Separacion parcial de componentes fenólicos en extractos acuosos de

hoja de granado mediante reacciones a la gota sobre papel de filtro

Quirante Candel A.

Resumen

Se describe un sencillo ensayo de reacciones a la gota sobre papel de filtro que permite la
separación parcial de componentes fenólicos, presentes en extracto acuoso de hoja verde de
granado, detectables por estimación densitométrica de la coloración de los productos de reacción de
estos compuestos con Fe(III).

Introducción
El propósito de este artículo es mostrar sencillas experiencias realizables en un laboratorio de
Química General basadas en ensayos a la gota de disoluciones de extractos acuosos de hoja de
granado sobre un papel de filtro seco, previamente impregnado de una disolución de reactivo
Fe(III), teniendo en cuenta la capacidad reactiva del ion Fe(III) con extractos acuosos vegetales
(Quirante Candel A. et al. 2016) .Entre los componentes de los extractos acuosos de hoja de
granado figuran distintos tipos de polifenoles capaces de formar complejos coloreados con Fe(III)
( Elfalleh1 W. et al.2012;Manel Mekni et al2013) . Estos compuestos, de intensa coloración,
pueden separarse parcialmente en estos ensayos y ser motivo de determinaciones cuali y
cuantitativas de las sustancias responsables de las mismas (Ruy Li al. 2016). La bibliografía
muestra también ejemplos de estimación cuantitativa de este tipo de sustancias a partir de medidas
densitométricas de desarrollos cromatográficos TLC de reacciones coloreadas de Fe(III) con
compuestos fenólicos presentes en extractos acuosos vegetales ( Hachula U. et al. 2005)

Parte experimental

A) Modo de reacción y estimación fotométrica

1) Se impregna un cuadrado de
papel de filtro de 5x5 cm
aproximadamente con una disolución
de reactivo Fe(III) 0,05M y se deja
secar

2) Desde un cuentagotas se vierte

muy lentamente una pequeña
muestra de disolución de extracto
vegetal a ensayar( M) sobre el papel
impregnado de Fe(III) (R)preparado
anteriormente procurando que se
desarrolle una mancha circular desde
el punto de incidencia de la muestra
en el papel de filtro impregnado de
 reactivo.
3) Se obtiene una fotografía digital
de la mancha circular obtenida que,
en condiciones adecuadas, podrá
ofrecer una serie de coronas
circulares concéntricas.

Se selecciona una sección

rectangular S tal como indica la
figura y se amplía (A) para posterior
estudio
4) Sobre la imagen de la sección
ampliada (A) proporcionada por un
ordenador se coloca una
fotorresistencia registrando el valor
de la resistencia R ofrecida mediante
un polímetro P para las distintas
posiciones al centro de la mancha

5) Se estima como absorbancia A en

cada punto la magnitud

A= (x/r)log(R/Rb)

x__distancia al centro de imagen

r__radio del círculo imagen
R__señal resistencia en x
Rb__resistencia para blanco
referencia

La gráfica A=f(x/r) obtenida para una muestra dada podrá proporcionar una serie de bandas mas
o menos complejas que cuantifica la respuesta de distintos tipos de compuestos coloreados
parcialmente separados en la imagen obtenida por el reactivo Fe(III) en las condiciones dadas de la
reacción.

B) Tipos de muestras a ensayar

Los ensayos se aplicaran a 3 tipos de materia vegetal correspondientes a distintos estados de

evolución de hojas originariamente verdes de granado, a saber: hoja verde sin secar, hoja verde
secada a la sombra, y hoja inicialmente verde que expuesta al medio ambiente exterior durante
unos días se degrada y oxida tomando un color marrón. Para posterior citación se referencia cada
una de ellas con un código de texto identificativo que muestra la siguiente tabla

Muestra Código
Hoja verde tierna HVT
Hoja verde seca HVS
Hoja verde seca degradada HVSD
 C) Condiciones de tratamiento de la muestra y de las imágenes obtenidas.
Se llevarán a cabo para cada una de las muestras dos extracciones diferentes: una en agua
destilada y otra en disolución saturada de bicarbonato sódico.

La aplicación del procedimiento experimental descrito a cada una de las extracciones

proporcionará sendos desarrollos circulares en papel de filtro para la determinación experimental de
la correspondiente gráfica A=f(x/r).

Sometiendo cada uno de los dos desarrollos circulares en papel de filtro obtenidos anteriormente
a una atmósfera de NH3 se producirán cambios apreciables de coloración que modificarán las
respuestas A=f(x/r) obtenidas anteriormente. Para posterior citación se referencia cada una de las
cuatro imágenes obtenidas con un código numérico identificativo que muestra la siguiente tabla

Muestra Código
Extracto acuoso sin exposición a NH3 00
Extracto acuoso con exposición a NH3 01
Extracto con bicarbonato sin exposición a NH3 10
Extracto con bicarbonato con exposición a NH3 11

Tratamiento de datos

Cada una de las gráficas experimentales A=F(x/r) obtenidas se someten a un proceso de

aproximación teórico como suma del mínimo número de bandas parabólicas capaces de ajustarse
suficientemente a la correspondiente gráfica experimental. El proceso de cálculo utilizado es el
descrito por Quirante A(2015) y permite obtener para cada una de las bandas teóricas obtenidas los
siguientes parámetros

x/r inicial de la banda (X0)

x/r máximo de la banda (Xm)
A máximo de la banda (Ym)

Muestra 1 : Hoja verde seca (HVS)

HVS 00 HVS 01

0,07 0,12
0,06 0,1
0,05 0,08
0,04 0,06
0,03 0,04
0,02 0,02
0,01 0
0 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1
 HVS 10
0,04 HVS 11
0,035 0,16
0,03 0,14
0,025 0,12
0,02 0,1
0,015 0,08
0,01 0,06
0,005
0,04
0
0,02
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1
0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1

Figura 1.- Gráficas experimentales A=f(x/r) (trazo azul) y aproximaciones de bandas teóricas
(trazo rojo) de reacciones a la gota sobre papel de filtro impregnado de Fe(III) 0,05 M de extractos
en agua y en disolución saturada de bicarbonato sódico de hoja verde de granado seca con o sin
revelado posterior con vapores de NH3

Tablas 1.- Parámetros de las bandas proporcionadas por la aproximación teórica en cada una
de las gráficas A=f(x/r) de la figura 1.

HVS 00 HVS01

Bandas Xo Xm Ym
Bandas Xo Xm Ym
1 0 0,14 0,024
1 0 0,09 0,015 2 0,13 0,21 0,02
2 0,045 0,24 0,06 3 0,2 0,3 0,045
3 0,35 0,45 0,015 4 0,3 0,37 0,016
4 0,65 0,75 0,01 5 0,32 0,4 0,012
5 0,75 0,85 0,01 6 0,36 0,46 0,051
7 0,55 0,81 0,1

HVS 10 HVS 11

Muestra 2: Hoja verde seca degradada

 HVSD 00 HVSD 01
0,09 0,14
0,08 0,12
0,07
0,1
0,06
0,05 0,08
0,04 0,06
0,03 0,04
0,02
0,02
0,01
0 0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1

HVSD10 HVSD 11
0,45
0,09 0,4
0,08 0,35
0,07 0,3
0,06 0,25
0,05 0,2
0,04 0,15
0,03 0,1
0,02 0,05
0,01 0
0 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1

Figura 2.- Gráficas experimentales A=f(x/r) (trazo azul) y aproximaciones de bandas teóricas
(trazo rojo) de reacciones a la gota sobre papel de filtro impregnado de Fe(III) 0,05 M de extractos
en agua y en disolución saturada de bicarbonato sódico de hoja verde de granado seca y degradada
con o sin revelado posterior con vapores de NH3

Tablas 2.- Parámetros de las bandas proporcionadas por la aproximación teórica en cada una de
las gráficas A=f(x/r) de la figura 2.

HVSD 00 HVSD 01
 HVSD10
HVSD 11

Muestra 3:Hoja verde tierna

HVT 10
HVT 00
0,05
0,14
0,045
0,04 0,12
0,035 0,1
0,03
0,08
0,025
0,02 0,06
0,015
0,04
0,01
0,005 0,02

0 0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1

HVT 11
HVT 01

0,12 0,16

0,14
0,1
0,12
0,08 0,1

0,08
0,06
0,06

0,04 0,04

0,02
0,02
0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1
0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1

Figura 3- Gráficas experimentales A=f(x/r) (trazo azul) y aproximaciones de bandas teóricas (trazo
rojo) de reacciones a la gota sobre papel de filtro impregnado de Fe(III) 0,05 M de extractos en
agua y en disolución saturada de bicarbonato sódico de hoja verde tierna de granado con o sin
revelado posterior con vapores de NH3

Tablas 3.- Parámetros de las bandas proporcionadas por la aproximación teórica en cada una de
las gráficas A=f(x/r) de la figura 3.

HVT 00 HVT 01

HVT 10 HVT 11

Discusion y conclusiones

Las gráficas A=f(x/r) presentan en términos generales una mancha difusa para valores de x/r
entre 0 y 0,6 (banda A) y otra mas definida para valores de x/r entre 0,7 y 1 (banda B). En todo caso
la respuesta coloreada que muestran puede atribuirse a la reacción de distintos tipos de compuestos
fenólicos presentes en la hoja de granado con el reactivo Fe(III). La localización de la banda A a
valores bajos de x/r podría deberse a la formación de compuestos poco solubles mientras que la
posición de los compuestos de la banda B en valores extremos de x/r estaría originada por
complejos fenólicos de Fe(III) de mayor solubilidad.

Por otra parte la banda la banda B, generalmente mas definida y localizada, puede ser originada
por un número reducido de especies responsables, mientras que la banda A debería atribuirse a un
mayor número de componentes. Los resultados de los parámetros proporcionados por las
aproximaciones teóricas parecen confirmar este extremo.

La evolución de las bandas A y B para las distintas condiciones de obtención de la imagen

pueden ofrecer alguna información cualitativa sobre la evolución con el pH de los distintos
componentes presentes en las mismas. En una primera aproximación cualitativa podemos suponer
que el pH de las imágenes obtenidas para cada muestra crece en el sentido de la clave numérica 00,
10, 01 y 11.
 La evolucion de la intensidad de las bandas B con el pH es congruente con el hecho de que sean
originadas por complejos de algun componente de la muestra con Fe(III) implicados en equilibrios
químicos del tipo

HX + Fe+3 <==> X Fe+2 + H +

La respuesta de las bandas A presenta una mayor complejidad que no permite este tipo de
consideraciones. Es de destacar el notable aumento en esta banda de la muestra de hoja seca
degradada para las condiciones de mayor pH (muestra HVSD 11), que puede estar relacionado con
descomposiciones asociadas a la degradación.

La determinación de las especiesresponsables de las bandas detectadas es una interesante cuestión

que escapa del alcance de este trabajo. En la bibliografía se describe la presencia en hoja de granado
de compuestos fenólicos detectablespor su reacción coloreada con Fe(III) tales como ácido
gálico(Ahmed E. et al.2009;) y taninos (Sahar A et al.1997;XIANG Lan et al. 2008 )

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