Espectrofotometria

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
MOQUEGUA
FACULTAD DE INGENIERÍA DE MINAS
LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA

APLICADA
ESPECTROFOTOMETRIA DE HIERRO
Hecho por: Callomamani Callomamani Viviana

Código: 2019-103104
Viernes 13de noviembre del 2020

INTRODUCCION
Este es un método muy ampliamente usado en bioquímica y análisis de

laboratorio para determinar la concentración de una sustancia presente en
solución. Se le utiliza para medir la concentración de una sustancia presente
en un líquido biológico (sangre total, suero, plasma, orina, etc.) También
es útil para la cuantificación de una sustancia presente en un tejido, sea por
examen en el tejido de una actividad enzimática por ejemplo o por previa
extracción de la sustancia a partir del tejido y su posterior determinación.
También pueden ser empleados estos métodos para la identificación de una
sustancia o examinar algunas propiedades de ella a través de la
modificación de su espectro de absorción por ejemplo. Así, hay otros usos
que los iremos viendo conforme avancemos en desarrollo del curso.
OBJETIVOS:
 Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y las

variables involucradas.
 Determinar la concentración de una muestra problema
 Mediante la realización de los cálculos respectivos

realizamos mediciones para evaluar y analizar la exactitud y
precisión.
 Construir una curva patrón de la solución a diferentes

concentraciones.
 Poseer los conocimientos básicos necesarios para interpretar y

usar un espectrofotómetro de Absorción Atómica.
MARCO TEORÍCO
La espectrofotometría es uno de los métodos científicos utilizados para
medir la absorción de luz por parte de un compuesto y su concentración,
siendo este uno de los métodos de análisis más usados. Cuando se
hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de onda) sobre un
medio homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y
otra transmitida, como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea
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atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la
intensidad del rayo de luz transmitido.
Dependiendo del compuesto y el tipo de absorción a medir, la muestra
puede estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las regiones visibles y
ultravioleta del espectro electromagnético, la muestra es
generalmente disuelta para formar una solución. Cada sustancia tiene su
propio espectro de absorción, el cual es una curva que muestra la
cantidad de energía radiante absorbida, absorbancia, por la sustancia
en cada longitud de onda del espectro electromagnético, es decir, a
una determinada longitud de onda de la energía radiante, cada sustancia
absorbe una cantidad de radiación que es distinta a la que absorbe otro
compuesto.
MATERIALES:
 muestra
 Balones y matraces aforados ( 1 lt y 100ml )
 Pipetas graduadas y aforadas
 Pipeteadores
 Probeta de 100ml y 50ml
 Biker de 100ml y 50ml
 Sistema de filtración atmosférico abierto
 Frascos lavadores
 Luna de reloj
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 Agitador de vidrio
 Balanza confiable
 Espectrofotómetro
REACTIVOS
 Sulfato ferroso amoniacal
 Acetato de sodio
 Fenoltralina
 Cloruro de hidroxilamina
 2.5 ml de ácido sulfúrico
BALON
MATRACES
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PIPETAS GRADUADAS Y AFORADAS
PIPETEADOR
PROBETA
Página 4
BIKER
SISTEMA DE FILTRACION ABIERTO
LUNA DE RELOJ
FRASCO LAVADOR
Página 5
AGITADOR DE VIDRIO
BALANZA
ESPECTROFOTOMETRO
PROCEDIMIENTO:
PRIMERO
Se agitara la muestra, para que este homogénea. Se

verterá en un biker un poco de la muestra para
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llevarla al sistema de filtración abierto, esto para que residuos presentes se
queden en el filtro y solo obtener la muestra original.
SEGUNDO
Pesaje del sulfato ferroso amoniacal, utilizaremos la
balanza y una luna de reloj, pesaremos aprox 0.7 gr.
TERCERO
Luego vertiéremos lo pesado en un biker,
añadiremos 30 ml de agua destilada aprox y con un
agitador disolveremos el reactivo por completo.
CUARTO
Finalmente se agregara 2,5 ml de ácido
sulfúrico de igual manera lo disolveremos
para llevarlo al balón aforado de 1 Lt.
QUINTO
EL BALON AFORADO DE 1000ML Y ESTE SE
CONSTITUYE COMO EL ESTÁNDAR STOCK
Prepararemos los diferentes estándares de
trabajo, pero primero prepararemos el testigo cero
(blanco).
SEXTO
En el testigo blanco agregaremos 50 ml de agua des ionizada (que no tenga
presencia de hierro) agregaremos los diferentes reactivos generadores de
color.
Página 7
SEPTIMO
Prepararemos los seis estándares agregando 1, 5, 10 25,50 y 75 ml de la
solución stock, luego agregaremos los diferentes volúmenes específicos de
reactivos para la generación de color y finalmente se llevara al aforo para
preparar los estándares de trabajo.
Definiremos nuestra muestra sintética para hacer el cálculo de la exactitud
(muestra del docente) y la muestra real medir 50 ml de agua, agregar los
reactivos y aforar con la misma
agua hasta los 100 ml.
Se agregó los reactivos 8ml de
acetato de sodio, cloruro de
hidroximila 1 ml y finaltrolina 10
ml, terminado el agregado de
los reactivos se afora. Se
esperare 10 min para que la
reacción se suficiente para la
formación de color.
OCTAVO
Por ultimo utilizaremos el espectrómetro y

analizaremos cada muestra que hicimos, con
ayuda de las ecuaciones y gráficos, obtendremos el
resultado deseado.
CONCLUSIONES
Página 8
adecuado uso del
espectrofotómetro permitió
obtener en el
 El conocer el adecuado uso del espectrofotómetro permitió
obtener en el laboratorio resultados con alta calidad analítica
en las mediciones que son emitidas por este.
 Se identificó que el equipo presenta una adecuada precisión

y exactitud determinando que las mediciones realizadas en este
pueden ser confiables.
 La absorbancia es la capacidad que tiene algunos compuestos para

absorber la radiación electromagnética, por tanto, se puede observar
como dependiendo de una longitud a la cual se aplique a un
rayo, pueda alcanzar un punto máximo de absorción.
 Variando la cantidad de solvente se puede disminuir la absorbancia
REFERENCIAS
Arenas, I. & López, J. (2004, Junio). ESPECTROFOTOMETRIA DE
ABSORCION – MAESTRIA EN CIENCIAS BIOQUIMICAS.
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/espectrometria_de_abs
orcion.pdf
íaz, N.; Bárcena, A.; Fernández, E.; Galván, A.; Jorrín, J.; Peinado, J.;
Toribio, F. & Túnez, I. (s.f.). espectrometría: espectros de absorción y
cuantificación colorimétrica de biomoléculas. Recuperado de:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pd
Arenas, I. & López, J. (2004, junio). ESPECTROFOTOMETRIA
DE
ABSORCION – MAESTRIA EN CIENCIAS BIOQUIMICAS. Recuperado
de:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/espectrometria_de_abs
orcion.pdf
Página 9
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/
uploads/2010/08/2016-TP-1-ESPECTROFOTOMETRIA.pdf
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/
08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf
http://www.revistabiomedica.mx/index.php/revbiomed/article/
view/273/285
Página 10

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Viernes 13de noviembre del 2020

Este es un método muy ampliamente usado en bioquímica y análisis de

 Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y las

 Determinar la concentración de una muestra problema

 Mediante la realización de los cálculos respectivos

 Construir una curva patrón de la solución a diferentes

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SISTEMA DE FILTRACION ABIERTO

Se agitara la muestra, para que este homogénea. Se

Por ultimo utilizaremos el espectrómetro y

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