LOS CALCULOS EN EL CONTROL DE CALIDAD

QUE CALCULAMOS?

Son necesarios algunos cálculos si el material de control es valorado y

tiene una lista de un rango de valores aceptados para cada método?

Si, Usted aun necesita recolectar las mediciones de su propio control y

calcular los límites de control que aplicará en su propio laboratorio, los

valores y límites que se encuentran en los insertos de los controles

valorados generalmente describen el desempeño observado para un método

específico en diferentes laboratorios o diferentes instrumentos. Lo cual

significa que estos cálculos incluyen las variaciones que ocurren entre

laboratorios, por lo tanto, estos límites son más amplios que para un

método individual en su propio laboratorio, si los limites de control son

mas amplios y Usted utiliza estos Usted podría no detectar problemas en su

propio laboratorio.

Las regulaciones de CLIA para los Estados Unidos, exigen que los

laboratorios determinen su propia media y su desviación estándar:

(493.1218-5d) “Cuando son usados materiales de control o calibración

deben ser determinados parámetros estadísticos (media y desviación

estándar) para cada lote de calibración y cada lote de control a través de

evaluaciones repetitivas”.

Qué estadísticos necesitan ser calculados para establecer mis propios límites de control?

Usted necesita calcular la media y la desviación estándar de los resultados que han sido
recolectados para cada material de control. Es también común expresar la desviación estándar en
porcentaje mediante el calculo del coeficiente de variación.
MEDIA, DESVIACIÓN ESTÁNDAR Y COEFICIENTE DE VARIACIÓN.

Cuantas mediciones de control deben ser recolectadas antes de hacer estos cálculos?

La regla indica recolectar por lo menos veinte mediciones durante por lo menos dos semanas o
diez días de trabajo y preferiblemente cuatro semanas o veinte días de trabajo. Esto se logra
incluyendo el procesamiento de los materiales de control como parte del trabajo diario durante un
rango de tiempo determinado para observar la variación esperada en el laboratorio; un corto
período de tiempo podría conducir a una pequeña desviación estándar, períodos de tiempo más
largos son mejores por que en los estimados influirán mas operadores y mas cambios de método,
desempeños pre y post mantenimiento, cambios en lotes de reactivos, cambios en pipeteadores
etc, por lo tanto aún un mes podría ser un corto período de tiempo.

En la práctica los cambios de la media y la desviación estándar son realizados mensualmente y los
datos mensuales son adicionados a los datos de los meses previos para calcular los estadísticos
acumulados, tales como media acumulada y desviación estándar acumulada, que son utilizados
para fijar límites de control. Estos límites de control acumulados son una mejor representación del
desempeño de la prueba en largos tiempos

CÓMO SE CALCULA LA MEDIA?

La media se calcula sumando los valores medidas y dividiendo por el total de mediciones en el
grupo:

Media:

Qué me dice la media acerca del desempeño del método?

El valor de la media para un material de control ofrece una valoración de la tendencia central de
la distribución que es esperada si el desempeño del método permanece estable. Cualquier cambio
en exactitud tal como un error sistemático o un sesgo es reflejado en el valor de la media del
control, lo cual es mostrado como un sesgo en la distribución de los resultados de control, siempre
se debe tener en cuenta que la media se encuentra relacionada con la exactitud o el error
sistemático y la desviación estándar con error aleatorio.

COMO SE CALCULA LA DESVIACIÓN ESTÁNDAR

Ds:

Que dice la desviación estándar del desempeño del método?

La desviación estándar esta relacionada con la dispersión o la distribución de los resultados de

control alrededor de la media esperada, la desviación estándar es una medida del ancho de la
distribución y esta relacionado con la imprecisión o error aleatorio. A mayor desviación estándar,
mayor amplitud de la distribución, mayor error aleatorio y mas pobre precisión del método; a
menor desviación estándar, mas angosta la distribución, mas pequeño el error aleatorio y mejor la
precisión del método.
 Para un procedimiento de medición se espera que la distribución de los resultados de la medición
sea normal o Gaussiana. Para una distribución Gaussiana el porcentaje de resultados que son
esperados dentro de ciertos límites pueden ser inferidos. Es decir, se espera que el 68.2% de los

resultados observados caigan dentro de una desviación estándar X bar +/- 1 D.E.; que el 95.5% de
los datos caigan en X bar +/- 2 D.E. alrededor de la media y que el 99.7% de los datos estén entre X
bar +/- 3 D.E. alrededor de la media.

VARIANZA:

Otro termino estadístico relacionado con la distribución de los datos es la varianza, la cual es
calculada elevando al cuadrado la desviación estándar.

Ya que la D.E puede ser positiva o negativa , al calcular su cuadrado se elimina el problema de los
signos. Un uso común de la varianza es el test F para comparar la varianza de 2 métodos y
determinar si hay o no diferencia estadísticamente significativa en la imprecisión entre los
métodos en cuestión.

QUE ES EL COEFICIENTE DE VARIACIÓN

El coeficiente de variación describe la desviación estándar como un porcentaje de la media.

CV = (DE / X) * 100

POR QUE ES ÚTIL EL COEFICIENTE DE VARIACIÓN?

La desviación estándar de un método generalmente cambia con la concentración por ejemplo a

mayor concentración, mayor desviación estándar, por lo tanto usualmente es necesario definir la
desviación estándar en el nivel de concentración de interés. Debido a que el coeficiente de

variación refleja un índice de la desviación estándar con respecto a la concentración esta

generalmente ofrece una mejor estimación del método através del rango de concentraciones.

Por ejemplo, Usted podría estar interesado en planear un procedimiento de control de calidad
sobre la base del desempeño necesario a una concentración crítica de 200 mg/dl pro el control
disponible mas cercano tiene una media de 190 mg/dl por lo tanto es mejor calcular el coeficiente

de variación de los resultados observados a 190 mg/dl y entonces aplicar este coeficiente de
variación al nivel de decisión de 200mg/dl

alibraciones, formas de calculo y materiales

1. 1. “CALIBRACIONES, FORMAS DE CALCULO Y MATERIALES DE CONTROL EN QUIMICA

CLINICA” Por Lic. Wilfredo Gochez,

2. 2. Calibraciones, formas de calculo y materiales de control en Quimica Clinica.  El proceso

de la calibracion en Quimica Clinica es uno de los pasos mas criticos que define la calidad
de los resultados en las pruebas.  Sin embargo en la literatura tradicional se encuentra
muy poco material que explique de forma clara, precisa y facil como realizarlo de manera
que los principiantes en esta materia comprendan de manera practica y teorica en que
consiste la calibracion de las pruebas. Ademas la automatizacion de los analisis en quimica
 clinica han dotado a los laboratorios de modernos equipos de Quimica clinica, con
caracteristicas modernas y de vanguardia, pero que aun necesitan de los criterios que el
profesional en laboratorio clinic debera considerer para poder validar las calibraciones del
equipo.

3. 3.  Para comenzar se debe definir el termino calibracion para que todos tengamos un
concepto definido a que se refiere este proceso.  DEFINICION CALIBRACION:  La palabra
calibracion se deriva del termino: “CALIBRADOR” que es sinonimo de ESTANDAR. Lo cual
quiere decir que Calibrador es igual a Estandar. Ahora definamos que es un Estandar
segun la CLSI (Clinical Laboratory Standar Institute), se define como estandar: Aquella
substancia altamente pura cuya concentracion especifica de un analito, substrato o
enzyme es conocida y esta no varia. La tolerancia de pureza segun ACS es de 100% mas o
menos 0.02. Estas substancias son fabricadas con materias primas de la mas

4. 4.  Alta pureza con calidad de AR (Analitycal Reagent), UP (Ultra pure), QP (

Quimicamente pura) segun la ACS(American Chemical Society).  Dependiendo de la
matriz de la cual este Estandar este hecho asi se definen los tipos de calibrador, que
pueden ser Estandares primaries o secundarios. Ambos estan hechos con materiales de
alta calidad certificados cuya concentracion es garantia de que es exactamente segun lo
define el fabricante y las variaciones son practicamente inexistentes. Lo cual nos permite
tomarlos como material de calibracion confiablez, siempre y cuando tengan las
certificaciones de pureza necesarias.

5. 5.  El CLSI es una organizacion sin fines de lucro ubicada en Waye PA, USA ( Estados
Unidos) cuyo objetivo es mejorar la calidad de los resultados de laboratorio clinico por
medio de la estandarizacion de procesos unificados y mejorados en busqueda de la
excelencia cientifica.  Ahora sabemos que un Estandar no es una susbstancia comun y
corriente, si no al contrario, una sustancia de valor conocido que no varia y la cual ha sido
fabricada con las mas altas y mejores materias primas, lo cual garantiza su pureza y
concentracion. Siempre hay que evaluar la calidad de los reactivos a usar y la calidad del
agua destilada. (Ver clase sobre este tema)

6. 6. Concentración Magnitud

7. 7.  Muy bien, ahora que ya defiimos que es un Calibrador o Estandar entonces definamos
que significa la palabra calibrar:  “Se define CALIBRAR como: obtener un factor de
Calibracion para ser usado en la medicion cuantitativa de una prueba usando un
espectrofotometro o analizador de quimica clinica”.  Entonces recordemos que es un
factor de calibracion?  DEFINICION FACTOR DE CALIBRACION:  “El factor de calibracion
es la relacion matematica entre una substancia de valor o concentracion conocida y que se
utiliza para determiner la concentracion de otras substancias desconocidas”.

8. 8.  Cuya formula matematica es la siguiente:  FC = ( Concentracion Estandar/ Abs.

Estandar)  El FC x Abs. de la Muestra desconcida = Concentracion Muestra  Que es igual
a la formula:  Abs. Muestra / Abs. Estandar x Concentracion Estandar.  Ej. Determine la
concentracion de glucose y el FC tomando en cuenta los siguientes datos:  ST Glucosa =
 0.34 Concentracion ST glucose= 100 mg/dl  Muestra desconocida 1: 0.30  Muestra
desconocida 2: 0.68

9. 9.  Aplicando la formula:  FC = 100 / 0.34 = 294  Muestra 1:  294 x 0.30 = 88.2 mg/dl o
igual a: 0.30 / 0.34 x 100 = 88.2  Muestra 2:  294 x 0.68 = 200 mg/dl o igual a: 0.68 / 0.34
x 100 = 200  Muy bien con este sencillo ej. aplicamos la formula del FC y ademas
comprobamos que es el mismo resultado que relacionar abs. de Estandares y muestras. El
uso de FC es mas practico cuando necesitamos aplicarlo en el calculo de varios resultados
simultaneous.

10. 10.  Ademas los FC son utiles como parametros de referencia para conocer del estado del
equipo, reactivos y estandares, y son de gran ayuda en la deteccion de errores de tipo
sistematico.  Entonces definiremos el proceso de CALIBRACION como:  La obtencion de
un factor de calibracion (FC) por prueba para ser utilizado en el calculo de la concentracion
de una sustancia desconocida. Usando Estandares de la mas alta calidad y pureza
disponibles en el mercado. Para garantizar que este proceso se realize correctamente se
deberan corer simultaneamente los sueros control de nivel normal y anormal (I , II)
obteniendo resultados, deseables, entre las 1 Dst y maximo 2 Dst. (Ver clase de Control de
Calidad Interno)

11. 11.  Este mismo principio que se usa en equipos manuales y semi automatizados, es el
que usan los aparatos de Quimica Automatizados, por ello es primordial que se
comprenda este proceso para poder facilitar el uso posterior de equipos automatizados. 
Otro parametro a analizar son los factores que intervienen en las reacciones quimicas, ya
que estos son los que directamente inciden en los resultados finales de las pruebas, y
debemos tenerlos en consideracion para mantener controlado todo el entorno que pueda
afectar los resultados finales en la cuantificacion de los analitos, substratos o enzimas en
quimica clinica.

12. 12.  Factores que intervienen en las pruebas quimicas(Puntos criticos):  1- Protocolo de
los Reactivos  2- Tiempos de incubacion y lecturas  3- Temperaturas de reaccion y pH 
4- Relacion de volumenes exactos de Muesta / reactivos  5- Formas de Calculo  6-
Instrumentacion usada para la medicion de la reaccion.  Etc.  Vale aclarar que solo
estamos considerando la fase analitica, en esta presentacion, sin embargo las otras 2 fases
juegan un rol critic en los resultados finales (Fases Pre y Post Analiticas).

13. 13.  De todos los puntos criticos que inciden directamente en las reacciones
estudiaremos uno de los mas importantes y que muchas veces es uno de los temas mas
olvidados en la literature de Quimica clinica, debido a la relative novedad en estos
metodos, nos referimos a las formas de calculo.  DEFINICION: Formas de Calculo  Se
define como formas de calculo a la relacion matematica que expresa la reaccion quimica
(estequiometria) que ha ocurrido en el tubo de ensayo o en la cuveta de reaccion del
equipo, y que sirve para cuantificar en forma exacta la cantidad de la substancia, analito,
enzyme que esta presente al final de la reaccion.

14. 14.  Estas formas de calculo vienen expresadas en los protocolos de las tecnicas, pero
deben ser insertados en las fichas tecnicas de los equipos semi y automatizados para que
 se cumpla a cabalidad la estequiometria de la reaccion y esta pueda ser medida de forma
satisfactoria. En casos de proceos manuals, el operador tendra que llevar los tiempos,
incubaciones, lecturas y calculus respectivos para poder cuantificar la reaccion.  Existen
diferentes formas de calculo usadas para distintas cuantificaciones de pruebas, pero en
este capitulo estudiaremos las mas importantes y de uso frecuente en los laboratorios
clinicos.  El uso de estas depende mucho de la clase de equipos utilizados y su tiempo de
fabricacion. Los equipos mas nuevos son los que generalmente traen incorporados en sus
softwares estas formas de calculo.

15. 15.  DIFERENTES FORMAS DE CALCULO:  1- Punto final (End Point)  2- Tiempo fijo
(Fixed Time)  3- Modo diferencial (Diferential Mode)  4- Modo Cinetico (Kinetic Mode) 
5- Multiestandar (Curvas de Calibracion)  6- Modo Corte (Cutt – Off)  7- Etc.

16. 16.  Las reacciones de Punto Final son expresadas en la siguiente ecuacion:  R1 + Mx ----
----- Abs Donde: R1= Reactivo 1 o 2  Mx= Volume de Muestra (suero,etc)  Abs=
Absorvancia final(unica)  Estas reacciones son aquellas que desarrollan un color que es
directamente proporcional a la concentracion de la muestra (Ley de Beer-Lamber) o sea la
Absorvancia es directamente proporcional a la concentracion de la muestra. Son
reacciones visibles a simple vista y fueran las primeras en usarse en quimica clinica a
travez de la colorimetria. Ej. Glucosa, Colesterol, Trigliceridos, Ac. Urico, Albumina,
Proteinas totals, etc. Estas se realizan en los rangos de la luz visible.

17. 17.  Las reacciones de Tiempo fijo, son aquellas que se expresan en la siguiente ecuacion:
 RT + Mx ---- Abs1 --Abs2 Donde: RT= Reactivo de trabajo  Mx= volume de muestra 
Abs1, 2= Abs 1 (inicial)  Abs 2 (final)  Delta= Abs. 2 – Abs 1  Estas reacciones son
conocidas tambien como cineticas de 2 puntos. Y se refiere a la medicion de 2
absorvancias una despues de una incubacion inicial y luego de un lapso de tiempo la Abs.
final. El calculo se realiza usando el valor del Delta que es igual a Abs2 – Abs1. Para esta
prueba hay que preparer un reactive de trabajo. Ej. Creatinina, BUN UV.

18. 18.  EL calculo para el modo diferencial se expresa en la siguiente ecuacion:  RT + Mx ----
---- Abs – BMx Donde: RT = Reactivo de Trabajo  Abs= Absorvacia final  BMx= blanco de
muestra  En estas reacciones se montan simultaneamente a las muestras, calibradores,
etc. blanco de muestra el cual debera ser substraido antes de la lectura de la absorvancia
final. Ej. Bilirrubina Total y Directa.

19. 19.  El modo Cinetico (Kinetic) como lo dice su nombre es la cuantificacion del consume
de un Substrato de una enzyme en un tiempo determinado. Es una reaccion en
movimiento, la cual se realiza en el espectro de la luz U.V. (Ultravioleta) a 340 nm. Se
expresa en la siguiente ecuacion:  RT + Mx ---Abs1 ---Abs2---Abs3--Abs4--Absx 
Donde: RT= Reactivo de trabajo  Abs1,2,3,4,X = No. de Absorvancias medidas en un lapso
tiempo determinado.  Se calcula un delta a partir de la substracion de Abs1 – Abs2, Abs2
– Abs3  Abs3 – Abs4, luego el Delta se multiplica por el Factor de Calibracion dado por el
faricante dependiendo de la temperature de la reaccion.
20. 20.  El modo de calculo Multiestandar se expresa en las curvas de calibracion, las cuales
se construyen a partir de el tiraje de varios estandares simultaneous. Se expresa asi:
Concentración Magnitud

21. 21.  Dependiendo del tipo de analisis asi sera el tipo de curva de caliracion: Poligonal,
Spline, Recta de regression, etc.  Ej. TSH, T3, T4, PSA, etc.

22. 22.  El modo de Cutt-Off o corte se refiere a la principal forma de calculo en las pruebas
de tamizaje. Donde se dee determiner la positividad o negatividad de pruebas infecto
contagiosas. Ej HIV, HCV, Habs, Toxo IgG, IgM, Rubeola, etc.  En estas pruebase se realiza
a partir de la Absorbancia de las muestras y controles positivos Fuertes y positivos debiles
un corte donde se descriminaran las pruebas que salgan positivas de las negativas a partir
del valor de Abs. Un valor intermedio entre estas se denominara como zona gris o de
indeterminados.

23. 23.  Existen muchas otras formas de calculo mas que se utilizan sobre todo en
investigaciones y desarrollo biotecnologicos de nuevos productos. Sin embargo estas seis
formas de calculo abarcan la mayoria de pruebas que se usan en el area de quimica clinica
actual, por lo tanto es responsabilidad del alumno conocerlas y entender como se
desarrolla la estequiometria de la reaccion, que a final se expresa en un resultado
cuantitativo.  MATERIALES DE CONTROL:  La forma mas efectiva de garantizar que
nuestras calibraciones son correctas es tirando simutanemente o posterior a esta los
materiales de sueros control valorados de Nivel I, II. Para asegurarnos que la calibracion ha
sido realized exitosamente,