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    Informe 3

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    Este documento describe los materiales y métodos para tres tipos de tinción de microorganismos: tinción simple, tinción Gram y tinción ácido resistente. Se explican los pasos para cada tinción y sus objetivos, como identificar características morfológicas de bacterias y determinar si son Gram positivas o negativas. La conclusión resume que las tres tinciones son necesarias para identificar plenamente los microorganismos.

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    Este documento describe los materiales y métodos para tres tipos de tinción de microorganismos: tinción simple, tinción Gram y tinción ácido resistente. Se explican los pasos para cada tinción y sus objetivos, como identificar características morfológicas de bacterias y determinar si son Gram positivas o negativas. La conclusión resume que las tres tinciones son necesarias para identificar plenamente los microorganismos.

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    MICROBIOLOGÍA GENERAL

    1. MATERIALES Y MÉTODOS

    1.1 MATERIALES

    1.1.1 TINCIÓN SIMPLE CON COLORANTES BÁSICOS.

    Porta y Cubreobjetos Aceite de Inmersión Azul de Metileno

    Cristal Violeta Pizeta Papel Secante

    Mechero Fisher Microscopio

    1.1.2 TINCIÓN DIFERENCIAL GRAM

    1
    MICROBIOLOGÍA GENERAL

    Porta y Cubreobjetos Aceite de Inmersión Alcohol-cetona

    Cristal Violeta Pizeta Papel Secante

    Mechero Fisher Microscopio Asa de kolle

    Lugol

    1.1.3 TINCIÓN DIFERENCIAL ÁCIDO RESISTENTE

    Porta y Cubreobjetos Aceite de Inmersión Carbolfucsina

    2
    MICROBIOLOGÍA GENERAL

    Cristal Violeta Pizeta Baño Maria

    Mechero Fisher Microscopio Asa de kolle

    Rejilla de Asbesto

    1.2 MÉTODOS
    1.2.1. TINCIÓN SIMPLE CON COLORANTES BÁSICOS:

    3
    MICROBIOLOGÍA GENERAL

     Coloque las láminas fijadas de microorganismos sobre el soporte para


    tinción.
     Agregue 5 o 6 gotas de cada colorante dejando que actúen por un tiempo
    de: 30 segundos para el azul de metileno; 10 segundos para el cristal
    violeta; y 5 segundos para la carbolfucsina.
     Una vez cumplido el tiempo para los colorantes, lave cada lámina con la
    pizeta de agua.
     Seque las láminas al aire o dentro del papel secante.
     Examine las preparaciones tenidas bajo el objetivo de inmersión (100-
    150X) de un microscopio compuesto.
     Elabore los esquemas de sus observaciones destacando las diferencias en
    tamaño, forma y agrupaciones que se presenten.

    1.2.2 TINCIÓN DIFERENCIAL GRAM

     Prepare una lámina fija de cada uno de los cultivos microbianos


    proporcionados y una lámina fija con la mezcla de Staphylococcus y
    Echerichia coli.
     Agregue cristal violeta y deje que actúe por 30 a 60 segundos.
     Enjuague con agua.
     Decolore con alcohol-acetona. Para una película delgada, la exposición
    al decolorante por 10-20 segundos es suficiente.
     Enjuague con agua.
     Aplique el colorante de contraste safranina por 30 segundos.
     Enjuague con agua y seque la lámina al aire o dentro de papel secante.
     Examine cada muestra bajo el objetivo de inmersión.

    1.2.3 TINCIÓN DIFERENCIAL ACIDO RESISTENTE:

     Prepare una muestra fija del microorganismo proporcionado y luego


    colocar sobre agua hirviente.
     Agregue a la preparación verde malaquita hasta cubrirla totalmente y
    dejarlo por 5 minutos.
     Lavar con agua suavemente.
     Cubrir con safranina. Mantenga esta condición durante 3 minutos,
    evitando que el colorante se seque o entre en ebullición.

    4
    MICROBIOLOGÍA GENERAL

     Lavar con agua y secar con papel filtro.


     Examinar con objetivo de inmersión.
     Lave con alcohol ácido hasta que resulte incoloro.
     Enjuague con agua.
     Cubra la preparación con verde malaquita dejando que actúe por dos
    minutos.
     Enjuague con agua.
     Seque la lámina al aire o dentro del papel secante.
     Examine al microscopio compuesto bajo un objetivo de inmersión.
     Elabore los esquemas correspondientes.

    CONCLUSIÓN

    En las prácticas realizadas en el laboratorio de Microbiología General, para


    identificar las características morfológicas de las Bacterias, fue necesario
    realizar tres tipos de tinciones (Tinción Simple, Tinción Diferencial Gram,
    Tinción Diferencial Ácido Resistente). En la tinción simple hemos podido
    identificar los microorganismos a previa coloración, en la Tinción Diferencial
    Gram existen dos grupos principales de bacterias (Gram (+) y Gram (-)) pero
    en la práctica que realizamos identificamos que el microorganismo era Gram (-)
    y en la Tinción Diferencial Ácido Resistente, llegamos a la conclusión de que en
    el microorganismo evaluado en este caso (Clostridium) existen presencia de
    endosporas microbianas.

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