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    Ammonia SP

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    Este documento describe un método para determinar los niveles de amoníaco en plasma utilizando una reacción enzimática. El método mide la disminución de la absorbancia a 340 nm causada por la conversión de NADPH a NADP+ catalizada por la glutamato deshidrogenasa. Los niveles elevados de amoníaco en plasma pueden indicar enfermedades hepáticas o renales.

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    Descripción original:

    CUANTIFICACION DE AMONIO

    Título original

    ammonia_sp

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    Este documento describe un método para determinar los niveles de amoníaco en plasma utilizando una reacción enzimática. El método mide la disminución de la absorbancia a 340 nm causada por la conversión de NADPH a NADP+ catalizada por la glutamato deshidrogenasa. Los niveles elevados de amoníaco en plasma pueden indicar enfermedades hepáticas o renales.

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    de 3

    Ammonia

    C Para la determinación de amoníaco (NH3) en plasma

    SIGNIFICACION CLINICA MUESTRA


    Se ha demostrado que el aumento de los niveles de amonía- Plasma con EDTA
    co (hiperamonemia) causa efectos tóxicos sobre el sistema (Ver Limitaciones del Procedimiento)
    nervioso central. Existen diversas enfermedades, tanto a) Recolección: extraer la muestra evitando estasis y hemóli-
    hereditarias como adquiridas, que causan hiperamonemia. sis. Centrifugar en un tubo tapado tan pronto como sea posible.
    La deficiencia hereditaria de enzimas del ciclo de la urea b) Aditivos: emplear únicamente EDTA (Anticoagulante W
    es la principal causa de hiperamonemia en niños. Entre las de Wiener lab) como anticoagulante.
    causas adquiridas que ocasionan aumento en los niveles de c) Sustancias interferentes conocidas: la hemólisis visible
    amoníaco se encuentran la enfermedad hepática avanzada interfiere en el ensayo. No se observan interferencias signi-
    y la insuficiencia renal. ficativas por bilirrubina hasta 60 mg/dL, hemoglobina hasta
    50 mg/dL ni triglicéridos hasta 500 mg/dL.
    FUNDAMENTOS DEL METODO Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
    El método se basa en la reacción del amoníaco de la muestra drogas en el presente método.
    con α-cetoglutarato y NADPH en presencia de glutamato d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: co-
    deshidrogenasa (GLDH) para producir glutamato y NADP+. locar la muestra en hielo y ensayar de inmediato. El plasma
    La disminución de la absorbancia a 340 nm es proporcional es estable durante 3 horas a 4oC en un recipiente tapado.
    a la concentración de amoníaco en plasma. Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes
    GLDH de realizar el ensayo.
    α-cetoglutarato + NH3 + NADPH
    α-glutamato + NADP+ MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
    - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
    REACTIVOS PROVISTOS - Espectrofotómetro.
    A. Reactivo A: α-cetoglutarato 8,0 mmol/L, NADPH 0,35 mmol/L - Baño de agua a la temperatura de reacción seleccionada.
    y GLDH 1000 kU/L en buffer Tris 100 mmol/L, pH 8,6. - Cronómetro.

    REACTIVOS NO PROVISTOS CONDICIONES DE REACCION


    Ammonia Calibrator de Wiener lab. Longitud de onda: 340 nm
    Temperatura de reacción: 25, 30 ó 37oC
    INSTRUCCIONES PARA SU USO Tiempo de reacción: 5 minutos
    Reactivo Provisto: listo para usar. Volumen de muestra: 100 uL
    Volumen final de reacción: 1,1 mL
    PRECAUCIONES
    El reactivo es para uso diagnóstico "in vitro".
    Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales PROCEDIMIENTO
    de trabajo en el laboratorio de análisis clínico. En dos cubetas mantenidas a la temperatura seleccio-
    Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de nada, marcadas B (blanco) y D (muestra o calibrador),
    acuerdo a la normativa local vigente. colocar:
    B D
    ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
    ALMACENAMIENTO Muestra o Calibrador - 100 uL
    Reactivo Provisto: estable en refrigerador (2-10oC) hasta Agua destilada 100 uL -
    la fecha de vencimiento indicada en la caja.
    Reactivo A 1,0 mL 1,0 mL
    INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS Mezclar e incubar durante 30 segundos. Leer la absor-
    REACTIVOS bancia DO1 de inmediato y luego DO2 a los 2,5 minutos
    La solución del reactivo debe ser clara. Si es turbia, el reac- exactos.
    tivo puede estar deteriorado.
    CALCULO DE LOS RESULTADOS BIBLIOGRAFIA
    Amoníaco (ug/dL) = ∆AM x factor ∆A = DO2- DO1 - Tietz, N.W., Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd ed.
    Philadelphia, PA: W.B. Saunders Co; 1995:44.
    x ug/dL - Young, D.S., Effects of preanalytical variables on clinical
    Factor = laboratory test. AACC Press. Third ed., 2007.
    ∆AC
    - Mondzac A,  Ehrlich GE,  Seegmiller JE - An enzymatic
    donde: determination of ammonia in biological fluids - J. Lab. Clin.
    ∆AM: ∆Absorbancia de la muestra Med. 66/3:526-31, 1965.
    x ug/dL: concentración de amoníaco en el Calibrador
    ∆AC: ∆Absorbancia del Calibrador

    METODO DE CONTROL DE CALIDAD


    Ammonia Control de Wiener lab.

    VALORES DE REFERENCIA
    Hombres: 25 - 94 ug/dL (14,7 - 55,3 umol/L)
    Mujeres: 19 - 82 ug/dL (11,2 - 48,2 umol/L)
    Cada laboratorio debe establecer sus propios valores de
    referencia. Los resultados deberán ser evaluados junto con
    la historia clínica del paciente, el examen médico y otros
    hallazgos de laboratorio.

    CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI


    Amoníaco (ug/dL) = 1,703 x amoníaco (umol/L)

    LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO


    Ver Sustancias interferentes en MUESTRA.
    No utilizar suero como muestra ya que durante la coagu-
    lación puede originarse amoníaco, produciendo resultados
    erróneos.
    Diluir manualmente las muestras que están por encima
    del rango de medición con agua libre de amoníaco recién
    destilada o desionizada (ej.: 1+1). Multiplicar el resultado
    por el factor de dilución (ej.: 2).
    No informar de los resultados generados a partir de una
    nueva corrida automática a menos que se agregue una
    muestra fresca.

    PERFORMANCE
    a) Reproducibilidad: se evaluó de acuerdo al protocolo
    EP5-A del CLSI. En este estudio se emplearon dos muestras
    con distintas concentraciones de amoníaco (NH3) que se
    probaron con 2 corridas diarias en duplicados durante 5 días.
    Nivel C.V.wr C.V.t
    71,9 ug/dL 3,0% 3,9%
    961,3 ug/dL 2,9% 4,3%
    b) Límite de detección: el límite de detección es de 15 ug/dL
    (9 umol/L) de amoníaco.
    c) Linealidad: la reacción es lineal hasta 1700 ug/dL (1000 umol/L)
    de amoníaco.

    PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS


    Para las instrucciones de programación consulte al manual
    del usuario del analizador en uso.

    PRESENTACION
    - 1 x 20 ml (Cód. 1009693)
    - 1 x 20 ml (Cód. 1009911)
    Símbolos
    Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

    C
    Este producto cumple con los requerimientos
    previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
    productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
    M Elaborado por:

    P Representante autorizado en la Comunidad


    Europea Nocivo

    V Uso diagnóstico "in vitro"


    Corrosivo / Cáustico

    X Contenido suficiente para <n> ensayos

    Irritante

    H Fecha de caducidad

    i Consultar instrucciones de uso

    l Límite de temperatura (conservar a)

     No congelar
    Calibr. Calibrador

    b Control

    F Riesgo biológico

    Volumen después de la reconstitución


    b Control Positivo

    Cont. Contenido c Control Negativo

    g Número de lote h Número de catálogo

    M Wiener Laboratorios S.A.I.C.


    Riobamba 2944
    2000 - Rosario - Argentina

    Wiener lab.
    http://www.wiener-lab.com.ar
    Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
    Bioquímica
    Producto Autorizado A.N.M.A.T.
    PM-1102-92 2000 Rosario - Argentina

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