Guia Bioquimica

Universidad de Buenos Aires
Facultad de Agronomía
CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA
BIOQUÍMICA APLICADA
GUÍA DE ESTUDIO
Edición 2020
Centro de Impresiones
I
II
CRONOGRAMA SEPTIEMBRE- DICIEMBRE 2020
SEM L MARTES/MIÉRCOLES JUEVES/VIERNES
7 8-9 10-11
S 1 Bioenergética (teórica) Enzimas
e
14 15-16 17-18
p 2 Enzimas (TP) Metabolismo-Glucolisis
t
21 22-23 24-25
i
e 3 Metabolismo de lípidos Ciclo de Krebs - Cadena Respiratoria
(teórica)
m
28 29-30 1-2
b
Compuestos cianogénicos Metabolismo de Aminoácidos / Ciclo del
r 4 (TP) Nitrógeno / Asimilación de Nitrógeno /
e Fijación Biológica del Nitrógeno
5 6-7 8-9
Ureasas en semillas de soja Germinación / digestión
5 (TP) / Nitrato Reductasa en
O hojas (TP)
12 13-14 15-16
c
t 6 Actividad de enzimas Primer Parcial
amilolíticas (TP)
u
19 20-21 22-23
b
r 7 Situaciones problemáticas Fotosíntesis. Fase Lumínica / Ciclo de
Calvin
e
26 27-28 29-30
8 Fotosíntesis. Reacción de Hill Fotosíntesis. Fotorrespiración (C4-

(TP) CAM)/Síntesis de carbohidratos
2 3-4 5-6
9 Síntesis de almidon en hojas Transferencia de la Información Genética

(TP)
N
9 10-11 12-13
o
10 Extracción de ácidos Biotecnología
v
nucleicos (TP)
i
16 17-18 19-20
e
PCR (TP) Bioquímica Ecológica (Metabolismo
m 11 Secundario / Relación planta insecto-
b patógeno)
r 23 24-25 26-27
e Situaciones problemáticas Bioquímica Ambiental (Estrés Oxidativo /
12 Respuesta a Xenobióticos)
D 30 1-2 3-4
i 13
c Repaso / Consultas Segundo Parcial
i 7 8-9 10-11
e
m 14 FERIADO Recuperatorio
b
III
Contenidos de esta Guía de Estudio:
Programa de la materia…………………………………………………………………………………. 3
Ingreso al CED………………………………………………………………………………………………. 16
Recomendaciones mínimas para el trabajo en laboratorio…………………………… 16
Modelo de informe de laboratorio………………………………………………………………. 17
Cuestionarios……………………………………………………………………………………………….. 19
Situaciones Problemáticas Integradoras……………………………………………………….. 33
Trabajos Prácticos Experimentales………………………………………………………………… 57
IV
PROGRAMA DE LA ASIGNATURA BIOQUÍMICA APLICADA
1-IDENTIFICACIÓN DE LA ASIGNATURA
Nombre de la Asignatura: Bioquímica Aplicada

Tipo de asignatura: obligatoria
Carreras: Agronomía plan de estudio 2017. Licenciatura en Ciencias Ambientales, plan
de estudio 2017.
Cátedra: Bioquímica
Departamento: Biología Aplicada y Alimentos
Año Lectivo: 2019
2. CARACTERÍSTICAS DE LA ASIGNATURA
Ubicación de la materia en el Plan de Estudio (año): Segundo Año
Duración- (anual, cuatrimestral, bimestral, otra.): Cuatrimestral
Correlativas requeridas: Biomoléculas (regular)
Carga Horaria para el Alumno: 4 horas semanales (obligatorias) durante 16 semanas.
Docentes:
Profesor a cargo de la Cátedra y responsable de la asignatura
Ing. Agr. M.Sc. Dr. Eduardo A. Pagano
Profesores
Ing. Agr. Dr. José A. Curá
Dra. Claudia M. Ribaudo
Ing. Agr. M.Sc. Dr. Jorge A. Zavala
Dra. Karina Balestrasse
Jefes de trabajos Prácticos

Ing. Agr. M. Sc. Juan I. Gori
Ing. Agr. M. Sc. Andrés Peton
Dra. Carla Caputo
Dra Carla Zilli
Dra Eliana Munarriz
Ing. Agr. Daniela Riva
Lic. Dra. María Daniela Tejedor
Dra. María Florencia Kronberg
Dra. Romina Giacometti
Dra. Florencia Alvarez
3
Ayudantes Primeros
Dra. Natalia Ilina
Ing. Agr. Jésica Barneto;
Ing. Agr. Dr. Francisco Dillon
Ing. Agr. MS. Ivana Sabljic
Ing. Agr. Silvina Monti
Ing. Agr. José Ignacio Zaballa
Ing. Agr. Diego Reinaldo Franz
Ing. Agr. Julián Filosofía
Dra. Virginia Medina
Ing. Agr. Cecilia Pérez Pizá
Ing. Agr. Josefina Demicheli
Ing. Agr. Mariano Cassina
Dra. Natalia Laspina
Lic. Albertina Gauna
Lic. Emily Sol García
Ing. Agr. Daniela Regeiro
Ing. Agr. Guillermina Natalin Arias
Lic. Catalina Molina
Ayudantes Segundos
Srta. Lucia Paula Giai
Srta. Florencia Coleman Bernaudo
Sr. Brian Zenteno
Srta. Sofía Marchese
Srta. María José Otero
Srta. Agostina Pedreira
Srta. Hannah Rico
Srta. Melina Trasante
Srta. Camila Amigo
Srta. Abi Maglio
Srta. Marina Garbarini
3. FUNDAMENTACIÓN
Con el correr de los años y los avances científicos relacionados con la productividad de
los sistemas agropecuarios y el impacto en el ambiente de las nuevas tecnologías ha
provisto a la bioquímica de una razón de ser en sí misma más que representar una
asignatura que sirva solo de base para las posteriores en cada carrera. Muchos de los
fenómenos productivos y ambientales no pueden ser explicados sin apelar a
conocimientos fundamentales de las reacciones biológicas. Las nuevas tecnologías
basadas en avances biotecnológicos requieren conocimientos de bioquímica no solo
4
para comprenderlos y hacerlos eficientes sino también para evaluar y mitigar sus
posibles efectos negativos.
El estudio de la Bioquímica en carreras de Agronomía y de Ciencias Ambientales

comprende cuatro áreas fundamentales: i) las bases para entender el funcionamiento
metabólico de los diferentes tipos de células, ii) el metabolismo general que
comparten los diferentes seres vivos, iii) la bioquímica de los procesos que sirven de
base a la producción agrícola y el funcionamiento del ecosistema, y iv) las bases
moleculares de la transferencia de la información genética. De esos ejes
fundamentales se desgranan los diferentes temas y, a su vez, sirven de base para las
asignaturas que siguen en el plan de estudios de las carreras de Agronomía y de
Ciencias Ambientales.
En la siguiente figura se esquematiza la agrupación de los temas en las diferentes áreas
conceptuales y se señala la proyección a las asignaturas que siguen en los planes de
estudio de agronomía y ciencias ambientales.
4. OBJETIVOS GENERALES
• Capacitar al estudiante para la comprensión de las bases moleculares de la vida.
Promover en él la utilización de ese conocimiento como herramienta para interpretar
la fisiología de los seres vivos y el control de su expresión génica.
• Prepararlo para que, insertado profesionalmente, colabore en desarrollar una
producción agropecuaria eficiente, sustentable y con cuidado del medio ambiente.
• Desarrollar en el alumno la destreza básica que se requiere para el trabajo en
un laboratorio de investigación, utilizando metodología científica y confeccionando
informes que lo preparen para elaborar una comunicación científica.
5
• Incentivar el hábito de la búsqueda bibliográfica, promover el análisis crítico
de publicaciones científicas y la capacidad de resolver situaciones problemáticas del
ámbito agropecuario.
5. CONTENIDOS
CONTENIDOS MINIMOS (según Res. CS. 6180/16)

Bioenergética. Principios de la termodinámica Transferencia de energía en la biosfera.
Compuestos de alta energía. Introducción a la Bioquímica ambiental. Ciclos
biogeoquímicos, Concepto de compuestos xenobióticos, clasificación. Enzimas.
Cinética de las reacciones bioquímicas. Regulación metabólica. Anabolismo y
catabolismo. Interrelación de vías metabólicas. Degradación de hidratos de carbono en
aerobiosis y anaerobiosis. Glucolisis y ciclo de Krebs. Transporte electrónico y
respiración celular. Metabolismo de lípidos. Beta-oxidación y síntesis de ácidos grasos.
Ciclo del glioxilato. Fotosíntesis. Etapa lumínica y bioquímica. Fotorrespiración.
Metabolismos C3 y C4. Metabolismo ácido de las crasuláceas (CAM). Síntesis de
disacáridos y polisacáridos. Metabolismo del nitrógeno. Ciclo del nitrógeno en el
ecosistema. Asimilación de nitrógeno en vegetales. Fijación biológica del nitrógeno.
Desaminación y transaminación. Bioquímica de la germinación. Etapas. Movilización de
reservas. Transferencia de la información genética. Síntesis de ácidos nucleicos.
Síntesis de proteínas. Regulación de la expresión génica. Nociones de ingeniería
genética.
Contenidos conceptuales
Bioenergética. Concepto. Termodinámica de las transformaciones bioquímicas.
Concepto de energía libre y criterio de espontaneidad. Reacciones exergónicas y
endergónicas. Reacciones acopladas. Uniones químicas de alta energía. Ciclo del ATP.
Al finalizar esta unidad temática el alumno estará en condiciones de:

- Asociar los principios de la termodinámica con los procesos bioquímicos que
ocurren en la célula viva pudiendo definir con precisión los conceptos de
entalpía, entropía y energía libre.
- Reconocer las condiciones de espontaneidad y de exergonicidad de una
reacción bioquímica.
- Describir el destino energético del ATP vinculándolo a sistemas de reacciones
acopladas.
Enzimas. Definición, clasificación decimal y nomenclatura. Propiedades físicas y

químicas de las enzimas. Especificidad enzimática. Teorías sobre el mecanismo de
acción enzimática. Los factores que influyen en la formación del complejo ES. Cinética.
Inhibición competitiva y no competitiva. Enzimas alostéricas y retrocontrol: su
importancia y ejemplos. Isoenzimas. Coenzimas: estructura, propiedades. Las
coenzimas de las reacciones redox y de transferencia.
6
- Describir las propiedades biológicas de las enzimas, su modo de acción y su
capacidad regulatoria de las vías metabólicas.
- Distinguir las diferentes cinéticas, sus parámetros fundamentales y modos de
inhibición de la actividad enzimática.
- Reconocer la ubicación de una enzima entre los seis grupos principales de su
clasificación decimal.
- Explicar la importancia y modo de acción de las coenzimas en la actividad
catalítica de una enzima.
Metabolismo de hidratos de carbono. Glucólisis: etapas e importancia biológica.

Bioquímica de la glucólisis. Fosforilación a nivel de sustrato. Balance energético.
Fermentaciones: láctica y etanólica, su relación con el ensilaje. Fermentación en el
rumen. Destino de los ácidos grasos volátiles. Efecto Pasteur. Reversión de la
glucólisis. Ciclo de pentosas fosfato (CPP): etapas e importancia biológica. Interrelación
metabólica. Biosíntesis y degradación de hidratos de carbono: sacarosa, almidón y
glucógeno. Los nucleótidos-azúcares como intermediarios.

- Tener una visión panorámica del metabolismo celular que le permita
interrelacionar las diferentes vías, reconociendo los requerimientos para su
funcionamiento en la dirección anabólica o catabólica.
- Describir la vía glucolítica distinguiendo objetivos biológicos según el destino de
su producto final. Describir diferentes tipos de fermentaciones relacionándolos
con procesos agroindustriales
- Describir las vías de síntesis de azúcares (mono y polisacáridos) y la de
degradación de los mismos asociándolos a los procesos de movilización de
reservas de la planta. Reconocer la importancia de los nucleótido azúcares
como intermediarios de los procesos anteriores
Ciclo de los ácidos tricarboxílicos. Etapas e importancia biológica. Rendimiento

energético. Anfibolismo. Reacciones anapleróticas. Regeneración en aerobiosis de
coenzimas oxidadas.
Transporte electrónico y respiración celular. Concepto. Cadena respiratoria
mitocondrial. Fosforilación oxidativa. Teorías de la fosforilación oxidativa.
Desacoplantes e inhibidores. Respiración insensible al cianuro en vegetales.
- Reconocer las ventajas de una vía cíclica, como mecanismo de oxidación de

metabolitos parcialmente oxidados comunes a la degradación de diferentes
nutrientes.
7
- Explicar los principales objetivos biológicos del Ciclo de los Ácidos
Tricarboxílicos.
- Reconocer la capacidad anfibólica del mismo, sabiendo ejemplificarla con
vinculaciones a diferentes vías metabólicas.
- Describir la membrana interna mitocondrial en relación a su capacidad de
realizar el transporte electrónico y el bombeo de protones durante el proceso
de respiración celular.
- Mostrar claramente la comprensión del mecanismo de síntesis de ATP asociada
al consumo de oxígeno en la matriz mitocondrial.
- Explicar los mecanismos de inhibición del transporte electrónico y de
desacople de éste proceso con la síntesis de ATP
- Realizar un balance energético que involucre la producción de ATP por
degradación de hidratos de carbono.
Metabolismo de lípidos. Catabolismo de los lípidos de reserva y de estructura.

Degradación de los ácidos grasos: beta-oxidación. Etapas e importancia biológica.
Rendimiento energético.
Ciclo del glioxilato. Etapas. Neoglucogénesis. Concepto. Relaciones con la germinación
y senescencia.
Biosíntesis de ácidos grasos saturados e insaturados. Localización subcelular en
animales y vegetales. Biosíntesis de acilglicéridos, de lípidos complejos y de la unidad
isoprenoide.

- Comprender y describir los mecanismos de degradación de lípidos y oxidación
de ácidos grasos en la célula vegetal
- Reconocer la ventaja energética de los lípidos como reserva.
- Describir el ciclo del glioxilato (propio de los vegetales) distinguiendo sus
objetivos biológicos del ciclo de Krebs. Relacionarlos con procesos
gluconeogénicos durante la germinación.
- Describir el sistema multienzimático de síntesis de ácidos grasos, distinguiendo
sus diferentes formas en células animales vegetales y bacterias.
- Formular la síntesis de acilglicéridos y lípidos complejos.
Fotosíntesis Fase Lumínica. Fotofosforilación oxidativa. Fase oscura (Ciclo de Benson-

Calvin) Fotorrespiración. Asimilación fotosintética diferencial del CO 2: plantas C4.
Fotosíntesis en plantas con metabolismo ácido de Crasuláceas.

- Describir el proceso de transducción de energía que se da en la fotosíntesis.
Explicar la transferencia de electrones y la participación de los fotosistemas.
Explicar el proceso de síntesis de ATP fotosintética.
8
- Describir el ciclo fotosintético de reducción del carbono (Ciclo de Calvin)
reconociendo las reacciones que utilizan la energía y poder reductor obtenidos
en la fase lumínica de la fotosíntesis.
- Explicar los mecanismos de regulación de ese ciclo y en particular la dual
capacidad catalítica de la enzima Rubisco y del fenómeno de fotorrespiración.
- Explicar la diferencia de asimilación de carbono en plantas C4 y en la familia de
las crasulaceas (plantas CAM).
- Formular detalladamente las vías de síntesis de almidón y sacarosa a partir de
la triosa fosfato obtenida en el ciclo de Calvin.
Metabolismo de aminoácidos. Desaminación oxidativa y no oxidativa. Transaminación.

Decarboxilación. Vías de incorporación de amoníaco en vegetales: glutamato
deshidrogenasa, glutamina sintetasa y glutamato sintetasa. Bioquímica comparada de
la eliminación del nitrógeno en los animales. Ciclo de la urea.
Ciclo del nitrógeno en el ecosistema. Concepto e importancia. Bioquímica de los
procesos de amonificación, nitrificación y asimilación de nitratos. Respiración de
nitratos. Bioquímica de la fijación biológica del nitrógeno. Fertilizantes nitrogenados y
bioquímica de su utilización.
- Comprender el objetivo biológico de la incorporación de nitrógeno en animales

y plantas distinguiendo los mecanismos generales para lograrlo.
- Explicar los mecanismos de separación del grupo amino de esqueletos
carbonados y sus correspondientes destinos en animales y plantas.
- Describir acabadamente el ciclo del nitrógeno en la biosfera explicando las
diferentes formas y mecanismos de asimilación de N en vegetales.
- Comprender la importancia agronómica de la fijación del nitrógeno atmosférico
a través de formas simbióticas y no simbióticas.
Bioquímica de la germinación. Concepto. Dormición. Respiración. Movilización de las

biomoléculas en semillas con reservas amiláceas, lipídicas y proteicas.

- Describir las etapas de la germinación vinculando los procesos bioquímicos con
los fisiológicos.
- Integrar vías y conceptos vistos anteriormente, (como el ciclo del glioxilato y la
vía de las pentosas) con dichos procesos.
- Tener cabal comprensión del fenómeno de movilización de reservas en la
semilla del vegetal.
9
Bioquímica de la digestión. Digestión en monogástricos y poligástricos. Principales vías
de degradación de carbohidratos, lípidos y compuestos nitrogenados. Integración
metabólica.

- Describir los procesos de digestión en monogástricos y poligástricos.
- Relacionar la bioquímica de la digestión en animales con la eficiencia de
producción.
Transferencia de la información genética. Dogma central de la Biología Molecular.

Síntesis de Ácidos Nucleicos. Replicación y Transcripción. El código genético. Síntesis
de proteínas o Traducción. Regulación de la expresión génica.
- Describir los mecanismos básicos de transferencia de la información genética

(duplicación, transcripción y traducción) y comprender la importancia de los
mismos en la supervivencia de las especies.
- Explicar mecanismos de regulación génica.
Introducción a la Biotecnología. Concepto de Biotecnología. Biotecnología Clásica y

Biotecnología Moderna. Agrobiotecnología. Biología molecular e Ingeniería Genética.
Degradación y síntesis de ácidos nucleicos “in vitro”. Enzimas de restricción. Reacción
en cadena de la polimerasa. Mutagénesis. Clonado. Expresión heteróloga de proteínas.
Transgénesis y Edición Genómica. Secuenciación. Marcadores moleculares.
Aplicaciones en la producción agropecuaria.

- Explicar los procesos mediante los cuales la biotecnología puede aportar a la
mejora de la productividad y a la protección del ambiente.
- Describir los principales procesos agrobiotecnológicos como la generación de
organismos transgénicos y la selección asistida por marcadores moleculares.
Nociones de Bioquímica Ecológica. Relaciones bioquímicas entre los integrantes de un

ecosistema. Relaciones planta-insecto y planta-patógeno. Producción de defensas en
las plantas y de antidefensas en los insectos. Producción de metabolitos secundarios y
de inhibidores de actividades enzimáticas. Respuestas bioquímicas de las plantas
frente a condiciones de estrés biótico y abiótico. Regulación hormonal.

- Describir los principales procesos metabólicos que participan en la respuesta de
las plantas al ataque de patógenos e insectos.
10
- Explicar los mecanismos de defensa que exponen las plantas para defenderse
de las adversidades bióticas y abióticas.
Nociones de Bioquímica Ambiental. Concepto de contaminación. Respuestas

bioquímicas de los organismos a la presencia de xenobióticos. Efecto de los metales
pesados sobre el metabolismo. Bioquímica de la producción de gases de efecto
invernadero. Mecanismos de mitigación.
- Describir los principales procesos que generan impacto ambiental desde el
punto de vista metabólico.
- Explicar cómo los sistemas de producción agropecuaria pueden afectar los
procesos biológicos en un ecosistema.
- Describir la base bioquímica de diferentes vías para reducir el impacto y/o
mitigar los efectos de la actividad agrícola e industrial.
Contenidos procedimentales
Capacidades que se busca desarrollar en los estudiantes:
i) destrezas en el trabajo de laboratorio y en el uso de instrumental básico de
bioquímica, ii) manejo de conceptos relacionados con el método científico, iii) manejo
del procesamiento de datos e interpretación de los mismos, iv) destrezas para la
elaboración de informes
Contenidos actitudinales
Actitudes que se intenta lograr en los estudiantes: i) respeto por el medio ambiente, ii)
responsabilidad en el uso de material científico, iii) respeto por las normas (incluidas
las de seguridad), iv) predisposición al trabajo en equipo, v) responsabilidad en la
preparación previa de las clases y el seguimiento de la asignatura.
6. METODOLOGIA DIDACTICA
La asignatura Bioquímica Agrícola, se compone de dos encuentros semanales de

carácter obligatorio. De esos dos encuentros teórico-prácticos, el primero tiene una
predominancia teórica y el segundo una práctica, pudiendo incluir un trabajo
experimental de laboratorio e involucra una evaluación con temas específicos de la
semana en curso (ver esquema general del curso al final de este ítem).
Carga horaria total: 64 horas

Teóricos: 32 horas (50%)
Prácticos: 26 horas (40%)
Evaluaciones: 6 horas (10%)
11
DINÁMICA DE LAS ACTIVIDADES
Las clases teóricas de introducción a los temas se impartirán en el segundo encuentro

semanal (salvo en la primera semana en donde se darán dos clases teóricas). Esto
permite que el alumno tenga el suficiente tiempo para estudiar los temas y
prepararse para los trabajos prácticos, donde se los evaluará en forma continua a los
efectos de constituir la nota de concepto.
CLASE TEÓRICA (dos horas de duración)

En estas clases se desarrollarán las siguientes actividades docentes:
a) Se impartirán utilizando medios audiovisuales, los conceptos básicos que le

permitirán al alumno introducirse en la temática correspondiente.
b) Se explicarán, si correspondiere, los fundamentos del trabajo práctico de laboratorio
de la clase siguiente.
Actividad del alumno (responsabilidad del alumno)

El alumno, ya introducido en los temas de la semana, deberá, para la siguiente clase:
a) Responder los cuestionarios correspondientes de la Guía de Estudios. Para ello

cuenta con sus propios apuntes tomados en el primer encuentro, los esquemas de la
Guía, la bibliografía indicada disponible en la Biblioteca Central de la FAUBA o en la
Cátedra de Bioquímica, o la información digital (texto, audio, imágenes y videos), a la
que se puede acceder a través del Centro de Educación a Distancia.
b) Preparar, a partir la Guía, el trabajo práctico de laboratorio, adquiriendo clara
conciencia de las mediciones a realizar, la metodología y los fundamentos del mismo.
CLASE PRÁCTICA (dos horas de duración)

Comprenderán las siguientes actividades:
a) Evaluación continua. Se interrogará eventualmente sobre los temas de la

semana en curso y sobre la práctica de laboratorio que se realizará ese día además de
la participación, predisposición y conducta en el laboratorio a los efectos de elaborar la
nota conceptual.
b) Interacción docente-alumno: Se promoverá a la reflexión de los conceptos más
destacados que hayan surgido de la resolución de los cuestionarios y se resolverán
problemas de integración sobre casos extraídos de la literatura científica, a partir de
los conocimientos adquiridos hasta el momento. Se discutirán situaciones
problemáticas de la práctica agropecuaria, ambiental y alimenticia que necesiten
fundamentos bioquímicos para ser resueltas.
d) Trabajo práctico. Se realizará un trabajo experimental utilizando el método científico
y se elaborará un informe siguiendo las pautas usuales en una publicación científica
(introducción, materiales y métodos, resultados y discusión).
12
Esquema general de organización del curso:
Sem. Práctico Teórico

1 Bioenergética (teórico) Enzimas
2 Enzimas Metabolismo - Glucolisis
3 Fermentación en silos y yogur Ciclo de Krebs – Cadena Respiratoria
4 Compuestos cianogenéticos Metabolismo de Lípidos
5 Lipasas en semillas Metabolismo de Aminoácidos
6 Ureasa en semillas de soja Fotosíntesis. Fase Lumínica.
7 Fotosíntesis. Reacción de Hill Fotosíntesis. Fase Oscura.
8 Primer parcial Síntesis de carbohidratos
9 Síntesis de almidón en hojas Bioquímica del ciclo del nitrógeno
10 Nitrato reductasa en hojas Bioquímica de la Germinación y de la
11 Actividad de enzimas amilolíticas Digestión
Bioquímica Ecológica
12 Producción de Metabolitos Bioquímica Ambiental
Secundarios
13 Actividad de enzimas antioxidantes Transferencia de la información genética
14 Extracción de ácidos nucleicos Biotecnología
15 Reacción en cadena de la polimerasa Segundo parcial
16 Entrega de informes Recuperatorio
7. FORMAS DE EVALUACIÓN
La aprobación de la asignatura Bioquímica Aplicada se logra por promoción directa o

rindiendo un examen final que debe aprobarse con nota mínima de 4 (cuatro).
El sistema de evaluación de la asignatura comprende:

1) Evaluaciones parciales (2): Se calificarán de 1 a 10, siendo 4 (cuatro) la nota de
aprobación. Para alcanzar la nota de aprobación el alumno deberá acreditar el
60 % de los conocimientos evaluados. Uno solo de estos exámenes parciales
podrá ser recuperado a los efectos de alcanzar la nota de aprobación.
2) Evaluación conceptual al finalizar el curso: El docente responsable, a partir del
desempeño de los alumnos durante los trabajos prácticos y los informes
solicitados, asignará una nota de 0 a 10 puntos. La nota de aprobación deberá
ser superior a 4 (cuatro) no siendo posible su recuperación.
3) Examen final: Para los alumnos que regularizaron la asignatura y no alcanzaron
la promoción, en las fechas de exámenes finales fijadas para la asignatura.
13
CONDICIÓN DEL ALUMNO AL FINALIZAR LA CURSADA
Los alumnos alcanzarán la condición regular en el caso de:

a) Haber cumplido con al menos el 75 % de la asistencia a las clases
b) Haber aprobado todos los informes de laboratorio.
c) Haber obtenido nota de concepto igual o superior a 4 (cuatro).
d) Haber obtenido nota igual o superior a 4 (cuatro) en las evaluaciones parciales.
Los alumnos alcanzarán la promoción sin examen final en caso de:

b) Haber aprobado todos los informes de laboratorio.
c) Haber obtenido nota de concepto igual o superior a 7 (siete).
d) Haber obtenido nota igual o superior a 7 (siete) en las evaluaciones parciales.
No será posible la recuperación de alguna de las evaluaciones parciales para alcanzar la

promoción. El recuperatorio se da como posibilidad solo para alcanzar la regularidad.
Los alumnos que no hayan podido alcanzar la regularidad, quedan en asistencia

cumplida en caso de:
b) No haber alcanzado una nota igual o superior a 4 (cuatro) en las evaluaciones
parciales, habiendo aprobado los informes de laboratorio y habiendo obtenido nota de
concepto igual o superior a 4 (cuatro).
Los alumnos que no cumplan con los requisitos para alcanzar la regularidad ni la
asistencia cumplida quedarán en condición de libre.
Examen libre
Para lograr la aprobación de la asignatura como alumno libre se deberá avisar esta
intención a la Cátedra de Bioquímica con una semana de anticipación. La inscripción
para el examen se realiza con el procedimiento habitual por Internet. Los alumnos que
rindan en esta condición, previo al examen final fijado en la fecha correspondiente,
deberán aprobar una evaluación escrita y una evaluación práctica, evaluaciones que
se realizarán con un día de anticipación a la fecha del final. Aprobadas estas
evaluaciones el alumno estará en condiciones de rendir el examen final. En el caso de
que el alumno haya aprobado las evaluaciones previas al final pero que no haya
aprobado este examen final, la próxima vez que se presente a rendir en condición de
alumno libre, deberá nuevamente rendir las evaluaciones previas y aprobarlas para
poder rendir el examen final.
14
8. BIBLIOGRAFÍA
Obligatoria
Guía de Trabajos Prácticos de Bioquímica Aplicada. CIFA.
Azcón-Bieto, J., Talón, M. Fundamentos de Fisiología Vegetal, 2da Ed. Editorial
McGraw-Hill. 688 pgs. 2008. Capítulos 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 17 y 30.
Stryer, L., Berg, J.M., Tymoczko, J.L. Bioquímica. 7ma edición. Ed. Reverté, Barcelona.
1232 pgs. 2013. Capítulos 1, 8, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 28, 29 y 30.
Complementaria
En español:
Bañó Aracil C., Pamblanco Rodríguez M., Peretó Magraner J., Sendra Pérez R.
Fundamentos de Bioquímica. 2da edición. Ed. PUV, Universidad Politécnica de
Valencia, España. 373 pgs. 2007.
Campbell, M., Farell, S.O. Bioquímica. Editorial Cengage Learning. 840 pgs. 2009.
Lehninger, A., D. Nelson y M. Cox. Principios de Bioquímica. 6ta edición. Ed. Omega,
Barcelona. 1282 pgs. 2014.
Monza, J. El Metabolismo del Nitrógeno en las Plantas. Ed. Almuzara. 176 pgs. 2004.
Trinchero, G. Bioenergética. Introducción al estudio de la Bioquímica. 1ra edición.
Editorial Facultad de Agronomía . UBA. 130 págs. 2004.
Trinchero, G. y Pintos, L. Introducción al Metabolismo del Animal Poligástrico. 1ra
edición. Editorial Facultad de Agronomía . UBA. 21 págs. 2003.
En ingles:
Appling, D.R., Anthony-Cahill, S.J., Mathews, C.K. Biochemistry. Concepts and
Connections.Pearson Education. 2016.
Arimura, G-I., Maffei, M. Plant specialized metabolism, genomics, biochemistry, and
biological functions. CRC Press. 2017.
Buchanan, B., W. Gruissem, R. Jones. Biochemistry & Molecular Biology of Plants. 2nd
Edition. American Society of Plant Physiologists. 1283 pgs. 2015.
Garrett, R. H., Grisham, C. M., Biochemistry. Cengage Learning, Brooks Cole. 2017.
González-Andrés, F., James, E. (eds.). Biological Nitrogen Fixation and Beneficial Plant-
Microbe Interaction. Springer International Publishing. 2016.
Krauss, G-D., Nies, D.H., Ecological Biochemistry. Environmental and Interspecies
Interactions. 2015 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Boschstr. 12, 69469
Weinheim, Germany. 2014.
Stryer, L., Berg, J.M., Tymoczko, J.L. Biochemistry: A short course. 3rd edition.
Macmillan / W. H. Freeman eds. 900 pgs. 2015.
15
Centro de Educación a distancia
Ingreso a la plataforma del Material de Estudio de Bioquímica Aplicada
1.- Entrar a http://cedserver.agro.uba.ar

2.- Ingresar en “Material de estudio para cursos de grado”.
3.- Seleccionar Agronomía (cartelera unificada con Ciencias Ambientales)
4.- Ingresar a “Bioquímica Aplicada”
(http://https://ced.agro.uba.ar/moodle/course/view.php?id=285&section=1).
5.- Si es la primera vez que ingresa, hacer clik sobre “Solicitud de alta”.
6.- Completar el formulario. Una vez llenado, el sistema le enviará un correo electrónico
para verificar que su dirección sea correcta.
IMPORTANTE: El nombre de usuario y contraseña ingresados será solicitado cada vez

que desee entrar a la plataforma.
7.- Abrir el correo y confirmar su registro.

8.- El sistema le solicitará una contraseña de acceso al curso, la cual fue enviada a su
casilla de mail. Ésta contraseña es específica para cada comisión y será solicitada por
única vez.
9.- A partir de ese momento podrá ingresar con su nombre de usuario y contraseña.
10.- Una vez realizado lo anterior, se habrá ingresado a la cartelera de la Cátedra de
Bioquímica donde se encontrará la información de la cursada, las presentaciones
animadas de las clases en formato PowerPoint, las presentaciones animadas del los
prácticos de laboratorio en formato PowerPoint, las notas y otros avisos.
Ante cualquier inconveniente en el acceso, envíe un mail a cedist@agro.uba.ar.
RECOMENDACIONES MÍNIMAS PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO

❖ Antes de comenzar el Trabajo Práctico, verificar que todo el material de vidrio esté
perfectamente limpio y sano. Al finalizar el trabajo práctico, limpiar el material de vidrio con
detergente y escobilla, enjuagando varias veces con agua corriente y dos veces con agua
destilada.
❖ No pipetear con la boca, hacerlo con pera de goma o dispositivo similar, según
instrucciones.
❖ Rotular siempre los tubos y frascos adecuadamente.
❖ Prestar atención a mecheros encendidos. Cuidar que no se apaguen y que no emane gas al
ambiente.
❖ Los solventes volátiles, drogas corrosivas o tóxicas deben permanecer y usarse bajo
campana. Cerrar cada frasco luego de utilizarlo.
❖ Mantener la mesada libre de elementos personales que no estén relacionados con la
práctica.
❖ NO FUMAR, COMER NI BEBER EN EL LABORATORIO
16
MODELO DE INFORME DE TRABAJO PRÁCTICO EXPERIMENTAL
NOTA IMPORTANTE: El siguiente esquema sigue los lineamientos generales que se

deben utilizar para enviar un trabajo experimental para su publicación en una revista
científica.
Se recomienda al alumno no copiar textualmente los ejemplos de redacción
indicados en letra cursiva, sino más bien adoptarlos como orientadores.
I- Introducción.
Base Teórica: Conceptos que ubican la práctica dentro del tema correspondiente.
Objetivo: El objetivo de este TP fue..., o…..en este TP se intenta mostrar.....
II- Materiales y Métodos

Se indican los reactivos y material biológico empleado, el equipamiento utilizado
y las técnicas utilizadas, formulando las reacciones realizadas dando importancia
al fundamento de cada paso de la práctica.
III- Resultados y Discusión

- Elaboración y organización de los resultados: Las reacciones realizadas
arrojaron los siguientes resultados. Escribir las reacciones realizadas y discutir
los resultados.
- Interpretación de los resultados: Los resultados obtenidos muestran…
IV- Conclusiones
Deberán responder al objetivo planteado.
17
18
CUESTIONARIOS
Bioenergética.
1) ¿Qué principio termodinámico permite explicar la transformación de energía
mecánica en energía calórica? ¿Cómo se expresa matemáticamente ese principio
cuando se produce un intercambio entre un sistema y su entorno? ¿Con qué valores y
en qué unidades se expresa la equivalencia de las formas de energía mencionadas?
2) Indique el significado de sistema "abierto", "cerrado" y "aislado". ¿En qué clase de

sistema ubicaría a los seres vivos (plantas o animales)? Justifique su respuesta.
3) ¿Cuál es el origen o de qué depende la energía química de una sustancia? ¿Cómo se

la puede medir? Relacione este concepto con el contenido calórico de un alimento.
Defina variación de entalpía y relaciónelo con el concepto de exotermicidad o
endotermicidad de una reacción química.
4) Defina el concepto de biomasa. Ejemplifique la utilización de energía a partir de

biomasa.
5) Enuncie el segundo principio de la termodinámica. Explique el significado de

"entropía", e indique cómo influye este principio y el primer principio de la
termodinámica en la espontaneidad de una reacción química. Relacione este concepto
con el de energía libre de una reacción. Escriba la expresión matemática hallada por
Gibbs para medirla.
6) Defina variación de energía libre estándar y relacione este concepto con la

constante de equilibrio de una reacción bioquímica. Explique la diferencia entre un
proceso endergónico y otro exergónico.
7) ¿Cuál es el origen de la energía química que porta el ATP? ¿Con qué reacción se
mide su capacidad energética? ¿Cómo se transfiere su energía a otra molécula
orgánica? (Potencial de transferencia del grupo fosfato). En relación a esto último dé
un ejemplo de reacciones acopladas y explique qué función biológica tienen éstas en
el transcurso de una vía metabólica.
8) ¿Cuál es el destino (o qué utilización general tiene) el ATP que sintetizan los seres
vivos?
9) Discuta la relación entre los conceptos de organización, información y entropía.

Interprete el concepto de sistema antientrópico. Aplíquelo a los seres vivos.
10) ¿Cuál es la fuente de energía que mantiene el equilibrio de autótrofos y

heterótrofos en la biosfera? ¿Por cuánto tiempo puede asegurarse ese equilibrio?
Explique el concepto de muerte térmica del universo.
11) Los ecologistas, defensores de la salud del planeta, promueven el reciclaje de todos
los desperdicios de la actividad humana a fin de mantener en equilibrio el ecosistema.
La aplicación de estos principios a la agricultura y ganadería se promocionan como
“sistemas auto-sustentables”. Discuta, teniendo en cuenta los principios de la
termodinámica, si el reciclaje de desperdicios puede sostenerse hasta alcanzar un
equilibrio absoluto e indefinido en el tiempo.
19
Enzimas.
1) Defina por su naturaleza química y función biológica el término “enzima” e indique:
a) Qué características generales son comunes a las enzimas y a los catalizadores no
biológicos y abióticos;
b) qué propiedades particulares caracterizan a las enzimas.
2) ¿Qué es el sitio activo de una enzima?
3) Una reacción catalizada biológicamente puede suceder con variación positiva o

negativa de la energía libre. Indique:
a) ¿En qué caso esa reacción será espontánea, y qué fenómeno biológico debe
acoplarse en caso que no lo sea?
b) ¿Qué es energía de activación (Ea) y cómo influye en la reacción descripta (A→P)?
c) ¿Qué efecto produce el agregado de una enzima sobre el valor de la energía de
activación de una reacción? Fundamente.
4) Indique las características principales de la clasificación decimal de enzimas. Indique

los seis grupos en que las enzimas se clasifican por la reacción que catalizan.
5) Explique qué son los cofactores de las enzimas. Clasifíquelos y ejemplifique.
6) Grafique la variación de la actividad enzimática en función de la concentración de

enzima, el pH y la temperatura.
7) Dada la reacción: E + S  ES → P + E
a) Grafique la variación de la velocidad de reacción (velocidades iniciales) en función
de la concentración de sustrato. Explique el comportamiento diferencial observado
con altas y bajas [S].
b) ¿Qué es velocidad máxima (Vmáx) o límite y qué es la constante de Michaelis (Km)?
c) Escriba la ecuación de Michaelis-Menten e indique en qué postulados y supuestos se
fundamenta.
d) Explique qué relación se verifica entre la KM y la afinidad aparente de una enzima
por el sustrato.
e) Grafique 1/V = (1/[S]) (Lineweaver-Burk) señalando los parámetros cinéticos
característicos. Indique la utilidad de esta representación respecto de la hiperbólica o
de Michaelis-Menten.
8) ¿Cómo actúan los inhibidores enzimáticos? Grafique {V = f[S] o 1/V = f(1/[S])} para
una situación de inhibición competitiva y no competitiva. ¿Cómo interactúan S, E e I?
En cada caso considere las gráficas con inhibidor y sin inhibidor. Fundamente las
variaciones de Vmáx y/o KM.
9) ¿Qué son las enzimas alostéricas? Ejemplifique.
10) Grafique V = f([S]) para un sistema catalizado por una enzima alostérica. Indique en
la figura el efecto que se produce al agregar: a) un efector positivo; b) un efector
negativo. Explique.
20
11) ¿Cuáles son las características particulares de las enzimas alostéricas que explican
la cinética sigmoidea y les permiten ser los puntos claves en la regulación de una vía
metabólica?
12) ¿Qué son las isoenzimas? ¿Qué función cumplen?
Introducción al metabolismo - Glucólisis.
1) ¿Qué entiende por vía metabólica? Distinga las características de vías anabólicas y
catabólicas.
2) Realice un esquema que muestre la convergencia de las vías catabólicas e indique la

ventaja de esta estrategia.
3) Explique en qué condiciones celulares están activadas las vías anabólicas. Indique
qué ocurre con las catabólicas en esas condiciones. Justifique sus respuestas.
4) Indique los destinos de la energía obtenida de la degradación metabólica de

nutrientes en la célula de un organismo heterótrofo. Compárelos con lo que ocurre en
una célula fotosintética.
5) En una dada secuencia de reacciones A→ B→ C→ D→ E→ F, catalizadas por las

enzimas E1, E2, E3, E4 y E5 respectivamente, ¿de qué depende la velocidad de formación
del producto F? Justifique.
6) Sea la conversión C→D catalizada por la E3, la etapa limitante. Como se modificará la
velocidad de formación del producto final F si:
a) la cantidad de enzima E3 presente en la reacción se duplicase;
b) si la enzima E3 fuera activada por un efector alostérico;
c) si la concentración de sustrato C aumenta.
7) Describa el mecanismo de regulación llamado retroinhibición (feed back).
8) Enumere las principales estructuras subcelulares de la célula eucarionte. Discuta

brevemente la importancia de la compartimentalización celular en relación a la
regulación metabólica.
9) ¿Qué es la glucólisis? ¿En qué organismos tiene lugar? ¿Cuáles son sus etapas
(descríbalas)? ¿Cuál es su ubicación celular?
10) Esquematice las reacciones que ocurren desde glucosa hasta piruvato.
11) ¿Escriba en detalle la etapa oxidativa de la glucólisis? ¿Qué es la fosforilación a

nivel de sustrato (FNS)?
12) ¿Cuáles son los pasos irreversibles de la glucólisis? ¿Cuáles son sus enzimas y cómo
están reguladas?
13) ¿Qué destinos metabólicos puede tener el producto final de la glucólisis y en qué
condiciones ocurren?
14) ¿Cuántos moles de ATP rinde la oxidación de un mol de glucosa que ha seguido la
21
vía glucolítica cuando ésta se oxida hasta piruvato y hasta CO 2?
15) Enuncie y explique el efecto Pasteur.
16) Escriba las ecuaciones correspondientes a las fermentaciones alcohólica y láctica a

partir de piruvato. Indique el objetivo biológico de la reacción de fermentación.
17) Describa las fases biológicas que sufre un material vegetal ensilado. ¿Qué tipo de
fermentación es la deseable? Justifique.
Ciclo de Krebs y Cadena Respiratoria.
1) ¿Cuál es el complejo multienzimático que cataliza la conversión de piruvato a acetil-

CoA? Escriba la reacción completa.
2) Señale en el esquema del ciclo de Krebs las reacciones de óxido-reducción,

descarboxilación y fosforilación a nivel de sustrato. ¿Cuál es la ubicación celular de
este ciclo?
3) Escriba las reacciones redox que ocurren en el ciclo, e indique los probables destinos
de las coenzimas reducidas.
4) Describa mediante ejemplos el carácter anfibólico del ciclo de los ácidos

tricarboxílicos.
5) Explique y ejemplifique el concepto de reacción anaplerótica.
6) Indique cuales son los sitios de regulación del ciclo de Krebs.
7) Indique la ubicación celular de la cadena respiratoria
8) En referencia a la cadena respiratoria, indique:

a) ¿Cómo se denominan los complejos que integran la cadena respiratoria?
b) ¿Cómo se disponen en la membrana mitocondrial?
c) ¿Cuál es su función?
d) ¿Cuáles son los dadores y aceptores de electrones para cada complejo?
e) ¿Cómo se genera el gradiente de protones?
9) Describa la constitución y funciones de las ATPasa de membrana e indique cuántas

moléculas de ATP son producidas en relación al movimiento de protones.
10) Compare los procesos de fosforilación oxidativa y de fosforilación a nivel de

sustrato.
11) Señale las diferencias entre agentes desacoplantes e inhibidores de la cadena

respiratoria.
12) Describa la reoxidación de las coenzimas NADH citosólicas. ¿Cuál es el rendimiento

energético de la utilización de una u otra lanzadera?
13) Calcule el rendimiento energético correspondiente a la oxidación completa de una

molécula de glucosa.
22
Metabolismo de lípidos.
1) ¿Cuáles son los lípidos de reserva? ¿Qué característica diferencial presentan los
ácidos grasos que los constituyen en el reino animal y en el vegetal y qué propiedades
físicas les confieren?
2) En la degradación de los lípidos de reserva contenidos en los liposomas:

a) ¿Qué productos se obtienen?
b) ¿Qué enzimas intervienen?
c) Indique a qué clase enzimática pertenecen.
d) ¿Es una reacción reversible?
3) ¿Cuáles pueden ser los destinos del glicerol resultante de la degradación de los
triglicéridos? Formule las reacciones involucradas.
4) ¿Cuál es la principal vía degradativa de los ácidos grasos?
5) ¿Cómo se activan los restos acilos para ser degradados?
6) ¿Cuál es la función de la carnitina en la degradación de los ácidos grasos en

animales?
7) ¿Qué tipo de reacciones involucra cada espiral completa de ß-oxidación?
8) ¿Qué enzima/s adicional/es permite/n la ß-oxidación de los ácidos grasos

insaturados y/o de número de carbonos impar?
9) ¿En qué ubicación subcelular se lleva a cabo la biosíntesis de ácidos grasos en

animales y en órganos vegetales fotosintéticos?
10) ¿Cuál es el metabolito precursor para la síntesis de ácidos grasos?
11) ¿Cuál es el papel del CO2 en la reacción de síntesis del malonil-CoA? ¿Qué vitamina
actúa como grupo prostético en dicha reacción?
12) Explique la diferencia de la síntesis de ácidos grasos de mamíferos, bacterias y

vegetales.
13) ¿Qué es la ACP y cuál es su grupo activo? ¿Qué papel cumple en la síntesis de
ácidos grasos?
14) ¿Qué reacciones involucra cada etapa de la adición de una unidad de 2 carbonos?
15) ¿Qué coenzima de oxidorreducción es necesaria para la síntesis de ácidos grasos

en animales y vegetales? Indique qué vía metabólica provee esta coenzima en:
a) Animales y células vegetales no fotosintéticas
b) Células fotosintéticas.
16) ¿Cuál es la fuente principal del glicerol-fosfato para la síntesis de triacilglicéridos?
23
17) ¿Cuál es el rol del ácido fosfatídico en la síntesis de triacilglicéridos y fosfolípidos?
Metabolismo de aminoácidos.
1) Mencione las reacciones generales del metabolismo de los -aminoácidos e indique:

a) ¿Cuál es la ecuación general de las transaminaciones? Mencione ejemplos de ezimas
intervinientes.
b) ¿Cuál es la principal desaminación oxidativa? Esquematice la reacción.
c) ¿Se trata de reacciones reversibles o irreversibles? Justifique.
2) Ejemplifique las reacciones de amidación y desamidación de aminoácidos, indicando

ecuaciones y su reversibilidad. ¿Cuál es el destino de las cadenas carbonadas que
formaban parte de estos aminoácidos?
3) Considerando el ciclo de la urea:

a) Indique su localización subcelular.
b) Escriba la reacción de síntesis del carbamil-fosfato (o fosfato de carbamilo) e indique
su importancia.
c) La síntesis de urea es un proceso endergónico. Explique el origen del ATP requerido
relacionándolo con el Ciclo de Krebs.
4) En animales:
a) ¿Cuál es la función del ciclo de la urea?
b) ¿En qué órgano ocurre?
c) Describa el transporte del nitrógeno desde otros tejidos para ingresar al ciclo.
5) ¿Cuáles son los aminoácidos cetogénicos y cuáles los glucogénicos? ¿Qué significan
cada uno de estos términos?
Bioquímica del ciclo del nitrógeno.
1) Esquematice el Ciclo del Nitrógeno mencionando cómo se denominan los procesos

bióticos y abióticos involucrados y los estados de oxidación del nitrógeno.
2) ¿Qué entiende por fijación del nitrógeno? Formule la ecuación correspondiente e

indique:
a) ¿A que se llama fijación biológica del N2?
c) ¿Qué tipos de fijación biológica conoce?
3) En la fijación simbiótica del N2:

a) ¿Qué requerimientos tiene el complejo de la nitrogenasa para poder fijar el N 2?
b) Explique el proceso de infección radicular por parte de las bacterias fijadoras y
mencione que cambios se producen en éstas y en el hospedante.
c) ¿Qué tipo de molécula es la leghemoglobina? ¿Cómo y dónde se sintetiza? ¿Cuál es
su función en la fijación del N 2?
d) ¿Cuál es el destino del NH3 en el bacteroide y en el hospedante? ¿Qué enzimas
intervienen?
24
4) ¿Cómo está constituido el complejo nitrogenasa? ¿Qué otros compuestos puede
reducir este complejo? ¿Cuál es la utilidad de estos sustratos alternativos del
complejo?
5) ¿Qué es la amonificación? ¿Qué compuestos químicos presentes en el suelo pueden

originar amoníaco?
6) ¿Cuál es el concepto de nitrificación? Formule la ecuación correspondiente e

indique:
a) ¿Qué tipo de proceso es teniendo en cuenta la variación de energía libre?
b) Mencione un género de bacterias que intervienen en cada etapa de este proceso.
7) ¿Cuál es la forma química nitrogenada del suelo que es absorbida en mayor

cantidad por las plantas?
8) ¿Qué es la reducción asimiladora de los nitratos? ¿Cuáles son las dos etapas
involucradas en el proceso? Formúlelas indicando enzimas, dadores de protones y
electrones en células fotosintéticas y no fotosintéticas.
9) Formule las vías de asimilación de amonio en las plantas (GS y GOGAT; GDH) y
responda:
a) ¿Cuál de las vías es más ventajosa en lo que respecta a la afinidad de la enzima por
el sustrato? Relacione este proceso con la eficiencia de la fotosíntesis
b) ¿Cuál es la función principal de la otra vía?
10) ¿Cuáles son los destinos de los aminoácidos en las plantas?
11) Formule la ecuación de degradación de la urea. ¿Cuál es la importancia de este

proceso para las plantas?
12) ¿Qué es la denitrificación?
Fotosíntesis: Fase lumínica.
1) Formule la ecuación fundamental de la fotosíntesis en los vegetales superiores e

indique:
a) ¿Qué tipo de reacción es desde el punto de vista químico y desde el punto de vista
energético?
b) ¿Cuáles podrían ser los posibles dadores y aceptores de hidrógeno en bacterias
anaeróbicas?
2) ¿En qué organela subcelular ocurre la fotosíntesis? Relacione la estructura de dicha

organela con la función que cumple.
3) ¿Cuántas etapas comprende la fotosíntesis en plantas superiores?
4) ¿Qué es un fotón? ¿Qué relación existe entre la energía de un fotón y la longitud de

onda?
5) Mencione los pigmentos fotosintéticos. Vincule su estructura con la solubilidad.
25
6) ¿Cuál es la estructura química básica de las clorofilas? ¿Qué característica
fotoquímica deriva de las diferencias de estructura entre la clorofila “a” y la “b”?
7) ¿Cuál es la estructura química básica de los carotenoides? ¿Cuál es la zona de su

máxima absorción en el espectro lumínico y, por consiguiente, de qué color son?
8) ¿Cuál es la función de los pigmentos fotosintéticos? ¿En qué consiste lo que se

conoce como efecto protector de los carotenos sobre clorofilas referido a la captación
de energía lumínica?
9) ¿Cómo están constituidos el Fotosistema I (PS I) y el Fotosistema II (PS II)? ¿Qué

funciones cumplirían el P 700 y el P 680 respectivamente?
10) ¿Cómo es el flujo de electrones respecto de los potenciales de oxidorreducción en

todo el sistema? ¿A través de qué proceso se reduce NADP+?
11) ¿Qué función cumple el Fotosistema II (PS II) en el proceso fotoquímico? ¿En qué
proceso, de la etapa lumínica de la fotosíntesis, el Fotosistema II no interviene y por
qué?
12) ¿Qué es la fotofosforilación?
Fotosíntesis: Fase bioquímica (“oscura”).
1) En el Ciclo de Calvin, ¿cuál es el aceptor primario del CO 2? ¿Qué enzima cataliza la

reacción?
2) ¿En cuáles etapas del Ciclo de Calvin se utiliza el ATP y el NADPH 2 producidos en la
etapa lumínica de la fotosíntesis?
3) Las plantas de maíz, sorgo, caña de azúcar, etc., presentan un mecanismo especial
de fijación de CO2:
a) ¿Sobre qué molécula se fija el CO2 atmosférico? (relaciónelo con la anatomía foliar).
¿Cuál es el producto primario de dicha fijación?
b) ¿Cómo continúa el proceso de fijación del CO2?
4) ¿Qué factores disminuyen la actividad carboxilasa y favorecien la actividad

oxigenasa de la rubisco?
5) ¿Qué es la fotorrespiración? Indique:

a) ¿Qué organelas están comprometidas en este fenómeno?
b) ¿Qué actividad tiene la enzima ribulosa 1,5-bisfosfato carboxilasa oxigenasa
(RuBisCO) o carboxidismutasa en la primera reacción de la fotorrespiración?
c) ¿Qué consecuencias tiene este fenómeno para el organismo?
d) ¿Se produce de igual manera en las plantas C4? Fundamente.
6) Describa el metabolismo de las plantas CAM (Metabolismo Acido de las

Crasuláceas).
Síntesis de carbohidratos.
26
1) Indique las reacciones de síntesis de sacarosa a partir de triosa fosfato.
2) Escriba las reacciones de síntesis de almidón en cloroplastos a partir de fructosa-6-

fosfato.
3) ¿Cuál es el transferidor de restos glucosilos común para la síntesis de almidón, de

glucógeno y de celulosa? Indique estructura y características. ¿Cuál es el transferidor
de restos glucosilos más eficiente para la síntesis de almidón?
4) ¿Cómo está regulada la síntesis de sacarosa y almidón en una célula

fotosintéticamente activa? Explique el rol del transportador Triosa fosfato/Pi del
cloroplasto.
5) ¿Cuáles son las principales características de la síntesis de celulosa?
Transferencia de la información genética.
1) Indique brevemente las características de estructura y composición química del

ácido desoxirribonucléico (ADN).
2) En células eucarióticas, ¿qué organelas subcelulares poseen ADN?
3) ¿Qué significa el término duplicación (también replicación) del ADN? Indique el por
qué del nombre y en qué momento de la vida celular ocurre.
4) ¿Qué significa “herencia semiconservativa” del ADN?
5) Indique cuáles son y qué función cumplen las ADN polimerasas descriptas para la
bacteria E. coli.
6) Indique los requerimientos de la ADN polimerasa III. Describa su mecanismo de

acción.
7) ¿Qué es la horquilla de replicación?
8) ¿A qué se llama hebra conductora y hebra rezagada (o retardada)? ¿Cuál es la

orientación de cada una?
9) ¿Qué son los fragmentos de Okazaki? ¿Cómo se producen?
10) Indique la función de la ADN ligasa.
11) Indique qué son los replicones.
12) Indique cuales son los ARN que se conocen y describa brevemente su estructura,
función y ubicación.
13) ¿Cuáles son las diferencias estructurales y químicas entre el ADN y los diferentes
ARN mencionados en la pregunta anterior?
14) ¿Cómo están constituidos los ribosomas?

27
15) Defina Gen. Esquematice y señale las partes constitutivas del mismo en referencia
a la síntesis de ARN.
16) ¿Qué es y qué función cumple la ARN polimerasa-ADN dependiente? Indique

cuáles son sus requerimientos.
17) Esquematice el proceso de Transcripción en E. coli.
18) ¿Cuántas son las ARN polimerasa-ADN dependiente presentes en células

eucarióticas? ¿Qué función cumple cada una?
19) ¿Qué se entiende por Código Genético? Indique las características principales, la
importancia y cómo es utilizado en la traducción del mensaje genético.
20) ¿Cuál es el mecanismo de activación de aminoácidos para la síntesis de proteínas?

Indique cuál es el nombre de la enzima que cataliza la reacción y el nombre general del
producto.
21) ¿Qué importancia tiene, en el proceso descripto anteriormente, el anticodón de los

ARN de transferencia?
22) Describa el proceso de traducción.
23) Explique el proceso de regulación genética e indique a qué se denomina:

a) Represor.
b) Activador.
c) Inductor.
24) Explique que es una mutación genética. Indique como afecta a la síntesis proteica y
a su heredabilidad.
25) ¿Cuáles son las polimerasas que catalizan la síntesis del material genético en los
retrovirus? Biotecnología- Fundamentos bioquímicos
1) ¿Cuál es la definición de biotecnología?
2) ¿Qué se entiende por biotecnología clásica y biotecnología moderna?
3) ¿Qué es la biología molecular?
4) ¿Qué es le ingeniería genética?
5) ¿Qué son las enzimas de restricción y cuál es su importancia biotecnológica?
6) ¿En qué consiste la técnica del ADN recombinante?
7) ¿En qué consiste la técnica de PCR?
8) ¿Qué son los plásmidos y cuáles son sus utilidades en la biotecnología?
9) ¿Cuáles son los pasos a seguir para obtener una planta transgénica?
10) ¿Qué se entiende por NBTs?

28
11) ¿En qué consiste la metodología de edición génica por nucleasas sitio dirigidas?
12) ¿Qué son los marcadores moleculares y cuál es su utilidad para el mejoramiento
genético de especies vegetales?
Degradación de polímeros. Germinación y digestión.
1) ¿Cuáles pueden ser las sustancias de reserva de una semilla?
2) ¿Qué etapas involucra el proceso de germinación?
3) ¿Qué factores intrínsecos y extrínsecos influyen en la germinación?
4) ¿Qué es el cociente respiratorio? ¿Cuál es su valor para un monosacárido, un lípido

y una proteína? ¿Qué implicancias biológicas tiene?
5) Nombre y esquematice las dos rutas metabólicas de utilización del almidón durante
la germinación.
6) En la movilización de reservas en cereales:

a) ¿Qué enzimas preexisten en la semilla madura?
b) ¿Cuál debe ser sintetizada durante la germinación? ¿Dónde se sintetiza? ¿Qué
fitohormona regula su síntesis y cuál es su mecanismo de acción?
c) ¿Cuáles son los azúcares de reserva utilizados inicialmente?
d) Formule un ejemplo indicando sustrato, enzimas y productos.
e) ¿Qué importancia tienen las fosforilasas en las primeras etapas de la germinación?
7) ¿Cuáles son los posibles destinos metabólicos de los productos de degradación de

los polisacáridos de reserva?
8) En la etapa final de la germinación:

a) ¿Cuál es la fuente principal de fósforo utilizada?
b) ¿Cuál es el destino principal del fósforo?
9) Respecto de la utilización de reservas proteicas:

a) ¿Qué enzimas catalizan la hidrólisis de proteínas y/o polipéptidos?
b) Nombre las características diferenciales de estas enzimas con respecto a su modo
de acción.
12) Respecto a la utilización de reservas lipídicas:

a) ¿Qué organelas subcelulares están implicadas en su utilización?
b) Indique las etapas metabólicas que ocurren en cada una.
c) ¿Qué enzimas se inducen durante este proceso?
10) ¿Qué causas físicas, fisiológicas y bioquímicas impiden la germinación de una

semilla madura?
11) Respecto de la vía de las pentosas fosfato:

a) ¿Cuál es la localización celular de esta vía?
b) ¿Cuáles son las reacciones que implican la conversión de glucosa-6-fosfato a
pentosa fosfato?
29
c) ¿Cómo se denominan las enzimas que catalizan la reacción y a qué clase
pertenecen?
d) ¿Cuál es la coenzima utilizada?
12) ¿Cuál es el destino metabólico de los productos de la primera etapa de la vía de las
pentosas fosfato? Considere tanto el metabolito con el que esta etapa concluye como
la utilización posterior de las coenzimas reducidas.
13) ¿Cuáles son las enzimas y los cofactores que intervienen en la etapa no oxidativa
de la vía de las pentosas fosfato?
14) ¿Cuáles son las funciones primordiales que cumple la vía de las pentosas fosfato en
la germinación?
15) Con respecto a la digestión en animales: ¿Cuáles son las principales

fermentaciones ruminales?
16) Realice un cuadro en que se muestren las principales funciones o transformaciones

que producen bacterias, hongos, levaduras y protozoarios en el rumen.
17) Explique la influencia de la alimentación en la proporción de ácidos grasos volátiles

(AGV) producidos en el rumen.
18) Indique los diferentes destinos de los AGV formados en el rumen.
19) Indique con ejemplos cómo las reacciones de fermentación producidas por
distintos micro-organismos contribuyen a mantener el equilibrio redox en el rumen.
20) De ejemplos de reacciones productoras de energía durante los procesos de

fermentación ruminal y señale el destino de esa energía.
Bioquímica Ecológica.
1) Mencione las especies reactivas del oxígeno y sus características. ¿Qué rol cumplen
en la generación de estrés oxidativo?
2) ¿Qué tipo de situaciones desencadenan estrés oxidativo en la planta y cómo éste

afecta a las estructuras celulares? ¿En qué consiste la hipótesis redox?
3) ¿Por qué se dice que la respuesta de las plantas a los ROS es dosis dependiente?
4) Defina los términos resistencia y tolerancia.
5) ¿Cuáles son las señales sistémicas que median las respuestas en las plantas frente a
una situación de estrés?
6) Mencione cuales son las defensas antioxidante enzimáticas de las plantas y que
reacciones catalizan.
7) ¿Cuál es la función del glutatión y del ácido ascórbico en el sistema de defensa de

una planta?
30
8) ¿Cuál es el rol del óxido nítrico en una situación de estrés? ¿Cuáles son sus
potenciales fuentes?
9) ¿Qué es el metabolismo secundario y cómo se relaciona con el metabolismo

primario?
10) ¿Cuáles son los precursores más importantes en la síntesis de metabolitos

secundarios vegetales?
11) De acuerdo a su clasificación según las vías de síntesis, ¿cuáles son los grandes
cinco grupos de metabolitos secundarios? Ejemplifique.
12) Mencione ejemplos de metabolitos secundarios implicados en: defensa a

herbivoría, nodulación, germinación y respuesta a estrés oxidativo.
13) ¿Cuáles son las barreras naturales que presentan las plantas para enfrentar
situaciones de estrés?
14) Una vez detectada la presencia del patógeno la planta activa mecanismos de
defensa: señale cuales son.
15) A qué se denomina “sistema inmune” de las plantas. Describa los principales
eventos desencadenados en la interacción planta-patógeno
16) ¿Cómo se da el reconocimiento de los patógenos en plantas?
17) ¿Cómo se desencadena la resistencia basal y la inducida? ¿Qué las diferencia?
18) ¿Qué es la reacción hipersensible, como se manifiesta y cuál es su finalidad?
19) ¿Qué es la respuesta sistémica en la planta?
20) ¿Qué es SAR y qué hormona está implicada en este mecanismo?
21) ¿Qué es ISR y qué hormonas participan de esta respuesta?
22) Describa brevemente los senderos de señalización que comparten la resistencia

primaria y secundaria.
23) ¿Qué son las proteínas relacionadas con la patogénesis?
24) ¿Cuáles son los mecanismos de resistencia de las plantas al daño de los insectos?
25) Mencione las teorías de defensa conocidas. ¿Cuál es la más aceptada actualmente?
Explique.
26) Explique la inducción de defensas en plantas ante el ataque de insectos

masticadores. ¿Qué diferencias se observan en el ataque de otros insectos y bacterias?
Bioquímica Ambiental.
1) Defina compuesto xenobiótico. Ejemplifique.
31
2) Mencione algunos ejemplos de transformación de compuestos xenobióticos.
3) ¿Cuáles son los compuestos intermediarios de la degradación del glifosato? ¿Qué

microorganismos están involucrados en su degradación?
32
SITUACIONES PROBLEMÁTICAS INTEGRADORAS
1) En semillas de cebada germinadas y sin germinar (maduras y viables) se realizó la

extracción de la enzima beta-amilasa para estudiar sus propiedades cinéticas. Se
obtuvo el siguiente gráfico de inversas:
1/v
4
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
-150 -100 -50 0 50 100 150
1/[almidón]
semilla germinada semilla sin germinar
a) ¿Qué parámetros cinéticos son diferentes y cuáles no?

b) Calcule aproximadamente el valor de Km para la enzima extraída de semillas
germinadas.
c) Explique la función de la beta-amilasa durante la germinación y mencione las
diferencias con la alfa-amilasa.
d) En base a los datos del gráfico, ¿cómo sería el mecanismo de regulación de la
actividad de esta enzima?
2) A partir de nódulos de plantas de soja inoculadas con bacterias del género

Rhizobium, se purificaron dos enzimas citosólicas: piruvato quinasa (PK) y
fosfoenolpiruvato carboxilasa (PEPC). Al analizar su cinética se obtuvieron los
siguientes gráficos en los que además se muestra el efecto de dos concentraciones de
malato.
a) Explique la función de cada una de estas enzimas en el metabolismo y formule las
reacciones que catalizan.
b) Considerando la forma de las curvas,
indique qué tipo de enzimas son y cómo
podría ser considerado al malato con respecto
a ellas.
c) El malato es una de las principales fuentes
carbonadas para la asimilación del nitrógeno
luego de la fijación. Partiendo de nitrógeno
atmosférico y malato explique con un ejemplo
cómo se llega a un aminoácido.
d) La PEPC cumple una función primordial en
la fotosíntesis de ciertas especies. Explíquela.
3) La actividad de la enzima enolasa (2-fosfo-

D-glicerato hidro-liasa) es rápidamente
33
activada por anoxia (falta de oxígeno) en especies tolerantes a la inundación como
Echinochloa phyllopogon..En cambio, en especies intolerantes a la anaerobiosis,
inclusive del mismo género, como Echinochloa crus-pavonis el aumento de la actividad
de la enolasa sólo se produce después de 15 horas de provocada la anoxia.
a) En base a esta información grafique en un eje de coordenadas la actividad de

enolasa en función del tiempo en plántulas de E. phyllopogon y en plántulas de E.
crus-pavonis durante las primeras 15 horas de exposición a condiciones de
anaerobiosis.
b) Fueron analizadas las propiedades catalíticas de enolasas purificadas provenientes
de ambas especies. Los resultados se representaron según Lineweaver-Burk:
2-PGA= 2-fosfoglicerato
A: E. phyllopogon
B: E. crus-pavonis
¿Qué información se puede obtener del gráfico mostrado?

c) Grafique en forma aproximada cómo sería la representación según Michaelis-
Menten (velocidad en función de concentración del sustrato) para cada especie.
d) Explique cómo realizaría el experimento para llegar a los gráficos mostrados en b.
¿Qué mediría?
e) ¿Con qué se relacionaría la mayor tolerancia a la anaerobiosis de E.phyllopogon?
4) La ACC-oxidasa cataliza el último paso de la ruta de síntesis del etileno, una

importante hormona vegetal, según la siguiente reacción:
ACC ⎯⎯⎯⎯⎯→ Etileno
(ácido aminociclopropano-1-carboxílico) ACC-oxidasa
Gráfico de Lineweaver-Burk para la ACC-oxidasa

utilizando ACC como sustrato
1/v 1.6
(µmol
etileno.mg de 1.2
proteina-1.h-1)-1
0.8
0.4
0
-3 -1 1 3 5 7
1/[S] (µM)-1 x 10-2
34
Utilizando extractos de frutos de papaya (Carica papaya) un grupo de investigación
determinó en 1998 la afinidad de la enzima ACC-oxidasa por el sustrato publicando el
siguiente gráfico de dobles inversos (Lineweaver-Burk) para esta enzima.
a) Defina los parámetros cinéticos de una enzima según el modelo michaeliano y

determínelos para la enzima ACC-oxidasa.
b) Represente con aproximación el gráfico según Michaelis-Menten, considerando los
datos obtenidos en el punto 1.
c) El ditionito de sodio y el metabisulfito de sodio son poderosos agentes reductores
consumidores de oxígeno. Al incorporarlos en la mezcla de reacción inhibieron la
actividad de la enzima, según se observa en el siguiente cuadro.
Concentración del Tasa de producción de etileno

Inhibidor
inhibidor [mol. mg proteina-1 . h-1]
Sin inhibidor Con inhibidor
Ditionito de sodio 0.022 mM 5.45 0
Metabisulfito de sodio 0.021 mM 5.50 0
Clasifique la enzima según su clase y proponga un mecanismo de acción de estos

inhibidores.
d) El Co2+ desarrolla un tipo de inhibición no competitiva. Grafique sobre la representa-
ción de Lineweaver-Burk, cómo podría ser el gráfico en presencia del inhibidor, en
comparación con el gráfico sin inhibidor. Comente cómo serán los respectivos
parámetros cinéticos.
5) La penicilina es hidrolizada y con ello inactivada por la penicilinasa, una enzima

presente en algunas bacterias resistentes. En un ensayo se midió la cantidad de
penicilina hidrolizada por minuto, en una solución de 10 ml con 10 -9 g de penicilinasa
purificada, en función de la concentración de penicilina, obteniendose los siguientes
datos:
a) Represente 1/v en función de 1/[S] a
Masa hidrolizada partir de los datos de la tabla.
[PENICILINA]
(moles.min-1) b) Indique qué tipo de cinética tiene la
0,1 x 10-5 M 0,11 x 10-9 penicilinasa.
c) ¿Cuál es el valor de vmáx y KM?
0,3 x 10-5 M 0,25 x 10-9 d) ¿Qué valor tomará el KM si en
0,5 x 10-5 M 0,34 x 10-9 presencia de un inhibidor el nuevo
valor de 1/vmáx es de 2,5 x 109? ¿De
1 x 10-5 M 0,45 x 10-9
qué tipo de inhibición se trata?
-5
3 x 10 M 0,58 x 10-9
Justifique.
5 x 10-5 M 0,61 x 10-9
35
6) La sal glufosinato de amonio es un potente inhibidor de la glutamina sintetasa,
según se observa en el siguiente gráfico:
A: con glufosinato de amonio

B: sin glufosinato de amonio
a) ¿Qué clase de inhibición ejerce el glufosinato de amonio sobre la glutamina

sintetasa? Justifique en base a los parámetros observados en el gráfico.
b) Represente el gráfico anterior en la forma hiperbólica o de Michaelis-Menten.
c) Considere en el gráfico anterior Vi vs [S] únicamente la curva sin presencia de
inhibidor. Indique, graficando, cómo influiría en ella un aumento de cantidad de
enzima.
7) En 1992 se produjeron en nuestro país casos de intoxicación por adulteración de un

medicamento (propóleo) con etilenglicol. La base de la toxicidad de este compuesto es
que en el organismo se metaboliza a ácido oxálico, sustancia de alta toxicidad,
teniendo como intermediario al aldehído glicólico. En el metabolismo de los hidratos
de carbono, usted vio la siguiente reacción:
H H H
O H
H C C H C C O
H
H H H
Acetaldehído Etanol
Esta reacción es catalizada por la enzima alcohol deshidrogenasa y requiere coenzima

reducida. Esta enzima puede también catalizar la siguiente reacción:
H H H
O
H C C H C C H
H
OH OH OH
Aldehído glicólico Etilenglicol
Responda:
a) ¿Por qué razón altas concentraciones de etilenglicol en los tejidos pueden originar
toxicidad por oxálico?
b) El tratamiento aconsejado consiste en suministrar altas cantidades de etanol. ¿Qué
tipo de efecto produce el etanol sobre la metabolización del etilenglicol?
c) Grafique (en un mismo gráfico) la velocidad de reacción de la alcohol
deshidrogenasa en función de la concentración de etilenglicol, en presencia y en
ausencia de etanol.
d) Indique qué parámetros cinéticos son afectados en presencia de etanol y cuáles no.
e) Defina estos parámetros cinéticos.
36
8) En un experimento en que se utilizaron semillas de Echinochloa crusgalli (pata de
gallo o pasto de agua), una maleza común en cultivos de arroz, se pudo determinar
que en condiciones de anaerobiosis se producía un incremento en el contenido de
etanol en la plántula, según el siguiente gráfico:
Concentración de etanol
en plántula (µmol g-1)
ausencia de O2
presencia de O 2
0 1 2 3 4 5 6 7
Tiempo de imbibición (días)
Indique:
a) ¿Qué proceso bioquímico está ocurriendo, y cuál es su sentido biológico?
b) ¿Cuál es el sustrato inicial que se está degradando?
c) ¿Qué compuesto rico energético se puede sintetizar a expensas de ese sustrato
inicial? ¿Qué nombre recibe este tipo de reacciones y cuál es su definición?
d) Si desaparecieran las condiciones de anaerobiosis del suelo y la plántula quedara
expuesta a aerobiosis, ¿qué sucedería probablemente con el ritmo de degradación del
metabolito inicial?
e) ¿Cuál sería la etapa metabólica sensible a este cambio?
f) En condiciones de aerobiosis, ¿cuál podría ser el destino del etanol formado
anteriormente? Sugiera un posible mecanismo de metabolización del etanol
producido.
9) Para extender la vida postcosecha de los frutos en cámaras de almacenamiento

suele disminuirse la concentración de oxígeno disponible. Esta tecnología es llamada
“almacenaje en atmósferas controladas”, ya que la proporción de cada gas es
mantenida en su nivel original a través del tiempo, independientemente de la
temperatura o de otras modificaciones ambientales. Al medir la actividad respiratoria
(producción de CO2 por unidad de tiempo y peso fresco del fruto) la curva obtenida
muestra un punto de extinción o compensación (que corresponde a concentraciones
de 1-2% de O2) en que la producción de CO2 es mínima. Por debajo de dicha
concentración de O2, el CO2 producido aumenta nuevamente, alterándose el sabor de
los frutos (Figura 1).
37
FIGURA 1
10
CO2 h kg de peso fresco)

Actividad respiratoria (ml de
8
-1
4
-1
2 Punto de extinción o
compensación
0
0 5 10 15 20 25
Concentración de oxígeno (%)
a) ¿A qué se debe el aumento de producción de CO2 a concentraciones de O2 en

atmósfera inferior al punto de compensación?
b) ¿Qué tipo de alteración experimentará el sabor del fruto?
c) ¿Qué reacciones justifican la producción de CO 2 por debajo y por encima del punto
de compensación?
d) ¿Qué concentración de O2 elegiría para almacenar frutos en cámaras de atmósfera
controladas por períodos prolongados?
e) ¿Qué otra variable utilizaría para disminuir la tasa respiratoria en la cámara de
almacenaje? Justifique.
10) En 1998, un joven investigador examinó las respuestas de los brotes de espárrago
(tejido meristemático en activo crecimiento) en un amplio rango de presiones parciales
de oxígeno por debajo de la presión normal atmosférica. La respuesta a la presión de
oxígeno por parte de los tejidos fue medida en términos de:
i) actividad de la enzima piruvato quinasa (gráfico A);
ii) cambios en los niveles de adenilato o carga energética (CE) de la célula (gráfico B)
expresado como CE = ([ATP] + ½ [ADP]) / ([ATP] + [ADP] + [AMP]).
4
Actividad de enzima piruvato quinasa
0.9
3.5
Carga energética o nivel de adenilato
0.8
3
(µmol min-1 g-1)
2.5 0.7
2 A B
0.6 4
1.5 4 0.5
2 3
1
0.5 3 0.4
0
1 2 1
0.3
0 5 10 15 20 0 5 10 15 20
Presión de Oxígeno (kPa) Pre s ión de Oxíge no (k Pa)
La respuesta dividió ambos gráficos en 2 grandes zonas:

Zona crítica: aquélla que no logra sostener un metabolismo equilibrado (subzonas 1 y
2);
Zona homeostática: aquélla que mantiene un metabolismo activo y equilibrado
(subzonas 3 y 4).
38
Analizando los efectos de disminución del O 2 se observa que:
• Desde 20 a 5 kPa existe estabilidad en la actividad de la enzima piruvato
quinasa (subzona 4);
• Desde 5 hasta 2 kPa se produce una importante caída de la actividad de la
enzima (región de stress o subzona 3)
• Desde 2 hasta 1 kPa se verifica un aumento significativo de la actividad de la
enzima (subzona 2);
• Desde 1 hasta 0 kPa se observa una nueva caída brusca de la actividad (región
de muerte o subzona 1).
a) ¿Qué tipo de reacción cataliza la enzima piruvato quinasa? Escríbala, mencionando
sustratos, productos y cofactores. ¿En qué ruta metabólica ubica usted la actividad de
la enzima piruvato quinasa? ¿Qué localización subcelular posee?
b) Explique los fenómenos que tienen lugar en cada uno de los 4 sectores de la curva
de actividad de la enzima piruvato quinasa.
c) ¿Qué tipo de enzima es, desde un punto de vista metabólico, la enzima piruvato
quinasa? Explique su respuesta.
d) Relacione los niveles de actividad enzimática (Gráfico A) con la carga energética o
nivel de adenilato (Gráfico B). Explique.
11) La mayoría de los productos frutihortícolas contienen ácidos orgánicos en niveles

superiores a los de requerimiento inmediato para el metabolismo celular. El exceso es
generalmente almacenado en vacuola. Por ejemplo, los ácidos málico y cítrico se
encuentran presentes en concentraciones relativamente importantes en los frutos de
banana, presentándose un incremento en la acidez de la pulpa durante la maduración
del fruto.
a) Formule en forma completa las reacciones en que intervienen el L-malato y el
citrato como producto o sustrato en el ciclo del ácido cítrico, indicando además el tipo
de reacción de que se trata, las enzimas y su clasificación, y los cofactores actuantes en
dichos pasos metabólicos
b) El citrato es también precursor de la ruta biosintética de lípidos. Ubique dicha ruta
subcelularmente y justifique la imposibilidad de participación directa del acetil-CoA
mitocondrial en dicho proceso. ¿Qué función cumple la citrato liasa dependiente de
ATP en dicho proceso?
c) Un ingeniero agrónomo midió la actividad respiratoria y el contenido de almidón de
los frutos de banana durante los cinco primeros días de maduración. El profesional
constató que la pérdida de almidón es continua hasta prácticamente anularse al quinto
día de medición. La producción de azúcares solubles (sacarosa, glucosa, fructosa) se
incrementa hasta el cuarto día, para luego decrecer muy lentamente. La producción
respiratoria de CO2 se incrementa hasta alcanzar un máximo al tercer día, declinando
luego ligeramente aunque manteniendo niveles elevados según se grafica a
continuación:
39
20 ALMIDÓN 140
AZÚCARES
18
ALMIDÓN y AZÚCARES
CO2 120
16
(% de peso fresco)
CO2 (mg.kg-1.h-1)
14 100
12 80
10
8 60
6 40
4
20
2
0 0
0 1 2 3 4 5
TIEMPO DE MADURACIÓN (días)
Considerando los procesos enunciados anteriormente (en el párrafo inicial y en el

gráfico) y sabiendo que el contenido total de lípidos en pulpa no varía sustancialmente
durante la maduración de los frutos de banana:
c.1) Señale los posibles destinos de degradación del almidón;
c.2) Mencione los principales pasos regulatorios de las vías involucradas en dicha
degradación y las enzimas intervinientes;
c.3) Puntualice por qué la evolución de la actividad respiratoria y del contenido de
almidón de los frutos es prácticamente inversa;
c.4) Esquematice las etapas en las cuales se produce desprendimiento de CO 2,
identificando las enzimas y cofactores intervinientes.
12) El complejo piruvato deshidrogenasa (PDH), constituido por tres enzimas que
actúan en forma secuencial, cataliza una de las transformaciones del piruvato
proveniente de la glucólisis. En la década del ’70, un equipo de investigadores
describió parcialmente la regulación del complejo piruvato deshidrogenasa en
vegetales. A tal efecto, se aislaron mitocondrias a partir de botones florales de brócoli,
las que fueron incubadas en una solución apropiada midiéndose a diferentes tiempos
la actividad del complejo piruvato deshidrogenasa.
Simultáneamente, se tomaron alícuotas de la suspensión y se les adicionaron
diferentes concentraciones de ATP, acompañadas de oligomicina, un potente inhibidor
del complejo ATP sintasa. Los resultados, expresados como porcentaje de la actividad
original, se observan en la figura 1.
40
FIGURA 1
100
% de la actividad original
75
Control (sin ATP)
0,1 mM de ATP
50 0,5 mM de ATP
1,1 mM de ATP
2 mM de ATP
25
0
0 4 8 12 16
Tiempo (minutos)
En otro ensayo, las mitocondrias pre-incubadas fueron tratadas con ATP marcado
(AT32P) comprobándose la incorporación de 32P al complejo de la PDH, como se
observa en la figura 2.
FIGURA 2
5500
5000
Incorporación del P
marcado al complejo
en mitocondrias
4500 desnaturalizadas
CPM
Incorporación de P
4000 marcado al complejo
en mitocondrias no
desnaturalizadas
3500
3000
0 4 8 12 16
Tiempo (minutos)
a) ¿Cuál es la reacción catalizada por el complejo piruvato deshidrogenasa? Incluya

sustratos, productos y cofactores intervinientes. ¿Qué solución estimaría apropiada
para realizar este ensayo?
b) ¿Cuál piensa usted es la razón de la utilización de la oligomicina en la experiencia
cuyos resultados se grafican en la figura 1?
c) ¿Qué tipo de regulación indican los resultados contenidos en la figura 1? Manifieste
su importancia en función de la economía energética celular. En base al enunciado
decida y justifique la posibilidad de una modificación covalente o un cambio
conformacional (por alosterismo) de la PDH en presencia de ATP.
d) ¿Qué ocurre en situaciones de baja carga energética celular y baja relación
NADH/NAD+ con la velocidad de funcionamiento del ciclo de Krebs? Mencione otros
41
posibles destinos del piruvato citoplasmático, explicitando la situación metabólica que
promueve dicho destino.
13) Se dispone de una suspensión de células facultativas (capaces de crecer en

presencia o ausencia de oxígeno), creciendo en condiciones anaeróbicas (ausencia de
oxígeno). Cuando dicha suspensión celular es pasada a un medio aeróbico, el consumo
de glucosa por parte de las células disminuye. Cuando se midió la producción de ácido
láctico, éste cesa en presencia de oxígeno.
a) ¿Por qué cesa la acumulación de láctico después de la adición de oxígeno?
b) ¿Por qué la adición de oxígeno disminuye la velocidad de consumo de glucosa?
c) Si a la misma suspensión celular se le añade n-butilmalonato, un inhibidor del
transporte del malato hacia mitocondria, prediga que sucederá con:
► El proceso glucolítico;
► El consumo de oxígeno;
► La formación de lactato;
► La síntesis de ATP.
En cada caso justifique.
d) En estas condiciones aeróbicas, un grupo de células fue tratada con el compuesto A,
y otra con el B. Se midió sobre las mismas la formación de ATP y consumo de oxígeno,
obteniéndose los siguientes resultados:
► Células tratadas con A: bajo consumo de oxígeno y baja síntesis de ATP
► Células tratadas con B: consumo normal de oxígeno y baja producción de ATP
Indique qué tipo de sustancia es A y B. Justifique.
14) Como resultado de la ingesta del rebrote de un sorgo granífero destinado a

pastoreo después de una lluvia que siguió a un período de sequía, se produjo im-
portante intoxicación de los animales. Un ingeniero agrónomo explicó que los sorgos
son capaces, en esas condiciones, de generar glucósidos cianogénicos que, a partir de
un proceso de hidrólisis, liberan ácido cianhídrico, y que el ion cianuro es un tóxico que
inhibe a la citocromo c oxidasa. Responda:
a) ¿Cuál es la ubicación subcelular de este complejo enzimático y qué tipo de reacción
cataliza?
b) ¿Puede el Ciclo de los Acidos Tricarboxílicos funcionar sin cadena respiratoria?
Justifique.
c) El ingeniero agrónomo confirmó su diagnóstico de intoxicación con cianuro al ver el
color rojo brillante de las mucosas de los animales, resultado según él de la elevada
concentración de oxígeno en la corriente sanguínea. Sin embargo, "las células mueren
por no poder utilizar dicho oxígeno", señaló. Explique esta afirmación desde el punto
de vista bioquímico, y señale si el cianuro es un agente desacoplante o no.
d) La acción del tóxico antes citado, en niveles que no produzcan la muerte celular,
¿aumenta, disminuye o no influye en la concentración de ADP? ¿Por qué?
d.1) En esas condiciones, ¿qué efecto tendrá la acción de la mencionada sustancia
tóxica sobre la actividad de la fosfofructoquinasa de glucólisis? ¿Por qué? ¿Qué tipo de
regulación es?
d.2) En idénticas condiciones, ¿qué metabolito de la glucólisis supone Ud. que se
acumularía? Justifique.
42
15) En un experimento con mitocondrias aisladas se midió el consumo de oxígeno en
presencia de distintas sustancias agregadas separadamente al medio de incubación.
Estas sustancias fueron:
- KCN
- ATP
- ADP
- succinato
Se obtuvo el siguiente gráfico:
120
[O2]
(consumo)
100
80
60
40
20
tiempo (seg)
a) Indique en qué momento (cuántos segundos a partir del comienzo de la experiencia)

fueron agregadas cada una de las sustancias mencionadas. Fundamente su respuesta.
b) Se ha encontrado en vegetales la existencia de una respiración insensible al cianuro.
En estos tejidos existen dos oxidasas: la citocromo c oxidasa (complejo IV de la cadena
respiratoria) que es sensible al cianuro y la oxidasa alternativa (resistente al cianuro).
La acción de la oxidasa alternativa, al igual que la citocromo c oxidasa, necesita del
consumo de oxígeno. Ambas vías de transferencia de electrones pueden operar
simultáneamente. La forma de comprobar la presencia de la oxidasa alternativa es
exponer a las mitocondrias a la presencia de cianuro. De existir esta enzima las
mitocondrias sobreviven. Por su parte la oxidasa alternativa se inhibe en presencia de
SHAM (ácido hidroxámico). Realice un gráfico similar al expuesto en la parte a), pero
para mitocondrias que presenten respiración insensible al cianuro. Indique además en
qué momento incorporaría SHAM para corroborar la existencia de este tipo de
respiración. Represente en el gráfico el efecto producido por este inhibidor.
c) Teniendo en cuenta que la acción de la oxidasa alternativa no permite la síntesis de
ATP ya que no bombea protones al espacio intermembrana de la mitocondria discuta
el posible rol biológico de esta enzima.
16) En un establecimiento agropecuario, parte del rodeo de bovinos tuvo

accidentalmente acceso a un sector del campo atravesado por un arroyo cargado de
efluentes industriales. Algunos de los animales experimentaron colapso, convulsiones
y muerte rápida. Otros, que sufrieron exposición menos intensa, permanecían vivos.
Fueron consultados el ingeniero agrónomo y el veterinario del establecimiento.
43
El ingeniero agrónomo había determinado con anterioridad que esas aguas residuales
contenían sulfuro de hidrógeno (H2S). El veterinario comentó que este tóxico irrita las
mucosas y provoca graves problemas respiratorios. Una rápida consulta bibliográfica
bastó para conocer que el H2S inhibe la citocromo c oxidasa.
a) Recordando la ubicación subcelular de la citocromo c oxidasa, mencione, al menos,
otras 4 enzimas o complejos enzimáticos (relacionados o no con la cadena respiratoria)
que presenten la misma localización.
b) Se suscitó una discusión entre el personal del establecimiento y los profesionales
acerca de la eficacia que presentaría como tratamiento el suministro de O 2 a los
animales envenenados. ¿Supone usted que el tratamiento con O 2 sería una medida
beneficiosa o no? ¿Por qué?
c) De acuerdo a lo enunciado, ¿clasificaría al H2S como agente desacoplante, inhibidor
de transporte electrónico, o inhibidor de ATPasa? Justifique, mencionando además si
se produce gradiente de protones.
d) Comente brevemente cómo se verán afectadas en general: a) las rutas de
biosíntesis y b) los procesos catabólicos, en células que han experimentado la acción
del tóxico en concentraciones lo suficientemente bajas para no causar la muerte.
17) Los nitrofenoles y clorofenoles, usados como conservadores de los postes de

alambrados, pueden implicar un peligro para el ganado.
a) Explique con fundamento bioquímico la causa de esta afirmación.
b) Explique y ejemplifique la diferente acción de un inhibidor de cadena respiratoria y
un desacoplante.
c) A partir de la estructura de los compuestos mencionados explique por qué son
fácilmente absorbibles por piel y mucosas
d) ¿Qué síntomas muestran y qué tratamientos se indican para animales intoxicados?
18) El 2,4 DB es un producto con un mecanismo de acción peculiar. En su estado

original, presenta muy poca actividad herbicida. Sin embargo, una vez aplicado sobre
el vegetal, experimenta en el interior de las plantas susceptibles una transformación a
2,4 D, sustancia fuertemente fitotóxica. Asocie esta transformación al metabolismo de
los ácidos grasos.
Cl -O-CH2-CH2-CH2-COOH ⎯⎯→ Cl-O-CH2-COOH
2,4 DB 2,4 D
a) La transformación de 2,4 DB en 2,4 D presenta un ΔG°'negativo. ¿Es un proceso
exergónico o endergónico? ¿Por qué?
b) ¿En qué lugar de la célula es transformado el 2,4 DB en 2,4 D?
c) Además del 2,4 D, ¿qué otros productos se forman como resultado final de la
transformación del 2,4 DB (incluya cofactores)?
d) En el metabolismo de los lípidos en animales, esos mismos productos sufren
transformaciones posteriores. Dos de los productos formados mencionados en el
punto 3, son cofactores que se oxidan en la cadena transportadora de electrones.
Mencione:
d.1) el tipo de cofactor de que se trata (activador, coenzima o grupo prostético);
d.2) el nombre del aceptor primario de los electrones cedidos por estos cofactores en
cadena respiratoria;
d.3) el número total de moléculas de ATP que se genera en cada caso, y la razón por la
cual dicho número difiere según el cofactor en cuestión (considere cadena respiratoria
completa).
44
e) ¿Cuáles serían los posibles destinos del tercer producto formado según se mencionó
en el punto 3?
f) Se sabe que algunas especies leguminosas (ej.: alfalfa, tréboles), por razones
exclusivamente bioquímicas, no son afectadas al aplicarse 2,4 DB. Sin embargo, sí son
afectadas al aplicarse 2,4 D. Discuta alguna razón bioquímica posible para la ocurrencia
de este fenómeno.
19) Desde la década del '70, los investigadores de las ciencias agropecuarias han
buscado formas de controlar las malezas gramíneas en los cultivos. En 1980, un
investigador descubrió un herbicida graminicida (diclofop metilo) que inhibe la
formación de malonil-CoA a partir de acetil-CoA.
a) ¿Cuál es la principal ruta metabólica afectada y por qué? En condiciones normales,
la secuencia de reacciones que conforman dicha ruta ¿es endergónica o exergónica?
¿Por qué?
b) ¿Cuál es la enzima inhibida por el herbicida? ¿A qué clase enzimática pertenece?
¿Qué tipo de reacción cataliza dicha enzima? Esquematice la reacción.
c) Mencione la vitamina que actúa como cofactor para dicha enzima y clasifique ese
cofactor (activador, coenzima o grupo prostético).
d) El paso inhibido por el herbicida es considerado limitante en la velocidad de la ruta
metabólica. Mencione qué metabolito/s incrementa/n la velocidad de la ruta, y cuál la
desacelera en condiciones normales. Teniendo en cuenta el concepto de regulación
enzimática de una ruta, ¿cómo catalogaría a esta enzima? Discuta.
e) La ruta metabólica en cuestión requiere el aporte, en determinados puntos de su
trayecto, de energía química en 2 formas. Mencione los mismas, indicando los pasos
en que dichos requerimientos tienen lugar.
f) ¿Qué estructuras celulares se ven crucialmente afectadas al aplicar esta clase de
herbicidas en especies susceptibles? Discuta el alcance de dicha incidencia.
g) Un ingeniero agrónomo, efectuando aplicaciones del herbicida, observó que las
malezas susceptibles al mismo experimentaban clorosis (amarillamiento) de las hojas,
por lo cual consideró posible que el herbicida produjera daños a nivel de cloroplasto.
¿Considera usted correcta esa apreciación? Fundamente la respuesta.
20) Se ha encontrado que el herbicida Paraquat actúa bloqueando el proceso

fotosintético y provocando la desecación o defoliación de las plantas. Dicha
interferencia se produce según el siguiente esquema:
45
P700*
Ferredoxina
PARAQUAT OX.
PARAQUAT RED.
NADP+
P700
a) ¿Supone usted que en presencia de Paraquat el ciclo de Calvin puede producirse

normalmente o no? Justifique.
b) ¿Existe desprendimiento de O2 de los cloroplastos? Fundamente su respuesta.
c) Considerando los valores de potenciales estándar de óxido-reducción del P700 (E0 =
+0,4V) y del Paraquat (E0 = -0,4V) explique si el proceso que va desde el P700 al
Paraquat es espontáneo o no. Fundamente su respuesta considerando la relación
entre G y E (variación del potencial estándar de reducción) según la siguiente ecuación:
G = -n.F.E
siendo n = número de electrones transferidos y F = 23,06 kcal/V.mol (cte. de Faraday).

Justifique la ocurrencia de dicho proceso en la naturaleza.
d) En un experimento se prepararon tres tubos según el siguiente esquema:
d.1) Suspensión de cloroplastos + luz + 2,6-diclorofenolindofenol.
d.2) Suspensión de cloroplastos + oscuridad + 2,6- diclorofenolindofenol.
d.3) Suspensión de cloroplastos + luz + Paraquat + 2,6-diclorofenolindofenol.
Indique qué resultados se obtendrán luego de transcurridas 2 horas.
21) Cuando se ilumina una suspensión de algas verdes en ausencia de CO 2 y se incuba

luego en la oscuridad con 14CO2 se detecta la aparición de glucosa marcada con 14C en
un intervalo de tiempo reducido. ¿Cuál es el significado de esta observación con
respecto a las fases de la fotosíntesis? ¿Por qué la conversión de a glucosa marcada se
interrumpe al cabo de un tiempo breve? Explique con ecuaciones generales.
22) El grado en que está oxidado o reducido un transportador electrónico durante la

transferencia de electrones fotosintética puede, a veces, observarse directamente con
un espectrofotómetro. Cuando se iluminan cloroplastos con luz de 700 nm, el
citocromo f, la plastocianina y la plastoquinona están oxidados. No obstante, cuando
se iluminan los cloroplastos con luz de 680 nm, estos transportadores electrónicos
están reducidos.
a) Explíque este fenómeno.
b) Cuando una planta es iluminada con una combinación de luz de 680 y 700 nm, el
ritmo fotosintético (medido por la producción de oxígeno) es mayor que si se la
ilumina con cada una de esas longitudes de onda por separado. Explique.
46
23) Se realizó la siguiente experiencia: se colocaron plantas de maíz (C 4) y plantas de
trigo (C3), en sus respectivas cámaras, conteniendo una atmósfera controlada y en
presencia de luz. En ambas se les inyectó CO2 radioactivo (marcado con 14C). Se
comprobó que después de aproximadamente 1 segundo, más del 90% de la
radioactividad incorporada en las hojas de maíz se encuentra en los átomos de C del
malato, aspartato, y oxalacetato, y que sólo después de 60 segundos aparece la marca
radioactiva en el C1 del 3-fosfoglicerato. En el caso de la planta de trigo no se detectó
la marca radioactiva en compuestos de 4 C en ningún momento, dentro de los
primeros 60 segundos. Fundamente estos resultados indicando:
a) Que compuesto aparecerá marcado como resultado de la incorporación del 14CO2,
en las células de la hoja de trigo;
b) Cual es la enzima responsable de la incorporación del mismo inicialmente en plantas
de maíz y en el caso del trigo.
Posteriormente se aumentó progresivamente la concentración de O2 dentro de la

cámara en la que se encuentra la planta de trigo, y se verificó un aumento en la
concentración de CO2 dentro de la misma.
c) Explique la razón de dicho aumento en la concentración del CO 2 dentro de la
cámara.
d) ¿Qué supone Ud. que pasaría en la cámara que contiene a las plantas de maíz?
Justifique.
24) No se conocen herbicidas que interfieran directamente con la reducción del CO 2 a

hidratos de carbono, pero casi la mitad de los herbicidas de uso corriente inhiben la
fotosíntesis. En presencia de luz, asocie la acción de los siguientes herbicidas con los
diferentes tipos de efectos posibles citados más abajo, y explique los mecanismos
correspondientes.
Herbicidas:
a) Diurón (compite con la plastoquinona B por su sitio de fijación en el fotosistema II).
b) Perfluidone (agente desacoplante en fotosíntesis).
c) Amitrol (inhibidor de la síntesis de carotenos).
d) Diquat (acepta electrones cedidos por la ferredoxina, y los dona a su vez al oxígeno
derivado de la fotólisis del agua, produciendo formas de oxígeno activas).
Posibles Efectos sobre:
a) Fotosensibilización de pigmentos clorofilianos.
b) Desprendimiento de oxígeno.
c) Fotofosforilación.
d) Flujo cíclico de electrones.
e) Formación de 1,3-bisfosfoglicerato en plantas C4.
En el caso de los herbicidas Diquat y Perfluidone, comente además qué etapas del
Ciclo de Calvin se verán directamente afectadas y por qué.
25) Cloroplastos aislados de espinaca son utilizados para evaluar su capacidad de

fotorreducir al NADP+ en un sistema de reacción que contiene ferredoxina. El sistema
es iluminado con luz blanca y se obtienen 2,9 moles de NADPH. En presencia de
inhibidor del PSII en cambio se obtienen 0,5 moles de NADPH.
a) ¿Por qué se anula drásticamente la reducción de NADPH en las condiciones
descriptas?
47
b) Esquematice el flujo de electrones en la etapa fotoquímica que justifique su
respuesta en a).
c) Formule las reacciones de utilización del NADPH formado por fotosíntesis en la
planta.
26) Un productor implantó una pastura consociada en cuya composición la especie

preponderante es la alfalfa. Previo a la siembra, el productor realizó la inoculación de
las semillas con las bacterias apropiadas. Posteriormente comprobó que las plantas de
alfalfa no alcanzaron el desarrollo esperado. Desenterrando algunas de ellas, verificó la
presencia de muy baja cantidad de nódulos en las raíces. Decidió entonces consultar a
un Ingeniero Agrónomo, quien propuso dos hipótesis: I) deficiencia de fósforo en el
suelo; II) alta disponibilidad de nitrógeno en el suelo. Indique:
a) ¿Qué fundamento bioquímico explica la falla en la nodulación y, por lo tanto, en la
fijación de nitrógeno en condiciones de deficiencia de fósforo?
b) En condiciones de alta disponibilidad de nitrógeno en el suelo, ¿cuál supone es la
entidad química del nitrógeno que ingresa preponderantemente a las plantas y de qué
manera éste compuesto influye negativamente en la fijación del nitrógeno? Utilice
fundamentos bioquímicos.
c) Con respecto al compuesto mencionado en el punto b), ¿qué procesos deben ocurrir
para que el nitrógeno pase a formar parte de biomoléculas? Indique las enzimas que
catalizan dichos procesos.
d) En condiciones de alta disponibilidad de nitrógeno en el suelo, ¿qué sucederá con la
síntesis de leghemoglobina? Fundamente la respuesta.
27) En un ensayo en macetas, se sembraron semillas de soja inoculadas con una cepa
de Rhizobium japonicum. Después de la aparición de los primeros nódulos se adicionó
una solución de KNO3 10 mM (día cero). Las plantas control fueron tratadas en forma
idéntica, pero reemplazando KNO3 .por KCl. Cinco días después de adicionadas las
soluciones citadas, se lavó el KNO 3 de algunas de las plantas tratadas, cultivándoselas
en un medio que reemplazaba el KNO3 con KCl. Todos los días se incubaron las raíces
intactas lavadas procedentes de plantas de los diferentes tratamientos con 5% de
acetileno (C2H2) en aire durante 1 hora a temperatura ambiente, procediéndose
posteriormente a la determinación de la actividad nitrogenasa a través de la medición
de la concentración de etileno (C2H4) por cromatografía gaseosa. Los resultados se
observan en el siguiente gráfico (Figura 1):
FIGURA 1
100
Actividad específica relativa
80
KCl
60
KNO3
40
Lavado
20 del
KNO3
0
0 2 4 6 8
Tiempo (días)
48
a) ¿Cuál es el fundamento de la medición de la actividad nitrogenasa utilizando
acetileno como sustrato? (Recuerde la reacción completa que cataliza la nitrogenasa)
b) Comente los mecanismos involucrados que motivaron las variaciones de la actividad
nitrogenasa en plantas con presencia de 10 mM de KNO 3 y en plantas lavadas a los 5
días.
En el mismo ensayo se separaron nódulos de las plantas tratadas con la solución de

KNO3 10 mM, midiéndose la actividad nitrogenasa con y sin adición de una fuente
carbonada (sacarosa). Los resultados se presentan en la figura 2.
FIGURA 2
50
nmol C2H4 mg-1 de nódulo
40
30
Sin sacarosa
Con sacarosa
20
10
0
0 2 4 6 8 10
Tiempo (horas)
c) Sin considerar las limitaciones que genera el trabajo con nódulos separados de la
planta, ¿qué sugiere el gráfico anterior? Justifique.
d) Asumiendo fotosíntesis activa, describa las reacciones que conducen a la síntesis de
sacarosa en una planta en crecimiento.
28) Se realizó una experiencia en donde residuos orgánicos fueron colocados en un

cámara de cultivo enriquecida con microorganismos del suelo y en condiciones
aeróbicas. El cultivo se prolongó durante varios meses en los cuales fue determinada la
cantidad de nitrógeno orgánico, amonio, nitritos y nitratos en el medio de incubación.
Los resultados obtenidos permitieron construir el siguiente gráfico.
N H 4+ NO -
2
350
300
250
n itró g e n o (m g /m 3 )
-
NO 3
200
150
N o r g á n ic o
100
50
0
0 1 2 3 4 5
m eses
49
Realice una discusión de los resultados considerando cada una de las curvas obtenidas,
indicando:
a) Procesos bioquímicos involucrados y organismos intervinientes.
b) ¿Podría algún organismo interviniente verse inhibido por altas concentraciones de
NH4+? En caso de ser así indique cuál.
c) ¿Cómo continuarían las curvas si a los 4 meses se extrajera totalmente el oxígeno de
la cámara? ¿Aumentaría el contenido de alguna forma nitrogenada no representada en
el gráfico original?
29) En una de las situaciones problemáticas de la Guía de Teórico-Prácticos

concerniente al metabolismo del nitrógeno, se hace referencia al glufosinato de
amonio, un herbicida que resulta un potente inhibidor de la glutamina sintetasa (GS).
a) ¿Qué reacción cataliza dicha enzima?
b) La vía GOGAT-GS constituye una de las vías para la síntesis de glutamato. ¿Qué
enzima actúa en vegetales como vía alternativa para dicha síntesis, y en qué
condiciones estima usted incrementa esta enzima su actividad?
c) Un ingeniero agrónomo efectuó una aplicación de glufosinato de amonio sobre la
maleza Sorgo de Alepo, registrando los valores de fotosíntesis (medida como CO 2
fijado en ppm) y niveles endógenos de amonio (en µg g-1 de peso fresco) expresados
en el gráfico. Explique los resultados obtenidos en función del mecanismo de acción
del glufosinato.
Niveles de CO2 fijado y niveles endógenos de
amonio en plantas tratadas con glufosinato de
amonio
200 700
Testigo
(CO600
2 fijado)
(respiración)
NH4+ (µg g-1 peso
150
CO2 fijado (ppm)
500
Con glufosinato
fresco)
(CO400
2 fijado)
(respiración)
100
300
Testigo (niveles de
200 amonio)
50
100
Con glufosinato
0 0 (niveles de amonio)
0 2 4 6 8
Tiempo (días)
d) En 1987, algunos investigadores descubrieron que ciertos microorganismos como la

bacteria del suelo Streptomyces son tolerantes al glufosinato por la presencia de una
enzima, la PAT (fosfinoacetil transferasa). Esta enzima altamente específica, acetila el
grupo amino del glufosinato usando acetil-CoA, convirtiéndolo en un producto
inactivo. ¿Aconsejaría usted la aplicación del herbicida al suelo antes de la emergencia
de las malezas para que éstas se vean afectadas al entrar en contacto con el producto?
¿Por qué?
e) El herbicida glufosinato no es selectivo (es decir, afecta tanto a malezas como a
cultivos). Sin embargo, algunos investigadores descubrieron el gen que codifica para la
enzima PAT en la bacteria Streptomyces (según se menciona en la pregunta anterior).
Discuta las posibilidades que este descubrimiento ofreció para lograr una forma
efectiva de selectividad (es decir, que no afecte a los cultivos y sí a las malezas).
30) En el ciclo del N las bacterias del género Nitrosomonas son responsables de la
primera etapa de la nitrificación y son autótrofas. Cuando dichas bacterias se cultivan
50
en presencia de NH3 y en condiciones de aerobiosis se verifica un aumento de pH en el
interior de la bacteria y una disminución en el exterior.
a) Escriba la reacción en que intervienen las bacterias del género Nitrosomonas.
b) ¿Cuáles son, a su entender, los mecanismos que ponen en juego estas bacterias y
qué beneficio obtiene de ellos?
c) ¿Se verificarían, a su entender, los mismos resultados si estas bacterias se incubaran
en presencia de NH3 pero en condiciones anaeróbicas? Fundamente.
31) Se sabe que el nivel de mensajeros (ARNm) de GS2 y Fd-GOGAT (Enzimas

cloroplásticas) es muy bajo en las raíces de plantas de trigo (C3), mientras que en hojas
es alto. Para estudiar la influencia del aporte de N del suelo en la expresión génica de
dichos mensajeros en las raíces y estructuras verdes de la planta, se agregó KNO 3 (10
mM) a un cultivo hidropónico de plántulas de trigo en cámara de crecimiento. A las
dos horas del agregado se realizó la extracción y medición de la inducción relativa de
los ARNm para cada uno de los genes en cuestión y el de nitrato reductasa (NR).
El gráfico 1 muestra el resultado obtenido.
Figura 1: Inducción relativa de los ARNm para los genes de GS, NR y GOGAT en raíz y
hojas.
a) ¿Por qué cree que los niveles de ARNm de GS2 y Fd-GOGAT son alta en hojas?
(Relaciónelo con la actividad oxigenasa de RUBISCO en plantas C3).
b) Plantee la ecuación catalizada por las tres enzimas, señalando cofactores y
productos de reacción.
c) Explique la necesidad de luz en el diseño de la experiencia. Cómo cree que fue
realizado el tratamiento control.
d) ¿Qué efecto se observa sobre el nivel de ARNm de GS, GOGAT y NR con el NO 3 en
cada uno de los tejidos vegetales?
51
e) Sugiera un mecanismo de acción de NO3-. Explique qué entiende por inductor.
f) ¿De dónde provienen los cofactores usados por estas enzimas en cada uno de los
órganos?
g) ¿Cuál podría ser la causa del diferente nivel de inducción de mensajeros para estas
enzimas en hojas y raíces?
d) Si quisiera disminuir el uso de fertilizantes nitrogenados en este tipo de cultivos,
¿cree que sería posible el uso de “fertilizantes ecológicos”? ¿Qué tipos de
microorganismos se asocian con estas plantas? ¿La presencia de altos niveles de
nitratos en la solución del suelo podría afectar la FBN? Justifique.
32) Explique los cambios que se producirán en los contenidos de lípidos, carbohidratos
y proteínas en cotiledones de plántulas de jojoba (cuyas semillas reservan los tres tipos
de nutrientes) durante 30 días después de la imbibición de las semillas. Indique
proceso metabólico, ubicación celular y enzima más importante para los tres tipos de
nutrientes, y si esperaría que sus concentraciones en el tejido cotiledonar aumenten o
disminuyan.
33) Las semillas de mostaza (Sinaspis alba) presentan en sus cotiledones sacarosa
(disacárido), rafinosa (trisacárido = gal-glu-fru) y estaquiosa (tetrasacárido = gal-gal-
glu-fru).
a) Explique en el siguiente gráfico la disminución del contenido de esos azúcares en
plántula entera en función del tiempo de imbibición.
Días de imbibición
b) Sobre el mismo gráfico, dibuje un par curvas que representen, estimativamente, el
contenido de fructosa y glucosa en función del tiempo.
c) ¿Qué clase de enzimas catalizan la degradación de azúcares de la figura?
d) ¿Cuáles son los destinos metabólicos de glucosa y fructosa en la planta?
34) Explique el siguiente gráfico que representa los cambios ocurridos en semillas de
ricino desde la imbibición:
52
a) ¿A qué se debe la disminución de lípidos totales? ¿Qué vía (o vías) metabólicas
estarán activas?
b) ¿A qué atribuye los cambios en el peso fresco?
c) ¿Qué enzimas del endosperma se activan para justificar el aspecto de la curva de
lípidos totales? ¿En qué día de la germinación, estima, comienza a activarse?
d) ¿Cuál es el producto final de la conversión de lípidos de las semillas con reservas
lipídicas?
e) Indique las reacciones particulares que posibilitan esta transformación. Indique
sustratos, productos y enzimas.
35) En semillas de algodón (reserva lipídica) en germinación se determinaron las

actividades de dos enzimas propias de la glucólisis: la fosfofructoquinasa (PFK) que
cataliza la reacción:
Fructosa 6P + ATP → Fructosa 1,6bisP + ADP
y la aldolasa, que cataliza la siguiente reacción:

Fructosa 1,6bisP → GA3P + DHAP
En los cotiledones las curvas resultantes fueron las que indica la figura. Responda:
a) ¿Por qué, si se trata de dos enzimas que participan de la glucólisis, la actividad de

una aumenta y la de la otra disminuye en los cotiledones cuando se induce la
germinación?
b) ¿Qué posibles funciones puede cumplir la aldolasa y cuál está cumpliendo en este
caso?
53
c) ¿Cuál sería la curva, a su entender, correspondiente a la PFK si se las determinara en
eje embrionario en vez de en los cotiledones?
d) Además se determinó la actividad de la glucosa-6-P deshidrogenasa (G6PDH) en el
eje embrionario, la cual cataliza la siguiente reacción:
Glucosa 6P + NADP → 6P-gluconato + NADPH + H+
La curva resultante fue la que indica la figura:
Responda
d.1) ¿Qué proceso bioquímico se está produciendo activamente en el que está
involucrada esta enzima?
d.2) ¿Cuál es el sentido biológico de este proceso? ¿Qué productos se obtienen?
¿Cuáles son sus destinos? Fundamente.
36) La fosfinotricina (PPT) es un herbicida sintético, análogo del ácido L-glutámico que
inhibe a la glutamina sintasa (GS). El uso de éste producto lleva a la muerte del vegetal.
Se han obtenido plantas transgénicas resistentes a PPT por transferencia de un gen
(gen bar) de Sterptomyces hygroscopicus, que codifica para una enzima detoxificante,
la cual convierte al PPT en un producto inactivo para GS. De Block et al. (1987)
colocaron el gen bacteriano bar bajo el control del promotor 35 S del CaMV y
transfirieron la construcción resultante a plantas de tomate utilizando el sistema del
plásmido Ti de Agrobacterium. El gen fue heredado como un único carácter dominante
y las plantas que lo expresaron fueron resistentes a una dosis diez veces superior a la
tóxica.
a) ¿Cuál es la importancia de GS en la asimilación de amonio? Compare la afinidad de
ésta enzima por el amonio con respecto a la de GDH.
b) ¿Por qué la inactivación de la GS lleva a la muerte del vegetal?
c) ¿Cuáles pueden ser los distintos procesos metabólicos que proveen de amonio para
GS? (Mencione al menos tres de ellos).
d) Para la expresión del gen bar, se necesita de la presencia del promotor 35 S CaMV.
¿Cuál es el papel del promotor en el proceso de la transcripción? ¿Qué características
presentan los promotores bacterianos? Describa.
e) El sistema usado para la transferencia del gen foráneo fue el plásmido Ti. Describa
por qué es el más utilizado en plantas dicotiledóneas.
f) ¿Qué nombre reciben las plantas que heredaron el gen bar y cómo procedió a
seleccionarse después de la transformación? Describa el proceso.
37) Durante los últimos años se han llevado a cabo importantes avances en el campo
de la biotecnología, principalmente en la biotecnología vegetal. Un ejemplo lo
constituye la producción de tomates transgénicos (que tienen bloqueado el gen
54
responsable de la maduración) y las plantas de soja transgénicas (que poseen
resistencia a un herbicida).
a) Explique qué es una planta transgénica. ¿Cuál es el microorganismo utilizado en
ingeniería genética, para transformar plantas dicotiledóneas?
b) ¿Qué porción del ADN de dicha bacteria se utiliza para la transferencia?
c) Esquematice en un modo claro, la transferencia de un gen desde la bacteria a la
planta y cómo seleccionaría las plantas transformadas. ¿Qué antibiótico usaría?
d) Una manera de silenciar un gen en una planta es mediante la tecnología de CRISPR-
CAS9. Explique brevemente en qué consiste.
38) Se aislaron ribosomas de bacterias que habían crecido en medio “pesado” ( 13C y
15N) y de bacterias que han crecido en medio “ligero” ( 12C y 14N). Estos ribosomas 70 S
se añadieron a un sistema in vitro que realizaba activa síntesis de proteínas. Se analizó

una alícuota extraída varias horas más tarde por centrifugación en gradiente de
densidad.
a) ¿Qué son las endonucleasas de restricción? Describa los posibles productos que se
generan de acuerdo al modo de acción sobre su sustrato específico.
b) Qué elementos deberían estar presentes en el plásmido Ti para que una planta
infectada por Agrobacterium tumefaciens inserte en su genoma un gen foráneo de
interés. Señale dichos elementos en un esquema del plásmido.
55
56
TRABAJOS PRÁCTICOS EXPERIMENTALES
Trabajo Práctico Nº 1. ENZIMAS
ESTUDIO CINÉTICO DE SACARASA
Introducción.
La sacarasa o invertasa es una hidrolasa que cataliza la hidrólisis de la sacarosa
liberando glucosa y fructosa. Se encuentra en el lumen de las células epiteliales de las
paredes intestinales, en levaduras y en células vegetales.
Los glúcidos liberados por la acción de esta enzima son capaces de reducir en medio
alcalino al ácido pícrico (color amarillo) convirtiéndolo en ácido picrámico (color rojo).
La intensidad de la coloración obtenida, medida espectrofotométricamente, es
proporcional a la cantidad de glúcidos reductores presentes en la muestra.
Reacción simplificada.
NO2
NO2
O
+ 3R C + H2O O
+ 3R C
H
O2N NO2 OH
OH O2N NH2
OH
ácido pícrico glucosa ácido picrámico ác. glucónico
(amarillo) (anaranjado)
Curva de calibración.
Para cuantificar la cantidad de glucosa presente en cualquier muestra a partir de la
reacción con ácido pícrico, se requiere confeccionar previamente una curva de
calibración que nos permita calcular el coeficiente de absorción del producto
coloreado (ácido picrámico) formado a partir de la glucosa, según la reacción anterior.
La curva de calibración se prepara de acuerdo al siguiente esquema:
Tubo N° 1 2 3 4 5 6
Solución glucosa 0,01M (ml) 0 0.5 1,0 3,0 5,0 10,0
Agua destilada (ml) 10 9.5 9,0 7,0 5,0 0,0
Mezclar por agitación
Sol. de NaOH 10% P/V (ml) 1 1 1 1 1 1
Sol. de Ac.pícrico (ss). (ml) 2 2 2 2 2 2
Mezclar por agitación y calentar en agua hirviendo 5 min.
Lectura de absorb. a 530 nm 0,000 * 0.060 0.157 0.486 0.947 1.271
µmoles glucosa/tubo 0 5 10 30 50 100
* Se calibra a cero el espectrofotómetro para que quede descontada automáticamente
la absorbancia producida por la coloración del ácido pícrico.
Como resultado de estas determinaciones experimentales se obtuvo la siguiente curva:
57
Absorbancia
1.6
Y=0,0141X
1.4
y = 0.0141x
2
R2=0,9393
R = 0.9393
1.2
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
moles de glucosa
Gráfico N° 1. Absorbancia en función de concentración de glucosa (expresado en
moles glucosa por tubo)
De esta recta se obtendrá el factor que permitirá calcular los moles de glucosa
aparecidos por hidrólisis con sacarasa en el TP (¿Qué relación habrá entre dicho factor
y la pendiente de la recta?).
Técnica para el estudio de la cinética de sacarasa.

Se prepara un extracto enzimático a partir de una suspensión de levaduras (1g de
levadura de cerveza en 100 mL de agua destilada) centrifugada durante 10 minutos a
3000 rpm.
Se procede según los siguientes pasos:
Número de tubo 1 2 3 4 5 6 7
Extracto enzimático (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Solución de sacarosa 2 % p/v (ml) 0 0.5 1 3 5 7 9.5
Agua destilada (ml) 9.5 9 8.5 6.5 4.5 2.5 0
Mezclar por agitación e Incubar a 37°C durante 10 minutos
Hidróxido de sodio al 10% p/v (ml) 1 1 1 1 1 1 1
Solución de ác. pícrico concentrado (ss) (ml) 2 2 2 2 2 2 2
Mezclar por agitación y calentar en agua hirviente durante 5 minutos
Lectura de absorbancia a 530 nm
Conc. de sacarosa (mM=µmoles/mL)*
Cantidad de glucosa (µmoles)
Velocidad de reacción (µmoles glu/min)
* Calcular la Molaridad en base a %p/v de sacarosa, el volumen utilizado y sabiendo
que su masa molecular es Mr: 342,3
En función de las concentraciones de sustrato (mM de sacarosa) y las velocidades de

reacción (µmoles glu/min), graficar la curva de reacción e indicar los parámetros
cinéticos: Velocidad máxima (Vmax) y la constante de Michaelis-Menten (KM) sobre la
58
gráfica según Michaelis-Menten y sobre la gráfica de las inversas de Lineweaver-Burk.
(Realizar el gráfico en computadora).
El alumno deberá presentar un informe de laboratorio acorde a las indicaciones
sugeridas en las Recomendaciones para el alumno. Se deberá presentar un informe
por grupo de trabajo.
59
Trabajo Práctico Nº 2. GLUCÓLISIS
GLUCÓLISIS EN YOGUR
Existen varias formas de medir un proceso glucolítico. En éste caso se medirá el

proceso glucolítico llevado a cabo por las bacterias del yogur (Lactobacillus bulgaricus y
Streptococcus thermophilus). Éstas bacterias liberan ácido láctico al medio como
metabolito final (o sea glucólisis más fermentación láctica) como consecuencia de ello
la acidez del medio aumenta (pH más bajo).
Una manera de medir la acidez resultante, consiste en titular con una base fuerte y un
indicador de pH, siguiendo el mismo procedimiento que se utiliza para titular un ácido.
Dado que la leche presenta cierta acidez, deberá hacerse un ensayo blanco para no
atribuir la misma, a la fermentación láctica llevada a cabo por las bacterias. La
diferencia de acidez con respecto al blanco nos dará la resultante de la fermentación
láctica.
Técnica.
Se toman 2 Erlenmeyers de 125 ml y se colocan 100 ml de lecha previamente

calentada a 40 °C. Se agrega aproximadamente 10 gr de yogur (inóculo), y se lo agita
para homogeneizar el medio.
Luego se coloca vaselina sobre la superficie del líquido. La muestra problema se incuba
en estufa a 45 °C durante 1 hora. El blanco se mantiene a 0 °C. Al cabo de ese tiempo
se toman 100 ml de cada Erlenmeyer, se agregan 3 gotas de fenolftaleína y se titula
con NaOH 0,5 N hasta que vire a rosado suave.
A partir de los volúmenes de titulación calcule los gramos de ácido láctico presentes en
la muestra problema:
(Vm – Vb) x N x 0,090 = gr de ácido láctico
Vm: volumen de NaOH agregados a la muestra.

Vb: volumen de NaOH agregados al blanco.
N: normalidad del NaOH.
0,090 gr: peso del meq. de ácido láctico.
60
Trabajo Práctico Nº 3. RESPIRACIÓN CELULAR
DETECCIÓN DE COMPUESTOS CIANOGÉNICOS EN TEJIDOS VEGETALES.
Introducción.
Hay plantas con altas concentraciones de glucósidos cianogénicos, que al

metabolizarse liberan ácido cianhídrico (HCN), un fuerte inhibidor del complejo IV de la
cadena de transporte de electrones mitocondrial. Cuando se trata de especies
forrajeras, su consumo por parte de los animales puede traer aparejado un cuadro de
intoxicación severo, pudiendo ser fatal.
Fundamento.
Los glucósidos cianogénicos pueden metabolizarse por la masticación o por

microorganismos del rumen. Los gases del ácido cianhídrico reaccionan con el picrato
de sodio (amarillo), formando picramato de sodio (rojo), proceso conocido como
Reacción de Grignard.
Técnica.
Preparación del papel picrosódico.
Se cortan tiras de 1 cm. de ancho y unos 7-10 cm. de largo de papel de filtro u otro
papel absorbente blanco y se embebe en una solución de ácido pícrico al 1%. Se dejan
secar las tiras en ambiente oscuro. Una vez secas, se impregnan con una solución de
carbonato de sodio al 10% y se dejan secar, quedando listas para su uso.
Preparado de la muestra vegetal.
Cortar 10 trozos de hoja de sorgo y malaxar en mortero durante 2 minutos, de manera

de simular el proceso de masticación. Colocar el malaxado en los frascos de vidrio de
boca angosta. Colocar las tapas con la tira de papel, sin que el papel toque las paredes
del frasco ni el material vegetal.
Repetir el procedimiento con el material vegetal utilizado como testigo.
Observar cambios en la coloración del papel. Para informar resultados negativos dejar
reaccionar al menos 24 hs. Tapar los frascos con papel aluminio y conservar hasta la
observación de la coloración final, cuando se lo compara con la escala colorimétrica de
Grignard.
Reacción de cuantificación simplificada:
+
+ HCN + CN-Na+ + H2O
Picrato de sodio (amarillo) Picramato de sodio (anaranjado)
61
Las recomendaciones a campo se pueden resumir en: si la tira conserva el color
amarillo o ha virado a anaranjado pálido, el contenido de glucósidos cianogénicos no
es limitante para el pastoreo; Si el papel se torna anaranjado intenso, se recomienda
pastorear con precaución; si tiene un color castaño oscuro no se recomienda
pastorear.
En función de los resultados ¿Qué recomendaciones haría sobre el pastoreo del
material muestreado?
62
Trabajo Práctico Nº 4. METABOLISMO DE LIPIDOS
VALORACIÓN DE LA ACTIVIDAD LIPÁSICA DE SEMILLAS DE OLEAGINOSAS
Introducción.
Las lipasas son glícero-hidrolasas (3.1.1 clasificación decimal), que se caracterizan por
ser poco específicas, es decir que catalizan la misma reacción s
obre más de un sustrato. En el caso particular del trabajo práctico a realizar a
continuación la enzima se desempeña mejor a pH ácido.
Material Vegetal.
Se utilizarán semillas de Ricinus communis L. (ricino o tártago), las cuales fueron

embebidas en agua durante 48hs a 30°C.
Técnica.
Se realizará una suspensión de semillas, a partir de 4 semillas a las que se debe quitar
el tegumento y triturar sobre un mortero con 5 ml de agua. Luego se malaxaran
agregando 10 ml de agua, se filtrará por tela para obtener el extractivo que se utilizará
en la incubación.
Como sustrato se utilizará una emulsión de manteca, la cual se preparará
suspendiendo 0,5g de manteca en 10ml de agua que será calentada hasta formar la
emulsión.
Pasos a seguir:
Tubo de ensayo N 1 2 3
Suspensión se semillas (ml) 5 5 -
Emulsión de manteca (ml)** 3 3 3
Solución reguladora (ml)* 1 1 1
Tratamientos calentar a 100C - sin susp. de
2’ semillas
Incubar a 37C durante dos horas
Agregar la suspensión de semillas al tubo 3 (5ml)
Alcohol (ml) 12 12 12
Fenolftaleína (gotas) 5 5 5
Agitar los tubos para homogeneizar el contenido
Titulación con NaOH
0,01N(ml)
* Solución reguladora pH5 AcOH/AcONa 0,1M.
** Tomar la precaución de que la temperatura de la emulsión no produzca la
precipitación de las enzimas.
¿Qué conclusiones puede obtener de la comparación de los tratamientos ensayados?
63
Trabajo Práctico Nº 5. METABOLISMO DE COMPUESTOS NITROGENADOS
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD UREASA DE SEMILLAS DE SOJA
Introducción.
La determinación de la actividad de la enzima ureasa en los productos derivados de la
soja es una práctica rutinaria en la industria de alimentos. Ésta enzima presenta un
nivel de tolerancia al calor similar a la de varios compuestos antinutricionales que
hacen que los granos crudos de la soja no sean comestibles. Los principales
compuestos antinutriconales termolábiles presentes en los granos de las leguminosas
son los inhibidores de proteasas y las lectinas. Por lo tanto, los preparados comerciales
de semillas de soja (harina de soja o alimentos procesados) son probados para
detectar la actividad de la ureasa, ya que ésta se correlaciona con la presencia de los
compuestos dañinos.
La enzima ureasa (E.C.3.5.1.5. urea amidohidrolasa) fue la primera enzima en ser

purificada y cristalizada a partir del poroto sable (Canavalia ensiformis). Esta enzima se
encuentra en muchas plantas, fundamentalmente en los frutos de las leguminosas,
como la soja, garbanzos, lentejas, etc., pero también está presente en hongos y
bacterias, no así en las células de mamíferos. La función principal de la ureasa en las
plantas es reciclar el nitrógeno a partir de la urea externa o generada internamente.
Reacción de la Ureasa y fundamento de la detección.
CO(NH2)2 + H2O → 2 NH3 + CO2
La disolución del amoníaco (NH3) formado tiene un pH alto que puede ser detectado
mediante un simple indicador de pH que vire al subir el pH de la solución a valores
superiores a 7, como ocurre con las antocianas que contiene el repollo colorado.
Objetivo del trabajo práctico.

Evaluar la efectiva eliminación de la actividad de ureasa en porotos de soja cocidos
Preparación de la solución indicadora de pH.
Remojar 2 hojas grandes de repollo cortadas en tiras en 200 ml de agua destilada

caliente (80-90ºC) por 5-10 minutos. Filtrar el sobrenadante y descartar el repollo
Técnica para la visualización de la actividad de ureasa.
-10 semillas de soja cortadas en mitades

-solución de urea al 20%
-solución indicadora de pH
-Agua destilada
64
Se procede según los siguientes pasos:
Tubo Nº 1 2 3 4
Indicador de pH 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml
Solución de Urea - 1 ml 1 ml 1 ml
Agua destilada 1 ml - - -
Semillas de soja 2 - 2 -
Semillas de soja
- - - 2
hervidas1
1- Colocar 4 semillas de soja en un tubo con 3 ml de agua y hervir por 5-10 min
Compare el color de todos los tubos al realizar la mezcla y luego de 5-10 min a Tº
ambiente.
¿A qué se debe el color que se observa en cada tubo antes y después de la

incubación?
¿Fue efectivo el hervido de los porotos de soja por 5-10 min? ¿Por qué?
¿Qué consecuencias puede traer el consumo de harina de soja que resultó positiva
en la actividad de ureasas?
65
Trabajo Práctico Nº 6. FOTOSÍNTESIS
REACCIÓN DE HILL – ACCIÓN DE UN HERBICIDA SOBRE LA ACTIVIDAD FOTOSINTÉTICA
Introducción.
El presente trabajo práctico tiene como fundamento la reacción de Hill. En 1939

Robert Hill demostró que un preparado de cloroplastos aislados, en presencia de luz y
de un conveniente aceptor de electrones (como por ejemplo ferricianuro) y en
ausencia de dióxido de carbono, es capaz de desprender oxígeno, así como de reducir
el ferricianuro a ferrocianuro.
Este descubrimiento de Hill constituyó un hito en el proceso de determinación del
mecanismo fotosintético, puesto que:
1ro: Fracciona la fotosíntesis en dos fases, mostrando que la liberación de O 2 puede

realizarse sin la reducción del CO 2, el cual puede sustituirse por aceptores de
electrones artificiales tales como el ferricianuro.
2do: Confirma que el oxígeno producido proviene del agua y no del CO 2, puesto que
éste no está presente.
3ro: Demuestra que los cloroplastos aislados pueden realizar una parte significativa
del proceso fotosintético.
4to: Revela que un hecho primario en la fotosíntesis es la transferencia activada
por la luz de un electrón desde una sustancia a otra contra un gradiente de
potencial químico. La reducción del ión Fe+3 del ferricianuro a Fe+2 del
ferrocianuro por la ación de la luz es una transferencia de energía lumínica a
energía química.
La reacción de Hill presenta la siguiente formulación: 2 H2O + 2A ⎯→ 2 AH2 + O2

donde el aceptor de electrones A es el llamado reactivo de Hill el cual puede ser
ferricianuro o colorantes reducibles como por ejemplo 2,6 diclorofenol-indofenol.
Si representamos las fases lumínica y oscura de la fotosíntesis con el siguiente

esquema:
El reactivo de Hill (A) está reemplazando como último aceptor de electrones al

NADP+ presente en la fase lumínica y actuaría a nivel de la filoquinona en el
Fotosistema I.
66
Materiales.
a) Muestra biológica:
Hojas frescas de espinaca (Spinacea oleracea L.)
b) Reactivos:
1- Solución buffer fosfato 0,1M pH 6,8 con sacarosa 0,34M y KCl 0,01M.
2- Solución de 2,6 di clorofenol-indofenol 1,2 Mm.
3- Suspensión de herbicida preeemergente: Nombre común: Diurón. Nomenclatura
química: 3-(3,4 diclorofenil)-1,1-diurea (DCMU). Interfiere la reacción de Hill,
captando los electrones que deberían pasar del fotosistema II (fase activada) a la
plastoquinona de la cadena transportadora de electrones que va al fotosistema I.
Técnica.
Se cortan con sacabocados 10 pequeñas porciones (aprox. 1cm de diámetro) de hojas

de espinaca (Spinacia oleracea L.) o acelga (Beta vulgaris var. cicla L.) evitando la
nervadura media. Las porciones se colocarán en un mortero previamente enfriado 10
minutos sobre hielo picado.
Una vez enfriado el material, se realiza un extracción malaxando durante 2 minutos
con 10 ml de la solución reguladora (buffer fosfato-sacarosa-cloruro de potasio)
previamente enfriada en heladera. Se filtra por tela. Se lava el material remanente en
el mortero con otros 15 ml de solución reguladora que se filtra nuevamente. A partir
de todo el volumen filtrado se distribuyen alícuotas de suspensión de cloroplastos para
su posterior tratamiento según el siguiente esquema:
Tubo Nº 1 2 3 4
Suspensión de cloroplastos (ml) 5 5 5 5

Emulsión DCMU* (gotas) - - - 3
Tratamiento ensayado Susp. de Susp. de Susp. de Susp. de
cloroplastos cloroplastos cloroplastos cloroplastos
previamente cubierto de y herbicida
hervida y papel de
enfriada aluminio
Sc. 2,6 diclorofenol´indofenol (gotas) 5 5 5 5
Observar y registrar la coloración de cada tubo
Coloración inicial
Exponer los tubos a la fuente de luz por 10 minutos y registrar la coloración final
Coloración final
* Herbicida preemergente no selectivo. Nomeclatura química: 3-(3,4 diclorofenil)-1,1-
dimetilurea. Nombre comercial: Diurón. Interfiere la reacción de Hill,, captando los
electrones que deberían pasar del fotosistema II (fase activada)a la plastoquinona de la
cadena transportadora de electrones que va al fotosistema I.
67
Reacción del 2,6 di clorofenol-indofenol (reactivo de Hill):
Cl Cl
2H
HO N O HO NH OH
Cl Cl
(oxidado-azul) (reducido-incoloro)
Resumen y conclusiones.
Exponga los objetivos de este trabajo práctico, las observaciones realizadas y las
causas de los fenómenos observados. Realice un esquema Z para indicar el sitio de
acción del reactivo de Hill y del herbicida.
68
Trabajo Práctico Nº 7. SÍNTESIS DE CARBOHIDRATOS
DETERMINACIÓN DE ALMIDÓN EN PLÁNTULAS DE TOMATE
Introducción.
El almidón transitorio es sintetizado en los cloroplastos de tejidos fotosintéticos como

uno de los productos de la fijación fotosintética de CO 2 atmosférico. El almidón
transitorio se acumula a modo de 5-7 gránulos insolubles por cloroplasto durante el día,
gránulos que son degradados durante la noche asegurando una disponibilidad constante
de azúcares a toda la planta. Funciona, por tanto, tamponando los cambios en la
disponibilidad de fotoasimilados como consecuencia del ciclo diurno de luz-oscuridad.
El mayor dinamismo de la síntesis y degradación de este tipo de almidón (síntesis
durante el día y degradación durante la noche subsecuente) es el responsable de su
nombre. La cantidad de fotoasimilados que son dirigidos a la síntesis de almidón
transitorio varía de unas especies a otras. La tinción de hojas con lugol permite
visualizar el contenido en almidón de estas hojas. El lugol es una solución yodada con
afinidad por los polímeros de glucosa. El lugol tiñe el almidón debido a que las
moléculas de yodo se alinean en el interior de las hélices formadas por las cadenas de
glucosa.
Material vegetal.
Se utilizarán plántulas de tomate de 10 días sometidas a 72 hs de oscuridad. El

tratamiento control recibirá 72 hs de luz continua.
Técnica.
Se cortarán las plántulas (tres de cada tratamiento) y se colocarán en tubos de 50 ml

conteniendo 30 ml de etanol 96%. Se cerrarán con tapa, teniendo la precaución de no
cerrarla herméticamente, y se sumergirán en agua hirviendo durante 10 min hasta la
pérdida total de clorofila.
Una vez enfriados, se descartará el etanol y se realizarán dos enjuagues con agua
destilada. Posteriormente se colocan las plántulas en placas de petri y se las cubrirá con
una solución de lugol al 5% (5% p/v I2 y 10% p/v KI) durante 10 minutos. Una vez
transcurrido ese tiempo, se descartará el lugol y se enjuagará con agua destilada.
Las placas se colocaran sobre un papal blanco y se observarán las diferencias entre
tratamientos.
69
Trabajo Práctico Nº 8. BIOQUÍMICA DEL CICLO DEL NITRÓGENO
DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD DE NITRATO REDUCTASA "IN VIVO"
Introducción.
En condiciones normales de cultivo, los nitratos (NO 3-) del suelo son los componentes
nitrogenados preferentemente absorbidos por el sistema radicular. Los nitratos
absorbidos del suelo pueden seguir tres destinos:
a) ser reducidos en las células de las raíces;
b) ser almacenados en vacuolas de las células de las raíces y de las hojas;
c) ser transportados a órganos fotosintetizadores para ser allí reducidos.
La primera enzima involucrada en la reducción de los nitratos dentro de la planta es la

nitrato reductasa (EC: 1.6.6.1). Esta enzima, que se encuentra también presente en
otras células eucarióticas (de hongos y algas verdes) cataliza la reducción del nitrato
(NO3-) a nitrito (NO2-) utilizando NADH o NADPH como dadores de electrones, según
la siguiente reacción:
NO3- + NAD(P)H + H+ NO2- + NAD(P)+ + H2O
En cereales se han identificado 2 isoenzimas de nitrato reductasa: una dependiente de

NADH (predominantemente en hojas) y otra que usa indistintamente NADH o NADPH
(presente en órganos no fotosintetizadores como raíz y escutelo).
Fundamento.
La incubación de trozos de 1 cm de hoja de Paspalum sp. en presencia de sustrato

(NO3K) y en oscuridad (de forma de frenar la actividad de la nitrito reductasa) permite
valorar colorimétricamente la cantidad de NO 2- (producto) producidos por la actividad
de la nitrato reductasa.
Técnica.
Se cortan 5 trozos de hoja de 1 cm de Paspalum sp. y se suspenden en un tubo de

ensayo 5 ml de solución reguladora de fosfatos 1M, pH=7,5 que contiene isopropanol
4% y nitrato de potasio (NO3K) 0,02N.
Se incuba en oscuridad, a 30°C durante 1 hora y 30 minutos. Transcurrido ese lapso, se
toma 1 ml. del incubado y se coloca en otro tubo de ensayo con 1 ml de solución de
sulfanilamida 1% (P/V) en HCl 3N, y 1 ml de solución de naftilendiamina 0,01% (P/V).
Se mezcla y se lee la absorbancia a 540 nm contra un blanco que se realiza
reemplazando el ml de incubado por 1 ml de buffer. La absorbancia obtenida con el
ensayo se convierte en microgramos de NO 2- producidos mediante una curva
previamente realizada con cantidades crecientes de droga estándar.
La actividad de la nitrato reductasa se expresa en µg de NO 2- producidos en 1 hora por
gramo de peso fresco (el dato de peso fresco de los discos de hoja utilizados será
proporcionado por el docente).
70
Curva de calibración
0.8
0.7
0.6
y = 0.0046x
Absorbancia
0.5
R2 = 0.9624
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
g de NO2
A partir de los valores de absorbancia obtenidos en la experiencia calcule los

microgramos de NO2- presentes en la solución. En función de la cantidad de nitritos, el
peso del material vegetal y el tiempo de incubación, exprese la actividad enzimática de
la siguiente forma:
AE = g NO2-
m (g) . t (minutos)
Reacciones de cuantificación de nitrito.
71
Trabajo Práctico Nº 9. BIOQUÍMICA DE LA GERMINACIÓN
ACTIVIDAD AMILÁSICA EN SEMILLAS DE CEREALES EN GERMINACIÓN
Introducción.
Durante el proceso de germinación de los cereales ocurren una serie de

acontecimientos metabólicos desencadenados por señales hormonales desde el
embrión que inducen la producción de enzimas hidrolíticas las cuáles permiten la
asimilación de compuestos de reserva. La figura 1 esquematiza lo que sucede en un
grano de cebada al inicio de la germinación: al hidratarse el embrión produce ácido
giberélico o giberelina (AG), una hormona vegetal que migra a través del endosperma
hacia la capa de aleurona cuyas células perciben el AG a través de receptores e
inducen la síntesis de enzimas hidrolíticas, principalmente α-amilasa. Una vez que
comienza la hidrólisis del almidón por α-amilasa se exponen numerosos extremos no
reductores desde los cuales comienza la hidrólisis mediada por β-amilasa. De forma
antagónica al AG, el ácido abscísico (ABA) bloquea la producción de α-amilasa y
suprime la germinación de la semilla. Se ha propuesto que el ácido salicílico (AS), una
fitohormona clave en la señalización molecular en respuesta a estrés, es otro inhibidor
de la germinación en cebada (Xie et al. 2007).
Figura 1. Diagrama del corte longitudinal de un grano de cebada que muestra la

actividad que se desarrolla en diferentes regiones de la semilla con respecto a las
hormonas, enzimas y algunos de los productos de la acción enzimática (Black, 1972).
Fundamento.
La actividad de las enzimas amilolíticas es regulada hormonalmente en el grano de

cebada y puede ser visualizada mediante la hidrólisis de almidón, polisacárido capaz de
formar un complejo coloreado con una solución de I 2KI (Reactivo de Lugol).
Técnica.
Etapa 1: Inducción de la síntesis de amilasas

Semillas de cebada, con y sin embrión, se germinan en bandejas con el agregado de 20
ml de agua destilada o solución de hormonas: ácido giberélico (AG) 50 µM y ácido
72
salicílico (AS) 5 mM. En condiciones normales, la síntesis de amilasas es inducida
durante la germinación.
• Semillas germinadas con embrión en agua destilada (tubo 3)
• Semillas germinadas sin embrión en agua destilada (tubo 4)
• Semillas germinadas con embrión en ácido salicílico (tubo 5)
• Semillas germinadas sin embrión en ácido giberélico (tubo 6)
Etapa 2: Evaluación cualitativa de la actividad amilolítica

Para evaluar la actividad amilolítica, se toman de 3 a 4 semillas sometidas a los
diferentes tratamientos, se cortan por la mitad con bisturí y se colocan en tubos
conteniendo una solución de almidón al 0,25% (2 ml).
En este trabajo práctico utilizaremos 6 tubos:

*2 tubos control (1 y 2)
*4 tubos tratamiento (3 al 6)
Nº de tubo 1 2 3 4 5 6
Controles Tratamientos realizados previamente
Tratamiento Semillas Semillas Semillas Semillas
Control Control germinadas germinadas germinadas germinadas
positivo sin negativo sin con embrión sin embrión con embrión sin embrión
semillas semillas en agua en agua en ácido en ácido
destilada destilada salicílico giberélico
Cantidad de
semillas - - 6-8 mitades 6-8 mitades 6-8 mitades 6-8 mitades
Agua
destilada (ml) - 2 - - - -
Solución de
almidón 2 - 2 2 2 2
0,25 % (ml)
Incubar a 40 ºC durante 15-45 minutos, agregar 1 gota de reactivo de lugol y observar la
coloración.
Coloración
73
Trabajo Práctico Nº 10. METABOLISMO SECUNDARIO
DETERMINACIÓN DE TANINOS EN SORGO
Introducción.
Los taninos son una variedad de polifenoles, ampliamente distribuidos en plantas. Los
grupos fenólicos de los taninos se unen fuertemente a proteínas mediante la
formación de enlaces de hidrógeno con los grupos –NH de péptidos, y estos enlaces no
pueden ser escindidos por las enzimas digestivas.
Fundamento.
El test se basa en la reducción del ion ferrico en ion ferroso por los taninos, seguido
por la formación del complejo coloreado ferricianida-ion ferrico (comúnmente
conocido como Azul de Prusia).
Técnica.
Colocar 2,5 gr de sorgo molido en un tubo de ensayo grande, agregar 50 ml de agua

destilada, tapar y agitar durante 3 minutos. Dejar descansar 1 minuto.
Tomar 1 ml del sobrenadante y colocarlo en otro tubo de ensayo. Agregar 1 ml de
solución de cloruro férrico (Cl3 Fe 8 mM en HCl 8 mM) y 1 ml de solución de
ferricianuro de potasio (Fe (CN)6 K3 3mM). Agitar y observar cambio de coloración al
minuto.
Considerando las estimaciones de la siguiente tabla, ¿Qué contenido estimado de

taninos tiene la muestra estudiada?
Color Contenido de taninos

Azul Alto
Turquesa Moderadamente alto
Verde oscuro Moderado
Verde Intermedio
Verde claro Bajo
74
Trabajo Práctico Nº 11. BIOQUÍMICA DEL ESTRÉS
EVALUACIÓN DE DAÑO LIPÍDICO E INTEGRIDAD DE MEMBRANAS EN PLANTAS DE

SOJA SOMETIDAS A ESTRÉS SALINO
Introducción.
La salinidad de los suelos es uno de los factores que más restringen la productividad
agrícola. En Argentina se encuentran afectadas por salinidad 600.000 hectáreas de
suelos irrigados (http://www.fao.org/ag/agll/supsh/topic2.htmargentina).
Entre las causas que conducen a la salinización de los suelos las más relevantes son:
lluvias de agua salina en zonas costeras, contaminación por erosión de rocas madre y
por sales oceánicas y el riego con aguas de mala calidad.
Tras la salinización del medio las plantas se ven desafiadas por varias condiciones de
estrés. El mecanismo de acción involucra principalmente un estrés hiperiónico (dado
por el aumento de la concentración de Na +, Cl- y SO42-) y un estrés hiperosmótico. Estos
dos componentes conducen en última instancia a un desbalance nutricional y estrés
oxidativo. El déficit hídrico, la toxicidad iónica y la falta de K + determinan la
acumulación de especies activas del oxígeno (EAO) disparando el estrés oxidativo. La
conjunción de todas estas formas de estrés limita el crecimiento de las plantas.
Material Vegetal.
Se utilizarán plantas de soja (Glycine max L.) crecidas en macetas con vermiculita en
cámara climatizada a 24 ± 2°C, con fotoperiodo de 16 horas y una intensidad lumínica
de 300 µmol m-2 s-1. Las plantas se mantendrán con solución nutritiva Hoagland. Un
lote de plantas mantendrá esas condiciones (plantas control) y otro lote será
sometido a un tratamiento salino de 48hs con una concentración 200 mM de NaCl
(plantas tratadas).
Técnica.
Determinación de la permeabilidad iónica en hojas.
Las hojas se cortarán en piezas de 30mm y serán enjuagadas con agua destilada. Se
colocarán en tubos de vidrio con 15 ml de agua desionizada a 25°C y luego de 20
minutos se determinará la conductividad eléctrica en la solución (C1). Luego, los
tubos se colocarán en un baño a 80°C por 90 minutos y se medirá nuevamente la
conductividad (C2). Exprese la permeabilidad iónica como porcentaje (Permeabilidad
iónica % = C1/C2 X 100).
Detección histoquímica de peroxidación lipídica en raíces.
Se colocarán raíces de 20 mm en recipientes de vidrio con 5 ml de reactivo de Schiff,

que detecta los aldehídos originados en la peroxidación de lípidos, por 30 minutos en
agitación constante. Luego las raíces se lavarán 3 veces con una solución de
pirosulfito de Na (0,5% [p/v] Na2S2O5 en 0,05 M Hcl). Observe la coloración final de
las raíces y compare entre tratamientos.
75
Detección histoquímica de pérdida de integridad de membranas.
El azul Evans es un colorante que se utiliza para evaluar integridad de membranas ya

que sólo puede ingresar en aquellas células que tienen su membrana celular dañada.
Se colocarán raíces de 20 mm en recipientes de vidrio con 5 ml de una solución Azul de
Evans (0,025% [p/v] en 100 µM CaCl2, pH 5.6) durante 10 minutos en agitación. Luego
se realizarán 3 lavados con 100 µM CaCl 2 (pH 5.6). Observe la coloración final y
compare entre tratamientos.
76
Trabajo Práctico Nº 12. TRANSFERENCIA DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
EXTRACCIÓN DE ADN DE BANANA
Introducción.
Toda la información genética esencial para la vida está contenida en el ácido
desoxirribonucleico (ADN) que contiene el organismo. En términos bioquímicos, los
ácidos nucleicos son macromoléculas compuestas de nucleótidos unidos en forma
covalente por medio de enlaces fosfodiester entre los carbonos de las posiciones 3´ y
5´ de dos residuos de azúcares adyacentes. Esta estructura forma un esqueleto de
azúcares y fosfatos constante en toda la macromolécula. La variación entre los
nucleótidos que constituyen la cadena de ácido nucleico está dada por sus bases
nitrogenadas. Así, una cadena o hebra de ácido nucleico, tendrá una estructura
primaria determinada por la secuencia de las bases que la componen.
La macromolécula de ADN está compuesta por dos cadenas nucleotídicas antiparalelas
que se enlazan entre sí formando una doble hélice. Los enlaces entre ambas hebras de
ADN están determinados por puentes de hidrógeno entre bases nitrogenadas
complementarias de una y otra cadena. Estos enlaces mantienen estable la estructura
de doble hélice de ADN, en la cual se pueden distinguir pares de nucleótidos o pares
de bases (pb). Estos pb pueden usarse como unidad de tamaño o longitud para las
moléculas de ADN, de esta manera podemos decir por ejemplo que el genoma
humano tiene un tamaño de 3,2 x 109 pb o lo que es lo mismo de 3.200 Megabases
(Mb). Todas las células deben enfrentarse al problema de cómo lograr contener en su
estructura moléculas tan grandes como el ADN. Esto se logra mediante el
empaquetamiento del ADN junto con numerosas proteínas del tipo histonas y no
histónicas.
El análisis del genoma de cualquier organismo invariablemente requiere de la
obtención del DNA en una cantidad y calidad adecuada. Para cumplir este fin, se han
diseñado diferentes técnicas las cuales básicamente buscan lisar suavemente a las
células y solubilizar su DNA. Posteriormente se remueven los contaminantes
(nucleasas, proteínas, lípidos, polisacáridos) para finalmente concentrar el DNA.
Objetivo.
El objetivo del trabajo práctico es la extracción de ADN de banana.
Técnica.
1. Cortar una rodaja de banana de 1 cm aproximadamente y colocarla en un tubo
falcon de 50 mL.
2. Agregar 5 mL de buffer TrisHCl 50 mM (pH 8) y desmembrar el tejido con la
ayuda de una varilla de vidrio. Mantener el tubo a 0°C.
3. Añadir con pipeta, 2 ml de EDTA (Ácido Etilen Diamino Tetraácetico) 0,25 M pH
8 y mezclar suavemente con la varilla durante 10 minutos.
4. Agregar 1 ml de Triton X-100 9% (v/v), mezclar bien con la varilla y dejar 30
minutos a temperatura ambiente.
5. Agregar 1 ml de Acetato de Sodio 3 M (pH 5,2) y mezclar con la varilla.
6. Filtrar a través de una gasa situada sobre un embudo y recolectar el extracto en
un vaso de precipitados de 50 ml.
77
7. Agregar lentamente 10 ml de Etanol frío mientras otra persona mezcla
suavemente con la varilla. En esta etapa, el ADN precipita formando hebras que
se enrollan a la varilla.
8. Transferir el ADN con ayuda de la varilla a un tubo limpio.
¿Qué característica del ADN posibilita la utilización de etanol y Acetato de sodio para
la precipitación mediante el protocolo utilizado?
78
Trabajo Práctico Nº 13. BIOTECNOLOGÍA
ELECTROFORESIS DE ADN EN GELES DE AGAROSA
Introducción.
La electroforesis en gel de agarosa es un método que separa ácidos nucleicos por su

tamaño, carga eléctrica y otras propiedades físicas. El término electroforesis es usado
para describir la migración de una partícula cargada bajo la influencia de un campo
eléctrico. Por lo tanto, a lo que se refiere la electroforesis en gel es la técnica en la cual
las moléculas son forzadas a través del gel ubicado en un espacio impulsado por una
corriente eléctrica.
Los ácidos nucleicos están cargados de forma negativa debido a su esqueleto de
grupos fosfato a los valores de pH normalmente utilizados en electroforesis (alrededor
de 8). Por lo tanto, en una electroforesis, los ácidos nucleicos migrarán hacia el polo
positivo (ánodo). La agarosa es un polisacárido extraído de algas marinas que tiene la
propiedad de mantenerse en estado sólido a temperatura ambiente pero que a altas
temperaturas se vuelve líquido. Esta característica permite una fácil preparación de
una matriz para ser usada en electroforesis: simplemente se pesa la cantidad de
agarosa requerida, se disuelve en un tampón adecuado, se calienta y se vierte sobre un
molde particular. La concentración de agarosa típicamente utilizada para electroforesis
está entre el 0.5 % y el 2%, y se escoge según el tamaño del ácido nucleico a analizar.
Durante la electroforesis, los ácidos nucleicos lineales con un alto peso molecular
migrarán al ánodo más lentamente que ácidos nucleicos lineales con un menor peso
molecular. En el caso de ácidos nucleicos no linealizados, como plásmidos circulares en
conformación nativa, la migración no solo dependerá del peso molecular sino también
de otros aspectos como el grado de superenrollamiento que éste posea.
La visualización del DNA se realizará bajo luz ultravioleta, después de tinción con un
colorante fluorescente que se intercala entre las bases del DNA. La radiación
ultravioleta a 254 nm es absorbida por el DNA y puede ser utilizado para detectar su
presencia. El análisis del tamaño de los distintos fragmentos se realiza por
comparación con un marcador de pesos moleculares: fragmentos de DNA del fago
lambda digerido con HindIII cuyos tamaños son conocidos.
Objetivo.
Análisis por electroforesis en gel de agarosa la amplificación de un fragmento de ADN

obtenido por PCR
Técnica.
Cada grupo correrá en el gel de agarosa un control negativo y una muestra incógnita,
provenientes de la amplificación por PCR de un fragmento de un gen.
Preparación del gel 1.5 % y corrida electroforética

1. Pesar 0,75 g de agarosa en un erlenmeyer.
2. Agregar 50 ml de buffer TAE 1X.
3. Disolver la agarosa en microondas por 1 min.
4. Agregar 5 µl de GelRed.
79
5. Al enfriarse volcar la solución en la cama del gel, eliminar cualquier burbuja que
impida la corrida de la muestra.
6. Luego de gelificado colocar la cama con el gel en la cuba de electroforesis.
7. Sembrar 10 uL de cada muestras en los pocillos.
8. Sembrar siempre un marcador de tamaño por gel.
9. Correr a 70 V por 1 hora.
10. Visualizar el gel en un transiluminador y estimar el tamaño del producto de
PCR en pb.
80

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8 Fotosíntesis. Reacción de Hill Fotosíntesis. Fotorrespiración (C4-

9 Síntesis de almidon en hojas Transferencia de la Información Genética

Recomendaciones mínimas para el trabajo en laboratorio…………………………… 16

Modelo de informe de laboratorio………………………………………………………………. 17

Situaciones Problemáticas Integradoras……………………………………………………….. 33

Trabajos Prácticos Experimentales………………………………………………………………… 57

Nombre de la Asignatura: Bioquímica Aplicada

Correlativas requeridas: Biomoléculas (regular)

Carga Horaria para el Alumno: 4 horas semanales (obligatorias) durante 16 semanas.

Jefes de trabajos Prácticos

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