IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS

LIPID´S IDENTIFICATION

AUTORES
Paula Natali Jimenez Martinez 20181180058
Venus Valentina Mora Piernagorda ​2018118005
Wilson Rincon Cruz ​201721800584

Identificación de Lípidos ,(2020). ​pnjimenezm@correo.udistrital.edu.co​, ​vv rap@correo.udistrital.edu.co,​

wilsonrincon9@gmail.com

RESUMEN también a las pruebas de Salkowski,

En el siguiente informe se tendrán en Libermann y Schiff​, con las cuales se
cuenta algunas de las pruebas para busca identificar las sustancias a las cuales
identificación de biomoléculas, más el colesterol tiene reacción según su
específicamente para lípidos, que son estructura molecular, sin embargo, no
moléculas encargadas de cumplir todas las pruebas logran detectar algunas
funciones de vital importancia, entre las características de las sustancias por lo cual
cuales se encuentran: ​“aportadores de el resultado es negativo cuando
energía, estructuradores de la membrana teóricamente se esperaría que fuese
celular, protectores de órganos, positivo.
mediadores hormonales, entre otros”
(Hoyos, 2014), determinando los Palabras clave:​ Lípidos, Solubilidad,
imprescindibles para que la vida siga su Aislamiento, Fosfolípidos, Colesterol,
curso. Asimismo, en el presente texto se Salkowski, Liberman, Shiff
realiza una descripción y análisis de las
pruebas de laboratorio a continuación INTRODUCCIÓN
descritas , en primer lugar se busca
identificar la solubilidad de un lípido para Los lípidos son biomoléculas encargadas
lo cual se usan 4 muestras de posibles de realizar un conjunto específico de
solventes (Agua destilada, cloroformo, funciones dentro de los seres vivos entre
éter y alcohol ) y se les agrega dos las cuales podemos encontrar energéticas,
líquidos diferentes (Aceite de hígado de componentes estructurales primarios de las
Bacalao y Aceite de olivo) para identificar membranas biológicas y aunque en menor
en cuál de las 4 se forma una solución proporción, también funcionan como parte
entre el lípido y el solvente, de hormonas, antioxidantes, factores de
Adicionalmente se presenta una prueba de crecimiento vitales y algunas vitaminas.
aislamiento de fosfolípidos con una yema Algunos ejemplos son fosfolípidos, los
de huevo así como de colesteroles por esteroides, los carotenoides, las grasas y
medio de una muestra de cerebro de los aceites, fácilmente identificables por su
origen animal, con esta última, se da paso estructura y función. Así mismo estas
biomoleculas se caracterizan por corta (≤ 10 átomos de carbono), de cadena
disolverse únicamente en solventes no media (12 o 14) y de cadena larga (≥16).
polares, como el éter, el cloroformo y la Según la presencia o no de dobles enlaces
acetona. Las funciones de los lípidos en su cadena hablamos de ácidos grasos
también son variadas. Diversas clases de saturados, cuando carecen de ellos,
moléculas lipídicas, son componentes monoinsaturados, cuando tienen un doble
estructurales importantes de las enlace, y poliinsaturados, cuando tienen al
membranas celulares. Otro tipo, las grasas menos 2 dobles enlaces, (Díaz, 2011)
y los aceites (ambos son triacilgliceroles),
almacenan energía de modo eficaz. Otras
clases de moléculas lipídicas son señales
químicas, vitaminas o pigmentos. Por
último, algunas moléculas lipídicas que se
Imagen 1.recuperada de
encuentran en las cubiertas externas de http://biblio3.url.edu.gt/Publi/Libros/2013/Bioquim
varios organismos tienen funciones ica​/
protectoras o impermeabilizantes.
Asimismo, se consideran las lipoproteínas,
los complejos de lípidos y las proteínas Triacilgliceroles: Los triacilgliceroles son
que transportan los lípidos en los animales. ésteres de glicerol con tres moléculas de
ácidos grasos (Fig. 2). Los glicéridos con
CLASES DE LÍPIDOS uno o dos grupos ácido graso, que se
Los lípidos pueden clasificarse en : 1. denominan monoacilglicerol es y
Ácidos grasos 2. Triacilgliceroles 3. diacilgliceroles, respectivamente, son
Ésteres de ceras 4. Fosfolípidos 5. intermediarios metabólicos. Se encuentran
Esfingolípidos 6. Isoprenoides (moléculas presentes en general en cantidades
formadas por unidades repetidas de pequeñas. Debido a que los
isopreno, un hidrocarburo ramificado de triacilgliceroles no tienen carga ( el grupo
cinco carbonos).​ ​(Rodríguez​,​ 2005) carboxilo de cada ácido graso está unido al
glicerol mediante un enlace covalente), se
Ácidos grasos: Son ácidos orgánicos les denomina en ocasiones grasas neutras.
monocarboxílicos que se encuentran La mayoría de las moléculas de
formando parte de los triglicéridos o como triacilgliceroles contienen ácidos grasos de
ácidos grasos “libres” en plasma diversas longitudes, que pueden ser
(asociados a albúmina). Tienen una insaturados, saturados o una combinación
estructura de cadena lineal anfipática con de ambos. Dependiendo de sus
un extremo polar (carboxilo) y una cadena composiciones de ácidos grasos, las
apolar que finaliza con un grupo metilo. mezclas de triacilgliceroles se denominan
Por razones de biosíntesis, en los grasas o aceites. Las grasas, que son
organismos superiores sólo existen ácidos sólidas a temperatura ambiente, contienen
grasos con un número par de átomos de una gran proporción de ácidos grasos
carbono y en función de ese número se saturados. Los aceites son líquidos a
clasifican como ácidos grasos de cadena temperatura ambiente debido a su
contenido relativamente elevado el ácidos
grasos insaturados. (Recuérdese que los
ácidos grasos insaturados no se sitúan tan
juntos como los ácidos grasos saturados.)
(Ferrier, R. 2014)

Imagen 3 estructura del Colesterol. recuperada de

es.wikipedia.org/wiki/Colesterol

Imagen 2. recuperada de Las lipoproteínas: Las lipoproteínas son

http://biblio3.url.edu.gt/Publi/Libros/2013/Bioquim estructuras esféricas subcelulares
ica evolutivamente desarrolladas para el
transporte de lípidos insolubles en el
torrente sanguíneo. Están compuestas por
El colesterol: El colesterol es una
estructura molecular de un cubierta polar que contiene
apolipoproteínas, fosfolípidos y colesterol
ciclofentanoperhidrofenantreno (esterano)
libre y, por un núcleo en el que se hallan
con cabeza polar (grupo hidroxilo) y cola
los elementos hidrofóbicos (ésteres de
apolar. Presente en las células de los
animales vertebrados, es componente colesterol y triglicéridos).
esencial de las membranas plasmáticas y
VLDL: ricas en triglicéridos y colesterol,
precursor de lipoproteínas, sales biliares,
son las encargadas del transporte endógeno
vitamina D y hormonas . Por su carácter
de lípidos desde el lugar de síntesis
hidrofóbico, en sangre es transportado por
hepática a los tejidos periféricos. Se
las lipoproteínas y, a nivel celular se puede
consideran partículas aterogénicas
encontrar formando parte de las
membranas o en el citoplasma en forma de especialmente las de menor tamaño y
contenido en triglicéridos y sus remanentes
“gotitas grasas”, previa esterificación con
(IDL)
un ácido graso pues el exceso de colesterol
libre es tóxico para la célula. El acúmulo LDL: producto final del metabolismo de
de colesterol esterificado intracelular,
las VLDL son altamente aterogénicas,
especialmente en macrófagos, también es
especialmente las de pequeño tamaño y
perjudicial para el hombre, favoreciendo el
gran densidad (fenotipo B).
desarrollo de lesiones ateroscleróticas.
Dado que consumimos, absorbemos, HDL: sus precursores proceden del
sintetizamos y no podemos metabolizar hígado, intestino y del catabolismo de
completamente el colesterol, y que su otras lipoproteínas. Son las protagonistas
acúmulo es deletéreo, no es de extrañar del transporte reverso de colesterol desde
que su homeostasis esté sujeta a complejos tejidos periféricos hasta el hígado para su
y finos mecanismos de regulación.
eliminación biliar. Se les considera, por reactivos , se debe tener precaución para
tanto, como partículas antiaterogénicas. no recibir quemaduras graves.
Método: Se disuelve uno o dos cristales de
colesterol en cloroformo seco en un tubo
Pruebas realizadas de ensayo seco. Añadir varias gotas de
Prueba de Salkowski​: Cuando a las anhídrido acético y después 2 gotas de
soluciones clorofórmicas de colesterol se conc.H ​2 SO ​4 y mezclar cuidadosamente.
les adiciona un volumen igual de ácido Después de terminada la reacción, la
sulfúrico concentrado, y se mezclan concentración de colesterol se puede medir
suavemente, se desarrolla un color rojo usando ​espectrofotometría .( ​Campbell,
característico en la capa clorofórmica. El Mary K. & Shawn O, 2005)
color obtenido resulta de la formación de
dobles enlaces adicionales o bien a partir
Reacción de Schiff: es un reactivo para la
de la condensación de 2 moléculas de
detección de ​aldehídos​, que también ha
colesterol para formar bioesteroides.
encontrado uso en la tinción de ​tejidos
biológicos. (​William A. Albert J. 1974)
Prueba Liebermann-Burchard o prueba
de anhídrido acético: se utiliza para la El reactivo de Schiff es el producto de una
detección de ​colesterol . La formación de reacción que incluye colorantes tales como
un color verde o verde-azul después de la ​fucsina y ​bisulfito de sodio​;
unos minutos es positivo. pararosanilina (que carece de un grupo
Lieberman-Burchard es un ​reactivo metilo aromático) y la nueva fucsina son
utilizado en un ​ensayo colorimétrico para otras dos alternativas para la detección
detectar el colesterol, lo que da un color química de aldehídos.
verde profundo. Este color se inicia como En su uso como una prueba cualitativa
un violáceo, de color rosa y progresa a para aldehídos, se añade la muestra
través de un color verde muy oscuro a desconocida con el reactivo de Schiff
continuación, de color verde claro. El decolorado; cuando el aldehído está
color es debido al grupo hidroxilo (-OH) presente se desarrolla un color ​fucsia
de colesterol reaccionar con los reactivos y característico. Reactivos del tipo de Schiff
el aumento de la conjugación del se utilizan para diversos métodos de
un-saturación en el anillo fusionado tinción de tejidos biológicos.
adyacente. Dado que este ensayo usa
anhídrido acético y ​ácido sulfúrico como
METODOLOGÍA

RESULTADOS

Solvente Resultado
ACEITE DE ACEITE HIGADO DE
OLIVO BACALAO

Agua destilada
Insoluble Insoluble
Alcohol
Cloroformo
Soluble Soluble
Eter
​Tabla 1.Resultados Prueba de solubilidad
lipidos
REACCIÓN RESULTADO POSITIVO

Schiff Coloración rojo Ladrillo

Dos capas de coloración, amarillo parte de

Salkovski
abajo y ámbar arriba

Lieberman-Burchard Verde Esmeralda

​ ​Tabla 2. Resultados Reacción Schiff, Salkowski

​ y​ Lieberman al reaccionar con colesteroles

ANÁLISIS DE RESULTADOS llevando consigo resultados no esperados,

si se confronta con la literatura relacionada
Para la disolución de dos o más sustancias con los enlaces polares no polares
debe existir semejanza en las polaridades (Repetto, 1997)
de su molécula, lo que significa; lo
semejante disuelve lo semejante, por este Según Guarnizo y Martínez (2009), la
motivo el agua al ser un compuesto polar, baja solubilidad de los lípidos es debida a
disuelve con facilidad sustancias polares que su estructura química es
tales como; ácidos, hidróxidos y sales fundamentalmente hidrocarbonada
inorgánicas. (alifática, alicíclica o aromática), con
gran una gran proporción de enlaces C-H
Se establece una relación de los 13 ​y C-C. El comportamiento de estos
compuestos en los que el aceite de oliva enlaces es 100% ​covalente y su momento
presentó solubilidad, según Repetto dipolar es mínimo. El ​agua, al ser una
(1997), el agua es una sustancia polar, al molécula muy polar, con gran ​capacidad
igual; el etanol y la acetona son para formar puentes de hidrógeno, no ​es
disolventes orgánicos polares, por lo que, apta para interaccionar con estas
teniendo en cuenta el grado de afinidad de moléculas. ​Por otro lado, los lípidos logran
soluto y solvente, el aceite de oliva crea solubilizarse ​en disolventes orgánicos,
una mezcla inmiscible al juntarse con como el éter, ​cloroformo, acetona,
dichas sustancias. Por otra parte, el benceno, etc.; debido a que poseen una
cloroformo y el éter son determinados estructura química semejante.
como disolventes orgánicos no polares
posibilitando que el aceite se disolviera Davillin, T (2000) explica que la mayoría
sencillamente produciendo una sola fase. de las membranas contienen colesterol y es
En el caso de las fases generadas en las el tercer lípido mayoritario presente en las
pruebas donde no se produce una solución mismas. Según Pocovi, M (2004) “el
deseada, la distribución de las fases (fondo colesterol es insoluble en agua y soluble en
y superficie) está vinculada con las los solventes orgánicos apolares, se
densidades de las sustancias. La pureza de disuelve bien en acetona, éter, benceno,
los reactivos pues afectar la prueba, cloroformo, sulfuro de carbono, éter de
petróleo, alcohol caliente pero poco obteniéndose el ion carbonio 3-5
soluble en alcohol fino”. Debido a esta colestadieno, este es el primer paso de la
solubilidad en el alcohol caliente fue reacción de color, la oxidación secuencial
posible extraer los lípidos. Según Rivera de este ion carbonio alílico, lo que genera
(2005) las lectinas precipitan fácilmente la coloración resultante
agregando cetona, lo que se enlaza con la
turbidez observada, además; Rivera CONCLUSIONES:
(2005), también afirma que al agregar agua
● Las moléculas no polares tales
a la muestra, el colesterol se precipita en
como las grasas y los aceites no
forma cristalina, además; de esto la
poseen regiones de cargas parciales
hidrofobia de los lípidos también actúa
positivas o negativas por lo que no
haciendo posible la formación de una
son atraídas electrostáticamente por
emulsión tras agregar.
moléculas de sustancias polares.
En cuanto al aislamiento de colesterol; ● Las moléculas polares y los iones
Pocovi, M (2004): “El colesterol es mal interactúan con los extremos
conductor de la electricidad al tener una parcialmente positivos y negativos,
constante dieléctrica alta con la cual es un de manera que las cargas positivas
buen aislante de descargas eléctricas. atraen a las negativas
Dicha característica explica al porque es ● La pureza del reactivo afecta
un componente importante en las directamente el resultado de la
estructuras de recubrimiento del tejido prueba, ocasionando que en
nervioso.”, motivo por la cual una de las algunas ocasiones se obtengan
maneras de aislar este lípido es a través de resultados no correspondientes.
la extracción a partir de un cerebro, al ● La forma estructural de las
aplicar la reacción de Liebermann para la sustancias influye en su
identificación, se especulaba que se comportamiento y a su vez en la
tornara inicialmente a una coloración relación que establezca con otros
violeta, característica de la prueba según elementos, la diferencia de
Clavo, L. (2004) la primera etapa de la densidades pueden hacer que los
reacción de Liebermann consiste en la resultados de solubilidad se
protonación del grupo OH del colesterol malinterpreten.
con la consiguiente pérdida de agua
BIBLIOGRAFÍA

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