orgánicos y acuosos de 27 especies del
Golfo de México, el Caribe y Península de Yucatán, esta actividad se identificó en
Laurencia microcladia, Dictyota caribaea, Turbinaria turbinata y Lobophora variegata
con una buena citotoxicicidad in vitro sobre promastigotes de Leishmania mexicana
(valores de LC50 entre 10.9 to 49.9 μg/ml) (Freile-Pelegrin et al., 2008). Los extractos de 27
especies de algas marinas recolectadas en la península de Yucatán fueron evaluados para
probar su actividad citotóxica y antiproliferativa, siendo Udotea flabellum y U.
conglutinata las especies que mostraron la mayor actividad citotóxica selectiva sobre todas
las líneas celulares tumorales, el extracto de Bryothamnion triquetrum tuvo una destacable
citotoxicidad selectiva contra las células Hep-2 (CC50 8.29 μg/mL)(Moo-Puc et al., 2009).
En extractos obtenidos con solventes orgánicos (diclorometano: metanol, 7:3) y extractos
acuosos de 29 especies recolectadas en el Golfo de México, costas del Caribe y la Península
de Yucatán, fueron evaluados in vitro para combatir el desarrollo de los tripomastigotes de
Trypanosoma cruzi, encontrando la mayor actividad en los obtenidos con solventes

2
 INTRODUCCIÓN GENERAL

orgánicos de Dictyota caribea, Lobophora variegata, Turbinaria turbinata y Laurencia

microcladia (León-Deniz et al., 2009). En las algas Padina durvillaei, Chlorodermis
hildebrandtii y Ulva lactuca, recolectadas en Oaxaca se determinó actividad inhibitoria de
topoisomerasa, actividad antioxidante y antimicrobiana, lo cual sugiere que pudieran ser
empleadas como potenciales compuestos que contribuyan a la prevención y tratamiento de
cáncer (García-Juárez, 2011). Ha sido comprobado en pruebas in vitro, que fracciones de
polisacáridos (de tipo fucoidán) obtenidos de Turbinaria tricostata recolectada en la
Península de Yucatán posee actividad hepatoprotectiva, asociada a su elevada capacidad
antioxidante (Chale-Dzul et al., 2015). Se ha evaluado la efectividad que poseen extractos
metanólicos de Caulerpa sertularioides y Ulva lactuca recolectadas en el sur de Sonora,
sobre la estimulación del sistema inmune del camarón blanco Litopeneaus vannamei, en
este estudio se observó una mayor supervivencia de los camarones infectados con Vibrio
parahaemolyticus y Vibrio alginolyticus tras ser sometidos a un tratamieto con estos
extractos (Esquer-Miranda et al., 2016). En cuanto a los estudios relacionados con el perfil
bioquímico y/o estructural asociado a los componentes presentes en los extractos de algas
mexicanas que exhiben bioactividad, Cantillo-Ciau et al. (2010) identificaron compuestos
químicos no polares (sulfoquinovosil diacilgliceroles –SQDG-) obtenidos por extracción en
cloroformo de la macroalga café Lobophora variegata recolectada en Yucatán, la cual
exhibe actividad anti-protozoaria sobre Entamoeba histolytica y Trichomonas vaginalis, los
principales SQDGs identificados fueron: (1) 1-O-palmitoil-2-O-miristoil-3-O-(6´´´-sulfo-α-
D-quinovopiranosil)-glicerol, (2) pequeñas cantidades de 1,2-di-O-palmitoil-3-O-(6´´´-
sulfo-α-D-quinovopiranosil)-glicerol y (3) un nuevo compuesto identificado como 1-O-
palmitoil-2-O-oleoil-3-O-(6´´´-sulfo-α-Dquinovopiranosil)-glicerol. También han sido
identificados cuatro compuestos citotóxicos aislados de Dictyota ciliolata, Padina sanctae-
crucis y Turbinaria tricostata: dos esteroles, fucosterol y 24ξ-hidroperoxi-24-
vinilcolesterol, y dos diterpenos, pacidictiol A y dictiol acetato B (Caamal-Fuentes et al.,
2014b).

En lo que respecta al Estado de Sinaloa, en la búsqueda bibliográfica realizada hasta

el momento sobre estudios relacionados con compuestos bioactivos en macroalgas, sólo se

3
 INTRODUCCIÓN GENERAL

encontró un estudio en el que se ha descrito a un extracto rico en ulvan (un polisacárido

sulfatado) proveniente de Ulva clathrata (cultivada en Los Mochis, Sinaloa) con peso
molecular 359,800 g/mol y un contenido mayoritario en su estructura de los azúcares
ramnosa y ácido glucurónico, el cual es capaz de inhibir la infección viral causada por
NDV (Newcastle Disease Virus) en aves de corral con una IC50 de 0.1 μg/mL (Aguilar-
Briseño et al., 2015). De esta manera, a pesar de que se conoce la biodiversidad de
especies, distribución, hábitat y condiciones ambientales en las que se encuentran las
macroalgas, son escasos los estudios relacionados con diversos aspectos de su composición
bioquímica y funcionalidad biológica. Por lo tanto, este proyecto de tesis tuvo como
objetivo principal la generación de información sobre la composición química proximal
(e.g. proteínas, carbohidratos, proteínas, cenizas y humedad), el contenido de compuestos
potencialmente bioactivos (e.g. pigmentos, ácidos grasos, esteroles y carbohidratos
sulfatados) y la evaluación de actividad quimiopreventiva (e.g. Antioxidante,
Antimutagenica y Antiproliferativa), en las especies más representativas de macroalgas que
se distribuyen en Sinaloa, lo cual permitirá el potencial aprovechamiento de este recurso
como fuente de compuestos naturales bioactivos y/o ingredientes funcionales.

4
ANTECEDENTES
 ANTECEDENTES

ANTECEDENTES

LAS MACROALGAS

El término alga se refiere tradicionalmente a un grupo muy variado de organismos

fotosintéticos que incluye a las micro- y macroalgas (Mader et al., 2007). Las macroalgas
pueden ser definidas como “plantas no vasculares, fotosintéticas, que contienen clorofila a
y estructuras reproductivas simples” (Balata et al., 2011). En esta definición se incluyen las
formas procariotas (cianofitas) y eucariotas, su biodiversidad es grande pero difícil de
determinar, principalmente por el limite biogeográfico de los inventarios existentes
alrededor del mundo (Dawes, 1998). Las macroalgas marinas constituyen uno de los grupos
más variados de talofitas o plantas “inferiores”, las más evolucionadas poseen estructuras
sencillas comparables a las raíces, tallos y hojas de las plantas “superiores”, generalmente
se encuentran sobre rocas u otros substratos en las áreas de costa. Desde mediados del siglo
diecinueve se distinguen empíricamente diferentes grupos con base en el color del talo, lo
que en gran medida se debe a que sus células efectúan la fotosíntesis empleando a la
clorofila a como pigmento primario y poseen según el grupo, diversos pigmentos
accesorios, en base a lo cual podemos encontrar tres divisiones: algas pardas o cafés
(Heterokontophyta o Ochrophyta, clase Phaeophycea), algas rojas (Rhodophyta) y algas
verdes (Chlorophyta, clase Bryopsidophyceae, Chlorophyceae, Dasycladophyceae,
Pranophyceae y Ulvophyceae) (Dawes, 1998; Stengel et al., 2011; Rindi et al., 2012).
Además de los distintos pigmentos fotosintéticos entre las divisiones de algas, existen
diferencias en la morfología, los ciclos de vida, la composición de la pared celular, los
polisacáridos de reserva que poseen, la ausencia o presencia de flagelos, así como la
construcción flagelar, la estructura fina de los cloroplastos, entre otros (Dawes, 1998; Rindi
et al., 2012).

Las algas bentónicas se encuentran bajo la influencia de las condiciones

fisicoquímicas del ambiente en el que se desarrollan. Los factores que más afectan la
abundancia y distribución de las especies de macroalgas, son la luz, la temperatura y la
disponibilidad de nutrientes, los cuales varían con la latitud, estación del año y localidad
geográfica. Además de factores físicos como la profundidad, la salinidad, los movimientos

6
 ANTECEDENTES

del agua y la disponibilidad de substrato (Lobban y Harrison, 1997; Dawes, 1998; Dıez et
al., 2003). Las condiciones individuales de crecimiento, morfología y reproducción son el
resultado de la cantidad de interacciones biológicas que sufren las macroalgas entre las que
se distinguen: 1) La interacción con otras macroalgas, bacterias, epífitas, hongos y/o
animales; 2) las interacciones entre plantas y herbívoros (macroalgas y epiflora); y 3) el
impacto de los predadores incluyendo al humano (Lobban y Harrison, 1997; Dıez et al.,
2003; Nabivailo y Titlyanov, 2006). Han sido descritas diversas alteraciones de
características morfológicas y/o fisiológicas de las macroalgas influenciadas por las
condiciones ambientales relacionadas con los cambios climáticos así como los que inducen
estrés tales como los sedimentos resultantes de contaminación por compuestos químicos
orgánicos e inorgánicos o cualquier tipo de alteración causada por la actividad humana
(Dıez et al., 2003; Balata et al., 2011)

Todas las macroalgas sintetizan simultáneamente diversas biomoléculas

(carbohidratos, proteínas y lípidos) fundamentales para su metabolismo; sin embargo,
existen diferencias intra- e inter- especies, lo que las hace sumamente diversas en su
composición y por lo tanto en bioactividad (Robledo y Freile-Pelegrín, 2005; Stengel et al.,
2011). Entre los compuestos bioquímicos que se han caracterizado en las macroalgas, están
los polisacáridos, lípidos y pigmentos presentes, además de diversos compuestos con
bioactividad como bromofenoles (Bhakuni y Rawat, 2005; Holdt y Kraan, 2011; Zbakh et
al., 2012) provenientes de algas rojas, cafés y verdes con actividad antibacterial y
antifúngica, compuestos heterocíclicos bromo oxigenados identificados en algas rojas y que
poseen propiedades larvicidas, heterocíclicos nitrogenados en algas rojas efectivos contra
áscaris (Bhakuni y Rawat, 2005) y derivados de fenazina como la caulerpina presente en
algunas especies del género Caulerpa (alga verde), la cual exhibe efectos antiinflamatorios
y anestésicos (Bhakuni y Rawat, 2005; Bitencourt et al., 2011; De Almeida et al., 2011;
Souza et al., 2011).

7
 ANTECEDENTES

Características Generales

Diversidad taxonómica

Hasta la década de los setentas las hipótesis filogenéticas se basaban en la

morfología reproductiva y la identificación se hacía típicamente por observación de
características morfológicas consideradas taxonómicamente importantes; sin embargo, en
los últimos veinte años, gracias al desarrollo de nuevas técnicas (como la microscopía
electrónica y la biología molecular), la clasificación taxonómica de estos organismos ha
evolucionado, ya que numerosos factores propician cambios fenotípicos generando una
gran diversidad de macroalgas que puede ser descrita con base en su taxonomía o
relaciones filogenéticas, estadio de madurez, tipos morfológicos, hábitats ocupados por los
diferentes grupos o la diversidad de compuestos químicos que poseen (Pedroche y Sentíes,
2003; Stengel et al., 2011; Rindi et al., 2012).

La característica común básica para todos los organismos que son clasificados como
algas es el proceso fotosintético, se incluyen eucariontes y bacterias, dos de los tres reinos
principales de los seres vivos, lo cual deriva en interrelaciones evolutivas muy complejas
(Figura 1). La fotosíntesis eucariota surgió primero en el Archaeplastida (Adl et al., 2005) a
través de un único evento endosimbiótico (Rodríguez-Ezpeleta et al., 2005). La fotosíntesis
en otros eucariotas se deriva de los eventos secundarios endosimbióticos con miembros de
la Archaeplastida (Cavalier-Smith, 1999; Nowack et al., 2008; Hampl et al., 2009; Stiller et
al., 2009; Baurain et al., 2010; Keeling, 2010). El grupo rhizaria, alveolados y extremófilos
(RAS, por sus siglas en inglés), incluye la clorofila c, en este grupo se incluyen algas que
pueden originarse ya sea de un solo (Cavalier-Smith, 1999) o varios eventos
endosimbióticos secundarios independientes (Baurain et al., 2010).

Una gran proporción de la diversidad algal puede ser atribuida a las especies
extremófilas incluyendo diatomeas, con una estimación de más de 10,000,000 de especies
no descritas, las Phaeophytas, Xanthophytas y un gran número de pico- y nano- eucariotas
(Moreira y López-Garcı́a, 2002; Massana et al., 2006). Predominantemente miembros
unicelulares de alveolados (incluyendo ciliados, dinoflagelados y apicomplexa),

8
 ANTECEDENTES

haptophytes (incluyendo cocolitos) y criptofitas, son igualmente abundantes y variables, en

este sentido la secuenciación molecular sugiere que estos grupos son más diversos de lo que
inicialmente se pensaba (Stern et al., 2010). Con respecto a las excavatas, se incluyen
algunos organismos de euglenozoa que posee cloroplastos verdes (Hampl et al., 2009). Por
tanto, la mayoría de la diversidad eucariótica se puede atribuir a los organismos
tradicionalmente llamados “algas”.

9
 ANTECEDENTES

Figura 1. Relaciones evolutivas entre los tres principales reinos, archea, eubacteria y
eucaryotes. (Panel izquierdo). Reinos que contienen la especie algae están escritas en azul y
algunas son consideradas de importancia económica (panel derecho). El primer evento
endosimbiótico entre eubacteria y eucariotas con la generación de eucariotas fotosintéticos
en la archaeplastida que se muestra en la línea sólida roja. El evento de endosimbiosis
secundaria subsecuente sucedió entre algas verdes y excavaras incluyendo a euglenozoa
(línea discontinua verde) y entre las algas rojas y el grupo RAS incluyendo algas con
clorofila c (línea punteada café) (Cavalier-Smith, 1999; Baurain et al., 2010) Citados en:
Stengel et al. (2011).

10
 ANTECEDENTES

La diversidad de algas procarióticas es probablemente aún mayor que en los

eucariotas. Estudios recientes han mostrado que las cianobacterias son más diversas de lo
que se considera, en gran parte porqué la delimitación de especies en poblaciones es
complicada, además puede darse transferencia horizontal de genes, también porqué se
1producen diversos pigmentos estables dependiendo del hábitat o cultivo, otras pueden ser
genéticamente distintas pero iguales morfológicamente, lo que resulta en poblaciones
conteniendo cepas distintas entre sí (Komárek, 2010). Por lo que es de suponer que en las
algas existen grandes variaciones bioquímicas intra e inter especie. Sin embargo, para todas
las especies de algas, se identifican compuestos poliméricos similares como los
carbohidratos y algunos compuestos de importancia comercial como lípidos y pigmentos
(Alves et al., 2012). Diversos autores han reportado propiedades bioactivas de algunas
biomoléculas presentes en las macroalgas tales como los polisacáridos (Fucoidanos),
presentes en S. henslowianum y F. vesiculosus (Ale et al., 2011a) capaces de inducir
apoptosis en células de cáncer de piel, galactofucanos presentes en S. japonica y U.
pinnatifida con actividad antitumoral probada en líneas celulares de cáncer mamario y de
melanomas (Vishchuk et al., 2011); ácidos grasos como el ácido pentadecanoico y el ácido
octadecanoico presentes como componentes principales en extractos de A. taxiformis con
actividad antimicrobiana; pigmentos carotenoides como las fucoxantinas de Turbinaria
ornata (alga café), compuestos fenólicos, taninos y glicosidos presentes en extractos de
Gayralia oxysperma y Chaetomorpha antennina (algas verdes), carotenos de Polysiphonia
howei (alga roja), cuyas propiedades antioxidantes pueden ser aplicadas a productos que
funcionen como quimioprotectores en el tratamiento de diversas enfermedades (Kelman et
al., 2012).

Importancia comercial

De acuerdo con la FAO (2014) durante el 2012, a nivel mundial cerca de 25

millones de toneladas de algas se cosechan anualmente y son destinadas para diversos usos,
entre los que se cuenta el consumo como alimento, materia prima para la elaboración de y
cosméticos y fertilizantes, así como el procesamiento para extraer agentes espesantes o
aditivos para la alimentación animal. Para la cosecha del recurso se aprovechan las algas

11
 ANTECEDENTES

silvestres de las zonas marinas y aquellas especies que han logrado ser cultivadas. El
cultivo de algas ha crecido rápidamente durante en las últimas décadas, debido a que la
demanda de productos provenientes de algas marinas ha superado la oferta de este recurso
marino natural. Estadísticas globales del 2012 reportadas por la FAO, revelaron que la
producción acuícola de algas marinas representó un valor estimado mayor de 6.4 billones
USD, siendo China el mayor productor y reconocido desde décadas anteriores como el
principal consumidor de algas comestibles con más del 90% (Lee, 2008; FAO, 2014), esta
situación ha generado intereses comerciales y de investigación algunos de los cuales se
resumen en la Tabla I.

En cuanto a las moléculas bioactivas y funcionales, tal es el caso del mercado

mundial de productos nutracéuticos, el cual en 2014 fue valorado en alrededor 250 millones
de USD y se espera que alcance los 385 millones de dólares en 2020, a una tasa compuesta
anual del 7.5 % desde 2016 hasta 2021 (Mordor Intelligence, 2016). Es en este contexto
que las sustancias bioactivas provenientes de materias primas de productos naturales tales
como las algas marinas, reciben ya desde hace tiempo cada vez más atención, en particular
por los investigadores y las empresas farmacéuticas (Lee, 2008; Bixler y Porse, 2011;
Abreu et al., 2014; Milledge et al., 2016).

A pesar de la biodiversidad de las algas, actualmente solo algunas se consideran de

importancia o valor comercial (Stengel et al., 2011). La importancia comercial de estas
especies en gran medida se debe al contenido de diversos compuestos bioactivos, entre los
que se encuentran algunos péptidos con capacidad para disminuir la presión arterial que
incluyen glicoproteínas como las lectinas (hemaglutininas o aglutinina) con capacidad de
aglutinar glóbulos rojos (Fitzgerald et al., 2011). Algunos polifenoles y florotaninos (en
algas rojas y pardas) que poseen una gran capacidad antioxidante, antiinflamatoria,
antialergénica, antibacterial y anticancerígena (Chandini et al., 2008; Devi et al., 2011;
Namvar et al., 2012). Estos compuestos han alcanzado desde décadas un alto valor
comercial, tal y como se muestra en Tabla II.

12
 ANTECEDENTES

Tabla I. Resumen de mercado e intereses de investigación dirigida a las aplicaciones de las macroalgas.
MERCADO ALIMENTO AGRICULTURA AMBIENTE SALUD
Criterio Vegetales Marinos Texturizantes Alimentación Fertilizantes Energía y Acuacultura Bioactivos para la
animal Biocombustibles Salud y Medicina
Estado del Emergente Maduro Emergente En crecimiento Emergente En crecimiento En crecimiento
Mercado:

Principal Nutrición y Salud al Bajo costo de Factibilidad Factibilidad Factibilidad Sustentabilidad Salud y medicina
Interés del consumidor Producción comercial comercial comercial comercial y
Mercado ambiental

Principal ● Disponibilidad de Investigación de Investigación Investigación de Propagación y Propagación de ● Propagación de

Interés de la la macroalga aplicaciones de aplicaciones rendimientos de macroalgas en macroalgas en
investigación ● Desarrollo del aplicaciones macro y micro sistemas de sistemas de
Producto algas acuacultura en acuacultura en
tierra tierra
● Desarrollo de
producto
Beneficios Rurales
● Comercial Si No Si Si Si Si Si
● Comunitario Si No Si Si Si Si Si
● Medio Si No Si Si Si Si Si
Ambiente
Modificado de: Lee (2008).
13
 ANTECEDENTES

Tabla II. Valor comercial de los compuestos bioactivos provenientes de macroalgas.

Tipo de Efecto bioactivo Macroalgas Producción Valor comercial Referencia
Compuesto asociado anual en dólares
Polisacáridos
sulfatados
Fucoidán anti-inflamatorios, Algas Cafés como: 250 toneladas $125 millones (Lee, 2008)
anti-Patogénico, Undaria sp. Reportado al 2004
moduladores Laminaria sp.
inmunes, Macrocytis pyrifera
anticoagulante, Fucus vesiculosus
antiviral, anti cáncer
Carotenoides $ 935 millones (Cardozo et al., 2007)
En el 2005
● Astaxantina Antioxidante Spirulina maxima $150 millones /año (Cardozo et al., 2007)
● Cantaxantina Durante el año 2000
14
 ANTECEDENTES

Las Macroalgas en México

Explotación industrial

La explotación comercial de las algas en América Latina y el Caribe se basa

principalmente en la explotación de algas productoras de ficocoloides (Tabla III). De
acuerdo a los resultados del Proyecto denominado AQUILA II (Apoyo a las Actividades
Regionales de Acuicultura en America Latina y el Caribe), el país que aprovecha el mayor
número de especies es Chile, mientras que en México la industria está limitada a sólo
algunas especies tales como Gracilariopsis lemaneiformis, Gelidium robustum,
Chondracanthus canaliculatus y Macrocystis pyrifera (Tabla IV) (Zertuche-González,
1993; Hernández-Garibay et al., 2006) especies que sólo se han aprovechado en el Estado
de Baja California, cuya explotación se ha orientado a la obtención de materias primas para
la producción de ficocoloides. A pesar que se han descrito otras especies de interés
comercial en algunas otras zonas del Golfo de California (Pacheco-Ruiz y Zertuche-
González, 1996).
La Comisión Nacional de Acuacultura y Pesca en el año 2015, reportó que durante
el 2014, la explotación de algas marinas (en peso fresco desembarcado) fue de tres mil
toneladas, aportando el 0.2% del volumen total de pesca en el país, con un valor
aproximado de 15 millones de pesos, concentrándose principalmente en la pesca de sargazo
en el litoral de Baja California y Baja California Sur (CONAPESCA, 2015).
Esto contrasta con los trabajos previamente descritos en que se demuestra que
algunas especies de algas que se distribuyen en las costas de México tienen un alto
potencial como fuentes de compuestos bioactivos, además de que existe un gran número de
especies a lo largo de las costas de México, y particularmente en el Estado de Sinaloa que
no han sido evaluadas.
Actualmente en Sinaloa se han identificado una gran variedad de macroalgas
distribuidas a lo largo del litoral costero y en los sistemas lagunares (Mendoza-Gonzalez et
al., 1994; Ochoa-Izaguirre, 1999; Hernández-Tovalín, 2007; Ochoa-Izaguirre et al., 2007;
Aguilar Rosas et al., 2009; Piñón-Gimate et al., 2009; Piñón-Gimate et al., 2012). En la

15
 ANTECEDENTES

Tabla V, se muestran las especies de macroalgas que han sido identificadas por su
abundancia y/o importancia comercial o ecológica en Sinaloa.

Tabla III. Especies de algas productoras de ficocoloides cultivadas o identificadas como

potencialmente cultivables en América Latina y el Caribe.
PAISES

LuciaLuCI
Venezuela
Argentina

Colombia
ESPECIES FICOCOLOIDES

St. Lucia
Ecuador

México
Brasil

Chile
Cuba

Perú

A
ALGINOFITAS
Lessonia nigrescens X X
L. trabeculata X X
L. flavicans X X
L. vadosa X X
Macrocystis pyrifera X X X X
M. integrifolia X X
Ecklonia arbórea (antes Eisenia) X
AGAROFITAS
Gracilaria sp X
Gracilaria verrucosa X X X

Gracilaria cornea(G. debilis) X X

G. domingensis X X X
Gracilaria cylindrica (G. blodgetii) X
Gracilaria chilensis X
Gracilaria pacifica X
Gracilariopsis lemaneiformis X X X
Gelidium robustum X
Bryothamnion triquetrum X
CARRAGENOFITAS
Gigartina sp. X
Gigartina skottsbergii X X
Chondracanthus canaliculatus X
Chondracanthus squarrulosus X
G. chamissoi X
Hypnea musciformis X
Mastocarpus papillatus X X
Iridaea laminarioides X
I. ciliate X
I. radula X
Eucheuma uncinatum X
Información modificada del Proyecto AQUILA II (FAO, 1993).

16
 ANTECEDENTES

Tabla IV. Especies de macroalgas explotadas comercialmente en México.

Especie Uso Cosecha Cosecha Cultivada* Industrialización
regular esporádica o (Comercialmente o nacional
reciente en fase de estudio)
Macrocystis Alginatos X Si
pyrifera Fertilizantes
líquidos,
Forrajes
Gelidium Agar X Si
robustum
Gracilaria Agar X X No
pacifica
Chondracanthus Carragenano X No
canaliculatus
Eucheuma Carragenano X X No
uncinatum
Porphyra Alimento X

Ch. Squarrulosus Carragenano X X

Egregia menziesii Harina, X

Alimento
Información modificada del Proyecto AQUILA II (FAO, 1993)

Todos estos estudios, se limitan a identificar y describir datos de su distribución,

morfología, estado reproductivo, el nivel de marea en la que se desarrollan y epifitismo
(Mendoza-Gonzalez et al., 1994), la variación estacional de la biomasa en relación con la
disponibilidad de nutrientes y algunos factores ambientales (Ochoa-Izaguirre, 1999) y de la
composición de algunos micro elementos y variabilidad entre especies (Pérez-Escobedo,
2011). Sin embargo, no existe información relacionada con la caracterización de
compuestos con actividad biológica y con potencial para el aprovechamiento como recurso
en Sinaloa. Algunas de las especies que se encuentran en Sinaloa han mostrado actividad
biológica, tal es el caso de Hypnea valentiae recolectada en Baja California Sur, la cual ha
mostrado actividad anti-coagulante en extractos crudos obtenidos a 80 °C (Muñoz Ochoa,
2006). Otros autores han reportado la actividad anticoagulante en extractos crudos de
Dictyota dichotoma (Deacon-Smith et al., 1985), así como inmunoestimulantes de

17
 ANTECEDENTES

macrófagos, los cuales son importantes en la inhibición de tumores a partir de los

polisacáridos sulfatados no galactanos provenientes de Ulva (Enteromorpha) prolifera
(Cho et al., 2010). Se ha observado citotoxicidad in vitro sobre líneas celulares de cáncer
cervicouterino en extractos metanólicos de Enteromorpha intestinalis y Rhizoclonium
riparium provenientes de la India (Paul y Kundu, 2013). En Spyridia filamentosa, se ha
comprobado actividad antibacteriana (Centeno y Ballantine, 1999; Zamora Tovar y
Ballantine, 2000) y antitumoral (Taskin et al., 2010). Además existen múltiples estudios de
algas del género Gracilaria, donde se ha reportado su potencial bioactivo, tal es el caso de
(1) Gracilaria corticata la cual ha mostrado poseer actividad antiviral (Mazumder et al.,
2002), antitumoral (Zandi et al., 2010), antimicrobiana (Govindasamy et al., 2012) y
antileishmanial (Sabina y Aliya, 2011); (2) Gracilaria vermiculophylla ha mostrado efectos
antiadipogénicos (Kim et al., 2012). Mientras que en especies del género Caulerpa, como
(1) C. racemosa actividades de tipo antinociceptivo y antiinflamatorio (De Souza et al.,
2009), antiproliferativo y antiapoptótico (Cavas et al., 2006), antiviral (Ghosh et al., 2004);
(2) C. sertularioides con actividades de tipo antinoceptivo y antiinflamatorio (Brito da
Matta et al., 2011), antibacterial (Maheswaran et al., 2013), antioxidante (Cavas y Pohnert,
2010) y actividad hemoaglutinante (Ly et al., 2012).

LAS MACROALGAS EN SINALOA

A lo largo de la costa de Sinaloa se han realizado algunos estudios ficoflorísticos

(Tabla V). Existen reportes que datan de la década de los 60’s hasta el año 2011, en el que
se llevó a cabo un estudio en las macroalgas presentes en los sistemas lagunares de El
Colorado, Ohuira-Topolobampo, San Ignacio-Navachiste-Macapule, Santa María-La
Reforma, Altata- Ensenada del Pabellón y Estero de Urías para determinar la composición
de algunos microelementos (C, N, P, Fe, Mn, Zn, Cu, Cd, Ni), en este estudio se relacionó
la abundancia de las especies y su composición de microelementos con las actividades
antropogénicas desarrolladas en las cercanías de las lagunas (Pérez-Escobedo, 2011). Con
base en estos antecedentes fué definida el área de estudio y especies que se investigaron en
este proyecto de tesis.

18
 ANTECEDENTES

Tabla V. Especies de macroalgas de mayor abundancia que han sido reportadas o

identificadas por su importancia comercial o ecológica en Sinaloa.

*Las zonas son los diferentes complejos lagunares de Sinaloa donde: 1= Ohuira-
Topolobampo-Santa María; 2= Navachiste-San Ignacio-El Macapule; 3= Santa María-La
Reforma; 4= Altata-Ensenada del Pabellón; 5=Ceuta; 6=Urías; 7= Teacapán-Agua Brava.
Época Estacional: Estiaje= mayo-junio; Lluvias= agosto-octubre; Frías= febrero-abril.
Tomado de: Ochoa-Izaguirre, 2007; Piñón-Gimate, 2008; García-Rodríguez, 2009; Pérez-
Escobedo, 2011.

19
ÁREA DE ESTUDIO
 ÁREA DE ESTUDIO

ÁREA DE ESTUDIO

El estudio se realizó en el Estado de Sinaloa, el cual se ubica entre 27° 02´ y 22° 29’
latitud Norte, 105° 23’ y 109° 28’ longitud Oeste, cuenta con una extensión territorial de
58,092 Km2, lo que representa el 3 % de la superficie de la República Mexicana (Cifuentes
y Gaxiola, 2003), cuenta con 608 Km2 de superficie insular, 221,600 ha de lagunas costeras
y una longitud de 656 Km de litoral (Figura 2).

Figura 2. Mapa de Sinaloa en el que se muestran las tres zonas seleccionadas para el
muestreo de macroalgas.

21
 ÁREA DE ESTUDIO

ZONA NORTE

Esta zona incluye los sistemas de Agiapampo-Bacorehuis, Ohuira-Topolobampo-

Santa María y Navachiste-San Ignacio-El Macapule.

Agiabampo-Bacorehuis

El sistema lagunar–estuarino Agiabampo–Bacorehuis–Río Fuerte Antiguo, se

encuentra ubicado en la zona costera al sur del Estado de Sonora y al norte del Estado de
Sinaloa, México, con comunicación directa con el Golfo de California (Figura 3). La
localidad más importante es la Cd. de Los Mochis, Sinaloa, ubicada al sur del sistema. La
distancia en línea recta a la laguna de Agiabampo–Bacorehuis es de 64.9 km; al estero Las
Lajitas 51.4 km, al estero La Chicura 50.7 km; al estero de San Juan 49.8 km y al estero río
Fuerte Antiguo 48.9 km. (http://ramsar.conanp.gob.mx/lsr.php).

Figura 3. Sistema lagunar Agiabampo–Bacorehuis–Río Fuerte Antiguo. Área de muestreo

se presenta en color naranja.

22
 ÁREA DE ESTUDIO

ZONA CENTRO

Esta zona incluye los sistemas de Santa María-La Reforma (Figura 4), Altata-
Ensenada del Pabellón y Ceuta (Figura 5).

Santa María-La Reforma

El sistema lagunar estuarino de Santa María la Reforma se encuentra en la

plataforma continental del Pacífico central mexicano. Está clasificada como una laguna
costera del tipo IIIA (Lankford 1977). Está habitada por manglares, su salinidad es variable
(e.g. Amezcua et al. (2006), reportaron una salinidad anual de 25.1 a 31.6%), la
profundidad máxima es 24 m y la profundidad media es 7 m. Esta laguna se conecta con el
Océano Pacífico a través de dos bocas de 5 km de anchura y profundidades que van de 12 a
17 m.

Figura 4. Sistema lagunar Santa María-La Reforma (color verde).

23
 ÁREA DE ESTUDIO

Ceuta

Se localiza a los 24° 06' y 24° 15' de latitud norte a los 107° 11' y 107° 24’ de
longitud oeste (Figura 5). Se halla semicerrada por la isla de Quevedo, al suroeste se
comunica con el Océano Pacífico por la boca del río San Lorenzo, al sureste tiene un canal
largo que también se enlaza con el Océano. Al noreste se limita con la bahía de Tepehuayo,
situada al noroeste de la isla de En medio. Cuenta con una extensión: 7340 Ha.

Figura 5. Sistema lagunar de Ceuta (color amarillo).

24
 ÁREA DE ESTUDIO

ZONA SUR

Esta zona abarca el Estero de Urías, la bahía de Mazatlán y Teacapán-Agua Brava.

Mazatlán-Urías

El Estero de Urías se localiza a 23° 09' y 23° 12' de latitud norte y los 106° 18' y
106° 25' de longitud oeste, al sur de Mazatlán y al norte de la desembocadura del río
Presidio. Posee una extensión de 800 Ha (Figura 6). Esta laguna es la más urbanizada en el
estado de Sinaloa, por lo que la ficoflora es abundante.

Figura 6. Sistema lagunar Estero de Urías (color rojo).

Bahía de Mazatlán

La Bahía de Mazatlán, Sinaloa, se localiza a los 23° 15' y 23° 11' de latitud norte y
los 106° 29' y 106° 25' de longitud oeste (Figura 7). Los sitios donde se ha reportado la
presencia de macroalgas son: Playa Norte, Playa Cerritos e Isla de la Piedra, así como la
zona aledaña al cerro “El Crestón”.

25
 ÁREA DE ESTUDIO

Figura 7. Bahía de Mazatlán. Sitio de muestreo (*) Playa Norte.

26
DESCRIPCIÓN DE ESPECIES
 DESCRIPCIÓN DE ESPECIES

DESCRIPCIÓN DE LAS ESPECIES DE ESTUDIO

El criterio de elección de especies para el desarrollo de esta investigación fueron los

antecedentes ficoflorísticos publicados por diversos autores (Mendoza-Gonzalez et al.,
1994; Hernández-Tovalín, 2007; Piñón-Gimate, 2008; Vega et al., 2008; Pérez-Escobedo,
2009; Pérez-Escobedo, 2011), particularmente se tomó como base la información contenida
en el “Catálogo de Macroalgas de las Lagunas Costeras de Sinaloa” (Ochoa-Izaguirre et al.,
2007), así como un estudio prospectivo.

RODOPHYCEAE

Gracilaria vermiculophylla (Ohmi) Papenfuss

Esta especie es una Rodophyta o alga roja de talo erecto, su color puede ser café
oscuro, verde amarillento, púrpura o guinda, el talo es ramificado con ejes cilíndricos de
hasta 90 cm de largo y una estructura de fijación discoidal pequeña. Ramas de 0.6 a 3.0 mm
de diámetro y ramificaciones irregularmente alternas dispuestas en forma radial (Figura 8).
Dependiendo de la fase reproductiva (tetraspórica o cistocárpica), los talos experimentan
cambios en su morfología, como ejes gruesos y poco ramificados. Se encuentra sobre rocas,
sustratos arenosos, fangosos y conchas de moluscos, formando extensos mantos en la zona
intermareal. Se encuentra distribuida durante todo el año en Ohuira, Navachiste, Santa
María-La Reforma, Altata-Ensenada del Pabellón, Ceuta, Urías y Teacapán, lagunas
costeras del Estado de Sinaloa (Ochoa-Izaguirre et al., 2007).

Spyridia filamentosa (Wulfen) Harvey

Esta especie tiene un talo arbustivo de color rojo rosado de hasta 20 cm de alto.
Ramificaciones abundantes, repetidamente dísticas; ejes principales bastante prominentes
en la determinación del aspecto de la planta, de hasta 2 mm de diámetro. Ramas
determinadas, cortas, costicadas y puntas con una espina terminal (Figura 9). Crece sobre
rocas y arena en la zona intermareal. En Sinaloa se distribuye en Ohuira, Navachiste, Santa
María-La Reforma, Altata-Ensenada del Pabellón, Ceuta y Agiabampo-Bacorehuis durante
todo el año.

28
 DESCRIPCIÓN DE ESPECIES

Figura 8. Fotografía de Gracilaria vermiculophylla (Ohmi) Papenfuss. Ejemplares

recolectados en octubre y noviembre de 2013 en lagunas costeras de Sinaloa: a, b y c)
planta cistocarpica, d y e) planta tetrasporongial.

Figura 9. Spyridia filamentosa (Wulfen) Harvey. a) ejemplar recolectado en Agiabampo-

Bacorehius en noviembre de 2013; b) Se muestra detalles de ramas.

29
 DESCRIPCIÓN DE ESPECIES

CHLOROPHYCEAE

Ulva expansa (Setchell) Setchell y Gardner

Talo laminar de color verde palo a verde claro, de forma elongada a orbicular,
algunas veces expandido de 1 a 3 metros de longitud y de 20 a 40 cm de ancho,
comúnmente no lobulado pero frecuentemente con los márgenes ondulados (Figura 10).

Las células marginales de 14 a 17 µm de diámetro, cuadradas en sección anticlinal,

las células de la porción central y basal de 13 a 18 µm de diámetro y de 25 a 30 µm de
longitud, arregladas anticlinalmente. Los cloroplastos en las paredes laterales con 1-3
pirenoides. Se le encuentra sobre rocas o sustratos arenosos, a veces epifitan otras algas, en
la zona intermareal y submareal. Previamente a sido reportada en Urias en época de frías
(Ochoa Izaguirre et al., 2007).

Figura 10. Ulva expansa (Setchell) Setchell y Gardner. a) ejemplar recolectado en

Agiabampo-Bacorehuis en noviembre de 2013; b) detalle de bordes ondulados; disposición
de monocapa de células en: c) el borde y d) el centro.

30
 DESCRIPCIÓN DE ESPECIES

Rhizoclonium riparium (Roth) Harvey

Especie con talo filamentoso, uniseriado y de color verde claro a verde amarillento
(Figura 11). Las plantas son flácidas, flexuosas, se desarrollan formando masas enredadas,
ramas principales con numerosas ramas rozoidales, aunque en ocasiones son de 2 a 5
células. Las células más largas que anchas, multinucleadas. El cloroplasto es reticular
portando de 10 a 15 pirenoides. Su reproducción es por fragmentación, por esporas
flageladas y por gametos también flagelados. Es una especie común en las lagunas de
Sinaloa, se encuentra enredada en otras algas en la zona intermareal de lugares con fondos
arenosos-lodosos. Se distribuye en Ohuira, Navachiste, Ceuta y Urías en época de frías;
Santa María-La Reforma en estiaje y lluvias; Altata-Ensenada del Pabellón en época de
frías, estiaje y lluvias; Teacapán en época de frías y estiaje (Ochoa-Izaguirre et al., 2007).

Figura 11. Rhizoclonium riparium (Roth) Harvey. La fotografía muestra: (a) y (b) aspecto
macroscópico de plantas recolectadas en Urias en junio de 2013, (c) aspecto de las células
de un filamento con una amplificación de 400 veces su tamaño.

31
 DESCRIPCIÓN DE ESPECIES

Caulerpa sertularioides (S. Gmelin) M. Howe

Talo cenocítico, ramificado de color verde claro. De hasta 6 cm de alto, constituido

por una porción rizomatosa cilíndrica de 1-2 mm de diámetro. Se fija al sustrato por medio
de evidentes rizoides ramificados. Ramas principales erectas, planas y pinnadas. Pínulas
pequeñas mucronadas de forma cilíndrica y algo curvas hacia arriba de 3 a 4 mm de
longitud. Se encuentran fijas a rocas o sustratos blandos compuestos de conchas y arena en
la zona intermareal en lugares protegidos (Figura 12). Se distribuye en Ohuira, Santa
María-La Reforma, Altata-Ensenada del Pabellón y Urías en época de frías, estiaje y
lluvias, Navachiste, en estiaje (Ochoa-Izaguirre et al., 2007).

Figura 12. Caulerpa sertularioides (S. G. Gmelin) M. A. Howe. Ejemplar recolectado en

Agiabampo-Bacorehuis en noviembre de 2013. En la fotografía se muestra un fragmento
donde se pueden observar detalles de tallo, hojas y ramificaciones.

32
 DESCRIPCIÓN DE ESPECIES

Codium isabelae W. R. Taylor

Esta especie se encuentra adherida sobre rocas de la zona intermareal, posee talo
procumbente, a menudo divaricado y anastomosado, formando plantas de hasta 10 cm de
diámetro, de color verde oscuro y suave al tacto (Figura 13).

Las ramificaciones irregulares o dicotómicas, cilíndricas o claviformes con una

marcada constricción por debajo del ápice de 350 a 600 µm de longitud. En Sinaloa se
distribuye en la bahía de Mazatlán y Urías en época de frías (Ochoa-Izaguirre et al., 2007).

Figura 13. Fotografía de Codium isabelae. Especímenes recolectados en la bahía de

Mazatlán en febrero 2014: (a) planta completa; (b) detalles de células apicales vistas al
microscopio (40×) y (c) (10×); (e) detalles de sus ramas.

33
 DESCRIPCIÓN DE ESPECIES

PHAEOPHYCEA

Padina durvillaei Bory Saint-Vicent

Alga formada de uno o varios ejes planos, ramificados irregularmente formando

abanicos amplios que se dividen profusamente de manera irregular con la edad (Figura 14).
Se adhiere a las rocas por una estructura cónica irregular. Plantas de color pardo obscuro en
la porción media baja y más clara a amarillentos en las porciones terminales. Los ejes se
caracterizan por presentar un engrosamiento muy evidente en las porciones apicales de los
abanicos conocido como meristemo de crecimiento. Crecen sobre rocas formando manojos
de más de 15 cm de alto. Se desarrollan usualmente en pozas o cubiertas por agua en la
zona intermareal y submareal.

En Sinaloa, Padina se distribuye en la bahía de Mazatlán y en Urías en época de

estiaje y lluvias (Ochoa-Izaguirre et al., 2007).

Figura 14. Padina durvillaei recolectada. Especímenes recolectados en la bahía de

Mazatlán en febrero 2014: (a) planta completa; (b) detalle de las hojas en forma de abanico;
(C) detalles del tallo y el órgano de adhesión al sustrato; (d) detalle de las células de las
hojas; (e) células del borde de las hoja.

34
JUSTIFICACIÓN
 JUSTIFICACIÓN

JUSTIFICACIÓN

El estado de Sinaloa posee una amplia superficie insular y de lagunas costeras, así
como una gran biodiversidad de especies marinas, entre las que se incluyen las algas. Se
estima que existen alrededor de 66 especies, de las cuales 23 pertenecen a la clase
Rhodophyceae, 12 especies de la clase Phaephyceae y 22 a la clase Chlorophyceae, mismas
que se agrupan en 25 familias y 38 géneros, siendo más representativos en cuanto a número
de especies los géneros Gracilaria, Hypnea, Polysiphonia, Ulva, Ceramium y Ectocarpus
(Ochoa-Izaguirre et al., 2007). Las macroalgas de Sinaloa son un recurso poco estudiado y
utilizado en el Estado, menos aún con fines industriales y la investigación existente hasta el
momento se ha dirigido exclusivamente a estudios biológicos (Lemus y López, 2002).

En algunas especies de macroalgas, se han encontrado compuestos químicos cuyas

pruebas in vitro o in vivo han demostrado que poseen actividad biológica de diversos tipos,
tales como antibacterial, antioxidante, antiviral, antifúngico, antihipertensivo, citotóxico,
antitumoral, espermicida, embriotóxico, neuroprotectivo, antiadipogénico, antinoceptivo y
antiinflamatorio, entre otros, lo que puede ser aprovechado en la nutrición humana y
animal, así como en importantes aplicaciones médicas y farmacológicas. Sin embargo, los
estudios realizados en macroalgas de Sinaloa enfocados en determinar la composición
bioquímica y funcionalidad de sus compuestos son escasos, razón por la que en el presente
proyecto de tesis se evaluó este importante recurso natural para su potencial
aprovechamiento.

36
HIPÓTESIS Y OBJETIVOS
 HIPÓTESIS

HIPÓTESIS

Al menos uno de los géneros más representativos de las macroalgas que se

distribuyen en Sinaloa tendrá actividad quimioprotectora y compuestos bioactivos de
interés comercial para considerar su eventual aprovechamiento en la industria farmacéutica
o biotecnológica.

38
 OBJETIVOS

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Determinarla composición química y compuestos bioactivos presentes en las

principales especies de macroalgas que se distribuyen en el estado de Sinaloa, con la
finalidad de establecer la factibilidad de un aprovechamiento de estos recursos como fuente
de compuestos bioactivos de interés comercial.

OBJETIVOS PARTICULARES

1) Determinar la composición proximal de dos especies de algas rojas: Gracilaria

vermiculophylla (Ohmi) Papenfuss, Spyridia filamentosa (Wulfen) Harvey; cuatro
especies de algas verdes: Ulva expansa (Setchell) Setchell y Gardner, Rhizoclonium
riparium (Roth) Harvey, Caulerpa sertularioides (S. G. Gmelin) M. A. Howe, Codium
isabelae (W. R. Taylor); y una especie de laga café: Padina durvillaei (Bory Saint-
Vicent), recolectadas en el Estado de Sinaloa, México.

2) Determinar la composición de pigmentos, ácidos grasos y esteroles presentes en las

especies de macroalgas recolectadas en Sinaloa, México.

3) Evaluar la capacidad antimutagénica, antioxidante y antiproliferativa de extractos

hexánicos, acetónicos y metanólicos obtenidos a partir de las especies de macroalgas
recolectadas en Sinaloa, México.

4) Establecer el contenido y composición de polisacáridos sulfatados en las macroalgas

recolectadas en Sinaloa, México.

5) Comparar los resultados entre especies con el fin de determinar la especie con mayor
factibilidad de aprovechamiento con base en su composición química y tipo de
bioactividad presentada.

39
 ESTRUCTURA DEL
TRABAJO EXPERIMENTAL
 ESTRUCTURA DEL TRABAJO EXPERIMENTAL

ESTRUCTURA DEL TRABAJO EXPERIMENTAL

El trabajo experimental se dividió en tres etapas o capítulos las cuales cubren los
distintos objetivos que se plantearon y que permitieron la generación de resultados
suficientes para la elaboración de un artículo científico por capítulo.

Todos los capítulos incluyen un marco teórico, objetivo del capítulo, metodología,
resultados, discusión y conclusión.

En el Capítulo I nombrado “Caracterización química y determinación de

compuestos de interés comercial en macroalgas de la costa de Sinaloa”, se hace una
descripción breve de las biomoléculas de importancia nutricional y/o bioactiva presentes en
las macroalgas. La metodología, resultados y discusión resultado de esta fase experimental
permitieron que se lograra cumplir con los objetivos particulares 1, 2 y 5 de la tesis.

Con el desarrollo del capítulo II. “Potencial bioactivo de macroalgas de la costa de

Sinaloa”, se alcanzaron los objetivos 3 y 5 de la tesis.

Por último, con el capítulo III “Polisacáridos sulfatados de macroalgas de la costa

de Sinaloa y su caracterización química-estructural”, se alcanzaron los objetivos 4 y 5 de la
tesis.

En la Figura 15 se muestra un esquema que describe la visión general del trabajo

experimental realizado, tras la recolección de las algas en los distintos sitios de muestreo,
los especímenes se identificaron taxonómicamente y separaron para realizar en un inicio la
caracterización química proximal y de compuestos con potencial bioactivo. Por otra parte
se obtuvieron extractos en solventes a los cuales se les evaluó propiedades bioactivas. Por
último se extrajeron polisacáridos sulfatados, los cuales se caracterizaron química y
estructuralmente.

41
 ESTRUCTURA DEL TRABAJO EXPERIMENTAL

Recolección de muestras
Identificación taxonómica
Separación de especies y limpieza

Almacenar en congelación a -70 Liofilizar, moler y

almacenar a -70 °C
Caracterización Química
Obtención de extractos
Composición de Composición
Compuestos con Proximal
potencial bioactivo

Residuo algas de extracción Extractos

Ácidos grasos (muestra despigmentada) (H, A, M)
y esteroles

Extracción de Polisacáridos
Pigmentos

Caracterización Caracterización Bioactiva

Química-estructural

FTIR Actividad antioxidante

Viscosidad Intrínseca Actividad antimutagénica

Contenido de Sulfatos y
Ácidos urónicos Actividad antiproliferativa

Composición de azúcares

Figura 15. Esquema general del trabajo experimental del proyecto de tesis.

42
 ESTRUCTURA DEL TRABAJO EXPERIMENTAL

RECOLECTA Y MANEJO DE MUESTRAS

La recolecta de las algas se realizó estableciendo al menos cuatro puntos en cada

una de las zonas de muestreo (Norte, Centro y Sur de Sinaloa) que comprenden cada uno de
los sistemas lagunares descritos, los puntos de muestreo se determinaron mediante un
posicionador geográfico satelital (GPS), previa exploración para determinar la presencia de
macroalgas para tener un inventario de especies por localidad (Anexo 4).
Las recolectas se realizaron en cada una de las estaciones recogiendo manualmente
las macroalgas en la zona intermareal y por medio de buceo libre en la zona submareal,
tratando de obtener una muestra representativa de aproximadamente 2 a 5 kg en peso fresco
para su identificación taxonómica y análisis químico, adicionalmente se midió la
temperatura, pH y salinidad en el lugar de la recolecta (Pérez-Escobedo, 2011). A las
macroalgas recolectadas se les removieron por completo los espibiontes visibles y se
lavaron con agua de mar, posteriormente se etiquetaron y guardaron en bolsas de plástico.
Una vez en el laboratorio, se realizó la identificación taxonómica de acuerdo a las
características morfológicas externas, internas y reproductivas como: forma de talo, tipo de
ramificaciones, tipos de células y estructuras reproductivas entre otras (Ochoa-Izaguirre et
al., 2007).

Preparación de las muestras

En el laboratorio, las macroalgas fueron separadas por especie, se lavaron con agua
destilada y una vez limpias las muestras se congelaron a –80 °C, una porción se conservó a
esa temperatura para la de composición de pigmentos, ácidos grasos y esteroles, el resto se
liofilizó, pulverizó y conservó a –80 °C en recipientes herméticos y protegidos de la luz
hasta su análisis (bioactividad y polisacáridos).

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 CAPÍTULO I
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y
DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE
INTERÉS COMERCIAL EN
MACROALGAS DE LA COSTA DE
SINALOA
 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

INTRODUCCIÓN

El estudio de compuestos químicos naturales ha sido relevante porque los

conocimientos generados son útiles en diversos campos científicos, tales como la medicina,
la agricultura, la tecnología de alimentos y biotecnología en general. Se trata
fundamentalmente de ciencia básica necesaria para el descubrimiento, caracterización y
clasificación de nuevas sustancias químicas que se encuentran en diferentes recursos en la
naturaleza. Si bien, los compuestos naturales, pueden contribuir a comprender las
diferencias en la composición de las especies, su respuesta al ambiente y la biología de las
mismas, la atención de los investigadores en las últimas décadas ha sido centrada en los
metabolitos generados por las algas los cuales utilizan como parte de sus mecanismos de
defensa y adaptación, debido a que muchos de éstos exhiben algún tipo de bioactividad.

Este capítulo contiene una revisión de algunas características estructurales y

bioactivas de compuestos químicos de importancia nutricional y/o farmacológica que han
sido estudiados en las macroalgas, enfatizando en la características de algunas biomoléculas
como ácidos grasos, esteroles y pigmentos, los cuales fueron determinados en las algas
seleccionadas en esta tesis y cuyos resultados se muestran en este capítulo.

BIOMOLÉCULAS DE IMPORTANCIA EN MACROALGAS

Las macroalgas han sido identificadas como especies acuáticas con potencial de
empleo para diversas aplicaciones, entre las que destacan las relacionadas con el área de la
salud y la alimentación. Desde el punto de vista energético las macroalgas pueden ser
empleadas como fuente de alimentos debido a que se ha reportado que algunas especies
contienen una adecuada proporción de aminoácidos y grasas esenciales, así como
vitaminas, minerales y un alto contenido de fibra dietaria. Desde el punto de vista funcional
pueden ser utilizadas porque poseen moléculas que exhiben propiedades bioactivas
funcionales. Entre las biomoléculas importantes debido a su potencial bioactivo destacan
los ácidos grasos, esteroles, pigmentos y polisacáridos sulfatados.

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Composición química proximal

Se han reportado numerosas investigaciones en las que se describe la composición

química proximal de diferentes especies de macroalgas, en algunos de los cuales se ha
llegado a proponer a este recurso acuático como una fuente adecuada de algunos nutrientes
necesarios para el desarrollo de animales terrestres y acuáticos, así como en alimentación
humana, dichas propuestas se basan principalmente en el hecho de que las macroalgas
poseen un alto contenido de fibra dietaria, proteínas de buena calidad debido a su
contenidos de aminoácidos esenciales, un adecuado balance de ácidos grasos
poliinsaturados, la presencia algunas vitaminas y minerales, los cuales además de
proporcionar la energía y estructuras básicas para el metabolismo, son considerados
promotores de salud.

Considerando el valor nutricional de especies de macroalgas que pudieran ser

destinadas a consumo humano, existen algunos estudios, por ejemplo, se ha evaluado la
composición nutricional de Hypnea charoides, Hypnea japonica y Ulva lacctuca,
encontrándose como componentes mayoritarios la fibra dietaria (50.3-55.4%peso seco) y
cenizas (21.3-22.8% peso seco), un bajo contenido de grasa cruda (1.42-1.64% peso seco),
y un contenido variable de proteína total, siendo mayor en las Hypnea analizadas (algas
rojas) respecto del alga verde U. lactucca (≈19% vs. 7%), pero en las tres especies las
proteínas con excepción del triptófano contienen todos los aminoácidos esenciales en
diferentes proporciones (Wong y Cheung, 2000), y en cantidad suficiente para cumplir con
los requerimientos nutricionales que establece la FAO/WHO (siglas en inglés para la
Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura y la
Organización mundial de la Salud); posteriormente, se determinó que la digestibilidad in
vitro de estas proteínas es superior al 80% (Wong y Cheung, 2001). Se ha reportado la
composición proximal y el perfil de aminoácidos de dos algas rojas Hypnea pannosa e
Hypnea musciformis, recolectadas en la Isla de St. Martin en Bangladesh, encontrado un
elevado contenido de fibra dietaria (≈38-40 % en peso seco) y proteína total en ambas
especies (≈16-18% en pes seco), así como un contenido importante de aminoácidos
esenciales (> 52 %, del total de aminoácidos cuantificados), siendo lisina, metionina y

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
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tirosina los aminoácidos limitantes en H. pannosa (53.3, 14.6 y 25.8 mg/g proteína;
respectivamente) y H. musciformins (45.6, 16.2 y 26.2 mg/g proteína; respectivamente)
(Abdul et al., 2013). Las algas cafés Padina pavonica, Dictyota dichotoma y Colpomenia
sinuosa, las cuales son ampliamente consumidas y utilizadas en Irak, por lo que fueron
analizadas para determinar su calidad nutricional, encontrando que poseen un adecuado
balance de ácidos grasos poliinsaturados (predominando C16:0, C18:1, C20:4n–6
yC20:5n–3) y aminoácidos esenciales como metionina (en D. dichotoma y P. pavonica) y
lisina (en C. sinuosa) en altas concentraciones (Tabarsa et al., 2012).

Algunos autores han comprobado la calidad nutricional y funcional in vivo de

diferentes especies de algas que han sido incorporadas a dietas experimentales probadas en
distintos animales de laboratorio, un ejemplo de estos estudios es el realizado por Taboada
et al. (2013) en el que se evaluaron a las algas comestibles Undaria pinnatifida (wakame) y
Porphyra purpurea (nori) como suplemento alimenticio en un bioensayo de cuatro semanas
con ratas, observando que ambas algas fueron una buena fuente de proteína (con todos los
aminoácidos esenciales) y fibra dietaria, y a pesar de que ambas algas contiene un bajo
porcentaje de lípidos, la mayoría de los ácidos grasos identificados son poliinsaturados, por
lo que la incorporación de estas algas en la dieta mostró efectos favorables a la salud en los
animales que ingirieron las algas respecto del grupo control, estos efectos fueron
determinados por la disminución en los niveles de enzimas asociadas a daños renales y
hepáticos (leucin-aminopeptidasa y ɤ-glutamil-transpeptidasa), las cuales se elevan en
procesos inflamatorios y reflejan estrés oxidativo; en el intestino, el efecto benéfico se
observó por la inhibición significativa de la actividad de enzimas que degradan a la
maltosa, sacarosa y lactosa (disacaridasas), lo que puede ser utilizado para prevenir algunos
desordenes de la homeostasis asociada con el proceso de digestión/absorción de los
carbohidratos.

Ácidos grasos

Los ácidos grasos poliinsaturados son lípidos cuya estructura química fundamental
es una cadena hidrocarbonada conteniendo más de dos dobles enlaces (C=C) o

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insaturaciones y un grupo carboxilo en un extremo que confiere una región polar (Campbell
et al., 2004). En la Tabla VI se muestra la nomenclatura y algunas de las características de
los principales ácidos grasos poli-insaturados. Existen dos nomenclaturas aceptadas para
indicar la posición de las insaturaciones de la cadena hidrocarbonada de los ácidos grasos,
en ambos casos se emplea un símbolo (ω ó n) y un número que indica la posición del
carbono con doble enlace contado desde el extremo de la cadena hidrocarbonada contrario
al grupo funcional carboxilo. Por ejemplo, un ácido graso que contiene un total de 18
carbonos y dos insaturaciones, se denominará ácido graso ω6 ó n–6 (Tabla VI).

Tabla VI. Principales ácidos grasos poliinsaturados.

Nombre Número de Grado de Nomenclatura Importancia biológica
átomos de insaturación* omega (ω) en humanos
carbono
Linoléico 18 18:2 - ∆9, 12 ω6 Precursor de ARA

α-Linolénico 18 18:3 - ∆9, 12, 15 ω3 Precursor de EPA

Araquidónico 20 20:4 - ∆5, 8, 11, 14 ω6 Precursor de

(ARA) prostaglandinas y
leucotrienos.
Estructura de
membranas celulares.

Eicosapentaenoico 20 20:5 - ∆6,9,12,14,17 ω3 Precursor de

(EPA) prostaglandinas y
leucotrienos.
Estructura de
membranas celulares.

Docosahexaenoico 22 22:6 - ∆4, 7, 10, 13, 15, 18 ω3 Desarrollo y función

(DHA) del sistema nervioso,
así como componentes
de la retina de los ojos.

Fuentes: (Valenzuela y Nieto, 2001; Campbell et al., 2004; Castellanos y Duque, 2008)

Existen variaciones intra e inter especie en cuanto a cantidad y perfil de ácidos

grasos (Tabla VII). Por ejemplo, se han encontrado diferencias en el contenido de ácidos
grasos en el alga café Costaria costata cuando los especímenes analizados son juveniles o
adultos; en general, el contenido de lípidos para esta especie, aumenta hasta tres veces más

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conforme aumenta la edad del alga (Gerasimenko et al., 2010). Los ácidos grasos
poliinsaturados (AGPI o PUFAS por sus siglas en inglés), particularmente de 18 y 20
carbonos de la serie n–3 han sido identificados en un gran número de macroalgas
(Khotimchenko, 2003; Sánchez-Machado et al., 2004; Colombo et al., 2006; Imbs et al.,
2012). Desde el punto de vista nutricional, de acuerdo con la Organización Mundial de la
Salud, es saludable la ingesta de lípidos con una relación ∑n–6/∑n–3 menor a 10. Se
encontró una proporción cercana a 1, en el contenido de ácidos grasos n-6: ácidos grasos n-
3, de especies provenientes de distintas regiones marinas tropicales y frías, entre las que
destacan Ulva lactuca, Ascophyllum nodosum provenientes de Noruega, Chondrus crispus,
Laminaria hyperborea, Fucus serratus de Francia, Undaria pinnatifida, Palmaria palmata
de Irlanda, Sargassum natans del océano Atlántico, Caulerpa taxifolia de Indonesia,
destacando el hecho de que para P. palmata se encontró un alto contenido de ácido
eicosapentaenoico (EPA, C20:5n–3), mientras que en S. natans además de EPA se detectó
el ácido graso docosahexaenoico (DHA, C22:6n–3) (van Ginneken et al., 2011b), en la
Tabla VIII se muestra la composición de ácidos grasos e índice nutricional en algunas
especies de macroalgas.
En Norteamérica han sido reportadas diversas especies de macroalgas con
importantes cantidades de ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) entre las que se encuentran
Nereocystis luetkeana, Porphyra perforata, Fucus distichus, Fucus sp, Pterigophora sp y
Ulva fenestrata, recolectadas en Canadá (Colombo et al., 2006). Por su parte, diversas
especies como Laminaria, Saccharina, Fucus, Ascophyllum, Undaria, Sargassum, Ulva,
Chondrus, Porphyra, Gracilaria y Palmaria, son de gran interés en el noreste europeo
(Holdt y Kraan, 2011); mientras que Gracilaria vermiculophylla y G. austramaritima de
Japón, G. tenuistupitata, G. ñhangii y G. bailiniae (Imbs et al., 2012). Se ha observado que
la inclusión de ácidos grasos poliinsaturados en la dieta proporciona efectos benéficos a la
salud para los seres humanos, ya que estos exhiben función antiarterosclerótica,
antihipertensiva, antiinflamatoria e inmunoreguladora (Holdt y Kraan, 2011).

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Tabla VII. Principales ácidos grasos poliinsaturados en las macroalgas.

Macroalgas
Ácidos Grasos Verdes Cafés Rojas
% del total de ácidos Ulva Enteromorpha Caulerpa Sargassu Costaria Dictyota Gracilaria Hypnea Palmaria
grasos lactuca intestinalis taxifolia m vulgare costata dichotoma verrucosa valentiae sp.
REF. 1 REF. 2 REF. 1 REF. 3 REF. 4 REF. 5 REF. 6 REF. 7 REF. 8
C12:0 n.r.* n.r n.r. n.d. 0.4 n.r. n.r. n.r. n.r.
C14:0 <1 4.7 2 6.33 8.6 7.3 4.6 4.5 13.76
C15:0 n.r. n.r n.r. 0.62 n.r. 0.4 n.r. n.r. n.r.
C16:0 12 38.9 39 31.23 9.8 20.6 32.8 59.8 45.44
C16:1n–7 n.r. 10.6 n.r. 8.61 0.8 0.9 2.2 8.5 5.26
C16:1n–9 <1 n.r 4 6.08 n.r. n.r. n.r. n.r. n.r.
C16:1n–5 n.r. n.r n.r. n.r. 0.6 8.5 n.r. n.r. n.r.
C16:3n–3 1 n.r 9 n.r. n.r. n.r. n.r. n.r. n.r.
C16:4n–3 n.r. n.r n.d. n.r. n.r. n.r. n.r. n.r. n.r.
C18:0 n.d.** 15.0 n.d. 1.62 0.8 1.0 2.0 2.1 1.28
C18:1n–9 20 9.5 7 n.r. n.r. 10.7 8.4 3.5 3.13
C18:2n–6 25 0.9 n.d. 7.59 6.6 2.4 1.3 0.4 0.69
C18:3n–3 20 8.4 18 n.d. 14.1 3.8 n.r. 0.3 0.59
C18:3n–6 2 n.r n.d. n.d. 1.6 0.9 n.r. n.r. n.r.
C18:4n–3 8 n.r 3 n.d. 18.7 18 n.r. n.r. 0.74
C20:3n–6 n.r. n.r n.r. 1.98 0.8 0.9 2.8 n.r. n.r.
C20:3n–9 n.d. n.r n.d. n.r n.r. n.r. n.r. n.r. n.r.
C20:4n–6 2 2.4 3 18.64 16.1 9.5 41.2 5.4 1.45
C20:4n–3 n.r. n.r n.r. n.r. 0.8 1.3 n.r. n.r 0.14
C20:5n–3, EPA 1 0.3 8 8.6 20.3 5.8 0.5 1.0 24.05
C22:4n–9 n.d. n.r n.d. n.r. n.r. n.r. n.r. n.r. n.r.
C22:5n–6 3 n.r n.d. n.r. n.r. n.r. n.r. n.r. n.r.
C22:6n–3, DHA n.d. n.d. n.d. 1.5 n.r. n.r. n.r. 0.7 n.r.
C24:0 n.d. 0.3 1 n.d. n.r. n.r. n.r. 0.2 n.r.
Total n–6 32 4.8 4 28.52 25.1 16.0 45.3 6.7 2.14
Total n–3 32 9.8 38 10.10 53.9 29.3 n.r. 2.5 25.52
Relación n–6/n–3 1.0 0.5 0.11 2.82 0.46 0.54 n.r. 2.7 0.13
*n.r. = Dato no Reportado; **n.d. = Valor no determinado. REF. 1: Van Ginneken et al., 2011; REF. 2: Rohani-Ghadikolaei et
al., 2011; REF. 3: Pereira et al., 2012; REF. 4: Gerasimenko et al. (2010); REF. 5: Khotimchenko (1995); REF. 6: S. V.
Khotimchenko (2005); REF. 7: Ghadikolaei et al. (2011); REF. 8: Sánchez-Machado et al. (2004).
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Tabla VIII. Composición de ácidos grasos e índice nutricional en algunas macroalgas.

Tipo de ácidos grasos
Índice nutricional
Macroalga (% del total de ácidos grasos)
AGS* AGM** AGPI*** AGPI/AGS n6/n3
Ulva lactuca 59.9±2.3 12.2±1.8 28.0±0.7 0.47±0.03 0.3 ±0.01
Ulva compressa 37.6±0.6 8.3 ±0.2 54.2±0.8 1.44±0.04 0.4 ±0.1
Ulva rigida 37.8±5.0 8.1 ±4.0 54.2±8.9 1.47±0.44 0.2 ±0.2
Ulva flexuosa 37.3±0.5 7.5 ±0.4 55.2±0.6 1.48±0.03 0.3 ±0.01
Ulva prolifera 39.1±0.9 9.5 ±0.8 51.4±0.9 1.31±0.05 0.6 ±0.1
Caulerpa racemosa 33.4±3.1 5.7 ±1.4 60.8±3.0 1.84±0.24 0.2 ±0.01
Caulerpa racemosa v. corynephora 58.2±6.4 2.9 ±0.4 39.1±6.0 0.68±0.17 0.6 ±0.1
Caulerpa verticillata 44±2.7 6.1 ±3.0 50±5.3 1.14±0.18 1.0 ±0.3
Caulerpa sertularioides 41.4±0.9 2.2 ±0.6 56.8±1.1 1.38±0.06 0.5 ±0.1
Bryopsis pennata 42.1±6.2 6.5 ±2.6 51.5±7.9 1.26±0.36 0.6 ±0.2
Bryopsis plumosa 51.5±4.4 8.2 ±1.1 40.4±3.4 0.79±0.13 0.5 ±0.1
Chaetomorpha linum 37.5±3.5 21.9±5.5 40.7±3.3 1.09±0.11 1.3 ±0.9
Padina gymnospora 33.8±0.2 16.9±0.7 49.3±0.9 1.46±0.04 0.9 ±0.01
Dictyota pinnatifida 55.8±3.4 11.3±1.3 33.0±2.3 0.60±0.07 3.9 ±1.8
Dictyota bartayresiana 28.9±1.0 13.1±0.6 58.0±4.0 2.01±0.08 0.6 ±0.01
Dictyota dichotoma 39.0±9.1 16.6±5.8 44.4±14.9 1.23±0.59 0.9 ±0.4
Dictyota cervicornis 36.5±1.9 12.1±0.7 51.4±2.7 1.41±0.15 0.9 ±0.01
Dictyota ciliolata 39.9±0.9 12.0±0.4 48.2±0.6 1.21±0.04 0.7 ±0.01
Dictyota haukiana 34.2±1.7 22.2±0.7 43.7±1.9 1.28±0.11 0.4 ±0.01
Sargassum tenerrimum 49.5±1.0 17.6±0.6 33±1.4 0.67±0.04 2.7 ±0.2
Sargassum johnstonii 46.3±4.4 15.2±0.3 38.5±4.2 0.84±0.16 1.6 ±0.3
Sargassum sp. 49.6±0.6 18.2±0.5 32.4±0.2 0.65±0.01 2.3 ±0.1
Sargassum carpophyllum 52.4±10.4 11.3±1.3 36.4±9.1 0.73±0.29 1.3 ±0.1
Sargassum plagiophyllum 42.8±1.9 13.0±0.4 44.7±2.2 1.05±0.1 1.3 ±0.1
Sargassum cinereum 43.2±6.4 32.9±8.7 24.1±2.5 0.56±0.02 0.5 ±0.1
Sargassum cinctum 35.9±14.7 18.5±4.4 45.7±10.5 1.61±1.25 2.1 ±0.1
Gracilaria textorii 60.0±4.4 11.5±1.6 28.6±2.9 0.48±0.08 n.r
Gracilaria corticata 31±2.5 3.5 ±0.1 65.6±2.5 2.13±0.25 n.r
Gracilaria corticata v. folifera 62.7±3.0 5.1 ±0.6 32.3±3.4 0.52±0.08 8.7 ±2.7
Gracilaria debilis 40.1±3.6 11.7±4.5 48.4±3.4 1.21±0.15 59.2±29
Gracilaria verrucosa 46.6±3.2 9.2 ±1.6 44.3±4.1 0.96±0.15 0.6 ±0.01
Hypnea valentiae 59.0±6.0 18.2±1.3 23.2±5.2 0.40±0.12 0.8 ±0.01
Hypnea musciformis 65.1±1.7 15±1.8 20±2.7 0.31±0.05 1.2 ±0.5
Hypnea spinella 65.7±1.5 6.2 ±1.1 28.2±2.1 0.43±0.04 16±4.6
Botryocladia leptopoda 56.6±2.3 15.9±0.9 27.7±2.4 0.49±0.06 1.7 ±0.2
Botryocladia botryoides 47.7±0.5 26.6±0.7 25.8±0.3 0.54±0.01 3.6 ±0.7
*AGS= ácidos grasos saturados; **AGM= ácidos grasos monosaturados; ***AGPI= ácidos
grasos poliinsaturados. n.r. =valor no reportado. Modificada de Kumari et al. (2013).

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Esteroles

Debido a que las algas constituyen el primer eslabón de la cadena alimenticia, su

contenido de esteroles juega un papel muy importante en el ecosistema marino. Los
fitoesteroles de macroalgas tienen una estructura similar a la del colesterol de origen
animal, pero difieren en de éstos porque poseen dobles enlaces adicionales en el anillo B o
grupos alquilo (metilo o etilo) extra en el C-24(Bhakuni y Rawat, 2006) (Figura 16). El
perfil de esteroles varia con la especie, en algas rojas poseen estructuras inusuales, ya que
generalmente carecen de alquilación en C-24, principalmente contienen colesterol, 22-
dehidrocolesterol y trazas de esteroles C-28 y C-29. En el caso de las algas pardas, el
esterol mayoritario es el fucosterol y pueden contener trazas de colesterol; mientras que las
algas verdes típicamente suelen contener una mezcla compleja de esteroles tales como 28-
isofucosterol, ergosterol y colesterol entre otros (Bhakuni y Rawat, 2006).
Los esteroles en algas fueron reportados por primera vez en 1935 (Heilbron et al.,
1935), posteriormente se reportó la presencia de esteroles en algas rojas del género
Gellidium (Tsuda et al., 1957), también 22-dehidrocolesterol y demosterol en el alga roja
Hypnea japónica (Tsuda et al., 1960), Rhodymenia palmata y Porphyra purpurea (Gibbons
et al., 1967), otros investigadores a su vez reportaron una mayor variedad de esteroles del
tipo C27, C28 y C29 en diversas especies de algas rojas (Idler et al., 1968; Patterson, 1971;
Fattorusso et al., 1975; Chardon-Loriaux et al., 1976). Desde entonces se incrementó el
interés por parte de los grupos de investigación en la descripción de los factores biológicos
y medio ambientales que afectan la composición de estos lípidos, ya que se encontró que
existía una considerable variación en el contenido y tipo de esteroles en algas; por ejemplo,
en Rhodymenia palmata se ha observado que el porcentaje de demosterol y colesterol varía
con la época y sitio de recolecta, dichas variaciones pueden ir desde 7.7 a 97.2% y de 2.1 a
97.3%, respectivamente (Idler y Wiseman, 1970; Idler y Atkinson, 1976). En general se ha
reportado que el colesterol está presente en un número importante de macroalgas, siendo el
esterol mayoritario en algas rojas con algunas excepciones como el caso de algas del género
Hypnea cuyo esterol mayoritario es el 22-dehidrocolesterol (Afaq-Husain et al., 1992).

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Sistema de nomenclatura de esteroles Colesterol

22-dehidrocolesterol Stigmasterol

Fucosterol

Figura 16. Diferencias estructurales entre el colesterol y fitoesteroles de macroalgas.

Adaptado de: Valezuela y Nieto (2004)

Tanto las características estructurales de los esteroles de macroalgas como las

propiedades bioactivas que poseen, han sido objeto de estudio por diversos autores. El
esterol mas estudiado por sus propiedades bioactivas es el fucosterol, se ha reportado que
este compuesto proveniente de distintas especie de la clase Phaeophyceae exhibiendo
diversas actividades entre las que se cuentan: actividad anticáncer, antidiabética,
antioxidante, hepatoprotectora, antihiperlipidemica, antifúngica, antihistamínica,
anticolinérgica, antiadipogenica, protege de daños por luz, antiosteoporosis, posee actividad

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hipercolesterolemica, antitrombótica y es capaz de inhibir la actividad de la acetil y

butilcolinesterasa (Abdul et al., 2016), además del fucosterol se ha observado la actividad
anticáncer de otros esteroles aislados de distintas especies, tal es el caso del alga parda
Sargassum carpophyllum de la cual se aislaron 7 esteroles con actividad citotóxica (Tang et
al., 2002).

Pigmentos

Todas las algas poseen pigmentos necesarios para realizar el proceso de fotosíntesis,
clorofilas, carotenoides y ficobilinas en rodophytas y algas azul-verdes. Las ficobilinas o
ficobiliproteínas son solubles en agua y a diferencia de las clorofilas y los carotenoides, no
se encuentran incrustadas en las membranas, se localizan en la superficie de los tilacoides,
estos pigmentos son tetrapirroles lineales, las principales son ficoeritrobilina (rojo) y
ficocianobilina (azul), las diferentes combinaciones de ambos pigmentos absorben a
distintas longitudes de onda, dando como resultado espectros de absorción distinta (Lobban
y Harrison, 1997).

Las ficobiliproteínas actualmente están siendo utilizadas como colorantes naturales

para alimentos tales como la goma de mascar y los productos lácteos, así como en
cosméticos, lápices labiales y delineadores de ojos (Sekar y Chandramohan, 2008). Además
algunos estudios han demostrado que diferentes ficobiliproteínas poseen bioactividad tal
como actividad antioxidante, antiinflamatoria, neuroprotectora, hipocolesterolémica,
hepatoprotectora, antiviral y antitumoral (Sekar y Chandramohan 2008).

Los carotenoides han sido objeto de atención debido a las funciones nutraceúticas.
Estos pigmentos están ampliamente difundidos en plantas superiores, bacterias, hongos y
algas. En las algas la clorofila es similar a la de plantas superiores, pero en los carotenoides
existe una alta variabilidad; en el caso de Rhodophyta: α y β-carotenos y sus derivados
hidroxilados; Pyrrophyta: peridin, dinoxantina y fucoxantina; Chrysophyta: epoxi-, alenic y
acetilenic-carotenoides; Euglenophyta: euterptielanona; Chloromonadophyta:

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
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diadinoxantina, heteroxantina y vaucheriaxantina; Chryptophyta: acetilenic-carotenoides;

Phaeophyta: fucoxantina (Delgado-Vargas y Paredes-López, 2002).

En la Tabla IX, se describe la distribución de pigmentos en las distintas clases de

algas, en la que se puede observar que en las algas se encuentran diferencias marcadas entre
divisiones, siendo los de mayor abundancia para todas las clases de algas la clorofila a y los
β-carotenos.

Carotenoides

Los carotenoides son compuestos constituidos por ocho unidades de isoprenoides, lo

que constituye el centro de la molécula (Delgado-Vargas y Paredes-López, 2002). La
principal función de los pigmentos carotenoides, es captar energía luminosa en el intervalo
de los 400-500 nm, energía luminosa que luego es transferida a las clorofilas para ser
transformada en energía química y moléculas orgánicas durante la fotosíntesis (Meléndez
Martínez et al., 2004; Ligor y Buszewski, 2012).

Los carotenoides son el grupo de pigmentos vegetales más comunes. Estos

compuestos son liposolubles y sus tonalidades son amarillas, naranjas y rojas, debido a la
presencia de un cromóforo consistente total o principalmente en una cadena de dobles
enlaces conjugados (Figura 17). Están presentes en todos los tejidos fotosintéticos, junto
con las clorofilas, así como en tejidos vegetales no fotosintéticos, como componentes de
cromoplastos, que pueden ser considerados como cloroplastos degenerados (Meléndez
Martínez et al., 2004).

Los carotenoides siempre acompañan a la clorofila en una relación de tres a cuatro

partes de clorofila por una parte de carotenoide, son producidos por plantas, algas y
bacterias, alrededor de 600 pigmentos naturales identificados en plantas son pigmentos de
este tipo, los carotenoides se encuentran relacionados con las moléculas de clorofila para
remover el exceso de energía del sistema fotosintético para prevenir daños, también juegan
un papel protector de los ácidos grasos poliinsaturados, fosfolípidos y glicolípidos debido al
poder antioxidante que estos pigmentos poseen (Ligor y Buszewski, 2012). En los seres
humanos, las funciones biológicas más relevantes de los carotenoides están vinculadas a su

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
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poder antioxidante, directamente relacionado a su estructura molecular. En los últimos

años, el incremento en el conocimiento de la generación de especies reactivas de oxígeno
(como oxígeno libre y otros radicales libres) por mecanismos de estrés oxidativo y la
búsqueda de estrategias adecuadas para luchar contra éste, se ha convertido en uno de los
objetivos principales de la acción de la investigación médica, debido a su relación con
algunas enfermedades; por ejemplo, algunos estudios han reportado que la patogénesis
degenerativa como el Alzheimer y Parkinson están asociados al estrés oxidativo; aunado a
esto, se ha demostrado que una dieta enriquecida en carotenoides disminuye el riesgo de
aparición de enfermedades degenerativas (Vílchez et al., 2011).

De acuerdo con su estructura química los carotenoides se clasifican en dos grupos:

1) Carotenos y 2) Xantofilas.

Carotenos
En este grupo se incluyen los α y β –carotenos, β–criptoxantina, estos compuestos
son importantes debido a sus funciones biológicas, por ejemplo los β-carotenos son
precursores de la vitamina A, indispensable en la formación y correcto funcionamiento de
la retina (Meléndez-Martínez et al., 2004). La diferencia entre los carotenos y las xantofilas
es que los primeros no contienen en su estructura química oxígeno (Figura 17).

Xantofilas
Este grupo incluyen a la luteína, zeaxantina, neoxantina, violaxantina, equinenona y
α– y β–criptoxantina y fucoxantinas. Las xantofilas son compuestos derivados de los
carotenos (Figura 17), cuya estructura química contiene grupos oxigenados como hidroxilo,
ceto, epoxi, metoxi o ácido carboxílico (Moros et al., 2002). Estos pigmentos son
importantes para la salud humana y se han asociado varias propiedades como la
estimulación del sistema inmune, protección del estrés oxidativo debido a la luz de alta
energía y prevención de la oxidación de lipoproteínas de baja densidad (Ligor y Buszewski,
2012), además de que poseen propiedades anti carcinogénicas y antitumorales (Moros et
al., 2002).

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE
SINALOA

Tabla IX. Distribución de pigmentos en las distintas clases de algas.

División Caroteno Xantofilas Clorofilas
Clase β α Ze Vi Ne Da Dd Fx Va Lu Lo Sx Otras Xantofilas a b c
Cyanophyta H L H No, L; Ec, H; My, H H L
Glaucophyta H H H
Rhodophyta
Unicelular H H H
Macrofita L L H L L H H
Cryptophyta H L Al, L; Cr, L; Mo, L H H
Heterokontophyta
Chrysophyceae H L L L H L H H
Raphidophyceae H H L L L L H H
Bacillariophyceae H L L L H H H
Phaeophyceae H H H L L H H H
Xanthophyceae H L H H Va-FA, L H H
Eustigmatophyceae H H L H
Haptophyta H L L H H Fx-FA, L H H
Dinophyta L L L H L Pe, H H H
Euglenophyta H L L L H L L H H
Chlorarachniophyta H L L L L L Lo-FA, L H H
Chlorophyta
Prasinophyceae H L L H H L L H Pr, L; Lo-FA, L; Sx-FA, H H H
Chlorophyceae H H L H H H L L Sx-FA, L H H
Ulvophyceae H L L H H L L L Sx-FA, H H H
Trebouxiophyceae H L H H H H H
Charophyceae H L H H H H H
Plantas terrestres H L L H H H H H
H, Mayor contenido de carotenoides en la mayoría de las especies para esa clase; L, Bajo contenido en la mayoría de las especies o alto
contenido sólo en algunas de las especies de esa clase. α, α-caroteno; β, β-caroteno; Al, alloxantina; Cr, crocoxantina; Da, diatoxantina; Dd,
diadinoxantina; Ec, echinenona; -FA, éster de ácidos grasos; Fx, fucoxantina; Lo, loroxantina; Lu, luteina; Mo, monadoxantina; My, myxol
glicosidos y oscillol glicosidos; Ne, neoxantina; No, nostoxantina; Pe, peridinina; Pr, prasinoxantina; Sx, siphonaxantina; Va,
vaucheriaxantina; Vi, violaxantina; Ze, zeaxantina. Rojo, α-caroteno y sus derivados. (Tomado de: Takaichi, 2011).
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Figura 17. Estructura química de carotenoides. (Tomado de: Takaichi, 2011).

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OBJETIVO GENERAL

El objetivo del capítulo I fue determinar la composición química proximal y de

compuestos con potencial bioactivo en Gracilaria vermiculophylla (Ohmi) Papenfuss,
Spyridia filamentosa (Wulfen) Harvey, Ulva expansa (Setchell) Setchell y Gardner,
Rhizoclonium riparium (Roth) Harvey, Caulerpa sertularioides (S. G. Gmelin) M. A.
Howe, Padina durvillaei (Bory Saint-Vicent) y Codium isabelae (W. R. Taylor)
recolectadas en el estado de Sinaloa, México.

MATERIALES Y MÉTODOS

MÉTODOS ANALÍTICOS DE COMPOSICIÓN PROXIMAL

La recolección y tratamiento de las muestras tanto para la determinación de

composición proximal, como la de compuestos con potencial bioactivo está descrito en la
secciónde recolecta y manejo de muestras (Página 43).

Determinación de proteína cruda

Las muestras fueron analizadas por triplicado y para ello se empleó el método
oficial de la AOAC 2001.11 que cuantifica nitrógeno total, empleando el factor de 6.25
para convertir a % de proteína cruda (AOAC, 2006).
El método consiste en la determinación del nitrógeno total mediante la digestión de
las proteínas y otros componentes orgánicos no proteicos (nitratos y nitritos) de las
muestras a analizar, en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El
nitrógeno orgánico total se convierte mediante esta digestión en sulfato de amonio. La
mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El destilado se
recoge en una solución de ácido bórico. Los aniones del borato así formados se titulan con
HCl 0.02N para determinar el nitrógeno contenido en la muestra. El resultado del análisis
es una buena aproximación del contenido de proteína cruda de la muestra ya que el
nitrógeno no proteico, normalmente está en bajas cantidades (< 0.2%, Hurtado et al., 2011).

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
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Determinación de grasa cruda

El contenido de grasa en la muestras se determinó mediante el método de la AOAC

2003.05, el cual contempla una extracción de los lípidos de la muestra seca con éter etílico,
para ello se emplea un equipo Soxhlet, en el que se coloca la muestra dentro de un dedal y
posteriormente se hace pasar el solvente de 6 a 8 horas a través de la muestra mediante
reflujo empleando un condensador, trascurrido el tiempo, se evapora el solvente, la grasa
queda depositada en el matraz del equipo y se calcula el porcentaje de grasa cruda mediante
gravimetría (AOAC, 2006).

Determinación de humedad

El contenido de humedad se determinó empleando el método oficial de la

AOAC.930.15, éste método consiste en colocar un cantidad de muestra de alga fresca en un
plato de aluminio a peso constante dentro de una estufa a una temperatura de 100 a 105 °C
durante 5 horas para eliminar la humedad contenida en la muestra; posteriormente, se enfría
en un desecador y se calcula el porcentaje de humedad empleando la siguiente ecuación
(AOAC, 2006):

𝑚2 − 𝑚3
% 𝐻𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑 = × 100
𝑚2 − 𝑚1

Donde:
𝑚1 : masa del plato vacío, en gramos
𝑚2 : masa del plato con la muestra fresca antes del secado, en gramos
𝑚3 : masa del plato más la muestra secada, en gramos

Determinación de cenizas

Se determinó el contenido mineral total mediante el método oficial gravimétrico de

la AOAC.930.30, el cual consiste en colocar una cantidad de muestra en crisoles a peso
constante, y se calcina por completo en una mufla a una temperatura de 600 °C,

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posteriormente se enfría en un desecador y se calcula el peso del residuo en la cápsula, éste

residuo es el contenido mineral o cenizas totales de la muestra (AOAC, 2006).

Extracto libre de nitrógeno

El extracto libre de nitrógeno que comprende principalmente carbohidratos, también

vitaminas y demás compuestos orgánicos solubles no nitrogenados, fueron determinados
por complemento de las determinaciones proximales de proteína, lípidos y cenizas.

DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS CON POTENCIAL BIOACTIVO

Análisis de ácidos grasos

Los ácidos grasos se analizaron de acuerdo con lo descrito por Serviere-Zaragoza et

al (2014). Iniciando con la extracción de lípidos de las muestras frescas con 2:1
cloroformo/metanol (2:1 v/v) (Folch et al., 1957). Los ácidos grasos se transesterificaron
con BF3 (en 14% de metanol, Supelco) y los ésteres metílicos se analizaron en un
cromatógrafo de gases (GC Agilent Technologies 6890 M) equipado con DB-23 columna
de sílice (30 m × 0.25 mm ID × 0.25 micras espesor de la película) y con un detector de
ionización de llama, se utilizó helio como gas acarreador (0.7 ml/min) y una rampa de
temperatura de 110 a 220 °C.
Los ácidos grasos se identificaron por comparación de sus tiempos de retención con
los de los estándares (Sigma, Bellefonte, PA, EE.UU.). Los datos fueron analizados
mediante GC Chem estación Rev. A .10.02 (1757, Agilent Technologies, 2003).

Análisis de esteroles

La composición de esteroles totales se determinó por cromatografía de gases según

el método descrito por Palacios et al. (2007) con algunas modificaciones. Para ello se
extrajeron los lípidos de muestras frescas según el método de Folch et al. (1957). Esta
muestra fue evaporada a sequedad con una corriente de N2. Los esteroles se

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
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transesterificaron con metóxido de sodio durante 90 min a temperatura ambiente y se

recuperaron en hexano. Los esteroles se determinaron con un cromatógrafo de gases (GC
Agilent Technologies 6890 M) equipado con una columna de silica fundida RTx®-65
(Crossbond diphenyl dimethyl polysiloxane) (15 m × 0.25 mm ID × 0.25 μm de grosor de
la película), equipado con un detector de ionización de flama, se utilizó hidrógeno como
gas acarreador (a una presión constante de 50 psi) y una rampa de temperatura de 50 a 260
°C. Los esteroles se identificaron mediante la comparación de los tiempos de retención con
los obtenidos de estándares (Sigma, Bellefonte, PA, EE.UU.). Los datos fueron analizados
mediante GC Chem estación Rev. A .10.02 (1757, Agilent Technologies, 2003).

Análisis de Pigmentos

Para determinar la composición de pigmentos se empleo la técnica descrita por

Zapata et al. (2000), con algunas modificaciones. Muestras de algas frescas fueron
maceradas con acetona en frío con un homogenizador (100 mg de muestra en 10 mL de
acetona pura), posteriormente el homogenizado se incubó durante 24 horas a 4 °C
protegido de la luz. Posteriormente el sobrenadante fue recuperado por centrifugación
(3200 × g, 10 min, 4 °C) y almacenado a –70 °C hasta su análisis. Los pigmentos fueron
determinados mediante análisis cromatográfico con un equipo HPLC (Agilent
Technologies 1200 Infinity Series), equipado con una columna Zorbax C8 (4.6 ×100mm,
con una fase estacionaria de tamaño de partícula de 3.5μm) y un detector de arreglo de
diodos (DAD). El análisis se realizó a una temperatura constate de columna a 25 °C, con
una elución por gradiente.
Las fases móviles empleadas fueron: Fase A, que consistió de una mezcla de
metanol:acetontrilo:piridina acuosa 0.25M (50:25:25, V:V:V), y Fase B, consistente
enacetonitrilo:acetona (80:20, V:V). El análisis se realizó a un flujo de 1 mL/min. Todos
los solventes empleados fueron grado HPLC (Tedia, OH, USA).
Los pigmentos se identificaron mediante comparación de tiempos de retención y
espectros máximos de absorción (λmax) con los de los estándares (DHI, DK-2970
Hoersholm, Denmark).

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ANÁLISIS ESTADÍSTICO

La composición proximal, contenido de ácidos grasos, esteroles y pigmentos fueron

analizados a través de un análisis de varianza de una vía (ANOVA), seguido de una prueba
a posteriori de Tukey para establecer las diferencias significativas (P<0.05) entre los
valores promedios. Los valores porcentuales fueron transformados al arcoseno antes de
análisis (Zar, 1999), pero solo se muestra en los resultados los valores promedio sin
transformación.

Se realizó un análisis factorial (Varimax normalizada, mediante análisis de

componentes principales) para extraer la varianza máxima del conjunto de datos de algunos
de los componentes bioquímicos (ácidos grasos, esteroles y contenido de pigmentos) en una
combinación lineal (componente principal) de los compuestos con mayor bioactividad,
considerando la ponderación de factores (factor loadings) ≥ 0.7 y eigenvalores > 1.0. Los
datos se presentan como la media±error estándar y se analizaron con Statistica v. 13.0
(Statsoft, Inc.).

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RESULTADOS

COMPOSICIÓN PROXIMAL

Los resultados de la composición proximal de las macroalgas se muestran en la

Tabla X. Se observaron diferencias estadísticamente significativas (P <0.05) en el
contenido de proteína cruda, composición lipídica, extracto libre de nitrógeno (ELN),
cenizas y humedad, en relación a las especies analizadas. Respecto al contenido de proteína
cruda, el mayor valor se observó en el alga verde Caulerpa sertularioides (11.96±1.93% en
peso seco) y los menores en el alga verde Ulva expansa y el alga parda Padina durvillaei
(4.12±0.51% y 5.87±0.12% en peso seco, respectivamente); mientras que Spyridia
filamentosa y Gracilaria vermiculophylla (ambas, algas rojas) mostraron valores
intermedios (10.4% en promedio).
En cuanto al contenido de lípidos, se obtuvo el valor más alto para el alga verde
Rhizoclonium riparium (1.5±0.01% peso seco) y los más bajos en S. filamentosa, G.
vermiculophylla y P. durvillaei (0.26, 0.36 y 0.37% en peso seco, respectivamente).
El mayor porcentaje de cenizas se observó en R. riparium (39.08±2.59% en peso
seco) y el menor en P. durvillaei y Codium isabelae (24.47±0.02% y 28.90±0.30%,
respectivamente) (Tabla X). En cuanto al peso seco los valores variaron 6 a 17%, siendo
mayor para P. durvillaei y U. expansa y menor para C. isabelae; por lo cual el contenido
de humedad en relación al peso fresco (los valores variaron de 83 a 93%) fué mayor en C.
isabelae y menor en P. durvillaei y U. expansa (Tabla X).

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SINALOA

Tabla X.Composición proximal (% peso seco) en algas seleccionadas de Sinaloa.

Composición
Algas verdes Algas rojas Alga café
Proximal
Ulva Caulerpa Rhizoclonium Codium Spyridia Gracilaria Padina
expansa sertularoides riparium isabelae filamentosa vermiculophylla durvillaei
Proteína 4.12±0.51c 11.96±1.93a 7.85±0.90b 8.90±0.06ab 10.61±0.34a 10.15±0.50a 5.87±0.12bc

Lípidos 0.65±0.01c 0.92±0.03b 1.50±0.01a 0.83±0.03b 0.26±0.01d 0.36±0.01d 0.37±0.03d

ELN1 59.61±2.59b 51.69±1.94c 52.2±2.18c 61.53±0.10ab 56.57±0.32bc 54.54±1.09bc 68.96±0.22a

Cenizas 35.66±2.95ab 35.54±0.12ab 39.08±2.59a 28.90±0.30bc 32.54±0.10b 35.02±0.72ab 24.47±0.02c

Peso seco (%) 15.41±1.32a 11.72±0.77b 10.17±0.48b 6.67±0.46c 6.88±0.11c 9.68±0.58bc 17.04±0.28a

Humedad (%)2 84.59±1.32c 88.28±0.77b 89.83±0.48b 93.33±0.46 a 93.12±0.11a 90.32±0.58ab 82.96±0.28c

1
ELN = Extracto Libre de Nitrógeno, este valor fue obtenido por diferencia: 100% – (%cenizas + %proteínas + %lípidos), este
resultado incluye fibra total.
2
Contenido de humedad con base en el peso fresco de las muestras.
Los valores son medias±e.e y fueron analizados mediante el método no paramétrico de Kruskal-Wallis ANOVA de una vía y una
prueba a posteriori de comparación múltiples de Tukey para establecer las diferencias significativas. Las medias con letras
distintas indican diferencias estadísticamente significativas (P < 0.05) entre especies.
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SINALOA

Tabla XI. Proporción de ácidos grasos en las macroalgas seleccionadas de Sinaloa.

Algas verdes Algas rojas Alga café
Ulva Caulerpa Rhizoclonium Codium Spyridia Gracilaria Padina
expansa sertularioides riparium isabelae filamentosa vermiculophylla durvillaei
14:0 2.24±0.21c 3.24±0.11bc 8.05±1.53ab 2.77±0.26c 10.57±0.22a 5.83±0.13b 2.96±0.21bc
16:0 48.89±0.59b 43.19±0.36bc 29.17±5.15d 33.15±2.10c 50.92±1.65b 64.51±0.82a 37.39±0.33c
18:0 3.76±1.07ab 1.04±0.02c 1.34±0.23c 4.57±0.15a 1.75±0.10b 5.08±0.57a 1.46±0.08c
22:0 4.69±0.49b 0.54±0.03c 0.55±0.07c 9.23±0.22a 0.17±0.06c 0.10±0.01c 0.37±0.44c
16:1n–9 0.70±0.04c 1.65±0.06b 1.25±0.16bc 5.73±0.13a 0.54±0.26d 0.39±0.01d 0.68±0.02c
16:1n–7 8.45±0.90ab 5.39±0.20bc 3.40±0.44c 2.56±0.92d 6.38±0.18b 2.53±0.05d 10.20±0.18a
18:1n–9 3.19±0.10d 3.78±0.01c 6.73±1.51bc 19.30±0.90a 9.29±0.20c 15.05±0.01b 20.64±0.32a
18:1n–7 18.89±1.45a 2.19±0.12b 4.32±2.07b 5.68±0.70b 6.19±0.07b 1.68±0.12b 3.35±0.20b
18:2n–6 2.49±0.10d 13.50±0.67b 23.42±0.49a 4.58±0.74c 0.86±0.03e 1.03±0.05e 3.90±0.05cd
18:3n–6 0.25±0.03b 1.44±0.01a 1.38±0.50a 0.77±0.09ab 0.06±0.00b 0.13±0.02b 0.73±0.02ab
18:3n–3 3.51±0.03c 16.72±0.71a 13.57±7.03ab 6.04±1.15b 2.94±0.09c 0.18±0.04c 3.34±0.05c
18:4n–3 1.77±0.13b 1.45±0.05b 1.11±0.57bc 0.37±0.01c 0.35±0.01c 0.08±0.01c 3.72±0.10a
20:4n–6 0.33±0.08c 1.76±0.07bc 2.45±0.33bc 3.02±1.13b 0.75±0.15c 3.17±0.28b 8.87±0.09a
20:5n–3 0.68±0.06ab 3.75±0.04a 2.87±1.70ab 0.57±0.04b 0.34±0.06b 0.14±0.03b 2.18±0.12ab
22:6n–3 0.14±0.02b 0.37±0.03b 0.39±0.08b 1.67±0.13b 8.90±2.19ab 0.11±0.03b 0.19±0.12b
SAT 59.59±1.63b 48.00±0.43bc 39.11±6.49c 49.71±1.91bc 63.41±1.88b 75.52±0.28a 42.18±0.07c
MUFA 31.23±1.39a 13.01±0.32c 15.70±4.15bc 33.27±1.33a 22.40±0.45b 19.65±0.15bc 34.88±0.44a
PUFA 9.18±0.24c 38.99±0.64ab 45.19±10.64a 17.01±1.27c 14.19±2.27c 4.83±0.28c 22.94±0.38b
HUFA 1.16±0.14c 5.87±0.12b 5.72±2.10b 5.25±1.14b 9.99±2.33a 3.42±0.26bc 11.24±0.29a
n–3/n–6 1.99±0.11b 1.34±0.09bc 0.63±0.30bc 1.05±0.16bc 7.46±0.95a 0.12±0.02c 0.70±0.03bc
I. INSAT 60±2c 128±1a 138±32a 89±4bc 93±13bc 37±1d 118±1b
Los valores son medias de tres determinaciones±e.e y fueron analizados mediante ANOVA de una vía seguido de una prueba a
posteriori de comparación múltiples de Tukey para establecer las diferencias significativas. Las medias con letras distintas
indican diferencias estadísticamente significativas (P < 0.05). n.d.= no detectado; SAT= Total de ácidos grasos saturados;
MUFA = Total de ácidos grasos monoinsaturados; PUFA = Total de ácidos grasos poliinsaturados; HUFA = Total de ácidos
grasos altamente insaturados; I. INSAT. = Índice de insaturación.
66
 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

ÁCIDOS GRASOS

La composición de los ácidos grasos varió significativamente (P< 0.05) entre las
especies de macroalgas (Tabla XI). En todas las especies el principal ácido graso
encontrado fue el ácido palmítico (16:0), con el valor más alto en G. vermiculophylla y el
más bajo en R. riparium (64.51±082 y 29.17±5.15%, respectivamente). El mayor contenido
de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) se encontró en R. riparium (45.19±10.64%) con
una importante contribución de los ácidos grasos linoléico (18:2n–6) con 23.42±0.49%,
linolénico (18:3n–3) con 13.57±7.03%), araquidónico o ARA (20:4n–6) con 2.45±0.33% y
eicosapentanóico o EPA (20:5n–3) con 2.87±1.70%. Un menor contenido de PUFA
(38.99±0.64%) se observó en C. sertularioides, con la aportación de 18:2n–6
(13.50±0.67%), 18:3n–3 (16.72±0.71%), 20:4n–6 (1.76±0.07%) y 20:5n–3 (3.75±0,04%).
En P. durvillaei, el contenido de PUFA fue de 22.94±0.38%, con un contenido más bajo de
18:2n–6 (3.90±0.05%) y 18:3n–3 (3.34±0.05%), pero mayor contenido de 20:4n–6
(8.87±0.09%) y un valor similar de 20:5n–3 (2.18±0.12%), en comparación del resto de las
macroalgas. El mayor contenido de 22:6n–3 o DHA se encontró en S. filamentosa
(8.90±2.19%), con valores significativamente más bajos en el resto de las especies.

Se observó que el contenido de ácidos grasos altamente insaturados (HUFA, por sus
siglas en inglés) se mantuvo de 1 a 11%, con mayores valores para P. durvillaei y S.
filamentosa, seguido de C. sertularioides, R. riparium y C. isabelae, los menores valores se
observaron en G. vermiculophylla y U. expansa. El índice de insaturación (I. INSAT.) fue
mayor en R. riparium, C. sertularioides y P. durvillaei (valores de 118 a 138), en
comparación del resto de las especies de macroalgas (Tabla XI).

ESTEROLES

Se observaron diferencias estadísticamente significativas (P<0.05) en el contenido

de esteroles de las macroalgas analizadas (Tabla XII). En las algas rojas S. filamentosa y G.
vermiculophylla se encontró el mayor contenido de colesterol + dehidrocolesterol (> 90%).
Por el contrario, las algas verdes C. sertularioides, R. riparium y C. isabelae, contiene al β-
sitosterol como el principal esterol (71-77%). En comparación con el resto de las especies,

67
 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

el mayor contenido de estigmasterol (14%) se encontró en R. riparium, siendo el segundo

esterol más importante de esta especie. En U. expansa y P. durvillaei, el principal esterol
fue el fucosterol (79%).

PIGMENTOS

La composición de pigmentos variaron significativamente (P <0.05) en relación a

las especies de macroalgas (Tabla XIII). Los dos principales pigmentos que se encontraron
en todas las especies de algas, fueron la clorofila a y b; el primero fue particularmente más
alto (57.57±6.84%) en G. vermiculophylla, seguido de S. filamentosa, P. durvillaei, U.
expansa y C. sertularioides (37-40%), y los valores más bajos (28%) en R. riparium y C.
isabelae. La clorofila b fue mayor (25 a 37%) en todas las algas verdes analizadas y menor
(<3%) en S. filamentosa; y no fué detectada en G. vermiculophylla y P. durvillaei. La
luteína se encontró en proporciones considerables en S. filamentosa, U. expansa y R.
riparium (29, 16 y 13%). Clorofilida a y fucoxantina fueron encontradas en proporciones
considerables en G. vermiculophylla y P. durvillaei (24 y 33%). El contenido de β-caroteno
estuvo dentro del intervalo de 1.5 a 8.3%, con mayor proporción en S. filamentosa y G.
vermiculophylla, mientras que en C. isabelae no se detectó (Tabla XIII).

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE
SINALOA

Tabla XII. Proporción de esteroles en macroalgas seleccionadas de Sinaloa.

Algas verdes Algas rojas Alga café
Ulva Caulerpa Rhizoclonium Codium Spridia Gracilaria Padina
expansa sertularioides riparium isabelae filamentosa vermiculophylla durvillaei
Colesterol + Dehidrocolesterol 7.15±0.42b 0.61±0.10c 2.87±0.81c 0.80±0.07c 90.57±0.17a 91.88±1.98a 1.51±0.21c
Brassicasterol 1.68±0.70b 2.69±0.29ab 1.42±0.63b 1.21±0.18b 1.93±0.24ab 3.14±0.49ab 4.10±0.53a
Campesterol 4.53±0.80b 0.52±0.1d 3.07±0.43c 14.80±0.39a 3.52±0.40bc 0.87±0.38d 1.46±0.28cd
Stigmasterol n.d. 1.08±0.13b 14.27±0.65a n.d. n.d. 1.12±0.21b 1.23±0.39b
β-Sitosterol 4.34±1.10c 76.86±0.50a 75.60±0.88a 70.92±1.04b 0.75±0.07d 0.99±0.32d 1.50±0.31cd
Fucosterol 78.84±4.46a 15.00±0.35b 2.76±0.17c 0.59±0.16c 0.80±0.07c 2.00±1.05c 79.22±1.34a
Esteroles no identificados 6.06±2.08ab 3.16±0.34b n.d. 11.67±1.41a 1.75±0.43c n.d. 11.61±2.08a
Los valores son medias de tres determinaciones ±e.e y fueron analizados mediante ANOVA de una vía seguido de una prueba a posteriori de comparación
múltiples de Tukey para establecer las diferencias significativas. Las medias con letras distintas indican diferencias estadísticamente significativas (P <
0.05).
n.d.= no detectado.
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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE
SINALOA

Tabla XIII. Proporción de pigmentos en las macroalgas seleccionadas de Sinaloa.

Algas verdes Algas rojas Alga café
Ulva Caulerpa Rhizoclonium Codium Spyridia Gracilaria Padina
expansa sertularioides riparium isabelae filamentosa vermiculophylla durvillaei
Clorofilida a n.d. 0.77±0.10b 0.92±0.02b n.d. n.d. 25.18±7.80a n.d.
Sifoxatina n.d. 3.64±0.33b n.d. 14.46±0.59a n.d. n.d. n.d.
Fucoxantina n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 33.88±0.16
Neoxantina n.d. 3.66±0.76 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d.
Violaxantina 2.53±0.05d 8.05±0.08a 6.12±0.11b 1.24±0.12e n.d. n.d. 4.50±0.10c
19-Hex-fucoxantina n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 5.80±0.12
Zeaxantina n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 7.83±0.22 n.d.
Luteina 17.60±0.46b 2.38±0.49c 15.62±0.07b n.d. 33.28±1.16a n.d. n.d.
Dihidroluteina 2.97±0.15ab n.d. 2.50±0.26b n.d. 3.70±0.22a n.d. n.d.
Sifoneina n.d. 5.80±0.18b n.d. 9.05±0.36a n.d. n.d. n.d.
Astaxantina n.d. 1.34±0.51ab 1.52±0.12a n.d. 0.43±0.10b n.d. 0.42±0.03b
Clorofila a 40.06±0.51b 38.88±0.77b 33.45±0.38c 31.08±0.76c 47.67±1.00ab 60.27±7.27a 40.20±0.23b
Clorofila b 32.59±0.23c 27.77±0.34d 36.91±0.46b 42.59±0.36a 2.99±0.11e n.d. n.d.
Clorofilac2 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 11.05±0.24
α-caroteno 0.83±0.03c 1.13±0.26b 1.22±0.09b 1.62±0.12ab 2.30±0.44a n.d. n.d.
β-caroteno 3.41±0.24cd 5.58±0.45bc 1.86±0.28d n.d. 9.62±0.21a 6.73±0.79b 4.16±0.12c
Los valores son medias±e.e y fueron analizados mediante ANOVA de una vía para los pigmentos identificados en más de una de
las especies de algas analizadas y una prueba a posteriori de comparación múltiples de Tukey para establecer las diferencias
significativas. Las medias con letras distintas indican diferencias estadísticamente significativas (P < 0.05).
n.d. = No detectado.
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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

COMPUESTOS CON POTENCIAL BIOACTIVO ANALIZADOS POR

COMPONENTES PRINCIPALES

La diversidad química en los compuestos de valor comercial presentes en las

distintas especies de macroalgas puede ser empleada como biomarcador para agrupar a las
algas dentro de grupos taxonómicos. Adicionalmente, estos compuestos bioquímicos han
demostrado tener distintos tipos de actividades quimioprotectores. Por lo tanto, el análisis
de componentes principales (PCA) permite tanto discriminar las variables bioquímicas que
principalmente explican la variación entre especies, permitiendo además la agrupación de
especies acorde a la variabilidad de los componentes bioquímicos. En este sentido, el
análisis factorial o PCA, mostró que la variación de los componentes bioquímicos
seleccionados por poseer algún potencial bioactivo se explican por tres componentes
principales (Tabla XIV). El primer componente explica el 39.3% de la varianza, con una
contribución significativa de la clorofila a y el β-caroteno (ambos con 0.79), β-sitosterol (–
0.90), ácidos grasos poliinsaturados totales (PUFA) (–0.72) y la clorofila b (–0.88). El
segundo componente explicó el 22.3% de la varianza, con una contribución significativa e
inversa de 20:4n–6 (–0.70), 20:5n–3 (–0.70) y el total de ácidos grasos altamente
insaturados (HUFA) (–0.87). Mientras que el tercer componente, explicó el 18.5% de la
varianza, con la contribución significativa de 22:6n–3 (0.76) y fucosterol (–0.79) (Tabla
XIV).

Los valores de los factores obtenidos con los compuestos bioquímicos

seleccionados mostraron una variabilidad común en el algas rojas G. vermiculophylla y S.
filamentosa, mientras que se obtuvo una composición similar en la algas verdes C.
sertularioides, R. riparium y C. isabelae. En contraste, la composición de U. expansa y P.
durvillaei, fue distinta a las otras especies de algas analizadas (Figura 18).

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Tabla XIV. Ponderación de factores (factor loadings, varimax normalizada) de los tres
componentes principales derivados del análisis factorial.
Variación Factor 1 Factor 2 Factor 3
β-sitosterol –0.90 0.01 0.27
Fucosterol 0.14 –0.18 –0.79
20:4n–6 0.12 –0.70 –0.54
20:5n–3 –0.58 –0.70 0.02
22:6n–3 0.41 –0.10 0.76
PUFA –0.72 –0.57 0.23
HUFA 0.19 –0.87 0.28
Clorofila a 0.79 0.03 –0.06
Clorofila b –0.88 0.40 0.01
β-caroteno 0.79 –0.17 0.38
Eigenvalor 3.9 2.2 1.8
% Varianza Total 39.3 22.3 18.5
Eigenvalor acumulativo 3.9 6.2 8.0
% Varianza acumulativa 39.3 61.7 80.2
Valores en negritas son estadísticamente significativos (≥ 0.7).

2.50

2.00

1.50
C. isabelae U. expansa
1.00
G. vermicullophylla
0.50
R. riparium
0.00
-2.00 -1.50 -1.00 -0.50 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00
-0.50
S. filamentosa
C. sertularioides
-1.00

-1.50
P. durvillaei
-2.00

-2.50

Figura 18. Agrupación de las algas (factor scores) en relación a la variación de los
componentes bioquímicos seleccionados por su potencial bioactivo. Cada punto es una
réplica de la muestra por especie.

72
 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

DISCUSIÓN

Existen diversos reportes de la composición bioquímica de algunas especies de

algas marinas que se encuentran en el Golfo de México y el Océano Pacífico Norte; sin
embargo, son inexistentes los reportes de la composición bioquímica de las algas que se
encuentran en el sur del Golfo de California y específicamente en las lagunas costeras de
Sinaloa. La composición bioquímica ha sido evaluada en distintas especies de macroalgas
en relación a la estación del año y sitio geográfico, se ha demostrado que estas variaciones
en la composición está influenciada por distintos factores intrínsecos asociados a la especie
y factores ambientales como la temperatura, salinidad, radiación y disponibilidad de
nutrientes (Xu et al., 1998; Nelson et al., 2002; Guschina y Harwood, 2006; Hurtado et al.,
2011; Polat y Ozogul, 2013; Serviere-Zaragoza et al., 2015), además en diversos trabajos se
ha reportado que los componentes químicos encontrados en las macroalgas resultan de
utilidad en distintas aplicaciones en la industria de alimentos y farmacológica, ya que
representan una fuente importante de compuestos con valor nutricional y/o con
funcionalidad biológica (Ito y Hori, 1989; Holt yKraan, 2011; Hafting et al., 2015; Tibbetts
et al., 2016)

En el presente estudio, se evaluó la composición bioquímica de las macroalgas de

Sinaloa; se encontró que sus componentes varían de manera importante, particularmente el
contenido de ácidos grasos, esteroles y pigmentos. A través de la selección de algunos de
estos componentes bioquímicos (Tabla XIV) y del análisis de componentes principales
(ACP), se demostró que la composición es similar en las macroalgas rojas (G.
vermiculophylla y S. filamentosa, con excepción del pigmento luteína que sólo está
presente en S. filamentosa), en otro grupo tenemos a las algas verdes (C. sertularioides, R.
riparium y C. isabelae), pero la composición de U. expansa y el alga café P. durvillaei es
particularmente diferente entre ellas y del resto de las especies (Figura 18).

Las algas verdes C. sertularioides y R. riparium se caracterizaron por un mayor

contenido de PUFA, seguido de C. isabelae. Por otro lado, a pesar de que el contenido de
HUFA fue similar en estas algas, se encontró un mayor contenido de 20:5n–3 en C.
sertularioides y R. riparium respecto a C. isabelae; mientras que el contenido de 20:4n–6 y

73
 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

22:6n–3 fue ligeramente mayor en C. isabelae. Desde el punto de vista del impacto en la
salud, es importante la proporción que guarden estos ácidos grasos (Kumari et al., 2010;
van Ginneken et al., 2011a; Kendel et al., 2015), ya que se ha demostrado en distintos
estudios epidemiológicos y pruebas clínicas que existe una relación entre la ingesta de estos
ácidos grasos y los efectos benéficos sobre distintas enfermedades como los desórdenes
cardiovasculares, diferentes tipos de cáncer, asma, enfermedades inflamatorias, artritis
reumatoide y osteoporosis (Gómez-Candela et al., 2011). En cuanto al contenido y tipo de
los esteroles, se observó que las algas verdes mostraron mayor contenido de β-sitosterol
(71-77%), excepto en U. expansa donde se encontró fucosterol (78%) como esterol
principal. En todas las especies la clorofila a y b se presentaron como los pigmentos en
mayor proporción, con ligeras diferencias en la proporciones del resto de los pigmentos. El
alga café P. durvillaei se caracterizó por tener el mayor contenido de 20:4n–6, fucosterol,
fucoxantina y clorofila a.

La variabilidad en la composición bioquímica resulta útil para explicar las

actividades quimiopreventivas que pueden ser encontradas en las distintas especies de
macroalgas. En el capítulo II de esta tesis, se discutirán las bioactividades asociadas en las
especies de macroalgas que fueron evaluadas, de este capítulo se generó una publicación en
la que se atribuyó específicamente la capacidad antioxidante al contenido de clorofilas y
flavonoides, así como a la posible presencia de compuestos lipofilicos como ácidos grasos
y fitosteroles (Osuna-Ruiz et al., 2016).

La capacidad antioxidante que fue evaluada en extractos de estas especies,

principalmente en P. durvillaei y U. expansa puede ser explicada por su contenido de
fucosterol (en ambas especies) y de fucoxantina en la primera especie (Tabla XII y XIII).
La fucoxantina es el principal carotenoide de las algas cafés, y en distintos estudios se ha
correlacionado la actividad antioxidante con la presencia de este pigmento que es capaz de
donar electrones para estabilizar a los radicales libres (Orazio et al., 2012). Se ha
demostrado que la capacidad antioxidante por eliminación de radicales DPPH se
correlaciona con el alto contenido de fucoxantina en las algas cafés Nizamuddinia
zanardinii y Cystoseira indica (Fariman et al., 2016). En otro estudio se encontró que la

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
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capacidad antioxidante evaluada mediante DPPH y CUPRAC (capacidad antioxidante por

la reducción de ion cúprico) y el contenido de fucoxantina, son mayores cuando se
determinan en muestras frescas de Undaria pinnatifida, en comparación con muestras que
han sido liofilizadas (Fung et al., 2013), indicando que la bioactividad y contenido de
pigmentos son afectadas tanto por la técnica de análisis como por el procesamiento de la
muestra. Otro compuesto que puede contribuir con las características bioactivas de P.
durvillaei y U. expansa es el fucosterol, principal esterol en algas cafés, aunque también se
ha encontrado en algunas especies de algas verdes, particularmente en U. expansa, en la
cual ha sido reportada en proporciones similares a la encontrada en nuestro trabajo (78.8%
en este estudio vs. 73.8% en Ilias et al.1985). El fucosterol es un compuesto con una
elevada capacidad antioxidante (Lee et al., 2003) y un candidato prometedor para el
tratamiento de diabetes (Jung et al., 2013), es capaz de inducir la apoptosis in vitro en
células de cáncer de colon (Kim et al., 2010), además posee actividad fotoprotectora contra
daños en la piel y el envejecimiento (Kim et al., 2013), por otra parte los fitosteroles son
efectivos para reducir los niveles de colesterol, LDL y por tanto disminuye el riesgo de
padecimientos de aterosclerosis (de Jong et al., 2003). También en P. durvillaei se
encontraron cantidades considerables de PUFA, pero no fué así en U. expansa (23 vs. 9%)
y adicionalmente al efecto antioxidante producido por los pigmentos y los esteroles en P.
durvillaei y U. expansa, el contenido de PUFA podría estar relacionado con la capacidad
antioxidante, en particular asociada a los ácidos grasos de la serie n–3, los cuales han
mostrado poseer una fuerte capacidad para reducir o eliminar radicales, así como una
inhibición significativa de las ROS/RNS (especies reactivas de oxígeno/especies reactivas
de nitrógeno) en células endoteliales humanas, lo que sugiere un efecto sobre el proceso de
la inflamación que podría reducir la aterosclerosis y enfermedades cardiovasculares
(Richard et al., 2008).

Los antioxidantes son compuestos capaces de inhibir una serie de reacciones

oxidativas, lo que tiene como consecuencia una disminución en la concentración de
radicales libres, éstos producen la peroxidación lipídica y el daño del ADN o incluso la
muerte celular, y por lo tanto inducen diferentes enfermedades crónicas y mutaciones

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 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
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celulares que eventualmente causan varios tipos de cáncer (Duthie et al., 1996). Se ha
reportado que extractos de C. sertularioides, R. riparium y S. filamentosa poseen actividad
anti-mutagénica y actividad antiproliferativa (Osuna-Ruiz et al. 2016). Un elevado
contenido de PUFA y luteína, junto con clorofilas a y b, así como β-sitosterol, podría
explicar las diferencias en la actividad anti-mutagénica de estas especies (R. riparium es
mas antimutagénico que C. sertularioides), mientras que la bioactividad de S. filamentosa
(menor que las de R. riparium y C. sertularioides) pudiera atribuirse a que se encontró un
menor contenido de PUFA y clorofilas, además de la ausencia de β-sitosterol. Se ha
observado que algunos pigmentos fotosintéticos (Panguestuti y Kim 2011), en particular la
luteína, astaxantina y β-caroteno poseen actividad anti-mutagénica (Bhagavathy et al.,
2011). Por otro lado, los valores elevados de β-sitosterol y fucosterol, sin descartar el
contenido de clorofilas y carotenoides, evaluados en C. sertularioides, podrían explicar la
mayor inhibición en la proliferación de células de linfoma B murino (M12.C3.F6). La
clorofila a, β-caroteno y luteína fueron identificados como principales compuestos
quimioprotectores contra la expresión del gen UMU C inducido por un mutágeno en S.
typhimurium TA1535/pSK 1002 (Okai et al., 1996). Además se ha demostrado que los
esteroles son buenos inhibidores de los promotores de tumores, particularmente el β-
sitosterol, el cual es capaz de inhibir el cáncer de piel (Yasukawa et al., 1991) y la
hiperplasia prostática (Wilt et al., 1999). Por su parte el fucosterol ha sido identificado en
ensayos de bioactividad in vitro e in vivo, como un compuesto capaz de actuar contra
diferentes tipos de cáncer (Kim y Van Ta, 2011).
Además de las bioactividades quimiopreventivas, las algas marinas son organismos
capaces de sintetizar compuestos con actividades de tipo antibacterial; recientemente, se
han reportado evaluaciones de extractos de algas en solventes orgánicos contra infecciones
por Vibrios resistentes a los antibióticos en diferentes especies de camarones cultivados, la
mayoría de estos trabajos atribuyen la bioactividad a los ß-glucanos, carotenoides,
tocoferoles, polifenoles, carbohidratos, compuestos halogenados (furanonas), etc.
contenidos en los extractos de las macroalgas, los cuales además actúan como promotores
mejorando los mecanismos de respuesta inmune (humoral y celular) de los camarones,
disminuyendo las tasas de mortalidad por la exposición a los Vibrios (Kanjana et al., 2011;

76
 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
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Sirirustananun et al., 2011; Peso-Echarri et al., 2012; Brito et al., 2014). También han sido
evaluados los extractos metanólicos de Ulva lactuca y Caulerpa sertularioides, siendo ésta
última la especie la que exhibió una actividad importante contra V. parahaemolyticus y V.
alginolyticus, disminuyendo significativamente la mortalidad de Litopenaeus vannamei
causada por exposición a estas dos bacterias (Esquer-Miranda et al. 2016). De acuerdo con
lo encontrado en nuestro estudio y a lo antes expuesto, el contenido de PUFA, en particular
de 20:4n–6, 20:5n–3, β-sitosterol, fucosterol, clorofilas y carotenoides, puede estar
relacionado con la actividad quimiopreventiva de C. sertularioides. Además, no se descarta
que otro compuesto abundante del género Caulerpa sp. conocido como Caulerpina puede
estar presente, ya que este compuesto no tóxico se ha encontrado en varias especies de
caulerpa (Vest et al., 1983; Vidal et al., 1984) y la caulerpina presente en Caulerpa
racemosa ha mostrado propiedades antinociceptivas y antiinflamatorias (De Souza et al.,
2009).
Respecto de la composición química proximal, el contenido de proteínas fue
ligeramente mayor en algas roja (10%), seguido de algas verdes (8%) y menor en el alga
café (6%). Todas las algas mostraron una baja proporción de lípidos, con valores
ligeramente superiores (0.98%) en las algas verdes, respecto de rojas y café (Tabla X). El
compuesto encontrado en mayor proporción en todas las especies fue extracto libre de
nitrógeno (ELN), en esta fracción se incluye una proporción importante de los
carbohidratos. El contenido más alto de esta fracción se encontró en P. durvillaei (69%),
esta alga también mostró el valor más bajo de cenizas.
En general, las variaciones observadas en la composición proximal de las
macroalgas marinas, se encuentran influenciadas por factores tales como la época del año,
área geográfica, contenido y disponibilidad de nutrientes en el ambiente en el que se
desarrollan (Martínez y Rico, 2002; Khairy y El-Shafay, 2013; Munier et al, 2013; Polat y
Ozogul 2013; Nascimento et al., 2014), específicamente en el caso del contenido de
proteína se ha reportado que existe una correlación positiva con el contenido de nitrógeno y
una correlación negativa con la temperatura y salinidad del agua (Marinho-Soriano et al.,
2006). En la mayoría de los reportes se ha encontrado que los contenidos de proteína total
en algas rojas y verdes son mayores que en las especies de las algas café (Dere et al., 2003;

77
 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
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Manivannan et al., 2009; Patarra et al., 2011; Rohani-Ghadikolaei et al., 2012), para algas
de la costa del Pacífico Mexicano Serviere-Zaragoza et al. (2002) reportaron un mayor
contenido de proteínas en algas rojas respecto de las algas café, lo cual es consistente con
los resultados obtenidos para las epecies de algas estudiadas en nuestro trabajo. Por otro
lado, diversos autores han reportado que el contenido de lípidos en las macroalgas varian
con la época y sitios geográficos de recolecta (Nelson et al., 2002; Kumari et al., 2010;
Frikha et al., 2011); esto puede explicar las diferencias en los valores de análisis proximal
encontrados en nuestro estudio respecto de las mismas especies estudiadas por otros
autores, tal es el caso de S. filamentosa recolectada en costas de Turquía, en la cual se
reportaron menores contenidos de proteína (2.81% vs 10.61%), cenizas (5.98% vs 32.54%),
humedad (82.05% vs 93.12%) y lípidos (0.23% vs 0.26%) respecto de la misma especie
recolectada en Sinaloa (Polat y Ozogul, 2013). En contraste, los contenidos de proteína y
lípidos (21.09±3.78 y 3.37±017%, respectivamente) de R. riparium distribuido en la India
(Chakraborty y Santra, 2008) fueron mayores en comparación con la misma especie
analizada en nuestro trabajo (7.85±0.90 y 1.50±0.01%, respectivamente) (Tabla X).
Desde el punto de vista nutricional, un factor importante a considerar en macroalgas
marinas es la composición de ácidos grasos, en particular los que contienen 20 carbonos o
más y de la serie n–3. En este sentido, aun cuando todas las algas contienen 20:5n–3 y 22:6
n–3, el mayor valor nutricional en relación con estos ácidos grasos puede ser atribuido a C.
sertularioides, R. riparium y P. durvillaei (Tabla XI). Un hallazgo interesante fue que en el
caso de alga roja S. filamentosa mostró el mayor valor nutricional debido a que tiene un
elevado contenido de 22:6n–3 (8.9%), mientras que G. vermiculophylla mostró un menor
valor nutricional debido al escaso contenido de EPA y DHA. En general, las especies rojas
han sido identificadas como una buena fuente de EPA; sin embargo, el contenido de este
HUFA es muy variable (Khotimchenko y Gusarova, 2004; Kumari et al., 2010; Imbs et al.,
2012; Pereira et al., 2012). Se ha reportado la variación estacional de 22:6n–3 en S.
filamentosa distribuida en Turquía, con valores que van desde 0.69% en la primavera y
3.82% en verano (Polat y Ozogul 2013). En algas marinas tropicales Ahnfeltia plicata,
Hypnea musciformis y Esperi musciformis (todas rojas) se reportó un contenido de DHA de
0.75%, 0.96% y 1.56%, respectivamente; mientras que en cuatro algas café y nueve algas

78
 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

verdes los valores de DHA se encontraron en el intervalo de 0.05 a 0.78% y 0.81 a 5.81%
(Kumari et al., 2010). Sin embargo, a pesar del contenido de estos ácidos grasos, debe
considerarse la proporción de los ácidos grasos de la serie n–6, ya que la Organización
Mundial de la Salud recomienda una relación de ≥ 1 de n-3/n-6, con el fin de promover la
salud, debido a que esta relación se ha asociado con la disminución de varios trastornos
cardiovasculares, enfermedades inflamatorias y cáncer (Simopoulos, 2009; Gómez-Candela
et al., 2011). Teniendo en cuenta la relación de n–3/n–6, junto con el índice de
poliinsaturación (IPU, Tabla XI), el cual indica el grado de insaturación de los ácidos
grasos evaluados en las algas marinas, todas las especies podrían ser considerados como
promotoras de la salud y apropiadas para el consumo humano, en particular las algas verdes
C. sertularioides y R. riparium y el alga café P. durvillaei. Aun cuando U. expansa mostró
una proporciónde n–3/n–6>1, ocasionado por el contenido de ácidos grasos de 18 átomos
de carbono y no alcontenido de HUFA, esta especie deben ser considerada valiosa,
nutraceuticamente hablando, principalmente por el contenido inusual de fucosterol y la
considerable cantidad de pigmentos (clorofila a y b, luteína y β-catoteno), ya que estos
compuestos poseen un elevado potencial antioxidante. Por otro lado, la diferencia en el
contenido de fitosteroles (brasicasterol, campesterol, estigmasterol, β-sitosterol y
fucosterol) de algas verdes y cafés, en comparación con el mayor contenido de colesterol +
dehidrocolesterol de algas rojas, debe ser considerado como un factor importante desde el
punto de vista de salud, ya que se ha demostrado que no solo los fitosteroles reducen el
contenido de colesterol total y LDL-colesterol en plasma, lo que disminuye el riesgo de
padecer enfermedades cardiovasculares; sino también los óxidos de fitosteroles u
oxifitoesteroles tienen la capacidad de ser citotóxicos y pro-apoptóticos, por lo que podrían
utilizarse en la prevención de la carcinogénesis (García-Llatas y Rodríguez-Estrada, 2011).

79
 CAPÍTULO I: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE INTERÉS
COMERCIAL EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

CONCLUSIONES

En las algas analizadas se encontraron diferencias en el valor nutritivo y

quimiopreventivo. De acuerdo a los componentes bioquímicos que fueron seleccionados
como marcadores de actividad biológica, se encontró que la composición fué similar entre
algas rojas G. vermiculophylla y S. filamentosa y las algas verdes C. sertularioides, R.
riparium y C. isabelae, mientras que la composición fue particularmente diferente en el
alga verde U. expansa y en el alga café P. durvillaei. Los principales compuestos
bioquímicos que contribuyeron a la variabilidad total de las especies estudiadas, fueron el
β-sitosterol, PUFA, HUFA, 20:4n–6, 20:5n–3, clorofila a, clorofila b y β-caroteno, y en
menor medida el fucosterol y 22:6n–3.
De acuerdo con la relación de n-3/n-6, el índice de poliinsaturación (IPU) y el
contenido de fitosteroles, la mayoría de las especies de las macroalgas marinas estudiadas
podrían ser consideradas apropiadas para el consumo humano, en particular C.
sertularioides, R. riparium y P. durvillaei.
Las diferencias en el contenido de estos compuestos pudieran explicar la respuesta en la
actividad quimiopreventiva (e.g. antioxidante, antimutagénica y antiproliferativa) evaluada
en estas especies de algas en el siguiente capítulo.

80
 CAPÍTULO II
POTENCIAL BIOACTIVO EN
MACROALGAS DE LA COSTA DE
SINALOA
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

INTRODUCCIÓN

Al igual que otros organismos sésiles, las estrategias de supervivencia que emplean
las algas incluyen adaptaciones dentro de las comunidades biológicas en las cuales se
desarrollan (cambios ambientales, presencia de depredadores, disponibilidad de nutrientes,
entre otros). Estas estrategias de adaptación pueden implicar cambios físicos o químicos,
éstos últimos incluyen la respuesta defensiva mediante un compuesto tóxico o metabolitos
repelentes/antiadherentes, los cuales son producidos por los organismos vivos, a éstos
compuestos se les denomina "productos naturales" (Lobban y Harrison, 1997; Dawes,
1998).

Desde el punto de vista de aprovechamiento del recurso, las algas son importantes
fuentes de productos naturales bioactivos. La bioactividad es una característica de una
molécula o compuesto derivado de una respuesta fisiológica al estrés ambiental o bien un
proceso acumulativo de cambios en las rutas metabólicas primarias 1, por lo que son el
resultado de procesos enzimáticos y poseen la capacidad para interactuar con ligandos
naturales o sintéticos, lo que les confiere que sean capaces de proporcionar algún efecto
farmacológico2 (Maschek y Baker, 2008).

Las investigaciones formales de compuestos naturales bioactivos de origen marino

iniciaron en 1951 con los trabajos de Bergman3; posteriormente, a partir de 1997 el número
de trabajos de investigación relacionados con el tema mostró un crecimiento significativo, a
este respecto se cuenta con una exhaustiva revisión de las investigaciones científicas
publicadas en 2014 realizada por Blunt et al. (2016), en la cual se emplearon 1,116 citas
que refieren compuestos naturales de origen marino aislados de microorganismos y
fitoplancton, algas verdes, cafés y rojas, esponjas, cnidarios, briozoos, moluscos, tunicados,
equinodermos, manglares y otras plantas y microorganismos intermareales (753 del período

1Las rutas bioquímicas primarias, son aquellas que los organismos vivos deben realizar continuamente para
llevar a cabo sus funciones biológicas como crecer, reproducirse, etc.
2Efecto farmacológico, es cualquier cambio producido en el organismo después de la administración de dosis
normales de un fármaco. Puede ser de dos tipos, principal o beneficioso e indeseables o adversos.
(Terapéutico, sistémico y tóxico)
3 Un ejemplo de los trabajos de Bergmann es el artículo publicado en colaboración con Feeney en 1951:
"Contributions to the study of marine products XXXII. The nucleosides of sponges. I", con DOI:
10.1021/jo01146a023
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

enero-diciembre de 2014). Esta revisión enfatiza el reporte de nuevos compuestos (1,378 en

456 artículos en 2014), junto con sus actividades biológicas, organismo y país de origen, en
algunos casos también incluyen estudios biosintéticos, revisión de estructuras y
estereoquímica. Para el caso específico de los hallazgos relacionados con el reporte de
nuevos compuestos provenientes de algas marinas y cuya bioactividad asociada está
comprobada al menos en pruebas in vitro, se menciona un mayor número de reportes en
algas rojas en comparación con las verdes y cafés, en las algas rojas los reportes en ese año
se observó un incremento en la descripción de nuevos compuestos (42 para 2014
comparado con 9 en el 2013) como glicolípidos, alquenos y alquinos halogenados,
monoterpenos halogenados, sesquiterpenos, diterpenos y aromáticos bromados.

A la fecha, mas de 30,000 nuevas sustancias han sido encontradas de fuentes

marinas y el número va en aumento cada año, estos compuestos naturales pueden obtenerse
de diferentes organismos, incluyendo microorganismos (microalgas y bacterias), plantas
(algas cafés, rojas y verdes), invertebrados (crustáceos, esponjas, pepinos marinos, ascidias,
etc.), así como algunos vertebrados (Hu et al., 2016) y a pesar del incremento de grupos de
investigación alrededor de mundo interesados en el desarrollo de nuevas líneas de
investigación relacionadas con los compuestos naturales de origen marino, la generación de
este conocimiento demuestra la sustentabilidad de los compuestos marinos en el
descubrimiento de nuevas drogas o fármacos para tratar y prevenir diversas enfermedades
crónicas (Suleria et al., 2016).

Actualmente en México, es una ciencia en desarrollo los estudios relacionados con

los compuestos bioactivos a partir de algas marinas, la mayor concentración de trabajos de
investigación se concentran en la zona del Golfo de México y mar Caribe, que incluye los
litorales de los Estados de Campeche, Quintana Roo, Yucatán, Tabasco, Veracruz y
Tamaulipas, predominando los reportes para especies de la Península de Yucatán. En la
zona del Pacífico Norte (particularmente en Baja California y Baja California Sur),
históricamente las algas marinas se han utilizado como fuente de ficocoloides (sustancia
con capacidad de producir geles que se obtiene de la pared celular de las algas, los cuales
tienen diversas aplicaciones en la industria de alimentos, farmacéutica y biotecnológica),

83
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

pero además las especies que se encuentran en esta región (incluyendo Sonora, Sinaloa y
Nayarit) pueden ser una fuente de compuestos bioactivos, por lo que en el desarrollo del
Capítulo II de ésta tesis, se revisan aspectos relacionados con la bioactividad en algas
marinas y se muestran los resultados obtenidos de la caracterización bioactiva de extractos
con diferentes solventes orgánicos.

LAS MACROALGAS COMO FUENTES DE COMPUESTOS BIOACTIVOS

Las algas contienen una gran variedad de compuestos biológicamente activos -

ácidos grasos poliinsaturados (PUFA), vitaminas (del grupo B), carotenoides, polifenoles,
fibra dietética, polisacáridos sulfatados y proteínas (Michalak y Chojnacka, 2015). Existen
un gran número de reportes en el que se informa que las algas son productores potenciales
de compuestos antibacterianos, antifúngicos, antivirales, antioxidantes, anti inflamatorios y
antitumorales. Por lo que cada vez el ambiente marino y específicamente las macroalgas
son empleadas en la búsqueda de compuestos naturales bioactivos.

Tipos de actividades quimiopreventivas encontradas en las macroalgas

La búsqueda de estrategias para prevenir enfermedades ha cobrado gran relevancia

debido al aumento constante de la incidencia mundial del cáncer y otras enfermedades
crónicas degenerativas, aunado a la morbilidad, mortalidad y los elevados costos del sector
salud y la seguridad social para dar tratamiento terapéutico a las personas enfermas.

Dentro de estas estrategias se cuenta la quimioprevención, ésta se define como el

uso de agentes naturales, sintéticos o biológicos para revertir, suprimir o impedir que
cualquiera de las fases iniciales de carcinogénesis o la progresión de células premalignas a
la enfermedad invasiva (Sporn, 1976). La quimioprevención puede implicar la perturbación
de una variedad de pasos en la iniciación del tumor, promoción y progresión (Steward y
Brown, 2013). Un gran número de mecanismos se han descrito y muchos han sido los
intentos para clasificar ampliamente a los agentes quimiopreventivos de acuerdo con los
efectos que tienen en diferentes etapas de la carcinogénesis (Figura 19). Sin embargo es
probable que muchos agentes, en particular los que son derivados de la dieta con múltiples

84
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

bioactividades, ejerzan efectos durante todo el proceso carcinogénico. Los compuestos que
inhiben la iniciación del cáncer se denomina tradicionalmente ''agentes de bloqueo" y puede
actuar mediante la prevención de la interacción entre los carcinógenos químicos o los
radicales libres endógenos y el ADN, reduciendo así el grado de daño, ya que el daño
celular producido mediante estos agentes dan como resultados mutaciones que contribuyen
no sólo a la iniciación del cáncer, sino también la inestabilidad genómica y la
transformación progresiva neoplásica en general. Así pues, la protección puede conseguirse
como una consecuencia de la disminución de la captación celular y la activación metabólica
de pro carcinógenos y/o una mejora en la desintoxicación de los reactivos electrófilos y la
eliminación de radicales libres, así como la inducción de vías de reparación celular
(Steward y Brown, 2013).

Antioxidantes Inhibición de angiogénesis

Inhibición de la invasión y metástasis

Iniciación Promoción Progresión

Proceso de desarrollo de
cáncer
Antimutágenos
Antiproliferativos
Agentes de bloqueo Antiinflamatorios Agentes de supresión

Figura 19. Etapas durante el desarrollo del cáncer, donde los compuestos
quimiopreventivos ejercen su actividad. Figura adaptada de López-Saiz et al. (2013)

La regulación dirigida a una disminución de las respuestas inflamatorias crónicas y

la producción de especies reactivas del oxígeno y nitrógeno pueden también contribuir a la
prevención del inicio del cáncer. Otro de los procesos de protección incluye la modulación
de metil transferasas de ADN para prevenir o revertir la inactivación inducida por la
hipermetilación de genes supresores de tumores, así como la inhibición de enzimas histona
desacetilasas, las cuales juegan un papel fundamental a nivel de estructuración de

85
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

cromosomas y su posterior transcripción, además, se han descrito una variedad de efectos

protectores que puede realizar los compuestos naturales para bloquear los mecanismos
epigenéticos que son asociados a la carcinogénesis (Hauser y Jung, 2008).

Una vez que se ha producido la iniciación, los agentes quimiopreventivos pueden

influir en la promoción y progresión de las células iniciadas, tales compuestos se
denominan a menudo "agentes de supresión" (Figura 19). Estos agentes emplean diferentes
mecanismos entre los que se incluye la inhibición de las vías de transducción de señales
para perturbar los efectos de promotores del tumor (Karin, 2006), lo que evita la
proliferación de células cancerosas. En algunos casos, las hormonas pueden promover la
progresión del tumor y los antiestrógenos como el tamoxifeno (droga quimiopreventiva
para cáncer de seno) puede bloquear este efecto (Yager y Davidson, 2006). Otros
mecanismos de quimioprevención incluyen la inducción de apoptosis y la inhibición de la
angiogénesis (Noonan et al., 2007).

Existen tres enfoques generales en el uso clínico de agentes de quimioprevención:

(1) "Quimioprevención primaria", que implica la administración de agentes a la población
"sana" en general o para aquellos sin enfermedad manifiesta pero que tienen factores de
riesgo particulares; (2) "Quimioprevención secundaria", que consiste en la identificación de
individuos con lesiones premalignas y se les administran los agentes para prevenir la
progresión a cáncer invasivo; y (3) "Quimioprevención terciaria", la cual se define como la
administración de agentes para prevenir la recurrencia de ciertos tipos de cáncer en
personas que han sido sometidos a un tratamiento exitoso de enfermedad temprana (Kelloff
et al., 1995).

Estos agentes pueden ser compuestos farmacológicos o bien ingredientes bioactivos

incluidos a través de la dieta, y en ambos casos estos compuestos pueden provenir de
organismos marinos como las algas.

Existe un número considerable de investigaciones relacionadas con compuestos

naturales provenientes de algas que posee actividad quimiopreventiva, en este capítulo nos

86
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

enfocaremos en tres, actividad antioxidante, antimutagénica y antiproliferativa. Las cuales

se describen brevemente a continuación.

Actividad antioxidante

Un antioxidante es cualquier sustancia que a bajas concentraciones, comparado con

el sustrato oxidable, retarda o previene significativamente la oxidación de ese sustrato
(Cárdenas-Rodríguez y Pedraza-Chaverri, 2006).
De acuerdo con lo descrito por (Halliwell, 1999), los antioxidantes se pueden
clasificar de la siguiente manera: (a) agentes que catalíticamente remueven los radicales
libres y a otras especies reactivas. Ejemplos: enzimas como la superóxido dismutasa
(SOD), catalasa, peroxidasas y antioxidantes específicos para el grupo tiol, (b) proteínas
que abaten la disponibilidad de los prooxidantes tal como los iones de hierro o cobre, y el
grupo hemo, ejemplos: ferritina, transferrina, haptoglobinas, hemopexina y metalotioneína,
(c) proteínas que protegen biomoléculas contra el daño (incluyendo estrés oxidativo) por
otros mecanismos, ejemplo: proteínas de choque térmico localizadas en el retículo
endoplásmico, periplasma y citoplasma, (d) agentes de bajo peso molecular que atrapan
diversas especies reactivas de oxígeno (ERO) y especies reactivas de nitrógeno (ERN),
ejemplos: glutatión, tocoferol, bilirrubina y ácido úrico.
Ha sido ampliamente demostrado que existe una relación directa entre el consumo
de algas marinas y la prevención y/o en el tratamiento de patologías relacionados con el
estrés oxidativo (Jiménez-Escrig y Sánchez-Muniz, 2000; Funahashi et al., 2001; Yuan y
Walsh, 2006). Además los extractos de algas marinas han sido ampliamente estudiados por
su actividad antioxidante, esta actividad se ha detectado por un número considerablemente
variado de técnicas, con distintos mecanismos de acción como son: la capacidad de atrapar
radicales libres, quelar metales activos, mecanismos de donación y aceptación de
electrones, capacidad de interrupción de la peroxidación lipidica y el incremento de la
actividad de enzimas antioxidantes (Yan et al., 1999; Jiménez-Escrig y Sánchez-Muniz,
2000; Lim et al., 2002). Esta actividad a su vez pudiera explicar las propiedades neuro y
hepatoprotectoras que presentan algunos de estos extractos (Linares et al., 2004;
Raghavendran et al., 2005).

87
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Un gran número de especies de macroalgas han sido identificadas como fuente de

compuestos antioxidantes, en la mayoría de los casos, la actividad has sido asociada con el
contenido de fenoles, flavonoides, ácidos grasos poliinsaturados, pigmentos y/o
polisacáridos sulfatos, presentes en los extractos.

Actividad antimutagénica

El término “antimutagénesis” fue usado inicialmente por Novik y Szilard en el año

1951 observaron que la presencia de nucleótidos normales de purinas en un medio de
crecimiento causaba una reducción significativa de la frecuencia de mutaciones de
resistencia a los fagos en la población bacteriana, posteriormente la antimutagénesis fue
definida como el proceso mediante el cual se reduce la frecuencia de mutaciones
espontáneas o inducidas (Kada et al., 1984).
La acción antimutagénica de un compuesto se define como la característica o acción
de esta sustancia para disminuir o evitar el daño provocado por mutaciones en el ADN de la
célula (antimutágeno) (Arencibia et al., 2009). Los antimutágenos pueden ser agrupados en
dos grandes categorías: los agentes bloqueadores, que impiden que los carcinógenos
alcancen o reaccionen con los sitios diana y los agentes supresores, que previenen la
evolución de los procesos neoplásicos.

Actividades antimutagénicas han sido descritas en distintas especies de macroalgas,

tales como Laminaria japonica y Undaria pinnatifida (Okai et al., 1993), Porphyra ternera
(Okai et al., 1996), Meristotheca papulosa (Cho et al., 1997), Hijikia fusiforme (Okai y
Higashi‐Okai, 1994), Gracilaria lameiformis (Chen et al., 2005) y Laminaria angustata
(Reddy et al., 1984).

Actividad antiproliferativa

La actividad antiproliferativa se refiere a la inhibición de la reproducción de células

cancerosas; por lo tanto, un agente antiproliferativo es aquél capaz de evitar la reproducción
de células de cáncer; sin embargo, este efecto puede darse también en células normales
(Rana et al., 2015).

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 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Los mecanismos de los agentes antiproliferativos están relacionados principalmente

con la inhibición de la síntesis de nucleótidos del ADN, evitar la división celular e inhibir a
las topoisomerasas (Acevedo et al., 2013; Rana et al., 2015)
En las algas marinas existe un número considerable de reportes que indican la
efectividad de extractos y compuestos provenientes de distintas especies con propiedades
antiproliferativas sobre distintos tipos de cáncer. En México los reportes de evaluación
antiproliferativa en algas son mucho menores y la mayoría de éstos se concentran en
especies de algas recolectadas en el Caribe, particularmente en Yucatán (Moo-Puc et al.,
2011a; Moo-Puc et al., 2011b; Caamal-Fuentes et al., 2014a; Caamal-Fuentes et al.,
2014b).

OBJETIVO GENERAL

Evaluar la actividad quimiopreventiva de extractos crudos provenientes de

Gracilaria vermiculophylla (Ohmi) Papenfuss, Spyridia filamentosa (Wulfen) Harvey,
Ulva expansa (Setchell) Setchell y Gardner, Rhizoclonium riparium (Roth) Harvey,
Caulerpa sertularioides (S. G. Gmelin) M. A. Howe, Padina durvillaei (Bory Saint-Vicent)
y Codium isabelae (W. R. Taylor) recolectadas en el estado de Sinaloa, México.

MATERIALES Y MÉTODOS
La recolección y tratamiento de las muestras se mencionó en recolecta y manejo de
muestras (página 43).

OBTENCIÓN DE EXTRACTOS

Se empleó la técnica reportada por (Rosaline et al., 2012) con las siguientes
modificaciones. La extracción de compuestos se realizó con solventes orgánicos (Sigma,
grado reactivo ACS ≥ 99.5%) con distintos grados de polaridad. Se realizaron extracciones
sucesivas, siguiendo el orden de polaridad de solventes de menor a mayor (hexano, acetona
y metanol), manteniendo las muestras de alga con los solventes durante 48 horas a
temperatura ambiente en una relación 1:3 p/v, posteriormente se filtró al vacío con filtro

89
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Whatman® GF/C, y se evaporó el solvente para realizar la extracción con el siguiente

solvente. Los extractos obtenidos se concentraron en rotavapor a 40 °C y se llevaron a
sequedad con nitrógeno gaseoso, posteriormente los extractos hexánicos y acetónicos se
resuspendieron en acetona y los metanólicos en DMSO, a una concentración de 30 mg/mL,
los cuales se conservaron a –70 °C y protegidos de la luz hasta su análisis.

FITOQUÍMICA DE EXTRACTOS

Clorofila total y carotenos

Con base a lo reportado por (Wellburn, 1994), se obtuvo la estimación del contenido
de pigmentos presentes en los extractos, para ello se prepararon muestras con acetona pura
en distintas diluciones (concentraciones de 0.1 a 2.7 mg/mL) a las cuales se determinó la
absorbancia a 470, 646 y 663nm, empleando acetona al 80% como blanco.

Las concentraciones se calcularon con las siguientes fórmulas:

Clorofila a (Ca) = 12.21A663–2.81A646

Clorofila b (Cb) = 20.13A646–5.03A663
Carotenos (Cx+c) = (1000A470– 3.27Ca–104Cb) / 198

Fenoles solubles totales por el método de Marigo (1973)

Para determinar el contenido total de compuestos fenólicos solubles presentes en los

extractos se mezclaron 100µL de extracto con 150 µL de FOLIN (diluido 1:1), 1 mL de
Na2CO3 al 2% y NaOH 0.4%, se incubó por 20 minutos a 25 °C protegidos de la luz y se
determinó la absorbancia a 750 nm, empleando como blanco el solvente correspondiente
(Véase Anexo A2.1).

La concentración de fenoles se determinó empleando una curva estándar de ácido

gálico y se expresó en mg equivalentes de ácido gálico por gramo de extracto crudo (mg
EAG/g de EC).

90
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Contenido de flavonoides totales

La determinación de flavonoides se realizó mediante un método colorimétrico

modificado por Luximon-Ramma et al., (2002). Para ello, alícuotas de 1.5 mL de muestra
se mezclaron con volúmenes iguales de cloruro de aluminio (al 2% en metanol), se agitaron
vigorosamente y se dejaron reposar 10 minutos. Posteriormente se midió la absorbancia a
368 nm. Para determinar la concentración de flavonoides en la muestra se empleó una
curva patrón de quercetina (pureza ≥ 95%, Sigma-Aldrich) con concentraciones de 0 a 0.5
mg/mL (Véase Anexo A2.2).

Posteriormente el contenido en flavonoides totales se expresó como equivalentes de

queracetina (mg queracetina/100 mL muestra; CEQ).

IDENTIFICACIÓN DE BIOACTIVIDAD EN EXTRACTOS

Actividad de inhibición del radical DPPH

La actividad de inhibición del radical DPPH se determinó según el método descrito

por Müller et al., (2011). Alícuotas de 100 µL de los extractos (en acetona o DMSO, según
sea el caso) a una concentración de 30 mg/mL fueron transferidos a tubos de ensayo,
seguido de la adición de 900 µL de una solución 0.3 mM de DPPH en hexano:etanol (1:1).
Los tubos se incubaron a temperatura ambiente durante 30 minutos protegidos de la luz y se
determinó la absorbacia a 540 nm (Anexo A3.1). Se sustrajo la auto-absorbancia de las
alícuotas y blancos (según el solvente) y se calculó la inhibición del radical de acuerdo con
la siguiente ecuación:

𝐴−𝐵
% 𝑅𝑒𝑑𝑢𝑐𝑐𝑖ó𝑛𝐷𝑃𝑃𝐻 = × 100
𝐴

Donde:
A: Absorbancia de control de DPPH
B: Absorbancia de la muestra

91
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Reducción de Radical ABTS

Para determinar la capacidad de reducción de radicales ABTS en los extractos, se

utilizó la técnica descrita por Przygodzkaet al. (2014) con las siguientes modificaciones. Se
empleó el radical ABTS (2,2-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonate) para
determinar la capacidad antioxidante de los extractos de macroalgas. Para realizar las
mediciones, el ABTS activado con 16 horas de anticipación, se diluyó en etanol hasta
obtener un nivel de absorbancia de 0.7 a 734 nm. Para el ensayo, 2.9 ml de la solución de la
ABTS y 100µL del extracto respectivo se mezclaron y la absorbancia se midió
directamente al tiempo cero y después de 10 min a 734 nm, esto a temperatura ambiente
(Anexo A3.2). El porcentaje de reducción del radical ABTS se determinó mediante la
siguiente ecuación:

𝐴−𝐵
% 𝑅𝑒𝑑𝑢𝑐𝑐𝑖ó𝑛𝐴𝐵𝑇𝑆 = × 100
A

Donde:

A = La absorbacia de la solución de ABTS antes de añadir el extracto (tiempo cero)

B = La absorbancia de la solución ABTS después de 10 minutos de adición del extracto.

Actividad antimutagénica

Los extractos secos obtenidos por fraccionación, se reconstituyeron con DMSO

(extractos metanólicos) o acetona (extractos hexánicos y acetónicos) hasta una
concentración de 30mg/mL. Posteriormente se realizaron diluciones seriadas 1:10, estas
diluciones se mezclaron con AFB1 hasta una concentración final de 500 ng de AFB1/100
μL. La mutagénesis residual de AFB1 se probó usando un estándar de acuerdo con el
procedimiento descrito por Maron y Ames (1983), el cual emplea la capacidad de mutación
que posee Salmonella typhimurium TA98 y TA100, la cual carece de la expresión del gen
para producir histidina y que ante la presencia de un agente con capacidad mutagénica,
provoca la mutación para que esta cepa exprese el gen de histidina, mismo que se evidencia

92
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

por el crecimiento positivo del microorganismo en un medio deficiente de histidina (Anexo

1). Todos los ensayos se realizaron por triplicado.

ACTIVIDAD ANTIPROLIFERATIVA

Línea celular

Para determinar la actividad antiproliferativa de los extractos se empleó el modelo

murino, para ello se utilizó la línea celular M12.C3.F6 de linfoma de células-B (murine B-
cell lymphoma) las cuales fueron proporcionadas por el Dr. Emil R. Unanue (Department
of Pathology and Immunology, Washington University at St. Louis, MO, USA) al Dr.
Carlos Velázquez (Depto. de Ciencias Químico Biológicas, Universidad de Sonora). Los
cultivos celulares se realizaron en medio Dulbecco’s modificado por Eagle’s (DMEM)
(Gibco, Grand Island, NY, USA) suplementado con 5% de suero fetal bovino inactivado
térmicamente, para lograr el crecimiento celular el cultivo se incubó a 37 °C en una
atmósfera con 5% CO2.

Ensayo de antiproliferación

El efecto de los extractos de macroalgas sobre la proliferación de la línea celular

M12.C3F6 se determinó con el ensayo estándar del MTT (Mosmann, 1983). Para ello se
colocaron en una microplaca estéril de 96 pozos 10,000 células (50 μL) por pozo. Después
se incubó por 12 horas a 37 °C en una atmósfera con 5% CO2 para lograr la adhesión de
las células, el cultivo celular fue incubado con 50 μL de medio conteniendo varias
concentraciones de extractos de algas y posteriormente se incubó por 48 horas. Todos los
extractos primero se resuspendieron en dimetilsulfóxido (DMSO) y fueron diluido con
medio DMEM con 5% de suero fetal bovino inactivado térmicamente Los controles de los
cultivos celulares fueron incubados con DMSO (concentraciones finales de DMSO 0.06%–
0.5% v/v). En los controles no se observaron evidencia de daño celular. Transcurridas las
48 horas de incubación, se adicionaron 10 μL de solución MTT (5 mg/mL) a cada pozo.

Los cristales de formazan formados se disolvieron con isopropanol acidificado y las

microplacas se leyeron en un lector de microplacas ELISA (Benchmark Microplate Reader;

93
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Bio-Rad, Hercules, CA, USA) usando una longitud de onda de prueba de 570 nm y una de
referencia de 630 nm.

Análisis estadísticos

Se realizó un análisis de varianza de una vía para evaluar los rendimientos de extracción
de las distintas especies en los tres solventes orgánicos empleados, el contenido total de
fenoles, el contenido total de flavonoides, clorofilas y carotenoides, la capacidad
antioxidante, antimutagénica y antiproliferativa de los distintos extractos algales, seguido
de una prueba a posterior de Tukey para establecer diferencias significativas. Los valores
en porcentaje fueron transformados empleando el arcoseno antes de su análisis (Zar, 1999),
pero solo se muestran en la sección de resultados los datos promedio sin transformación.

Se realizó un análisis factorial (Varimax normalizada, mediante componentes

principales) en el cual se extrajo la maxima varianza de los compuestos antioxidantes
(fenoles totales, flavonoides totales, clorofila y carotenoides) en una combinación lineal
(componente principal) de todos los antioxidantes analizados en cada extracto,
considerando la ponderación de factores (factor loadings) ≥ 0.7 y eigenvalor> 1. Con el fin
de analizar la variación de los CP entre las especies de algas con cada solvente orgánico
empleado, los CP se utilizaron como nuevas variables a las que se les aplicó un análisis de
varianza de una vía, seguido de una prueba a posteriori de Tukey para establecer
diferencias significativas (Hurtado et al., 2012). Finalmente, los CP se usaron como una
combinación de los compuestos antioxidantes analizados, los cuales se correlacionaron
(Pearson) con la actividad antioxidante determinados por DPPH y ABTS. Los datos son
reportados como valores promedio±error estándar y fueron analizados con Statistica V.
13.0 (Statsoft, Inc., Tulsa, OK).

94
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

RESULTADOS

RENDIMIENTOS DE EXTRACCIÓN

Los rendimientos de extracción con los tres solventes empleados en las algas
seleccionadas para el estudio se muestran en la Figura 20. En promedio, los valores de
rendimiento de extracción con acetona, hexano y metanol, para todas las algas fueron de
6.4± 0.5, 2.7±0.5 y 1.4±0.3%, respectivamente; observándose diferencias significativas (P
< 0.05) en el rendimiento de extracción asociado a la especie y al solvente empleado.
Los mayores rendimientos se obtuvieron en los extractos metanólicos de R.
riparium, S. filamentosa, C. sertularioides (9.5, 8.3 y 6.7%, respectivamente). En todas las
especies evaluadas, los extractos con metanol mostraron los valores más elevados de 4.2 a
5.8 %. Y en el caso de las extracciones con acetona, destacó el extracto de P. durvillaei
cuyo rendimiento fue significativamente mayor (6.7%) al resto de los extractos en este
solvente.
Los CP obtenidos a partir de los compuestos antioxidantes no se correlacionaron
con el rendimiento de extracción en hexano o metanol, pero si se observó una correlación
del CP2 con el rendimiento cuando se empleó la acetona (r = 0.75, P<0.05, Tabla XV).

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE

Compuestos fenólicos totales, contenido total de flavonoides, clorofilas y carotenoides

En la Tabla XVI se muestra la composición química de los extractos. En general, se

observaron diferencias estadísticamente significativas (P<0.05) para el contenido de
compuestos fenólicos totales, flavonoides, clorofilas y carotenoides entre los distintos
tratamientos y especies.

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 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Figura 20. Rendimiento de extracción (%) de las especies de macroalgas seleccionadas

utilizando diferentes solventes. Los datos son media(n=3)±e.e. Las letras distintas sobre las
barras indican las diferencias estadísticamente significativas (P< 0.01).

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 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Tabla XV. Ponderación de factores (factor loadings, varimax normalizada) usando componentes principales (CP) y correlación
de los CP con la capacidad antioxidante y rendimiento de los extractos en hexano, acetona y metanol de las algas seleccionadas.
Variación Hexano Acetona Metanol
Factor 1 Factor 2 Factor 1 Factor 2 Factor 1 Factor 2 Factor 3
Fenoles totales -0.09 -0.80 -0.21 0.92 -0.04 0.13 -0.99
Flavonoides totales 0.86 0.12 0.84 0.33 0.16 0.88 0.04
Clorofila total 0.98 -0.05 0.99 0.03 0.98 -0.15 -0.05
Clorofila a 0.92 0.26 0.96 -0.04 0.94 -0.20 0.00
Clorofila b 0.91 -0.22 0.94 0.12 0.97 -0.12 -0.07
Carotenoides Totales -0.24 0.73 -0.20 0.96 -0.56 -0.56 -0.14
Eigenvalor 3.4 1.3 3.6 1.9 3.1 1.2 1.0
Varianza total % 57.5 21.6 59.7 31.4 52.4 19.8 16.7
Eigenvalor acumulado 3.4 4.7 3.6 5.5 3.1 4.3 5.3
% acumulativo 57.5 79.1 59.7 91.1 52.4 72.2 88.9
Coeficiente de correlación
DPPH 0.81* 0.17 0.47 0.51 -0.22 0.61 0.16
ABTS 0.91** 0.00 -0.48 0.33 0.24 -0.50 0.05
Rendimiento de extracción -0.48 0.10 -0.28 0.75* -0.61 -0.24 0.45
Valores en negritas son estadísticamente significativos (≥ 0.7). Significancia estadística = *P <0.05, **P <0.01
97
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Figura 21. Componentes principales obtenidos para el total de compuestos antioxidantes (flavonoides, compuestos fenólicos
totales, contenido de clorofila total, clorofila a y clorofila b, y contenido total de carotenoides) y actividad antioxidante en
extractos hexánicos, acetónicos y metanólicos de las algas seleccionadas. (a) CP1 y (b) CP2, actividad antioxidante evaluada
mediante (c) DPPH y (d) ABTS Los datos representan los valores promedios±error estándar. Tanto para DPPH y ABTS, se
expresa la capacidad antioxidante equivalentes de Vitamina C (CAEVC), un equivalente de vitamina C (EVC) son los mg de
vitamina C por cada 100 mg de extracto seco (n=3).
98
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Tabla XVI.Contenido total de compuestos fenólicos, flavonoides, clorofilas y carotenoides en los extractos de algas.
CTC3
Solvente CFT1 CF2 (µg/mg dw)
Especies de extracción (EAG) (EQ) Ct Ca Cb Cx+C
U. expansa H 3.51±0.271bc 9.7±0.0f 1.40±0.004h 0.86±0.013h 0.55±0.046e 0.127±0.022ef
A 1.13±0.041e 31.9±0.8c 88.82±0.306ª 49.98±0.016b 38.84±0.080a n.d.
M 1.01±0.062e 12.4±0.2 e 3.11±0.015h 1.94±0.021hg 1.16±0.006e n.d.
C. sertularioides H 2.55±0.185cd 16.3±3.3 ed 14.99±0.04e 12.48±0.035e 2.50±0.046d 0.018±0.004f
A 1.01±0.020e 66.6±1.5b 90.44±0.323ª 63.25±0.53a 27.19±0.20b n.d.
M 0.68±0.075e 14.6±0.7e 8.52±0.313f 3.70±0.042g 4.82±0.35cd n.d.
R. riparium H 2.46±0.070cd 9.8±0.2 f 0.81±0.032i 0.70±0.035i 0.11±0.011e 0.028±0.013f
A 1.02±0.033e 22.8±0.8cd 25.97±0.051d 20.67±0.064d 5.30±0.019cd n.d.
M 0.66±0.027e 11.8±0.1ef 3.25±0.073h 2.29±0.017hg 0.96±0.087e n.d.
S. filamentosa H 6.26±0.654a 9.9±0.2f 1.00±0.08h 0.98±0.012h 0.01±0.004e 0.149±0.006ef
A 1.04±0.122e 12.8 ±0.4e 6.22±0.093gf 5.37±0.022f 0.85±0.072e 0.552±0.029ef
M 0.90±0.007e 10.8±0.4f 2.55±0.020h 2.10±0.029hg 0.45±0.012e 0.031±0.011f
P. durvillaei H 3.22±0.502c 11.4±0.2ef 5.49±0.052g 5.62±0.022f 0.01±0.005e 2.407±0.016c
A 2.27±0.014d 21.8±0.5cd 13.49±0.038e 12.74±0.078e 0.75±0.041e 4.938±0.055a
M 0.97±0.019e 14.3 ±1.3e 18.10±5.25d 6.60±0.195f 11.50±3.30bc n.d.
C. isabelae H 3.80±0.017b 17.4±0.3d 48.09±0.48c 17.87±0.12d 30.23±0.41b n.d.
A 1.31±0.022ed 76.8±1.7a 73.41±0.41b 35.96±0.63c 37.45±0.21a 3.741±0.154b
M 0.72±0.146e 11.6±0.3ef 14.69±0.62e 4.15±01.36fg 10.54±4.84bc n.d.
G. vermiculophylla H 2.94±0.091c 12.1±0.4ef 10.55±0.017ef 10.66±0.023e 0.01±0.005e 1.598±0.440d
A 0.80±0.023e 14.4±0.2e 13.02±0.15e 12.51±0.016e 0.51±0.14e 0.667±0.085e
M 0.74±0.003e 10.8±0.1f 15.66±0.64ed 6.44±0.11f 9.22±0.74c n.d.
1
CFT= contenido total de compuestos fenólicos, expresado como mg Equivalentes de Ácido Gálico (EAG) por cada 100 mg de extracto
seco, (n = 4).
2
FC= Contenido de flavonoides, expresado como mg equivalentes de queracetina (EQ) por cada 100 mg de extracto seco, (n = 3).
3
CTC= Contenido de Clorofilas y carotenoides (CAT, Clorofila total; Ca, Clorofila a; Cd, Clorofila b; y Cx+C, carotenoides totales),
expresados en µg/mg de extracto seco (n=3).
Los datos representan los valores promedios±el error estándar. n.d. = no detectado. Literales diferentes en la columnas, representan
diferencias significativas entre extractos (P<0.05)
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 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Se encontraron diferencias significativas (P< 0.05) en los dos componentes

principales (CP1 y CP2, ver Figura 21) que se utilizaron como la combinación lineal del
total de los compuestos antioxidantes analizados. Los CP1 y CP2 de los extractos en
hexano explican el 57.5% y el 21.6% de la variación, contribuyendo significativamente
para el CP1 el total de flavonoides (0.86), clorofila total, clorofila a y clorofila b (0.98, 0.92
y 0.91, respectivamente), mientras que para el CP2 la contribución de compuestos fenólicos
totales fue significativa e inversa (–0.8), además también para el CP2 se observó una
contribución positiva del total de carotenoides (0.73, Tabla XV). Los CP derivados de los
extractos en acetona (CP1 y CP2), explican el 59.7 y el 31.3% de la variación con una
contribución significativa para el CP1 del total de flavonoides (0.84), así como el contenido
de clorofila total, a y b (0.99, 0.96 y 0.94, respectivamente), para el CP2 se observó una
contribución significativa de los compuestos fenólicos totales (0.92) y el contenido total de
carotenoides (0.96, Tala XV). Tres componentes principales que se obtuvieron en los
extractos en metanol, explican el 52.4, 19.8 y 16.7% del total de la varianza. El CP1 tiene
una contribución significativa del contenido de clorofila total, a y b (0.98, 0.94 y 0.97,
respectivamente), mientras que para el CP2 la contribución fue del contenido total de
flavonoides (0.88) y el CP3 tuvo una contribución negativa del contenido total de
compuestos fenólicos (–0.99).

INHIBICIÓN DE RADICALES DPPH Y ABTS

Para la capacidad antioxidante evaluada por la eliminación de radicales DPPH y

ABTS de los distintos extractos, se encontraron diferencias estadísticamente significativas
(Figura 20c y d). Los mayores valores de actividad DPPH fueron observados en los
extractos acetónicos de R. riparium, C. isabelae, P. durvillaei y C. sertularioides, así como
el extracto en metanol de R. riparium (1.74% en promedio). En general los valores más
elevados en DPPH se obtuvieron en los extractos en acetona, seguidos de los extractos en
metanol, mientras que menores valores se observaron en los extractos en hexano (1.56, 1.31
y 0.57%, respectivamente).

100
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

En la Figura 22, se muestra la concentración media efectiva (para lograr el 50% de

reducción o eliminación del radical evaluado); en el caso del DPPH, destacan los extractos
en acetona de P. durvillaei y U. expansa, los cuales exhibieron la mayor efectividad
antioxidante (17 y 24 mg/mL, respectivamente), seguidos de los extractos metanólicos del
P. durvillaei y R. riparium, así como el extracto de S. filamentosa en acetona (ver Figura
21a). Pero solo en el caso de los extractos en hexano, se encontró una correlación
significativa de la actividad DPPH (r = 0.81, P<0.05) con el CP1 (Figura 21a) lo cual
explica el 57.5% de la varianza con una contribución significativa del total de flavonoides,
clorofila total, a y b (Tabla XVI).

En el caso de la actividad antioxidante evaluada con ABTS, no se observó el mismo

comportamiento que para DPPH, ya que la mayor actividad antioxidante evaluada con el
radical ABTS se observó para los extractos metanólicos de G. vermiculophylla, C. isabelae
y S. filamentosa (42.7, 26.9 and 25.9%, respectivamente), seguido de los extractos en
acetona de G. vermiculophylla y P. durvillaei (21.8 y 18.7%) y finalmente C. isabelae en
hexano (15.3%, ver Figura 21d). En cuanto a la concentración media efectiva para eliminar
el radical ABTS, los extractos con mayor efectividad fueron el de P. durvillaei en acetona y
el de G. vermiculophylla en metanol (1.56 y 2.07 mg/mL, respectivamente), seguidos de los
extractos en acetona y metanol de U. expansa, C. isabelae y S. filamentosa (ver Figura
22b). En los extractos hexánicos, la capacidad antioxidante evaluada con ABTS se
correlacionó (r = 091, P<0.05, Tabla XV) con el CP1 (Figura 21a) explicando el 57.5% de
la variancia con una contribución significativa del contenido total de flavonoides, clorofila
total, a y b. No se observó correlación de los valores de ABTS con el CP1 en los extractos
en metanol y acetona.

101
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Figura 22. Actividad antioxidante de los extractos de las algas seleccionadas y controles
expresados como la concentración (mg/mL) necesaria para eliminar el 50% de los
radicales. Controles empleados: Vitamina C y TROLOX. En la figura (a) 2, 2-Diphenyl-1-
Picrylhydrazyl (DPPH) y (b) 2, 2´-azinobis[3-ethylbenzthiazoline]-6-sulfonic acid (ABTS).
Se muestran los valores promedio (n=3)±e.e. Letras distintas en el costado de las barras
indican diferencias estadísticamente significativas (Prueba de Tukey, P< 0.05). A =
extracto en acetona, M = extracto en metanol.

102
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

ACTIVIDAD ANTIMUTAGÉNICA

En la Tabla XVII, se observan los resultados de la actividad antimutagénica de los

extractos evaluada a dos concentraciones. La inhibición más alta de mutagenicidad (≥ 95%)
sobre las cepas de S. typhimurium TA98 y TA100, se obtuvieron para los extractos
acetónicos de C. sertularioides, R. riparium y S. filamentosa en ambas concentraciones (3 y
0.3 mg/placa). En todos los casos el efecto antimutagénico disminuye a menores
concentraciones, sobre todo en C. sertularioides y S. filamentosa. Sin embargo, en el caso
del extracto de R riparum, se observó un efecto sostenido al alrededor del 93% a
concentraciones de 0.03 a 3 mg/placa, y superior al 50% para TA98 a 0.003 mg/placa, algo
similar sucedió con la TA100, de 0.03 a 3 mg/placa la inhibición fue total y superior al 77%
con 0.003 mg/placa, mientras que para C. sertularioides y S. filamentosa se mantiene una
fuerte actividad antimutagénica en la concentración de 0.03-3.0 mg/placa y de 0.3 a 3.0
mg/placa, respectivamente; sin embargo, la actividad en estos extractos disminuyó a débil a
concentraciones más bajas (Figura 23).

Ikken et al. (1999), clasificó cómo débil el efecto antimutagénico, si se encontraba

en el intervalo de 25 a 40% y fuerte si el efecto inhibitorio era superior al 40%, para su
estudio emplearon nitrosaminas como mutágeno y cepas de Salmonella typhimorium
TA100. De acuerdo con esta clasificación la mayoría de las extractos crudos de las
macroalgas que se probaron, tuvieron un efecto inhibitorio fuerte, ya que para TA100 a 0.3
mg/placa, un extracto hexánico (C. sertularoides) y todos los acetónicos y metanólicos de
las siete especies de macroalgas probadas, exhiben valores de inhibición superiores al 70%
(Tabla XVII).

103
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Tabla XVII. Actividad antimutagénica de extractos de macroalgas sobre la mutagenicidad de Aflatoxina B1 en las cepas de S.
typhimuriumTA98 y TA 100.
S. typhimurium TA98 S. typhimurium TA100
Número de Revertantes/placa Inhib. % Número de Revertantes/placa Inhib. %
Concentración: 500 ng/placa
AFB11 383.4±20.9 - 990.7±155.2 -
SR2 58.56±3.2 - 131.0±3.0 -
Solvente de extracción Hexano Acetona Metanol
S. typhimurium S. typhimurium S. typhimurium S. typhimurium S. typhimurium S. typhimurium
TA98 TA100 TA98 TA100 TA98 TA100
Macroalgas
Número de 3Inhib. Número de Número de Número de Número de Número de
Inhib. Inhib. Inhib. Inhib. Inhib.
Revertantes/ Revertantes/ Revertantes/ Revertantes/ Revertantes/ Revertantes/
% % % % % %
placa placa placa placa placa placa
Concentración: 3 mg/placa
U. expansa 163.2±34.8 67.8 386.5±16.1 70.3 45.8±10.2 100 307.3±12.1 79.5 70.2±4.4 96.4 144.0±7.3 98.5
C. sertularioides 51.0±4.7 100 118.7±7.6 100 45.6±1.4 100* 174.0±14.4 95* 62.4±6.8 98.8 154.8±8.9 97.2
R. riparium 44.4±2.0 100 115.0±5.8 100 45.0±3.4 100* 94.0±4.8 100* 76.2±7.1 94.6 147.3±5.0 98.1
S. filamentosa 63.2±4.7 98.6 178.5±14.2 94.5 34.0±4.4 100* 140.5±0.9 98.9* 45.2±3.5 100 166.8±5.9 95.8
P. durvillaei 144.0±14.3 73.7 571.0±41.7 48.8 43.6±5.1 100 144.7±7.1 98.4 52.8±1.6 100 134.3±4.3 99.6
C. isabelae 205.0±22.5 54.9 761.0±9.2 26.7 95.6±8.3 88.6 299.3±8.3 80.4 111.8±4.3 83.6 277.8±6.0 82.9
G.vermiculophylla 93.8±13.0 89.2 287.0±22.8 81.9 60.0±3.8 99.6 130.7±1.4 100 59.0±1.9 99.9 141.4±8.1 98.8
Concentración: 0.3mg/placa
U. expansa 406.2±20.4 - 1205.3±38.7 - 67.6±5.3 97.2 269.5±4.7 83.9 206.0±18.7 54.6 374.0±21.6 71.7
C. sertularioides 184.8±22.5 61.1 320.0±18.7 78.0 67.6±2.8 97.2* 178.3±7.5 94.5* 118.0±10.3 81.7 485.3±37.3 58.8
R. riparium 207.2±14.7 54.2 719.3±75.0 31.6 55.2±3.5 100* 132.3±8.4 99.8* 142.5±9.9 74.2 338.8±61.3 75.8
S. filamentosa 366.4±24.4 5.2 1173.3±75.9 - 53.0±0.7 100* 208.0±26.5 91.0* 156.8±7.5 69.8 309.4±29.1 79.2
P. durvillaei 442.8±18.2 - 867.8±64.4 14.3 95.6±13.0 88.6 176.0±9.9 94.8 108.8±13.1 84.5 352.0±15.8 74.3
C. isabelae 500.5±27.5 - 1140.0±56.0 - 250.6±17.4 40.9 324.7±30.4 77.5 178.4±10.9 63.1 346.0±13.7 75.0
G.vermiculophylla 354.8±29.5 8.8 722.3±53.4 31.2 97.6±9.4 88.0 123.3±3.1 100 123.6±7.8 80.0 348.0±9.1 74.8
* Extractos que mostraron elevada actividad antimutagénica en ambas concentraciones para las dos cepas de Salmonella typhimorium TA98 y TA100.
1AFB1: Control de positivo de la mutación por aflatoxina B1; 2SR: Revertantes espontáneas; 3Inhib.: Inhibición de la mutagenicidad, expresada en porcentaje.

El número de revertantes/placa se expresó como el promedio± error estándar (n = 5). Todos los tratamientos fueron activados metabólicamente con S9.
104
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Figura 23. Actividad antimutagénica de los extractos en acetona de C. sertularioides, R.

riparium y S. filamentosa a distintas concentraciones expresada en porcentajes de
Inhibición sobre S. typhimurium TA98 y TA100. En la figura: a) S. typhimurium TA98 y b)
TA100. La Aflatoxina B1 se empleó como mutágeno control. Todos los tratamientos fueron
activados metabólicamente con S9. Se muestran los valores promedio (n=3)±e.e. Valores
de referencia de actividad: >40 fuerte, 25 a 40 moderado, <25 bajo (Ikken, 1999).

105
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

ACTIVIDAD ANTIPROLIFERATIVA

En la figura 24, se observa el efecto de los extractos de macroalgas (a una

concentración de 100 µg/mL) sobre la línea celular M12.C3.F6 de linfoma B murino a las
24 horas de incubación. Como puede apreciarse en la figura 24, no hubo efectos de daño
visibles en las células incubadas con los extractos hexánicos y los extractos metanólicos. En
cambio, los extractos acetónicos de todas las algas marinas después de 24 horas de
exposición provocan diferentes grados de daño celular visible (Figura 24), siendo mayor en
la presencia de cuerpos apoptóticos y cambios en la morfología celular denotando estrés.
Esto fue notable en los extractos acetónicos de C. sertularioides, R. riparium y S.
filamentosa, particularmente el extracto de C. sertularoides se evidenció un 100% de
muerte celular, observándose además detritos en el total de los campos de visión explorados
por microscopía óptica, mientras que en el extracto acetónico de R. riparium y S.
filamentosa, se observaron células muertas, cambios en la morfología celular y detritos, lo
que sugiere que estos extractos poseen la mayor actividad antiproliferativa (Figura 24). Esta
actividad fue comprobada con el ensayo MTT (Mosmann, 1983), los resultados para todos
los extractos se presentan en la Figura 25. En comparación con los extractos obtenidos con
hexano y metanol, los extractos en acetona mostraron mayor actividad antiproliferativa, en
particular en C. sertularioides, R. riparium y S. filamentosa (Figura 25a). El mayor efecto
antiproliferativo se observó en C. sertularioides, disminuyendo en efecto a menores
concentraciones (e.g. 63 a 28% de proliferación celular a 12.5 y 25 µg/mL, y de
respectivamente). En el caso de S. filamentosa y R. riparium, el efecto antiproliferativo
cercano al 80 % se observó sólo en la mayor concentración probada (25 y 29% para 100
µg/mL, respectivamente) (Figura 25b).

106
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

UeH CsH Rr SfH Pd Ci Gv

UeA CsA Rr Sf Pd CiA GvA

Cs

UeM CsM RrM Sf PdM Ci GvM

CU1 Células estresadas CU2 CsA 12.5 µg/mL CsA 25 µg/mL CsA 50 µg/mL
(Cambios morfológicos)

Cuerpos apoptóticos
(Detritos)

Figura 24. Imágenes representativas (20×) de los cambios observados en la morfología de la línea celular M12.C3.F6 (Linfoma
de células-B murino) posterior a 24 horas de incubación con extractos de algas (100µg/mL) y efecto de la concentración del
extracto en acetona de C. sertularioides. Código de Imágenes: XxY, Donde Xx= Especie de alga (Ue, U. expansa; Cs, C.
sertularioides; Rr, R. riparium; Sf, S. filamentosa; Pd, P. durvillaei; Ci, C. isabelae; and Gv, G. vermiculophylla), Y= Tipo de
extracto (H, hexano; A, acetona; y M, metanol), CU1 y CU2: Controles positivo de proliferación con DMSO.
107
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

Hexano Acetona Metanol

Figura 25. Efecto sobre la proliferación celular de los extractos de macroalgas. (a) Los
extractos de algas a una concentración de 100 µg/mL y (b) los extractos en acetona de S.
filamentosa, R. riparium y C. sertularioides a distintas concentraciones. Las barras
representan promedios±e.e. (n=3). El control celular fue incubado con DMSO (0.5%), y
representa el 100% proliferación. Letras distintas sobre las barras indican diferencias
estadísticamente significativas (P<0.05)

110
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

DISCUSIÓN

De acuerdo con los resultados obtenidos por el análisis de componentes principales,

el rendimiento de extracción no se correlacionó con el contenido de compuestos
antioxidantes determinados en los extractos (compuestos fenólicos, flavonoides, clorofilas
y carotenoides), con excepción de los extractos en acetona, donde se observó una
correlación positiva con el CP2 (Tabla XV), con una contribución significativa del
contenido total de compuestos fenólicos y carotenoides. Los mayores rendimientos se
observaron en los extractos metanólicos de todas las especies analizadas, lo cual puede ser
atribuido a la mayor afinidad de solvatación de algunas moléculas polares que componen a
las membranas celulares (como glicolípidos y fosfolípidos) los cuales se caracterizan por su
elevado contenido de ácidos grasos poliinsaturados (como EPA y DHA) los cuales han sido
descritos principalmente en algas rojas y cafés (Serviere-Zaragoza et al., 2015) y cuya
proporción en las algas analizadas en nuestro estudio han sido mostradas y discutidas en el
capítulo 1. Un hecho relevante en nuestro caso es el elevado contenido de HUFA
encontrado en P. durvillaei, S. filamentosa, C. sertularioides, R. riparium y C. isabelae
(11.24, 9.99, 5.87, 5.72 y 5.25%, Tabla XI), debido a que se ha observado que los extractos
lipofílicos de diversas especies de algas poseen potencial antioxidante, el cual aumenta
considerablemente con un mayor contenido de ácidos grasos poliinsaturados (Huang y
Wang, 2004), además en este tipo de extractos existe regularmente la presencia de otros
compuestos lipofílicos con bioactividad comprobada por diversos autores como pigmentos
y fitoesteroles, los cuales han sido descritos y evaluados previamente en el capítulo 1, por
lo que es muy probable que estos compuestos formen parte de los componentes presentes
en los extractos de algas que exhibieron algún tipo de bioactividad en este estudio.
La capacidad antioxidante depende en gran medida de las condiciones de análisis
(radical y técnica empleada) y de la naturaleza de la muestra, así como de los solventes y
técnicas empleadas para la extracción de los compuestos naturales. En diversos estudios se
ha observado una correlación en la actividad antioxidante determinada por DPPH y ABTS
en productos vegetales terrestres como sorgo (Awika et al., 2003) y en diversas extractos de
frutas y vegetales (Floegel et al., 2011), en algunos casos se ha observado la importancia
del solvente empleado en la extracción sobre la correlación de los valores de DPPH y

111
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

ABTS, un ejemplo de este efecto es el estudio realizado por (Thaipong et al., 2006), en el
que fueron evaluados dos extractos de guayaba, uno empleando como solvente metanol y
otro diclorometano, dando como resultado que sólo los extractos con metanol mostraron
correlación entre las dos técnicas empleadas para medir la actividad antioxidante (DPPH y
ABTS). En nuestro caso, los valores de DPPH y ABTS obtenidos para la totalidad de los
extractos algales no se correlacionaron; sin embargo, se pudo determinar que la actividad
antioxidante está asociada a la especie y al solvente de extracción, debido a que en un
extracto crudo como los que hemos analizado, la actividad antioxidante depende de la
polaridad de los solventes y los compuestos presentes en la muestra, dando como resultado
deferencias en los porcentajes de partición de los compuestos naturales en los solventes de
extracción y por tanto se observan diferencias en el potencial antioxidante (Marinova y
Yanishlieva, 1997).
En frutas y vegetales, por ejemplo, la capacidad antioxidante ha sido relacionada
con la presencia de vitaminas y fenoles (hidrofílicos), así como pigmentos carotenoides
(lipofílicos) (Halliwell, 1996). Para diversas especies de macroalgas, el elevado contenido
de fenoles y flavonoides presentes en extractos obtenidos mediante el empleo de
cloroformo, etil acetato, agua y metanol, sugieren que los compuestos antioxidantes en
mayor proporción en extractos bioactivos son lipofilicos (Murugan y Iyer, 2014). En
nuestro trabajo, de acuerdo con el análisis de componentes principales, el contenido de
flavonoides y clorofilas pueden explicar la variación en el poder antioxidante de las algas
seleccionadas y en extractos hexánicos y acetóncos, pero en el caso de los extractos en
metanol sólo la clorofila puede explicar esa variación (Tabla XV). Sin embargo, sólo para
los extractos en hexano el CP1 que combina los compuestos antioxidantes se correlacionan
positivamente con DPPH y ABTS (Figura 21, Tabla XV). Estos resultados sugieren que
existe un efecto del solvente usado para la extracción en el que se estabilizan los
compuestos naturales, o que existen interacciones positivas entre los compuestos
antioxidantes, particularmente en los extractos hexánicos. Este mismo comportamiento se
observó para la concentración efectiva media de antioxidación, determinada con ambas
técnicas DPPH y ABTS en los extractos que mostraron actividad antioxidante (Figura 22),
siendo mayor en el alga café y algas verdes, que en las rojas. Tendencias similares han sido

112
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

reportadas previamente para extractos en diclorometanol de algas verdes, cafés y rojas del
Golfo de México (1.44-51.48, 0.32-34.88 y 2.48 a 77.71 mg/mL, respectivamente) (Zubia
et al., 2007). Las diferencias con los resultados obtenidos en nuestro trabajo respecto de lo
reportado por Zubia et al. (2007), pueden atribuirse a las diferencias en las especies de
algas marinas y las condiciones del ensayo; sin embargo, cabe mencionar que en nuestro
estudio se observó una mayor capacidad antioxidante en el alga café P. durvillaei (EC50 =
16.9 y 1.56 mg/mL, en DPPH y ABTS respectivamente), mientras que para el alga roja S.
filamentosa los valores fueron menores (EC50 = 254.5 y 3.41 mg/mL, Figura 22). Cabe
señalar que de todas las algas café del Golfo de México que fueron analizadas por Zubia et
al., (2007), Padina gymnospora mostró la segunda capacidad antioxidante (DPPH) más alta
(EC50 = 3.45 mg/mL). En el presente trabajo, se encontró en P. durvillaei, una alta
proporción de fucoxantina y fucosterol (39 y 80%), lo cual explica la alta capacidad
antioxidante de esta macroalga.
Los antioxidantes ejercen un efecto importante en la disminución de los radicales
libres que producen peroxidizacion lípidos y daño del ADN en las células vivas, apoyando
así la protección contra las mutaciones que causan el cáncer (Duthie et al., 1996). Han sido
identificados diferentes compuestos como los responsables de ejercer efectos
antimutagénicos, anticarcinogénicos y antiangiogénicos, destacándose los pigmentos
fotosintéticos que se han descrito como agentes quimioprotectores principalmente en
algunas especies de algas marinas (Pangestuti y Kim, 2011). En el alga roja Porphyra
tenera, extractos en metanol: acetona (1:1 v/v), ricos en β-caroteno, clorofila a y luteína
han sido identificados como los principales compuestos quimioprotectores con actividad
antimutagénica contra la expresión de umu C en S. typhimurium TA1535/pSK 1002 (Okai
et al., 1996). Una tendencia similar fue observada en el alga verde Chlorococcum
humicola, cuyos extractos metanólicos mostraron que la composición del total y de
carotenoides individuales (astaxantina, luteína y β-caroteno) poseen una alta actividad anti
mutagénica sobre las cepas de S. typhimurium TA98, TA100 y TA 102 (Bhagavathy et al.,
2011); efectos similares se observaron en este estudio para los extractos en acetona de las
algas verdes C. sertularioides y R. riparium y en el alga roja S. filamentosa (≥ 95%) (Tabla
XVII), lo que puede ser asociado al elevado contenido de clorofilas totales y fenoles (Tabla

113
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

XVII). Es probable que el bajo contenido de clorofilas en las algas rojas en comparación
con las algas verdes, sea compensado con otros compuestos antioxidantes como los fenoles,
para el mantenimiento de su capacidad antioxidante y anti mutagénica. Se ha demostrado
que la clorofila a, la luteína y el β-caroteno disminuyen su actividad mutagénica cuando se
evalúan individualmente, pero esta actividad se incrementa cuando todos estos pigmentos
se mezclan, lo que sugiere un efecto aditivo supresor por la combinación de los pigentos y
la actividad antimutagénica (Okai et al. 1996). Este efecto ha sido observado en pigmentos
aislados de distintas fuentes como P. ternera (alga roja), en cianobacterias, té verde y
zanahoria (Okai et al. 1996).
De los tres extractos que exhibieron una mayor actividad antiproliferativa dos
provienen de algas verdes y uno de alga roja, estos resultados son consistentes con los
encontrados por Moo-Puc et al. (2009) para extractos de 27 especies de algas marinas del
Golfo de México, cuya actividad citotóxica y antiproliferativa fue evaluada contra varias
líneas celulares de cáncer, ya que las mayores actividades se reportaron para extractos de
algas marinas verdes y cafés, mientras que sólo una alga roja exhibió actividad citotóxica.
Para los extractos de las tres especies evaluadas en esta tesis, la actividad antiproliferativa
disminuyó con el aumento de la concentración del extracto, resultando que el extracto de C.
sertularioides posee una mayor efectividad para disminuir la proliferación celular en las
concentraciones mas bajas (63 y 28% de proliferación para 12.5 y 25 µg/mL, Figura 25b).
Paul y Kundu (2013) reportaron la actividad antiproliferativa (IC 50) de extractos
metanólicos de algas verdes E. intestinalis y R. riparium sobre células HeLA. 309.05±3.08
μg/ml y 506.1±3.7 μg/ml respectivamente, y aproximadamente 16.18% y 9.87% de
antiproliferación a una concentración de 100 µg/mL, estos porcentajes son menores a los
encontrados en nuestro estudio para las células de linfoma de células-B de murino
M12.C3.F6 cuya IC50 fue de 80.67±1.67µg/mL, este valor es mayor si lo comparamos con
otros extractos de algas verdes, como U. fasciata (extracto metanólico) el cual fue evaluado
sobre células A549 de carcinoma de hígado y células de riñón de mono verde africano, con
un IC50 de 12μg/mL (Rani et al., 2013). Murugan e Iyer (2014), reportaron capacidad
antiproliferativa elevada en extractos de algas rojas y cafés sobre células de
adenocarcinoma de hígado (A549), adenocarcinoma de colon (HCT-15), carcinoma de

114
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

próstata (PG-3) y osteosarcoma (MG-63), asociando el efecto a la cantidad de fenoles y

flavonoides responsables de actividades antioxidantes elevadas. En nuestro caso se observó
un comportamiento diferente, ya que la cantidad de fenoles totales presentes en el extracto
acetónico de C. sertularoides es relativamente baja respecto de los extractos hexánicos, y
éstos últimos no exhibieron actividad sobre el cultivo celular probado, lo que puede estar
asociado al hecho de que los efectos antiproliferativos son específicos para distintos tipos
de cáncer, aún cuando han sido evaluados para un mismo extracto, además de que la
actividad citotóxica y antiproliferativa de diferentes extractos de algas verde, cafés y rojas
parecen estar relacionadas con el contenido de compuestos lipofílicos, fenoles y lectinas
(Moo-Puc et al. 2009), sin embargo en algunos estudios las variaciones en el contenido
lipídico y composición (e.g. ácidos grasos), no logren explicar la actividad antiproliferativa
que se evalúa en varias líneas celulares de cáncer, como en el caso de las algas verdes
cultivadas Penicillus dumetosus (Moo-puc et al. 2011a) y Udotea flavelum (Moo-puc et al.
2011b).

Por otra parte, los flavonoides y compuestos fenólicos, contenidos en las algas cafés
y rojas en extractos orgánicos y acuosos, ejercen una toxicidad e inhibición del crecimiento
celular diferenciada, puesto que se ha observado que éstas bioactividades son mayores en
adenocarcinoma hepático (A549) y osteosarcoma (MG-63), respecto de lo observado en las
células cancerosas de colon (HCT-15) y de próstata (PC-3) (Muragan y Iyer 2014). En otro
estudio, extractos en diclorometano y etanol de las especies Dictyota ciliolata, Sargassum
fluitans, Turbinaria tricostata y Padina sancta-Crusis, mostraron inhibición de la
proliferación de células de cáncer de mama humano (MCF-7), pero son ineficaces en líneas
celulares de cáncer de riñón (HEK 293), próstata (LNCaP) e hígado (Hep-G2) (Caamal-
Fuentes et al., 2014a), los mismos autores en un trabajo posterior identificaron en las
mismas especies de algas cafés dos esteroles (fucosterol y 24ξ hidroperoxi 24
vinilcolesterol) y dos diterpenos (pachydictol A y B) que son capaces de inhibir la
proliferación celular de cáncer de mama humano (MCF-7) y de cuello uterino (SiHa)
(Caamal-Fuentes et al., 2014b). También se ha reportado que compuestos fenólicos,
florotaninos y aminoácidos micosporina (MAAs) contenidos en algunas algas cafés y rojas

115
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

inhiben la proliferación de células de adenocarcinoma cervical humano (Yuan y Walsh

2006). Por lo tanto, el aumento de la actividad antiproliferativa observada en algas verdes
C. sertularioides y R. riparium puede deberse al contenido de compuestos lipófilicos, como
el β-sitosterol (esterol mayoritario en ambas especies) y un elevado contenido de PUFA en
el caso R. riparium (45.19±10.64%), cuya bioactividades asociadas fueron discutidas en el
capítulo I, mientras que en el alga roja S. filamentosa, probablemente su actividad puede
estar relacionada con el elevado contenido de luteina que posee esta alga (33.28%, Tabla
XIII, del capítulo I).

El daño celular ocasionado por distintas concentraciones del extracto acetónico de

C. sertularoides, se puede observar en la Figura 24. A las 24 horas de incubación, podemos
observar que a una concentración de 25µg/mL el daño celular es evidente, a la menor
concentración (12.5µ/mL) el daño aumenta con el tiempo de incubación, ya que a las 24
horas el daño es mínimo, pero los resultados de MTT (Figura 25b) indican que el daño es
elevado a las 48 horas, ya que es capaz de inhibir la proliferación celular cercano al
40%.De acuerdo con la clasificación del Instituto Nacional del Cáncer de Estados Unidos,
un extracto es activo si exhibe una CC50 ≤ 30 µg/ml a frente a líneas celulares de cáncer
(Suffness y Pezzuto, 1990). Por lo tanto, el extracto de C. sertularoides podría ser
considerado para una purificación adicional con el fin de identificar y aislar los compuestos
bioactivos que están implicados en la actividad quimioprotectora.

116
 CAPÍTULO II: POTENCIAL BIOACTIVO EN MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA

CONCLUSIONES

De acuerdo con la actividad quimiopreventiva evaluada para las siete especies de

algas marinas recolectadas en Sinaloa y que fueron seleccionadas en esta investigación, la
variación detectada en la actividad antioxidante para los distintos extractos y el rendimiento
de extracción no pueden ser explicadas con el contenido de compuestos fenólicos,
flavonoides y pigmentos, excepto en los extractos acetónicos, donde se observó una
correlación del rendimiento de extracción con el contenido de compuestos fenólicos y
carotenoides. Los extractos que exhibieron una mayor capacidad antioxidante fueron los
obtenidos con acetona y metanol. Pero sólo en los extractos en hexano los compuestos
como flavonoides y pigmentos explicaron las variaciones en la capacidad antioxidante.
Estos resultados sugieren que el tipo de solvente empleado en la extracción ejerce una
interacción en la capacidad antioxidante, particularmente en los extractos con hexano.

Los extractos acetónicos exhibieron la mayor actividad quimiopreventiva

(relacionada con valores elevados en todas las actividades evaluadas), particularmente los
provenientes de C. sertularioides, R. riparum y S. filamentosa. La actividad antioxidante y
antimutagénica de estos extractos están relacionadas con el contenido de flavonoides y
clorofilas y en menor medida con el contenido de compuestos fenólicos y carotenoides,
aunado al contenido de β-sitosterol y ácidos grasos altamente insaturados que estas especies
de macroalgas poseen.

Sin embargo es necesario profundizar en el aislamiento biodirigido para lograr

identificar la estructura química del compuesto responsable de la bioactividad,
principalmente en el alga C.sertulariodes especie que mostró el mayor potencial bioactivo.

117
 CAPÍTULO III
POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE
MACROALGAS DE LA COSTA DE
SINALOA Y SU CARACTERIZACIÓN
QUÍMICA ESTRUCTURAL
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

INTRODUCCIÓN

Las capacidades metabólicas y fisiológicas de los organismos marinos que les

permiten sobrevivir en un hábitat complejo les brindan un gran potencial para producir
metabolitos únicos que no se encuentran en ambientes terrestres. Los organismos marinos,
en particular los sésiles, han sido reconocidos como una fuente potencial para el desarrollo
de compuestos farmacéuticos (Barsanti y Gualtieri, 2006).

Durante muchos años, se han utilizado a las algas marinas como fuente de alimentos
y como parte de la medicina tradicional y actualmente son consideradas un nuevo recurso
natural del que se pueden extraer muchos materiales funcionales, resultando muy atractivo
por la gran variedad de componentes funcionales que se pueden obtener a partir de ellas.

Estos componentes han evolucionado para permitir la supervivencia de éstos

organismos ante condiciones de estrés ambiental (Percival y McDowell, 1967; Barsanti y
Gualtieri, 2006), por lo que no sólo resultan variados los compuestos naturales de estas
fuentes, sino que además muchos de ellos resultan de mayor novedad química respecto de
las plantas terrestres.

Los polisacáridos son el principal componente de la pared y matriz celular de las

macroalgas y su característica distintiva es su carácter aniónico, debido a la presencia de
grupos carboxilo (COO-) como en los alginatos de algas pardas, grupos hemiéster sulfato
(OSO3-) en agares y carragenanos o la presencia de ambos como en fucoidán de algas
pardas y ulvan de algas verdes. Por otra parte, los polisacáridos sulfatados, solo se
encuentran en las plantas marinas y están ausentes en plantas terrestres; forman una clase
de macromoléculas biológicas con estructuras diversas y variadas propiedades
fisicoquímicas, las cuales varían en función del peso molecular y del grado de sustitución
en la molécula (Kloareg y Quatrano, 1988; Ale et al., 2011b; Jiao et al., 2011; Wijesekara
et al., 2011).

Se han descrito diversas actividades biológicas de los polisacáridos sulfatados de

diferentes especies de macroalgas. En México la mayoría de estos reportes corresponden a

119
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

especies recolectadas en la parte norte del Golfo de California en las que se ha explorado la
capacidad anticoagulante de diferentes polisacáridos sulfatados (Muñoz Ochoa, 2006) y
antiviral (Elizondo-Gonzalez et al., 2012; Aguilar-Briseño et al., 2015; Morán-Santibañez
et al., 2016). Para especies de algas de Sinaloa, no existe información relacionada con el
contenido de polisacáridos sulfatados, los cuales representan un potencial de
aprovechamiento de las especies como fuentes de compuestos bioactivos. Por lo tanto, en
este capítulo, se revisarán algunos aspectos relacionados con las características químico-
estructurales de los polisacáridos sulfatados y su posible relación con el potencial bioactivo.
Además se presentan los resultados de la caracterización química realizada a los
polisacáridos sulfatados que se extrajeron de las especies de macroalgas recolectadas en las
lagunas costeras de Sinaloa.

CARACTERÍSTICAS QUIMICO-ESTRUCTURALES DE POLISCÁRIDOS

SULFATADOS DE MACROALGAS

En diversas investigaciones se ha determinado la composición química y las

características estructurales de diversos polisacáridos sulfatados, la importancia de esta
caracterizaciones deriva en el hecho de que ha sido demostrado que la funcionalidad
biológica y por lo tanto el potencial de aplicación de estos compuestos, se encuentran
estrechamente relacionados con el peso molecular, la composición química y el grado de
sulfatación (Jiao et al., 2011; Morya et al., 2012), los cuales varían y son influenciados por
factores ambientales (como la estación del año y sitio de recolecta) (Mak et al., 2013),
biológicos (principalmente la especie y su etapa de desarrollo) (Anastyuk et al., 2012;
Byankina et al., 2013), disponibilidad de nutrientes (particularmente sulfatos) (Lee et al.,
2014) y de procesamiento (relacionadas con los métodos de extracción) (Cho y You, 2015;
Imbs et al., 2015).

Polisacáridos sulfatados

El principal componente de las paredes celulares de las macroalgas son los

polisacáridos cuyas estructuras básicas varían entre las especies, cuya diferencia principal
respecto de los polisacáridos de plantas terrestres es la presencia de sulfatos, siendo para

120
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

algas verdes los ulvanes, agares y carragenanos para las algas rojas y fucanos para las algas
cafés o pardas (Lordan et al., 2011; Vera et al., 2011; Wijesinghe y Jeon, 2012).

Ulvanos

Los ulvanos son los principales constituyentes de las paredes celulares de las algas
verdes, representa del 8 al 29% de su peso seco. Se trata de polisacáridos ramificados y
sulfatados con dímeros básicos de L-ramnosa-3-sulfato unidos con: (a) Residuos de ácido
D-glucurónico (unidad A de ácido ulvanobiurónico); (b) Residuo de ácido L-idurónico
(unidad B de ácido ulvanobiurónico); (c) Residuo de D-xilosa-4-sulfato (unidad A de
ulvanobiosa); o (d) Residuo de D-xilosa (Unidad B de ulvanobiosa) (Figura 26). Todos los
ulvanes contienen ramificaciones en la posición O-2 de la ramnosa y residuos sulfato en la
posición 3 (Vera et al., 2011).

Figura 26. Estructura le las principales unidades disacáridas repetitivas presentes en

ulvanos; los ácidoa ulvanobiuronicos A3S y B3S, y las ulvanobiosas U3S y U2’S3S. (Tomado
de: Robic et al., 2009b).

121
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Agar

Las algas rojas contienen polisacáridos de la familia de los galactanos sulfatados,

tales como el agar y los carragenanos. Particularmente, algas pertenecientes a los géneros
Gracilaria, Gelidium, Gelidiela y Gracilariopsis, entre otras, sintetizan agar. El agar está
constituido por dos fracciones polisacáridas; la agarosa y la agaropectina. Tanto la agarosa
como la agaropectina tienen la misma estructura básica constituida por unidades alternas de
galactosa y 3,6-anhidrogalactosa, ambas en forma piranosa (Figura 27). Las unidades se
enlazan por uniones α L (1→3) y β D (1→4), también en forma alternada (Yalpani, 2013).
A diferencia de la agarosa, la agaropectina posee alto contenido de sulfato y piruvato
(Lahaye et al., 1985) (Armisen y Galatas, 1987).

Figura 27. Estructura repetitiva de la agarosa. (Tomado de: Manisvasagan et al., 2016).

Carragenanos

Uno de los mayores constituyentes de las paredes celulares de algunos géneros de

algas rojas son los carragenanos. Los carragenanos están constituidos por polisacáridos
lineales con una estructura lineal base de D-galactosa enlazada en forma alternante en las
posiciones β (1→3) y α (1→4), con diferentes grados de sustitución por grupos sulfato y
unidades de anhidro D-galactosa. En base al patrón de sustitución de grupos sulfato y

122
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

contenido de anhidrogalactosa, se distinguen diferentes tipos de carragenanos (Usov, 1998).

Los carragenanos se clasifican en diferentes familias (β, К y λ); sin embargo, de acuerdo a
sus propiedades, comercialmente se distinguen tres principales tipos de carragenanos, el
kappa carragenano, constituido por β (1→3) D-galactosa 4–Sulfato unida a la α (1→4) D
anhidro D-galactosa, lambda carragenano, formado por la β (1→3) D-galactosa 2S unida a
α (1→4) D-galactosa 2,6 disulfato e iota carragenano está constituida por β (1→3) D
galactosa 4S a α (1→4) anhidro D galactosa 2S (Figura 28) (Vera et al., 2011).

Kappa (κ) carragenano Iota (ι) carragenano

Lamnda (λ) carragenano

Figura 28. Carragenanos kappa, lambda e iota de algas rojas. (Tomado de: Manisvasagan et
al., 2016).

Fucanos o Fucoidán

Los fucanos o fucoidanos son de los constituyentes principales de las paredes

celulares de algas pardas, representan del 5 al 20% en peso seco, su composición química y

123
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

estructural es variable entre especies, pero en términos generales están constituidos

principalmente por fucosa y pequeñas cantidades de galactosa, xilosa, manosa y ácidos
urónicos (Percival y Ross, 1950; Patankar et al., 1993; Nagaoka et al., 1999; Bilan et al.,
2002). La estructura base es fucosa sulfatada en posición C2 ó C4 y ramificaciones cada
dos o tres residuos de fucosa (Figura 29), predominando una u otra estructura dependiendo
de la especie (Vera et al., 2011).

Se trata de un polímero intracelular altamente higroscópico, soluble en agua y

sulfatado, cuya función principal es proteger de la desecación la superficie de las
macroalgas marinas que lo contienen y de contribuir a la formación de una red de gel
(Percival y McDowell, 1967).

Figura 29. Unidades de fucosa sulfatada en fucanos de A. nodosum (A) y L. vadosa (B).
(Tomado de: Vera et al., 2011).

124
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

BIOACTIVIDAD RELACIONADA CON LOS POLISACÁRIDOS PRESENTES EN

MACROALGAS

El potencial bioactivo que poseen los carbohidratos provenientes de macroalgas, ha

sido estudiada por diversos autores que han atribuido propiedades de promoción de la salud
relacionada con diferentes condiciones clínicas, tanto en el sentido de la prevención como
en el tratamiento de determinadas enfermedades, este potencial es resumido en la Figura
30, en la que se esquematizan las diversas propiedades atribuidas al tipo de polisacáridos
que predominan en las algas verdes, cafés y rojas, así como los beneficios a la salud que se
les atribuyen y el potencial de aplicación industrial. En este sentido, el mayor número de
reportes se presentan para los fucoidanos, polisacáridos presentes en algas cafés, lo que
posiblemente se deba a las funciones biológicas que pueden llevar a cabo en diversos
organismos entre los que destacan algunas especies de peces y crustáceos obtenidos
mediante acuicultura y evidencias de bioactividad en células humanas, entre las que se han
descrito y comprobado se encuentran su actividad anticoagulante y antiinflamatoria, efectos
inhibidores de proliferación y adhesión celular, protección celular ante infecciones virales y
pueden interferir con mecanismos involucrados en la fertilización (Berteau y Mulloy,
2003); sin embargo, el interés de explorar la presencia de compuestos con potencial
bioactivo tanto en algas verdes como rojas, se ha incrementado recientemente.

Actividad antitumoral de los polisacáridos de algas

Como resultado de diversas investigaciones, se ha sugerido que la actividad anti-

cáncer de los polisacáridos de algas marianas se relaciona con la composición química, el
tamaño molecular y la conformación del polisacárido. En el caso de los fucoidanos se ha
observado que son capaces de inducir la apoptosis en células de cáncer de colon en
humanos (Kim et al., 2010), esta bioactividad muestra variaciones entre especies y tipo de
células de colon, pero para fuocoidanos provenientes de una misma especie también se
observan variaciones asociadas a la estructura química y el tamaño molecular; por ejemplo,
en los fucoidanos provenientes de Undaria pinnatifida, se observó que un menor tamaño
molecular y una conformación estructural más abierta exhiben mayor actividad anti-cáncer

125
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

(You et al., 2010). En polisacáridos con alto nivel de sulfatación y bajo peso molecular
obtenidos del alga parda Sargassum pallidum se ha detectado actividad anti-tumoral in
vitro sobre las líneas celulares A549, HepG2 y MGC-803 de cáncer de pulmón humano,
hígado y cáncer gástrico, respectivamente (Ye et al., 2008a).

Actividad antiviral de los polisacáridos de algas

Se ha determinado la actividad antiviral contra el virus tipo 1 del Herpes simple

(HSV-1) de polisacáridos sulfatados provenientes de algas rojas recolectadas en la costa de
marruecos, se probaron extractos acuosos de Asparagopsis armata, Ceramium rubrum,
Gelidium pulchellum, Gelidium spinulosum, Halopitys incurvus, H. musciformis,
Plocamium cartilagineum, Boergeseniella thuyoides, Pterosiphonia complanata y
Sphaerococcus coronopifolius, encontrando efectividad media (EC50) inhibitoria del
mecanismo de replicación del virus in vitro de 2.5 a 75.9 mg/mL (Rhimou et al., 2010).
Asimismo, han sido evaluados algunos polisacáridos sulfatados característicos de algas
rojas y café tales como los carragenanos y los fucoidanos han mostrado poseer actividad
antiviral la cual bloquea la infección en líneas celulares humanas expuestas a virus de
inmuno deficiencia humana (HIV), herpes (HSV-1) y citomegalovirus (Baba et al., 1988b).
Para el fucoidán se ha observado que muchos de los mecanismos bioactivos se relacionan
con la estructura y en el caso de la actividad antiviral se basan en la inhibición de actividad
in vitro del heterodímero nativo y recombinante de HIV transcriptasa reversa (Baba et al.,
1988a; Patankar et al., 1993), en este sentido fucanos extraídos de F. vesiculosus han
producido efectos inhibitorios in vitro a concentraciones de 0.5–1 mg/mL sobre
transcriptasa reversa aviar, dichos efectos son atribuidos al grado de sulfatación, lo que
sugiere que la actividad antiviral en los fucanos es dependiente de cambios iónicos y la
orientación espacial de los anillos del azúcar en una configuración y carga específica, la
cual es reconocida por la enzima, lo que permite uniones específicas (Queiroz et al., 2008).

La composición química de los polisacáridos aunada a otros factores, es responsable

de la actividad antiviral, en términos generales algunos estudios han sido sugerido que los

126
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

heteropolisacáridos sulfatados son los que poseen mayor actividad antiviral (Melo et al.,
2002).

Actividad antiobesidad

El sobrepeso y la obesidad son factores de riesgo para numerosas enfermedades

crónicas, entre las que se incluyen la diabetes, las enfermedades cardiovasculares y el
cáncer (Kopelman, 2007). Se ha estudiado el efecto de distintos polisacáridos algales con
efecto glicémico postprandial, entre los que destacan fucoidanos con altos índices de
sulfatación de U. pinnatifida, cuya actividad antiobesidad se relaciona con el efecto
inhibitorio de la actividad aminoglucosidasa, por lo que pudieran estos compuestos ser
considerados para el empleo como agentes terapéuticos para reducir los efectos severos de
la hiperglucemia postprandial en pacientes diabéticos gracias a la absorción retardada de la
glucosa (Cho et al., 2011). Se ha reportado que alginatos con alta viscosidad provenientes
de L. digitata reducen dramáticamente la absorción de glucosa y la respuesta de insulina en
cerdos (Vaugelade et al., 2000). Se han observado efectos similares en polisacáridos de P.
palmata, Eucheuma cottonii y Laminaria digitata variables a diferentes viscosidades, lo
que sugiere que cuando los substratos poseen alta viscosidad frecuentemente disminuye el
contacto con las enzimas digestivas (Cho et al., 2011).

Actividad anticoagulante

En algas se han encontrado sustancias con efectos similares a la heparina, tales es el

caso del fucoidan, el cual ha sido muy estudiado in vitro como un potencial anticoagulante
sanguíneo. Aunque no se sabe con claridad cuáles son las bases de esta bioactividad en los
polisacáridos, algunas investigaciones sugieren que involucra más de un mecanismo, como
son la inhibición directa o indirecta de trombina así como la activación de inhibidores de
trombina (e.g. cofactor II de antitrombina heparina) (Jiao et al., 2011). Estructuralmente, se
ha observado que la actividad anticoagulante de los fucoidanos puede estar relacionada con
el contenido y posición de los sulfatos, el peso molecular y la posición y composición de
azúcar (Berteau y Mulloy, 2003). Se ha documentado que a mayor contenido de grupos

127
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

sulfatos mayor es la actividad anticoagulante en los fucoidanos de diversas especies de

algas; sin embargo, no sólo el contenido de sulfatos es importante, sino que la posición
juega un papel muy importante en la actividad anticoagulante, especialmente cuando el
azúcar es monosulfatada en la posición C-2 y disulfatada en C-2,3 (Li et al., 2008b).

La actividad anticoagulante de polisacáridos extraídos de algas rojas ha sido

ampliamente estudiada; por ejemplo, se reportó que un D-galactano 2,3-di-O-sulfatado del
alga roja Botryocladia occidentalis exhibió actividad anticoagulante similar a la heparina
mediante inhibición de trombina y factor X, siendo la actividad mayor que la de galactanos
mono sulfatados provenientes de invertebrados (Farias et al., 2000) y polisacáridos de
Gelidium crinale con menores cantidades de D-galactosa 2,3-di-O-sulfatada (Pereira et al.,
2005).

128
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Algas Algas Algas

verdes cafés rojas

Polisacáridos Sulfatados
Ulvanos Fucoidanos Carragenanos

Inhibición de Actividad
Tirosinasa
Anticoagulante Antiinflamatorio Anticoagulante
Antiviral Incremento de
elasticidad en la
Beneficios a piel
Beneficios a la Beneficios a la
Anticáncer Antifúngico
la Salud Salud Anticoagulante Salud
Anticáncer Antitumoral
Antioxidante Modulación de factor
Inhibición de
Inmunoestimulante de crecimiento Antioxidante
metaloproteasas Estimulación de
proliferación de Antiviral
fibroblastos

Potenciales Aplicaciones Potenciales Aplicaciones Potenciales Aplicaciones

Industriales Industriales Industriales

Farmaceútica Biomateriales Farmacéutica

Biomédica Nutraceútica Farmaceútica Alimentos
Cosmética Alimentos Funcionales Cosmética Alimentos Cosmética Funcionales
Funcionales

Figura 30. Potencial bioactivo y potenciales aplicaciones industriales de los polisacáridos sulfatados de algas verdes, cafés y
rojas. (Pereira et al., 2005; Cardozo et al., 2007; das Chagas et al., 2011; Fernandes de Araújo et al., 2011; Gupta y Abu-
Ghannam, 2011; Lordan et al., 2011; Wijesekara et al., 2011; Alves et al., 2012; Qi et al., 2012; Whijesinge y Jeon, 2012).
129
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

En polisacáridos provenientes de algas verdes, también se ha evaluado la actividad

anticoagulante y se ha observado que en la mayoría de los casos, los polisacáridos poseen
una alta sulfatación y/o un elevado contenido de ramnosa, tal es el caso de un polisacárido
proveniente U. conglobata con un elevado contenido de ramnosa y con un 35% de
sulfatación, el cual resultó efectivo para inhibir la trombina mediante la modulación de
cofactor II de heparina (Mao et al., 2006), de igual forma un polisacárido con elevada
sulfatación y ramnosa proveniente de Monostroma nitidum exhibió una mayor actividad en
comparación a la heparina (Maeda et al., 1991).

Actividad antibacterial

Se ha reportado que alginatos, fucoidanos y extractos de Laminaria sp. poseen

actividad antibacteriana efectiva contra bacterias tales como E. coli, Staphylococcus,
Salmonella y Listeria. El alginato de sodio es reconocido como un potente agente
antibacteriano (Holdt y Kraan, 2011). Se ha sido sugerido el uso de alginato de sodio para
el recubrimiento bioactivo en productos de pescado como el salmón ahumado que se
comercializa en rodajas y filetes durante el almacenamiento en refrigeración, ya que ha
mostrado ser eficaz contra el patógeno Listeria monocytogenes, el cual puede desarrollarse
en temperatura de refrigeración (Ye et al., 2008b).

130
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

OBJETIVO GENERAL

Caracterizar química y estructuralmente los polisacáridos sulfatados de Gracilaria

vermiculophylla (Ohmi) Papenfuss, Spyridia filamentosa (Wulfen) Harvey, Ulva expansa
(Setchell) Setchell y Gardner, Rhizoclonium riparium (Roth) Harvey, Caulerpa
sertularioides (S. G. Gmelin) M. A. Howe, Padina durvillaei (Bory Saint-Vicent) y
Codium isabelae (W. R. Taylor) recolectadas en el estado de Sinaloa, México.

MATERIALES Y MÉTODOS

OBTENCIÓN DE POLISACÁRIDOS

El protocolo de extracción de la fracción polisacárida de las especies estudiadas se

muestra en la Figura 31, este proceso consiste en extraer con agua a 65 °C la fracción
soluble y posteriormente precipitar los polisacáridos por la adición de etanol.
Las extracciones se realizaron por duplicado con el fin de calcular rendimientos de
extracción por especie.

CARACTERIZACIÓN QUÍMICO-ESTRUCTURAL DE POLISACÁRIDOS

Una vez obtenidos los polisacáridos, se les realizó una caracterización mediante
distintas técnicas, las cuales se describen a continuación:

Viscosidad intrínseca [ƞ].

La viscosidad intrínseca es un parámetro que se puede utilizar para caracterizar el

volumen hidrodinámico de polisacáridos (asumiendo que no existen interacciones con otras
moléculas vecinas o que estas no contribuyen significativamente a la viscosidad), lo que
permite hacer inferencias sobre su peso molecular y conformación. La viscosidad intrínseca
([η]) se determinó mediante las medidas de viscosidad relativa ηrel de soluciones acuosas de
los extractos de polisacáridos algales a 25±0.1 °C, para ello se usó un viscosímetro capilar
Ubbelohde (Instrument Company, Bohemia, NY, USA).

131
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Para obtener la viscosidad intrínseca se extrapola la concentración al valor “cero” de los

valores de ƞsp/c mediante la siguiente relación:

[ƞ] = lim ƞsp ⁄c = lim(1⁄c ln ƞ⁄ƞs ) (1)

c→0 c→0

Donde:
ƞsp = viscosidad específica
ƞ = viscosidad de la solución
ƞs= viscosidad del solvente

ƞsp = (ƞ − ƞs )⁄ƞs = ƞrel − 1 = ƞ⁄ƞs (2)

A su vez, esta relación puede expresarse en distintas ecuaciones, como:

Ecuación de Huggins

ƞsp ⁄c = [ƞ] + 𝑘ʼ[ƞ]2 c+. .. (3)

Ecuación de Kramer

(ln ƞrel )⁄c = [ƞ] + 𝑘ʼʼ[ƞ]2 c+. .. (4)

Ecuación de punto único

0.5
[ƞ] = [2(ƞsp − ln ƞrel )] ⁄c (5)

En nuestro caso el valor [ƞ] se obtuvo a partir de la extrapolación conjunta de las

curvas de Huggins (ecuación 3), Kramer (ecuación 4) y "punto único" (ecuación 5).

132
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Seca, molida y pre-tratada con

Alga solventes en frío

3 veces Extracción Alga: H2O destilada (1:20 p/v) 65

°C,
2 h agitación magnética
Filtro de fibra de vidrio tamaño de
Residuo Filtración poro 1.2μm

Filtrado

Filtrado
os

Impurezas
Centrifugación 12,000 × g, 4 °C, 20min.

Sobrenadante
(S)
Impurezas S: Etanol 96% (1:3)
Precipitación Incubación 12h 4 °C

Centrifugación 12,000 × g, 4 °C, 20min.

Precipitado (P)
P + H20 destilada q.s.p.
Temp. amb. agitación
Resuspensión magnética
2 veces
(PS)
Precipitación PS: Etanol 96% (1:3), T
amb.

Precipitado (Pf) Pf + H20 destilada q.s.p.

Temp. amb. agitación
Resuspensión magnética
(PfS)
PfS vs agua, 48 h, T amb,
Diálisis agitación magnética.
MWM 14KDa

Liofilización

Polisacáridos

Figura 31. Diagrama de flujo de la extracción polisacáridos algales.

133
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Identidad química (FTIR).

Los espectros de infrarrojo fueron adquiridos mediante un espectrofotómetro

Nicolet iS50 FT-IR Thermo Scientific USA (Madison, WI, US) con un sistema detector
ATR. Para analizar la muestra, se empleó el extracto seco, obtenido de cada una de las
especies. El espectro se adquirió en modo de absorción en el intervalo de 400 a 4000 cm–1
con una resolución de 4 cm–1; para cada muestra se hicieron 32 barridos aplicando las
transformadas de Fourier.

COMPOSICIÓN QUÍMICA

Determinación de carbohidratos totales

Se determinó mediante el método de fenol-ácido sulfúrico (Dubois et al., 1956),

empleando glucosa como estándar (Anexo A2.4).

Determinación de contenido de proteínas

Para determinar el contenido de proteínas que pueden estar presentes en los

extractos ricos en polisacáridos de las algas, se empleó el método de Bradford (1976),
como estándar se utilizó albúmina de suero bovino (BSA) (Anexo A2.3).

Determinación de contenido de sulfatos

El contenido de sulfatos en los polisacáridos se determinó con el método descrito

por Dogson y Price (1962), en el cual se utiliza una solución de BaCl2-Gelatina y K2SO4
como estándar (Anexo A2.5).

Determinación de contenido de ácidos urónicos totales

Para la determinación de ácidos urónicos se empleó el método modificado de

carbazol (Bitter y Muir, 1962), como estándar se utilizó ácido glucurónico (Anexo A2.6).

Composición de azúcares

Para determinar la composición de azúcares en las muestras de polisacáridos, a las

muestras se les realizó hidrólisis con H2SO4 (5mg de muestra disuelta en agua + 0.4 mL de

134
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

H2SO4 7.5 N, 100 °C por 3 horas), seguida de una reducción con NaBH4/DMSO y posterior
acetilación con metilimidazol, con el fin de obtener alditol acetatos, los cuales fueron
analizados por cromatografía de gases. Se utilizó para el análisis un cromatógrafo de gases
marca Agilent Technologies 6890N, con detector de ionización de flama (FID); equipado
con una columna capilar de tipo BD225 (50% cianipropilfenil- 50% dimetilpolisioxano) de
30 m de longitud × 0.15μm de espesor de película × 0.32mm de diámetro interno; como gas
acarreador se empleó nitrógeno a presión constante de 50 psi y una rampa de temperatura
de 50–260 °C.
La identificación de los alditol acetato de los azúcares neutros se realizó
comparando el tiempo de retención de los cromatogramas de las muestras con los
estándares, los resultados se expresaron en porcentaje relativo de las áreas totales de los
picos identificados en los cromatogramas, la suma en porcentaje de aquellos picos cuyos
tiempos de retención no coincidieron con los estándares empleados, se expresaron como
porcentaje total de azúcares no identificados.

RESULTADOS

RENDIMIENTOS DE EXTRACCIÓN

Se observó una variación estadísticamente significativa (P<0.05) de los

rendimientos de extracción entre los polisacáridos de las distintas especies de alga (Tabla
XVIII), siendo mayor el rendimiento de extracción de polisacáridos para la especie roja
Gracilaria vermiculophylla (10.64±0.24 % peso seco) y el menor para el alga café Padina
durvillaei (0.83±0.01 % peso seco).

VISCOSIDAD INTRÍNSECA

En la Tabla XIX, se muestran las viscosidades intrínsecas de los polisacáridos

evaluados. El mayor valor de viscosidad intrínseca se observó en el polisacárido
proveniente del alga roja Spyridia filamentosa (52.76 dL/g) y el menor se observó para el
polisacárido proveniente del alga café Padina durvillaei (0.77 dL/g).

135
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Tabla XVIII. Rendimientos de extracción de polisacáridos de algas seleccionadas.

Alga *Rendimiento de extracción (%)
Ulva expansa 9.26±0.16b
Caulerpa sertularioides 1.01±0.36d
Rhizoclonium riparium 8.34±0.38b
Codium isabelae 2.52±0.05c
Spyridia filamentosa 1.33±0.06cd
Gracilaria vermiculophylla 10.64±0.24a
Padina durvillaei 0.83±0.01d
*Los datos mostrados son los valores promedio de dos extracciones±error estándar,
expresado en porcentaje en peso seco. Los datos fueron analizados mediante una ANOVA
de una vía y una prueba a posteriori de Tukey para establecer diferencias significativas.
Letras distintas indican diferencias estadísticamente significativas (P<0.05) entre las
distintas especies.

COMPOSICIÓN QUIMICA

La composición química de los polisacáridos (PS) fue significativamente diferente

entre las especies (P<0.05), en términos generales el mayor contenido de azúcares totales y
sulfatos, se observó para los PS de C. sertularioides (73.8 y 22.9%, respectivamente) y P.
durvillaei (60.6 y 20.2 %). El mayor contenido de ácidos urónicos se obtuvo en P.
durvillaei (41.5%) y el menor en C. isabelae (1.4%). El mayor contenido de proteínas se
encontró en P. durvillaei y el menor en C. sertularioides (Tabla XIX).

IDENTIDAD QUÍMICA FTIR

En los espectros de FT-IR de los siete polisacáridos algales estudiados se

observaron las bandas de absorción características de las vibraciones típicas observadas en
polisacáridos, una banda fuerte en el intervalo de frecuencias de los 3300 a los 3420 cm–1
asociado con las vibraciones de "estiramiento" de los enlaces O-H y una banda débil
cercana a los 2900 cm–1 asociada con las vibraciones de estiramiento en los enlaces de
grupos funcionales CH3, CH2 y CH.

136
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

En las Figura 33 se agruparon para efectos comparativos los espectros IR de los

polisacáridos sulfatados obtenidos de algas verdes, en ellos se muestra amplificada la zona
donde de puede observarse la denominada "huella digital", la cual se localiza en el intervalo
de frecuencias de los 1200 a 800 cm-1, lo que permite observar diferencias en las bandas de
absorción de los polisacárdidos estudiados. De igual forma se aguparon los espectros IR de
los PS provenientes de algas rojas (Figura 33a) y café (Figura 33b).
En todos los espectros se localizó la banda de absorción característica de las
vibraciones asociadas a los grupos sulfatos (alrededor 1250 cm–1). Para el PS de U.
expansa, se detectaron las bandas típicas asociadas a ulvanos (Tabla XX); en el caso de P.
durvillaei, las bandas detectadas coinciden con lo reportado para fucoidanos (Figura 33a y
Tabla XX); para agares de algas rojas se identificaron algunas bandas de absorción típica en
G. vermiculophylla y S. filamentosa. En C. sertularioides se identificaron las bandas de
absorción asociadas a galactosa sulfatada (830 cm–1).

137
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Tabla XIX. Composición química y viscosidad intrínseca de los polisacáridos extraídos del las algas seleccionadas.
Alga Proteína total Azúcares Ácidos Urónicos Sulfatos *Viscosidad intrínseca
(%) totales (%) (%) (%) [ƞ] (dL/g)
U. expansa 3.7±0.3c 47.9±0.5d 13.4±0.5b 14.9±0.9b 4.27

C. sertularioides 1.2±0.4d 73.8±3.3a 4.6±2.0bc 22.9±0.5a 3.91

R. riparium 2.1±0.2d 36.7±2.5e 2.8±0.3d 5.7±0.0c 2.72

C. isabelae 6.4±0.0b 41.5±1.6e 1.4±0.2d 5.0±0.1c 14.02

S. filamentosa 5.3±0.6b 27.5±0.4c 3.8±1.6cd 3.8±0.2cd 52.76

G. vermiculophylla 2.4±0.2cd 42.3±1.4de 9.6±1.7b 1.0±0.2d 1.68
P. durvillaei 11.5±0.0a 60.6±1.0b 41.5±0.7a 20.2±1.0a 0.77
Los datos mostrados son los valores promedio de tres determinaciones±error estándar, expresado en porcentaje en peso seco. Los
datos fueron analizados mediante una ANOVA de una vía y una prueba a posteriori de Tukey para establecer diferencias
significativas. Literales distintas indican diferencias estadísticamente significativas (P<0.05) entre las distintas especies.
* El valor [ƞ]se obtuvo a partir de la extrapolación conjunta de las curvas de Huggins, Kramer y "punto único". Para determinar
las viscosidades relativas se promediaron 5 lecturas, las determinaciones se hicieron por triplicado.
138
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Transmitancia (%)

C. isabelae
1413
888 817
1541

1641

1220-1140

1053-1024
R. riparium 1420
1634

886-825
1213

1140-1024
996
C. sertularioides
1382 765
1645 830

1228
1059 -1024
U. expansa
1425
790
845
1608
1214

1033-981

2000 1500 1000

Número de onda (cm-1)

Figura 32. Espectros FT-IR de los polisacáridos sulfatados obtenidos de algas verdes.

139
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

(a)

S. filamentosa
Transmitancia (%)

1418 933
1652 823-769

1225
1150

G. vermiculophylla 1409
1069
1634
1215 767
893
1150
931

1037

(b)

1250
P. durvillaei 1420

1617

1035

2000 1500 1000

Número de onda (cm-1)

Figura 33. Espectros FT-IR de los polisacáridos sulfatados obtenidos de (a) algas rojas y (b)
alga café.

140
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Tabla XX. Bandas de absorción IR de mayor importancia en los distintos tipos de

polisacáridos algales.
Tipo de Frecuencia Grupo asociado Referencias
Polisacárido (cm-1)

Ulvanos 1750-1716 Vibración de estiramiento tipo ester (C=O) (Robic et al.,

1650-1400 Carboxilo (vibración de estiramiento) 2009a;
1260-1250 Vibraciones S=O Hernández-
1200-1000 Vibraciones de anillo de azúcar que se traslapan Garibay et al.,
con las vibraciones de estiramiento de (C–OH) y 2011; Aguilar-
vibraciones de enlaces glucosídicos (C–O–C) Briseño et al.,
1055 Vibración estiramiento del enlace C–O de los dos 2015)
azúcares principales :Ramnosa y ácido
glucuronico
850 y 790 Vibraciones de anillos de azúcar
Agarocoloides 1380-1355 Ester de sulfato (-S=O) (Souza et al.,
1250-1240 Vibraciones S=O 2012; Barros et
1080-1040 Cadena de galactanos al., 2013)
940-930 Vibraciones del C-O-C de 3,6-anhidrogalactosa
900-890 Banda específica de agar
850-845 Galactosa-4-sulfato
820 Galactosa-6-sulfato
Carragenanos 1260-1210 Esteres de sulfato S=O (Chopin y
1070 C-O de 3,6-anhidrogalactosa Whalen, 1993;
975-970 Galactosa Pereira et al.,
933-928 Vibraciones del C-O-C de 3,6-anhidrogalactosa 2009; Gómez-
900-890 β-D-galactosa no sulfatada Ordóñez y
850-840 C-O-S sulfato axial secundario en C-4 de Rupérez, 2011)
galactosa (D-galactosa-4-sulfato)
830-825 C-O-S sulfato ecuatorial secundario en C-2 de
galactosa (D-galactosa-2-sulfato)
825, 820 (D-galactosa-2,6-disulfato)
820-810, C-O-S sulfato ecuatorial primario en C-6 de
867 galactosa (D-galactosa-6-sulfato)
805-800, C-O-S sulfato axial secundario en C-2 de 3,6-
905 anhidrogalactosa (3,6-anhidro-D-galactosa-2-
sulfato)
Fucoidanos 1740 Vibración de estiramiento (C=O) (Synytsya et al.,
1455 Vibraciones de tipo tijera del CH2 en galactosa y 2010)
xilosa y Vibración asimétrica de flexión de
enlaces CH3 de fucosa
1380 Vibración simétrica de flexión de CH3
1256 Vibraciones de estiramiento asimétrico de
S=O=S
1200-970 Vibraciones con anillos de azúcar y enlaces
glucosídicos

141
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

COMPOSICIÓN DE AZÚCARES

En esta Tabla XXI se muestran los porcentajes relativos de cada uno de los azúcares
identificados en los PS, para la identificación se emplearon los estándares de azúcares más
comúnmente reportados en polisacáridos provenientes de algas, aquellas señales que no
correspondieron con los tiempos de retención de los estándares empleados, se les agrupo en
"otros" y representan a azúcares no identificados. El tipo y porcentaje de azúcar fue
significativamente (P< 0.05) diferente entre especies. En todas las especies se detectaron la
manosa, glucosa y galactosa, siendo esta última el azúcar principal en las algas rojas S.
filamentosa (54.04%), G. vermiculophylla (64.36%) y en el alga verde C. sertularioides
(55.05%) y el azúcar de segunda importancia en R. riparium (23%), en la cual la arabinosa
fue el azúcar más abundante (60.49%). Para el alga verde U. expansa, se encontró como
azúcares principales la ramnosa (49.8%) y glucosa (15.29%), mientras que en C. isabelae
mas del 80% de azúcares detectados se distribuyó entre arabinosa, manosa y galactosa
(39.5, 22.7 y 26.38%, respectivamente), finalmente para el alga café cerca del 80% de
azúcares detectados se distribuyeron entre fucosa (39%), glucosa (20.43%) y galactosa
(16.68%).

142
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Tabla XXI. Composición en porcentaje relativo de azúcares neutros de los polisacáridos algales.

Azúcares Ulva Caulerpa Rhizoclonium Codium Spyridia Gracilaria Padina

(% relativo) expansa sertularioides riparium isabelae filamentosa vermiculophylla durvillaei

Fucosa n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 39.00±1.93

Ramnosa 49.80 ±0.28a n.d. 1.93±0.10b n.d. n.d. n.d. n.d.

Arabinosa n.d. n.d. 60.49±0.93a 39.50±0.13b 3.68±0.25c n.d. n.d.

Xilosa 9.68±0.73b 9.58±0.07b 4.59±0.16c n.d. 4.47±0.16c 3.26±0.11c 12.28±0.74a

Manosa
7.02±0.96b 12.18±0.23c 3.12±0.06b 22.77±0.65a 8.00±0.00c 8.11±1.01bc 11.61±2.17b
Galactosa
6.79±0.85e 55.05±0.54b 23.00±0.49c 26.38±0.68c 54.04±0.57b 64.36±2.15a 16.68±0.10d
Glucosa
15.29±2.03ab 10.45±0.37b 4.41±0.61c 5.05±0.37c 13.11±0.82b 12.16±0.62b 20.43±0.60a
*Otros
11.43±0.78b 12.73±0.47b 2.47±0.02d 6.30±0.27c 16.70±0.16a 12.11±0.42b n.d.
Los datos mostrados son los valores promedio de dos determinaciones±error estándar, expresado en porcentaje relativo. Los
datos fueron analizados mediante una ANOVA de una vía y una prueba a posteriori de Tukey para establecer diferencias
significativas. Letras distintas indican diferencias estadísticamente significativas (P<0.05) entre las especies.
n.d. = No detectado. * Otros = azúcares no identificados.
143
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

DISCUSIÓN

Existe una relación entre las características estructurales de los polisacáridos

sulfatados (PS) provenientes de algas marinas y las propiedades funcionales y bioactivas de
estas biomoléculas. En diversos estudios se ha observado que la composición química
(proporción y tipo de azúcar, nivel de sulfatación y contenido de ácidos urónicos), el
tamaño molecular (y su comportamiento en solución) y la conformación del polisacárido
tienen una influencia significativa sobre el tipo de bioactividad y su eficiencia como agente
bioactivo; por ejemplo, en términos generales se ha reportado que al disminuir el peso
molecular y/o viscosidad en polisacáridos sulfatados de algunas algas se incrementa su
actividad anticáncer (de Sousa et al., 2007; Ye et al., 2008a; You et al., 2010); mientras
que una mayor viscosidad incrementa la actividad anti obesidad; la actividad anti viral
cambia con el nivel de sulfatación (Karmakar et al., 2010) y tipo de azúcar (Melo et al.,
2002), de igual forma la actividad anticoagulante depende de la composición del
polisacárido (Li et al., 2008a; Li et al., 2015).

Debido a que se realizó para todas las algas el mismo proceso de extracción, en el
que como etapa inicial se solubilizaron los polisacáridos en agua caliente (65 °C), seguido
de una precipitación con etanol, el tipo de polisacárido obtenidos no es específico; es decir,
la extracción y "purificación" no son completamente eficaces en la eliminación de otros
componentes como proteínas y cenizas. Los pasos finales para la eliminación de estos
contaminantes, pueden variar considerablemente, en este caso se empleó un dializado que
se esperaba eliminara una buena cantidad de estas sustancias; sin embargo, en todas las
muestras aún se encuentra una pequeña proporción de proteínas y otros contaminantes
(Tabla XIX), por lo que el porcentaje de carbohidratos totales varía de 27.5 a 73.8% peso
seco, siendo el valor menor para S. filamentosa y el mayor para C. sertularioides. También
es importante mencionar que en todos los espectros FTIR de los polisacáridos analizados se
observó una banda fuerte de absorción en el intervalo de 3500-3200 cm–1 asociada a las
vibraciones de estiramiento de polímeros con grupos hidroxilos los cuales son típicos de los
polisacáridos (Robic et al., 2009a; Alves et al., 2013), por lo que esta región no se muestra
en los espectro FTIR, para poder amplificar la región denominada "huella digital" que

144
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

comprende la región de 2000-500 cm–1 (Figuras 32 y 33) y en la que se pueden observar

bandas de absorción asociadas a vibraciones de enlaces de grupos específicos en los
distintos tipos de ficocoloides (Tabla XX).

Todos los polisacáridos evaluados en ese estudio, presentan diferencias en la

composición química y en su viscosidad intrínseca, lo que supone aplicaciones y
potenciales bioactivos diversos, en este sentido serán discutidas las características químicas
de los polisacáridos analizados.

POLISACÁRIDOS DE ALGAS VERDES

Polisacárido de Ulva expansa

Las algas verdes de la clase Ulvophyceae sintetizan polisacáridos sulfatados (PS),

éstos pueden ser clasificados dentro de dos grandes grupos, esta clasificación originalmente
fue propuesta por Percival en 1979, y en el primer grupo (1) se incluyen a polisacáridos
ricos en ácido urónico, ramnosa, xilosa y algunas veces galactosa, y en el segundo grupo
(2) se incluye a los polisacáridos con cantidades limitadas de ácidos urónicos y con
cantidades importantes de galactosa, arabinosa y en algunos casos xilosa.

De las algas verdes incluidas en el presente estudio, el primer grupo estaría

representado por los polisacáridos sulfatados provenientes de Ulva expansa, y en el
segundo grupo se incluyen Caulerpa sertularioides, Codium isabelae y Rhizoclonium
riparium (Domozych, 2012).

Los polisacáridos sulfatados en las especies de Ulva son solubles y se denominan

ulvanos, los cuales contienen una elevada proporción de ácidos urónicos y ramnosa con
unidades disacáridas básicas repetitivas iniciando en →4)-β-d- GlcAp-(1→4)-α-l-Ramn-
(1→. α-l-Iduronico o β-xilosa, puede reemplazar al ácido glucurónico por un cierto tipo de
azúcar unido al C-2 de algunos residuos de ramnosa. La sulfatación comúnmente en C-3 de
las unidades de ramnosa y en C-2 del ácido glucurónico a los lados de las cadenas
(Domozych, 2012).

145
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

El PS proveniente de U. expansa contiene como azúcar principal a la ramnosa

(49.8%), un contenido de ácido glucurónico de 13.4% y 14.9% de sulfatos (Tabla XXI),
ésta composición es característica de los polisacáridos de tipo ulvan (Lahaye y Robic,
2007), algunos de los cuales se les ha detectado alguna bioactividad; por ejemplo, se ha
descrito un polisacárido obtenido de U. pertusa con un contenido total de carbohidratos de
47%, 23.2 % de ácidos urónicos y 17.1% de sulfato, y con ramnosa (13.7%), xilosa (6.4%)
y glucosa (4%) como azúcares principales, el cual se degradó a dos fracciones de menor
peso molecular una de 151.6 y otra de 28.2 kDa, estos polisacáridos mostraron actividad
anti hiperlipidémica en pruebas in vivo con ratones a los cuales se les administraron las
fracciones solubles en agua por intubación durante 7 días (dosis de 150, 250 y 500 mg/Kg),
los resultados indicaron que ulvanos con diferentes pesos moleculares exhiben efectos
diferenciados sobre el metabolismo lipídico, ya que el ulvan de alto peso molecular mostró
eficacia para disminuir el contenido de lípidos en suero total y LDL-colesterol, mientras
que las fracciones de bajo peso molecular disminuyeron el contenido de triglicéridos totales
y HDL-colesterol, lo que deriva en la disminución de riesgos aterogénicos y permite una
mejor salud cardiovascular (Pengzhan et al., 2003). Tres polisacáridos obtenidos de U.
conglobata con composición variable de sulfatos (23-35%), proteína (3.8-4.5%), ácidos
urónicos (10-14%) y un alto contenido de ramnosa (63-72 mol%) y glucosa (13-22 mol%),
exhibieron una elevada actividad anticoagulante (Mao et al., 2006). Recientemente se
reportó un ulvan con actividad anti viral extraído de U. clathrata, con una composición de
21.7% de ramnosa, 13.9% de ácido glucurónico y 11% de sulfato (Aguilar-Briseño et al.,
2015).

Por otro lado, para que el ulvan pueda ser utilizado en aplicaciones biomédicas,
debe evaluarse su seguridad en células humanas; en este sentido, se ha evaluado la
citotoxicidad del ulvan obtenido de U. lactuca con un 32.2% de sulfatos, ramnosa y ácido
glucurónico en un 22% cada uno, este polisacárido mostró ser seguro en pruebas in vitro al
ser incubado con células de fibroblastos (L929) al ser contrastado con ácido hialurónico en
los mismos niveles de concentración, el cual es reconocido como un compuesto no tóxico
(Alves et al., 2013).

146
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Con respecto al espectro FTIR del polisacárido extraído de U. expansa (Figura 32),
se observa un espectro similar a los descritos por otros investigadores para distintas
especies de Ulva (Robic et al., 2009a; Hernández-Garibay et al., 2011; Alves et al., 2013),
exhibiendo bandas de absorción atribuidas a las vibraciones de estiramiento asimétrico de
grupos carboxilados una fuerte a 1608 y una débil de estiramiento simétrico a 1425 cm –1.
Asociada a ésteres de sulfato, se observa una banda mayor a 1214 cm–1, dos bandas a 854 y
790 cm–1relacionadas con la ciclación de los azúcares. La región de 1200 a 1000 cm–1 es
dominada por vibraciones de estiramiento de los grupos C-OH y C-O-C de enlaces
glucosídicos. La banda a 1033 cm–1 se encuentra relacionada con las vibraciones de
estiramiento de enlaces C-O de los dos azúcares principales en este tipo de polisacáridos,
ramnosa y ácido glucurónico. También se detectaron dos bandas de absorción a 845 y 790
cm–1, relacionadas con vibraciones de los anillos de azúcar.

Polisacárido de Caulerpa sertularioides

Los polisacáridos presentes en Caulerpa, exhiben una compleja composición,

diversidad y particularidad estructural, los polisacáridos solubles en agua se encuentran
compuestos principalmente de glucanos y polisacáridos sulfatados, éstos últimos son
heteropolisacáridos cuyo azúcar principal es la galactosa, además puede contener xilosa,
glucosa y manosa (Wang et al., 2014). Esta composición general coincide con la
encontrada en este estudio para el polisacárido obtenido de Cualerpa sertularioides el cual
contiene como azúcar principal a la galactosa (55%), además de manosa (12.18%). glucosa
(10.45%), xilosa (9.58%) y un 22.9% de sulfatos, composiciones similares han sido
reportadas en polisacáridos sulfatados de Caulerpa okamurai y C. brachypus (Hayakawa et
al., 2000) los cuales han exhibido actividad antitrombótica; en un PS con 44.2% de
galactosa y 44% de sulfatación obtenido de C. lentillifera se encontró actividad
inmunoestimuladora por activación de macrófagos mediante los mecanismos de
señalización NF-κB y p38 MAPK y el incremento en la expresión de varios genes que
codifican para citocinas y la actividad fagocitaria de células de macrófagos (Maeda et al.,
2012); además se han evaluado la actividad antioxidante, antiproliferativa y anticoagulante
de polisacáridos altamente sulfatados de tres especies de Caulerpa recolectadas en Brasil

147
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

(Caulerpa cupressoides, C. prolifera y C. sertularioides), encontrando que todos estos

polisacáridos poseen bioactividad (Costa et al., 2010). El espectro FTIR del PS de C.
sertularioirdes (Figura 32) muestra bandas de absorción que han sido reportadas por otros
autores para PS de Caulerpa, tales como C. cupressoides (Rodrigues et al., 2014). La banda
de absorción a 1645 cm-1 es característico de las vibraciones de estiramiento de grupo
carboxilo, a 1228 cm-1 se atribuyen las vibraciones relacionadas al contenido de sulfatos, se
observan también bandas a 1059-1024 cm-1 asociada a las vibraciones de estiramiento en la
cadenas de arabinogalactano sulfatado y absorción a 830 cm-1 característico de galactosa 6-
sulfato.

Polisacárido de Rhizoclonium riparium

Respecto de la composición del PS proveniente de R. riparium, los azúcares

principales son arabinosa y galactosa (60.45 y 23%, respectivamente) y un menor
contenido de otros azúcares (4.59% de xilosa, 3.12% de manosa, 1.93% de ramnosa y
4.41% de glucosa, Tabla XXI). Otros autores han reportado composiciones distintas, lo que
puede estar asociado con el proceso de extracción y el área geográfica de recolección del
alga. En un estudio en el que se caracterizó a los polisacáridos del alga Rhizoclonium sp.
recolectada en un estanque acuícola de Taiwán, se determinó que los polisacáridos
extraídos con agua caliente contienen glucosa (65.8%), xilosa (19.8%), galactosa (12.5%) y
manosa (1.3%) (Chao et al., 1999); para R. riparium, pero cultivada en Taiwán, se
describió una fracción polisacárida de alto peso molecular soluble en álcali con una
composición de 41.99% de galactosa, 34.53% de glucosa, 20.24% de xilosa y 3.24% de
manosa, la cual posee propiedades inmunomodulatorias ya que es capaz de inducir la
expresión génica de Interlucin-1-beta (IL-1) mediante el mecanismo de señalización de la
proteína quinasa (Hsu et al., 2006).

En el espectro FTIR de R. riparium (Figura 32), se observa la banda de absorción

asociada con la vibración de estiramiento del grupo carboxilo a 1634 cm–1 (Robic et al.,
2009a). Las bandas de absorción en el intervalo de 1420 a 1213 cm–1 se encuentran
asociadas a vibraciones de estiramiento de los enlaces C–O/C–C y a vibraciones de OH

148
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

(Chao et al., 1999), en el intervalo de 1140 a 1024 cm–1 aparecen asociadas las vibraciones
de anillos de azúcar y las de enlaces glucosídicos (Robic et al., 2009a), la absorción 886-
825 cm–1 se asocia con el enlace β-glucosídico (Chao et al, 1999; Guptas et al., 1987).

Polisacárido de Codium isabelae

En las especies de Codium, han sido descritos tres tipos de polisacáridos sulfatados
característicos: (1) polisacáridos ramificados, con alto contenido de sulfato y piruvato del
tipo β-(1→3)-d-galactanos, (2) polisacáridos lineales de tipo β-(1→3)-l-arabinanos
altamente sulfatados y (3) polisacáridos lineales del tipo β-(1→4)-d-mananos parcialmente
sulfatado principalmente en el C-2 de algunas unidades de manosa (Domozych et al.,
2012).

El polisacárido sulfatado obtenido a partir de Codium isabelae contiene un bajo

contenido de ácidos urónicos y sulfatos (1.4±0.2 y 5.0±0.1%, respectivamente) y como
azúcares principales a arabinosa, manosa y galactosa (39.50±0.13, 22.77±0.65 y
26.38±0.68%, respectivamente), siendo menor el contenido de manosa en C. isabelae
respecto de lo reportado para C. vermiaria (>80% en C. vermilaria) (Fernandez et al.,
2011). El espectro FTIR de los PS de C. isabelae mostró las bandas de absorción
característicos de polisacáridos sulfatados de otras especies como Codium vermilaria
(Fernandez et al., 2011), observándose una banda a 1120 cm–1 asociada con las vibraciones
de estiramiento asimétrico de los enlaces O=S=O de esteres de sulfato. También se
observan las bandas a 1053, 1024, 888, 817 cm–1 las cuales se asocian con cadenas de
arabinogalactanos sulfatados que han sido previamente reportados para C. fragile (Estevez
et al., 2009).

Desde el punto de vista bioactivo, se han reportado dos polisacáridos aislados de

Codium dwarkense, un arabinano sulfatado (100% arabinosa, 41.45% de sulfato) y un
arabinogalactano sulfatado (61.25% arabinosa, 38.75% galactosa y 31.85% de sulfato),
ambos con actividad anticoagulante, pero siendo notablemente mayor en el arabinano
(Siddhanta et al., 1999); también reportaron la actividad antitrombótica de polisacáridos
obtenidos de Codium divaricatum, C. adhaerence, C. latum y C. fragile que contienen

149
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

arabinosa como azucar principal y encontraron que estos polisacáridos poseen mayor
actividad antitrombotica que otros polisacáridos de algas verdes cuyo azúcar predominante
es la galactosa (e.i. Caulerpa okamurai y C. brachypus), estas diferencias en bioactividad
los autores se las atribuyeron a que la arabinosa carece de un grupo hidroximetilo en la
posición C-5 (Hayakawa et al., 2000). Por otra parte, en seis especies de Codium (C.
dearkense, C. iyengarii, C indicum, C. geppei, C. tomentosum, C. decorticatum, C.
coronatum y C. tenue) recolectadas en India fueron estudiadas como fuente de
polisacáridos con actividad anticoagulante y de composición variable (18-34 % de azúcares
totales, 8-18% de proteína, 0.7-4.5 % de urónicos, 11-31% de sulfato y porcentajes
variables de arabinosa, galactosa y manosa), en el caso de C. dearkense, C. tomentosum y
C. tenue, contienen un bajo contenido de ácidos urónicos y un elevado contenido de
sulfatos, además exhibieron una mayor actividad anticoagulante en comparación con los
polisacáridos provenientes de C. geppei y C. coronatum con menor contenido de sulfato y
mayor de ácidos urónicos, lo cual indica que existe una relación entre el contenido de
sulfato y ésta bioactividad (Shanmugam et al., 2002). Adicionalmente, se ha reportado un
galactano sulfatado proveniente de Codium cylindricum con actividad anticoagulante y
antiangiogénica (Matsubara et al., 2003). Todos estos reportes indican que la composición
y sulfatación en los polisacáridos provenientes de las distintas especies de Codium, son
responsables del tipo de bioactividad que éstos pueden exhibir, por lo que es posible que el
polisacárido de C. isabelae obtenido en nuestro estudio pueda exhibir algún tipo de
bioactividad asociada a su contenido de arabinosa y su parcial sulfatación.

POLISACÁRIDOS DE ALGAS ROJAS

Polisacárido de Spyridia filamentosa

El PS de S. filamentosa, fue el que exhibió un mayor valor de viscosidad intrínseca

(52.76 dL/g) al ser disuelto en agua a 25 °C y está compuesto por 3.8% de ácidos urónicos,
3.8% de sulfatos (Tabla XX), posee galactosa como principal azúcar (54.04%), además de
glucosa (13.11%), manosa (8%), xilosa (4.47%) y arabinosa (3.68%) (Tabla XXI). Para

150
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

algas rojas son múltiples los reportes de actividad antioxidante y citotóxica (Chagas
Faustino Alves et al., 2011), antiviral (Talarico et al., 2004), anticoagulante y
antiinflamatoria (Wijesekara et al., 2011) asociada a galactanos sulfatados.
Adicionalmente, existen reportes de actividad antihiperlipidémica asociada con la elevada
viscosidad de los ficocoloides (Vaugelade et al., 2000; Cho et al., 2011), por lo que esta
característica del polisacárido de S. filamentosa, para la formación de soluciones de alta
viscosidad, puede ser deseable para algunas aplicaciones en la industria de alimentos y
farmacológica.

El espectro de FTIR de S. filamentosa (Figura 33a) muestra bandas características

de polisacáridos de tipo agar (1225, 1069, 933 y 823 cm–1), una banda de mediana
intensidad a 1225 cm–1 corresponde a la vibración S-O de los grupos sulfato (Souza et al.,
2012), la intensidad de esta señal se asocia con el contenido de sulfatos encontrado para
este polisacáridos (3.8%, Tabla XIX). La banda de absorción a 933 cm –1 se asocia a
vibraciones C-O-C de 3,6-anhidrogalactosa (Barros et al., 2013), la señal asociada a la
cadena de galactanos se observa en 1069 cm–1. La banda en 823 cm–1 se asocia con la
posición del grupo sulfato en la galactosa en la posición C-6 (Melo et al., 2002).

Polisacárido de Gracilaria vermiculophylla

El polisacárido de G. vermiculophylla contiene 9.6% de ácidos urónicos y una baja

sulfatación (1%) (Tabla XIX), además contiene como azúcar principal a la galactosa
(64.36%) y en menor proporción glucosa (12.11%), manosa (8.11%) y xilosa (3.26%)
(Tabla XXI). Se ha reportado la composición de agar proveniente de G. vermiculophylla
recolectada en costas de Portugal, esta composición fue obtenida por el análisis de los
espectros FTIR y RMN describiendo su estructura de la siguiente manera: un esqueleto de
3 unidades de d-galactosa y 4 unidades de 3,6-anhidrogalactosa, contiene metil-
substituciones en C-6 (16-19% mol) en la cadena de 3 unidades y en C-2 (2-3%mol) en la
cadena de 4 unidades, posee además una menor sulfatación en la cadena de 3 unidades en
C-4 (Villanueva et al., 2010). El espectro de FTIR de G. vermiculophylla (Figura 33a)
muestra bandas características de polisacáridos de tipo agar (1215, 1037, 931 y 893 cm–1),

151
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

y es similar al polisacárido reportado de G. caudata proveniente de Brasil el cual fue

caracterizado por Barros et al. (2013) y Villanueva et al., (2010). Una banda de baja
intensidad a 1215 cm–1 corresponde a la vibración S-O de los grupos sulfato (Freile-
Pelegrın y Murano, 2005; Souza et al., 2012), lo cual es corroborado por el bajo contenido
de sulfatos encontrado para este polisacárido (1%, Tabla XIX). La banda de absorción a
931 cm–1 se asocia a vibraciones C-O-C de 3,6-anhidrogalactosa (Barros et al., 2013), la
señal asociada a la cadena de galactanos se observa en 1037 cm–1. En agares obtenidos de
G. cervicornis, G. blodgettii y G. crassissima recolectadas en las costas de Yucatán,
México, en los que se reporta la presencia de bandas de absorción en el intervalo de 825-
820 cm–1 atribuidas a las vibraciones de grupos sulfatos localizados en la posición C-6
(Freile-Pelegrın y Murano, 2005), estas bandas no aparecen en el espectro de G.
vermiculophylla (ver Figura 33a), por lo que con base en lo reportado por Villanueva et al.,
(2010) puede ser interpretado como la ausencia de sulfatación en esta posición.

Diversos autores han reportado bioactividad asociada a polisacáridos provenientes

de gracilarias, entre los que se encuentra la actividad antiviral contra HSV-1 y HSV-2 de
polisacáridos obtenidos de G. corticata con un mayor contenido de sulfatos (10 veces más)
y una menor proporción de galactosa al encontrado en nuestro estudio, los autores
encontraron que el polisacárido de G. corticata con la mayor actividad antiviral era un
galactano sulfatado en C-4 y de alto peso molecular (Mazumder et al., 2002), por lo que
nuevamente se observa una relación del tipo y efectividad de la función bioactiva de los
polisacáridos con la composición química y estructural. Se ha reportado la protección del
daño gástrico causado por etanol, el cual fue determinado in vivo para ratones de
laboratorio a los cuales se les administró vía oral un polisacárido extraído de G. caudata,
los autores determinaron que esta protección se lleva a cabo mediante activación de
mecanismos de reducción de la producción de radicales libres y peroxidación lipidica, así
como la activación de canales de KATP (Silva et al., 2011).

152
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

POLISACÁRIDOS DE ALGAS CAFÉS

Polisacárido de Padina durvillaei

Fucoidan o fucano son términos utilizados para denominar a una clase de

polisacáridos sulfatados ricos en fucosa que se encuentran en las paredes celulares y
espacios intercelulares de las algas cafés. Los heterofucanos además de fucosa, pueden
poseer distintas proporciones de galactosa, manosa, xilosa, glucosa y/o ácido glucurónico,
éstos azúcares normalmente se encuentran en menores cantidades (Senthilkumar et al.,
2013).

El PS de P. durvilleae contiene 41.5 % de ácidos urónicos y 20.2% de sulfatos

(Tabla XX), se trata de un heterofucano que posee como azúcar principal a la fucosa (39%),
además de glucosa (20.43%), galactosa (16.68%), manosa (11.61%) y xilosa (12.28%)
(Tabla XXI). En el espectro FTIR del polisacárido proveniente del alga café P. durvillaei
(Figura 33b) se observan dos bandas débiles características de la fucosa, azúcar
característico de estos polímeros, una a 1420 y otra a 541 cm–1, la banda de absorción a
1250 cm–1 está asociada a vibraciones de estiramiento asimétrico de S=O=S (Silva et al.,
2005) y la banda a 1035cm–1 se debe a la vibración de los anillos de azúcar y a los enlaces
glucosidicos (Synytsya et al., 2010).

Los fucanos provenientes de distintas especies de algas cafés, han sido reconocidos
por su bioactividad, principalmente de tipo anticoagulante y quimiopreventiva.
Básicamente se tratan de heterofucanos en los que las proporciones de los azúcares
distintos al azúcar principal (fucosa) y el nivel de sulfatación juegan un papel fundamental
en el tipo y efectividad de las bioactividades detectadas, algunos ejemplos son: los
heterofucanos de Padina gymnospora con diferentes proporciones de fucosa, xilosa, ácido
urónico, galactosa y sulfato, cuya estructura central consiste en 3-β-D-glucurónico 1→o 4-
β-D-glucurónico 1→, sustituido en C-2 de α-L-fucosa o β-D-xilosa. Con grupos sulfatados
solo en C-3 de 4-α-L-fucosa 1→ a los que se atribuye la fuerte actividad anticoagulante del
polímero (Silva et al., 2005).

153
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Estudios recientes, sugieren que los fucanos de menor peso molecular son los que
poseen una mayor actividad biológica con aplicaciones farmacológicas, un ejemplo de estos
estudios es el realizado por Zhang et al., (2011) en el que fucanos de bajo peso molecular
(<10 KDa) han mostrado inhibir el crecimiento de células de carcinoma humano como las
de adenocarcinoma de cérvix (HeLa), fibrosarcoma (HT1080), leucemia (K562), linfoma
(U937) y adenocarcinoma de pulmón (A549).

Por otro lado, a este tipo de polisacáridos provenientes de distintas especies (e.g.
Undaria pinnatifida) se les han atribuido actividades de tipo inmunomodulatorias y
antitumorales (Maruyama et al., 2006); en Laminaria japonica actividad antiviral
(Makarenkova et al., 2009), antitrombótica y anticoagulante (Zhu et al., 2010); actividad
antiinflamatoria en Laminaria saccharina (Jaswir y A Monsur, 2011); antitrombótica en
fucanos de Ascophyllum nodosum (Colliec‐Jouault et al., 2003); antioxidante en Fucus
vesiculus (Rupérez et al., 2002); y inmunomodulatoria intestinal en fucoidanos de
Sargassum crassifolium y Padina australis (Yuguchi et al., 2016), por mencionar algunos.
Por lo tanto, es probable que el heterofucano de P. durvillaei determinado en el presente
trabajo posea algún tipo de actividad biológica.

CONCLUSION

Se logró una caracterización química de los polisacáridos de las siete especies de

algas seleccionadas para este estudio, encontrando diferencias estructurales y de
composición asociadas a la especie. Además se encontraron variaciones en la composición
química de los polisacáridos de las especies R. ripariun y G. vermiculophylla, respecto de
las mismas especies recolectadas en otras regiones.

A pesar de estas variaciones, algunas de las características químicas y estructurales,

concuerdan con las determinadas por otros autores en polisacáridos bioactivos, por lo que
no se descarta la posibilidad de que los polisacáridos estudiados en nuestro trabajo, posea
algún tipo de bioactividad que permita su uso a nivel farmacológico o nutricional.

154
 CAPÍTULO III: POLISACÁRIDOS SULFATADOS DE MACROALGAS DE LA COSTA DE SINALOA Y SU
CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ESTRUCTURAL

Sin embargo, es necesario evaluar las bioactividad de los polisacáridos con el fin de
profundizar en los posibles componentes y mecanismos relacionados con la función
biológica de estos polisacáridos, lo que resulta fundamental para su potencial aplicación.

155
CONCLUSIÓN GENERAL Y
RECOMENDACIONES
 CONCLUSIÓN GENERAL

CONCLUSIÓN GENERAL

Mediante el desarrollo de este proyecto de tesis doctoral, se logró la caracterización

química y funcional de especies de macroalgas de la costa de Sinaloa (cuatro especies
verdes, dos especies rojas y una especie café). Por primera vez, se generó información
sobre la importancia de las macroalgas de Sinaloa como posible fuente de compuestos
biactivos.
A pesar de que las especies de algas marinas estudiadas mostraron diferencias en el
perfil de compuestos con potencial bioactivo, es posible agruparlas con base en algunos
componentes específicos, los cuales pueden ser empleados como biomarcadores por su
contribución a las actividades biológicas que fueron evaluadas. Se observaron similitudes
en la composición de acuerdo con su clase taxonómica, tal es el caso de las especies
Rhodophyceae evaluadas (G.vermiculophylla y S. filamentosa) y la mayoría de las
Chlorophyceae (C. sertularioides, R. riparium y C. isabelae) con excepción de U. expansa,
en la cual se detectó una elevada proporción de fucosterol similar a la encontrada en la
especie de la clase Phaeophyceae estudiada (P. durvillaei).
En el caso del contenido de polisacáridos sulfatados, en la mayoría de las especies
se encontraron características químicas y estructurales que concuerdan con las
determinadas por otros autores en polisacáridos bioactivos, por lo que no se descarta la
posibilidad de que los polisacáridos sulfatados estén relacionados con algún tipo de
bioactividad.
Las especies de macroalgas que se destacaron por su alto potencial quimioprotector
(antioxidación, antimutagenicidad y antiproliferación) fueron las algas S. filamentosa, R.
riparium y C. sertularioides.
El resto de las especies mostraron componentes químicos particulares que pudieran
aprovecharse como fuentes de compuestos bioactivos y/o nutricionales con importante
aplicación en la promoción de la salud, prevención y/o control de enfermedades en
humanos y animales.
Por lo tanto y con base en los resultados obtenidos en este trabajo de investigación,
se puede concluir que las especies de macroalgas que se distribuyen en la costa de Sinaloa
pueden ser consideradas como materia prima para la obtención de compuestos con

157
 CONCLUSIÓN GENERAL

actividad biológica, lo que puede ser una alternativa atractiva para el aprovechamiento
integral de este recurso marino.

158
 RECOMENDACIONES

RECOMENDACIONES

Aún cuando los resultados expuestos en este trabajo de investigación indican que las
especies estudiadas pueden ser aprovechadas para la obtención de compuestos de alto valor
agregado, no debe perderse de vista que es necesario aplicar nuevas técnicas de extracción
(e.g. punto crítico) que permitan aislar eficientemente los compuestos bioactivos, para con
ello continuar su evaluación y aislamiento biodirigido en estas y otras especies de
macroalgas de la región, con el fin de determinar y aislar los compuesto químicos
responsables de la bioactividad quimiopreventiva. Así mismo resulta indispensable
continuar la evaluación bioactiva de los polisacáridos sulfatados extraídos de las especies
de macroalgas analizadas en esta tesis.

Estos resultados plantean nuevas oportunidades para continuar con su estudio,

abriendo un abanico de posibilidades para el desarrollo y aplicación de estrategias
biotecnológicas encaminadas al aprovechamiento integral de las macroalgas con
potenciales beneficios en la salud humana y en el desarrollo económico de la región.

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 LITERATURA CITADA

LITERATURA CITADA

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182
PUBLICACIONES
 PUBLICACIONES

ARTÍCULOS CIENTÍFICOS

Artículo Publicado

Idalia Osuna-Ruiz, Carmen-María López-Saiz, Armando Burgos-Hernández, Carlos

Velázquez, Mario Nieves-Soto and Miguel Ángel Hurtado-Oliva (2016): Antioxidant,
antimutagenic and antiproliferative activities in selected seaweed species from Sinaloa,
Mexico, Pharmaceutical Biology, DOI: 10.3109/13880209.2016.1150305.

Artículo Sometido

Idalia Osuna-Ruiz, Mario Nieves-Soto, Mercedes Marlenne Manzano-Sarabia, Enrique

Hernández-Garibay, Jaime Lizardi-Mendoza, Armando Burgos-Hernández, Miguel Ángel
Hurtado-Oliva. Nutritional value and chemopreventive potential of selected seaweeds
species from Sinaloa, Mexico.

ARTÍCULO DE DIFUSIÓN

Artículo Publicado en línea

Idalia Osuna Ruiz, Miguel Ángel Hurtado Oliva, Mario Nieves Soto, Mercedes Marlenne
Manzano Sarabia, Armando Burgos Hernández, Jaime Lizardi Mendoza y Enrique
Hernández Garibay. Algas marinas: potencial fuente de compuestos contra el cáncer,
Ciencia.

i
ANEXOS
 ANEXOS

ANEXO 2. ENSAYO DE AMES, PARA LA DETERMINACIÓN DE

ANTIMUTAGÉNESIS

Figura A1.1.- Diagrama del ensayo de Ames para determinar el potencial antimutagénico
de compuestos naturales.

ii
 ANEXOS

ANEXO 2. DESCRIPCIÓN Y CURVAS DE CALIBRACIÓN DE LAS TÉCNICAS

ESPECTROFOMÉTRICAS DE ANÁLISIS EMPLEADAS.

A2.1.- Determinación de Compuestos Fenólicos Totales (CFT).

Tabla A2.1.1. Protocolo de técnica para cuantificar CFT modificada de Marigo (1973).
Orden de adición ó Sustancia Volumen Precauciones
paso de la técnica
1 Muestra o estándar 100 μL Disuelto en metanol
o etanol.
2 Reactivo de FOLIN 150 μL Diluir previamente el
reactivo 1:1 con agua
deionizada.
3 Na2CO3 2%:NaOH 0.4% 1 mL
Para preparar: a 100
mL de gua
deionizada adicionar
2g de Na2CO3 y 0.4g
de NaOH.

Incubar 20 min. a temperatura ambiente, protegido de la luz

Leer la absorbancia a 750 nm
Blanco metanol 80%

Tabla A2.1.2. Datos de la curva estándar, elaborada para la determinación de CFT.

Concentración de Ácido Gálico Absorbancia a 750nm

(mg/mL) Repetición 1 Repetición 2 Repetición 3 Promedio
0.000 0.025 0.136 0.142 0.101
0.074 0.456 0.460 0.451 0.456
0.148 0.777 0.801 0.800 0.793
0.222 1.267 1.261 1.241 1.256
0.296 1.679 1.709 1.750 1.713
0.370 2.198 2.241 2.247 2.229
0.444 2.540 2.608 2.606 2.585
0.518 2.872 2.934 2.991 2.932
0.592 3.250 3.227 3.151 3.209

iii
 ANEXOS

Figura A2.1.1. Curva Estándar de ácido gálico para la cuantificación de CFT.

Ecuación para la cuantificación de compuestos fenólicos totales en Equivalentes de Ácido

Gálico (EAG) (mg de Ácido Gálico/g de Muestra seca):

A−b
Equivalentes de Ácido Gálico (EAG) = × B−1
m

Donde:

A = Absorbancia de la muestra a 750nm

b = El valor de la ordenada al origen de la curva estándar de ácido gálico

m = El valor de la pendiente de la ecuación de la línea recta en la curva estándar de ácido

gálico

B = Peso seco de la muestra en gramos

iv
 ANEXOS

A2.2.- Determinación de flavonoides totales.

Tabla A2.2.1. Protocolo de técnica para cuantificar flavonoides totales (Luximon-Rama et

al., 2002).
Orden de adición ó Sustancia Volumen Precauciones
paso de la técnica
1 Muestra o estándar 1mL Disuelto en metanol.
2 AlCl3 2% 1 mL Para preparar: a 100
mL metanol 99%
puro adicionar 2g de
AlCl3.

3 Agitar vigorosamente

Incubar 10 min. a temperatura ambiente, protegido de la luz

Leer la absorbancia a 367 nm
Blanco metanol 80%

Tabla A2.2.2. Datos de la curva estándar, elaborada para la determinación de Flavonoides

totales.

Concentración de Queracetina Absorbancia a 750nm

(mg/mL) Repetición 1 Repetición 2 Repetición 3 Promedio
0.000 0.017 0.000 0.000 0.006
0.025 0.231 0.222 0.200 0.218
0.050 0.464 0.456 0.427 0.449
0.075 0.723 0.700 0.688 0.704
0.100 0.921 0.952 1.007 0.960
0.125 1.206 1.178 1.160 1.181
0.150 1.467 1.430 1.454 1.450
0.175 1.770 1.745 1.690 1.735
0.200 1.931 2.066 1.903 1.967
0.225 2.230 2.246 2.228 2.235
0.250 2.427 2.408 2.402 2.412

v
 ANEXOS

Figura A2.2.1. Curva estándar de queracetina para la cuantificación de flavonoides totales

Ecuación para la cuantificación de flavonoides totales en Equivalentes de Queracetina

(EAG) (mg de Queracetina/g de Muestra seca):

A−b
Equivalentes de Queracetina (EQ) =
mB
Donde:

A = Absorbancia de la muestra a 367nm

b = El valor de la ordenada al origen de la curva estándar de Queracetina

m = El valor de la pendiente de la ecuación de la línea recta en la curva estándar de

Queracetina

B = Peso seco de la muestra en gramos

vi
 ANEXOS

A2.3.- Determinación de proteína total

Tabla A2.3.1. Protocolo de técnica para cuantificar Proteínas totales (Bradford, 1976).
Orden de adición ó Sustancia Volumen Precauciones
paso de la técnica
1 Muestra o estándar 100 μL Disuelto en agua
2 Reactivo de Bradford 1000 μL

Incubar 5 min. a temperatura ambiente. Leer la absorbancia a 545 nm

Blanco agua

Tabla A2.3.2. Datos de la curva estándar, elaborada para la determinación de proteínas

totales.
Concentración Absorbancia a 545 nm
BSA* (mg/mL) Repetición 1 Repetición 2 Repetición 3 Promedio AX-A0**
0.000 0.467 0.464 0.467 0.466
0.030 0.480 0.495 0.482 0.486 0.027
0.060 0.495 0.494 0.492 0.494 0.035
0.090 0.515 0.512 0.519 0.515 0.057
0.120 0.536 0.532 0.534 0.534 0.075
0.150 0.550 0.561 0.555 0.555 0.097
0.180 0.558 0.558 0.580 0.565 0.107
*Seroalbúmina de Bovino disuelta en agua
** AX = Promedio de absorbancia a la concentración conocida, A0 = Promedio de
Absorbancia a concentración cero (blanco reactivo)

vii
 ANEXOS

Figura A2.3.1. Curva estándar de BSA para la cuantificación de proteínas totales

Ecuación para la cuantificación proteínas totales:

(A − A0 ) − b
Proteína Total [mg⁄mL] =
m
Donde:

A = Absorbancia de la muestra a 545 nm

A0 = Absorbancia de blanco reactivo

b = El valor de la ordenada al origen de la curva estándar de BSA

m = El valor de la pendiente de la ecuación de la línea recta en la curva estándar de BSA

viii
 ANEXOS

A2.4.- Determinación de carbohidratos totales

Tabla A2.4.1. Protocolo de técnica para cuantificar carbohidratos totales (Dubois, 1956).
Orden de adición ó Sustancia Volumen Precauciones
paso de la técnica
1 Muestra o estándar 200 μL Disuelto en agua
2 Fenol 5% 200 μL Solución acuosa
3 H2SO4 1000 μL ACS, concentrado

Agitar vigorosamente 1 min, Incubar 30 min. a temperatura ambiente. Leer la

absorbancia a 490 nm
Blanco H2SO4

Tabla A2.4.2. Datos de la curva estándar, elaborada para la determinación de carbohidratos

totales.
Concentración Absorbancia a 490 nm
glucosa (μg/mL) Repetición 1 Repetición 2 Repetición 3 Promedio AX-A0**
0 0.040 0.033 0.036 0.0365
31.87 0.412 0.332 0.403 0.382 0.346
63.74 0.500 0.556 0.548 0.535 0.498
95.61 0.804 0.805 0.72 0.776 0.740
127.48 0.988 1.091 1.092 1.057 1.021
254.96 1.698 1.694 1.702 1.698 1.662
*glucosa disuelta en agua
** AX = Promedio de absorbancia a la concentración conocida, A0 = Promedio de
Absorbancia a concentración cero (blanco reactivo)

ix
 ANEXOS

Figura A2.4.1. Curva estándar de glucosa para la cuantificación de carbohidratos totales

Ecuación para la cuantificación carbohidratos totales:

(A − A0 ) − b
Carbohidratos totales [mg⁄mL] =
m

Donde:

A = Absorbancia de la muestra a 490 nm

A0 = Absorbancia de blanco reactivo

b = El valor de la ordenada al origen de la curva estándar de glucosa

m = El valor de la pendiente de la ecuación de la línea recta en la curva estándar de glucosa

x
 ANEXOS

A2.5.- Determinación de sulfatos

Tabla A2.5.1. Protocolo de técnica para cuantificar sulfatos (Dogson y Price, 1962).
Orden de adición ó Sustancia Cantidad Precauciones
paso de la técnica
1 Muestra o estándar 1-2 mg En tubos con tapón roscado,
limpios y secos
2 HCl 1N 1mL Agregar en campana de
extracción de humos
3 Hidrolizar cerrando bien los tubos, por espacio de 4-5 horas a 110 °C
4 Tomar 250 μL del hidrolizado y colocarlo en tubo de ensaye limpio,
ajustar el volumen a 500 μL por adición de HCl 1N
5 Ácido Tricloroacético 30% 3.5 mL Manejar con sumo cuidado ya
que este ácido es muy
corrosivo
6 Agitar en vortex
7 BaCl2-gelatina 1 mL 2g de gelatina disuelta en 400
mL de H2O (60-70 °C), una
vez disuelta la solución es
enfriada por 8 horas a 4 °C,
posteriormente se adicionan 2
g de cloruro de bario y se
disuelven en la solución de
gelatina. Almacenar a 4 °C
durante 3 h antes de usarse.
8 Agitar en vortex, reposar 10 min
Leer la Absorbancia a 360 nm contra blanco de HCl 1 N.
El complejo es estable aproximadamente 1 hora.

Tabla A2.5.2. Datos de la curva estándar, elaborada para la determinación de sulfatos.

Concentración Absorbancia a 360 nm
K2SO4
(μg/mL) Repetición 1 Repetición 2 Repetición 3 Promedio AX-A0**
0 1.532 1.532 1.534 1.533
50 1.862 1.856 1.876 1.865 0.332
100 1.798 1.809 1.796 1.801 0.268
200 1.701 1.675 1.756 1.711 0.178
300 1.630 1.627 1.665 1.641 0.108
400 1.598 1.564 1.578 1.513 -0.019
* K2SO4disuelto en HCl 1N
** AX = Promedio de absorbancia a la concentración conocida, A0 = Promedio de
Absorbancia a concentración cero (blanco reactivo)

xi
 ANEXOS

Figura A2.5.1. Curva estándar de K2SO4 para la cuantificación del contenido de sulfatos

Ecuación para la cuantificación de sulfatos:

(A − A0 ) − b
Contenido de Sulfatos [μg⁄mL] =
m

Donde:

A = Absorbancia de la muestra a 360 nm

A0 = Absorbancia de blanco reactivo
b = El valor de la ordenada al origen de la curva estándar de K2SO4
m = El valor de la pendiente de la ecuación de la línea recta en la curva estándar de K2SO4

xii
 ANEXOS

A2.6.- Determinación de ácidos urónicos totales

Tabla A2.6.1. Protocolo de técnica para cuantificar ácidos urónicos totales (Bitter y Miur,
1962).
Orden de adición ó Sustancia Volumen Precauciones
paso de la técnica
1 Reactivo A 3 mL Solución 0.025 M de Na2B4O7.10H2O en
H2SO4
Mantener los tubos en baño de hielo a 4
°C
2 Muestra o 500 μL Muestra en Solución acuosa.
Estándar Mantener los tubos en baño de hielo a 4
°C
3 Cerrar los tubos, agitar gentilmente y después vigorosamente enfriando
4 Incubar 10 minutos en baño de agua hirviendo
5 Enfriar a temperatura ambiente
6 Reactivo B 100 μL Solución .125% de Carbazol en Metanol
Mantener los tubos en baño de hielo a 4
°C
7 Agitar vigorosamente enfriando
8 Incubar 15 minutos en baño de agua hirviendo

Enfriar a temperatura ambiente. Leer la absorbancia a 530 nm

Blanco H2SO4

Tabla A2.6.2. Datos de la curva estándar, elaborada para la determinación de ácidos

urónicos totales.
Concentración Absorbancia a 530 nm
Ac. Glucurónico
(μg/mL) Repetición 1 Repetición 2 Repetición 3 Promedio AX-A0**
0 0.398 0.377 0.37 0.382
8 0.458 0.455 0.461 0.458 0.076
16 0.502 0.554 0.534 0.530 0.148
24 0.574 0.566 0.571 0.570 0.189
32 0.649 0.639 0.589 0.626 0.244
40 0.673 0.703 0.695 0.690 0.309
*Ácido glucurónico disuelto en agua
** AX = Promedio de absorbancia a la concentración conocida, A0 = Promedio de
Absorbancia a concentración cero (blanco reactivo)

xiii
 ANEXOS

Figura A2.6.1. Curva estándar de ácido glucurónico para la cuantificación de ácidos

urónicos totales.

Ecuación para la cuantificación ácidos urónicos totales:

(A − A0 ) − b
Ácidos urónicos totales [μg⁄mL] =
m

Donde:

A = Absorbancia de la muestra a 530 nm

A0 = Absorbancia de blanco reactivo

b = El valor de la ordenada al origen de la curva estándar de ácido glucurónico

m = El valor de la pendiente de la ecuación de la línea recta en la curva estándar de ácido

glucurónico

xiv
 ANEXOS

ANEXO 3. DESCRIPCIÓN DE LAS TÉCNICAS EMPLEADAS PARA LA

DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE.

A3.1.- Determinación de Actividad Antioxidante mediante la técnica de DPPH.

Tabla A3.1.1. Protocolo de técnica DPPH para determinar actividad antioxidante.

Muestra Estándar Control Observaciones
Muestra 100 μL - 100 μL Disolver previamente a
TROLOX - 100 μL - concentración deseada en
etanol
Solvente - - 900 μL
hexano:etanol (1:1)
Solución de radical 900 μL 900 μL - Verificar previamente que
DPPH la absorbancia de la
0.3 mM solución sea de 0.8 a 0.9,
proteger de la luz.

Incubar 20 min. a temperatura ambiente, protegido de la luz

Leer la absorbancia a 540 nm
Blanco hexano:etanol (1:1)

𝐴−𝐵
% 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑐𝑖ó𝑛𝐷𝑃𝑃𝐻 = × 100
𝐴

Donde:
A: Absorbancia de control de DPPH
B: Absorbancia de la muestra

Tabla A3.1.2. Datos de curva estándar para determinar los equivalentes TROLOX (TEAC)
de actividad antioxidante con DPPH.
Concentración de Repetición Repetición Repetición Inhibición
TROLOX 1 2 3 Promedio DPPH (%)
μg/mL mg/mL
2503 0.0100 0.046 0.110 0.046 0.067 91.93
501 0.0020 0.732 0.747 0.751 0.743 10.87
250 0.0010 0.776 0.812 0.789 0.792 5.00
50 0.0002 0.808 0.830 0.834 0.824 1.20
25 0.0001 0.815 0.835 0.831 0.827 0.84
0 0.0000 0.826 0.831 0.845 0.834 0.00

xv
 ANEXOS

Figura A3.1.1. Curva estándar de TROLOX para la cuantificación de actividad antioxidante

sobre DPPH en TEAC.

Ecuación para la cuantificación de capacidad antioxidante, mediante la inhibición de

radicales DPPH en equivalentes TROLOX (TEAC) (μg de TROLOX/g de muestra seca):

A−b
Equivalentes TROLOX de Actividad Antioxidante (TEAC) =
mB

Donde:

A = Absorbancia de la muestra a 540nm

b = El valor de la ordenada al origen de la curva estándar de TROLOX

m = El valor de la pendiente de la ecuación de la línea recta en la curva estándar de

TROLOX

B = Peso seco de la muestra en gramos

xvi
 ANEXOS

A3.2.- Determinación de Actividad Antioxidante mediante la técnica de ABTS.

ACTIVACIÓN DEL
RADICAL ABTS

Pesar 19.2 mg de radical ABTS

disolver en 5 mL de H2O deionizada

Pesar 0.0378 g Persulfato de potasio

disolver en 1 mL H2O deionizada

Tomar 88 μL de la solución de Persulfato y

agregar a la solución de ABTS

Agitar vigorosamente la solución ABTS-Persulfato y

dejar 12-16 Hrs a temperatura ambiente y oscuridad

Tomar un 1 mL del radical ABTS activado y agregar aprox.

88 mL de etanol y disolver bien, proteger de la luz

Ajustar a 0.8 de absorbancia a 734 nm

Figura A3.2.1. Diagrama de flujo para la activación del radical ABTS.

xvii
 ANEXOS

TECNICA DE ABTS

En celda de 4 mL, agregar 2.9 mL del Radical ABTS, tomar Inicio de la

la lectura de absorbancia a 734 nm, este es el tiempo cero Reacción

No debe
Agregar 0.1 mL de la muestra a probar transcurrir más
de un minuto

Agitar vigorosamente

Continuar con la lectura en celda a 734 nm cada Término de la

minuto durante un tiempo total de 10 min. reacción

Leer contra blanco reactivo (etanol 80%)

Calcular % inhibición al tiempo en el cual la

absorbancia permanece constante

LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE SE EXPRESA COMO:

TEAC (Trolox equivalent activity) para lo cual se requiere una curva
de calibración de trolox.
VCEAC (Vitamin C equivalent antioxidant activity) para lo que se
requiere una de calibración de vitamina C.

Figura A3.2.1. Diagrama de flujo la determinación de actividad antioxidante empleando

como radical ABTS.

xvii
i
 ANEXOS

ANEXO 4. INVENTARIO DE ESPECIES Y PARÁMETROS AMBIENTALES IN

SITU EN LA RECOLECCIÓN DE ALGAS

Tabla A4.1. Inventario de las especies identificadas durante el estudio prospectivo en los
sitios de recolección y épocas climáticas.
SITIOS U C SMLR A-B BM

ÉPOCA CLIMÁTICAS E LL E LL E LL E LL F

CLOROPHYCEAE
Caulerpa sertularioides* X X X
Chaetomorpha linum X X X X
Cladophora serícea X X
Ulva expansa X X X
Ulva intestinalis X X
Ulva lactuca X X X
Rizoclonium riparium X X X X
Codium isabelae X

RODOPHYCEAE
Gracilaria turgida X
Gracilaria vermiculophylla X X X
Hypnea spinella X
Poysiphonia pacifica X
Spyridia filamentosa X X

PHAEOPHYCEAE
Dictyota dichotoma X
Padina durvillaei X
*Esta especie se encontró en dos estadios reproductivos: Tetrasporas (T) y Cistocarpos (C).
E = Época de Estiaje que comprende de mayo a julio, LL = Época de Lluvias que
comprende de agosto a octubre. F = Época de Frías que comprende de febrero a abril. U =
Urías, C = Ceuta, SMRL = Santa María-La Reforma, A-B = Agiabampo-Bacorehuis, BM =
Bahía de Mazatlán.

xix
 ANEXOS

Tabla A4.2. Sitios de recolecta y parámetros ambientales* determinados in situ.

Sitio de **U C A-B SMLR P
Muestreo
Época de Estiaje Lluvias Lluvias Lluvias
recolecta Jun-2013 Oct-2013 Oct-2013 Oct-2013
(mes-año)
pH 8.0±0.05b 8.6±0.07ª 8.5±0.09ª 8.5±0.08ª 0.0012
Temperatura 31.9±0.2ª 31.2±0.4a 27.5±0.5b 27.6±0.4b 0.0018
( °C)
Salinidad (UPS) 36.7±0.9a 15.0±1.3b 35.7±1.7ª 33.5±1.5ª 0.0043
*Los valores son medias±e.e. de los datos tomados en diferentes sitios en cada sistema
lagunar y fueron analizados mediante el método no paramétrico de Kruskal-Wallis
ANOVA de una vía y una prueba a posteriori de comparación múltiples de Tukey para
establecer las diferencias significativas. Las medias con letras distintas indican diferencias
estadísticamente significativas (P < 0.05).
** U = Urias, C = Ceuta, A-B = Agiabampo-Bacorehuis, SMLR = Santa María-La
Reforma.

xx