Volumen 37 Número 1 (2020) SEMESTRAL

INDEX ÍNDICE

Obituary Anunciacion Lafuente Giménez, Professor of Toxicology at the Obituario Anunciacion Lafuente Giménez, Catedrática de Toxicología de la
University of Vigo................................................................................................... 1 Universidad de Vigo............................................................................................... 1
EDITORIAL ......................................................................................................... 2 EDITORIAL........................................................................................................... 2
Pallardo-Fernández I, Muñoz-Rodríguez JR, González-Martín C, Alguacil LF. Pallardo-Fernández I, Muñoz-Rodríguez JR, González-Martín C, Alguacil.
Human clusterin gene polymorphisms associated with substance use Asociación entre polimorfismos del gen humano de clusterina y trastornos por
disorders…………………………………………………………………………..3 consumo de sustancias............................................................................................3
Retuerto-Figueroa MG, Ramos-Llica E, Gorriti-Gutiérrez AR, Gallardo-Jugo T, Retuerto-Figueroa MG, Ramos-Llica E, Gorriti-Gutiérrez AR, Gallardo-Jugo T,
Ortega-Romero E, Calixto-Cotos M, Cosquillo-Rafael M, Fuertes-Ruitón C, Ortega-Romero E, Calixto-Cotos M, Cosquillo-Rafael M, Fuertes-Ruitón C,
Quispe-Jacobo F, Villafuerte-Montes U. Pharmacognostic, antioxidant and Quispe-Jacobo F, Villafuerte-Montes U. Estudio farmacognóstico, antioxidante
cytotoxic study of Sinningia warmingii "papa madre"..................................... 6 y citotóxico de Sinningia warmingii "papa madre"………………………….... 6
Narváez M, Astudillo A , García N, Moscoso D, Mejía D, Vásquez P, Maza D, Narváez M, Astudillo A , García N, Moscoso D, Mejía D, Vásquez P, Maza D,
Bailón N. Genotoxic effect of PM2.5 particulate material collected in the urban Bailón N. Efecto Genotóxico del material particulado PM2.5 recolectado en la
area of the city of Cuenca - Ecuador in the Chinese hamster ovary cells line zona urbana de Cuenca - Ecuador sobre la línea celular de ovario de hámster
CHO-K1……………………………………………………………………….... 11 chino CHO-K1...................................................................................................... 11
Gabrielli TA, Voitzuk AP, Greco V, Osorio P, Alava Arteaga JR, Juárez FJ, Taiman Gabrielli TA, Voitzuk AP, Greco V, Osorio P, Alava Arteaga JR, Juárez FJ, Taiman
JN, Gallo IM. Bilateral radial paresis secondary to chronic lead exposure: a JN, Gallo IM. Paresia radial bilateral secundaria a exposición crónica a plomo:
case report............................................................................................................. 17 reporte de un caso..................................................................................................17
Ugokwe CU, Okafor F C, Okeke PC, Ezewudo BI, Olagunju TE. Induction of Videla C.G., Las Heras M., Ayala Y., San Román E. Inducción de alteraciones
Genetic Alterations and Oxidative Stress in Giant African Land Snail genéticas y estrés oxidativo en el Caracol de Tierra Africano Gigante
(Limicolaria aurora) Exposed to Municipal Waste Leachate ............................19 (Limicolaria aurora) expuesto al lixiviado de residuos municipales.................19
Álvarez-Freire I, Cabarcos Fernández P, Regenjo Vázquez M, Tabernero Duque
Álvarez-Freire I, Cabarcos Fernández P, Regenjo Vázquez M, Tabernero Duque
MJ, Bermejo Barrera AM. Investigación toxicológica en suicidios a partir de las
MJ, Bermejo Barrera AM.. Toxicological investigation in suicides from samples muestras recibidas en el Servicio de Toxicología Forense de la Universidad de
received at the Forensic Toxicology Service of the University of Santiago de Santiago de Compostela en el periodo 2009-2018...............................................26
Compostela in the period 2009-2018.................................................................. 26 Lugo-Vargas AF , Chaves-Silva DC, Quevedo-Buitrago WG, Martínez-Suárez JF.
Lugo-Vargas AF , Chaves-Silva DC, Quevedo-Buitrago WG, Martínez-Suárez JF. Catinonas sintéticas: una revisión del panorama actual y las estrategias de
Synthetic cathinones: a review of the current landscape and analytical detección analítica.................................................................................................31
detection strategies…............................................................................................31 Hernández C, Álvarez M. Un analisis de imagen por segmentación de la
histopatología producida por la acrilamida en el pez cebra adulto (Danio
Hernández C, Álvarez M. image analysis by segmentation of histopathology
rerio)…………………………………………………………………………….. 41
produced by acrylamide in the adult zebrafish (Danio rerio)............................41 Béjar Calzada CM, Pi-Figueres Valls M2, Clemente Rodríguez C, PallàsVillaronga
Béjar Calzada CM, Pi-Figueres Valls M2, Clemente Rodríguez C, PallàsVillaronga O, Arnau Barrés I, Calpe Perarnau X, Cirera Lorenzo I, Supervía Caparrós A.
O, Arnau Barrés I, Calpe Perarnau X, Cirera Lorenzo I, Supervía Caparrós A. Características de las intoxicaciones agudas en pacientes ancianos según la
Characteristics of acute poisonings in elderly patients according to age ……44 edad........................................................................................................................44
Duque JJ, Caicedo J, Estrada AF, Berrouet MC, Zuluaga-Gómez M. Experience Duque JJ, Caicedo J, Estrada AF, Berrouet MC, Zuluaga-Gómez M. Experiencia
in the management of intoxications by Beta-blockers and Calcium-antagonists: en el manejo de intoxicaciones por Betabloqueadores y Calcioantagonistas:
serie de casos y revisión de la literatura............................................................ 48
case series and review.......................................................................................... 48
Goya-Jorge E, de Julián-Ortiz JV, Gozalbes R, Revisión de los modelos
Goya-Jorge E, de Julián-Ortiz JV, Gozalbes R, Protection against Endocrine computacionales que relacionan la estructura química con la disrupción del
Disruption through Quantitative Structure-Activity Relationship sistema endocrino..................................................................................................55
modelling...............................................................................................................55

Incluido en Scopus, Latindex, REDALYC, REDIB, IBECS, ICYT, Index Copernicus, IME, Recolecta, EMBASE/Excerpta Medica y Chemical Abstracts
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ASOCIACIÓN ESPAÑOLA DE TOXICOLOGÍA

Rev. Toxicol. 37 (1), 1-68 (2020)
ISSN 0212-7113
Certificado de Excelencia (2016-2019)
 Revista de ------------

Toxicología
ÓRGANO OFICIAL DE LA ASOCIACIÓN ESPAÑOLA DE TOXICOLOGIA

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coordinar sus esfuerzos a fin de contribuir al desarrollo y difusión http://revista.aetox.es
de los conocimientos en las diferentes áreas de la toxicología. Su
Estatuto fundacional fue aprobado oficialmente el 15 de enero de El Equipo Editorial: revista@aetox.es
1980.
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Toda persona interesada en pertenecer a esta Asociación deberá
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cumplimentar una ficha de inscripción, refrendada por la Junta
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Directiva. La cuota anual (60 €) se abona por domiciliación
Alimentación, Toxicología y Medicina Legal.
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organizados por la asociación. Una vez admitidos los nuevos Dra. Emilia Ferrer García. Universitat de València
asociados recibirán un titulo y, periódicamente, las actas de las
reuniones y comunicación de actividades con carácter nacional e Editores asociados:
internacional que pueden ser de interés. Dra. María P. Míguez Santiyán. Universidad de Extremadura
La asociación promueve la celebración, cada dos años, del Dr. Juan Carlos Rios Bustamante. Pontificia Universidad Católica de
Congreso Español de Toxicología, cuya organización puede Chile
delegar. Además se ha establecido la celebración periódica de
seminarios o mesas redondas organizadas por grupos de trabajo.
Cada reunión de este tipo será monotemática y abierta a personas D.L.:C0-723-83.
no pertenecientes a la Asociación, y se desarrollará en diferentes
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ciudades españolas.
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Asociación Española de Toxicología

Secretaría de la AETOX
Emma Martín López Área de Toxicología
Facultad de Veterinaria. Universidad de Murcia.
Tel: 86888 7022/9311 e-mail: emmaml@um.es

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Obituary Anunciacion Lafuente Giménez, Professor of Toxicology at the Obituario Anunciacion Lafuente Giménez, Catedrática de Toxicología de la
University of Vigo................................................................................................... 1 Universidad de Vigo............................................................................................... 1
EDITORIAL ......................................................................................................... 2 EDITORIAL........................................................................................................... 2
Pallardo-Fernández I, Muñoz-Rodríguez JR, González-Martín C, Alguacil LF. Pallardo-Fernández I, Muñoz-Rodríguez JR, González-Martín C, Alguacil.
Human clusterin gene polymorphisms associated with substance use Asociación entre polimorfismos del gen humano de clusterina y trastornos por
disorders…………………………………………………………………………..3 consumo de sustancias............................................................................................3
Retuerto-Figueroa MG, Ramos-Llica E, Gorriti-Gutiérrez AR, Gallardo-Jugo T, Retuerto-Figueroa MG, Ramos-Llica E, Gorriti-Gutiérrez AR, Gallardo-Jugo T,
Ortega-Romero E, Calixto-Cotos M, Cosquillo-Rafael M, Fuertes-Ruitón C, Ortega-Romero E, Calixto-Cotos M, Cosquillo-Rafael M, Fuertes-Ruitón C,
Quispe-Jacobo F, Villafuerte-Montes U. Pharmacognostic, antioxidant and Quispe-Jacobo F, Villafuerte-Montes U. Estudio farmacognóstico, antioxidante
cytotoxic study of Sinningia warmingii "papa madre"..................................... 6 y citotóxico de Sinningia warmingii "papa madre"………………………….... 6
Narváez M, Astudillo A , García N, Moscoso D, Mejía D, Vásquez P, Maza D, Narváez M, Astudillo A , García N, Moscoso D, Mejía D, Vásquez P, Maza D,
Bailón N. Genotoxic effect of PM2.5 particulate material collected in the urban Bailón N. Efecto Genotóxico del material particulado PM2.5 recolectado en la
area of the city of Cuenca - Ecuador in the Chinese hamster ovary cells line zona urbana de Cuenca - Ecuador sobre la línea celular de ovario de hámster
CHO-K1……………………………………………………………………….... 11 chino CHO-K1...................................................................................................... 11
Gabrielli TA, Voitzuk AP, Greco V, Osorio P, Alava Arteaga JR, Juárez FJ, Taiman Gabrielli TA, Voitzuk AP, Greco V, Osorio P, Alava Arteaga JR, Juárez FJ, Taiman
JN, Gallo IM. Bilateral radial paresis secondary to chronic lead exposure: a JN, Gallo IM. Paresia radial bilateral secundaria a exposición crónica a plomo:
case report............................................................................................................. 17 reporte de un caso..................................................................................................17
Ugokwe CU, Okafor F C, Okeke PC, Ezewudo BI, Olagunju TE. Induction of Videla C.G., Las Heras M., Ayala Y., San Román E. Inducción de alteraciones
Genetic Alterations and Oxidative Stress in Giant African Land Snail genéticas y estrés oxidativo en el Caracol de Tierra Africano Gigante
(Limicolaria aurora) Exposed to Municipal Waste Leachate ............................19 (Limicolaria aurora) expuesto al lixiviado de residuos municipales.................19
Álvarez-Freire I, Cabarcos Fernández P, Regenjo Vázquez M, Tabernero Duque
Álvarez-Freire I, Cabarcos Fernández P, Regenjo Vázquez M, Tabernero Duque
MJ, Bermejo Barrera AM. Investigación toxicológica en suicidios a partir de las
MJ, Bermejo Barrera AM.. Toxicological investigation in suicides from samples muestras recibidas en el Servicio de Toxicología Forense de la Universidad de
received at the Forensic Toxicology Service of the University of Santiago de Santiago de Compostela en el periodo 2009-2018...............................................26
Compostela in the period 2009-2018.................................................................. 26 Lugo-Vargas AF , Chaves-Silva DC, Quevedo-Buitrago WG, Martínez-Suárez JF.
Lugo-Vargas AF , Chaves-Silva DC, Quevedo-Buitrago WG, Martínez-Suárez JF. Catinonas sintéticas: una revisión del panorama actual y las estrategias de
Synthetic cathinones: a review of the current landscape and analytical detección analítica.................................................................................................31
detection strategies…............................................................................................31 Hernández C, Álvarez M. Un analisis de imagen por segmentación de la
histopatología producida por la acrilamida en el pez cebra adulto (Danio
Hernández C, Álvarez M. image analysis by segmentation of histopathology
rerio)…………………………………………………………………………….. 41
produced by acrylamide in the adult zebrafish (Danio rerio)............................41 Béjar Calzada CM, Pi-Figueres Valls M2, Clemente Rodríguez C, PallàsVillaronga
Béjar Calzada CM, Pi-Figueres Valls M2, Clemente Rodríguez C, PallàsVillaronga O, Arnau Barrés I, Calpe Perarnau X, Cirera Lorenzo I, Supervía Caparrós A.
O, Arnau Barrés I, Calpe Perarnau X, Cirera Lorenzo I, Supervía Caparrós A. Características de las intoxicaciones agudas en pacientes ancianos según la
Characteristics of acute poisonings in elderly patients according to age ……44 edad........................................................................................................................44
Duque JJ, Caicedo J, Estrada AF, Berrouet MC, Zuluaga-Gómez M. Experience Duque JJ, Caicedo J, Estrada AF, Berrouet MC, Zuluaga-Gómez M. Experiencia
in the management of intoxications by Beta-blockers and Calcium-antagonists: en el manejo de intoxicaciones por Betabloqueadores y Calcioantagonistas:
serie de casos y revisión de la literatura............................................................ 48
case series and review.......................................................................................... 48
Goya-Jorge E, de Julián-Ortiz JV, Gozalbes R, Revisión de los modelos
Goya-Jorge E, de Julián-Ortiz JV, Gozalbes R, Protection against Endocrine computacionales que relacionan la estructura química con la disrupción del
Disruption through Quantitative Structure-Activity Relationship sistema endocrino..................................................................................................55
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a ASOCIACIÓN ESPAÑOLA DE TOXICOLOGÍA

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Toxicología
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COMITÉ EDITORIAL/EDITORIAL BOARD

Directora/Editor In Chief
Guillermina Font Pérez. Universitat de Valencia. David Hernández Moreno. Instituto Nacional de
Spain. Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria.
Madrid. Spain.
Subdirectora/Deputy Editor-in-Chief Arantxa Martínez Caballero. Universidad Complutense de
Madrid. Spain.
Emilia Ferrer García. Universitat de Valencia.
Spain. Emma Martínez López. Universidad de Murcia. Spain.
Ana María Molina López. Universidad de Cordoba.
Editores Asociados/Associate Editor Spain.
Mª del Prado Míguez Santiyán. Universidad de Miguel A. Mora. Texas A&M University. Estados
Extremadura. Spain. Unidos.
Juan Carlos Ríos Bustamante. Pontificia Ana Isabel Morales Martín. Universidad de Salamanca.
Universidad Católica de Chile. Spain.
Consejo Editorial/Editorial Committee Rosario Moyano Salvago. Universidad de Cordoba.
Spain.
Rafael Balaña Fouce. Universidad de León. Spain.
Marcos Pérez López. Universidad de Extremadura. Spain.
Ana Bermejo Barrera. Universidad de Santiago de
Compostela. Spain. Silvia Pichardo Sánchez. Universidad de Sevilla. Spain.
Houda Berrada Ramdani. Universitat de Valencia. Ana Isabel Prieto Ortega. Universidad de Sevilla. Spain.
Spain. María José Ruiz Leal. Universitat de Valencia. Spain.
Ana María Cameán Fernández. Universidad de Gianni Sagratini. Università degli Studi di Camerino.
Sevilla. Spain.
Francisco Soler Rodríguez. Universidad de Extremadura.
Mónica Fernández Franzón. Universitat de Spain.
Valencia. Spain.
Sabina Stranno-Rossi. Universita Cattolica Sacro Cuore.
Fernando Gil Hernández. Universidad de Granada. Roma.
Spain.
María Jesús Tabernero Duque. Universidad de Santiago
Ángeles Jos Gallego. Universidad de Sevilla. de Compostela. Spain.
Spain.

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 Obituario

EN RECUERDO A NUESTRA COMPAÑERA ANUNCIACIÓN LAFUENTE

Anunciación Lafuente Giménez, miembro de la Asociación Española de

Toxicología (AETOX) desde comienzo de los años noventa, vicepresidenta
de la AETOX desde 2007 a 2013, ha sido una de esas personas cuyo paso por
la vida ha dejado una profunda huella tanto en sus amigos, compañeros de
universidad y discípulos a los que formó con gran dedicación durante su vida
profesional.
Anunciación Lafuente, para siempre Nunci, estudió Biología en la
Universidad de Santiago de Compostela y desarrolló principalmente su labor
docente e investigadora en las Facultades de Veterinaria de Lugo y de
Biología de la Universidad de Vigo en el Campus da Auga de Orense, siempre
impartiendo docencia en Toxicología, un área de conocimiento abundada de profesionales que entonces no
solían entender qué hacía un biólogo en ella. La fuerte personalidad de Nunci se caracterizó profesionalmente
por su competencia profesional, su extraordinaria capacidad de trabajo, su elevado sentido de la amistad y
del compañerismo y su rebeldía. Desde su Tesis Doctoral en 1991 en neuroendocrinología Nunci abordó la
ciencia desde la perspectiva de la experimentación animal con un enfoque aplicado a la seguridad alimentaria
y ambiental, sus trabajos, primero en endocrinología experimental, resultados de su Tesis doctoral, y después
incluyendo la exposición a tóxicos ambientales como el cadmio y ciertos plaguicidas organoclorados, hizo
que fuera una de las primeras investigadoras en España en utilizar el término de toxicidad neuroendocrina
para determinados tipos de compuestos. Más adelante, y con una visión clara del riesgo de exposición a estos
tóxicos y de su repercusión en la seguridad del consumidor, comenzó una línea puntera sobre la toxicidad del
perfluoroctano sulfonato (PFOS) de extraordinaria actualidad y que lamentablemente tuvo que interrumpir
por su enfermedad.
Nunci ejerció desde 1995 como Profesora Titular primero y a partir de 2006 como Catedrática de Toxicología
en la Universidad de Vigo impartiendo clases de Toxicología Alimentaria a los alumnos de Ciencia y
Tecnología de los Alimentos, hasta la aparición de su enfermedad. Nunci accedió a la Vicepresidencia de la
AETOX en 2007 a 2013, representando con su prestigio personal a nuestra Asociación en todos los eventos
nacionales e internacionales en los que participó. Para dar una idea de lo mucho que se llegaba a apreciar a
Nunci en su entorno académico valga el detalle de que durante los dos años que ha durado su enfermedad
han acudido con regularidad a su laboratorio no solamente muchos de sus compañeros de Facultad y de la
Universidad, sino también –y a pesar de la distancia generacional– estudiantes que querían saber cuando
volvería a reintegrarse en la docencia en plenas condiciones. Pero no fue así, los que seguimos su
convalecencia de cerca, vimos en varias ocasiones como nos hacía creer que las cosas iban mejor de lo que
eran en realidad. Hubo un momento en que pareció que realmente sería así, pero desafortunadamente la
enfermedad nos la arrebató.
Nunci nos dejó el pasado 31 de diciembre de 2019 tras dos largos años de una enfermedad que llevó con la
dignidad de una luchadora infatigable. Sus amigos, sus compañeros, discípulos y familiares nos quedamos
sin ella. Amiga Nunci, el vacío que dejas a los que creemos que te conocimos bien se echa mucho de menos,
tu curiosidad y respeto para los que tenían creencias opuestas a las tuyas, con los que te gustaba entablar
discusión y que ahora te añoran, tu sentido del humor y tu sabio magisterio en el laboratorio, en el que como
buena maña difícilmente dabas tu brazo a torcer se recordarán entre tus discípulos. Nos has dejado demasiado
pronto, justo en el momento en el que la experiencia y la madurez dan sus mejores frutos. Sin embargo,
permanecerá siempre en nuestro recuerdo tu personalidad inquebrantable, la lealtad a tus amigos y la
generosidad con discípulos y compañeros, tu vasto conocimiento y tu buen hacer. Donde quiera que te
encuentres ahora, descansa en paz.
David Ordóñez Escudero: CU Toxicología jubilado de la Universidad de León
Rafael Balaña Fouce: CU Toxicología de la Universidad de León

Rev. Toxicol (2020) 37 (1) 1

 Editorial

EDITORIAL

En estos tiempos de pandemia, consideramos una prioridad hacer referencia al momento que nos ocupa y
preocupa, porque la Revista de Toxicología trata temas de salud, y aunque este hecho no sea directamente
relevante desde el ámbito de la virología, y a primera vista, no parezca tener relación con el síndrome
respiratorio agudo SARS-CoV-2 entre otras manifestaciones de la enfermedad, si se presentan algunas
consecuencias relacionadas con la Toxicología.

La epidemia provocada por la Covid-19 variará nuestros hábitos, así como la utilización de diversos
materiales potencialmente tóxicos se verá incrementada. Algunas intoxicaciones como las producidas por
productos de limpieza han aumentado, originando diversos cuadros toxicológicos. Y posteriores
consecuencias relacionadas con potenciales agentes tóxicos se irán poniendo de manifiesto en un futuro.

Por ello como profesionales de la Toxicología tenemos la obligación de seguir velando por la salud de los
organismos vivos y los ecosistemas desde las diferentes ramas de la Toxicología.

Queremos una vez más dar las gracias a los investigadores que confían en la difusión de sus investigaciones
a la Revista de Toxicología y a los revisores que con su experiencia contribuyen a la calidad de las
publicaciones.

Os animamos a seguir comunicando vuestros resultados y conclusiones a través de la Revista de Toxicología

desde donde sirven a profesionales de la salud, docentes y estudiantes, así como a la población en general de
forma fácil al estar los ejemplares disponibles.

Animo a todas y todos, cuidaros y esperamos seguir recibiendo noticias vuestras.

EL EQUIPO EDITORIAL

2 Rev. Toxicol (2020) 37 (1)

 Rev. Toxicol (2020) 37: 3-5

Human clusterin gene polymorphisms associated with substance use disorders

Pallardo-Fernández I1, Muñoz-Rodríguez JR2, González-Martín C1, Alguacil LF1,*
1
Facultad de Farmacia, Universidad San Pablo-CEU, CEU Universities
2
Unidad de Investigación Traslacional, Hospital General Universitario de Ciudad Real
Abstract: Previous work revealed that the levels of clusterin in neurobiology of food and drug addiction (Volkow et al., 2013).
biological fluids are associated with loss of control over eating and According to this idea, previous studies in non-human primates
with the duration and intensity of tobacco use in humans. In non- revealed that chronic treatment with cocaine alters clusterin gene
human primates, chronic cocaine upregulates clusterin gene expression in the nucleus accumbens, a brain area deeply involved in
expression in the nucleus accumbens, a key area in addiction. All different kind of addictions (Freeman et al., 2001). Recent reports of
these findings have led to suggest that clusterin could be associated human studies are in agreement with these findings: thus, salivary
with the presence of different kind of addictive behaviours. In this levels of clusterin in nicotine addicts depended on the length of
work possible associations between clusterin gene polymorphisms tobacco use and the number of daily cigarettes consumed, and
and drug use disorder were studied. Forty-four selected single decreased after smoking cessation (Pallardo-Fernández et al., 2018).
nucleotide polymorphisms (SNPs) of the clusterin gene were studied Up to our knowledge the possible consequences of genetic variability
in DNA samples from 499 subjects diagnosed of substance use in the clusterin gene on the risk of developing addictions have not
disorder (addicted to alcohol, cocaine or both) and 500 control been studied, despite the fact that this variability is known to be
subjects. Genotyping was performed by using a multiplexing assay relevant in other diseases where clusterin is also involved, i.e.
and data were analysed with logistic regression. Four SNPs Alzheimer’s disease (Foster et al., 2019). Accordingly, this work has
(rs867231, rs867232, rs9331896 and rs11787077) were found explored possible associations between selected single nucleotide
significantly associated with the presence of substance use disorder. polymorphisms (SNPs) of the human clusterin gene and SUD.
These associations further extend the hypothesis that clusterin could
be a relevant protein in addiction. Materials and Methods
Keywords: Clusterin; Substance Use Disorder; Addiction; Alcohol; Genetic variants of the clusterin gene were studied in 499 subjects
Cocaine. diagnosed of SUD according to the Diagnostic and Statistical Manual
of Mental Disorders (4th ed., text rev.; American Psychiatric
Resumen: Asociación entre polimorfismos del gen humano de Association, 2000) and 500 control subjects (table 1). The SUD group
clusterina y trastornos por consumo de sustancias included patients that abused alcohol, cocaine or both drugs with
predomination of males, which is in accordance with the reported
Estudios previos han encontrado una asociación entre los niveles de
sex-biased proportion of addicts that seek treatment (European
clusterina en fluidos biológicos y la pérdida de control sobre la
Monitoring Centre for Drugs and Drug Addiction, 2019).
ingesta, así como entre dichos niveles y la duración e intensidad del
consumo de tabaco. Por otra parte, la administración crónica de Table 1. Main characteristics of the subjects included in the study. Numbers
cocaína a primates no humanos incrementa la expresión del gen de represent means ± SD.
clusterina en el Núcleo Accumbens, una región cerebral clave en las Drug addicts Controls
adicciones. Estos antecedentes sugieren que la clusterina podría estar
implicada en distintos tipos de trastornos adictivos. En este trabajo se
Sex (females : males) 108 : 391 250 : 250
han estudiado posibles asociaciones entre polimorfismos de un solo
nucleótido (single nucleotide polymorphisms, SNP) del gen de 40.2 ± 3.9
Age (years) 44.4 ± 10.6
clusterina y trastornos por consumo de sustancias (TCS). Se
genotiparon 44 SNP en muestras de ADN procedentes de 499 sujetos
diagnosticados de TCS (adictos al alcohol, cocaína o ambas drogas) Body mass index (kg/m2) 25.4 ± 4.6 26.2 ± 4.4
y 500 sujetos control. Para la secuenciación y el genotipado se utilizó
la plataforma Sequenom y el análisis estadístico de los resultados se Length of drug consumption (years) 21.8 ± 11.4
realizó mediante regresión logística. Se detectó una asociación
significativa entre 4 SNP (rs867231, rs867232, rs9331896 y Severity of drug dependence
rs11787077) y la presencia de TCS. Estos resultados apoyan la 7.5 ± 3.1
(SDSS/DSM-IV score)
hipótesis de que clusterina es una proteína relevante en las adicciones.
Palabras Clave: clusterina, trastornos por consume de sustancias,
addicción, alcohol, cocaina. DNA samples were collected and processed following standard
operating procedures with the appropriate approval of the ethical and
Introduction scientific committees of the biobanks involved and San Pablo CEU
University (USP 191-17). Samples from drug addicts were provided
Recent proteomic studies performed in morbid obese patients by the Spanish Biobank of the Addiction Disease Network (Biobanco
revealed that the plasma concentration of clusterin positively RTA), integrated in the Valencian Biobanking Network (Spain);
correlated with loss of eating control, one of the main dimensions of these samples were prepared by extracting genomic DNA from
food craving in these subjects (Rodríguez-Rivera et al., 2019). peripheral blood using the Real Blood DNA kit (Durviz-Real
Clusterin is a multifunction protein that was already known to Laboratory SL, Valencia, Spain) following manufacturer’s
mediate the effects of both leptin and ghrelin on appetite (Gil et al., instructions. Briefly, the protocol consists in a four-step process: lysis
2013), therefore the possibility exists that changes in the levels or of red blood cells, lysis of white blood cells followed by RNA
function of this protein could be potentially associated to pathological digestion, protein precipitation that leaves DNA in the supernatant,
conditions where problematic eating behaviours are expected to play and DNA concentration and purification by isopropanol
a key role, i.e. the food addiction phenotype of obesity (Davis et al., precipitation. The quantity and quality of the obtained DNA was
2011). This association could extend to substance use disorders measured by spectrophotometry using a NanoDrop 1000
(SUD), if we bear in mind the close relationship reported between the spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific, Wilmington DE,
USA). DNA samples were taken to a final concentration of 50 ng/µl
*e-mail: lfalguacil@ceu.es

3
 Rev. Toxicol (2016) 33:
Pallardo-Fernández 2 - 11
I, Muñoz-Rodríguez JR, González-Martín C, Alguacil LF
and stored at -80 ºC. Samples from control subjects were provided by Table 2. SNPs selected for this study. MAF, Minor Allele Frequency.
the National DNA Bank Carlos III (BNADN, Spain); genomic DNA
was also obtained in this facility from peripheral blood, using the SNP Locus MAF Type Wild allele
Gentra Puregene Blood kit (Qiagen, Vedbaek, Denmark). The steps rs4732729 15319638 0.4726 A/C C
were similar to those followed in the former procedure: red blood cell
rs9331936 15315658 0.0653 A/C A
lysis followed by white cell lysis, protein precipitation and DNA
precipitation with isopropanol. The DNA obtained was washed with rs9331931 15316250 0.1478 C/G C
70% ethanol, resuspended in DNA Hydration Solution (10 mM Tris, rs9331930 15316440 0.2636 A/C C
1 mM EDTA, pH = 7-8), normalized to 100 ng/µl and stored at -80 rs9331923 15319409 0.0581 C/T C
ºC. The concentration and purity of the DNA was determined with a
NanoDrop 2000c spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific, rs7812347 15318331 0.2640 A/G A
Wilmington DE, USA). A ratio of 260nm/280nm absorbances higher rs60056423 15317351 0.1480 A/C C
than 1.8 was considered indicative of optimal quality, and integrity rs66969288 15317786 0.1480 A/G G
was confirmed by loading 1 µl of the samples in 0.7% agarose gel to
check the presence of a single band after electrophoresis. rs76604252 15319510 0.0597 C/T T
rs9331908 15321764 0.4734 A/G G
Genomic DNA samples were sent to the Spanish National Center for
Genotyping (CEGEN-PRB3-ISCIII) to study 44 SNPs of the rs73679246 15321302 0.0715 A/G G
clusterin gene with a minor allele frequency greater than 5% that were rs9331888 15327008 0.3335 C/G G
selected from the dbSNP database (National Center for rs34109053 15328743 0.2198 A/G G
Biotechnology Information NCBI, USA) (table 2). Samples were
rs72417182 15329066:15329067 0.2961 --/AG -
normalized to 20 ng DNA/µl with Milli Q water in a Evo Freedom
liquid handling robot (Tecan, Männedorf, Switzlerand), then rs17515931 15328342 0.2105 A/C C
analysed by using a multiplexing platform (Sequenom iPLEX Gold, rs73231005 15328924 0.2109 C/G C
Agena Bioscience, San Diego CA, USA) based on a simple single- rs867230 15326649 0.3247 A/C C
base primer extension assay and Matrix-Assisted Laser
Desorption/Ionisation, Time-of-Flight mass spectrometry (MALDI- rs545243 15328286 0.0603 G/T G
TOF) for allelic discrimination. Briefly, polymerase chain reaction rs546076 15328357 0.0529 C/T C
(PCR) primers were designed in a region of approximately 100 base rs867232 15325329 0.1290 C/T T
pairs around each SNP of interest, and an extension primer was
rs9331892 15326151 0.0571 C/T C
designed immediately adjacent to the SNP; PCR products were
single-nucleotide-extended using dideoxynucleotide triphosphates rs867231 15325538 0.1264 C/G C
(ddNTPs) with some of their atoms substituted in order to generate rs2070926 15325967 0.2352 C/G C
weight differences between alleles. Mass spectrometry was then used
rs9331896 15325832 0.3828 T/C C
for allele differentiation by weight (Ragoussis et al., 2006).
rs4732731 15334320 0.0673 C/T C
The genotypes of drug addicts were compared to those of controls to
rs9331950 15312828 0.1030 C/T C
investigate SNPs associated with SUD by using logistic regression.
The model obtained fitted with data as shown by the Log Likelihood rs9331949 15312832 0.0966 A/G A
ratio test (p = 4.39x10-17), Nagelkerke’s R2 (0.31) and the percentage rs9331942 15313260 0.1200 C/T T
of subjects properly classified by the adjusted logistic model (70%). rs73679247 15323778 0.0731 A/C A
The level of statistical significance was set at p < 0.05.
rs1532277 15324327 0.2360 C/T C
Results rs1532278 15324461 0.2636 C/T C
Table 3 depicts four clusterin gene polymorphisms and the rs1982229 15332745 0.2342 C/T T
corresponding genotypes that were found to be significantly rs2279590 15314399 0.2406 A/G G
associated with the presence of SUD. As it is shown, three of these
rs3087554 15313588 0.2420 A/G G
SNPs were located within the signal peptide exon, while the
remaining one was intronic. rs11787077 15323458 0.3786 C/T T
rs10503814 15312721 0.0575 C/T C
Discussion
rs11136000 15322665 0.3782 C/T T
The results obtained clearly show the existence of associations
rs1532276 15324303 0.3706 C/T T
between several clusterin gene variants and the presence of SUD.
Some Odds Ratios reached high values, which is expected when the rs4236673 15323075 0.2346 A/G G
corresponding genotype is highly predominant in the total sample rs7982 15320627 0.3355 C/T C
(Cerda et al., 2013). These associations further extend the hypothesis rs9314349 15332348 0.2330 A/G G
that clusterin could be a relevant protein in addiction, as it was
suggested by the antecedents previously commented (Freeman et al., rs9331905 15322390 0.1348 A/G A
2001; Pallardo-Fernández et al., 2018; Rodríguez-Rivera et al., rs9331902 15323947 0.0715 A/G G
2019). A biological interpretation of these results cannot be yet rs536332 15333913 0.3117 A/G A
provided, bearing in mind that the functional consequences of the
genetic variants detected are largely unknown and thus require studied in models of neuronal damage induced by ischemia (May et
additional, specific work to be fully understood. Despite of this, it is al., 1992), β-amyloid deposition (Boggs et al., 1996), excitotoxicity
important to note that rs867232, rs867231 and rs9331896 could (Park et al., 2007) and trauma (Huang et al., 2016). Accordingly,
impact the signal peptide function, and hence could influence those genotypes linked to altered clusterin function could affect the
clusterin transportation and cellular location (Jarjanazi et al., 2008). vulnerability to suffer different diseases related with neuronal injury,
By turn, the intronic SNP rs11787077 could affect splicing. such as dementia and drug addiction. In fact, the latter parallelism is
A neuroprotective role has been proposed for clusterin after being observed in the case of rs9331896, since the T allele is associated
with higher risk of both SUD and Alzheimer’s disease (Lambert et

92
4 Rev.
Rev.Toxicol (2017)
Toxicol 34:
(2020) 843-5
37: - 93
 Rev. Toxicol (2016) 33: 2 - 11 Human clusterin gene polymorphisms associated with substance use disorders
Table 3. Clusterin gene variants significantly associated with drug use disorder. +, increased risk; -, decreased risk; OR = odds ratio; c.i. = 95% confidence interval.
SNP Locus Association Genotype OR c.i.

A_ 0.24 0.06 – 1.00

rs867232 Signal peptide exon -
AA 0.12 0.03 – 0.50

G_ 4.38 1.08 – 17.72

rs867231 Signal peptide exon +
GG 8.76 2.16 – 35.44

T_ 4.39 1.48 – 13.01

rs11787077 UTR / intron +
TT 8.79 2.97 – 26.02

C_ 0.26 0.09 – 0.77

rs9331896 Signal peptide exon -
CC 0.13 0.04 – 0.38

al., 2013), as well as other kinds of dementia (Nordestgaard et al., 9. Huang Z, Cheng C, Jiang L, Yu Z, Cao F, Zhong J, Guo Z, Sun X.
2018). We did not find in the literature additional associations Intraventricular apolipoprotein ApoJ infusion acts protectively in
between the remaining three SNPs identified in our study and any Traumatic Brain Injury. J. Neurochem. 2016; 136 (5), 1017-1025.
other disease. All these findings strongly recommend further
investigations on the role of clusterin gene variants and clusterin 10. Jarjanazi H, Savas S, Pabalan N, Dennis JW, Ozcelik H.
function in drug addiction. Biological implications of SNPs in signal peptide domains of
human proteins. Proteins 2008; 70 (2), 394-403.
Acknowledgements
11. Lambert JC, Ibrahim-Verbaas CA, Harold D, Naj AC, Sims R et
This work was supported by the Ministerio de Sanidad, Servicios al. Meta-analysis of 74,046 individuals identifies 11 new
Sociales e Igualdad (Plan Nacional sobre Drogas, PNSD 2016I025), susceptibility loci for Alzheimer’s disease. Nat. Genet. 2013; 45
Spain. We want to particularly acknowledge the patients, the (12), 1452-1458.
biobanks BNADN and Biobanco RTA (integrated in Valencian
12. May PC, Robison P, Fuson K, Smalstig B, Stephenson D, Clemens
Biobanking Network) for its collaboration, as well as Prof. Santiago
JA. Sulfated glycoprotein-2 expression increases in rodent brain
Angulo for helpful statistical advice. The genotyping service carried
after transient global ischemia. Brain Res. Mol. Brain Res. 1992;
out at CEGEN-PRB3-ISCIII is supported by grant PT17/0019 of the
15 (1-2), 33-39.
PE I+D+i 2013-2016, funded by ISCIII and ERDF.
13. Nordestgaard LT, Tybjærg-Hansen A, Rasmussen KL,
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1. American Psychiatric Association. Diagnostic and statistical clusterin and risk of dementia and ischemic vascular disease in the
manual of mental disorders (4th ed., text rev.). Washington DC: general population: Cohort studies and meta-analyses of 362,338
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 Rev. Toxicol (2020) 37: 6 - 10

Estudio farmacognóstico, antioxidante y citotóxico de Sinningia warmingii "papa

madre"
Retuerto-Figueroa MG *1ab, Ramos-Llica E1ac, Gorriti-Gutiérrez AR1ad, Gallardo-Jugo T1ac, Ortega-
Romero E1ae, Calixto-Cotos M2ae, Cosquillo-Rafael M1ag, Fuertes-Ruitón C3ad, Quispe-Jacobo F1g,
Villafuerte-Montes U4h
1
Grupo de Investigación de Farmacognosia y Medicina Tradicional “GRUPO FARMA”, Universidad Nacional San Marcos (UNMSM). Lima, Perú.
2
Grupo de Investigación de Alimentos Nativos, Recursos Nativos y Metabolismo oxidative. Universidad Nacional San Marcos (UNMSM). Lima, Perú.
3
Grupo de Investigación de Natural Resources Research (Nature)
4
Grupo de Investigación de Caracterización Integral y Procesos Tecnológicos de Alimentos Funcionales y Nutracéuticos. CIPTECAL
a
Químico Farmacéutico b Magister en Medio Ambiente y Desarrollo Sostenible
c
Bachiller en Farmacia y Bioquímica d Doctor en Farmacia y Bioquímica
e
Magíster en Productos Naturales y Biocomercio f Magister en Bioquímica
g
Licenciado en Química h Ingeniero de Alimentos

Resumen: Los estudios farmacognósticos, antioxidantes y subtrópicos del viejo y nuevo mundo (Kvist et al., 2005; Weber and
citotóxicos de plantas medicinales nativas de un país son la base para Skog, 2007). Sinningia es un género neotropical y comprende 68
el desarrollo e innovación de productos herbarios con actividad especies de hierbas (Chautems, 1990; Wang et al., 1990; Chautems
biológica. Sinningia warmingii, planta herbácea peruana con raíces at al., 2010). Sinningia warmingii (Hiern.) es una hierba con
tuberosas se evaluó según sus características farmacognósticas, tubérculos perennes y brotes anuales, se distribuye ampliamente en
antioxidantes y citotóxicas. Los resultados muestran compuestos Brasil, Colombia, Ecuador, Perú, Bolivia, Paraguay y Argentina
fenólicos, flavonoides y taninos como componentes mayoritarios, y (Kvist et al., 2005; Perret at al., 2006; Perret at al., 2007; Verdan et
trazas de alcaloides. La actividad antioxidante del extracto etanólico al., 2014). En el Perú, se encuentran 28 géneros y 150 especies de
según DPPH mostró capacidades antioxidantes de 85,75 y 90,25% en Gesneraceae, que son abundantes en los bosques húmedos (500-1000
las concentraciones de 16 y 20 µg/mL, respectivamente. La msnm). En los departamentos de Lima, La Libertad y Lambayeque
evaluación de citoxicidad sobre Artemia salina del extracto etanólico sólo se registra Sinningia warmingii (Diaz et al., 2012). Son
de S. warmingii, mostró una Concentración Letal media (CL50) de numerosos los híbridos. Sinningia warmingii se encuentra en los
591,40 µg/mL con una confiabilidad del 95%. Se concluye que el departamentos de Cajamarca y Huancavelica, entre 2000 – 2500
extracto etanólico de la raíz de S. warmingii presenta compuestos m.s.n.m. (Mostacero et al., 2009). Sinningia warmingii (Hiern)
fenólicos con una significativa capacidad antioxidante, que es Chautems está considerada en el catálogo de la flora de Contumazá-
moderadamente tóxica de acuerdo con el CYTED. Cajamarca. En la provincia de Utcubamba, en el nororiente peruano,
los pobladores de “Quebrada Seca Alta”, conocen las propiedades de
Palabras clave: Sinningia warmingii; Artemia salina; análisis “papa madre”, nombre popular con el que se describen a S. warmingii
farmacognóstico; actividad antioxidante; citoxicidad. (Soukup, 1995; Sagástegui, 1995; Mostacero et al., 2009; Santa Cruz
Abstract: Pharmacognostic, antioxidant and cytotoxic study of et al., 2019). Utilizada en el nororiente peruano para el alivio de
Sinningia warmingii "papa madre" ciertas dolencias de las mujeres, tratamientos de inflamaciones post-
parto y flujos vaginales (Mostacero et al., 2009; Vicuña Z., 2011) se
The pharmacognostic, antioxidant and cytotoxic study of medicinal utiliza como infusión de sus tubérculos para el tratamiento de
native plants in a country is the base to develop and innovate herbal problemas ginecológicos, como inflamaciones puerperales y también
products with biological activity. In the present study, Sinningia se emplean en el tratamiento de vaginosis microbiana “descensos
warmingii has been studied according to pharmacognostic vaginales” (Diaz et al., 2012; Winiewski et al., 2017). En 98% de
characteristics, antioxidant capacity by DPPH and cytotoxic mujeres con vaginosis y hasta en un 50% en mujeres sanas, se ha
properties on Artemia salina. The results have shown phenolic clasificado a Gardnerella vaginalis como una sola especie,
compounds, flavonoids, and tannins as majority components of estableciéndose como agente causal de la vaginosis (Klouman et al.,
ethanolic extract from S. warmingii roots. The antioxidant capacity 2005).
of ethanolic extract evaluated by DPPH has shown 85.75 and 90.25%
of antioxidant capacity in the concentrations of 16 and 20 µg/ml, Muchas de las propiedades preventivas o curativas, para hacer frente
respectively. The cytotoxic evaluation on A. salina from S. a enfermedades agudas y crónicas, se restringen a la naturaleza
warmingii ethanolic extract has shown median lethal concentration química de los fitoquímicos presentes en las especies vegetales y en
(LC50) of 591.40 µg/ml. In conclusion, the ethanolic extract from S. particular a los compuestos polifenólicos, fitoquímicos (Mercado et
warmingii roots have shown phenolic compounds with significant al., 2013).
antioxidant capacity and moderately toxic according to CYTED. Las plantas presentan principios activos con notable actividad
Keywords: Sinningia warmingii; Artemia salina; pharmacognostic; fisiológica en el ser humano, siendo un importante aliado para la
Antioxidant activity; cytotoxic. prevención y tratamiento de ciertas patologías. No obstante, pueden
ocasionar reacciones tóxicas a quienes las utilizan; por esta razón, se
Introducción realizan investigaciones para determinar la presencia de metabolitos
secundarios con bioactividad y toxicidad de las plantas medicinales
La Sinningia warmingii (Gesneriaceae) denominada comúnmente (Cruz et al, 2013).
"papa madre" con sinónimo científico Reschsreineria peruviana
(Solomon 2012). Es una planta herbácea con raíces tuberosas, de Los beneficios potenciales de los antioxidantes están principalmente
tronco corto, hojas aterciopeladas verde oscuro, ovales, bordes asociados a los efectos supresores sobre los radicales libres (Vallejo
crenulados, pecioladas y carnosas; flores provistas de amplia corola et al., 2017; Zheng and Anggreani, 2017). La capacidad antioxidante
tubular, con cinco lóbulos púrpura-violáceo. Gesneriaceae es una evaluada in vitro puede usarse como un indicador indirecto de la
familia de arbustos terrestres y epífitos que comprende entre 150 a actividad in vivo. La determinación de la capacidad antioxidante de
160 géneros y alrededor de 3 200 especies distribuidas en trópicos y extractos, se realizó mediante e ensayo DPPH (Arnao et al., 2011).
La capacidad antioxidante está relacionada con los diferentes tipos de
*e-mail: monica.retuerto@unmsm.edu.pe
solventes de extracción de sus constituyentes químicos bioactivos,
que proporcionan respuestas diferentes. Además, el tiempo de

6
sergas.es
 Estudio farmacognóstico, antioxidante y citotóxico de Sinningia warmingii "papa madre"
almacenamiento parece interferir en la estabilidad de estas sustancias camarones de Artemia salina fueron donados por IMARPE (Instituto
(Santos and Goncalves; 2016). del Mar del Perú). Se procedió a preparar las condiciones para la
eclosión de los huevos (Fig. 1), Los huevos de Artemia salina se
La Artemia salina (Crustacea: Artemiidae) “camarón salino” o incubaron durante 24 horas a temperatura ambiente (25–30 ° C) en
“camarón de salmuera” es un crustáceo utilizado para evaluar agua salina preparada con sal marina, para la eclosión de los nauplios,
compuestos con actividad biológica y con estructuras químicas y ser trasvasados a los viales. Para la prueba de control cada vial
variadas (Naidu et al., 2014; Iannacone et al., 2016). El contenía 10 mL de agua de mar y 10 nauplios vivos. Cada
microcrustáceo se emplea como alimento vivo para peces y experimento se realizó en tres réplicas. Las gambas supervivientes
crustáceos marinos en cultivo por su alto valor nutricional (Ramírez fueron contadas después de 24 horas (figura 2).
et al., 2010; Nishimori et al., 2016), considerada una herramienta
inicial para evaluar la toxicidad de toxinas fúngicas, extractos de
plantas, metales pesados (Iannacone et al., 2016).
El objetivo del presente estudio fue determinar la caracterización
farmacognóstica, antioxidante y citotóxica de Sinningia warmingii.
El conocimiento de los constituyentes químicos, la capacidad
antioxidante y citotóxica de Sinningia warmingii, permitirá
determinar la concentración óptima para estudios posteriores que
tengan como objetivo aislar el o los constituyentes químicos para
elaborar formulaciones farmacéuticas y evaluación de posibles
efectos secundarios adversos.
Materiales y métodos
Muestra: 10 kg de raíces tuberosas de Sinningia warmingii se
colectaron al azar en la etapa de floración en la provincia de
Utcubamba-Amazonas, situada a 400 m.s.n.m. La identificación
taxonómica de la especie vegetal se realizó con un ejemplar completo
en el Museo de Historia Natural de la Universidad Nacional Mayor
de San Marcos (UNMSM).
Reactivos: etanol absoluto QP, metanol QP, agua bidestilada, DPPH
(2,2-difenil-1-picrilhidrazil), trolox (6-hidroxi-2, 5, 7, 8
tetrametilcromo-2 ácido carboxílico 97%) (Sigma-Aldrich USA),
vitamina C (Sigma-Aldrich, USA) y reactivos necesarios para el
tamizaje fitoquímico.
Equipos: espectrofotómetro UV-visible (Merck), balanza analítica
de capacidad de 1 mg - 200 g (Ohaus Pioneer), Estufa (Memmert).
Preparación del extracto
La raíz de la muestra se procedió a limpiar, secar y licuar con etanol;
se llevó a maceración por 7 días y posteriormente se desecó en estufa
de aire circulante a una temperatura de 40ºC por 2 días.
Tamizaje fitoquímico y cromatografía en capa fina
Con el uso de reactivos de coloración y precipitación se determinó Figura 2: Método de Artemia salina
los constituyentes químicos del extracto etanólico (Lock De Ugaz,
2016). Tratamiento de datos
Capacidad antioxidante La capacidad antioxidante fue determinada por el método de
El método del reactivo 2,2-difenilo-1-picrilhidrazilo (DPPH) regresión utilizando el programa de Excel ver. 2016.
desarrollado por Brand-Willams et al. (1995) se utilizó para evaluar Los datos obtenidos de la actividad citotóxica fueron procesados
la capacidad antioxidante. El método ofrece una detección rápida de usando un programa estadístico PriProbit, versión 1.63. Se determinó
la capacidad de eliminación de radicales de compuestos específicos el porcentaje de mortalidad y la citoxicidad del extracto.
(Gülcin I., 2012). El radical DPPH tiene un electrón desapareado y es
de color azul-violeta, decolorándose hacia amarillo pálido por la Resultados
reacción con sustancias antioxidantes, el cambió se mide en el
espectrofotómetro UV-Vis (GENESYSTM 10S UV-Vis, Estudio farmacognóstico
ThermoFisher Scientific) a la longitud de onda de 517 nm (Ramos et El estudio cualitativo determinó compuestos fenólicos: heterósidos
al., 2008; Arnao et al., 2011;) y los resultados se expresan como flavónicos y taninos, constituyentes mayoritarios y trazas de
concentración inhibitoria al 50% de su capacidad (IC50). alcaloides (tabla 1).
Determinación de la actividad citotóxica. Capacidad antioxidante
Ensayo biológico de letalidad de Artemia salina (Martínez-Hormaza La capacidad antioxidante es dependiente de la concentración del
et al., 2006; Haule et al., 2012; Abdul et al., 2016; Rahman et al., extracto, se determinó una elevada capacidad captadora de radicales
2016;) “camarón de salmuera” fue realizado para ver el efecto libres a concentraciones de 16 y 20 µg/mL, fue de 85,75 y 90,25%
citotóxico del extracto de la raíz de Sinningia warmingii sobre respectivamente; presentando una Concentración inhibitoria media
nauplios de camarones en salmuera. Los huevos de salmuera de (IC50) de 10,39 µg/mL. (tabla 2, figura 1).

Rev. Toxicol (2020) 37: 6 - 10 117

 Retuerto-Figueroa MG, Ramos-Llica E, Gorriti-Gutiérrez AR, Gallardo-Jugo T, Ortega-Romero E, Calixto-Cotos M, Cosquillo-Rafael M, Fuertes-Ruitón C,
eQuispe-Jacobo F1g, Villafuerte-Montes U4h
Tabla 1. Screening farmacognóstico de raíz Sinningia warmingii “papa madre"

Extracto Constituyentes
N° Reactivo
etanólico químicos

1 Molish + carbohidratos
2 Felhing + Azucares reductores
3 Trommer + Azucares reductores
4 FeCl3 + Compuestos fenólicos
5 Gelatina + Taninos
6 Agua de bromo + Taninos catéquicos
7 Shinoda + Flavonoides

8 Borntrager - Compuestos antraquinónicos

Figura 1: Capacidad antioxidante del extracto etanólico de raíz de Sinningia warmingii
“papa madre"
9 Lieberman-Burchardat - Compuestos triterpenoides
Tabla 4. Citotoxicidad. Efecto del extracto de raíz de Sinningia warmingii “papa madre"
10 Ninhidrina - Compuestos amino sobre nauplios de Artemia salina
11 Dragendorff + Alcaloides
12 Mayer - Alcaloides Concentración CL 50
13 Bertrand - Alcaloides Log (C) % mortalidad
(µg/mL) (µg/mL)
14 Sonnenschein + Alcaloides
15 Popofff + Alcaloides
10 1 0
16 Prueba de espuma - Saponinas
+: presencia; -: ausencia 20 1.3 0
40 1.6 0
Tabla 2. IC50 (µg/mL). Concentración inhibitoria media necesario para reducir al 50%
la concentración inicial del radical DPPH por el extracto etanólico de raiz Sinningia
80 1.9 0
591,40
warmingii “papa madre" 140 2.1 0
(450,25 -
Tubo Tubo Tubo Cap. 160 2.2 0
IC 50 830,59)
Concentración 1 2 3 PROMEDIO Antiox 340 2.5 30
(µg/mL)
µg/mL Abs. Abs. Abs. Abs. %
540 2.7 50
20 0.049 0.048 0.044 0.047 90.25
16 0.063 0.065 0.078 0.069 85.75 740 2.9 60
10.39
12 0.198 0.199 0.199 0.199 58.82 940 3 70
+ 0,003
8 0.306 0.298 0.299 0.301 37.55
estigmasterol. Las diferencias podrían deberse a las diferencias
4 0.390 0.392 0.385 0.389 19.29
edafológicas y al fraccionamiento realizado en hexano.
Valores (DS ± medio, n=3)
Los resultados de investigaciones de Verdan et al., 2013; son
Actividad citotóxica y determinación de Concentración Letal similares a los obtenidos en nuestra investigación con respecto a los
Media (CL50) . compuestos fenólicos, pero hay que tener en cuenta que los estudios
farmacognósticos se realizaron sobre una especie diferente
El extracto etanólico de la raíz de Sinningia warmingii mostró
de Sinningia Leucotricha encontrando flavonoides, esteroides,
letalidad moderada. La tasa de mortalidad del camarón de salmuera
fenilpropanoides, quinonas, cromenos, etilciclohexanos y aceites
se incrementó de acuerdo con el aumento de la concentración de la
esenciales.
raíz (tabla 4).
Se determinó una elevada capacidad captadora de radicales libres a
La letalidad se calculó a partir de la supervivencia media de nauplios
concentraciones de 16 y 20 µg/mL, su capacidad antioxidante fue de
en viales tratados con extracto y solución control. En la evaluación
85,75 y 90,25% respectivamente. Con nuestros resultados podemos
de la citoxicidad en Artemia salina del extracto etanólico de Sinningia
inferir que la presencia de flavonoides y compuestos fenólicos
warmingii, se determinó con la Concentración Letal Media (CL50),
podrían brindar efecto antiinflamatorio; siendo ensayos preliminares,
591,40 µg/mL (450,25 µg/mL y 830,59 µg/mL) con una
recomendamos más estudios que permitan validar el uso tradicional
confiabilidad al 95%.
de esta especie.
Discusión El método de Artemia salina para evaluar la toxicidad del extracto
El estudio farmacognóstico del extracto de la raíz Sinningia nos proporciona información inicial y preliminar de toxicidad y es un
warmingii determinó presencia de azúcares, compuestos fenólicos en indicador de bioactividad, antes de probar un compuesto en líneas
alta cantidad y alcaloides en menor proporción, mientras en los celulares (Pino et al., 2010). Los extractos acuosos presentan un
estudios de tubérculos de Sinningia warmingii de Brasil (Verdan et riesgo de toxicidad cuando muestran valores CL50 ≤ 1 mg / mL.
al., 2014) difiere de los constituyentes químicos encontrados en la (Gastaldi et al., 201). Asimismo, teniendo en cuenta la clasificación
fracción de hexano del extracto etanólico: ocho compuestos de toxicidad, todas coinciden en agrupar las sustancias con CL50
identificados como 7-hidroxi-α-dunniona, lapachenol, tectoquinona, inferiores a 100 μg/mL en las categorías de mayor toxicidad,
7-metoxitectoquinona, 1-hidroxitectoquinona, 7- mientras, los que muestran valores superiores a 1 000 μg/mL se
hidroxitectoquinona, agregatina C, agregatina D, halleridone, y clasifican como no tóxicos (Martinez et al., 2006; Hernandez et al.,
cedrol. Asimismo, aislaron una mezcla de esteroides, sitosterol y 2017). Este método tiene las ventajas de ser rápido, bajo costo,

8 Rev. Toxicol (2020) 37: 6 - 10

 Estudio farmacognóstico, antioxidante y citotóxico de Sinningia warmingii "papa madre"
sencillo, reproducible y aceptado por la comunidad científica para 9. Haule E, Moshi M, Nondo R, Mwangomo D. and Mahunnah R. A
evaluar la citotoxicidad de especies vegetales (Pérez at al., 2010). Se study of antimicrobial activity, acute toxicity and cytoprotective
pueden utilizar fácilmente un gran número de organismos para la effect of a polyherbal extract in a rat ethanol-HCl gastric ulcer
validación estadística, no necesita equipamiento especial y se model. BMC Research Notes 2012, 5:546
emplean pequeñas cantidades de muestras. Asimismo, los defensores
de los derechos de los animales no han objetado el uso de estos 10. Hernández E, Carrazana D, González R, García A, Marrero O,
invertebrados para el trabajo experimental (Jacques et al., 2004). Águila E, Morales A. y López Y. Ecotoxicidad aguda en Physa
cubensis P. y Artemia salina L. de 8 antibacterianos con riesgo
Martínez-Hormaza et al. trabajaron con muestras de hojas de ambiental. Rev. Toxicol (2017) 34: 118- 123
Erythroxylum confusum Britt, donde el valor promedio de la CL50 fue
por debajo de 640 μg/mL, por lo que consideraron a todas las 11. Iannacone J, Alvariño L, Valle V, Ymaña B, Argota G, Fimia F,
muestras como no tóxicas. En nuestro estudio los valores son Carhuapoma M. and Castañeda L. Toxicidad de agentes
similares por lo que se considera a la Sinningia warmingii como no antiparasitarios, antimicrobianos e insecticidas sobre larvas del
tóxica y de acuerdo al CYTED (tabla 3), como ligeramente tóxica, camarón salino Artemia franciscana (Crustacea: Artemiidae).
lo que valida su bioactividad. Rev. Toxicol (2016) 33: 31-38
12. Jacques E, Massayoshi S, Martin A, Mascarenhas A, da Silva A,
Tabla 3. Clasificación de toxicidad según CYTED Nicácia C, et al. Median Lethal Concentrations of Amazonian
Toxicidad µg/mL Plant Extracts in the Brine Shrimp Assay. Pharmaceutical
1 Extremadamente tóxico 0-10 Biology. 2004; 42 (3): 253-257.
2 Altamente tóxico 10-100
3 Moderadamente tóxico 100-500 13. Klouman E, Manongi R and Klepp K. Self-reported and observed
4 Ligeramente tóxico 500-1000 female genital cutting in rural Tanzania: associated demographic
5 Prácticamente no tóxico 1000-1500 factors, HIV and sexually transmitted infections. Trop Med Int
6 Relativamente inocuo <1500 Health. 2005 Jan; 10(1):105-15.

Conclusiones 14. Kvist L, Skog L, Amaya-Márquez M, Salinas I. Las Gesneriáceas

de Perú. Arnaldoa. 2005. 12 (1-2):16-40.
El estudio farmacognóstico determinó presencia de carbohidratos y
compuestos fenólicos como constituyentes mayoritarios, evidenció 15. Lock De Ugaz O. (2016). Investigación Fitoquímica: Métodos en
capacidad antioxidante y presenta actividad citotóxica en Artemia el estudio de productos naturales.Lima, Perú. Fondo Editorial de
salina. la Pontificia Universidad Católica del Perú.

Agradecimientos 16. Martínez-Hormaza I, Quintero-Rodríguez G, Márquez-Montiel L,

González-Lavaut J, Álvarez-Reyes A. & Zarragoitía A.
A la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Determinación de la Citotoxicidad de Extractos de Erythroxylum
Mayor de San Marcos. Al Vicerrectorado de Investigación de la confusum Britt. mediante el Método de la Artemia salina. Acta
Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Proyecto CON CON Farm. Bonaerense 25 (3): 429-31(2006)
Código: 140401071, RR N°01243-R-14)
17. Martínez H, Carrazana D, González R, García A, Marrero O,
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10 Rev. Toxicol (2020) 37: 6 - 10

 Rev. Toxicol (2020) 37: 11 - 16

Efecto Genotóxico del material particulado PM2.5 recolectado en la zona urbana

de Cuenca - Ecuador sobre la línea celular de ovario de hámster chino CHO-K1
Narváez M1*, Astudillo A , García N †, Moscoso D1, Mejía D1, Vásquez P1, Maza D2, Bailón N3.
1
Centro de Estudios Ambientales, Universidad de Cuenca (CEA), Cuenca-Ecuador.
2
Departamento de Química y Ciencias Exactas, Sección de Ingeniería Ambiental de la Universidad Técnica Particular de Loja_Ecuador.
3
Departamento de Ciencias de la Salud, Sección de Genética Humana, Microbiología y Bioquímica Clínica de la Universidad Técnica Particular de Loja_Ecuador.

Resumen: Estudios toxicológicos y epidemiológicos ponen de consecuencia el deterioro del ambiente, afectando la calidad del aire
manifiesto que el material particulado (PM) específicamente el PM 2.5 (Lacasaña et al., 1999; Vasconcellos et al., 2007). Entre los distintos
tiene efectos negativos significativos en la salud humana, asociado con contaminantes del aire, el material particulado (PM) constituye uno de
mortalidad, insuficiencia cardíaca, trastornos respiratorios, los más importantes por sus efectos asociados con la química de los
enfermedades pulmonares y cáncer. La toxicidad y el efecto procesos atmosféricos, el clima (Sienra et al., 2002; Vasconcellos et al.,
inflamatorio de estas partículas están relacionados con su tamaño y 2007), y la salud, (Pope III et al., 2002; Valavanidis et al., 2008)
características químicas. En este estudio se determinaron las induciendo en algunos casos enfermedades cardiovasculares (Shah
características químicas de las fracciones acuosas y orgánicas solubles et al., 2013), respiratorias (Porredon et al., 2014), y trastornos
del PM2.5 recolectado en tres sitios de monitoreo del área urbana de la neurodegenerativos. El PM está formado por una mezcla de partículas
ciudad de Cuenca-Ecuador y se evaluó su actividad genotóxica finas y ultrafinas, presentado mayor interés las partículas PM2.5 ya que
mediante el ensayo del cometa en la línea celular de ovario de hámster pueden ingresar en los pulmones, que por su gran superficie de contacto,
chino, CHO-K1. El análisis gravimétrico de las muestras reveló que pueden absorber diversas sustancias de conocida actividad genotóxica,
dos de los sitios de estudio superaron el límite de 25 µg/m3 establecido mutagénica y/o carcinogénica, como metales pesados, hidrocarburos
por la Organización Mundial de la Salud. En la caracterización de las aromáticos policíclicos (HPA) (Abou et al.,2007; Bełcik et al., 2018;
fracciones acuosas y orgánicas se determinó la presencia de metales Gutiérrez et al., 2006), especies aniónicas y catiónicas, (Astudillo et al.,
como el hierro y zinc e hidrocarburos aromáticos tales como el 2015), las cuales asociadas a las partículas atmosféricas inducen estrés
benzo(a) antraceno respectivamente. Las células fueron expuestas a oxidativo en las células, las mismas que inician con la formación de
3,26 m3 de aire /mL de los extractos acuosos y 1,63 m3 de aire/mL de especies reactivas de oxígeno (ROS), capaces de inducir cambios en
los extractos orgánicos. Finalmente se observó que los extractos ciclo redox celular y por tanto desencadenar una serie de eventos en
obtenidos de PM2.5 inducen daño genotóxico en la longitud del largo cascada como la apoptosis, inflamación y daño oxidativo a
de cola medido mediante el ensayo del cometa; este tipo de daño macromoléculas como proteínas, lípidos y ácidos nucleicos.
pueden atribuirse a la combinación de las especies químicas detectadas. Actualmente, por convención internacional se encuentran reguladas y
consideradas como contaminantes críticos, las partículas en suspensión
Palabras claves: Material particulado; genotoxicidad; ensayo del de PM10 (≤ 10 μm) y PM2.5 (≤ 2.5 μm), por su presunta contribución en
cometa; metales pesados; hidrocarburos aromáticos; PM2.5. la mortalidad y morbilidad por afecciones a largo plazo como el
Abstract: Genotoxic effect of PM2.5 particulate material collected in decremento en la función pulmonar y la aparición de cáncer (Sahagún,
the urban area of the city of Cuenca - Ecuador in the Chinese 2009). La presente investigación tiene por objetivo caracterizar
hamster ovary cells line CHO-K1. químicamente las fracciones acuosas y orgánicas solubles del material
particulado PM2.5; y evaluar sobre la línea celular de ovario de hámster
Toxicological and epidemiological studies have a manifesto that chino (CHO-K1), el posible efecto genotóxico mediante el ensayo del
particulate matter (PM), specifically PM2.5 has negative effects on cometa, el cual es un método rápido, sensible y económico. Dicho
human health, associated with mortality, heart failure, respiratory análisis pone de manifiesto la hipótesis de que los metales pesados e
disorders, lung diseases, and cancer. The toxicity and inflammatory hidrocarburos aromáticos presentes en los extractos solubles de PM2.5
effect of these particles are related to their size and chemical estarían relacionados con los daños genotóxicos ocasionados en las
characteristics. The objective of this study was to determine the células tras 24 horas (h) de exposición.
characteristics of the soluble aqueous and organic fractions of the
particulate material PM 2.5 collected in the monitoring sites of the urban Metodología
area of the city of Cuenca-Ecuador and to evaluate its genotoxic
activity by means of the test of the comet of in the Chinese hamster Selección de sitios de estudio
ovary cells line CHO-K1. The gravimetric analysis of the samples La selección de los puntos de monitoreo se realizó en función de un
revealed that two of the study sites exceeded the limit of 25 ug / m3 estudio preliminar, ejecutado por el Centro de Estudios Ambientales de
established by the WHO. In the characterization of water and organic la Universidad de Cuenca, cuyo objetivo fue determinar las áreas con
fractions, the presence of metals such as Fe and Zn and aromatic mayores concentraciones de material particulado. Se seleccionaron tres
hydrocarbons such as benzo(a) anthracene determined, respectively. puntos que se consideraron significativos recogidos en la Figura 1 y
Cells were exposed to 3,26 m3 of air /mL of aqueous extracts and 1,63 cuyas coordenadas geográficas son: punto P1 (2°53’37,63”S 79°
m3 of air/ mL of organic extracts. Finally, it was observed that the 0’13,92”O) localizado en el centro histórico de la ciudad, el cual se
extracts obtained from PM2.5 induce genotoxic in the length of tail caracteriza por presentar altas emisiones vehiculares y poca vegetación;
length measured by the comet assay; this type of damage can be punto P2 (2°53’7,86”S 79° 0’33,23”O) localizado al oeste de la ciudad,
attributed to the combination of the detected chemical species. este sector está designado de acuerdo a la ordenanza de uso de suelo
Keywords: Particulate matter; genotoxicity; comet assay; heavy como vivienda y el punto P3 (2°54’48,19”S 79° 2’14,08”O), asignado
metals; aromatic hydrocarbons de acuerdo a la ordenanza como uso principal vivienda. (Figura 1).

Introducción Recolección de las muestras y determinación de las

concentraciones
El desarrollo industrial y el crecimiento urbano asociados a las
emisiones de una variedad de fuentes, incluyendo la combustión de Se empleó un equipo de bajo caudal (Partisol 2000i), con un flujo de
gasolina y diésel así como las industriales, ha traído como 16,3 L de aire/min. Se utilizaron filtros de fibra de teflón de 47 mm de
diámetro y 2 µm de poro. Los filtros fueron expuestos a 24 h de
monitoreo (Legal Information Institute, 1992). La concentración de las
*e-mail: monica.narvaez@ucuenca.edu.ec partículas fue determinada por análisis gravimétrico, previa

11
11
sergas.es
Narváez M, Astudillo A, García N , Moscoso D, Mejía D, Vásquez P, Maza D, Bailón
estabilización de los filtros (40 % - 45 %) de humedad relativa y Modelo Biológico
temperatura (entre 15 oC y 30 oC), pesados antes y después de la
recolección. Las concentraciones fueron corregidas de acuerdo a lo Para los ensayos biológicos se empleó células CHO-K1 que fue
establecido en la normativa nacional ecuatoriana en el Texto Unificado cultivada en medio base HAMF-12 (Sigma Chemical Co., St. Louis,
de Legislación Ambiental Secundaria del Ministerio de Ambiente MO, USA) suplementado con 10 % de suero fetal bovino (Sigma
(Lexis Finder, 2015). Chemical Co., St. Louis, MO, USA), L-glutamina (2 mM, GIBCO

Figura 1: Mapa de las zonas de monitoreo de material particulado PM 2,5

Obtención del extracto acuoso soluble de material particulado

y su caracterización
Las partículas contenidas en los filtros fueron extraídas con agua ultra
pura, empleando un equipo de ultrasonido modelo Cole- Parmer 8894,
durante 15 min a temperatura ambiente. Posteriormente el extracto fue
Figura 2: Cromatograma y picos registrados para los compuestos orgánicos
centrifugado a 2500 g durante 30 min para sedimentar la materia
insoluble. Las soluciones frescas preparadas fueron almacenadas a 4
oC, para su posterior empleo en el ensayo de genotoxicidad. Para el Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) y antibiótico-
antimicótico (100 unidades/ml de Penicilina G, 100 µg/mL de
análisis de los metales pesados Fe, Al, Ni, Pb, Cu; en los extractos
Estreptomicina y 25 µg/mL de Amfotericina B, GIBCO Thermo Fisher
acuosos se empleó el método analítico NIOSH 7082 por espectroscopia
Scientific, Inc., Waltham, MA, USA). El cultivo celular se mantuvo en
de absorción atómica, empleando el equipo de marca Perkin Elmer
incubación a 37 °C en una atmósfera húmeda con el 5 % de CO2, con
AA400.( The Perkin-Elmer Corporation, 1996)
un tiempo de duplicación de 24 h. Las células fueron expuestas a
Obtención del extracto orgánico soluble de material distintas concentraciones (0,82 m3 de aire/mL, 1,63 m3 de aire /mL y
particulado y su caracterización 3,23 m3 de aire /mL) tanto de extractos acuosos como de los extractos
orgánicos. Como control positivo, se usó el doxorrubicina 2 µM.
Para los extractos orgánicos los filtros fueron sonicados con 10 mL de Además, se trabajó como control negativo de células en agua destilada,
una mezcla diclorometano-acetona (50% - 50%) durante 15 min a y los blancos de cultivo celular con soluciones acuosas y orgánicas de
temperatura ambiente. Posteriormente los extractos se concentraron en filtros libres de partículas.
un evaporador rotatorio a 10 mL, y fueron centrifugados a 2500 g
durante 30 min, el sobrenadante fue evaporado a sequedad y Se sembraron las células en placas de 96 pocillos, con un total de 3,5 x
posteriormente resuspendido en 100 µL de dimetilsulfóxido (DMSO), 103 células por pocillo, se incubó por 24 h, transcurrido este tiempo se
las muestras fueron almacenadas a 4 oC, para su posterior empleo en el adicionó el tratamiento respectivo por 24 h de exposición.
ensayo de genotoxicidad. Para la caracterización de los extractos Ensayo de citotoxicidad por FDA/BrEt
orgánicos, [benzo (b) fluoranteno], [benzo(a) pireno], [benzo(a)
antraceno], y [fenantreno], se aplicó el método adaptado de referencia Tras 24 h de exposición se realizó el ensayo de viabilidad según el
EPA 610 PAH (Environmental Protectión Agency, 1984). La protocolo descrito por Jones y Senft (Jones, 1985), con ligeras
cuantificación se realizó mediante un cromatógrafo de gases Agilent modificaciones. A la suspensión celular se adicionó una solución de
Technologies 6890N en detector FID (Flame Ionization Detector) y se diacetato de fluoresceína (5 mg/mL) – bromuro de etidio (0,2 mg/mL).
utilizó una columna ID-BPX5 de 50 m de longitud, 0,22 mm de Se contabilizaron 200 células por placa cada una por duplicado y se
diámetro y de 0,25 µm de porosidad. Para la cuantificación de los analizó en el microscopio de fluorescencia (ZEISS-Axioskop 2 plus).
HAPs se utilizó el estándar de 13 hidrocarburos de Sigma-Aldrich
(catálogo# 48953-U EPA 525 PAH MIX-A, 1X1 ML, 500 mg). El Determinación de daño genotóxico mediante ensayo del cometa
análisis CG-FID se realizó en las siguientes condiciones de operación: in vitro en células CHO-K1
detector FID a 250 °C mezcla (ml/min): Aire 300 – H2 30 – N2 45. Se El protocolo para el ensayo cometa se fundamentó en el descrito por
inyectó 1 µl en modo splitless a 250 °C. La temperatura inicial fue 45 (Olive y Banáth, 2006) adaptado a las condiciones del laboratorio.
°C por 1 min y se incrementó de la siguiente manera 25 °C/min hasta Transcurrido el tiempo de exposición, las células fueron tripsinizadas y
llegar a 200 °C, 8 °C/min hasta 280 °C, 10 °C/min hasta 330 °C durante lavadas con medio suplementado, dos veces consecutivas. Las células
5 min. El tiempo de análisis es de 25 min. El gas de arrastre empleado se suspendieron con 75 µL de agarosa de bajo punto de fusión 1 %
fue He con un flujo de 1,8 mL/min. La temperatura de inyección fue (LMP) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) a 37 ºC y fueron
250 °C. (Figura 2). colocadas sobre un portaobjetos que contenía una capa de agarosa. Se
añadió una tercera capa de agarosa LMP. Las placas fueron colocadas

12 Rev. Toxicol (2020) 37: 11 - 16

 Efecto Genotóxico del material particulado PM2.5 recolectado en la zona urbana de Cuenca - Ecuador sobre la línea celular de ovario de hámster chino CHO-K1
en una solución de lisis [10 % de DMSO (Sigma Chemical Co., St. se registraron concentraciones de Fe y Zn (Tabla 2). De acuerdo a la
Louis, MO, USA), 1 % Tritón X-100 (Sigma Chemical Co., St. Louis, normativa Española (INSHT) (Instituto Nacional de Seguridad y
MO, USA), 2,5M NaCl (Merck), 100 mM EDTA (Invitrogen Corp., Bienestar en el Trabajo (INSSBT), O.A., 2018) los tres puntos de
Grand Island, NY, USA), 10 mM Tris (Invitrogen Corp., Grand Island, monitoreo sobrepasaron el límite de exposición permitido para el Fe
NY, USA) y pH 10] por 24 h. Desde este paso en adelante se trabajó (1,00 mg/m3). Como se observa en la Tabla 2, todos los sitios de
en oscuridad, a 4 ºC. Posteriormente, las placas se dejaron reposar en muestreo, sobrepasan la normativa canadiense (Astete et al., 2014) para
un buffer de electroforesis [300 mM NaOH (Merck Germany), 1mM Zn (120 µg/m3).
EDTA, pH>13], por un período de 20 min. La electroforesis se efectuó
en condiciones de 25 voltios, 300 mili-Amperios durante 20 min. Caracterización de la fracción orgánica
Después de este tiempo, las placas se colocaron en una solución de En la caracterización de los extractos para la determinación de HAPs
neutralización (pH 7,5), y deshidratadas con metanol para su análisis mediante GC-FID se preparó una curva de calibración a partir de 3, 5,
posterior. 10 y 25 mg/L del mix HAPs obteniendo un coeficiente de correlación
Para el análisis, se tiñeron con 60 µL de bromuro de etidio (1,5 µg/mL). r2 ≥ 0.995 en cada uno.
En el microscopio de fluorescencia (ZEISS-Axioskop 2 plus), se En la figura 2 se presenta los tiempos de retención de los compuestos
analizaron 100 células, en cada placa, mediante el uso del software
Comet Assay IV, que permiten obtener parámetros de medición de la orgánicos en estudio.
migración del ADN, donde se evaluaron dos parámetros, la longitud de
la cola del cometa medida desde el centro del núcleo hacia el final de
la cola. El otro parámetro fue el porcentaje de ADN en la cola dado por
100 multiplicado por la intensidad del ADN en cola con respecto a la
intesidad del ADN en la célula.
El análisis estadístico para los ensayos de viabilidad y efectos
genotóxicos se realizó mediante el análisis estadístico de varianza
(ANOVA), seguido del test Dunnet. En el caso del ensayo genotóxico
se aplicó el estadígrafo de Kruskal-Wallis usando el programa
GraphPad Prism 8.0.
Resultados
Concentraciones de PM2.5
Figura 3: GC-FID del punto P1 presencia de benzo(a) antraceno
El análisis de las concentraciones de PM2.5 muestra valores similares
en los puntos P1 y P3. El punto P2 presenta una concentración Luego se evaluaron las muestras de los extractos dando como resultado
significativamente menor en comparación a los otros sitios de estudio en una muestra la presencia de benzo(a) antraceno a un tiempo de
(p < 0,001) (Tabla 1). retención de 15,656 con una concentración de 3,64 mg/L. (Figura 3).

Tabla 1. Concentración promedio de 22 muestras de material particulado PM2.5

Ensayo cometa para la evaluación de genotoxicidad.
recolectado durante un período de 24 h continuas, con intervalos de tres días, en
cada sitio de estudio. Se determinó la viabilidad de las células expuestas a los extractos a 0,82

Sitios de Concentración Concentración máxima Concentración promedio

estudio mínima (µg/m3)** (µg/m3)** (µg/m3)** ±DS
P1 16,09 59,56 29,81*±11,44

P2 5,44 38,52 19,93 ±10,25

P3 16,20 60,14 37,31*±14,02

El monitoreo se realizó de acuerdo a los estipulado en la normativa Nacional Texto
Unificado de Legislación Ambiental Secundaria del ministerio del Ambiente, Libro
VI, Anexo IV, el equipo empleado para la recolección de las muestras fue el Partisol
2000i. (*) Concentraciones que superan la normativa dada por la OMS (25,00 µg/m3 ).
(**) µg de PM/ m3 de aire.

Caracterización de la fracción acuosa. Figura 4: Porcentaje de Viabilidad de células CHO-K1 expuestas a diferentes
concentraciones de las fracciones acuosas y fracciones orgánicas. Los datos representan
Los resultados de la caracterización de la fracción acuosa del PM2,5 no 3 experimentos por duplicado.
registraron valores de concentración para Ni, Pb y Cd. Sin embargo,

Tabla 2. Concentraciones de metales pesados presentes en las 22 muestras del

extracto acuoso de material particulado PM2.5 de los sitios de estudio, mediante
técnica de espectrometría de absorción atómica.

Fe Zn Ni Pb Cd
Sitios de estudio
mg/L mg/L mg/L mg/L mg/L

P1 1,42 0,11 N.C. N.C. N.C.

P2 1,46 0,10 N.C. N.C. N.C.
P3 2,25 0,19 N.C. N.C. N.C.
Método: Digestión ácida y lectura por espectrometría absorción atómica, Equipo
Perkin Elmer Aanalyst 400. Límite de detección de Cadmio: 0,03 mg/L, límite de
detección de Plomo: 0,15 mg/L, límite de detección de Níquel: 0,10 mg/L; N.C. =No Figura 5: Efectos en el DNA en células CHO expuestas a los extractos acuosos (3,26
cuantificado. m3/mL). A. Longitud de la cola. B. % de DNA en la cola. Test Kruskal-Wallis y post test
En la fracción orgánica de los extractos de PM 2.5; el único elemento identificado fue Dunns. Los datos representan 3 experimentos por duplicado. ** p < 0.001; *** p <
el benzo(a) antraceno en el punto P1, con una concentración igual 3,63 ppm. 0.0001

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 Narváez M, Astudillo A, García N , Moscoso D, Mejía D, Vásquez P, Maza D, Bailón
m3/mL; 1,63 m3/mL y 3,26 m3/mL; sin embargo, la viabilidad de las pulmonar se ha visto comprometida (Astudillo et al., 2015). Un hallazgo
células en el extracto orgánico a 3,26 m3/mL fue menor al 20 % inesperado fue que la caracterización del extracto acuoso de PM 2.5 no
mientras que las células expuestas al extracto acuoso en ambas permitió cuantificar concentraciones de Ni, Pb y Cd; probablemente por
concentraciones la viabilidad es mayor al 90 %, lo que se consideró el limitante de detección del método (Astudillo et al., 2015). Este
que los extractos orgánicos se probaran a 1,63 m3/mL mientras que los hallazgo resulta contrario a lo manifestado en otras investigaciones
extractos acuosos a 3,26 m3/mL 8 (Figura 4); dosis adecuadas para donde se reportan elevadas concentraciones de estos metales (Ewen et
realizar los ensayos de genotoxicidad. De los dos parámetros al., 2009; Quijano et al., 2014; Quijano et al., 2010; Bełcik et al., 2018),
analizados del ensayo del cometa asociados a la exposición a 3,26 los cuales son responsables de ocasionar efectos genotóxicos. Sería
m3/mL, los extractos acuosos de material particulado PM2.5 indican que recomendable estudios posteriores que permitan establecer con mayor
hay diferencias significativas (p <0,0001) tanto en la longitud de cola precisión su concentración.
como en el porcentaje de ADN al comparar con el Blanco (B) en los
sitios de muestreo P2 y P3 (Figura 5). Caracterización de los extractos orgánicos
Al exponer las células a los extractos orgánicos a una dosis más baja Al realizar la caracterización de la fracción orgánica de los extractos de
debido a sus efectos en la viabilidad, no existen diferencias PM2.5 en los tres sitios de estudio, no se registran concentraciones para
significativas de la longitud de cola del cometa entre los puntos y el benzo(a)pireno, benzo(b)fluoranteno y fenantreno. Este hallazgo fue
blanco (B). Sin embargo, en intensidad existe diferencia con respecto inesperado, dado que otras investigaciones evidencian que el material
al punto P1 (Figura 6). particulado tiene como parte de su composición compuestos orgánicos
como los hidrocarburos aromáticos policíclicos (Atkinson y Arey 1994;
Hu et al., 2018; Quijano y Meléndez, 2014). La concentración tóxica
equivalente de benzo(a) antraceno determinada en el punto P1 igual a
3,635 ppm excede el valor propuesto por la Comisión Europea, cuyo
valor límite es de 1 ng/m3 lo que sugiere que existe riesgo para la salud
de los habitantes (Vargas et al., 2013). Una posible explicación de la
ausencia de los compuestos podría ser la limitada cantidad de muestra
analizada, o el limitante de la detección del método.
Ensayo cometa para la evaluación de genotoxicidad.
Los efectos que ocasionan las diferentes concentraciones de material
particulado con metales pesados e hidrocarburos aromáticos sobre las
células CHO-K1, se evaluaron mediante los parámetros de longitud de
cola y porcentaje de DNA en la cola. En las dosis probadas todas
generan un daño en la longitud de la cola, en el caso de la intensidad se
Figura 6: Determinación de los parámetros que afectan el DNA de la línea celular de observan diferencias con las dosis de los extractos acuosos y sólo con
hámster chino CHO-expuestas a los extractos orgánicos (1,63 m3/mL) A. Longitud de la
cola.B. % de DNA en la cola. Test Kruskal-Wallis y post test Dunns. Los datos el punto P1 de los extractos orgánicos que es justamente donde se pudo
representan 3 experimentos por duplicado. * p < 0.01;*** p < 0.0001 detectar el benzo(a) antraceno. Actualmente la mayoría de estudios
mencionan que la exposición a diferentes concentraciones de metales
Discusión en el aire ambiente puede ser un factor de incremento en la incidencia
de cáncer (Pope III et al., 2002). En virtud de ello se recomienda
Concentración del material particulado 2.5 (PM2.5) estudios futuros donde se tome en consideración una caracterización
Las concentraciones de PM2.5 están condicionadas al uso de suelo. completa, donde se vinculen los metales, hidrocarburos y especies
Registrándose las mayores concentraciones en los sectores donde la iónicas, además mayor número de muestra. Estos hechos coinciden con
actividad comercial y flujo vehicular son elevados, coincidiendo con lo la investigación de Gutiérrez et al., (2006).
manifestado por otros investigadores quienes afirman que la mayor El ensayo cometa presenta mayor ventaja en la detección de
frecuencia de exposición a contaminantes mutágenos ocurre en las genotóxicos, debido a la capacidad de resolver si un agente produce
ciudades con mayor intensidad de tráfico vehicular (Morales y Arias, daños en el DNA a bajas dosis, manejo sencillo, bajo costo y
2013). Las concentraciones reportadas en los tres sitios de monitoreo reproducible (Afanasieva, 2018). El daño genotóxico causado por los
superan los 25 µg/m3, valor límite estipulado en la guía de calidad del extractos acuosos en la línea celular CHO-K1, medido por la migración
aire de la Organización Mundial de la Salud (OMS, 2005). Un hallazgo del DNA de las células (largo de cola del cometa) podría estar asociado
interesante es que el punto de estudio P2, localizado a mayor altitud, a la presencia de los metales como el Fe y Zn. Otras investigaciones han
presenta menores concentraciones PM2.5 coincidiendo con lo reportado resultados similares en cuanto a la aplicación de tratamientos
manifestado por (Opazo, 2009), quien establece que aquellas acuosos en la línea celular del epitelio alveolar A 549 ( Gutiérrez et al.,
estaciones que están ubicadas en lugares muy altos registran los niveles 2006 Astudillo et al., 2015). Es posible que existan variables que
más bajos de contaminación, siendo la altura un factor que influye en podrían estar afectando los resultados como los mecanismos de acción
la determinación de las concentraciones de PM (Opazo, 2009). de los componentes y las interacciones entre ellos (Astudillo et al.,
Caracterización de los extractos acuosos 2015). Siendo por lo tanto la caracterización de la composición un
elemento crucial en la evaluación sobre los efectos en la salud
De los elementos caracterizados en el extracto acuoso, el que mostró (Gutiérrez et al., 2006). Estudios previos manifiestan que las mezclas
una tendencia general de niveles más altos fue el Fe. Esta observación de químicos genotóxicos pueden sufrir una variedad de interacciones,
es consistente con los resultados reportados en la literatura (Quijano et que se expresan como aditivas, sinérgicas y antagónicas (Silva et al.,
al., 2010 ; Astudillo et al., 2015). Estudios previos manifiestan que la 2011; Ortiz et al., 2012; Quintero et al., 2009). En este estudio se
presencia de este elemento en el aire ambiente podría atribuirse a las encontró también la presencia de benzo (a) antraceno reconocido según
fracciones geoquímicas, tráfico vehicular y fuentes industriales la EPA el en grupo 2A como probablemente carcinogénicos para
(Fernández et al., 2000). Seguido de este se registran concentraciones humanos; además se observó la asociación de un parámetro (longitud
de Zn, el cual está formando parte de aditivos de lubricantes, además de cola) del daño genotóxico y el tratamiento con extractos orgánicos,
de las fracciones geoquímicas (Ewen et al., 2009). El Fe es un elemento reconociendo que existe una afectación a la salud de la población
señalado como irritante local para los pulmones y el tracto (Quijano et al., 2014).
gastrointestinal al ser inhalado. Además en casos de exposición
prolongada a una mezcla de polvo de Fe y otros metales la función Conclusiones

14 Rev. Toxicol (2020) 37: 11 - 16

 Efecto Genotóxico del material particulado PM2.5 recolectado en la zona urbana de Cuenca - Ecuador sobre la línea celular de ovario de hámster chino CHO-K1
El PM2.5 es referido como un contaminante criterio, por la OMS, el cual 8. Environmental Protectión Agency. Method 610: Polynuclear
ocasiona severos problemas de salud en la población expuesta, debido Aromatic Hydrocarbons: United States: 1984.
a la asociación de fracciones químicas orgánicas e inorgánicas. Dos
áreas de estudio superaron las concentraciones de PM2.5 establecidas 9. Ewen C, Anagnostopoulou M, Ward N. Monitoring of heavy metal
por la OMS. Los efectos genotóxicos ocasionados sobre la línea celular levels in roadside dusts of Thessaloniki, Greece in relation to motor
de hámster chino CHO-K1 por la aplicación de los tratamientos vehicle traffic density and flow. Environmental Monitoring and
acuosos fueron observados a una concentración de 3,26 m3/mL en dos Assessment. 2009; 157 (1-4), 483-498.
áreas de estudio. Para el caso de los extractos orgánicos, estos extractos 10. Fernández A, Ternero M, Barragán F, Jiménez J. An approach to
generan un mayor daño citotóxico por lo que los análisis genotóxicos characterization of sources of urban airborne particles through heavy
se realizaron a una concentración de 1,63 m3/mL. El efecto genotóxico metal speciation. Chemosphere-Global Change Science. 2000; 2
resultó positivo únicamente en el % de DNA en el P1 que pudiera estar (2), 123-136.
relacionado con su composición orgánica. Futuras investigaciones
deben considerar el análisis de las fracciones insolubles y evaluar otros 11. Gutiérrez M, Roubicek D, Cebrián M, De Vizcaya A, Sordo M,
tipos de contaminantes que pudieran estar presentes en la fracciones Ostrosky P. Effect of chemical composition on the induction of
del material particulado. Finalmente el estudio resalta la importancia DNA damage by urban airborne particulate matter. Environmental
de generar investigación relacionada con los impactos de este tipo de and molecular mutagenesis. 2006; 47 (3), 199-211.
contaminante, y aportar con información para la elaboración de un 12. Hu R, Liu G, Zhang H, Xue H, Wang X, Wang R. Particle-
marco legal nacional donde se tomen en consideración límites Associated Polycyclic
permisibles de los elementos vinculados a este contaminante.
13. Aromatic Hydrocarbons (PAHs) in the Atmosphere of Hefei, China:
Agradecimientos Levels,
El presente trabajo se ha desarrollado en el contexto del Proyecto: 14. Characterizations and Health Risks. Archives of environmental
“Genotoxicidad del material particulado (PM2.5) suspendido en el aire contamination and
de la zona urbana de Cuenca” Ganador del XIV Concurso de Proyectos
de la Dirección de Investigación de la Universidad de Cuenca DIUC, toxicology. 2018; 74 (3), 442-451.
financiado por el mismo. Los autores desean expresar su 15. Instituto Nacional de Seguridad y Bienestar en el Trabajo (INSSBT),
agradecimiento a la Universidad de Cuenca, Dirección de O.A., M. P.[sede web]. España. (2018). Límites de Exposición
Investigación (DIUC), Centro de Estudios Ambientales (CEA) y Profesional para Agentes Químicos en España.[acceso 07 de febrero
Universidad Técnica Particular de Loja, Ecuador de 2020]. Disponible en https://www.insst.es/
(PROY_CCSAL_1334) por el respaldo institucional prestado en esta
investigación, la cual pretende generar conciencia sobre los problemas 16. Jones K, Senft J. An improved method to determine cell viability by
de contaminación ambiental en nuestro país y establecer pautas para un simultaneous staining with fluorescein diacetate-propidium
cambio sostenible. iodide. Journal of .Histochemistry & Cytochemistry. 1985; 33 (1),
77-79.
Por la contribución técnica al desarrollo de éste trabajo agradecemos a
Andrea Álvarez, Katherine Arrobo, Ana Herrera, Cristina Cueva y 17. Lacasaña M, Aguilar C, Romieu I. Evolución de la contaminación
Diana Brazales. del aire e impacto de los programas de control en tres megaciudades
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16 Rev. Toxicol (2020) 37: 11 - 16

 Rev. Toxicol (2020) 37: 17 - 18

Paresia radial bilateral secundaria a exposición crónica a plomo: reporte de un

caso
Gabrielli TA1*, Voitzuk AP1, Greco V.1, Osorio P.1, Alava Arteaga JR1, Juárez FJ1, Taiman JN1, Gallo IM2
1
Centro Nacional de Intoxicaciones, Hospital Prof. Alejandro Posadas, Buenos Aires, Argentina.
2
Laboratorio de Toxicología, Hospital Prof. Alejandro Posadas, Buenos Aires, Argentina.

Resumen: La exposición ocupacional al plomo continúa siendo un

problema de salud pública que afecta mayoritariamente a trabajadores
de países en vías de desarrollo. La exposición crónica produce síntomas
similares a otras patologías clínicas motivo por el cual es importante
poseer alto grado de sospecha. De acuerdo con los síntomas, signos y
valor de plumbemia inicial, será necesario el alejamiento de la fuente
y posterior tratamiento quelante con edetato cálcico disódico y/o
dimercaprol. Presentamos un caso clínico de paresia radial bilateral por
exposición crónica a plomo.
Palabras Clave: Plomo, exposición ocupacional, paresia, quelante,
EDTA, BAL
Abstract: Bilateral radial paresis secondary to chronic lead
exposure: a case report
Occupational exposure to lead continues to be a public health problem,
affecting mainly workers of developing countries. Chronic exposure
produces symptoms that can be confused with other clinical
pathologies, which is why it is important to have a high degree of
suspicion. According to the symptoms, signs and value of initial blood Figura 1: Paresia de miembros superiores.
lead concentration, it will be necessary to remove from the source and
posterior chelation with edetate calcium disodium and/or dimercaprol. Se realizó tratamiento quelante durante 5 días con EDTA Ca con buena
We present a clinical case of bilateral radial paresis due to chronic lead tolerancia y se inicia kinesiología motora asociado a pregabalina y
exposure. amitriptilina, con mejoría parcial de la dorsiflexión de ambas manos.
Presentó una plumbemia postquelación de 44.8 mcg/dL, cifra próxima
Keywords: Lead poisoning, occupational exposure, paresis, chelator, al límite máximo biológico establecido en 40 mcg/dL.
EDTA, BAL
Discusión
Introducción
En nuestro medio la fuente de exposición más habitual es la exposición
La intoxicación crónica por plomo es un problema de distribución crónica laboral en fábricas de reciclado de baterías.
mundial propio de la era moderna siendo, la mayoría de los casos,
resultado de la exposición industrial por reciclado de baterías. La forma En cuanto a la fisiopatología de la neurotoxicidad se cree que es
clásica de neuropatía involucra debilidad de las muñecas y de los producida por varios mecanismos incluyendo apoptosis, alteración de
extensores de los dedos que, posteriormente, puede afectar otros neurotransmisores (acetilcolina, noradrenalina, GABA, glutamato y
músculos. Hay afectación sensorial mínima con una baja correlación sistemas dependientes de NMDA) y segundos mensajeros. A su vez
entre los niveles de plumbemia y neuropatía periférica, particularmente habría mecanismos de daño mitocondrial, endotelial cerebrovascular,
para el patrón subagudo (Thomson et al, 2006). así como daño en oligodendrocitos y astroglía con alteración de la
formación de mielina (Nelson et al., 2014).
Caso clínico
El plomo es capaz de atravesar las células endoteliales de la barrera
Paciente de sexo masculino de 40 años sin antecedentes de relevancia hematoencefálica (BHE) a través de las Ca+2- ATPasas gracias a su
que consulta derivado de otro centro asistencial por debilidad y dolor similitud con el calcio (Wani et al., 2015). Posteriormente se acumula
en miembros superiores (en tratamiento con pregabalina a dosis en las células astrogliales que contienen proteínas con enlaces de plomo.
habituales). Como antecedente laboral trabajó durante 10 años en Estudios clásicos demostraron que se acumula más en dichas células
fundición de plomo y reciclado de baterías con jornadas laborales de que en las propias neuronas (Thomas et al., 1973; Lindhal et al., 1999).
12 horas diarias. Se solicitó plumbemia inicial cuyo valor fue de 70.5 Los efectos tóxicos del plomo son más pronunciados en el sistema
mcg/dL y electromiograma (EMG) con resultado de denervación y nervioso en desarrollo al causar daño en las células astrogliales
déficit de unidades motoras en territorio de ambos nervios radiales, inmaduras y obstruir la formación de la vaina de mielina, ambos
cuya estimulación provocaba respuestas de baja amplitud. La velocidad factores implicados en el desarrollo de la BHE (Flora et al., 2012). De
de conducción en ambos nervios mediales y cubitales era normal. En hecho, se sabe que el coeficiente intelectual (CI) disminuye de 2-4
el examen físico se evidenciaba paresia de ambos miembros superiores puntos por cada mcg/dL en el rango entre 5 a 35 mcg/dL (Brunton,
( figura 1) con arreflexia estilorradial bilateral, hiporreflexia bicipital e 2007).
hipopalestesia distal, ribete de Burton, dolor abdominal inespecífico y
debilidad en miembros inferiores. En el laboratorio al ingreso La disfunción motora, detectada por electrofisiología, puede ocurrir con
presentaba Hto: 29.7%, Hb 9.5 g/dL, ASAT (aspartato niveles a partir de 40 mcg/dL (Klaassen, 2001).
aminotransferasa) 46 UI/L y ALAT (alanino aminotransferasa) 48 En cuanto a la clínica neurológica, produce una polineuropatía motora
UI/L. Fue evaluado por el servicio de Neurología quien diagnostica una que afecta los cuatro miembros (puede ir precedida de debilidad primero
polineuropatía motora – sensitiva de miembros superiores de probable en manos y luego en pies) y disminuye la velocidad de conducción en
etiología tóxica. el electromiograma. A su vez, puede generar convulsiones,
encefalopatía plúmbica (especialmente en niños, merced a la mayor
*e-mail: gabrielli.tomas87@gmail.com permeabilidad de su barrera hematoencefálica), edema cerebral y

11
17
sergas.es
Gabrielli TA, Voitzuk AP, Greco V, Osorio P, Alava Arteaga JR, Juárez FJ, Taiman JN, Gallo IM.
aumento de la presión intracraneana. medidas de protección personal adecuadas, debiendo contemplar áreas
independientes para comer y zonas de aseo personal y limpieza de ropa
La mayoría de neuropatías tóxicas son predominantemente sensoriales de trabajo en el propio trabajo con el fin de prevenir exposición familiar.
y la pérdida sensitiva se da en un patrón longitud – dependiente con los Así mismo, se deberán monitorizar rutinariamente los límites
pies involucrados primariamente y luego otras regiones más ambientales propuestos por la ACGIH (Albiano y Villaamil Lepori,
proximales. La debilidad tiende a afectar los extensores del dedo medio 2015).
y anular antes de afectar el resto de los dedos y extensores del pulgar y
de la muñeca. Raramente puede dañar músculos proximales, incluida Bibliografía
la cintura escapular (Thomson et al., 2006). En el caso de los miembros
inferiores habitualmente se afecta la dorsiflexión y extensión del pie. 1. Albiano N, Villaamil Lepori E. Toxicología Laboral. Buenos Aires:
Es de destacar que hay descritos históricamente casos de lesión Emede; 2015. p.102-112.
cervical, bulbar y de músculos extraoculares (Aub et al, 1925) así como 2. American Conference of Governmental Industrial Hygienists. TLVs
progresión a cuadriplejía (Oh, 1975). Así, el patrón motor suele ser and BEIs. Based on the Documentation of the Threshold Limit
ligeramente asimétrico, en parte, por la actividad muscular. La Values for Chemicals Substances and Physical Agents and
debilidad tiende a ser mayor en la mano dominante (Aub et al, 1925; Biological Exposure Indices. Cincinnati: ACGIH; 2015.
Cantarow y Trumper, 1944). En cuanto a la sensibilidad, puede afectar
todas las modalidades, siendo su presentación infrecuente. Se cree que 3. Aub JC, Fairhall LT, Minot AS, Reznikoff P. Lead poisoning.
la afectación muscular pura es más frecuente en la exposición subaguda Medicine. 1925; 4, 1–250.
a altas concentraciones, mientras que la presentación típica (motor, 4. Brunton LL, Goodman LS, Blumenthal D, Buxton I, Parker KL.
sensitiva y autonómica) es patrimonio de exposiciones crónicas Goodman and Gillmans Manual of Pharmocology and Theraupetics.
(generalmente superiores a 10 años) a concentraciones más bajas New York: Mcgraw Hill Professional; 2007.
(Rubens et al., 2001; Thomson et al, 2006).
5. Calello DP, Henretig FM. Lead. En Nelson et al., Goldfrank´s
El pronóstico de recuperación es bueno si el paciente se aleja de la Toxicologic Emergencies. 10 ed. Nueva York: McGraw Hill
fuente y depende del grado de gravedad inicial como ya indicara Education; 2014. p. 1219-1231
Windebank (1993). De hecho, los pacientes con debilidad motora
subaguda generalmente mejoran después de la baja laboral. Por el 6. Contartese CM., Gallo IM., Repetto MV. Procedimiento
contrario, no se encontró evidencia de que los pacientes con trastornos normalizado de operación para la determinación de plomo en sangre
sensoriales y exposición crónica al plomo mejoren durante sus entera por Absorción Atómica Atomización Electrotérmica (Horno
primeros años después de detener la exposición (Rubens et al., 2001). con Plataforma) del Laboratorio de Toxicología del Hospital
Nacional Prof. Alejandro Posadas (8va ed.). Buenos Aires; 2020.
Es de destacar que la neuropatía plúmbica comparte numerosas
similitudes con la presente en la porfiria cutánea. Al igual que en esta 7. Flora G., Gupta D., Tiwari A. Interdiscip Toxicol. 2012; 5(2): 47–
última, se evidencian dolores abdominales cólicos, constipación y 58.
neuropatía predominantemente motora con debilidad de patrón inusual
(carece de la distribución distal típica de las neuropatías tóxicas). La 8. Klaasen CD et al. Cassarett and Doull´s Toxicology: The basic
afectación sensitiva es más común en la porfiria cutánea, así como la science of poisons. Estados Unidos: McGraw – Hill; 2001. p. 827 –
repercusión en nervios craneales y sistema autonómico. Los 834.
biomarcadores ácido delta- amino levulínico (ALA) y las 9. Lindahl, L. S., Bird, L., Legare, M. E., Mikeska, G., Bratton, G. R.,
coproporfirinas están elevados en sangre y orina de ambos tipos de and Tiffany-Castiglioni, E. Differential ability of astroglia and
pacientes (Thomson et al, 2006). neuronal cells to accumulate lead: Dependence on cell type and on
En cuanto al diagnóstico se deberá solicitar la plumbemia (PbS) y, degree of differentiation. Toxicol. Sci. 1999; 50, 236–243.
adicionalmente, ácido delta aminolevulínico dehidratasa (δ ALA-DH) 10. Oh SJ. Lead neuropathy: case report. Arch Phys Med Rehabil. 1975;
en sangre. Si bien no hay niveles seguros de plomo en sangre, podría 56:312–317.
aceptarse hasta 5 mcg/dL en niños, 10 mcg/dL en adultos no expuestos,
y 30 mcg/dL en mujeres adultas en edad fértil expuestas y 40 mcg/dL 11. Rubens, O. Peripheral neuropathy in chronic occupational inorganic
en trabajadores adultos expuestos. lead exposure: a clinical and electrophysiological study. Journal of
Neurology, Neurosurgery & Psychiatry. 2001; 71(2), 200–204.
En el caso de sospecha de neuropatía se deberá solicitar https://doi.org/10.1136/jnnp.71.2.200
electromiograma de los cuatro miembros con velocidad de conducción
motora y sensitiva. El electroencefalograma, la tomografía 12. Talamoni M., Voitzuk AP. Metales. En Talamoni M., Crapanzano
computarizada (TC) y la resonancia magnética nuclear (RMN) deberán G. Greco V, Guía de diagnóstico y tratamiento en toxicología. 2da
ser efectuados ante la presencia de convulsiones y/o para la valoración ed. Buenos Aires: Eudeba; 2014. p. 125-130.
de secuelas (Talamoni et al., 2014). 13. Thomas, J. A., Dallenbach, F. D., & Thomas, M. The distribution of
El tratamiento incluye el alejamiento de la fuente y tratamiento radioactive lead (210pb) in the cerebellum of developing rats. The
quelante con EDTA Ca y BAL. Este último atraviesa la BHE y actúa Journal of Pathology. 1973; 109(1), 45–50.
en los espacios intra y extracelular. Una vez realizado el tratamiento https://doi.org/10.1002/path.1711090106
quelante se repetirá la plumbemia a los 15 días, evaluando necesidad 14. Thomson, R. M., & Parry, G. J. Neuropathies associated with
de nuevos ciclos de tratamiento. excessive exposure to lead. Muscle & Nerve. 2006; 33(6), 732–741.
Es fundamental el inicio de terapia de rehabilitación kinésica precoz a https://doi.org/10.1002/mus.20510
fin de aminorar las secuelas, así como también, el apoyo 15. Wani, A. L., Ara, A., & Usmani, J. A. Lead toxicity: a
psicoterapéutico de los pacientes, teniendo en cuenta la incapacidad review. Interdisciplinary Toxicology. 2015; 8(2), 55–64.
temporal o permanente que puede generar la afectación del miembro. https://doi.org/10.1515/intox-2015-0009
Es frecuente la aparición de depresión en los pacientes laboralmente
activos por la pérdida de función motora. 16. Windebank AJ. Metal neuropathy. En Dyck PJ, Thomas PE,
Griffin JW, Low PA, Poduslo JF, Peripheral neuropathy.
La higiene en los centros de trabajo es fundamental para prevenir la Philadelphia: WB Saunders; 1993. p. 1549–1570.
exposición excesiva a plomo. Los trabajadores deben contar con

18 Rev. Toxicol (2020) 37: 17 - 18

 Rev. Toxicol (2020) 37: 19 - 25

Induction of Genetic Alterations and Oxidative Stress in Giant African Land Snail
(Limicolaria aurora) Exposed to Municipal Waste Leachate
Ugokwe C. U. 1*, Okafor F. C1., Okeke P. C2., Ezewudo B. I1., Olagunju T.E 3
1
Department of Zoology and Environmental Biology, University of Nigeria, Nsukka, Enugu State, Nigeria.
2
Opec Entomology Consult, Awka, Anambra State, Nigeria
3
Department of Biology/Microbiology/Biotechnology, Alex Ekwueme Federal University, Ndufu-Alike Ikwo, Nigeria

Abstract: Uncontrolled waste disposal has continuously threatened the become imperative to monitor and evaluate waste leachate toxicity.
health of the surrounding environment through the leaching of
hazardous xenobiotics. Systemic toxicity and genotoxicity potential of Generally, leachate assessment is based on identification of pollutants
waste leachates from Onitsha municipal dumpsite were investigated in through chemical analyses which can only detect a slight amount of the
giant African land snail (Limicolaria aurora) through oxidative stress toxic compounds present in leachate samples (Ghosh et al., 2017),
biomarker and micronucleus test assessment respectively. however, evaluation of leachate can also be assessed on the interactions
Physicochemical indices were evaluated in the leachate following with biota (Tsarpali et al., 2012). Bioassay toxicity tests can evaluate
standard protocols. Snails were exposed to different concentrations (0, effects on organisms and can detect toxicity even when the pollutants
6.25, 12.5, 25.0 and 50.0%) of waste leachate for 21 days; oxidative are not detected by chemical analysis. It integrates the effect of all
stress biomarkers and micronucleus analysis performed on snail contaminants and provides indication on their bioavailability (Tsarpali
digestive gland and hemocyte respectively. The leachate induced dose- et al., 2012).
duration dependent increase (P< 0.05) in Superoxide dismutase, Animal use in evaluating the toxicity of waste leachates has become a
Catalase, malondialdehyde and Glutathione peroxidase levels with well-established practice. Land snails, have an ecological role and
associated decrease in total protein concentrations in the exposed snails importance as the most species-rich group of terrestrial mollusks and
compared to the control. Similarly, the frequency of micronucleus and are broadly acknowledged as being an effective bioindicator of
other nuclear abnormalities shows concentration dependent increase environmental stress. They are easily used in evaluating terrestrial
(P< 0.05) in treated groups. This observed genotoxic effect might be pollution (Vega et al., 2012), due to their wide distribution, easy
induced by the oxidative stress, via the production of reactive oxygen sampling and capability to bio accumulate pollutants (Anim et al.,
species. This shows that waste leachate contains hazardous and 2011).
genotoxic compounds capable of inducing oxidative stress and DNA
damage. Therefore, continuous exposure of waste leachate into the Onitsha, one of the major cities in Anambra State, southeastern Nigeria,
environment could pose a grave health risk to the surrounding biota, is one of the most important commercial hubs in sub-Sahara Africa with
humans included. significant human population. It has the biggest municipal waste dump,
situated along Onitsha-Owerri road, Obosi, and receive most of the solid
Keywords: Biochemical, Giant African Land Snail, Micronucleus, waste from Onitsha metropolis. Leachate collection and treatment
Nigeria, Waste Pollution. system is lacking in this dumpsite; thus, leachates generated from the
waste are easily discharged into the surrounding aquatic and terrestrial
Introduction
environmental media. Hence, this study aimed at evaluating the
Uncontrolled urbanization and high population growth results in waste systemic toxicity and genotoxicity potential of waste leachate from
generation increase, with serious environmental implications when the Onitsha municipal waste dumpsite in giant African land snail
rapid growing waste rates are not effectively disposed. Management of (Limicolaria aurora) via oxidative stress and micronucleus test
municipal solid waste has become a grave problem in most developing assessment respectively.
countries. In Nigeria, per day, more than 12 million tons of solid wastes
is generated, of which less than 28% are efficiently managed, with
Materials and Methods
landfilling and/or open dumping common methods for these waste Leachate collection
disposals (Adetoro et al., 2018). This method of waste management is
a known source of environmental pollution, which can cause severe Obosi dumpsite situated at Onitsha-Owerri road, Ogbaru Local
impact on human and environmental health (Gupta et al., 2019). Government (latitude 6º06́ 12`N and longitude 6º48́́ 43`E) Anambra
Improperly disposed wastes in landfills/dump sites undergo series of State, was chosen as the collection site for leachate sample. This site is
biological and chemical changes that results in the formation of toxic the primary municipal dumping site of Onitsha and its metropolitan area
leachate (Ghosh et al., 2017). for over 10 years. Dumping of waste at this site is unrestricted and
contains mixtures of both organic and inorganic waste materials,
Waste leachate is generated due to filtration of water through waste including industrial, agricultural, domestic and medical wastes. Raw
and/or moisture containing by-products of biochemical interactions leachates were collected from different leachate wells in the dumpsite,
that occur in the dumpsite (Ghosh et al., 2017). Leachate transports thoroughly mixed to provide a representative leachate sample. The
organic and inorganic compounds, in downward and outward leachate was taken to the laboratory in pre-washed 5-liter plastic
movement, conveying contaminants from the landfill (Zin et al., 2012). container and stored at 4oC until use.
This has become a major source of pollution for underground and
immediate surface water ecosystems (Li et al., 2017). Waste leachates Leachate characterization
are highly complex in nature; consisting of numerous toxic compounds
Leachate analysis was done by measuring the physical and chemical
such as macro-inorganic compounds, phenols, heavy metals, pesticides
components of the leachate. Parameters such as pH, electrical
and pathogens. Combined, these compounds can bio-accumulate in
conductivity, total dissolved solid (TDS) and Dissolved oxygen (DO),
aquatic organisms, eventually reaching to animals and humans through
were determined in-situ with a digital Multimeter (TOPAC
the food chain (Zhao et al., 2017). Studies have strongly suggested that
INSTRUMENTS INC). Chloride, phosphate, Nitrate, ammonia,
pollutants present in leachates have harmful effects on some living
sulphate, total hardness, total alkalinity, biochemical oxygen demand
cells (Adetoro et al., 2018; Gupta et al., 2019). This poses concerns on
(BOD) and chemical oxygen demand (COD) were determined
the health safety of the environment, animals and humans, hence, it has
according to APHA (2012). The concentrations of heavy metals; Iron
(Fe), Lead (Pb), Copper (Cu), Zinc (Zn), Cadmium (Cd) and Chromium
*e-mail: ugokwecollins@gmail.com (Cr) were carried out using Buck Scientific Atomic absorption

1119
sergas.es
Ugokwe C. U., Okafor F. C., Okeke P. C., Ezewudo B. I., Olagunju T.E
spectrophotometer, after digestion with a mixture of HClO3 and HNO3 Estimation of Glutathione Peroxidase: The level of Glutathione
(ratio of 1:2), according to USEPA (1996) and APHA (2012) . peroxidase (GPx) was measured in a cuvette with a solution consisting
of 2 μg protein homogenate, 50 mM potassium phosphate buffer,
Biotoxicity Test 0.4mM EDTA, 0.15 mMβ-NADPH, 1unit glutathione reductase, and 1
Adult giant African land snails (Limicolaria aurora) (average weight; mM glutathione (reduced) according to the method of Livingstone et al.
10.47± 0.42g) were used as test organism to assess the toxicity of the (1992). The change in absorbance was determined based on the
collected waste leachate. These land snails are delicacy in diets of rural decrease of NADPH at 340 nm for 1 min and was expressed as μmol/mg
communities (Ebenso et al., 2004b), they play an important ecological of proteins.
roles and have been recognized as a suitable bioindicator of Estimation of Total proteins: The protein concentration was
environmental stress due to their ability to bio accumulate compounds determined according to Bradford (1976) method, based on the reaction
(Ebenso et al., 2004a,b; Ebenso et al., 2005; Anim et al., 2011 ). The of proteins with Coomassie Brilliant Blue G-250 dye. The calibration
snails were commercially acquired from a snail farm in Nsukka, Enugu curve was prepared with bovine serum albumin (BSA) and absorbance
State, and transported to the animal house of the Department of read in a spectrophotometer at 595 nm.
Zoology and Environmental Biology, University of Nigeria, Nsukka.
They were kept in plastic boxes 12 x 12 x 60cm3 with lids punctured Micronucleus assay
for ventilation, under constant conditions with a temperature cycle of
27 ± 2oC. They were acclimatized for six (6) days according to the Micronucleus test was evaluated on snail hemocytes according to the
method described by Ebenso et al. (2004a) and fed ad libitum with methods of Villela et al. (2007). The collected hemolymph was added
fresh green pawpaw (Carica papaya) leaves. The use of these snails to 1ml of 0.075 M potassium chloride in a tube and maintained under
was in accordance with the guidelines on the use of animals for incubator at 340C for 1hr. Samples were centrifuged at 550×g for 10
research as stated by the institutional animal care committee of min; supernatants were removed and drop of cell suspensions smeared
University of Nigeria Nsukka. The experiment was conducted under on clean microscopic slides, and then allowed to air-dry at room
the natural photoperiod prevalent at Nsukka (Nigeria) in the month of temperature. The cells were fixed in absolute methanol for 5 min,
August. allowed to air-dry and subsequently stained with 5% Giemsa for 10 min.
Total of 2000 hemocytes were scored per sample under a light
The treatment groups comprises of five different concentrations (0, microscope (1000× magnification) and results recorded as
6.25, 12.5, 25.0 and 50.0%) of the leachate sample (v/v; leachate: micronucleus frequency (MN frequency). The mean frequencies of each
dechlorinated tap water). Sterile Loamy soil was placed at base of category were estimated and expressed per 1000 cells (%).
different boxes of each group (each in triplicate) up to 2cm deep, and
moistened with the different treatment solutions respectively. This Statistical Analysis
acted as both substrate and source of exposure. Ten (10) snails each Two-factor analysis of variance (ANOVA) was used to examine the
were randomly allotted to each plastic box of each concentration. Oral effects of leachate concentrations and exposure durations on the level
application of different leachate samples was also given to the snails of oxidative stress parameters, and frequency of nuclear abnormalities
using chopped pawpaw (C. papaya) leaves. This was done by in snails. The means were separated using Turkey’s test at 0.05%
immersing the pawpaw leaves in their respective leachate significance level. Results with P < 0.05 were considered statistically
concentrations before feeding it to the snails. Snails were fed and significant. The analysis was done using R statistical software, version
watered twice a week. During the 21-day exposure period, three (3) 3.5.3.
snails from each group were randomly selected at interval (day 1, 7, 14
and 21). Result
Haemolymph was collected through the hemal pore according to the Physicochemical characteristics of leachate
methods of Sminia and Barendsen (1980). Briefly, the foot of the snail
was stimulated with the tip of micropipette; extruded hemolymph was The values of phosphate, sulphate, COD, sodium, BOD, EC alkalinity,
collected with micropipette for micronucleus test after the snail deeply TDS, nitrate, ammonia, and chloride ion analysed were higher than
retract into its shell. The snails were later euthanized and the digestive regulatory safe limits (Table 1). Equally, the leachate concentrations of
gland dissected out for evaluation of oxidative stress parameters. heavy metals; lead, cadmium, Chromium, copper, iron and zinc were
higher compared to standard permissible limits (Table 1).
Biochemical Assays
Effects of waste leachate exposure on oxidative stress
Estimation of Lipid Peroxidation: Lipid peroxidation was estimated parameters in Limcoraria aurora
by determining the concentration of malondialdehyde (MDA)
equivalents produced by reaction with 0.6% thiobarbituric acid (El- Concentration and duration of waste leachate exposures influenced the
Moshaty et al., 1993). Absorbance was determined at 532 nm and the levels of oxidative stress indices in Limicoraria aurora (Table 2). The
result expressed in μmol/mg proteins. mean level of SOD and CAT was significantly (P < 0.001) higher in
those exposed to the different concentrations of leachate compared to
Estimation of Superoxide dismutase (SOD): Superoxide dismutase those of the control group (Figures 1 and 2). With respect to the duration
activity was measured by Nitro Bluetetrazolium (NBT) of exposure, the mean levels of SOD observed on days 14 and 21 was
spectrophotometry as described by the method of Zhu et al. (1990). significantly higher than those of days 1 and 7. No significant difference
Xanthine and xanthine oxidase generated superoxide anion radicals, was observed between day 1 and 7, nor between day 14 and 21 in the
which react with 2-(4-indophenyl)- 3(4-nitro-phenyl)-5-phenyl mean SOD levels (Figure 1). The highest level of CAT was also
tetrazolium chloride (NBT) to form a red formazan dye. Inhibition of observed on day 14 and 21, which was significantly different from those
50% of the reaction was defined as one unit of superoxide dismutase of day 7 and 1 (Figures 2).
enzyme. Absorbance was determined at 560 nm and the result
expressed as units/mg proteins. Comparing snails exposed to leachate treatment to the control, the levels
of malondialdehyde (MDA) and Glutathione Peroxidase (GPx) were
Estimation of Catalase: Catalase (CAT) activity was determined observed to be significantly higher in the snails treated with leachate,
spectrophotometrically according to the method of Zhang et al. (2010), compared to the control. There was, however, no significant difference
by measuring the decrease of absorbance at 240 nm in a reaction in the levels of MDA and GPx for the different concentrations of
mixture containing 0.3 ml H2O2 (0.1 M) and 0.1 ml extract. The result
was expressed as μmol/mg of proteins.

20 Rev. Toxicol (2020) 37: 19 - 25 11

 Toxicity of Waste Leachate in Limicolaria aurora

Table 1. Physicochemical characteristics of Onitsha Municipal Waste leachate.

Physicochemical Leachate Sample Standards

Parameters+
NESREA USEPA

pH 8.20 ± 0.1 6.0 – 9.0 6.5 – 8.5

COD (mg/l) 464 ± 74.9 90 410
BOD (mg/l) 263 ± 52.8 50 -
TDS (mg/l) 1328.73 ± 69.3 500 500
Hardness (mg/l) 259 ± 173.9 - 0 -75
Alkalinity (mg/l) 387 ± 116.4 150 20
EC (μs/cm) 383 ± 50.6 125 -
Chloride (mg/l) 951 ± 164.9 250 250
Ammonia (mg/l) 16.82 ± 5.2 1.0 0.02
Phosphate (mg/l) 288.39 ± 10.9 2.0 -
Nitrate (mg/l) 14.03 ± 1.5 10 10
Sulphate (mg/l) 379.02 ± 16.4 250 250 Figure 1: Boxplot of the mean levels of SOD in snails exposed to different concentrations
Sodium (mg/l) 47.92 ± 1.2 0.50 - of leachate, grouped by their duration of exposure.

Potassium (mg/l) 55.18 ± 0.6 100 -

Calcium (mg/l) 38.04 ± 3.2 50 -
Lead (mg/l) 0.73 ± 0.2 0.05 0.015
Cadmium (mg/l) 0.47 ± 0.2 0.2 0.05
Chromium 1.93 ± 0.5 0.05 0.01
Copper (mg/l) 2.05 ± 0.2 0.5 1.0

Iron (mg/l) 14.74 ± 4.5 - 0.3

Zinc (mg/l) 7.32 ± 2.7 6.0 – 9.0 -

Key: NESREA=National Environmental Standards and Regulations Enforcement
Agency, USEPA=United State Environmental Protection Agency, COD= Chemical
Oxygen Demand, BOD =Biological Oxygen Demand, TDS = Total Dissolved Solids,
EC=Electrical Conductivity. Values are mean of three replicate determination (n = 3) ±
standard deviations

Table 2. Influence of leachates treatment effects on oxidative stress indices in L. aurora.

Parameters SOD CAT MDA GPx TP

Concentration < < < < < 0.001

0.001 0.001 0.001 0.001 Figure 2: Boxplot of the mean levels of CAT in snails exposed to different concentrations
Duration 0.005 < < < < 0.001 of leachate, grouped by their duration of exposure.
0.001 0.001 0.001
Concentration x Ns Ns ns Ns ns
Duration

ns = not significant

leachate (Figures 3 and 4). With respect to the duration of exposure to

leachate, a significant increase in the mean level of MDA was observed
on day 7 of exposure. This increase was not significantly different in
days 14 and 21 (Figure 3). On the other hand, a significant increase in
the mean level of GPx was observed on day 14 of exposure. This
increase was not significantly different in day 21 (Figure 4).
The mean level of Total protein (TP) was observed to be significantly
lower in snails treated with leachate, compared to the control snails.
There was, however, no significant difference in the level of TP for the
different concentrations of leachate. Upon exposure to waste leachate
for different duration of time, the mean level of TP was observed to be
highest on day 1 and lowest on day 21 (Figure 5).
Effects of waste leachate concentration and duration on the Figure 3: Boxplot of the mean levels of MDA in snails exposed to different
frequency of micronuclei (MN) and other nuclear abnormalities concentrations of leachate, grouped by their duration of exposure.
(NA)
The frequency of micronuclei (MN) in snails exposed to leachates was (Table 3). The mean frequency of MN in snails exposed to leachate
significantly influenced by both concentration and duration of treatment was significantly higher than those of the control snails. A
exposure, whereas the frequency of other nuclear abnormalities (NA) change in the leachate concentration, however, had no effect on the
was significantly influenced by only the concentration of the leachates. frequency of MN in those snails exposed to leachate treatment. With

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 Ugokwe C. U., Okafor F. C., Okeke P. C., Ezewudo B. I., Olagunju T.E

Figure 6: Mean and SE for frequency of MN in snails exposed to different concentrations

of leachate, grouped by their duration of exposure.

Figure 4: Boxplot of the mean levels of GPx in snails exposed to different concentrations
of leachate, grouped by their duration of exposure.

Figure 7: Mean and SE for frequency of NA in snails exposed to different concentrations

of leachate, grouped by their duration of exposure.

Figure 5: Boxplot of the mean levels of TP in snails exposed to different concentrations

of leachate, grouped by their duration of exposure.

Table 3. Influence of treatment effects on the frequencies of micronucleus (MN) and

nuclear abnormalities (NA) for leachates.

Parameters Micronuclei (MN) Nuclear abnormalities

Figure 8: Hemocytes of L. aurora exposed to waste leachate showing, Normal hemocyte
(NA)
(N), micronucleated cell (M), binucleated cell (BN), Karyolytic cell (KL) and
Concentration < 0.001 < 0.001 Karyorrhectic cell (KH) (×1000)

Duration 0.005 ns of ecologically relevant species like land snails offers a chance to
Concentration x Duration Ns ns perform early tests on ecosystem health in relation to exposure to these
ns = not significant. contaminants (Jha, 2004).

respect to duration of exposure to leachate, significant increase in the Oxidative stress is one of the most reported biological response
mean frequency of MN was observed on day 14, and was not observed in snails treated with several chemical compounds. Digestive
significantly different from that of day 21 (Figure 6). In comparison glands in mollusks are known to be one of the important sites of
with the control, a significantly higher frequency of other NA was multiple oxidative reactions and maximal free radical generation (Ali et
observed in snails exposed to leachate concentrations of 12.5%, 25% al., 2012). The increase or decrease in antioxidant activity in organisms
and 50%. No significant difference was observed between the control results to an oxidative stress (Ojha et al., 2011). Oxidative stress,
snails and those exposed to leachate concentration of 6.25% (Figure 7). therefore, occur as an imbalance in the biological oxidant to antioxidant
ratio; which results to lipid, proteins, carbohydrates and nucleic acids
Discussion impairment. In most cases, is the high production of reactive oxygen
species (ROS), which results to severe damage to cell structure,
Waste leachates constitute major source of environmental pollution indicative of oxidative damage (El-Demerdash, 2007). High production
and contains hazardous compounds such as organic and inorganic of ROS and its direct interaction with biological tissues are the major
compounds. These toxic compounds induce physiological dysfunction mechanisms exerted by pollutants in biological systems (Ma et al.,
and DNA damage in most biota (Alimba and Bakare, 2016), and have 2013).
become a serious health issue, due to their ability to bond with DNA
molecules and induce cascades of biological damages. The application The elevation of the antioxidant enzymes observed in the present study

22 Rev. Toxicol (2020) 37: 19 - 25

 Toxicity of Waste Leachate in Limicolaria aurora
suggests that waste leachate have oxidative stress inducing effects in al., 1983). In this study, significant decrease in Total Protein levels was
the exposed snails. SOD and CAT are the initial line of defense in observed in snail treatment groups compared to the controls. Singh et
antioxidant systems due to their significant function against oxidative al. (1996) reported that the quantity of proteins depends on the rate of
stress. In this study, the significant increase in the activities of SOD synthesis or its degradation. The decrease in the reported levels of total
and CAT observed in the digestive gland of L. aurora exposed to waste protein may be partly resulted from imbalance between the rate of
leachate is an indicative of cellular damage that results in release of synthesis and the rate of degradation. Depletion in the concentration of
antioxidant enzymes to inhibit the accumulation of reactive oxygen protein might be due to either suppressed incorporation of protein
intermediates. Wu and Yi (2015) reported that exposure to pollutants synthesis or increased breakdown of proteins in to amino acids, which
increases the antioxidant enzymes like SOD and CAT to neutralize the further diffused out of cells (Gaur, 2011). In addition, the harmful effect
impact of ROS. Increase in SOD and CAT activity was dose-duration of the waste leachate could cause increase in energy utilization and
dependent and was observed in snails exposed to highest damage to cell organelles of exposed snails leading to inhibition of
concentrations (25% and 50%) of leachate over longer durations (days protein synthesis (Eissa et al., 2002). The present study is in consonance
14 and 21). This might have occurred to compensate for increase in with the observations of Radwan et al. (2008), that methiocarb caused
ROS caused by high leachate concentrations, resulting to oxidative significant decrease in total proteins in the tissues of E. vermiculata.
stress. It has been suggested that toxicants may induce different
antioxidant/prooxidant responses depending on their ability to produce Micronucleus (MN) test has been a common method in environmental
ROS (Barata et al., 2005). Similar to this study, Fahmy et al. (2014) genotoxicity assessment. MN are formed in actively dividing cell as a
reported the toxicity of zinc oxide nano-particules, which include result of mitotic spindle dysfunction or lagging chromosomes that failed
inhibition and stimulation of both SOD and CAT activities, depending to incorporate in the daughter nuclei during cell division (Krishna et al.,
on their concentrations in tissues of freshwater snail Biomphalaria 2000). Bakare et al. (2012) opined that the formation of micronucleus
alexandrina. They suggested that the observed effects could be due to is an indication of DNA damage. Haemocytes are frequently used in
ROS formation and increase in antioxidant defense system cytogenetic evaluation due to their sensitivity to genotoxic pollutant,
dysfunction. relatively non-invasive, easily sampled, and play significant role in
immune defense and detoxification (Magni et al., 2006). In the present
Lipids are one of the principal targets of oxidative stress. Lipid study, micronuclei (MN) and other nuclear abnormalities (NA) were
peroxidation results to generation of highly damaging intermediates, investigated in hemocyte of Limicolaria aurora exposed to different
which consequently increase the production of ROS in biological concentrations of waste leachate. The study revealed increase of
system. Malondialdehyde (MDA) is the main biomarkers of lipid micronuclei and other nuclear abnormalities on snails exposed to
peroxidation and its quantification is a direct indicator of oxidative leachate compared to the control. This result suggested that the waste
stress (Tao et al., 2013). In this study, increase in MDA concentration leachate contain xenobiotics, mostly toxic metals and organic
was observed in L. aurora exposed to waste leachate compared to the compounds, which are clastogenic and or aneugenic and are capable of
control. Free radicals generation by pollutants in biological system has causing chromosomal damage in L. aurora. This result is in accordance
been reported to result to increased levels in MDA (Belhaouchet et al., with the findings of Khalil (2016) who reported increase formation of
2012). This result is comparable with the reports of Siwela et al. (2010) MN in land snail (Eobania vermiculata) exposed to sublethal doses of
that observed high increase in MDA level in Lymnaea natalensis, methomyl lannate.
exposed to environmental pollutants. In addition, Fahmy et al. (2014)
recorded a significant increase in MDA level in the tissues of Frequency of micronuclei observed in treated snails was also
biomphalaria alexandrina exposed to zinc oxide nanoparticles. significantly influenced by the duration of exposure to leachate.
Giarratano et al. (2014) suggested that the increase free radical Observed increase in MN frequencies on days 7 and 14 indicate
production might be associated with the high content of iron (Fe) in increased genetic alterations, which might enhance cell mutation and
digestive gland tissue of snails. Through Fentontype reactions, Fe can cancer formation, and possibly, leading to decreased embryonic
induce the production of toxic radicals and aggravates peroxidation of viability, genetic disorders and biodiversity loss of biota (Russo et al.,
lipids; therefore, the high increase of MDA content observed in this 2004). These findings were in congruence with the report of Alimba and
study might also be due to the high concentration of Fe in the leachate. Bakare (2016) wherein they observed significant increase in MN
This is in consonance with the findings of Radwan et al. (2010) which formations in catfish, quail and rat exposed to landfill leachates.
demonstrated positive correlation of MDA with heavy metals, and Aside the formation of micronuclei, increased frequencies in other
suggested that the presence of ionic metals in the digestive gland of nuclear abnormalities in hemocytes of treated snails were observed and
snails catalyzes the Fenton reaction and increase the risk of cell injury. their presence complement the scoring of MN and further accentuate
Glutathione peroxidase (GPx) is known as the most significant the genotoxic effects of the leachate. These nuclear abnormalities are
peroxidase that detoxify the peroxide and hydroperoxides to water and indicators of cellular dysfunction in snail and can lead to genetic
hydroxyl compounds, respectively (Pinto et al., 2003) thus it damage (Rodilla, 1993). The occurrence of binucleated cells is the result
constitutes an essential part of the antioxidant system. In this study, of the inhibition of cytokinesis during M phase of the cell cycle leading
significant increases in GPx activity in L. aurora exposed to varying to the formation of a cell with two nuclei (Fenech et al., 2003). Ali et
concentrations of leachate were recorded compared to the control. This al. (2008) and Alimba and Bakare (2016) reported similar observations.
might be due to the formation of free radicals in the cells, since ROS is The presence of Karyorrhectic cells might be associated with the
the main substrate for GPx activation (Hermes-Lima, 2004). GPx chromatin disorder caused by xenobiotics in the waste leachate,
stimulation shows dose and duration dependent of leachate exposures. resulting to dense network of nucleochromatin elements that lead to
This could be associated to its compensatory role in the defense system fragmentation and disintegration of the nucleus. Karyolytic cells
of the antioxidant mechanism as toxicant in the system increases. Ali appears to have no nuclei. This indicates cell injury, which are
et al. (2012) observed an increase GPx activity in the digestive gland associated to the late stage of cell death process.
of Lymnaea luteola and suggested the cause to be overproduction of The main impact of oxidative stress is chromosomal damage (Radetski
ROS after ZnO nanoparticles exposure. The reported increase is also et al., 2004), and elevated levels of oxidative enzymes was earlier
in consistent with the findings of El-Shenawy et al. (2012) who observed in this study. Induction of DNA damage due to oxidative stress
observed elevated GPx levels in snails exposed to cadmium, lead, have been reported in waste leachate exposures (Bakare et al., 2013).
copper and iron. This occurrence might be due to oxidative biotransformation that
Proteins are one of the major groups of biological materials comprising produces high DNA-reactive specie (Woodhead et al., 1999). This
the chief nitrogenous elements of the body tissues. The concentration postulation reinforced the reports of Bakare et al. (2012), wherein they
of free amino acids in mollusk varies with pollution levels (Bishop et showed that MN induction by landfill leachate in mouse might be due

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 Ugokwe C. U., Okafor F. C., Okeke P. C., Ezewudo B. I., Olagunju T.E
to oxidative damage caused by chemicals present in the leachate. waste leachate and contaminated well water. Challen. 2013; 4:169–
187.
Furthermore, heavy metals can form a bond with phosphate and DNA
bases, interfering with protein structure and function to cause DNA 9. Bakare AA, Patel S, Pandey AK, Bajpayee M, Dhawan A. DNA and
damage (Resit et al., 1998). High concentrations of heavy metals above oxidative damage induced in somatic organs and tissues of mouse
the standard permissible limits observed in the leachate might also be by municipal sludge leachate. Toxicol IndHealth. 2012; 28:614–
accountable for these observations. Heavy metals are known mutagenic 623.
and studies have linked the genotoxic potential of heavy metals to
accumulation of free radicals and DNA damage actions in some 10. Barata C, Varo I, Navarro JC, Arun S, Porte C. Antioxidant enzyme
organisms (Andreikėnaitė et al., 2007). In addition, the elevated levels activities and lipid peroxidation in the freshwater cladoceran
in conductivity, TDS, COD, BOD and anions levels suggested that the Daphnia magna exposed to redox cycling compounds. Toxicol.
waste leachate contain high proportion of inorganic pollutants, which Comp. Biochem. Physiol.C. 2005; 140: 175–186.
can also contributed to the oxidative damage and genotoxic effects 11. Belhaouchet N, Djebar MR, Meksem L, Grara N, Zeriri I, Berrebbah
observed in this study. H. Evaluation of the biomarkers of the oxidative stress induced by a
biopesticide. The Spinosad on an alternate model: Helix aspersa. J.
Conclusion
Appl. Sci. Res. 2012; 8: 4199-4206.
In this study, observed induction of oxidative stress and genotoxicity
12. Bishop SH, Ellis LL, Burcham JM. Amino acid metabolism in
in concentration and duration dependent manner was stimulated by the
molluscs. In the Mollusca. Metabolic Biochemistry and Molecular
sampled waste leachate in L. aurora. The genotoxic effect observed
Biomechanics. Academic Press, New York, USA. 1983; 1: 243-327.
was likely induced through the production of reactive oxygen species
(ROS) which also resulted in oxidative stress. This reinforced that 13. Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of
waste leachate consists of hazardous compounds capable of posing a microgram quantities of protein utilizing the principle of protein–
public health risk to the environment, surrounding biota and humans dye binding. Ann. Biochem. 1976; 72:248–254.
included. This study also demonstrate the sensitivity of giant African
land snail to environmental pollutants and therefore, recommends its 14. Ebenso IE. Molluscicidal effects of neem Azadirachta indica extract
use in environmental monitoring studies. on edible tropical land snails. Pest Manag. Sci. 2004a; 60(2): 178 –
182.
Acknowledgments
15. Ebenso IE, Chukwu S, Udo S, Ukpai CU, Udo MT, Umanah U,
The authors acknowledge the technical support of Dr. Oguejiofor of Isang A, Akam A. Some behavioural responses of Limicolaria
Faculty of Veterinary Medicine, University of Nigeria, Nsukka. aurora exposed to gramoxone. Nigerian J. Physiol. Sci. 2004b;
19(1-2): 82 – 85
Conflict of interest
16. Ebenso IE, Ita B, Umoren EP, Ita M, Binang W, Edet G, Izah M,
The authors declare no conflict of interest regarding the publication of Udo IO, Ibanga G, Ukpong EE. Effect of carbamate molluscicide on
this manuscript. African giant land snail Limicolaria aurora. J. Appl. Sci. Environ.
Reference Mgt. 2005; 9(1): 99 - 102
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Rev. Toxicol (2020) 37: 26 - 30

Investigación toxicológica en suicidios a partir de las muestras recibidas en el

Servicio de Toxicología Forense de la Universidad de Santiago de Compostela en
el periodo 2009-2018
Álvarez-Freire I, Cabarcos Fernández P, Regenjo Vázquez M, Tabernero Duque MJ, Bermejo Barrera AM
Servicio de Toxicología Forense. Instituto de Ciencias Forenses. Facultad de Medicina. Universidad de Santiago de Compostela C/ San Francisco s/n 15782 Santiago
de Compostela España

Resumen: Los suicidios son la principal causa de muerte violenta en de prácticamente todos los casos forenses, siendo un componente
España, muy por delante de los accidentes de tráfico. Los medios más integral de la investigación del suicidio. Los hallazgos detectados
comúnmente utilizados para ello son la ahorcadura, precipitación, durante los exámenes toxicológicos pueden arrojar luz sobre la causa y
sumersión y las intoxicaciones. En el Laboratorio de Toxicología la forma de la muerte. Los resultados toxicológicos pueden revelar la
Forense del Instituto de Ciencias Forenses de la Universidad de falta de medicación, o el incumplimiento de tratamiento, en un
Santiago de Compostela, se reciben las muestras judiciales de parte de individuo afectado con trastorno psiquiátrico como la depresión.
los fallecidos en la Comunidad Autónoma de Galicia, entre los que se También pueden revelar la presencia de etanol u otra sustancia
encuentra un gran número de suicidios. En este trabajo se recopilan los potencialmente tóxica en un suicida.
datos disponibles de los casos de suicidio recibidos, durante el período
2009-2018. Se han analizado 1177 casos, encontrándose que el método Actualmente, existen muy pocos trabajos publicados sobre los suicidios
más frecuente de suicidio es el ahorcamiento, tanto en hombres como desde el punto de vista toxicológico (Shields et al., 2006) (Shane Darke,
en mujeres, seguido de la precipitación. El número de casos de suicidio 2009), y ninguno en Galicia hasta la fecha. Este trabajo comprende 10
de hombres recibidos triplica al de mujeres en el total de casos años (2009-2018) y repasa los hallazgos toxicológicos de los casos de
recibidos. Alrededor de un 50% de los casos fueron positivos a alguna suicidio analizados en el Instituto de Ciencias Forenses de la
sustancia tóxica. En más del 20% la determinación de alcohol etílico Universidad de Santiago de Compostela, provenientes de la Comunidad
en sangre resultó positiva siendo más frecuente en hombres que en Autónoma de Galicia.
mujeres. La presencia de drogas y medicamentos se confirmó en más Material y Métodos
del 30 % de los casos y para estas sustancias son las mujeres el grupo
predominante. Se ha realizado una revisión retrospectiva de 10 años de los casos de
suicidio, cuyas muestras biológicas fueron enviadas al Laboratorio de
Palabras Clave: Suicidio; Investigación Toxicológica; Galicia Toxicología Forense. Los datos analizados son: el género, la edad, la
Introducción procedencia geográfica de cada caso, el método de suicidio, así como
los resultados toxicológicos.
El suicidio es la acción de quitarse la vida de forma voluntaria y
premeditada. Cada año mueren en el mundo cerca de 800.000 personas Los análisis toxicológicos se realizan principalmente en sangre y orina.
por suicidio, más que por accidentes de tráfico o conflictos bélicos Cuando el médico forense lo solicita, se analizan otras muestras como
(OMS, 2019). Se estima que, por cada suicidio llevado a cabo con bilis, contenido gástrico y humor vítreo. De forma general, se realiza en
éxito, se cometen 20 que no fructifican pero que acarrean primer lugar un screening en orina (si está disponible) mediante un
consecuencias como lesiones graves, hospitalizaciones y secuelas inmunoensayo, seguido de la confirmación y cuantificación por
emocionales, tanto para el suicida como para sus allegados. El suicidio cromatografía de gases acoplada a la espectrometría de masas (CG-EM)
es un problema multifactorial y que ofrece diferentes facetas de o cromatografía líquida de alta resolución acoplada a un detector de red
aproximación, tanto epidemiológicas y de salud pública, como desde de diodos (HPLC-PDA). El análisis de etanol se realiza mediante
el punto de vista clínico-psiquiátrico y toxicológico. cromatografía de gases y detección de ionización de llama (CG-FID) y
tanto el monóxido de carbono (carboxihemoglobina) como el cianuro
La Organización Mundial de la Salud (OMS) desarrolla la se determinan por espectrofotometría ultravioleta-visible.
Clasificación Internacional de Enfermedades (CIE, 2019). En el
capítulo 20 de la misma, se encuentran las autolesiones intencionales Resultados
designadas por los códigos del X60 al X84: Incidencia de los suicidios
Envenenamiento autoinfligido intencionalmente por, y exposición a: Se analizaron un total de 1177 casos. En la Figura 1 se muestran el total
Analgésicos, drogas, narcóticos, medicamentos y otras sustancias de casos de suicidio en España (INE, 2019) distribuidos por año, el
(X60-X64); al alcohol (X65); disolventes orgánicos e hidrocarburos número total en Galicia (IMELGA, 2019) (representan un 9,08% del
halogenados y sus vapores (X66); otros gases y vapores (X67); total de España) y el número de casos recibidos en nuestro laboratorio
plaguicidas (X68); otros productos químicos y sustancias nocivas, y (36.51% del total de suicidios en Galicia).
los no especificados(X69)
Lesión autoinfligida intencionalmente por:
Ahorcamiento, estrangulamiento o sofocación (X70); ahogamiento
y sumersión (X71); disparo de armas de fuego (X72-X74); material
explosivo (X75); humo, fuego y llamas (X76); vapor de agua,
vapores y objetos calientes (X77); objeto cortante (X78); objeto
romo o sin filo (X79); al saltar desde un lugar elevado (X80); por
arrojarse o colocarse delante de objeto en movimiento (X81); por
colisión de vehículo de motor (X82); por otros medios especificados
(X83); por medios no especificados (X84)
Los análisis toxicológicos juegan un papel esencial en la investigación
Figura 1: Total de casos de suicidio en España, Galicia e Instituto de Ciencias Forenses
*e-mail: ivan.alvarez@usc.es (USC) (Fuente INE, 2019)

26
sergas.es
 Investigación toxicológica en suicidios a partir de las muestras recibidas en el Servicio de Toxicología Forense de la USC en el periodo 2009-2018
Analizando los casos por provincias, se observa que A Coruña es la
que mayor número de suicidios registra seguida de Pontevedra (Tabla
1). Cabe señalar que son las dos provincias con mayor población de
Galicia. Si los casos son referidos a 100.000 habitantes, Lugo y
Ourense son las provincias con mayor incidencia. En la Figura 2 se
refleja esta incidencia por provincia y 100.000 habitantes para el año
2018 (IMELGA, 2019).
Tabla 1. Número de casos de suicidio por provincia y año (Fuente: IMELGA, 2019)

A Coruña Lugo Ourense Pontevedra

2012 177 55 44 88
2013 140 52 48 107
2014 181 60 31 122
2015 153 58 31 82 Figura 4: Evolución de los suicidios en Galicia por género en los años estudiados.
2016 179 33 35 98
2017 149 44 46 85
2018 129 47 40 72 Método de suicidio
En cuanto al método de suicidio empleado, los datos muestran que el
mayoritario es la ahorcadura, utilizada en un 68,1% de los casos por
hombres y en un 48,8 % por mujeres. A continuación, por número de
casos sería la precipitación el método elegido con un 8,37% en hombres
y un 16,72 % en mujeres. En tercer lugar, aparecen en nuestro medio la
sumersión y la intoxicación para el caso de los hombres (con el mismo
número de casos, 66 casos, 7,47%) mientras que en las mujeres el tercer
lugar se le asigna a la intoxicación con un 12,97%. En la Tabla 3 se
muestran los datos según el método de suicidio escogido en hombres y
Figura 2: Suicidios por 100.000 habitantes en el Año 2018 (Fuente: IMELGA, 2019) en mujeres.
El Instituto de Medicina Legal de Galicia (IMELGA) integra a los Tabla 3. Casos según el método de suicidio empleado en hombres y mujeres.
médicos forenses de Galicia. Posee 7 subdireciones en Galicia:
Hombres Mujeres
Santiago, A Coruña, Ferrol, Lugo, Ourense, Pontevedra y Vigo. En la Ahorcadura 602 144
Figura 3 se muestran los casos recibidos de cada subdirección en el Precipitación 73 49
período objeto de estudio. Algunas subdirecciones envían sus muestras Sumersión 66 37
al Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias Forenses en Madrid de Intoxicación 66 47
Atropello Tren 21 8
ahí el bajo número de muestras recibidas de las mismas. Arma Fuego 39 3
Otros 12 10

Resultados de la investigación toxicológica

Todos los casos de suicidio incluidos en este estudio fueron analizados
en el laboratorio de Toxicología. La investigación toxicológica de las
muestras recibidas muestra resultados positivos a alguna sustancia en
un 30-40 % de los casos, porcentaje que aumenta un poco en los casos
de atropello por tren.
El alcohol etílico fue positivo en sangre en un 23,5 % de los hombres y
en un 14,7 % de las mujeres (Figura 5). En cuanto a los psicofármacos
y drogas de abuso se encontró un mayor porcentaje de positivos en
mujeres, 43%, mientras que en los hombres fue del 26,7% (Figura 6)

Figura 3: Número de casos recibidos de cada subdirección del IMELGA.

Género y edad de las víctimas

En nuestro estudio la distribución por género muestra que, de los 1177
casos, 879 correspondieron a hombres mientras que 298 fueron
mujeres. Éstas por tanto representaron un 25 % del total de la población
estudiada. En la Figura 4 se muestra la distribución de los casos por
género y año.
En cuanto a las edades, la franja que comprende entre 45 y 64 años es
la que más casos de suicidio abarca, tanto en hombres como en mujeres
(Tabla 2).
Tabla 2. Distribución de los casos de suicidio estudiados por edades.

Edad <15 15-44 45-64 65-74 <74 desconocida

Hombres 0 237 340 107 176 19
Mujeres 0 71 108 45 70 4 Figura 5: Número de casos positivos a alcohol etílico por sexo y porcentajes.

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 Álvarez-Freire I, Cabarcos Fernández P, Regenjo Vázquez M, Tabernero Duque MJ, Bermejo Barrera AM

Tabla 4. Sustancias tóxicas más frecuentemente encontradas en hombres desglosadas por

edades.

Hombres Edad 15-44 45-64 65-74 <74 desconocida

Antidepresivos 36 53 12 5 5
Drogas 63 26 1 1 3
Benzodiacepinas 41 67 13 7 6

Etanol 67 109 0 10 5

Tabla 5. Sustancias tóxicas más frecuentemente encontradas en mujeres desglosadas por

edades.

Mujeres Edad 15- 45- 65- <74 desconocida

44 64 74
Antidepresivos 22 36 8 8 0
Drogas 10 4 0 0 1
Benzodiacepinas 28 39 12 11 3
Etanol 13 29 3 2 1
Figura 6: Número de casos positivos a psicofármacos/drogas de abuso por sexo y
porcentajes.

En la Figura 7 se muestran desglosados por familias todas las

sustancias encontradas en los casos estudiados. En ella queda reflejado
que las sustancias más frecuentemente encontradas son el etanol y las
benzodiacepinas en hombres y las benzodiacepinas y los
antidepresivos en mujeres. Otro dato significativo lo aportan las Tablas
4 y 5 donde se muestran los 4 tipos de sustancias más frecuentemente
encontradas, desglosadas por edades.

Figura 8: Número de casos positivos a psicofármacos/drogas de abuso por sexo y porcentajes.

El suicidio es un fenómeno multicausal, por lo tanto, su terapia y

prevención son complejas y deben tomarse en consideración las
diferencias de género y estrato social al desarrollar estrategias
preventivas (Kanchan y Menezes, 2008) (Kanchan y Menezes, 2008).
Si bien los grupos en riesgo en general se pueden identificar, la
predicción del suicidio de manera individual es difícil porque los
factores de riesgo de cada sujeto representan una pequeña proporción
de la varianza del riesgo y carecen de suficiente especificidad, lo que
resulta en altas tasas de falsos positivos (Oquendo et al., 2006).
En general las razones invocadas para el suicidio difieren sensiblemente
según el sexo del suicida. Por lo tanto, las campañas de prevención,
recomendaciones y guías clínicas deberían tener muy en cuenta este
fenómeno y hacer una distinción en sus objetivos. Para las mujeres, las
principales razones que se mencionan son de orden de salud psíquica y
física mientras que, para los hombres, si bien la depresión es la primera
razón nombrada, las de orden afectivo y financiero están en la segunda
y tercera posición (Villettaz, 2007).
Para que podamos llegar a conclusiones realmente significativas es
fundamental registrar de manera exhaustiva y detallada los tipos y la
evolución de los tóxicos empleados, porque muchas veces en los casos
de autolesión no hay un criterio claro por parte de todas las
Figura 7: Sustancias tóxicas encontradas en los casos estudiados (hombres arriba, instituciones, lo cual conlleva una gran pérdida de información y hace
mujeres abajo) más difícil su acceso y consecuentemente, su análisis. Con respecto a la
falta de información y la falla en su recopilación se realizó un estudio
En cuanto a los suicidios por intoxicación, las sustancias más en Tarragona, entre 2004 y 2012 con el objetivo de evaluar el impacto
frecuentemente encontradas fueron los antidepresivos (21%), las de la pérdida de información sobre las estadísticas oficiales de suicidio
drogas de abuso (16%), las benzodiacepinas (10,5%) seguidas muy de y poner de relieve la importancia de la información de origen forense.
cerca por los analgésicos (9,5%) y los antipsicóticos (8,6%) (Figura 8) Se concluyó que la recuperación de datos en las muertes por suicidio a
partir de las fuentes de datos forenses mejora la información estadística,
Discusion
corrige su infradeclaración y amplía el conocimiento sobre el método

28 Rev. Toxicol (2020) 37: 26 - 30

 Investigación toxicológica en suicidios a partir de las muestras recibidas en el Servicio de Toxicología Forense de la USC en el periodo 2009-2018
de suicidio y las características personales de los implicados (Eneko con tasa de suicidios más altas de España, en 2018 el 70,07 % de las
Barbería et al., 2018). Además, Giner y Guija (Giner y Guija, 2014) en víctimas fueron hombres (INE, 2020). En nuestro estudio se observa
2014, propusieron una posible solución a este problema: que el que de los casos recibidos un 74,55% de los fallecidos son varones. Esta
encargado de cumplimentar los datos de muerte con intervención cifra se encuentra en sintonía con los datos generales de suicidios a nivel
judicial fuese el mismo médico forense que realiza el informe de mundial, donde las tasas son tres veces mayores en hombres que en
autopsia y que remite al Juzgado de Instrucción. Esta medida no se ha mujeres. Si evaluamos los suicidios cometidos en los diferentes grupos
implementado y el error de registro continúa, lo que supone una de edades, la categoría de 45-64 años es la que posee mayor riesgo de
limitación en los trabajos de investigación epidemiológica sobre suicidio tanto en hombres como en mujeres.
muerte violenta realizados en nuestro país (Santurtún, 2016).
Este estudio recoge los casos recibidos en el Servicio de Toxicología
El presente estudio proporciona una valiosa información acerca de los Forense de la Universidad de Santiago de Compostela, que, aunque no
métodos, sexo, edades y los tóxicos empleados a la hora de cometer son todos los casos de la Comunidad Autónoma de Galicia, reflejan una
suicidio en la Comunidad Autónoma de Galicia. tendencia similar a los datos publicados a nivel nacional.
La elección del método suicida se puede tomar como un espejo de la Bibliografía
sociedad en la que ocurre. A rasgos generales en Estados Unidos lo
más común es el uso de armas de fuego, mientras que en Europa el 1. Brockington, L. (2001). Suicide in women. Int Clin
ahorcamiento es más frecuente, prevaleciendo el uso de agroquímicos Psychopharmacol 16 Suppl 2, S7-19.
en el caso de Asia (Gunnell et al., 2007). 2. CIE. (2019). Recuperado el 10 de Julio de 2019, de Organizacion
Las sustancias más frecuentemente encontradas son el etanol y las Mundial de la Salud: https://www.who.int/classifications/icd/en/
benzodiacepinas. Es bien sabido que el etanol es una de las sustancias 3. Eneko Barbería, R. g.-S. (2018). Mejora de la estadística de
psicoactivas más detectadas en el análisis postmortem en todo el mortalidad por suicidio en Tarragona (Cataluña, España) entre 2004
mundo y está demostrado que facilita la conducta suicida en sujetos y 2012. Revista de Psiquiatría y Salud Mental, 11(4).
predispuestos (Kordrostami R, 2017). Las benzodiacepinas han
sustituido a los barbitúricos, un grupo de fármacos históricamente muy 4. Gibbons RD, H. K. (2005). The Relationship Between
utilizado para cometer suicidio. Tienen una toxicidad menor Antidepressant Medication Use and Rate of Suicide. Arch Gen
comparado con los barbitúricos (Handley SA, 2014), lo que ha Psychiatry 62 (2), 165.
propiciado la disminución de muertes a lo largo de los años. De todas 5. Giner L, G. J. (2014). Number of suicides in Spain: Differences
formas, siguen siendo unos fármacos muy habituales, especialmente en between data from the Spanish Statistical Office and the Institutes
países del primer mundo donde el uso de este tipo de fármacos es más of Legal Medicine. Rev Psiquiatr y Salud Ment (English Ed.), 139-
usual y son relativamente fáciles de conseguir, más teniendo en cuenta
146.
que un gran porcentaje de suicidas tienen algún tipo de problema
psiquiátrico (Villettaz, 2007). En muchas ocasiones se ingieren junto 6. Gunnell D, F. R. (2007). The impact of pesticide regulations on
con alcohol y/u otras drogas, lo que aumenta su toxicidad. También suicide in Sri Lanka. (36 (6): 1235-1242).
están muy presentes los antidepresivos, ya que son cada vez más
recetados, no sólo por los psiquiatras, sino también por los médicos de 7. Handley SA, F. R. (2014). Drugs and other chemicals involved in
atención primaria. Es interesante mencionar que en los últimos años fatal poisoning in England and Wales during 2000-2011. Clin
algunas agencias reguladoras han emitido advertencias sobre el uso de Toxicol.52 (1), 1-12.
inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina. Estos fármacos 8. IMELGA. (2019). Recuperado el 28 de 8 de 2019, de Instituto de
aumentan el riesgo de manera moderada, pero significativa de ideación Medicina Legal de Galicia: https://cpapx.xunta.gal/instituto-de-
suicida o intentos de suicidio no fatales en niños y adolescentes medicina-legal-de-galicia1
(Whittington et al., 2004). En los siguientes años esperamos que este
debate siga en curso mientras no tengamos del todo claro la relación 9. INE. (2019). Recuperado el 17 de 12 de 2019, de Instituto Nacional
entre los antidepresivos y el riesgo de comportamiento suicida de Estadística: https://www.ine.es/jaxiT3/Tabla.htm?t=7947
(Gibbons et al., 2005) 10. INE. (2020). Instituto Nacional de Estadística. Recuperado el 23 de
La crisis económica que afectó a España a partir del año 2008 se dejó 1 de 2020, de
notar también en el número de suicidios, pasando de 3158 en 2010 a https://www.ine.es/jaxi/Datos.htm?path=/t15/p417/a2018/l0/&file=
3910 en 2014 en toda España. Ese aumento se ve reflejado en la figura 02013.px
4, encontrando un máximo de casos en el año 2011 en los hombres y 11. Kanchan T, M. R. (2008). Suicidal hanging in Manipal, South India
en 2014 en las mujeres, aunque en el año 2014 es donde se observa un - Victim profile and gender differences. J Forensic Leg Med 15 (8),
aumento en la tasa de suicidios en la mayor parte de las comunidades 493-496.
autónomas españolas. En los años en estudio las tasas brutas de
mortalidad por 100000 habitantes en las diferentes comunidades 12. Kanchan T, M. R. (2008). Suicidal poisoning in Southern India:
autónomas reflejan diferencias apreciables. Así mientras en el Gender differences. J. Forensic Leg Med.15, 7-14.
comienzo del estudio, en el año 2009, Galicia ocupaba el primer puesto
13. Kordrostami R, A. M. (2017). Forensic toxicology analysis of
en tasa bruta de mortalidad por suicidio (12,28), seguida por Asturias
selfpoisoning. DARU J Pharm Sci. 25, 1-10.
(10,87) y las Islas Baleares (9,65), en el año 2017 la tasa más alta se
encontró en Asturias (13,01) ocupando Galicia el segundo lugar 14. OMS, O. M. (2019). Recuperado el 9 de Julio de 2019, de
(11,95) y las Islas Canarias el tercero con una tasa de 9,25. El estudio https://www.who.int/mental_health/prevention/suicide/estimates/en
de tasas de suicidio refleja que en los años en estudio, Asturias, /
Canarias y Madrid son las que sufren un mayor aumento en el número
de casos mientras que la tendencia en Galicia es casi homogénea, 15. Oquendo MA, C. D. (2006). Prospective studies of suicidal behavior
exceptuando el aumento en el año 2014 (13,54) (Portal Estadístico. in major depressive and bipolar disorders: What is the evidence for
Ministerio de Sanidad, 2020) predictive risk factors? Acta Psychiatr Scand.114 (3), 151-158.

Aunque los intentos de suicidio son más comunes en mujeres que en 16. Peiris-John R, K. B. (2014). Fatalities and hospitalisations due to
hombres, en general la mortalidad es mayor en el sexo masculino acute poisoning among New Zealand adults. Intern Med J. 44 (3),
(Ruiz-Pérez I, 2006) (Peiris-John R, 2014). La razón media mundial es 273-281.
de 2,8 a 1 (Brockington, 2001). En Galicia, unas de las comunidades

Rev. Toxicol (2020) 37: 26 - 30 1129

 Álvarez-Freire I, Cabarcos Fernández P, Regenjo Vázquez M, Tabernero Duque MJ, Bermejo Barrera AM
17. Portal Estadístico. Ministerio de Sanidad, C. y. (3 de Febrero de 22. Villettaz, P. (2007). El Suicidio En Suiza. Justicia Juris 7, 47-53.
2020). Ministerio de Sanidad. Obtenido de
https://pestadistico.inteligenciadegestion.mscbs.es/publicoSNS/Co 23. Whittington CJ, K. T. (2004). Selective serotonin reuptake inhibitors
mun/Informe.aspx?IdNodo=5005 in. Lancet 363(9418), 1341-1345.

18. Ruiz-Pérez I, d. L.-L. (2006). El suicidio en la España de hoy. Gac

Sanit 20 (supl 1), 25-31.
19. Santurtún, M. ,. (2016). Método empleado en las muertes por
suicidio en España: envenenamiento y agentes violentos no tóxicos.
Cuad Med Forense 22, 73-80.
20. Shane Darke, J. D. (2009). Toxicology and Circumstances of
Completed Suicide by Means Other than Overdose. J Forensic Sci,
54(2), 490-494.
21. Shields Lisa B E, H. D. (2006). Toxicology findings in Suicide. A
10-Year Retrospective Review of Kentucky Medical Examiner
Cases. The American Journal of Forensic Medicine and Pathology,
27(2), 106-112.

30 Rev. Toxicol (2020) 37: 26 - 30

 Rev. Toxicol (2020) 37: 31 - 40

Catinonas sintéticas: una revisión del panorama actual y las estrategias de

detección analítica
Lugo-Vargas AF1* , Chaves-Silva DC1 , Quevedo-Buitrago WG1 , Martínez-Suárez JF2
1
Grupo de Investigación en Sustancias Psicoactivas, Programa de Maestría en Toxicología, Facultad de Medicina, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá,
Colombia.
2
Grupo de Investigación en Productos Naturales Amazónicos, Programa de Química, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad de la Amazonia, Calle 17 Diagonal
17 con Carrera 3F, Florencia, Caquetá, Colombia
Resumen: Las catinonas sintéticas forman parte de las denominadas 2014).
“Nuevas Sustancias Psicoactivas (NSP)” y representan un gran
problema debido al aumento progresivo de su popularidad en el
mercado de las drogas de abuso, representando un reto para el campo
de la toxicología. La detección analítica de estas sustancias presenta
grandes inconvenientes, principalmente por la gran variedad
estructural y la complejidad de la matriz de análisis, estos factores
deben ser abarcados, por lo que se requieren avances en la detección
analítica de estas sustancias, que respondan a la situación actual. En el
presente informe se hace una revisión que permite recopilar
información acerca de la química y la toxicología de las catinonas
sintéticas, el estado actual en términos de regulación y consumo en el Figura 1: Principales moléculas activas de las hojas de Khat (Catha edulis).
panorama nacional (Colombia) e internacional, las tendencias actuales
en la detección analítica de estas sustancias y los avances recientes en El surgimiento de las primeras catinonas sintéticas no se dio con el
la detección electroquímica. propósito de un consumo con fines recreativos, sin embargo, estas
moléculas terminaron empleándose con estos fines principalmente
Palabras clave: Narcóticos; Análisis Químico; Drogas de calle; porque su uso era muy discreto, lo cual, en un inicio, permitió que
electroquímica; drogas de diseño. pasaran desapercibidas ante las autoridades. Diferentes catinonas
sintéticas fueron probadas para su uso en tratamientos médicos, para
Abstract: Synthetic cathinones: a review of the current landscape
citar algunos ejemplos, la metcatinona fue probada como agente
and analytical detection strategies. Synthetic cathinones are part of the
analéptico y como estimulante locomotor (Felice et al., 2014), la
so-called "New Psychoactive Substances (NPS)" and represent a major
metcatinona fue la primera catinona sintética conocida junto a la
problem due to the progressive increase in their popularity in the
mefedrona (4-metilmetcatinona), las cuales fueron sintetizadas por
market for drugs of abuse, representing a challenge for the field of
primera vez en 1928 y 1929 respectivamente (Coppola & Mondola,
toxicology. The analytical detection of these substances presents major
2012; Felice et al., 2014; João et al., 2014; Espert et al., 2015). Las
drawbacks, mainly due to the great structural variety and complexity
catinonas sintéticas tienen una estrecha similitud con los derivados
of the analysis matrix, these factors must be covered, which is why
anfetamínicos en cuanto a la estructura química y los efectos generados
advances in the analytical detection of these substances are required,
sobre el sistema nervioso central (SNC) (Felice et al., 2014), dicha
which respond to the current situation. In this report, a review is made
similitud llevó a que se buscara una aplicación como antidepresivos y
that allows information on the chemistry and toxicology of synthetic
fármacos anoréxicos a la metcatinona, bupropion (m-cloro-N-tert-butil-
cathinones, the current status in terms of regulation and consumption
catinona), dietilpropion (N, N-dietilcatinona) y dimetilpropion (N, N-
in the national (Colombia) and international scene, current trends in
dimetilcatinona), sin embargo, de las moléculas estudiadas, se observó
analytical detection of these substances and recent advances in
que la metcatinona mostró un alto potencial adictivo, aún mayor que el
electrochemical detection.
de la cocaína y la catinona, que fue atribuido a la N-monometilación,
Keywords: Narcotics; Chemical Analysis; Street drugs; fenómeno que también fue descrito para la anfetamina, que al
electrochemistry; designer drugs. monometilarse y pasar a ser metanfetamina se potenciaban los efectos
generados sobre el SNC (Felice et al., 2014; João et al., 2014).
Introducción
Tras el descubrimiento de diversos análogos sintéticos de la catinona,
Las catinonas sintéticas son derivados obtenidos mediante síntesis no se extendió el conocimiento de su uso recreativo hasta la entrada en
química que le deben su nombre a la molécula de origen natural vigor de las políticas planteadas en la Convención Única de 1961 sobre
“catinona”. La catinona es el principal alcaloide encontrado en las estupefacientes, y la posterior fiscalización de los estimulantes de tipo
hojas de Khat (Catha edulis), una planta perenne autóctona de Etiopía, anfetamínico en el Convenio sobre Sustancias Sicotrópicas de 1971.
que también se cultiva en el este de África y en el sur-oeste de la Las sustancias denominadas anfetaminas fueron prohibidas e incluidas,
Península Arábiga, sitios donde se mastican sus hojas por tradición la gran mayoría, en la lista 1, es decir, sustancias de mayor riesgo sin
socio-cultural y religiosa, o se preparan en forma de té para obtener de aplicación médica comprobada, lo que llevó a que se emplearan
ellas el efecto estimulante (João et al., 2014; Cruz et al., 2015; Feng et alternativas “legales” en el mercado de drogas para sustituir las
al., 2017). La planta de Khat fue identificada por primera vez entre sustancias que estaban bajo fiscalización (Espert et al., 2015). De
1761 y 1763 por el botánico sueco Peter Forskal, sin embargo, no fue acuerdo con lo anterior, se dio lugar a la diversificación estructural de
hasta 1930 cuando se identificó la primera molécula con el potencial las sustancias fiscalizadas, pues la clasificación establecida en el
estimulante de la planta: la (+)-norpseudoefedrina (Catina), a la cual se Convenio sobre Sustancias Sicotrópicas de 1971 establecía una lista de
consideraba el principal componente activo de la planta hasta que en sustancias sometidas a fiscalización, sin embargo, no contemplaba los
1975 se aisló la catinona, un beta-ceto análogo de la anfetamina, en el análogos estructurales. Como respuesta a esta problemática se amplió
laboratorio de estupefacientes de las Naciones Unidas. Dicha molécula la prohibición de las drogas a sus análogos en la Convención de las
mostró ser de 7 a 10 veces más potente que la catina, pero mostró ser Naciones Unidas contra el Tráfico Ilícito de Estupefacientes y
susceptible a la degradación, generando una pérdida de sus efectos Sustancias Sicotrópicas realizada de 1988, fecha para la que ya se había
tiempo después de cortada la planta, por lo que su consumo debía acuñado el concepto de “Droga de diseño”, planteándose como medida
provenir de hojas frescas (Coppola & Mondola, 2012; João et al., de control que toda droga de diseño se incluyera en la lista de sustancias
fiscalizadas de acuerdo a su analogismo estructural con las drogas ya
*e-mail: alugov@unal.edu.co incluidas en esta lista (Espert et al., 2015).

sergas.es Rev. Toxicol (2020) 37: 31 - 40 1131

Lugo-Vargas AF , Chaves-Silva DC, Quevedo-Buitrago WG, Martínez-Suárez JF.
Como resultado de las medidas adoptadas en la Convención de las Única sobre Estupefacientes de 1961 y su protocolo de modificaciones
Naciones Unidas contra el Tráfico Ilícito de Estupefacientes y de 1972. Mediante la ley 43 de 1980 se aprueba el Convenio sobre
Sustancias Sicotrópicas (1988), las catinonas sintéticas ganaron sustancias Sicotrópicas de 1971 y se autoriza al gobierno para adherirse
popularidad en el mercado de las drogas de abuso ante la prohibición a este, y mediante la ley 67 de 1993, se aprueba la Convención de las
en muchos países de derivados anfetamínicos como la 3,4- Naciones Unidas contra el Tráfico Ilícito de Estupefacientes y
metilendioximetanfetamina (MDMA), y se empezaron a presentar Sustancias Sicotrópicas de 1988. Por otra parte, mediante la ley 30 de
como alternativas legales, alcanzando su mayor popularidad en la 1986, se adopta el estatuto nacional de Estupefacientes, el cual se
primera década del 2000 (Coppola & Mondola, 2012; João et al., 2014; reglamenta mediante el decreto 3788 de 1986.
Valento & Lebin, 2017; Graddy et al., 2018), empleándose estrategias
de comercialización para evadir el control de la justicia como la síntesis Como una herramienta para el seguimiento de la dinámica de las drogas,
de sustancias con poca analogía con las sustancias prohibidas en la lista se crea el Sistema de Alertas Tempranas (SAT) del Observatorio de
1, vendiéndose con etiquetas con mensajes como “no apta para el Drogas de Colombia (ODC) mediante la Resolución No. 001 de 2016
consumo humano”, “sales de baño”, “mezclas herbales”, “sustancias del Consejo Nacional de Estupefacientes. El Sistema de Alertas
de investigación”, entre otras, y valiéndose de tiendas virtuales para Tempranas ha informado desde su creación la aparición de nuevas
una comercialización más discreta (Coppola & Mondola, 2012; Cruz sustancias en el mercado de las drogas de abuso, reportandose así, desde
et al., 2015; Espert et al., 2015). el observatorio de drogas de Colombia, por primera vez en 2013, la
presencia de Metilona y Etilona en el país (ODC, 2017b).
Las catinonas más consumidas en la segunda mitad de la primera
década del siglo XXI fueron la 4-Metilmetcatinona (Mefedrona), la Las nuevas alternativas emergentes en el mercado de las drogas de
3,4-Metilendioximetcatinona (Metilona) y la 3,4- abuso implican a su vez la aparición de nuevos retos para la toxicología
Metilendioxipirovalerona (MDPV) (João et al., 2014; Espert et al., clínica y analítica (Tyrkko et al., 2016), que deben responder a la
2015). En 2009 las catinonas eran las drogas más populares en Reino dinámica judicial al momento de ejercer control sobre la fabricación,
Unido, año para el cual ya representaban un problema en Estados transporte, comercialización y consumo de estas sustancias. Es esta
Unidos, donde estas tres sustancias lograban evadir el control de la sincronía entre el aparato judicial y el mecanismo técnico-científico la
justicia debido a que la ley contra drogas que estaba en vigencia para que se ve afectada tras la aparición de nuevas sustancias psicoactivas.
finales de la primera década del 2000 solo penalizaba la fabricación y La química analítica aplicada a la detección de sustancias psicoactivas
posesión para uso humano (Prosser & Nelson, 2012), razón por la cual ha servido de herramienta para el desarrollo de diferentes áreas del
la Administración para el Control de Drogas (DEA, por sus siglas en conocimiento como la toxicología y su aplicación a las ciencias
inglés) intervino prohibiendo totalmente el 7 de septiembre de 2011 forenses, siendo una herramienta de gran importancia al momento de
estas tres moléculas temporalmente, mientras se evaluaba la impartir justicia, sin embargo, en las últimas décadas se ha evidenciado
posibilidad de una prohibición permanente (Prosser & Nelson, 2012; un aumento desproporcionado en el número de sustancias psicoactivas
Riley et al., 2020), acción que llevó a que en 2012 estas catinonas y en las estrategias con las cuales se ofertan en el mercado ilícito. Las
sintéticas fueran incluidas en la lista 1 de sustancias prohibidas en técnicas voltamperométricas se presentan como una alternativa
Estados Unidos, de acuerdo con la clasificación establecida en el interesante para la detección de catinonas sintéticas, estas técnicas
Convenio sobre Sustancias Sicotrópicas de 1971, y se incluyeran en la incluyen entre sus ventajas una alta sensibilidad, selectividad hacia
lista de drogas sintéticas de abuso (Espert et al., 2015). especies electroactivas, un amplio rango lineal, instrumentación portátil
y de bajo costo, capacidad de especiación y una amplia gama de
electrodos que permiten ensayos de entornos inusuales. Además, las
técnicas voltamperométricas pueden alcanzar límites de detección del
rango nanomolar (Wang, 2006), comparables a los obtenidos con los
procedimientos cromatográficos (Oiye et al., 2009; Oiye et al., 2017),
con volúmenes de muestras muy pequeños (5-20 µL) (Wang, 2006), lo
cual es un factor muy importante en ambientes complejos, como por
ejemplo, en su aplicación a escenarios forenses donde el elemento
material probatorio se puede encontrar en cantidades limitadas.
El presente artículo tiene como finalidad reportar una revisión
sistemática de la información reciente disponible correspondiente a
aspectos químicos y toxicológicos de las catinonas sintéticas, el
panorama actual de estas y las tendencias actuales en cuanto a su estudio
analítico, dedicando una sección a la revisión del estudio electroquímico
de estas sustancias.
Métodos
Se realizó una búsqueda sistemática utilizando las bases de datos de:
Springer Link, SciELO, Medline y Scopus. Las ecuaciones de búsqueda
Figura 2: Estructura química de las catinonas sintéticas más consumidas en la primera empleadas fueron: “synthetic cathinones”, “Metabolism AND synthetic
década del siglo XXI.
cathinones”, “Forensic electrochemistry AND synthetic cathinones”,
El mismo fenómeno de diversificación estructural que se presentó “Electrochemistry AND abuse drugs”, “chromatography AND
luego de la fiscalización de otros grupos de sustancias psicoactivas no synthetic cathinones”. Se obtuvieron 150 referencias tras una revisión
fue ajeno al grupo de las catinonas sintéticas, ante este panorama, se inicial, de las cuales se seleccionaron 62 para la elaboración de la
diversificó la cantidad de análogos estructurales que surgieron como presente revisión, posterior a un proceso de selección de referencias
alternativas para evadir a las autoridades. Se pueden citar algunos recientes, relacionadas con el enfoque de la revisión y tras eliminar
ejemplos como la bufedrona, metedrona, flefedrona, 3- documentos repetidos.
fluorometcatinona, butilona y etilona, que emergieron en el mercado Resultados
de las drogas de diseño tras la prohibición de la mefedrona (João et al.,
2014). Estructura química
En Colombia, por medio de la ley 13 de 1974 se aprueba la Convención Las catinonas sintéticas pertenecen al grupo los derivados de la

32 Rev. Toxicol (2020) 37: 31 - 40

 Catinonas sintéticas: una revisión del panorama actual y las estrategias de detección analítica

Figura 3: Diferencias estructurales entre A: fenetilamina, B: Anfetamina, C: Catinona y D: Catinona sintética.

fenetilamina, al igual que la anfetamina y sus derivados, siendo la estructura química de la molécula, por ejemplo, las catinonas que
estructura de fenetilamina el grupo farmacóforo, con semejanza poseen un anillo de pirrolidina en su estructura tienen una mayor
estructural con los neurotransmisores dopamina y norepinefrina capacidad para cruzar la barrera hematoencefálica debido a la baja
(Espert et al., 2015; Feng et al., 2017). Las catinonas sintéticas son β- polaridad de este (Coppola & Mondola, 2012; Prosser & Nelson, 2012).
ceto análogos de la anfetamina, es decir, con un grupo carbonilo unido En relación con lo anterior, las catinonas sintéticas de tipo pirovalerona
al carbono β de la cadena amino-alquílica que a su vez está unida a un presentan una absorción rápida por vía oral e intravenosa en ratas,
anillo de fenilo (Coppola & Mondola, 2012; Prosser & Nelson, 2012; reportándose que solo un 29% de la dosis administrada vía oral no es
Banks et al., 2014), por lo que se les suele denominar β-k-anfetaminas absorbida y se mantiene en el estómago 30 minutos después de la
(Prosser & Nelson, 2012). Al igual que el resto de moléculas de tipo administración oral (Prosser & Nelson, 2012).
fenetilamina, las catinonas pueden aparecer en dos formas
estereoisoméricas, usualmente en forma de mezcla racémica, por lo que En síntesis, se puede decir que cuanto mayor sea el patrón de sustitución
entre los estereoisómeros pueden haber diferencias en cuanto a efectos de la molécula con grupos que le otorguen lipofilicidad, menor será el
generados sobre el organismo, por otro lado, se cree que la coexistencia tiempo en que se observen los efectos psicoactivos. En el caso de las
de dos formas estructurales se puede dar también a través de la catinonas sintéticas de tipo pirovalerona, como característica principal
tautomería ceto-enol (Coppola & Mondola, 2012). se debe tener en cuenta el efecto generado por el anillo de pirrolidina
unido a la amina terminal sobre la lipofilicidad de estas sustancias, ya
Al poseer el mismo grupo farmacóforo que otras sustancias de tipo que este grupo no solo le otorga protección ante la acción enzimática
fenetilamina, como los derivados de tipo anfetamínico, se cree que sus sobre la amina terminal, sino que hace que la molécula sea altamente
mecanismos y efectos farmacológicos son similares (Banks et al., lipofílica, penetre con gran facilidad la barrera hematoencefálica y tenga
2014; Espert et al., 2015), sin embargo, el grupo carbonilo ubicado en un alto volumen de distribución, con vidas medias tisulares y
la posición β a la cadena amino-alquílica aumenta su polaridad y, por plasmáticas más largas (Simmler et al., 2013; Rickli et al., 2015;
ende, reduce su permeabilidad en la barrera hematoencefálica, lo que Nóbrega & Dinis-Oliveira, 2018). La velocidad de absorción depende,
disminuye la intensidad de los efectos generados (Coppola & Mondola, además, de la vía por la que se introduzca la sustancia al organismo, la
2012; Prosser & Nelson, 2012). No obstante, la lipofilicidad de las absorción por vía nasal e intravenosa es mucho más rápida que la
catinonas puede aumentar a merced del tipo y el grado de sustitución, absorción por vía oral (Dargan et al., 2011).
así pues, la adición de grupos aceptores de electrones como el fluor
(como en la flefedrona y la 3-fluorometcatinona, por ejemplo), o el Los estudios toxicocinéticos de las catinonas sintéticas en humanos son
aumento de la longitud de la cadena carbonada sobre el grupo amino muy limitados, pese a esto, se han reportado importantes avances en el
terminal o sobre el carbono α al grupo amino aumentan la lipofilicidad modelo animal, siendo la mefedrona una de las moléculas del grupo de
y podrían otorgarle a la molécula resistencia ante la degradación las catinonas sintéticas más estudiada, así pues, de acuerdo a
enzimática (Banks et al., 2014). experimentos con mefedrona en ratas, los efectos aparecen en pocos
minutos por vía nasal e intravenosa, siendo un poco más lenta la
Toxicología de las catinonas sintéticas aparición de los efectos por vía oral (15 a 45 minutos), en esta última
vía la velocidad de absorción se ve disminuida por la presencia de
La información disponible acerca de aspectos toxicológicos alimentos en el estómago. En consecuencia, la duración de los efectos
relacionados con las catinonas sintéticas es limitada, esto se debe al será afectada por la velocidad de absorción, reportándose que la
reciente interés sobre estas sustancias, a la gran variabilidad estructural duración del efecto de la mefedrona por vía nasal y oral fue de 2 a 3
que se oferta en el mercado de las drogas y a que usualmente se horas y para la vía intravenosa fue de 15 a 30 minutos (Dargan et al.,
comercializa mezclada con otras sustancias como anfetaminas y 2011). Por otra parte, Martínez-Clemente et al. reportan un estudio de
cafeína, lo cual dificulta tener un objetivo claro de estudio (Ferreira et la toxicocinética de la mefedrona en ratas Sprague-Dawley macho
al., 2019). donde demostraron que tras la administración de 10 mg/kg vía
Entre los efectos buscados por los consumidores se encuentran la intravenosa y 30 a 60 mg/kg vía oral las concentraciones máximas de
euforia, empatía, aumento de la energía, aumento de las capacidades mefedrona en el organismo se alcanzaron entre las 0.5 y 1 h, siendo los
sociales y de trabajo, aumento de la libido sexual, entre otras (Coppola niveles indetectables a las 9 h, también se estimó que la relación de
& Mondola, 2012; Tremeau-Cayel et al., 2018). Entre los efectos niveles cerebrales/niveles plasmáticos libres es de 1.85±0.08, lo que
adversos más comunes se reportan taquicardia, hipertensión, indica que la mefedrona puede cruzar fácilmente la barrera
hipertermia, infarto de miocardio y muerte (Banks et al., 2014). hematoencefálica (Martínez -Clemente et al., 2013; Ellefsen et al.,
2016) .
Toxicocinética
Papaseit et al. reportaron un estudio concerniente a la farmacología de
Absorción la mefedrona comparada con la de la MDMA en humanos, mediante la
aplicación de un ensayo aleatorizado, doble ciego, cruzado y controlado
El modo de consumo de las catinonas sintéticas es muy variado, las
con placebo en el que se suministró a 12 voluntarios varones 200 mg de
formas más comunes son inhaladas, fumadas e inyectadas (Banks et
mefedrona, 100 mg de MDMA y placebo para cuantificar
al., 2014).
posteriormente, por cromatografía de gases acoplada a espectromería de
La velocidad y la intensidad con la que se presentan los efectos masas (GC/MS), la concentración plasmática de las sustancias
psicoactivos dependen de la capacidad de las catinonas sintéticas para estudiadas. Se reportó una concentración máxima plasmática de
permear las membranas biológicas, y esta a su vez varía a merced de la mefedrona 1.25 h después de la administración, y para la MDMA dicha

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Lugo-Vargas AF , Chaves-Silva DC, Quevedo-Buitrago WG, Martínez-Suárez JF.
concentración se alcanzó 2 h después de la administración; en cuanto a lado, en moléculas que no tienen un grupo metilendioxi, como la
la vida media plasmática se reportaron grandes diferencias, para la mefedrona, la reacción más importante del metabolismo de fase 1 es la
mefedrona la vida media plasmática fue de 2.15 h, mientras que para N-desmetilación que conduce a la formación una amina primaria,
la MDMA fue de 7.89 h, lo cual se debe principalmente a las grandes seguida de la reducción del carbonilo del grupo ceto a hidroxilo
diferencias de lipofilicidad generada por la presencia del grupo (formación de alcoholes), por último, el grupo tolilo se oxida al alcohol
carboxilo en la estructura de la mefedrona y por la susceptibilidad a la correspondiente. La fase 2 consiste en conjugaciones con ácido
acción enzimática que en comparación con la MDMA es mucho mayor, glucurónico y sulfatos (Meyer & Maurer, 2010; Meyer et al., 2010;
lo anteriormente descrito puede explicar el patrón de consumo Coppola & Mondola, 2012; Prosser & Nelson, 2012).
compulsivo de la mefedrona (Papaseit et al., 2016).
Para la metilendioxipirovalerona (MDPV) que contiene un grupo
Distribución pirrolidin en su estructura se propone que, como resultado del
metabolismo de fase 1, los principales metabolitos son
La distribución de las catinonas sintéticas en el organismo ha sido poco catecolpirovalerona y metilcatecolpirovalerona (Strano-Rossi et al.,
estudiado, el modelo animal, sin embargo, ha permitido obtener 2010; Coppola & Mondola, 2012; Prosser & Nelson, 2012), que se
algunos valores que pueden servir de indicativo. En ratones se ha generan por la apertura del anillo metilendioxi, con una posterior
encontrado que tras la administración de pirovalerona las desmetilación que conduce a la formación del catecol, seguida de una
concentraciones más altas de la sustancia se encuentran en bilis, hígado metilación generada por la enzima catecol O-metiltransferasa (COMT)
y riñones, siendo la concentración en cerebro de solo 1% de la dosis (Strano-Rossi et al., 2010; Prosser & Nelson, 2012), conociéndose
administrada (Prosser & Nelson, 2012). mediante ensayos in-vitro con microsomas hepáticos humanos y
Recientemente Vignali et al. reportaron los resultados obtenidos del fracciones celulares que el 80% de la molécula de MDPV no se
análisis de α-pirrolidinohexiofenina (α-PHP) en sangre, orina, metabolizaba, el 10% se metabolizaba a metilcatecolpirovalerona y el
contenido gástrico, tejidos principales y cabello de una persona 7% a catecolpirovalerona, dato que, según los autores, pueden verse
fallecida, a partir de muestras biológicas recogidas durante la autopsia afectados por la alta concentración de MDPV empleada para el
en las cuales se cuantificó la concentración de α-PHP por experimento, además se determinó que las isoformas de citocromo P-
cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem 450 involucradas en el metabolismo in-vitro de MDPV fueron
(LC/MS-MS). Las concentraciones más altas de la molécula CYP2C19, 2D6 y 1A2 (Strano-Rossi et al., 2010; Coppola & Mondola,
cuantificada se encontraron en pulmón y bazo (71,1 y 83.8 ng/ml 2012; Prosser & Nelson, 2012). En cuanto al metabolismo de fase 2,
respectivamente), las concentraciones en bilis y orina (1.2 y 5.6 ng/ml este consiste en conjugaciones con ácido glucurónico y sulfato que
respectivamente) fueron inferiores a las cantidades encontradas en la según lo reportado por Strano-Rossi et al. (2010) se dan en proporción
sangre recolectada de la cavidad torácica (15.3 ng/ml), las de 40% y 50% respectivamente.
concentraciones en hígado, riñón, cerebro y corazón fueron de 3.5, Eliminación
7.9,4.7 y 23.6 ng/ml respectivamente (Vignali et al., 2019). Si bien los
resultados del estudio dan una idea de la distribución de las catinonas La vida media de eliminación para la metilona luego de la
en el organismo, se debe tener en cuenta que las concentraciones y los administración vía intravenosa a ratas es de 0.95 h, y 0.55 h por vía oral
lugares donde se encuentra la molécula se pueden ver afectados por la (López-Arnau et al., 2012). De igual manera, se reportó que la vida
redistribución post mortem. media de eliminación de la mefedrona por vía intravenosa es de 0.37 h
y por vía oral de 0.55 h (Martínez-Clemente et al., 2013).
Para la metilona se reporta, en experimentos con ratas, un alto volumen
de distribución: 538 ml/kg para la vía intravenosa y 433 ml/kg para la Namera et al. estimaron la vida media de eliminación de α-
vía oral, con una biodisponibilidad del 78-89% y aproximadamente un pirrolidinopentiofenona (α-PVP) y α-pirrolidinobutiofenona (α-PBP) a
13% de unión a proteínas (López-Arnau et al., 2012). Por otra parte, partir del monitoreo de la concentración en orina de estas dos sustancias
para la mefedrona se estima que la biodisponibilidad total es de en un individuo después de la administración intravenosa,
aproximadamente 10%, con un porcentaje unido a proteínas proponiéndose una vida media de eliminación estimada de 22 h para α-
plasmáticas del 21.59±3.67%, en estudios hechos sobre ratas Sprague- PVP y 11 h para α-PBP, e informándose que el pH de la orina puede
Dawley macho (Martínez-Clemente et al., 2013; Ellefsen et al., 2016). alterar las vidas medias de eliminación, ya que a pH ácido la tasa de
eliminación puede aumentar (Namera et al., 2013).
Biotransformación
En términos de porcentajes, luego de la administración de pirovalerona
Las principales reacciones que se dan lugar en la fase 1 del por vía oral en ratones se reporta una eliminación del 70% en la orina,
metabolismo de las catinonas sintéticas son la N-desmetilación, la sin embargo, para la administración por vía intravenosa fue de un 90%
reducción del grupo ceto a hidroxilo y la oxidación de los grupos como metabolitos y un 6-8% como compuesto inalterado (Prosser &
alquilo del anillo bencénico (Meyer & Maurer, 2010; Coppola & Nelson, 2012). El porcentaje de compuesto inalterado eliminado es
Mondola, 2012). Pese a que el metabolismo enzimático de las mucho mayor que el reportado para la catinona, molécula naturalmente
catinonas sintéticas en el organismo puede variar a merced de encontrada en la planta Catha edulis, que fue del 2%, con una vida
polimorfimos genéticos, estructura química de la moléculas, entre media de eliminación de aproximadamente 5.2 h (Coppola & Mondola,
otros, se ha reportado ampliamente que las catinonas sintéticas se 2012).
metabolizan principalmente por la isoforma CYP2D6 del citocromo
P450, con contribuciones menores de las isoformas CYP2C19, Toxicodinamia
CYP1A2, CYP2C9, CYP2B6 y CYP3A4 (Pedersen et al., 2013; Silva
& Martínez, 2016; Tyrkko et al., 2016; Manier et al., 2018; Calinski et Debido a la similitud estructural que existe entre las catinonas sintéticas
al., 2019; Olesti et al., 2019). y los derivados de la anfetamina se puede predecir que sus mecanismos
toxicodinámicos son similares, por lo que se sabe que las catinonas
En moléculas que contienen un grupo metilendioxi como la metilona, centran sus efectos en el sistema nervioso mediante la alteración de los
la etilona y la butilona la principal reacción de fase 1 es la sistemas monoaminérgicos centrales y periféricos, como mecanismo
desmetilación del anillo metilendioxi, después de esto se da lugar a una primario (Espert et al., 2015).
o-metilación mediada por la enzima o-metiltransferasa de donde
resultan dos posibles metabolitos: 4-hidroxi-3-metoxi o 3-hidroxi-4- Se han definido dos posibles mecanismos (German et al., 2014),
metoxi. En la fase 2 del metabolismo estos metabolitos se conjugan con totalmente contrarios entre ellos, pero que, sin embargo, conllevan al
ácido glucurónico y sulfatos, siendo así excretados en la orina junto aumento de la concentración de catecolaminas en la hendidura
con moléculas no metabolizadas (Meyer & Maurer, 2010; Meyer et al., sináptica:
2010; Coppola & Mondola, 2012; Prosser & Nelson, 2012). Por otro

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 Catinonas sintéticas: una revisión del panorama actual y las estrategias de detección analítica
El primer mecanismo consiste en el bloqueo de la recaptación de los En el 2012 la incautación de mefedrona alcanzó un pico de 4,2 toneladas
transportadores de dopamina (DAT) y serotonina (SERT), los cuales a nivel mundial, centrándose la mayor parte de las incautaciones en
tienen la función de regular los niveles de neurotransmisores en el Reino Unido (UNODC, 2019). En el periodo 2014-2017 la mefedrona
hendidura sináptica, fenómeno que genera que la concentración de fue la sustancia con mayor cantidad de incautaciones en Rusia, siendo
neurotransmisores aumente tras su liberación natural, pero que no de 0,7 toneladas en 2014, 3,1 toneladas en 2015 y 2 toneladas en 2016
puedan reingresar al espacio presináptico (Felice et al., 2014; German (UNODC, 2019). También se informó que durante el período 2013-
et al., 2014; Espert et al., 2015). 2017 se dio la mayor cantidad de incautaciones de mefedrona en Reino
Unido, además de India, Polonia, China, entre otros, que suman un total
El segundo mecanismo consiste en la elevación de la liberación de 20 países que reportaron el decomiso de mefedrona en este periodo
presináptica de neurotransmisores, específicamente en la vesícula (UNODC, 2019). Contrariamente a los esperado, luego de que se
presináptica, generada por la entrada de otros neurotransmisores fortaleciera el control de este tipo de drogas en 2015, se observó un
relacionados con los sistemas colinérgicos o glutamatérgicos (Felice et aumento en las incautaciones de mefedrona, especialmente en Europa,
al., 2014; German et al., 2014; Espert et al., 2015). probablemente debido a que esta sustancia ha establecido su propio
El mecanismo de acción de las catinonas puede depender la estructura mercado y este mercado puede evolucionar en respuesta a las políticas
molecular, por ejemplo, moléculas como la metilona y mefedrona de control. Tras el aumento del control internacional, algunas catinonas
pueden aumentar la liberación de dopamina desde el espacio sintéticas como la MDPV alcanzaron en 2017 sus niveles más bajos de
presináptico a la hendidura sináptica, por una despolarización interna incautaciones, luego de que su punto más alto de incautaciones fuera en
de las células en reposo (Felice et al., 2014). 2013 (UNODC, 2019).

Por su parte, la metilendioxipirovalerona (MDPV) es un inhibidor de Los cambios en las políticas antidroga y el evidente aumento en el
la recaptación de neurotransmisores (Felice et al., 2014), que se une a control de estas ha conllevado a que diferentes catinonas sintéticas
los transportadores de neurotransmisores como los transportadores de como mefedrona, 3-metilmetcatinona (3-MMC) , 4-metiletilcatinona,
dopamina (DAT) y serotonina (SERT), los cuales regulan la cantidad pentedrona y derivados de tipo pirovalerona como como MDPV y α-
de neurotransmisores en la hendidura sináptica, alterando el alcance y PVP pasaran de ser nuevas sustancias psicoactivas no fiscalizadas para
la duración de la señalización entre neuronas (Espert et al., estar en la lista de sustancias prohibidas (UNODC, 2019). El mercado
2015). En el caso de las anfetaminas, el efecto de inhibición de los de las drogas de abuso es dinámico, y la variabilidad estructural, debida
transportadores puede generar una pérdida en la función del a los múltiples patrones de sustitución de las moléculas, permiten la
transportador, fenómeno que se asocia a los efectos agudos, y conlleva rápida búsqueda de nuevas alternativas a las sustancias prohibidas, por
a deficiencias a largo plazo en los sistemas de la dopamina (DA) y ejemplo, en Eslovenia, después de la prohibición de la mefedrona, los
serotonina (5-HT) tras la exposición a niveles tóxicos (Espert et al., usuarios de esta sustancia psicoactiva buscaron los mismos efectos en
2015). otras catinonas sintéticas como 3-MMC, metilona, 4-metiletcatinona y
pentedrona, además de reportarse el uso simultaneo de 3-MMC con
Las catinonas sintéticas pueden afectar algunos sistemas de órganos opioides como medida de sustitución de la cocaína (UNODC, 2019).
autónomos mediante la alteración de las monoaminas periféricas, como
la norepinefrina (NE), las cuales son importantes reguladores de la En Colombia se reportaron en el periodo 2006-2017 la aparición de 28
función del sistema nervioso autónomo, lo que puede llevar a nuevas sustancias psicoactivas, de las cuales 7 corresponden a catinonas
alteraciones en órganos del sistemas periférico tales como los sistemas sintéticas. Se observó que el 2016 fue el año con el aumento más
cardiovascular y digestivo (Espert et al., 2015). significativo en el número de catinonas sintéticas reportadas (ODC,
2017b). La aparición de catinonas sintéticas en el escenario Colombiano
En el mercado actual de nuevas sustancias psicoactivas se suelen se inició en el 2013, cuando se conoció la iniciativa de ingresar la
comercializar las catinonas sintéticas como mezcla de catinonas, lo que metilona y otras catinonas sintéticas al país haciendolas pasar como
abre la posibilidad de que el consumidor experimente mecanismos de “destapacañerías” para evadir el control de la justicia (ODC, 2017a).
elevación de la liberación de neurotransmisores y mecanismos de
inhibición de la recaptación de estos al mismo tiempo (Felice et al., En el periodo 2013-2014 se reportó el hallazgo de etilona y α-PVP en
2014). Por otro lado, se pueden presentar mezclas de catinonas con el territorio nacional, y para el año 2016 se detectó la presencia de
otras sustancias como anfetaminas o cocaína, los cual puede amplificar butilona, dibutilona, dimetilona y n-etilpentilona (ODC, 2017b). Esta
la toxicidad por efecto del sinergismo y aumentar la probabilidad de un gran variabilidad de sustancias reportadas emergen con el objetivo de
desenlace fatal (Espert et al., 2015). evadir el control ejercido por la legislación colombiana, lo que las hace
alternativas tentadoras para sustituir a las anfetaminas controladas como
Catinonas sintéticas: panorama actual la MDMA debido a su similitud en cuanto a efectos generados (ODC,
Las catinonas sintéticas son parte de las denominadas “nuevas 2017b, 2017a).
sustancias psicoactivas”, término que no hace referencia a sustancias La dinámica en el mercado de las nuevas sustancias psicoactivas en
de reciente síntesis sino a sustancias que a pesar de ser ya documentada Colombia contrasta con el panorama mundial, sabiéndose que algunos
su síntesis se conocen como nuevas sustancias por su reciente aparición reportes como el de la N-etilpentilona en Colombia fueron de los
en el mercado de las sustancias psicoactivas y por no estar en un primeros a nivel mundial (ODC, 2017b).
principio fiscalizadas (Silva & Martínez, 2016).
Detección analítica de catinonas sintéticas
Según el Reporte Mundial de Drogas, emitido por la Oficina de las
Naciones Unidas contra la Droga y el Delito (UNODC), en la mayoría Se realizó una búsqueda de los reportes científicos recientes
de los años registrados, las nuevas sustancias psicoactivas (NSP) relacionados con la aplicación de técnicas analíticas a la detección de
estimulantes han sido el grupo más grande de sustancias identificado e catinonas sintéticas. Como resultado de la búsqueda se obtuvieron 25
informado por los Estados miembros, con un aumento durante el artículos científicos, de los cuales se incluyeron 12 en la presente
periodo 2009-2017 de cuatro veces, pasando de 48 sustancias revisión, ver Tabla 1.
identificadas en 2009 a 206 en 2015, valor que se ha mantenido estable Como se observa en la tabla 1, a pesar de que las catinonas sintéticas
hasta la actualidad (UNODC, 2019). Las NSP estimulantes más son relativamente nuevas en el mercado de las sustancias psicoactivas,
ampliamente incautados entre 2014 y 2017 fueron las catinonas se han reportado diferentes estudios a nivel mundial en los últimos años,
sintéticas, las incautaciones de estas aumentaron en un 4% (a 2,8 el constante reporte de artículos científicos donde se aplican técnicas
toneladas) en 2017 con respecto al año anterior, lo cual generó que las cromatográficas permite que el estado actual del estudio de estas
cantidades de NSP estimulantes incautadas aumentaran ligeramente sustancias en cuanto a su determinación analítica esté actualizado
(5%) en el mismo periodo (UNODC, 2019).

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Lugo-Vargas AF , Chaves-Silva DC, Quevedo-Buitrago WG, Martínez-Suárez JF.

Tabla 1. Técnicas analíticas más empleadas para el análisis de catinonas sintéticas. análogos estructurales o agentes de corte.

Técnicas Matriz País Cita Entre las estrategias reportadas para el mejoramiento de las señales
Material incautado
cromatográficas se destaca el reporte de Levitas et al. en el cual se
(Cheng and Wong mejora la señal espectral aplicando un método de ionización electrónica
GC/CI-MS y LC-DAD en forma de polvo China
2019)
cristalino a bajas temperaturas y se evidencia la mejora de resultados obtenidos
Material incautado con un sistema GC-MS/MS frente a un sistema GC-MS (Levitas et al.,
(Fabregat-Safont
LC-MS/MS en forma de polvo España
cristalino
et al., 2019) 2018).
Cabello/post
LC-MS/MS
mortem
Italia (Freni et al., 2019) Por otra parte, debido a que el análisis de catinonas sintéticas se ve
(Gerace et al., afectado por la presencia de adulterantes que agregan complejidad a la
GC-MS Orina Italia
2019) matriz de análisis, se evidencia el interés por separar los componentes
(Sánchez- de la muestra mediante una separación previa al análisis (Carnes et al.,
España-
HPLC-MS/MS Orina González et al.,
Italia
2019) 2017; Fontanals & Borrull, 2017; Alsenedi & Morrison, 2018; Sánchez-
Patrones de Estados (Levitas et al., González et al., 2019), lo que permite la obtención de resultados sin la
GC-MS y GC-MS/MS
referencia Unidos 2018) interferencia de los componentes que acompañan al analito en la matriz
Bélgica (Kinyua et al., de análisis.
LC-QTOF-MS Aguas residuales
-Suiza 2018)
Material incautado Detección electroquímica de catinonas sintéticas
GC-MS, FTIR, HRMS (Fabregat-Safont
en forma de polvo España
Y RMN et al., 2018)
blanco
La detección y cuantificación de drogas de abuso por métodos
Reino (Alsenedi and
GC-MS Orina electroquímicos se ha centrado en tres matrices analíticas
Unido Morrison 2018)
Emirato principalmente: muestras de calle o muestras incautadas comúnmente
s (Alremeithi et al., en forma de polvo cristalino, soluciones libres o impregnadas en papel
GC/NCI-MS Orina y plasma
Árabes 2018)
Unidos
secante, comprimidos, materiales fumables, entre otros; fluidos
UHPLC-QTOF-MS, biológicos y en menor proporción en muestras ambientales como aguas
Material incautado China (Liu et al., 2017)
GC-MS y RMN residuales (Florea et al., 2018).
(Fontanals and
LC-HRMS Aguas residuales España
Borrull 2017) Las drogas ilícitas más estudiadas por métodos electroquímicos han
GC/CI-MS: Cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas con ionización sido la cocaína (Oiye et al., 2009; Balbino et al., 2012; De Jong et al.,
química; LC-DAD: Cromatografía de líquidos con detector de arreglo de diodos; LC-
MS/MS: Cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de masas en tándem; GC-
2016; Balbino et al., 2016), la marihuana (Balbino et al., 2012; Balbino
MS: Cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas; HPLC-MS/MS: et al., 2016), la dietilamida del ácido lisérgico (LSD) (Merli et al., 2014)
Cromatografía líquida de alta eficacia acoplada a espectrometría de masas en tándem; y de forma creciente se ha aumentado el interés por estudiar las nuevas
GC-MS/MS: Cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas en tándem; sustancias psicoactivas, también llamadas “drogas de diseño” como las
LC-QTOF-MS: cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas cuadrupolo
con tiempo de vuelo; FTIR: Espectroscopía infrarroja con transformada de Fourier; sustancias del grupo de las anfetaminas (Švorc et al., 2014; Tadini et
HRMS: Espectrometría de masas de alta resolución; RMN: Resonancia magnética al., 2014; Cumba et al., 2016), sustancia del grupo de las piperazinas
nuclear; GC/NCI-MS: cromatografía de gases con ionización química negativa (Waddell et al., 2017) y derivados de la feniletilamina como los
acoplada a espectrometría de masas; UHPLC-QTOF-MS: cromatografía líquida de
ultra alta eficacia acoplada a espectrometría de masas cuadrupolo con tiempo de vuelo;
NBOMes (Andrade et al., 2016; Oiye et al., 2017; Souza et al., 2017).
LC-HRMS: Cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de masas de alta En la mayor parte de estos estudios se ha reportado que los métodos
resolución. voltamperométricos generan resultados comparables (Oiye et al., 2009,
2017) o mejores a los obtenidos por métodos cromatográficos (Cumba
(Carlsson et al., 2018). Es de destacar que, pese a que las matrices más et al., 2016).
exploradas son el material incautado, principalmente en forma de polvo
cristalino, y las matrices biológicas, se puede evidenciar también un La rápida y progresiva aparición de catinonas sintéticas en diferentes
crecimiento en el interés por estudiar matrices ambientales. matrices hace necesario para las autoridades contar con herramientas de
campo versátiles y confiables que permitan detectar este voluminoso
Las investigaciones recientes abordan un nuevo enfoque, el cual grupo de sustancias (Smith et al., 2014; Zuway et al., 2015; Elbardisy
consiste en el mejoramiento de condiciones analíticas para optimizar el et al., 2019). Los métodos electroquímicos se muestran como una
desempeño de las técnicas aplicadas, esto surge tras ser evidente la alternativa para suplir esta necesidad, observándose un reciente interés,
complejidad que exige el análisis de catinonas sintéticas, evidenciado en el crecimiento de los reportes de detección de estas
principalmente por la interferencia de otras sustancias, ya sean sustancias mediante la aplicación de métodos electroanalíticos.
Tabla 2. Reportes científicos referentes a análisis electroquímico de catinonas sintéticas.
Sustancias Matriz Tipos de electrodo País Cita
Metcatinona y catinona Suero Serigrafiados China (Zang et al., 2013)
Sales de hidrocloruro o
Metcatinona, mefedrona y 4- Diamante dopado con boro, carbono
hidrobromuro sintetizadas en Reino Unido (Smith et al., 2013)
metiletcatinona vítreo y serigrafiado de carbono
laboratorio
Muestras callejeras de NRG-2
(nombre popular de la 4-
Mefedrona y 4-metiletcatinona Serigrafiados de carbono Reino Unido (Smith et al., 2014)
metiletcatinona) en forma de
polvo cristalino blanco
Muestras callejeras de NRG-2
(nombre popular de la 4- Fabricado con moneda británica de 1
Mefedrona y 4-metiletcatinona Reino Unido (Tan et al., 2015)
metiletcatinona) en forma de penique
polvo cristalino blanco
Muestras callejeras de NRG-2
Mefedrona y 4-metiletcatinona (nombre popular de la 4- Serigrafiados de grafito Reino Unido (Zuway et al., 2015)
metiletcatinona)
Muestras de calle en forma de
Etilona Diamante dopado con boro Brasil (Scheel et al., 2018)
píldoras
Impresos molecularmente, basados
Mefedrona Orina y plasma en la tecnología sol-gel y Irán (Razavipanah et al., 2018)
politiramina
Mefedrona: Nor-mefedrona y Reino Unido –
Orina Serigrafiados de grafito (Elbardisy et al., 2019)
dihidromefedrona. Egipto

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 Catinonas sintéticas: una revisión del panorama actual y las estrategias de detección analítica
A pesar de que las catinonas sintéticas son un grupo de sustancias con un polímero sol-gel impreso molecularmente y modificado para la
gran variabilidad estructural y su popularidad en el mercado de las identificación y cuantificación indirecta de mefedrona en solución a
nuevas sustancias de abuso es reciente, se han reportado diferentes partir del cambio en la respuesta de la sonda [Fe (CN)]-3/-4. La
estudios para su determinación y cuantificación en diferentes matrices, caracterización electroquímica se hizo mediante voltamperometría
sin embargo, los estudios basados en técnicas electroquímicas son cíclica y las mediciones electroquímicas se realizaron por
limitados. voltamperometría de onda cuadrada. Bajo condiciones experimentales
optimizadas se alcanzó un límite de detección de 0.8 nM (142 pg mL-1)
Zang et al. desarrollaron un conjunto de sensores serigrafiados basados (Razavipanah et al., 2018).
en una película impresa molecularmente mediante
electropolimerización con catinona, metcatinona como moldes y pirrol Recientemente Elbardisy et al. desarrollaron un protocolo para la
como monómero, mejorado con grafeno-NH2 como material de soporte detección electroquímica de mefedrona (4-MMC) y dos metabolitos de
para la detección simultanea de metcatinona y catinona en muestras de mefedrona: Nor-mefedrona y dihidromefedrona, mediante
suero, la superficie de los electrodos fueron caracterizados mediante voltamperometría cíclica y de pulso diferencial, empleando electrodos
voltamperometría cíclica y se probó usando voltamperometría de pulso de grafito serigrafiados y tomando orina humana como matriz de
diferencial, demostrando que el método proporcionaba una detección análisis. Como resultado, reportan una herramienta novedosa y portátil,
rápida, sensible y rentable, destacando el efecto del uso de grafeno- que puede ser aplicada en campo y que permite la identificación y
NH2 en términos de mejoramiento de la conductividad del electrodo y cuantificación de metabolitos de mefedrona en orina, además de ser
cinética de adsorción rápida, obteniendo límites de detección de 3.3 y rápida y barata (Elbardisy et al., 2019).
8.9 pg mL-1 para metcatinona y catinona, respectivamente (Zang et al.,
2013). El enfoque en análisis electroquímico de catinonas sintéticas apunta
hacia el diseño de sistemas miniaturizados que permitan un análisis
Por otra parte, Smith et al. demostraron la detección de tres catinonas rápido y de campo.
sintéticas: (±)-Metcatinona, (±)-Mefedrona y 4-MEC, en este estudio
se probaron tres diferentes electrodos: de diamante dopado con boro Conclusiones
(DDB), carbono vítreo y serigrafiado de grafito, concluyendo que el El control del consumo, transporte, venta y fabricación de sustancias
electrodo con mejor comportamiento durante el estudio fue el psicoactivas a nivel mundial genera que el mercado de las drogas de
serigrafiado de grafito, la detección fue dependiente del pH de la matriz abuso sea más dinámico, lo cual repercute en el aumento de la oferta de
analítica y se vio limitada por este factor, disminuyendo la selectividad nuevas sustancias psicoactivas que emergen con el fin de evadir el
entre las diferentes catinonas sintéticas estudiadas, y entre estas y los control judicial. El aumento en el número de sustancias que se ofertan
adulterantes cafeína y benzocaína (Smith et al., 2014). en el mercado de drogas de abuso a nivel mundial genera grandes retos
Posteriormente, en un segundo estudio Smith et al. aplicaron electrodos desde los diferentes puntos en los que se puede estudiar la situación:
de grafito serigrafiado para la detección electroquímica de 4-MMC Y social, legal, científico, entre otros. Desde la perspectiva técnico-
4-MEC por voltamperometría cíclica en la que se obtuvieron límites de científica de la toxicología no cabe duda de que, según la revisión de la
detección de 11.80 µg mL-1 para 4-MMC y 11.60 µg mL-1 para 4-MEC información actual, existen grandes vacíos que alimentan la
sin observarse mejora tras la modificación de la superficie con una complejidad del abordaje toxicológico de la situación, principalmente
película de mercurio y bismuto (Smith et al., 2014b). desde el punto de vista de la toxicología clínica y analítica.

En 2015 Zuway et al. desarrollaron y validaron la detección Es ostensible en la evidencia científica reportada hasta el momento que
amperométrica de 4-MMC Y 4-MEC empleando cromatografía liquida la detección analítica de las catinonas sintéticas debe responder e ir a la
de alta eficacia acoplada a un detector amperométrico (HPLC-AD) y velocidad con la que demuda el mercado de estas sustancias,
comparando los resultados con los obtenidos por cromatografía liquida respondiendo a su vez a las necesidades del aparato legal y la capacidad
de alta eficacia acoplada a espectroscopía UV (HPLC-UV). A pesar de de respuesta desde el abordaje de la toxicología clínica, por tanto, es
que los límites de detección obtenidos por el método HPLC-AD no evidente que se requieren nuevos métodos de detección analítica que
fueron superiores a los obtenidos por HPLC-UV, se eliminó la permitan obtener resultados rápidos y que amplíen su ambiente de
interferencia entre las señales amperométricas de 4-MMC y 4-MEC trabajo a la detección en campo.
comunes en los métodos voltamperométricos sin un proceso de Las técnicas electroquímicas tienen gran potencial para responder a la
separación cromatográfico previo (Zuway et al., 2015). En el mismo problemática actual en el campo de la detección de sustancias
año, Tan et al. reportan por primera vez el desarrollo de un método psicoactivas y en específico a la problemática de las catinonas
basado en un sensor electroquímico construido con una moneda de un sintéticas, tema en el que se enfoca la presente revisión, pese a ello,
penique británico para la detección de mefedrona (4-MMC) y 4-MEC, existen pocos reportes relacionados con la aplicación de técnicas
el método fue validado para su aplicación en una matriz analítica en electroanalíticas para la detección y cuantificación de catinonas
forma de polvo cristalino obtenida de muestras de NRG-2 (nombre sintéticas, a pesar de que en los últimos años ha ido creciendo el interés
popular de la 4-metiletcatinona) obtenidas en el mercado callejero, por este enfoque.
adicionalmente fue comparado con un método basado en cromatografía
líquida de alta eficacia (HPLC) demostrándose que el método es Bibliografía
aplicable para la finalidad con la que fue validado (Tan et al., 2015).
1. Alremeithi R, Meetani MA, Alaidaros AA, Lanjawi A, Alsumaiti K.
Scheel et al. desarrollaron un método voltamperométrico para la Simultaneous Quantitative Determination of Synthetic Cathinone
determinación de etilona en muestras incautadas mediante Enantiomers in Urine and Plasma Using GC-NCI-MS. J. Anal.
voltamperometría de pulso cíclico, diferencial y de onda cuadrada Methods Chem. 2018; 1–11.
usando un electrodo de diamante dopado con boro (DDB), observaron
2. Alsenedi KA, Morrison C. Determination of amphetamine-type
que la señal voltamperométrica de los adulterantes de las muestras no
stimulants (ATSs) and synthetic cathinones in urine using solid
interferían en la señal de la etilona a excepción de la señal de la cafeína,
phase micro-extraction fibre tips and gas chromatography-mass
efecto que fue corregido mediante previa extracción en fase solida con
spectrometry. Anal. Methods. 2018; 10(12), 1431–1440.
una columna de octadecil sílice, obteniendo así un método
electroanalítico sensible, simple y con diferencias estadísticas no 3. Andrade BA, Mamo SK, Gonzalez-Rodriguez J. Rapid screening
significativas en comparación con los métodos cromatográficos method for new psychoactive substances of forensic interest:
(Scheel et al., 2018). Electrochemistry and analytical determination of phenethylamines
derivatives (NBOMe) via cyclic and differential pulse voltammetry.
Razavipanah et al. desarrollaron un sensor electroquímico basado en
Anal. Chem. 2017; 89(3), 1445–1452.

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 Rev. Toxicol (2020) 37: 41 - 43

Un analisis de imagen por segmentación de la histopatología producida por la

acrilamida en el pez cebra adulto (Danio rerio)
Hernández C., Álvarez M *1.
1
Laboratorio de Microscopia, Instituto Anatómico “José Izquierdo” Facultad de Medicina de la Universidad Central de Venezuela, Caracas-República Bolivariana
de Venezuela.1012.
Resumen: Los sistemas de análisis de imágenes han permitido la Introducción
implementación de técnicas de histomorfometría para cuantificar con
precisión las irregularidades arquitectónicas y la complejidad de las La histopatología como campo de investigación se ha ido enriqueciendo
estructuras histológicas en condiciones normales, así como en con la incorporacion de los sistemas automatizados de analisis de
situaciones de daño tisular inducido. El objetivo del trabajo fue imágenes de células y tejidos, lo que ha incrementado la atención y la
cuantificar los efectos histológicos producidos por la acrilamida en el conciencia de que la patología científica y el diagnóstico requieren de
modelo de vertebrado Danio rerio adulto expuesto durante 8 días a la enfoques novedosos para realizar análisis cuantitativos (Griffin y
concentración de 0.85 mM de un alqueno como la acrilamida. Se aplico Treanor, 2017; Aeffner et al, 2019). Los sistemas de analisis de
un proceso de segmentación de imagenes a través del programa de imágenes han permitido incorporar tecnicas de histomorfometría para
dominio público ImageJ. Fiji, sobre preparaciones histológicas de cuantificar con precisión las irregularidades arquitectónicas y la
tejido renal, intestinal y hepático, aplicando umbrales de intensidad y complejidad de las estructuras histológicas en condiciones normales, así
diseñando contornos alrededor de las áreas de interés ubicadas en como en situaciones de daño tisular inducido (Wienert et al, 2012). Así,
imágenes mascaras binarias de 8-bit. Esta fue obtenida a partir de la la expresión numérica de la arquitectura nuclear y/o citoplasmática, ha
transformación de la imagen original contrastada con hematoxilina y proporcionado una mejor información para comprender a los sistemas
eosina. Los datos obtenidos fueron incorporados al programa biológicos, así como también conocer la posible progresión de algunas
estadístico GraphPad Prims. 7 para su cuantificación y representación patologías a través de suministrar resultados cuantitativos y un valor
gráfica. Los espacios internos de las Capsulas de Bowman en el tejido agregado al analisis cualitativo de la clásica caracterización histológica
renal registraron un mayor tamaño promedio en comparación con el manual (Xing F et al, 2019). El objetivo del trabajo fue realizar un
tejido control, mientras que en el tejido intestinal se registraron analisis de imagen por segmentación de la histopatología en peces cebra
vacuolas citoplasmáticas de mayor tamaño promedio en comparación adultos (Danio rerio) sometidos durante 8 días a la concentración de
a las vacuolas registradas en el tejido hepático, con un valor de 0.85 mM de un alqueno tipo-2 como la acrilamida (ACR). La ACR, es
****p<0,0001, altamente significativo en contraste con los respectivos un agente químico de procesado (Masson et al, 2007), altamente toxico
controles. Concluimos que con la segmentación fue posible (Hernández et al, 2019., Lopachin , 2012), por lo que en las últimas
caracterizar a la histopatología inducida por la acrilamida como un décadas ha sido considerada como un agente contaminante de alto
efecto tejido-dependiente, resultando más sensible el tejido renal y el riesgo y un verdadero problema de Salud Publica, ya que su presencia
intestinal en comparación con el tejido hepático. en productos de consumo alimenticio masivo, ya ha sido reportada
(Semla et al, 2017); sin embargo, la cuantificación de las señales de su
Palabras claves: Analisis de imagen, segmentación, acrilamida, toxicidad a nivel de la microarquitectura tisular inducidas por este
toxicidad diferencial, pez cebra agente en modelos experimentales, hasta donde se conoce ha sido poco
considerada. Cabe destacar que el pez cebra (Danio rerio) es un
Abstract: An image analysis by segmentation of histopathology
teleósteo de pequeño tamaño, natural de las regiones tropicales y con
produced by acrylamide in the adult zebrafish (Danio rerio)
una alta homología genómica con el humano (Goldsmith y Jobin, 2012).
Image analysis systems have allowed the implementation of Esta característica, particularmente a nivel de tejidos como el renal, el
histomorphometry techniques to precisely quantify architectural intestinal y el hepático, entre otros, hacen que el pez cebra sea un
irregularities and the complexity of histological structures in normal modelo atractivo y prometedor para múltiples bioensayos debido a la
conditions, as well as in situations of induced tissue damage. The aim facilidad de manejo y la relación costo-beneficio en comparación con
of this work was to quantify the histological effects produced by otros modelos de experimentación (Cornet et al, 2017). La
acrylamide in the vertebrate model Danio rerio adults exposed for 8 susceptibilidad de los tejidos en cuestión a la acción de agentes tóxicos,
days to the concentration of 0.85 mM of an alkene such as acrylamide. ha hecho que el pez cebra adulto sea utilizado para pruebas de toxicidad-
Segmentation was performed on histological preparations of renal, protección con agentes naturales como posibles candidatos fármacos
intestinal and hepatic tissue, through the use of the public domain hematoprotectores (Alvarez et al, 2017a; Alvarez et al, 2017b).
program ImageJ Fiji, applying intensity thresholds and designing
contours around the areas of interest located in binary 8-bit mask Materiales y metodos
images. This was obtained from the transformation of the original Obtención y preparación de los peces.
image contrasted with hematoxylin and eosin. The data obtained were
incorporated into the GraphPad Prims statistical program 7 for Los peces cebra adultos de cepa silvestre (wt) fueron obtenidos de
quantification and graphic representation. The internal spaces of the alevines desarrollados y mantenidos bajo patrones adaptados a las
Bowman Capsules in the renal tissue registered a larger average size condiciones del laboratorio de Microscopia del Instituto Anatómico
compared to the control tissue, while in the intestinal tissue “José Izquierdo”, de la Facultad de Medicina de la Universidad Central
cytoplasmic vacuoles of larger average size were recorded compared de Venezuela, Caracas, Venezuela. Los peces fueron acondicionados en
to the vacuoles recorded in the liver tissue , with a value of ****p acuarios de vidrio de 120 cm de largo, 50 cm de profundidad y 30 cm
<0,0001, highly significant in contrast to the respective controls. We de alto, provisto de filtro interno de carbón activado y un aireador para
conclude that with segmentation it was possible to characterize the la oxigenación del agua, a temperatura de 26°C y pH 7,2, y alimentados,
histopathology acrylamide-induced as a tissue-dependent effect, with tres veces al día, con alimento en hojuelas para peces (Kantal S.A.
renal and intestinal tissue being more sensitive compared to liver tissue. Venezuela).
Keywords: Image analysis, segmentation, acrylamide, differential Tratamiento Acrilamida.
toxicity, zebrafish.
Los bioensayos se realizaron por triplicado. Grupos de 7 peces adultos
fueron sometidos durante 8 días a una concentración toxica de ACR de
*e-mail: alvarezmenator@gmail.com
0,85 mM, estimada previamente. Cabe destacar que la concentración de
0,85 mM ha sido obtenida a partir de una concentración madre de 7 mM

Rev. Toxicol (2020) 37: 41 - 44 1141

sergas.es
Hernández C, Álvarez M.
incluida por otros autores (Komoike y Matsuoka, 2019) dentro del
rango de toxicidad de la ACR y generadora de adupto de hemoglobina.
Luego de una serie de ensayos con distintas concentraciones en un
rango entre 0.21 mM y 7 mM se obtuvo como CT50 = 0, 85 ±0,18 mM.
Transcurrido el tiempo de tratamiento, los peces fueron sacrificados de
acuerdo a las normas del comité de bioética de la institución y
siguiendo anotaciones de otros autores (Monte y Zoltán, 2012).
A A’
Procesamiento de muestras.
Los diferentes órganos, particularmente riñón, intestino e hígado,
fueron extraídos y fijados en paraformaldehido frío al 4% durante 24
horas y procesados para ser incluidos en parafina. Los respectivos
bloques de las muestras, controles y tratadas con ACR, fueron cortadas
en secciones histológicas de 5µm, para ser sometidas a las tinciones
con Hematoxilina y Eosina.
B B’
Adquisición de las imágenes
Las imágenes digitales de los cortes histológicos seriados de muestras
controles y tratadas con ACR, fueron adquiridas a través de un sistema
de captura digital, Capture IC.22. Imaging Sourse, incorporado a un
Microscopio Olympus BX50, bajo objetivo 10x y 100x de inmersión
en número de 5 cinco imágenes por corte.
Segmentación C C’
El procesamiento de segmentación utilizado consistió en la aplicación Figura 1: Imágenes transformadas 8-bit de cortes de tejido renal, intestinal y hepático de
del umbral de color a la imagen original teñida con hematoxilina y pez cebra adulto controles (A; B; C) y tratados con ACR (A’, B’, C’). Las imágenes
eosina, para luego realizar la transformación del producto obtenido, en originales teñidas con H&E. Se destaca en riñón mayor espacio de la Capsula de Bowman
(ECB) (flechas), así como gran presencia de vacuolas en los tejidos intestinal y hepático
una imagen binaria de 8-bit, blancos-grises-negro, o mascara. Sobre (flechas). Barra = 1,45 µm.
esta imagen binaria se delimitaron las regiones de interés;
particularmente; el Espacio de la Capsula de Bowman (ECB), en el 1 1 0 -0 3

tejido renal, así como las regiones correspondientes a los espacios * * * * p < 0 .0 0 0 1

vacuolares en el tejido intestinal y hepático. Esto fue realizado a través

)
2
( m
de la definición de bordes o contornos alrededor de estas áreas, 1 1 0 -0 4

A M E C B
mediante el uso de gradientes de escala de grises, aplicando umbrales
de intensidad de pixeles, para luego estimar el Área Media del Espacio 1 1 0 -0 5

de la Cámara de Bowman (AMECB) y el Área Vacuolar Media

(AVM). Para todo ello se procedió a través del menú del programa
1 0
A’
-0 6

ImageJ Fiji. Los datos numéricos en µm2 fueron obtenidos y A 1

C o n tro l R iñ o n - A C R

analizados con un test no paramétrico y fueron representados en una Figura 2: Segmentación y delimitación de contornos de los espacios de la Capsula de
gráfica de media geométrica de eje lineal de acuerdo al Programa Bowman (ECB) en el tejido hepático tratado con ACR. Mascara del corte original (A).
estadístico GraphPad Prism 7.0. Cuantificación del Área Media de los ECB (A’).

Resultados * * * * p < 0 .0 0 0 1
1 1 0 -0 3

El contraste entre las imágenes binarias de los distintos tejidos renal,

intestinal y hepático control (Fig.1A, 1B, 1C) y los respectivos tratados
)
2

1 0
( m

-0 4

con ACR (Fig.1A’, 1B’ y 1C’), puso en evidencia, un significativo

1
A V M

incremento en los ECP, en el tejido renal, así como un incremento de

vacuolización en el tejido intestinal y el hepático. La selección por 1 1 0 -0 5

contorno de las áreas de interés en el tejido renal, delimitada por el

contorno de fuertes líneas rojas en la denominada mascara de la imagen
B B’ 1 1 0 -0 6

original (Fig.2A), permitió cuantificar la mayor área entre los ECB, al C o n tro l I n t e s t in o - A C R

comparar los valores de AMECB de los controles y tratados (Fig.2A’),

Figura 3: Segmentación y delimitación de contornos de vacuolas en el tejido intestinal de
con diferencias cuantitativas y altamente significativas ****p<0,0001. pez cebra adulto tratado con ACR Mascara del corte original (B Cuantificación
Por su parte, la selección de las áreas de interés en tejido intestinal, significativa de las diferencias del Área Vacuolar Media (AMEV) (B’).
delimitada igualmente por el contorno de fuertes líneas rojas en la
denominada mascara de la imagen original (Fig.3B), permitió mostrar
una mayor presencia de vacuolas citoplasmáticas en la región de los
enterocitos de las vellosidades de dicho tejido al contrastar los valores
de AMV de controles y tratados (Fig.3B’), con diferencias cuantitativas
e igualmente estadísticamente significativas ****p<0,0001.
Finalmente, la selección de las áreas de interés en el tejido hepático,
visualizada en la denominada mascara de la imagen original (Fig.4C),
permitió mostrar una mayor presencia de vacuolas citoplasmáticas en
dicho tejido al comparar los valores de AMV control y tratado C C’
(Fig.4C’), con diferencias cuantitativas e igualmente altamente
significativas ****p<0,0001. Figura 4: Segmentación y delimitación de contornos de vacuolas en el tejido hepático de
pez cebra adulto tratado con ACR Mascara del corte original (C). Cuantificación
significativa de las diferencias del Área Vacuolar Media (AMEV) (C’).

42 Rev. Toxicol (2020) 37: 41 - 43

 Un analisis de imagen por segmentación de la histopatología producida por la acrilamida en el pez cebra adulto (Danio rerio)

Discusion 3. Álvarez M, Vanessa G, Arias M, Perdomo L, Navarro. Acrilamida y

Amaranthus dubius L en células sanguíneas de pez cebra Danio
Con los datos obtenidos en este estudio se puso en evidencia que rerio. RETEL. 2017b; Vol 49: 28-37
efectivamente la acrilamida causa efectos adversos en los tejidos
analizados; renal, intestinal y hepático de pez cebra adulto, demostrado 4. Cornet C, Calzolari S, Miñana-Prieto R, Dyballa S, van
principalmente a través de la evidente perdida de la microarquitectura Doornmalen E, Rutjes H, Savy T, D'Amico D, Terriente J. Ze
de estos tejidos, probablemente debido a un aumento significativo de GlobalTox: An Innovative Approach to Address Organ Drug
la peroxidación lipídica, disminución de los niveles de glutatión y Toxicity Using Zebrafish. Int J Mol Sci. 2017; Vol 18 (4):864-882.
disminución de las actividades de la catalasa y la superóxido dismutasa,
5. Goldsmith JR, Jobin C. Think small: zebrafish as a model system of
principales mecanismos de acción de la acrilamida que han sido
human pathology. J Biomed Biotechnol. 2012; 2012:817341.
reportados por otros autores (Mohamed, 2012). Sin embargo, no solo
se verifico la acción toxica de la acrilamida sobre estos tejidos 6. Griffin J, Treanor D. Digital pathology in clinical use: where are we
particulares, sino que la cuantificación del daño tisular, obtenida a now and what is holding us back? Histopathology. 2017; Vol 70
través del analisis de imágenes binaria en escala de grises, aporto un (1):134–145.
valor agregado al analisis cualitativo. Esto a través de la incorporacion
de datos numéricos, con cifras estadísticamente significativas, que 7. Hernández, C, Álvarez, M, Perdomo, L, Rodríguez-Acosta.
permitieron establecer la expresión; AMECB-Riñón >AVM-Intestino Hemotoxicity activity caused by acrylamide on the peripheral
>AVM-Hígado. De dicha expresión, se pudo concluir que el daño erythrocytes of Zebrafish (Danio rerio). RETEL. 2019; Vol 59: 64-
tisular ejercido por la ACR podria ser un efecto toxico con 75.
características de tejido-dependiente, estableciéndose así que los 8. Komoike, Yuta, and Masato Matsuoka. “In vitro and in vivo studies
tejidos renal y hepático podrían ser caracterizados como los tejidos con of oxidative stress responses against acrylamide toxicity in
una mayor sensibilidad hacia la acción de la ACR, en comparación con zebrafish.” Journal of hazardous materials. 2019; Vol. 365: 430-439.
el tejido hepático; la existencia de tejidos con una mayor o menor
sensibilidad a la ACR, hace posible establecer características que hasta 9. LoPachin RM, Gavin T. Molecular mechanism of acrylamide
donde conocemos no habían sido claramente definidas. Por otra parte, neurotoxicity: lessons learned from organic chemistry. Environ
cabe destacar que el proceso de segmentación utilizado como protocolo Health Perspect. 2012; Vol 120 (12):1650–1657.
para el análisis de imágenes, resulto un método simple para la 10. Stephen J. Powers, Donald S. Mottram, Andrew Curtis & Nigel G.
cuantificación de cambios en la microarquitectura tisular, utilizando Halford. Acrylamide levels in potato crisps in Europe from 2002 to
solo la denominada “imagen mascara” correspondiente a la expresión 2016. Food Additives & Contaminants: Part A. 2017; Vol 34 (12):
de una huella de la imagen original, con una alta precisión y validación 2085–2100.
como ha sido reportado en otros estudios histopatologicos (Xu J et al,
2011). Dicho proceso de segmentación, ha sido caracterizado como una 11. Mohamed Sadek K. Antioxidant and immunostimulant effect of
de las etapas de relevancia en el análisis de imágenes de microscopía, Carica papaya linn. Aqueous extract in acrylamide intoxicated rats.
ya que permite colocar las áreas de interés en un primer plano, Acta Inform Med. 2012; Vol 20 (3):180–185.
diferenciándolas de las regiones de bajo interés, que quedan
12. Matthews M, Varga ZM. Anesthesia and Euthanasia in zebrafish.
incrustadas en zonas de píxeles de fondo. Este umbral de intensidad de
ILAR J. 2012; Vol 53 (2):192-204.
píxeles es definido automáticamente mediante la función de umbral del
software de código abierto ImageJ Fiji, que utiliza información mínima 13. Russell RA, Adams NM, Stephens DA, Batty E., Jensen K., Freemont
y detecta las regiones de interés independientemente de su forma PS Segmentación de imágenes de microscopía de fluorescencia para
(Russell RA, 2009). Dicha característica permite la aplicación de este el análisis cuantitativo de la arquitectura nuclear celular. Biophys J.
procedimiento de segmentación en un amplio espectro de estructuras 2009; Vol 96: 3379–3389.
histológicas en condiciones normales, así como en condiciones de daño
tisular inducido, ya que evita el sesgo de la segmentación 14. Semla M, Goc Z, Martiniaková M, Omelka R, Formicki G.
independiente de las características de la forma. En este contexto cabe Acrylamide: a common food toxin related to physiological functions
destacar que la segmentación de las imágenes digitales de los tejidos and health. Physiol Res. 2017; Vol 66 (2):205–217.
analizados de pez cebra adulto, permitió incorporar datos cuantitativos 15. Wienert S, Heim D, Saeger K, Stenzinger A, Beil M, Hufnagl P,
como un valor agregado al analisis cualitativo del daño tisular inducido Dietel M, Denkert C, Klauschen F. Detection and segmentation of
por la ACR Con dicha incorporacion se podria establecer un posible cell nuclei in virtual microscopy images: a minimum-model
índice del grado histopatológico para la acción de este alqueno tipo-2, approach. Sci Rep. 2012; Vol 2: 503-509
con el cual poder realizar un seguimiento progresivo de la toxicidad de
este importante agente químico de procesado. 16. Xing F, Xie Y, Shi X, Chen P, Zhang Z, Yang L. Towards pixel-to-
pixel deep nucleus detection in microscopy images. BMC
Agradecimientos Bioinformatics. 2019; Vol 20 (1):472-484.
A la Licenciada Lourdes Perdomo por el trabajo de histotecnologia 17. Xu J, Janowczyk A, Chandran S, Madabhushi A. A high-throughput
realizado. Al Dr. Alexis Rodríguez Acosta y a la Licenciada Amanda active contour scheme for segmentation of histopathological
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Rev. Toxicol (2020) 37: 41 - 43 1143

Rev. Toxicol (2020) 37: 44 - 47

Características de las intoxicaciones agudas en pacientes ancianos según la edad

Béjar Calzada CM1, Pi-Figueres Valls M2,3,4, Clemente Rodríguez C2,3, PallàsVillaronga O3,5, Arnau Barrés
I2,3,4, Calpe Perarnau X3,4, Cirera Lorenzo I3,5,6,7, Supervía Caparrós A3,5,6,7.
1Institut de Neuropsiquiatria i Adiccions, Centre Assistencial Dr. Emili Mira, Parc de Salut Mar (PSM), Barcelona.
2Servei de Geriatria. Hospital Universitari del Mar, PSM, Barcelona.
3Unitat Funcional de Toxicologia. Hospital Universitari del Mar, PSM, Barcelona.
4Grup de treball de Toxicologia de la SoCMUE (SoCMUETox).
5Servei de Urgències. Hospital Universitari del Mar, PSM, Barcelona.
6Universitat Autònoma de Barcelona.
7Institut Hospital del Mar d’Investigacions Mèdiques. Barcelona.
Resumen: Introducción: Con el aumento en la esperanza de vida, es en función del sexo7,9,10, la procedencia11 o la edad12. El objetivo de este
de esperar un incremento en el número de intoxicaciones agudas en trabajo es evaluar las características de las IA atendidas en un SUH en
pacientes ancianos. Los objetivos del estudio son analizar las pacientes >65a divididos en grupos etarios.
características de las intoxicaciones en >65años e identificar
diferencias según la edad. Metodología: Estudio retrospectivo Métodos
comparativo en pacientes ancianos divididos en 3 grupos: 1 (66- Estudio descriptivo, retrospectivo y comparativo de todas las IA en
75años), 2 (76-85años) y 3 (>85años), atendidos en Urgencias de un >65a atendidas en un SUH universitario desde el 1 de enero de 2009
Hospital Universitario, por intoxicación aguda, del 2009-2014. hasta el 31 de diciembre de 2014. Los datos se obtuvieron a través de la
Resultados: Se recogieron 341 intoxicaciones en pacientes >65años revisión de las historias clínicas correspondientes. Variables
(8,9% del total de intoxicados). Edad media: 78,9(7,7). Grupo 1: registradas: edad, sexo, lugar de la intoxicación (domicilio/vía pública),
predominaron los varones (63,6% vs 28,1% y 20%; p<0,001). Grupos iniciativa de la asistencia (Servicio de emergencias médicas [SEM],
2 y 3: se intoxicaron más frecuentemente en domicilio (93,5% y 97,1% propios medios, otros), intención
vs 58,5%; p<0,001), de manera accidental (77,1% y 97,0% vs 34,7%; (recreativa/suicida/homicida/involuntaria-accidental), existencia de
p<0,001); mayoría por fármacos (73,9% y 85,7%) y precisaron menor antecedentes psiquiátricos y/o intoxicaciones previas, tóxico/s
contención mecánica (p<0,006). Conclusiones: Las intoxicaciones son implicado/s (alcohol/drogas de abuso/fármacos/gases/productos
más frecuentes en pacientes de entre 76-85 años, en los grupos 2 y 3 la domésticos), síntomas, tratamiento, realización de valoración
mayoría son mujeres, accidentales, en domicilio y debidas a fármacos. psiquiátrica y comunicado judicial previo al alta, destino al alta y
Abstract: Characteristics of acute poisonings in elderly patients mortalidad.
according to age La muestra se dividió en tres grupos: el grupo 1 incluyó pacientes de
Background and objective: With the increase in life expectancy, an 66-75años; el grupo 2 de 76-85 años; y el grupo 3 >85a.
increase in the number of acute poisonings in elderly patients is Para comparar las variables cuantitativas se utilizó la prueba de la t de
expected. The aims of this study are to analyze the characteristics of Student o de la U de Mann-Whitney, y para las cualitativas, la prueba
the poisonings in patients over 65 years and identify the differences de Chi-cuadrado con corrección de Fisher; siendo estadísticamente
according to age. Methods: Comparative retrospective study in elderly significativo un valor de p<0,05. Se comprobó la normalidad de los
patients divided into Group 1: (66-75 years), group 2: (76-85 years) datos mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov y para el análisis de
and group 3: (>85 years), treated in the Emergency Department of a datos se utilizó SPSS 15.0.
University Hospital for acute intoxication during a period of 6 years.
Results: 341 poisonings were collected in patients over 65 years (8.9% Resultados
of all acute poisonings). Average age: 78.9 (7.7). In group 1, males
Durante el periodo de estudio se registraron 3.847 IA, de las cuales, 341
predominated (63.6% vs. 28.1% and 20%; p <0.001). Groups 2 and 3
(8,9%) se presentaron en pacientes >65a (media 78,9±7,7 años).
were more frequently intoxicated at home (93.5% and 97.1% vs.
Pertenecían al grupo 1: 118 (34,6%) pacientes, al grupo 2: 153 (44,9%)
58.5%; p <0.001), accidentally (77.1% and 97.0% vs. 34.7%; p
y al grupo 3: 70 (20,5%).
<0.001); with greater involvement of drugs (73.9% and 85.7%) and
required less mechanical containment (p <0.006). Conclusions: En la Tabla 1 se muestra que, en el grupo 1 predominaron varones
Poisonings are more frequent in patients between 76-85 years, in (63,6%) y en los grupos 2 y 3, mujeres (71,9% y 80%, respectivamente)
groups 2 and 3 the majority are women, accidental, at home and due to (p< 0,001). La forma más frecuente de acceso al SUH fue a través del
drugs. SEM (p=no significativa [ns]). La mayoría de los pacientes de los
grupos 2 y 3 presentaron intoxicación en domicilio (93,5% y 97,1% vs
Introducción 58.5%) (p<0,001). En el grupo 1 destaca un porcentaje relativamente
Las intoxicaciones agudas (IA) representan un importante problema de similar en domicilio y vía pública (39%). La causa accidental fue
salud a nivel mundial produciendo una morbimortalidad responsable en la mayoría de IA de los grupos 2 y 3, comparado con el
significativa1,2. Se estima que el 1% de las asistencias en los Servicios grupo 1 (77,1% y 85,7% vs 34,7% respectivamente) (p<0,001), en los
de Urgencias hospitalarias (SUH) 3 se deben a IA y que del 2% al que existía un mayor porcentaje de IA por intención recreativa (11,1%
10,5% se producen en pacientes >65 años (>65a) 1,4. Dadas las y 2,9% vs 50,0%) (p<0,001). Los pacientes de los grupos 2 y 3 tuvieron
características especiales de esta edad, las IA pueden tener mayor menos antecedente de IA previas (18,3% y 11,4% vs 44%) (p<0,001),
dificultad diagnóstica5,6, provocando hospitalizaciones hasta en el y de patología psiquiátrica (34% y 20% vs 50,8%) (p<0,001).
25,5% de los casos y una mortalidad de hasta el 11,8%7. Tal y como se describe en la Tabla 2, en los grupos 2 y 3 los fármacos
La OMS estima un aumento mundial de casi el doble de la población fueron el tóxico más implicado (73,9% y 85,7% vs 43,2%) (p<0,001);
>60a para el año 20508. Esto puede suponer un incremento en el la digoxina en ambos grupos más frecuente (34,0% y 42,9% vs 5.1%)
número de intoxicaciones en esta población. (p<0,001). En el grupo 1, las benzodiacepinas fueron la primera causa
farmacológica y la segunda en los grupos 2 y 3 (21,2%, 21,6% y 27,1%,
Se han descrito diferencias en las características de las intoxicaciones respectivamente) (p=ns). Los opiáceos, en tercer lugar (3,4%, 8,5% y
4,3%) (p=ns). El alcohol fue responsable en el 52,5% de casos del grupo
*e-mail: 60820@parcdesalutmar.cat 1 vs 13,7% y 1,4% de grupos 2 y 3 (p < 0,001). Las drogas de abuso

Rev. Toxicol (2020) 37: 44 - 47 11

sergas.es
 Características de las intoxicaciones agudas en pacientes ancianos según la edad

Tabla 1. Características generales según grupo etario. Tabla 2. Tipos de tóxicos (fármacos, alcohol, drogas de abuso, etc.)

Grupo Grupo Grupo Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3

1 2 3 p 66-75 años 76-85 años >85 años p
66-75 76-85 >85 n (%) n (%) n (%)
años años años
n (%) n (%) n (%) Fármacos 51 (43,2) 113 (73,9) 60 (85,7) <0,001

Sexo BDZ 25 (21,2) 33 (21,6) 19 (27,1) ns

Mujeres 43 110 56 (80) <0,001
Hombres (36,4) (71,9) 14 (20) Neurolépticos 6 (5,1) 3 (2,0) 4 (5,7) ns
75 43
(63,6) (28,1) Antidepresivos 6 (5,1) 7 (4,6) 4 (5,7) ns
Procedencia
España 111 149 70 ns Litio 2 (1,7) 4 (2,6) 0 ns
Extranjero (94,1) (97,4) (100)
7 (5,9) 4 (2,6) 0 (0) Opiáceos 4 (3,4) 13 (8,5) 3 (4,3) ns
Iniciativa
SEM/TS 97 126 60 Paracetamol 4 (3,4) 4 (2,6) 2 (2,9) ns
Medios propios (82,2) (82,4) (85,7)
CAP otro 18 19 2 (2,9) ns AINEs 3 (2,5) 4 (2,6) 2 (2,9) ns
hospital, etc. (15,3) (12,4)
8 Digoxina 6 (5,1) 52 (34,0) 30 (42,9) <0,001
3 (2,5) 8 (5,2) (11,4)
Lugar Otros 0 1 (0,7) 0 ns
Domicilio 69 143 68 <0,001 antiarrítmicos
Vía pública (58,5) (93,5) (97,1) Betabloquantes 0 2 (1,3) 0 ns
Otros 46 7 (4,6) 1 (1,4)
(39,0) 3 (1,9) 1 (1,5) IECAs 1 (0,8) 1 (0,7) 1 (1,4) ns
3 (2,5)
Intencionalidad Antiepilépticos 3 (2,5) 5 (3,3) 2 (2,9) ns
Accidental 41 118 60
Recreativa (34,7) (77,1) (85,7) <0,001 ADOs 2 (1,7) 2 (1,3) 3 (4,3) ns
Suicida 59 17 2 (2,9)
Homicida/otros (50,0) (11,1) 7 (10) Alcohol 62 (52,5) 21 (13,7) 1 (1,4) <0,001
17 16 1 (1,4)
(14,4) (10,5) DA:
1 (0,9) 2 (1,3) Anfetaminas 1 (0,8) 0 0 ns
Ant. Previos: Heroína 2 (1,7) 0 0
-Intoxicaciones Si 52 28 8 <0,001 Productos 10 (8,5) 7 (4,6) 6 (8,6) ns
No ó N/S (44,0) (18,3) (11,4) domésticos
66 125 62 Intoxicación por 7 (5,9) 15 (9,8) 2 (2,9) 0,035
-Psiquiátricos Si (56,0) (81,7) (88,6) <0,001 gases
No ó N/S
60 52 14 BDZ: Benzodiacepinas; AINEs: Antiinflamatorios no esteroideos; IECAs: Inhibidores
(50,8) (34,0) (20,0) de la enzima conversora de la angiotensina; ADOs: Antidiabéticos orales; DA: Drogas
58 101 56 de abuso.
(49,2) (66,0) (80,0)
IC a Si 31 19 7 0,007
Psiquiatría No ó N/S (26,3) (12,5) (10,0) Se evidenció sintomatología en el 90,6% de todos los casos de IA
87 134 63 (p=ns). La Figura 1, muestra que los síntomas más frecuentes, en los
(73,7) (87,5) (90,0)
Comunicado Si 13 18 4 (5,7) ns
tres grupos, fueron los neurológicos (76 casos [64,4%], 90 [58,8%] y 40
judicial No ó N/S (11,0) (11,8) 66 [57,1%] respectivamente) (p=ns). Se encontraron diferencias
105 135 (94,3) significativas en síntomas digestivos (18 casos [15,3%], 50 [32,7]% y
(89,0) (88,2) 27 [38,6%], respectivamente) (p<0,001), alteraciones conductuales (23
Destino al alta Domicilio 96 109 47
Planta (81,4) (71,2) (67,1) pacientes [19,5%], 16 [10,5%], y 4 [5,7%], respectivamente) (p=0,013)
convencional y cardiovasculares (12 [10,2%], 31 [20,3%] y 14 [20,0%]) (p= 0,046).
UCI 8 (6,8) 31 19 ns
Psiquiatría 2 (1,7) (20,3) (27,1) En la Tabla 3, se detalla que el tratamiento se precisó en 64,4%, 74,5%
Traslado/Otros 1 (0,8) 3 (2,0) 0 y 85,7% de grupos 1, 2 y 3 respectivamente (p<0,02); el más utilizado:
11 0 0
(9,3) 10 4 (5,8)
el soporte inespecífico. Un bajo porcentaje de pacientes necesitaron
(6,5) soporte vital avanzado y ventilación mecánica no invasiva en los tres
Fugas Si 6 (5,1) 0 0 0,003 grupos (0,8%, 2,0%, 1,4% y 1,7%, 0,7%, 0,0%, respectivamente). Se
No 118 153 70 administró algún tipo de antídoto en 9 (7,6%) casos del grupo 1, 22
(94,9) (100,0) (100,0)
Mortalidad Total 1 (0,8) 3 (2,0) 3 (4,3) (14,4%) del 2 y 15 (21,4%) del 3 (p=0,025); por orden de frecuencia:
Accidental 0 3 (2,0) 2 (2,9) ns Flumazenil (5,1%, 10,5% y 18,6%, respectivamente) (p=0,013),
Suicida 1 (0,8) 0 1 (1,4) Naloxona (1,7%, 3,3% y 0%, respectivamente) (p=ns) y N-
Acetilcisteína (0,8%, 1,3% y 2,9% respectivamente) (p=ns). En 1 caso
SEM/TS: Servicio de emergències médicas/Transporte Sanitario; CAP: Centro de
atención primaria; Ant.Pevios: antecedentes previos; N/S: No se sabe. IC: Interconsulta; del grupo 2 se utilizó flumazenil y naloxona. La descontaminación
UCI: Unidad de cuidados intensives. gástrica (aspiración/carbón-activado), las soluciones ácidas/alcalinas, la
depuración renal o la cámara hiperbárica, fueron utilizadas en bajos
fueron de baja incidencia, hubo 2 (1,7%) casos por heroína y 1 (0,8%) porcentajes (p=ns). Precisó contención mecánica el 5,9% de pacientes
por anfetaminas en el grupo 1. Respecto a las IA por productos del grupo 1, el 0,7% del grupo 2 y ninguno del grupo 3 (p=0,006).
domésticos hubieron 8,5% casos del grupo 1, 4,6% del grupo 2 y 8,6% En la Tabla 1, se describe que la valoración psiquiátrica de urgencias
del grupo 3 (p=ns), destacando la lejía (9 pacientes) y el ácido fue requerida en el 26,3%, 12,5% y 10,0% de los casos, grupos 1, 2 y 3
clorhídrico (3 pacientes). Las intoxicaciones por gases se produjeron (p=0,007). El comunicado judicial se realizó con escasa frecuencia en
con baja frecuencia (grupos 1, 2 y 3: 5,9%, 9,8% y 2,9%, los tres grupos (p=ns). La mayoría de los pacientes de los tres grupos
respectivamente) (p=ns); el monóxido de carbono (CO), responsable pudieron ser dados de alta a domicilio desde el SUH (81,4%, 71,2% y
en la mayoría de los grupos 2 y 3 (p=0,035).

Rev. Toxicol (2020) 37: 44 - 47 1145

Béjar Calzada CM, Pi-Figueres Valls M2, Clemente Rodríguez C, PallàsVillaronga O, Arnau Barrés I, Calpe Perarnau X, Cirera Lorenzo I, Supervía Caparrós A.
67,1%) (p=ns). Ingresaron en planta convencional (6,8%, 20,3% y el grupo etario. En nuestro estudio se encontraron diferencias en los tres
27,1%, respectivamente) (p<0,013). Sólo 2 (1,7%) pacientes del grupo grupos, principalmente entre los ≤75a y >75a.
1 y 3 (2%) del grupo 2, ingresaron en la unidad de cuidados intensivos
y en Psiquiatría 1 (0,8%) del grupo 1. Se fugaron del SUH 6 (5,1%) Como en otras series, en los grupos de mayor edad predominaron
pacientes del grupo 1, y ninguno de los otros grupos (p=0,003). Fueron mujeres7,9,10,11,12,13, y en el grupo joven predominaron hombres1,14,15. Y
éxitus, 1 (0,8%) del grupo 1, 3 (2,0%) del grupo 2 y 3 (4,3%) del grupo aunque a partir de los 50-55 años ya hay más mujeres que hombres en
3 (p= ns). nuestra población de estudio, según el Instituto de Estadísticas de
Cataluña16, esta diferencia aumenta de manera exponencial a medida
que avanza la edad, siendo más evidente a partir de los 75 años. Otras
razones que explicarían estas diferencias, podrían ser, la causa de
intoxicación, siendo la más frecuente en ≤75a la recreativa y el tóxico
más implicado, el alcohol, coincidiendo con otros estudios realizados a
nivel nacional5,14. Mientras que en los >75a predominó la causa
accidental2,5,9,10,11,15; y en estos, el tóxico predominante fueron los
fármacos2,5,6,13, probablemente vinculado también a que es en esta franja
de edad, en donde existe mayor probabilidad de estar presente la
polifarmacia o elevada comorbilidad, fragilidad, posible deterioro
cognitivo, etc. 6,13. Respecto a esto último, quizá se justifica también
que a mayor edad, aumentó
el porcentaje de IA producidas en domicilio13,17.
Comparado con otros estudios1,4,5, en los cuales han quedado en primer
lugar las benzodiacepinas, en nuestro estudio el fármaco más
frecuentemente responsable de intoxicación en los grupos 2 y 3 fue la
digoxina, en segundo lugar, las benzodiacepinas y en tercero, los
opiáceos. Esto pone de manifiesto la persistencia en el uso de digoxina
en el paciente mayor en la población estudiada, así como el aumento en
la prescripción de opioides5. Por ello y considerando el estudio de
Karbakhsh et al15 en el que la intoxicación por opiáceos superó la mitad
de los casos, se debería reflexionar sobre la importancia de optimizar
estrategias para el uso adecuado de medicamentos en el anciano.

Figura 1: Sintomatología de la intoxicación. Se observó un elevado porcentaje de intoxicaciones por productos

domésticos; esto podría traducir la posibilidad de alteraciones
Tabla 3. Tratamiento e intervenciones en la intoxicación durante su estancia en cognitivas (variable no registrada en nuestro estudio) en los grupos de
urgencias.
mayor edad, tal y como se muestra en el estudio de Klein-Swartz4 et al.
Esto mismo también podría explicar la alta frecuencia de IA
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 accidentales, en domicilio y por fármacos encontrada en nuestra
66-75 años 76-85 años >85 años p
n (%) n (%) n (%)
muestra.

Tratamiento: 76 (64,4) 114 (74,5) 60 (80,7) 0,020

Los síntomas neurológicos sobresalieron en los 3 grupos,
probablemente por la participación de benzodiacepinas18, opiáceos y
Inespecífico 58 (49,2) 85 (55,6) 44 (62,9) ns alcohol. Entre los grupos de mayor edad siguieron por frecuencia, los
Antídoto 9 (7,6) 22 (14,4) 15 (21,4) 0,025 síntomas digestivos y cardiovasculares, quizá relacionados a
A. Gástrica 1 (0,8) 2 (1,3) 1 (1,4) ns
Carbón Activado 5 (4,2) 4 (2,6) 2 (2,9) ns intoxicación digitálica si tomamos en consideración lo encontrado en
Sol. Alcalina 2 (1,7) 1 (0,7) 0 ns estudios previos19,20, y a diferencia de lo encontrado en el estudio Yu-
Hui Hu et al, en el cual son los neurológicos seguidos de los
SVB 19 (16,1) 25 (16,3) 17 (24,3) ns
SVA 1 (0,8) 3 (2,0) 1 (1,4) ns
gastrointestinales y respiratorios. En el grupo joven, en cambio, el
segundo más frecuente fue la alteración conductual probablemente
Contención 7 (5,9) 1 (0,7) 0 0,006 relacionada con el alcohol, quizá explicando también la mayor
mecánica necesidad de contención mecánica que hubo en éstos.
VMNI 2 (1,7) 1 (0,7) 0 ns
En nuestra muestra, casi el 65% de pacientes precisaron tratamiento,
Diálisis 1 (0,8) 0 0 ns
mayoritariamente inespecífico. A mayor edad, mayor uso de antídotos,
Cámara hiperbá 0 1 (0,8) 0 ns sobresaliendo flumazenil y naloxona, en concordancia al porcentaje
rica encontrado de intoxicaciones por benzodiacepinas y opiáceos.
Det. Tóxicos en 48 (40,7) 81 (52,9) 37 (52,9) ns Aunque la mayoría de los pacientes fueron dados de alta a domicilio,
orina
destaca al igual que en el estudio de Kyunghee et al, que tuvieron mayor
IC a Psiquiatría 31 (26,3) 19 (12,5) 7 (10,0) 0,007 necesidad de ingreso hospitalario los grupos 2 y 3, debido quizás y
resaltando nuevamente, la alta probabilidad de que en estos pacientes
Comunicado 13 (11,0) 18 (11,9) 4 (5,7) ns haya una elevada comorbilidad y/o fragilidad6,13.
judicial
De los 7 casos de éxitus, 5 fueron causa accidental por fármacos (3 por
A.Gástrica: Aspiración Gástrica; SVB: Soporte vital básico; SVA: Soporte vital digoxina, 1 opioide, 1 hipoglucemiante) y 2 fueron suicidios (1
avanzado; VMNI: Ventilación mecánica no invasiva; DetTóxicos en orina.: polifarmacia + alcohol y 1 ác. clorhídrico). De lo anterior, destaca un
Determinación de tóxicos en orina; IC: Interconsulta. bajo porcentaje de mortalidad (2,0%) inferior comparado con otra
serie13. El suicidio consumado (0,5%) coincide con que, a mayor edad,
Discusión hubo menos antecedentes de intoxicaciones previas y de patología
psiquiátrica a diferencia de otros estudios1,7,13.
Existen pocos estudios sobre IA en pacientes de edad avanzada según

46 Rev. Toxicol (2020) 37: 44 - 47

 Características de las intoxicaciones agudas en pacientes ancianos según la edad
Con todo lo anterior, se concluye que las IA en pacientes >65a 14. González-Fernández D, Alonso-Fernández M. Intoxicaciones
representan un porcentaje no despreciable del total de intoxicaciones agudas en un Servicio de Urgencias. Estudio descriptivo en el área
atendidas en un SUH lo que invita a tenerlas siempre presentes como Sanitaria III de Asturias. RevToxicol 2009;26:122-7.
diagnóstico diferencial en el motivo de consulta a urgencias en los
pacientes en este rango de edad. Hay diferencias significativas según 15. Karbakhsh M, Zandi NS. Pattern of poisoning in the elderly: An
aumenta la edad destacando como punto de corte los 75 años, y que por experience from Tehran. ClinToxicol (Phila) 2008;46:211-7.
encima de esta edad hay mayoría de mujeres, IA de tipo accidental, en 16. Anuario Estadístico de Cataluña. Demografía. Población por sexo y
domicilio y por causa farmacológica, con especial mención de la grupos de edad (periodo revisado del 2009 al 2014). Instituto de
digoxina y las benzodiacepinas, sin perder de vista a los opiáceos. Estadísticas de Cataluña [www.idescat.cat] (consultado en Abril de
Dentro de las limitaciones del estudio, están el carácter retrospectivo y 2020)
unicéntrico del mismo, así como la falta de registro de otras variables 17. Kroner BA, Scott RB, Waring ER, Zanga JR. Poisoning in the
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Experiencia en el manejo de intoxicaciones por Betabloqueadores y

Calcioantagonistas: serie de casos y revisión de la literatura
Duque JJ1, Caicedo J2, Estrada AF3, Berrouet MC4, Zuluaga-Gómez M5*
1
Médico Universidad San Martin. Residente Medicina de Urgencias, Universidad CES, Linea de Investigación Medicina de Urgencias y Toxicología CES. Medellín,
Colombia.
2
Especialista en Medicina de Urgencias, Universidad CES. Urgentóloga Hospital Pablo Tobon Uribe, Medellin, Colombia.
3
Especialista en Medicina de Urgencias, Universidad CES. Urgentólogo Hospital Pablo Tobon Uribe, Medellin, Colombia. Especialista en Gerencia de IPS. Docente
de cátedra Facultad de Medicina UPB. Docente Adscrito Universidad CES. Linea de Investigación Medicina de Urgencias y Toxicología CES. Medellín, Colombia.
4
Especialista en Toxicología Clínica Universidad de Antioquia, Medelín, Colombia. Toxicóloga Hospital General de Medellín, Climica SOMA, Docente de
farmacología y Toxicología Universidad CES. Linea de Investigación Medicina de Urgencias y Toxicología CES. Grupo de investigación HGM – CES. Medellín,
Colombia.
5
Médico Universidad Pontificia Bolivariana. Residente Medicina de Urgencias, Universidad CES, Medellin, Colombia. Estudiante de la Especialización en Gerencia
de IPS, Universidad CES. Linea de Investigación Medicina de Urgencias y Toxicología CES. Medellín, Colombia.

Resumen: La intoxicación por betabloqueantes y calcio antagonistas principalmente por los trastornos de la conducción cardíaca y la caída
suele generar una gran morbilidad y mortalidad secundaria a sus en la resistencia vascular periférica (Truit el at, 2012. Mowry et al 2015.
efectos tóxicos cardiovasculares, como son los trastornos de la Love et al, 2000). Según el reporte anual de los Centros para el Control
conducción cardíaca y la caída en la resistencia vascular periférica. En y la prevención de Enfermedades (CDC) del 2014- 2015, en Estados
sobredosis, los beta bloqueantes y calcio antagonistas tienen similar Unidos aproximadamente 2.277 personas al año son tratadas en los
presentación clínica y su tratamiento suele ser común entre ellos, en servicios de urgencias como consecuencia de una intoxicación, de éstas
varios puntos del manejo. Estas intoxicaciones, a menudo, son el 47,6% corresponden a medicamentos de formulación habitual donde
refractarias al manejo médico estándar, por lo que las intervenciones a resaltan los calcio antagonistas y beta bloqueantes (Mowry et al 2015).
realizar deben ser ordenadas y estandarizadas con conocimiento
profundo de la farmacología. Las emulsiones lipídicas no son el En Colombia se puede observar cómo las intoxicaciones han aumentado
tratamiento de primera línea para las intoxicaciones por calcio en los últimos años. El Sistema Nacional de Vigilancia en Salud Pública
antagoistas y betabloqueantes y se usan solamente cuando se han (SIVIGILA) para el período entre 2017-2018 reporta una incidencia de
agotado las otras opciones terapeúticas descritas, siendo una 55.6 casos por cada 100.000 habitantes y para el mes de Agosto del
alternativa eficaz para el manejo de este tipo de intoxicaciones. En este 2019 se reportan 2967 casos de toxicidad por medicamentos, con una
trabajo se pretende, con una serie de casos y revisión de la literatura, letalidad de 3,4 por cada 100.000 (Instituto Nacional de Salud, 2019).
analizar la evidencia disponible en el paso a paso del abordaje y Estrada et al, (2018) encontró en un período de 4 años en tres
tratamiento de los pacientes intoxicados por calcio antagonistas y instituciones participantes de la ciudad de Medellín (Colombia), que el
betabloqueantes planteando un algoritmo de manejo. 19,3% de los casos por intoxicación se debió a medicamentos de uso
común incluyendo betabloqueadores y calcio antagonistas, con un 74%
Palabras clave: Bloqueadores de los canales de Calcio; Antagonistas de intención suicida (Estrada et al, 2018).
Adrenérgicos beta; Emulsiones grasas intravenosas; Técnica de
Clampeo de la Glucosa; Glucagón. Los betabloqueantes ejercen sus efectos farmacológicos a través de
receptores beta, aunque existen algunos con efecto alfa. En el miocito,
Abstract: Experience in the management of intoxications by Beta- el receptor beta se encuentra acoplado a proteínas G y cuando el
blockers and Calcium-antagonists: case series and review. receptor es estimulado por el fármaco, aumentan los niveles de
Adenosin Monofosfato Cíclico (AMP) y la actividad de la
The poisoning by beta blockers and calcium antagonists usually proteinquinasa A, lo que inicia una serie de procesos de fosforilación
generates great morbidity and mortality secondary to its cardiovascular que finalmente llevan al aumento del nivel del calcio intracelular de la
toxic effects such as cardiac conduction disorders and the decrease in siguiente forma: se activan los canales de calcio tipo L en la membrana
peripheral vascular resistance. In overdose beta blockers and calcium celular, permitiendo la entrada de calcio a la célula, además se libera
antagonists have a similar clinical presentation and their treatment calcio al citoplasma desde las reservas que se encuentran en el retículo
usually overcomes, these poisonings are often refractory to standard sarcoplásmico (Shepherd, 2008; Heath, 1984). Los iones de calcio se
medical management so the interventions to be performed must be unen a la troponina C en el complejo de la troponina desplazando a la
ordered and standardized with deep knowledge of pharmacology. Lipid tropomiosina y permitiendo la unión de los filamentos de actina con
emulsions are not the first-line treatment for antagonistic calcium miosina, lo que permite el acortamiento de las fibras musculares para
blockers and beta blockers, they are used only when the other que se de la contracción muscular. Por lo tanto, se debe entender que al
therapeutic options described have been exhausted but they are an ejercer su efecto farmacológico el betabloqueante produce un efecto
effective alternative for the management of this type of poisoning. It is inotrópico negativo al inhibir todo este mecanismo fisiológico
intended with this series of cases and review of the literature to analyze (Shepherd, 2008; Heath, 1984; Bangash et al, 2015).
the evidence available in the step-by-step approach and treatment of
calcium-poisoning patients antagonists and beta blockers posing a Los calcio antagonistas ejercen sus efectos a través de la interacción
management algorithm. directa y antagonismo de los canales de calcio tipo L, tanto en el miocito
cardíaco (los subtipos no dihidropiridínicos) como en el músculo liso
Key words: Calcium Channel Blockers; Adrenergic beta-Antagonists; vascular periférico (los subtipos dihidropiridínicos) permitiendo la
Far Emulsions, Intravenous; Glucose Clamp Technique; Glucagon. entrada del calcio a la célula, y por estos mecanismos estos
Introducción medicamentos producirían efectos inotrópicos negativos y
vasodilatación (Shepherd, 2008; Kerns, 2007).
La intoxicación por betabloqueadores y calcio antagonistas puede ser
el resultado de una ingesta no intencional, un intento suicida o un error Es importante, por lo tanto, comprender el mecanismo de acción de los
en la dosificación de la medicación, generando gran morbilidad y beta bloqueantes y calcio antagonistas, ya que la vía final común de
mortalidad secundaria a sus efectos tóxicos cardiovasculares, ambos será el calcio, el cual es absolutamente necesario en la
contractilidad del miocito. Es por esto que en la intoxicación con
dichas sustancias generará disminución del cronotropismo,
*e-mail: mateozg92@hotmail.com dromotropismo e inotropismo cardíaco que se manifestará

48
sergas.es
 Experiencia en el manejo de intoxicaciones por Betabloqueadores y Calcioantagonistas: serie de casos y revisión de la literatura
como depresión en la contractilidad cardíaca, bradicardia, bloqueos de nitrofurantoina, prazosina, y fluoxetina que son presuntamente los
la conducción aurículo-ventricular en distinto grado y vasodilatación medicamentos implicados en el cuadro actual. Se desconoce la cantidad
periférica, por lo que estos pacientes pueden llegar a los servicios de de cada uno de los medicamentos ingeridos. Se concluye que se trata de
urgencias en choque hemodinámico de difícil manejo (Shepherd, una intoxicación por múltiples antihipertensivos con efectos adversos
2008; Heath, 1984; Kerns, 2007). cardiovasculares, entre los cuales predominan los asociados a la
intoxicación por calcio antagonistas y beta bloqueantes.
En sobredosis, los beta bloqueantes y calcio antagonistas tienen similar
presentación clínica y su tratamiento suele ser común entre ellos, en Se inicia manejo con vasopresor tipo noradrenalina y gluconato de
varios puntos críticos del manejo. Estas intoxicaciones a menudo son calcio IV, requiriendo aumento progresivo del vasopresor hasta dosis
refractarias al manejo médico estándar, por lo que las intervenciones a altas (1,5 mcg/kg/min) por lo que se adiciona glucagón IV en bolos
realizar deben ser ordenadas y estandarizadas con conocimiento hasta llegar a una dosis máxima de 10 mg IV y debido a la persistencia
profundo de la farmacología (Olson et al, 2009). del choque se inicia manejo con hiperinsulinemia euglicémica y
finalmente es necesario administrar emulsión lipídica. La paciente
Se describen interacciones farmacológicas de importancia clínica de logra un regular control de su hemodinamia y es trasladada a la Unidad
los calcio antagonistas con distintos medicamentos como Digoxina de Cuidados Intensivos (UCI) para vigilancia clínica.
(aumentando entre un 40 a un 90% las concentraciones de la misma),
Alfa bloqueantes (potenciando el efecto hipotensor en caso de Los datos clínicos de ingreso muestran electrocardiograma con
intoxicación con alguno de esta familia) y betabloqueadores bradicardia sinusal, frecuencia cardíaca de 53, con onda p presente en
(propiciando las concentraciones de este último además de aumentar el bloqueo auriculoventricular de primer grado, manifestación de RSr en
riesgo de trastornos en la conducción y generar disfunción sistólica con derivadas del electrocardiograma V1 y V2, Gases arteriales pH 7.29,
choque cardiogénico). Otros medicamentos, como Fenitoina o pCO2 35mmHg, pO2 180mmHg, Glucosa 222mg/dL, Lactato
Rifampicina al ser inductores enzimáticos podran reducir la 1.2mmol/L, HCO3 18 mmol/L BE -9.0, Química sanguínea Alanino
biodisponibilidad del calcioantagonista (Bendersky et al, 1997; Taddei Aminotransferasa (ALT) 41 UI/L, Aspartato Aminotransferasa (AST)
et al, 2001). 38 UI/L, Creatinina 1.04mg/dL, BUN 19mg/dL, Sodio (Na) 136
mmol/L, Cloro (Cl) 111 mmol/L, Potasio (K) 4.32 mmol/L, Calcio (Ca)
El efecto de bloqueo generado, tanto por los calcio antagonistas como 8 mg/dL, Magnesio (Mg) 1.7 mg/dL, Hemoglobina (Hb) 12.7 g/dL,
los beta bloqueadores, genera además bloqueo en celulas beta a nivel Hematocrito (Hto) 37%,Leucocitos 35300 células/uL, Neutrofilos 78%,
pancreático, previniendo la liberación de insulina. Ello genera Linfocitos 12%, Bandas 6%, Plaquetas 288000 células/mm3.
hipoinsulinemia y resistencia a la insulina, causando hiperglicemia o
en algunos pacientes crisis hiperglucémica cetósica. En este estado de En la UCI inician monitoreo hemodinámico invasivo, bicarbonato en
estrés cadiovascular, los miocitos pasarán de utilizar como sustrato infusión y se logra estabilización hemodinámica con desmonte gradual
ácidos grasos libres a glucosa (Silverthorn et al, 2010; Kumar et al, de soporte vasopresor y alta directa desde la UCI a su hogar después de
2018). 72 horas de vigilancia clínica sin ningún tipo de secuela. Los
diagnósticos finales de esta paciente fueron: Intento suicida,
Así mismo, a nivel sistémico podrá conllevar a hipoperfusión cerebral, intoxicación polimedicamentosa grave (principalmente calcio
resultado de la hipotensión severa, generando alteración del nivel de antagonistas y beta bloqueantes), choque refractario resuelto.
conciencia, convulsiones o encefalopatía. Habrá ademas, tendencia a
la acidosis láctica como resultado del metabolismo anaerobio y la Caso clínico 2
pobre perfusión tisular, por disminución en la conversión del lactato a
piruvato en la mitocontria debido a la disminución de entrada del calcio Paciente femenina de 18 años, consulta al servicio de urgencias de un
a la célula (Kumar et al, 2018). Se describe además lesión renal aguda hospital de alto nivel de complejidad después de ingerir de 60 tabletas
por estado de hipotensión e hipoperfusión, siendo de origen prerrenal de amlodipino de 10mg en un intento autoinflingido de características
y llevando incluso a isquemia renal. El edema pulmonar no impulsivas. Ingresó al servicio con una presión arterial de 110/70mmHg
cardiogénico será resultado de la vasodilatación pulmonar y y una frecuencia cardíaca de 150 latidos por minuto. Se inició manejo
extravasación alveolar del fluido, por lo que la reanimación hídrica con líquidos endovenosos (solución salina a 100 cc/hora) y gluconato
excesiva puede empeorar el cuadro clínico (Stephen et al, 2019. Siddiqi de calcio al 10% una ampolla cada 8 horas y posteriormente
et al, 2014). observación clínica. Los datos paraclínicios iniciales fueron:
Hemoglobina 13,3g/dL, Hematocrito 38.5%, Leucocitos 22.200
La presente revisión y reporte de serie de casos clínicos pretende células/uL, 80% Neutrofilos, Plaquetas 328.000 células /uL, Magnesio
revisar y estudiar la evidencia disponible en el paso a paso del abordaje 1.82 mg/dL, Cloro 110mmol/L, Potasio 3.38 mmol/L, Sodio 135
y tratamiento de los pacientes intoxicados por calcio antagonistas y mmol/L, Calcio 9.6mg/dL, BUN 13.4mg/dL, Creatinina 1.36 mg/dL,
beta bloqueantes en un intento de unificar los conceptos en el manejo pH 7.53, PCO2 18.7mmHg, pO2 88.5mmHg, HCO3 15.5 mmol/L, BE
de las mismas. -7.2. Posteriormente, presentó caída de la presión arterial, por lo cual se
inició infusión de Noradrenalina a 0,5mcg/kg/minuto titulado. Requirió
Resultados vigilancia en la UCI con soporte vasopresor y ventilatorio (requiere
Caso clínico 1 asegurar vía aérea) y posteriormente necesitó inicio de vasopresina a
dosis de 2.4U/h. A las 24 horas requirió aumento en el soporte
Paciente femenina de 17 años, soltera, sin hijos, estudió bachillerato ventilatorio, por falta de mejoría clínica se ordenó bolo de gluconato de
incompleto, ama de casa. Inicialmente consulta a una institución de calcio 60mL y posteriormente infusion a 1.2ml/kg/hora, por
mediana complejidad con historia de intoxicación medicamentosa por persistencia de signos de hipoperfusión se inició solución
múltiples sustancias, pero por su condición clínica es llevada en hiperinsulinemia euglicémica a 1UI/Kg/hora, para este momento
traslado no regulado a otra institución de alta complejidad por presentó deterioro de función renal (creatinina 2.7mg/dL) e
diagnóstico de choque cardiogénico con bradicardia e hipotensión hiperlactatemia de 5.26mmol/L, por lo que se decidió inicio de azul de
refractaria al manejo inicial con líquidos y dopamina Intravenosa (IV). metileno 2mg/kg con dos dosis subsecuentes. Se solicitaron niveles de
La paciente ingresa al hospital de alta complejidad después de 4 horas metahemoglobina, los cuales fueron menores al 5%, requiriendo
de ingesta de las sustancias, en malas condiciones generales, inestable hemofiltración e infusión de bicarbonato. Se inició soporte por ECMO
hemodinámicamente, pálida, fría, diaforética, con alteración sensorial, pero a las 48 horas la paciente fallece.
hipotensa, con presión arterial de 78/30 mmHg, bradicárdica, con
frecuencia cardíaca de 56 latidos por minuto y el resto de signos vitales Caso clínico 3
dentro de parametros de normalidad. Los familiares aportan varios Paciente de masculino 16 años que acude al servicio de urgencias de un
blíster vacíos de losartán, amlodipino, verapamilo, metoprolol,

Rev. Toxicol (2020) 37: 48 - 54 1149

 Duque JJ, Caicedo J, Estrada AF, Berrouet MC, Zuluaga-Gómez M.
hospital de alto nivel de complejidad 12 horas después de la ingesta El calcio es parte del manejo inicial de esta intoxicación, recordando
voluntaria de 24 tabletas de Acetaminofén, 30 tabletas de Propanolol y que dicho ión es la vía común farmacológica de ambas sustancias, y en
10 tabletas de Doxiciclina. Al ingreso se encuenta con presión arterial teoría, el aumento del calcio extracelular ejerce un efecto antagonista
de 120/70mmHg, frecuencia cardíaca de 85 latidos por minuto, competitivo y la sobreposición de este en los canales de calcio aumenta
frecuencia respiratoria de 18 por minuto. Se inició infusión de N Acetil teóricamente la entrada del ión a la célula (Ramoska et al, 1993). Estos
Cisteína 50mg/kg para 4 horas y después 100mg/kg durante 16 horas, resultados están descritos en modelos biológicos experimentales y
e inmediatamente se inicia Gluconato de Calcio en bolo 30ml. Los voluntarios sanos. La cinética en escenario de intoxicaciones agudas no
datos clínicos del ingreso fueron Hemoglobina 10.8/dL, Hematocrito es conocida.
32.5%, Leucocitos 19200 células/u, 84% Neutrófilos, 13% linfocitos,
3% bandas, Plaquetas 190.000 células /uL, Sodio 142 mmol/L Potasio El calcio puede ser usado como una medida temporal mientras se
3.91 mmol/L, Magnesio 2.12 mg/dL, Cloro 108mmol/L, Calcio 8.2 prepara la instauración de otros agentes inotrópicos, no se debe usar
mg/dL, BUN 15 mg/dL, Creatinina 0.98 mg/dL, pH 7.18, PCO2 32.3 como única medida farmacológica ya que es poco probable que su
mmHg, pO2 94.3 mmHg, HCO3 13.2 mmol/L, BE -8.4. A las 24 horas administración aislada pueda proveer un adecuado soporte
de vigilancia, se documenta bradicardia extrema (frecuencia cardíaca hemodinámico en los pacientes con intoxicación severa. Un esquema
de 36 latidos por minuto) con Bloqueo Auriculoventricular de primer recomendado es iniciar con dosis de cloruro de calcio de 10 ml IV o
grado, por lo cual se inicia Dopamina a dosis de 5mcg/kg/min con gluconato de calcio 30 ml IV (este último es el que tenemos disponible
adecuada respuesta. A las 48 horas después se logra desmontar en Colombia) hasta un máximo de 3 dosis y seguir una infusión de 0.6
Dopamina e infusión de Calcio y se logra dar de alta sin secuelas ni – 1.6 ml/kg/h tolerando un aumento del calcio ionizado hasta 2 veces el
otras complicaciones. valor superior del limite de referencia (Ramoska et al, 1993; Angulo et
al, 2012).
Discusión
3. Glucagón:
Existe poca evidencia respecto al manejo de estas intoxicaciones, pero
El glucagon es otra estrategia que ha sido aceptada de forma histórica
es necesario conocer los estudios disponibles para optimizar el
como parte de la terapia estándar en el manejo temprano de los pacientes
abordaje y el manejo temprano y específico de estos pacientes.
con estas intoxicaciones pero especialmente se ha avalado su uso para
Las metas de reanimación inicial en el paciente intoxicado no difieren los beta bloqueantes. Al glucagón se le atribuyen acciones cronotrópicas
de las de otras patologías críticas, donde se deben priorizar y e inotrópicas positivas cuyos efectos se traducen en incremento de la
diagnosticar los eventos potencialmente fatales por medio de la frecuencia cardíaca, la presión arterial media y reversión transitoria de
valoración del A-B-C-D-E (vía aérea, ventilación, circulación, déficit los bloqueos auriculo-ventriculares por medio del incremento de las
neurológico) con el fin de lograr la estabilización inicial del paciente concentraciones de AMPc, el cual a su vez aumenta el calcio
(Olson et al, 2009). intracelular por los mecanismos que se habían explicado previamente.
Este incremento lo hace de manera directa a través de un “bypass” al
Es muy común que los pacientes intoxicados ingresen a los servicios receptor, por lo que es independiente de la modulación habitual de las
de urgencias por ingesta de múltiples tipos de medicamentos, los cuales catecolaminas por los receptores alfa y beta (Boyd, 2013; Bailey, 2003).
van a ejercer sus efectos tóxicos por medio de varias vías
farmacológicas. Ante tal escenario, priman en primer lugar las medidas Se recomienda dar dosis de glucagon de 3 a 5 mg IVy en caso de no
de estabilización universal y posteriormente tratar de identificar las tener mejoria hemodinámica repetir con 4 a 10 mg IV administrados en
sustancias específicas ingeridas, con el fin de definir cuales son los 10 minutos (Shepherd, 2008).
riesgos específicos de éstas (cardiovascular, neurológico, renal, etc) e
El glucagón no debe ser considerado como terapia de primera línea o
instaurar el tratamiento dirigido a cada una (Mowry et al, 2015. Olson
terapia única en ninguno de estos escenarios, sino que debe formar parte
et al, 2009; Arroyave et al, 2008).
de un grupo escalonado de intervenciones en la reanimación de los
A continuación se describen las medidas específicas en el tema de la pacientes. El uso de glucagón se recomienda tras el inicio de
intoxicación con betabloqueantes y calcio antagonistas. vasopresores a dosis óptima, después del uso de calcio y medidas de
reanimación estándar. Actualmente, la evidencia que existe en humanos
1. Liquidos endovenosos y vasopresores: se limita a reportes de casos y series de casos, la mayoría de la evidencia
La reanimación hídrica es la primera medida común ante el escenario se ha extrapolado de estudios animales pero ésto no quiere decir que no
de hipotensión sostenida que proponen diferentes protocolos, sin tenga efectos positivos en el manejo de estos pacientes y por lo tanto es
embargon la evidencia cada vez aporta más hacia reanimaciones factible recomendar su uso en esta intoxicación (Shepherd, 2008;
restrictivas definidas como un bolo inicial de 10 cc/kg de cristaloides e Bailey, 2003).
infusiones posteriores, de acuerdo a la tendencia hemodinámica del 4. Hiperinsulinemia euglicémica:
paciente, con el fin de evitar efectos adversos asociados a la
sobrehidratación, como lo son el edema pulmonar cardiogénico y no La hiperinsulinemia euglicémica ha emergido a través de los años como
cardiogénico (Shepherd, 2008). un recurso a usar en la intoxicación por calcio antagonistas y beta
bloqueantes. En los pacientes con estas intoxicaciones se ha observado
En este contexto, ya que el choque no es de tipo hipovolémico sino que hay interrupción del metabolismo de los ácidos grasos, una
cardiogénico y vasopléjico (como se observa en el segundo caso donde disminución de la producción de insulina en los islotes beta pancreáticos
hubo un amplio uso de cristaloides), se recomienda la instauración y una resistencia relativa a la insulina en el miocardio, por lo que esta
temprana de vasoactivos como la dopamina y la noradrenalina, terapia aumenta la disponibilidad de insulina permitiendo el transporte
prefiriendo esta última cuando no hay bradicardia extrema (en casos de intracelular de glucosa y el aprovechamiento de ésta por parte del
bradicardia extrema podría ayudar más el efecto agonista beta uno de miocardiocito. A estos mecanismos se les atribuye el efecto inotrópico
la dopamina (Holger et al, 2006). Se requerirá titular la dosis con el fin positivo que de esta solución (Truitt, 2012).
de obtener una presión arterial media mínima de 65 mmHg y en muchas
ocasiones se necesitarán altas dosis e incluso el uso combinado de Si bien no hay buena evidencia respecto a su uso, varios reportes de
vasopresores para lograr las metas de presión arterial, como se caso (Lherureux et al, 2006; Engebretsen et al, 2017; Sandroni et al,
evidencia en el segundo y en el tercer caso descrito (Arroyave et al, 2004) muestran un efecto benéfico en estos pacientes especialmente en
2008. Holger et al, 2006. Graudins et al 2015). aquellos con choque cardiogénico. Esta terapia inicia su acción a los 5
minutos, con tasas de respuesta máximas entre los 15 y 45 minutos; se
2. Calcio: administra a dosis de 1 unidad/kg de insulina cristalina en 0.5 g/kg de
dextrosa (al 5 o 10%) en bolo y se continua con la mitad de la dosis por

50 Rev. Toxicol (2020) 37: 48 - 54

 Experiencia en el manejo de intoxicaciones por Betabloqueadores y Calcioantagonistas: serie de casos y revisión de la literatura
cada hora hasta que haya mejoria de los parametros hemodinámicos El azul de metileno se ha usado para el manejo del choque refractario
con vigilancia continua de las glucometrías y los niveles de potasio con evidencia extrapolada del manejo del choque post cirugía cardíaca,
por riesgo de hipokalemia (Shepherd, 2008; Lheureux, 2006. Sandroni septicemia y anafilaxia que comparten como factor común la depleción
et al, 2004). de reservas metabólicas miocárdicas, la vasoplejia y redistribución de
flujo. Sin embargo, existe cada vez más valor agregado en el escenario
5. Emulsiones lipidícas: de choque inducido por intoxicaciones, ya que esta sustancia actúa
Las emulsiones lipídicas son compuestos formados por triglicéridos y inhibiendo la oxido nítrico sintasa y la guanosina monofosfato cíclica
fosfolípidos que se utilizan como parte de la nutrición parenteral y cuya modulación se traduce en menor impacto secundario a la toxicidad
sirven también como vehículo para algunos medicamentos (como por por estas sustancias y mejor respuesta a los vasopresores; la dosis
ejemplo el Propofol), como manejo en algunas intoxicaciones como recomendada de azul de metileno es 1-2 mg/kg como una única dosis
por los anestésicos locales y sustancias liposolubles como los (Jang et al, 2011).
betabloqueantes, los calcioantagonistas y los antidepresivos tricíclicos, 7. Otras intervenciones
entre otros. En nuestro medio la emulsión lipídica que se encuentra con
mayor frecuencia disponible es el Intralipid® (Litonius, 2012; a. Marcapasos
Fresenius, 2017).
El marcapasos transcutáneo es la estrategia óptima de manejo en los
Las emulsiones lipídicas no pueden ser por ahora consideradas el pacientes con bradiarritmias inestables, bloqueos AV de segundo grado
tratamiento de primera línea para las intoxicaciones por calcio avanzado y tercer grado. Los marcapasos han sido utilizados en estas
antagoistas y betabloqueantes. La evidencia de su uso proviene de intoxicaciones en pacientes con bradicardia sintomática e inestabilidad
series de reportes de caso y de revisiones narrativas donde se ha hemodinámica. La evidencia en torno a su uso es escasa en escenario de
atribuido una relación causal a su efectividad con las tasas efectivas de intoxicación aguda por beta bloqueadores y calcio antagonistas,
retorno a la circulación espontánea, lo que ha parecido prometedor en limitada a reportes de casos y series que describen en algunos pacientes
el tiempo. No obstante, debe ser claro que el pilar de tratamiento problemas tanto en la conducción como en la captura. Sin embargo, la
fundamental sigue siendo instaurar de forma temprana medidas de mejoría hemodinámica fue considerablemente superior cuando se
reanimación básica y avanzada dirigidas a soporte cardiovascular lograron buenos índices de captura ventricular con el marcapasos; por
temprano, lo tanto, puede ser considerado como una de las terapias a realizar con
otras medidas de intervención (Lee et al, 1995. Mcglinchey, 1998).
evitando condicionar el proceso de reanimación a un elemento cuya
disposición esta condicionada en el medio y es recurso solo de b. Inotrópicos:
hospitales de alta complejidad fuera del servicio de urgencias. Por
tanto, se considera que las emulsiones lipídicas se pueden considerar La dobutamina es un inotrópico que mediante la estimulación de
solamente cuando se han agotado las otras opciones terapeúticas receptores B1 adrenérgicos y alfa 1 adrenérgicos aumenta el
descritas. inotropismo, cronotropismo y con efecto vasodilatador periférico
agregado. Está descrito en la literatura que el efecto per se de la
Existen varias teorias respecto al uso y la acción de las emulsiones intoxicación lleva a un efecto no predecible de este inotrópico por el
lipídicas: contexto de bloqueo de receptores beta; además, dado que uno de los
espectros críticos de la intoxicación es el síndrome vasopléjico, el perfil
• El tóxico o la sustancia liposoluble es atrapada en el centro lipídico farmacodinámico de este fármaco no es el óptimo en el manejo de las
de la emulsión, mecanismo conocido como “lipid sink” o intoxicaciones por beta bloqueadores o calcio antagonismos, por lo que
inmersión lipídica y así se evitra que el tóxico o sustancia no se debe evitarse.
una al sitio de acción en los diferentes órganos, reduciendo su
volúmen de distribución y efectos tóxicos (Rothschild, 2010). El levosimendán y el milrinone también se han usado en estos pacientes,
pero sin evidencia aún que avale su uso (Levine et al, 2013. Hollenberg,
• Los cardiomiocitos tienen predilección por la utilización de ácidos 2011).
grasos para la producción de ATP (80-90% de la fuente de ATP
proviene de la fosforilación oxidativa de ácidos grasos) y las c. Dispositivos de asistencia extracorpórea (ECMO- Balón de
emulsiones lipídicas facilitan la recuperación de la carnitin contrapulsación)
acilcarnitín translocasa, la cual es necesaria en este metabolismo
Se han utilizado en pacientes que no responden a ninguna de las terapias
de ácidos grasos permitiendo que se optimice el metabolismo y la
previamente mencionadas. Dado el carácter reversible de estas
producción energética en la célula miocárdica (Levine et al, 2016).
intoxicaciones, estos dispositivos pueden permitir ganar tiempo para
• Los lípidos permiten la modulación de los potenciales de acción de permitir la redistribución, metabolismo y eliminación hasta que la
los canales de sodio y calcio de la membrana celular, activándolos función cardíaca se recupere (Baud et al, 2007. Daubin et al, 2009).
en su presencia y ejerciendo un efecto cardioprotector (Hoegberg, d. Atropina
2017).
La terapia con atropina habitualmente sugerida en el contexto de
• Las emulsiones lipídicas producen un estímulo a los receptores bradicardia sintomática suele ser ineficaz y no tiene ningún papel en el
adrenérgicos con efectos directos sobre las ATPasa miocárdicas manejo de estos pacientes. Hollenberg (2011) observa una elevación
reduciendo los niveles endoteliales de óxido nítrico por medio de transitoria de la frecuencia cardiaca pero rápidamente hay recurrencia
inhibición de la óxido nítrico sintasa y así su efecto vasodilatador de la bradicardia y las dosis repetidas tampoco muestran efectos
(Levine et al, 2016). positivos, por el contrario, incurren en riesgo de presentación de
Las emulsiones lipídicas están disponibles en varias concentraciones, síndrome colinérgico (Hollenberg, 2011).
siendo las presentaciones más frecuentes al 10, 20 y 30%. La mayoría En este contexto, se propone un algoritmo de manejo para la
de reportes de caso y estudios han utilizado la concentración al 20%. intoxicación por beta bloqueadores y calcio antagonistas (Tabla 1).
Dentro de las dosificaciones utilizadas la que más coincide en la
literatura es iniciar con un bolo de 1,5ml/kg de una solución de lípidos Conclusiones
al 20% y posteriormente continuar una infusión de 0,25ml/kg/min de
la misma solución (American College of Medical Toxicology, 2011). El tratamiento de las intoxicaciones severas por calcioantagonistas y
betabloqueantes es, en definitiva, un gran reto que requiere a menudo
6. Azul de metileno: un enfoque multidisciplinario y multimodal. La toxicidad es debida a
depresión miocárdica, bradicardia, reducción de la contractilidad y

Rev. Toxicol (2020) 37: 48 - 54 1151

 Duque JJ, Caicedo J, Estrada AF, Berrouet MC, Zuluaga-Gómez M.
vasodilatación,
Tabla 1. Algoritmoel
de tratamiento tienecon
manejo de pacientes como intención
intoxicación contrarestar
por Beta estos
Bloqueadores y Calcio Antagonistas.

Paciente con intoxicación por Beta Bloqueadores

y Calcio Antagonistas

A Vía Aérea
B Ventilacion
C Circulación
D Neurológico

Liquidos endovenosos Medidas de Reanimación guiada

descontaminación de acuerdo a
estabilidad
Reanimación restrictiva hemodinámica
10cc/kg IV Cristaloides Primeras 2 horas
posteriores a la ingesta
Evite y vigile sobrecarga
pulmonar
Meta de PAM > 65mmHg
Riesgo de choque cardiogénico
y no cardiogénico

Cloruro de Calcio 10ml IV ó

Bolo Gluconato de Calcio 30ml IV (máximo 3 dosis)
Si requiere infusión: 0,6 - 1,6ml/kg/h

Si no hay mejoría: Glucagón 3 - 5mg IV

Si no hay mejoría hemodinámica repetir 4 - 10mg IV (en 10 minutos)

Si no hay mejoría: Hiperinsulinemai euglicémica

Preparar Bolo: 1UI/kg de Insulina Cristalina en 0,5gr/kg Dextrosa al 5% ó 10%
Luego infusión: La mitad de la dosis usada por cada hora hasta obtener mejoría
hemodinamica

Si no hay mejoría:
Emulsión lipidica 20% Bolo IV de 1,5ml/kg y luego infusión 0,25ml/kg/min

Si no hay mejoría:Azul de Metileno 1 -2mg/kg IV en dosis unica

Si no hay mejoría:
- Marcapasos eléctrico y/o farmacológico (Dopamina o Adrenalina IV)
- Considere Inotropicos (Dobutamina IV, Levosimendan IV)
- Dispositivos de asistencia extracorpórea (ECMO - Balón contrapulsación)

52 Rev. Toxicol (2020) 37: 48 - 54

 Experiencia en el manejo de intoxicaciones por Betabloqueadores y Calcioantagonistas: serie de casos y revisión de la literatura
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Es destacable reconocer que los beneficios a la terapia variarán acorde demiológico%20semana%2034.pdf
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A través de esta revisión de tema y reporte de experiencia de manejo
de tres casos, se logra proponer un manejo integral farmacológico y no 18. Kumar K, Biyyam M, Bajantri B, Nayudu S. Critical management of
farmacológico de intoxicaciones severas con beta bloqueadores y severe hypotension caused by amlodipine toxicity managed with
calcio antagonistas, para tener en cuenta dentro de la práctica clínica. hyperinsulinemia/euglycemia therapy supplemented with calcium
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 Rev. Toxicol (2020) 37: 55 - 68

Revisión de los modelos computacionales que relacionan la estructura química con

la disrupción del sistema endocrino
Goya-Jorge, E. 1,2, de Julián-Ortiz, J.V. 3, Gozalbes, R. 1*
1
ProtoQSAR SL., CEEI (Centro Europeo de Empresas Innovadoras), Parque Tecnológico de Valencia. Av. Benjamin Franklin 12, 46980 Paterna, Valencia, España.
2
Departamento de Farmacología, Facultad de Farmacia, Universidad de Valencia, Av. Vicente Andrés Estellés, s/n, 46100 Burjassot, Valencia, España.
3
Unidad de Diseño de Fármacos y Topología Molecular, Departamento de Química-Física. Facultad de Farmacia, Universidad de Valencia, Av. Vicente Andrés
Estellés, s/n, 46100 Burjassot, Valencia, España.

Resumen: El término interruptor endocrino define una amplia y funciones de las hormonas ha preocupado a la comunidad científica
diversa clase de sustancias de origen natural o antropogénico con la internacional (Gassner et al., 1958). Por su terminología en inglés
capacidad de interferir con alguna función del sistema endocrino y “endocrine disruptors” o “endocrine disrupting chemicals”, se ha
provocar efectos adversos en un organismo o su descendencia. La extendido y popularizado su nombre indistintamente como “disruptores
disrupción endocrina se asocia con cáncer, obesidad, diabetes, endocrinos” (anglicismo), interruptor o alterador endocrino. En
disfunción reproductiva e inmunológica. Constituye una forma mamíferos, aves, reptiles y peces, los efectos de estas sustancias se han
específica de toxicidad cuyas regulaciones y legislación actualmente detectado en alteraciones del comportamiento sexual, la
carecen de consenso. Los métodos computacionales, y particularmente masculinización de hembras y la feminización de machos, que incluye
los estudios quimioinformáticos como las relaciones cuantitativas la reducción del tamaño de los órganos sexuales, así como la pérdida de
estructura-actividad (QSAR), son herramientas valiosas de su funcionalidad. Otras consecuencias son el desarrollo de
investigación que han ocupado gradualmente un importante espacio en malformaciones y procesos cancerosos, niveles séricos anómalos de las
los estudios toxicológicos. Esta revisión propone un análisis del más principales hormonas, problemas de fertilidad, perturbaciones en la
reciente estado del arte relativo a la modelación QSAR de la disrupción respuesta inmune, disminución de la capacidad de aprendizaje y de la
endocrina. Los casos de estudio seleccionados se centran en tres memoria a corto y largo plazo. Niveles elevados de compuestos
mecanismos importantes que representan la biosíntesis, el transporte y interruptores endocrinos en fluidos como la leche materna han revelado
la interacción con los receptores hormonales mediados por la capacidad el riesgo de exposición temprana a estos tóxicos (Schug et al., 2016;
inhibitoria de la enzima aromatasa, y los efectos sobre la proteína Yilmaz et al., 2020).
transportadora de transtiretina y el receptor de andrógenos,
respectivamente. Estas herramientas predictivas pueden ayudar a La publicación del libro de Rachel Carson “Silent Spring” en 1962
priorizar sustancias como posibles alteradores endocrinos y, por lo supuso para el público en general una llamada de atención ante las
tanto, son contribuciones importantes que garantizan el ahorro de consecuencias a largo plazo de la contaminación medioambiental, y en
tiempo, materiales y recursos humanos. particular sobre los riesgos potenciales en la reproducción de productos
químicos sintéticos como el dicloro difenil tricloroetano (DDT). Sin
Palabras clave: QSAR, modelos computacionales, interruptor embargo, la primera tentativa global de establecer una definición formal
endocrino, TTR, aromatasa, hormona. de los compuestos que provocan efectos adversos al interactuar con el
sistema endocrino data de 1991 (Bern et al., 1991).
Abstract: Protection against Endocrine Disruption through
Quantitative Structure-Activity Relationship modelling A nivel europeo, la primera iniciativa en relación con los alteradores
endocrinos fue la aprobación en el Parlamento, en octubre de 1998 de
The endocrine disruptors are defined as a broad and diverse class of la “Resolución sobre las sustancias químicas que provocan
substances of natural or anthropogenic origin with the ability to perturbaciones endocrinas” propuesta por la Comisión de Medio
interfere with some function of the endocrine system and, in doing so, Ambiente, Salud Pública y Protección del Consumidor. Comenzó a raíz
cause adverse effects on an organism or its descendants. Endocrine de esta resolución a aplicarse en la Unión Europea la aún vigente
disruption, associated with pathologies such as cancer, obesity, “Estrategia Comunitaria para los Alteradores Endocrinos” con
diabetes, and reproductive and immunological dysfunction, constitutes diferentes proyectos de investigación asociados (Karjalainen et al.,
a specific form of toxicity whose regulation and legislation currently 2017).
lack consensus. Computational methods, and within them
chemoinformatic studies such as the prediction of quantitative En una de las primeras resoluciones adoptadas por el Parlamento
structure-activity relationships (QSAR), are valuable research tools Europeo en el año 2000, se enfatizó la necesidad de desarrollar sistemas
that have gradually occupied an important space in toxicological de control de riesgo rápidos y efectivos, y de actuar inmediatamente en
studies. This review proposes an analysis of the most recent state of the la identificación de sustancias con potencial toxicidad endocrina. El
art related to QSAR modelling in the context of endocrine disruption. Parlamento y el Consejo de Ministros se harían eco de este imperativo
For this, case studies reported on three important hormonal al proyectar la disrupción endocrina como parte del Reglamento (CE)
mechanisms were selected, which represent synthesis, transport, and N.º 1907/2006 (REACH, acrónimo de Registro, Evaluación,
interaction with receptors. The summarized QSARs modelled the Autorización y Restricción de sustancias y mezclas químicas), así como
inhibitory capacity of the aromatase enzyme and the effects on the la creación de la Agencia Europea de Sustancias y Mezclas Químicas
transthyretin transporter protein and the androgen receptor. These (ECHA, del inglés “European Chemicals Agency”). De conformidad
predictive tools can assist in prioritizing substances as potential con REACH, los alteradores endocrinos se identifican como sustancias
endocrine disruptors and are therefore important contributions that extremadamente preocupantes, junto con las consideradas
guarantee the saving of time, material, and human resources. carcinógenas, mutagénicas y tóxicas para la reproducción (sustancias
CMR), con objetivo de reducir su uso y sustituirlas progresivamente por
Keywords: QSAR, endocrine disruptor, TTR, aromatase, androgen otras alternativas más seguras.
receptor, hormone.
Junto a la creciente llamada de atención en torno a la disrupción
Introducción endocrina en la década de los 90, la Organización Mundial de la Salud
Desde mediados del siglo XX, la capacidad de ciertos compuestos (OMS) y la Organización para la Cooperación y el Desarrollo
químicos de irrumpir en el organismo y causar modificaciones en las Económicos (OECD) publicaron numerosas directivas en pro de reducir
la experimentación animal en la investigación científica. Se
intensificaría así el ya notable interés en la aplicación de métodos
*e-mail: rgozalbes@protosar.com alternativos al uso de animales, y entre ellos los estudios

55

sergas.es
 Goya-Jorge E, de Julián-Ortiz JV, Gozalbes R.
computacionales o modelación “QSAR” (del inglés Quantitative aminas. Algunas de las principales hormonas humanas y las glándulas
Structure-Activity Relationships). endocrinas donde son secretadas se muestran en la Figura 1.
Actualmente, el desarrollo de métodos QSAR continúa siendo una La complejidad del sistema endocrino queda evidenciada en la
temática de creciente impacto en el campo toxicológico y diversidad estructural y funcional de las moléculas hormonales
farmacológico (Gozalbes et al., 2015; Lin et al., 2020). La aplicación representada en la Figura 1 (Leblebicioglu et al., 2013). Existen
de esta metodología para la predicción de la toxicidad endocrina hormonas de naturaleza puramente hidrofóbica como es el caso de las
causada por compuestos químicos a través de la enzima aromatasa, la esteroidales que derivan del lípido colesterol y entre las cuales se
proteína transportadora transtiretina y el receptor de andrógenos será encuentran las asociadas con la reproducción como el estradiol, la
objeto de revisión en este artículo. progesterona y la testosterona. Sin embargo, hormonas
peptídicas/proteicas como la insulina secretada en el páncreas o la
El estudio que se presenta fue desarrollado en el contexto del proyecto calcitonina en las glándulas tiroideas, están formadas por múltiples
europeo H2020- PROTECTED: “Protection against endocrine cadenas de aminoácidos que le atribuyen propiedades hidrofílicas. Las
disruptors; detection, mixtures and health effects, risk assessment and hormonas de tipo aminas contienen representantes hidrofílicos como la
communication” (http://protected.eu.com/) que tiene como objetivo serotonina o la dopamina y otros lipofílicos como la tiroxina (Soto et
integrar diversos métodos de evaluación de la toxicidad endocrina de al., 2009).
compuestos y mezclas químicas, así como promover la conciencia
social de los riesgos que supone la disrupción endocrina. 2.1.2. La actividad hormonal
Panorama conceptual y teórico La secreción o síntesis de hormonas es un proceso que implica múltiples
tejidos debido a las variadas funciones que tienen estas moléculas en el
2.1. El sistema endocrino y su disrupción organismo. En el caso de las hormonas esteroideas, los mecanismos
2.1.1. Las hormonas enzimáticos involucrados se agrupan como: enzimas específicas del
citocromo P450 (CYPs), hidroxiesteroide-deshidrogenasas (HSDs) y
Las hormonas son mensajeros químicos que se encargan de regular y esteroide reductasas (Miller WL, 1988). Un ejemplo característico es la
coordinar las funciones metabólicas principales, el crecimiento y el enzima P450 aromatasa (CYP19A1), la única capaz de catalizar en
desarrollo de diferentes poblaciones de células en un organismo. No vertebrados la reacción de aromatización que transforma andrógenos en
existe ningún órgano o sistema en el cuerpo humano fuera del control estrógenos (Sanderson, J.T., 2006). Otra enzima importante es la
de una o varias rutas del sistema hormonal, más conocido como sistema hemoproteína transmembrana glicosilada tiroperoxidasa (TPO), que
endocrino (Tata, 2017). De acuerdo con su estructura química, las desempeña un papel crucial en la síntesis de hormonas tiroideas (Yen,
hormonas se clasifican en tres grupos: péptidos/proteínas, esteroides y 2001).

Figura 1: Diagrama de las clases químicas de hormonas y algunos ejemplos de las glándulas endocrinas que las secretan.

56 Rev. Toxicol (2020) 37: 55 - 68

 Revisión de los modelos computacionales que relacionan la estructura química con la disrupción del sistema endocrino
El proceso de señalización endocrina involucra a un gran número de La toxicidad sobre el sistema endocrino puede ser causada por la
receptores y rutas celulares. Un grupo importante es la superfamilia de alteración de la síntesis y secreción de hormonas, afectando por ejemplo
receptores nucleares (NR), reguladores de la transcripción y activados la aromatasa P450 o inhibiendo la TPO. Diferentes compuestos
por ligandos endógenos y exógenos. Estos receptores suelen compartir químicos son capaces de causar también modificaciones en la
patrones de organización estructural que incluyen un dominio N- biodisponibilidad y en la unión a proteínas trasportadoras como las
terminal variable, uno central de unión al ADN y uno C-terminal al globulinas de enlace a hormonas sexuales (SHBG), las de
cual se unen ligandos como las hormonas, pero también corticosteroides (CBG) y la transtiretina (TTR) (Cheek et al., 1999;
prostaglandinas, ciertas vitaminas y ácidos grasos (McEwan, 2016). Hong et al., 2015). Además, han sido descritos otros mecanismos de
Están relacionados con diversas funciones fisiológicas en los metazoos disrupción del metabolismo y la excreción de hormonas.
que van desde el crecimiento, desarrollo y reproducción hasta el
metabolismo y la homeostasia. Algunos de los receptores nucleares Por otro lado, los elementos que regulan la activación o desactivación
más conocidos son el receptor de estrógenos (ESR), el receptor de no fisiológica de rutas hormonales dependen, entre otros factores, de la
andrógenos (AR), y los receptores de hormonas tiroideas (TR). Son capacidad de respuesta de las distintas células y tejidos, lo que a su vez
estos receptores también la diana de múltiples xenobióticos que, está condicionado por la afinidad hacia el receptor, el número de
mimetizando o antagonizando el efecto de las hormonas, interrumpen receptores disponibles, la concentración hormonal y la presencia de
la homeostasia endocrina causando diversas consecuencias tóxicas cofactores que puedan favorecer o reprimir sus efectos. Los perfiles de
(Balaguer et al., 2019). El ESR tiene como ligando endógeno la expresión de los receptores suelen variar también durante el desarrollo,
hormona 17β-estradiol (E2). Existen dos subtipos (ESRα y ESRβ), y una hormona es capaz de cumplir diferentes roles en un momento u
ambos con un papel importante en la fisiología humana. Sin embargo, otro del crecimiento. Los múltiples elementos involucrados complican
sus efectos pueden llegar a ser antagónicos en muchos casos. Con el por tanto el estudio de las acciones celulares de las hormonas, así como
descubrimiento de ESRβ se reveló que las funciones estrogénicas no se el perfil toxicológico de los compuestos que interfieren con los
limitaban a la reproducción femenina, sino que tenían relación con mecanismos endocrinos (Vandenberg et al., 2013).
muchos otros órganos y sistemas en ambos sexos (McEwan, 2016; Durante décadas de estudio e investigación, diversos compuestos han
Tata, 2017). Por otro lado, la activación del AR está ligada a las demostrado tener capacidad para alterar el sistema endocrino
hormonas androgénicas testosterona y 5α-dihidrotestosterona (5α- ocasionando numerosas consecuencias fisiológicas. Sin embargo, no
DHT). Fisiológicamente el AR es el responsable de la diferenciación existe una definición universalmente aceptada por las entidades
sexual masculina, desde el útero, hasta los cambios que acontecen en científicas y regulatorias para los llamados “interruptores endocrinos”.
la pubertad. En el hombre adulto sus efectos han sido relacionados con La principal limitación consiste en la dificultad de integrar en un único
la masa y la fuerza muscular (Leblebicioglu et al., 2013). Por último, concepto la diversidad estructural, los mecanismos de acción y los
los receptores tiroideos se pueden encontrar expresados a partir de dos escenarios de exposición asociados con la toxicidad endocrina (Schug
genes independientes (α y β), y cada gen tiene a su vez 2 isoformas del et al., 2016).
receptor. Intervienen entre otras funciones en el crecimiento, el
desarrollo y la regulación del metabolismo (Little, 2016). Así por ejemplo, la Comisión Europea asume la definición establecida
por la OMS en el informe emitido por el Programa Internacional de
2.1.3. La disrupción endocrina Seguridad Química de 2002 según la cual un interruptor endocrino es
La acción sobre receptores nucleares, como se ha mencionado “una sustancia o mezcla exógena que altera la(s) función(es) del sistema
anteriormente, está entre los mecanismos más comunes por los cuales endocrino, causando consecuentemente efectos adversos para la salud
sustancias de todo tipo pueden alterar el efecto de las hormonas en un organismo, su progenie o (sub)poblaciones” (WHO, 2002). Sin
(Balaguer et al., 2019). Sin embargo, muchas otras rutas de embargo, la Endocrine Society de los Estados Unidos, acordó en 2012
interrupción del sistema endocrino han sido identificadas a definir los alteradores endocrinos como aquellos “compuestos químicos
consecuencia de la acción de entidades químicas (WHO/UNEP, 2013). exógenos o mezclas que pueden interferir con cualquier aspecto de la
Los más importantes se representan en la Figura 2. acción hormonal” (Thomas Zoeller et al., 2012). La inclusión pues, de
los efectos adversos a la hora de considerar un compuesto como
interruptor endocrino ha abierto una brecha entre ambos conceptos, lo
que se traduce en significativas diferencias en el número de sustancias
a considerar según una u otra definición.
La falta de coherencia en este sentido no ha impedido que los términos
como disrupción, interruptores o alteración endocrina se empleen
alegando indistintamente cualquiera de los conceptos. Los interruptores
endocrinos se han asumido globalmente como compuestos cuya
determinación permite establecer parámetros o criterios de toxicidad
relativos a las alteraciones que, por múltiples mecanismos, pueden
desencadenar diversos agentes químicos sobre las rutas hormonales. Se
obvia, por tanto, en muchos casos la definición establecida por la OMS,
y se reportan ensayos, mediciones, determinaciones o modelos de
disrupción endocrina en los cuales no se demuestra que el efecto sobre
el organismo, su progenie o (sub)poblaciones sea adverso, sino que
pueda ser considerado, simplemente, un efecto potencial. Existe, claro
está, una necesidad de aunar esfuerzos para sistematizar la definición de
los compuestos que deberían considerarse interruptores endocrinos, de
manera que su estudio pueda ser abordado en distintos contextos sin
generar contradicción.
2.2. Generalidades de la modelación QSAR
La información toxicológica es cada vez más específica y amplia debido
a los esfuerzos internacionales de proveer datos científicos para regular
Figura 2: Principales mecanismos de disrupción del sistema endocrino causado por
agentes químicos. las sustancias químicas y garantizar la salud de las personas y del
medioambiente. Sin embargo, persisten limitaciones y lagunas de

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información. En el caso de la toxicidad endocrina, aun cuando algunos compuestos se convirtió por tanto en elemento crucial. Esta
mecanismos han sido dilucidados, existen otros en los cuales el parametrización cuantitativa o descripción de las moléculas no es más
volumen de información es escaso o que las mediciones experimentales que “el resultado final de un procedimiento matemático y lógico que
son objeto de controversia (Delgado et al., 2012). trasforma la información química codificada en la representación
simbólica, en un número útil o el resultado de algún experimento
Los métodos alternativos a la experimentación animal son estandarizado” (Todeschini and Consonni, 2009).
particularmente importantes en el campo toxicológico donde han
ganado una marcada aceptación. Dentro de las múltiples ventajas que Derivados del análisis de un gran número de teorías, se han definido
ofrecen destacan el ahorro de tiempo y recursos. Además, la capacidad miles de descriptores moleculares. El contenido de información en sus
predictiva de los modelos in vitro e in silico se ha ido perfeccionando definiciones ha avanzado también junto al surgimiento de nuevas
durante décadas, llegando a sustituir hoy día a la experimentación herramientas estadísticas para el análisis de datos. En general es posible
animal en la industria cosmética europea y en gran parte de los estudios identificar dos clases de descriptores, los basados en medidas
de toxicidad ocular y cutánea de sustancias (de Ávila et al., 2019; experimentales (ej. polarizabilidad, log P, refractividad molar), y los
Tourneix et al., 2020). derivados de la representación simbólica de las moléculas, también
conocidos como descriptores teóricos. A su vez, los descriptores
2.2.1. Conceptualización teóricos se clasifican en descriptores de 0-5D dependiendo de la
En el caso de los métodos computacionales, destacan los estudios información estructural que contienen. En los descriptores 0D no se
basados en la relación existente entre la estructura química de los considera la estructura molecular, únicamente la fórmula química de los
compuestos y la actividad/propiedad objeto de interés. Difundidos compuestos (ej. peso atómico, número de átomos). Los descriptores 1D
como QSAR/QSPR (de sus siglas en inglés: Quantitative Structure- son listas de fragmentos estructurales de las moléculas, pero sin
Activity Relationships/Quantitative Structure-Property Relationships), considerar la estructura molecular en su conjunto (ej. conteo de grupos
esta metodología de modelación quimioinformática fue introducida funcionales o de sustituyentes de interés). Los descriptores 2D (o
hace más de medio siglo en la práctica farmacéutica y toxicológica, con topológicos), ponderan los átomos con propiedades como la
utilidad además en la agroquímica y la química medioambiental. Su electronegatividad o el volumen y consideran la conectividad, así como
aplicabilidad se refleja en los múltiples trabajos científicos publicados las interacciones intra/intermoleculares. Los descriptores 3D (o
que, como se representa en la Figura 3, superan los ochocientos anuales geométricos) permiten la consideración de elementos estereoquímicas
en la última década. de los átomos, mientras que los 4D incluyen además información de
campos de interacción como es el caso de las relaciones con los sitios
activos de los receptores. Por último, la descripción 5D estima también
elementos estereodinámicos en la parametrización de la estructura
química de las moléculas (Sahoo et al., 2016).
2.2.2. Sistemática en la modelación QSAR
El desarrollo de modelos QSAR se encuentra en crecimiento y
actualización continuos (Cherkasov et al., 2014). Sin embargo, siete
pasos comunes rigen su sistemática (Figura 4).
El primer paso en un estudio QSAR, como se muestra en la secuencia
de la Figura 4, es la formulación del problema. Es importante desde el
comienzo del estudio determinar el objeto de análisis y el nivel de
información requerido. Además, se agrupará el mayor volumen posible
de información relevante para la construcción de bases de datos amplias
o específicas de acuerdo con el interés del trabajo. Seguidamente, se
procederá a la parametrización cuantitativa de las estructuras químicas
Figura 3: Línea temporal que representa el conteo de publicaciones científicas contenidas en la base de datos, empleando para ello la clase de
asociadas con el término MeSH: quantitative structure-activity relationship en la base descriptores moleculares que se estime oportuna. La selección de
de datos PubMed
variables permite escoger aquéllas estadísticamente relevantes a través
Los modelos QSAR asumen que las características y propiedades de de técnicas como la de pasos sucesivos (SW). Es posible también
las moléculas, tanto estéricas, geométricas como electrónicas, emplear técnicas de agrupamiento como el análisis de componentes
determinan finalmente su comportamiento en diversos ambientes principales (PCA) para generar nuevos descriptores que contengan
biológicos, así como las propiedades fisicoquímicas atribuibles a las mayor volumen de información.
mismas. Es de esta forma que los tres elementos fundamentales de un La medición de la propiedad de interés suele requerir estrategias de
estudio QSAR/QSPR son: el concepto de estructura molecular, la “pretratamiento” de los datos, necesario para garantizar la
definición de descriptores moleculares y la determinación estadística homogeneidad de la variable respuesta a modelar, dado
de la relación existente entre la una y la otra. fundamentalmente el hecho de que a menudo el origen de dichos datos
El concepto de estructura molecular fue un importante aporte de la es muy diverso (diferentes fuentes de información, técnicas de medición
ciencia de finales del siglo XIX, mientras que la Teoría de Crum- experimental, etc.). La selección del tipo de modelo QSAR es un paso
Brown sería el primer sistema de representación gráfica de compuestos crucial, y dependerá tanto de la variable respuesta como del conjunto de
químicos, preludio de los que hoy se conocen como descriptores datos en su totalidad. Según la propiedad o actividad analizada, se
moleculares. Crum-Brown and Fraser introducirían en esa época la identifican globalmente dos tipos de modelos, los de regresión, cuando
llamada “primera formulación de las relaciones cuantitativas la variable respuesta es cuantitativa, y los de clasificación, cuando se
estructura-actividad” en la que propusieron que la actividad biológica modelan categorías o clases (Dudek et al., 2006). En ambos tipos de
(Φ) es una función que depende de la constitución química (C), de QSARs, la dependencia estadística con los datos estructurales puede o
modo que Φ = f(C). Por tanto, variaciones en una (∆C) se reflejan en no ser lineal.
la otra (∆Φ) (Brown and Fraser, 1868). Los métodos estadísticos lineales más comunes para relacionar la
Transformar la estructura molecular en parámetros que estructura con la actividad de los compuestos químicos son el análisis
matemáticamente pudieran ser relacionados con las mediciones discriminante lineal (LDA) para los datos categóricos y la regresión
experimentales de efectos o con las propiedades fisicoquímicas de los lineal múltiple (MLR) para los datos cuantitativos. También es muy

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 Revisión de los modelos computacionales que relacionan la estructura química con la disrupción del sistema endocrino

Figura 4: Representación de los siete pasos generales de la modelación QSAR.

empleado el método de mínimos cuadrados parciales (PLS) basado en estéricas y electrostáticas de interacción (Cramer et al., 1988), mientras
la factorización de las variables independientes (descriptores). En los que CoMSIA calcula las energías de interacción entre los átomos
modelos PLS se proyectan los descriptores y la variable respuesta en introduciendo una función gaussiana. Por lo general, ambos métodos
un nuevo espacio y, aunque su aplicación más común es en el análisis producen un elevado número de parámetros numéricos que caracterizan
de regresión, se ha combinado con el análisis de discriminante (PLS- las moléculas y que suelen ser agrupados y luego modelados junto a la
DA) para modelar categorías binarias. variable respuesta empleando PLS.
Las funciones genéticas de aproximación (GFA) son métodos también Durante la modelación, es común la división del conjunto de datos en
muy empleados en la construcción de modelos QSAR/QSPR. series más pequeñas que son empleadas para el entrenamiento y para la
Inspirados en teorías evolutivas y adaptativas, los GFAs son capaces evaluación de la capacidad predictiva de los modelos QSAR. El diseño
de generar múltiples modelos de forma eficiente analizando grandes estadístico de estos subconjuntos de entrenamiento y de predicción
volúmenes de datos. Se han combinado también con los modelos PLS puede ser aleatorio o empleando técnicas multivariantes de
(G/PLS) aprovechando las ventajas de uno y otro (Rogers, 1999). De reconocimiento de patrones para garantizar la distribución racional del
igual forma, otras funciones que permiten la transformación de los conjunto de datos. En cualquier caso, resulta imprescindible aplicar
datos como es la basada en el método de Kernel se han acoplado con procedimientos de validación para garantizar que los modelos son
PLS (KPLS) en el desarrollo de modelos QSAR. En el caso de la capaces de generar predicciones confiables, como se detalla a
clasificación, la técnica de reconocimiento de patrones k-vecinos más continuación. Por último, la modelación QSAR suele concluirse con la
cercanos (k-NN) ha demostrado una marcada utilidad en la modelación interpretación mecanicista y que generalmente está basada en el análisis
quimioinformática. de los descriptores moleculares empleados. La mayor aplicabilidad de
un modelo predictivo basado en QSAR será en el cribado virtual de
Los métodos predictivos no lineales más comunes y que se emplean compuestos químicos que no han sido estudiados anteriormente.
para modelar todo tipo de variables en el análisis QSAR, son los
algoritmos de aprendizaje automático (“machine learning”). Dentro de 2.2.3. Principios de validación definidos por la OECD
ellos son muy conocidos los árboles de decisión (DT), que en función
de la variable de destino serán árboles de clasificación o de regresión. El proceso de validación de un modelo QSAR demanda la obtención de
Además, por su elevada capacidad predictiva algoritmos como las pruebas estadísticas que demuestren que el método desarrollado es lo
máquinas de soporte vectorial (SVM) y las redes neuronales artificiales suficientemente fiable y reproducible en la generación de los resultados
(ANN) son frecuentemente utilizados tanto para problemas de previstos. El espacio químico en el cual un modelo QSAR es capaz de
regresión y como de clasificación. generar predicciones fiables se conoce como dominio de aplicación
(Cherkasov et al., 2014; Tropsha et al., 2003). Con el objetivo de
Vale la pena mencionar además dos tipos de metodologías que, por su estandarizar el desarrollo de los modelos QSAR, la OECD agrupa el
amplia aplicabilidad en el descubrimiento de fármacos, se encuentran proceso de validación en una serie de principios regulatorios (OECD,
entre las más renombradas en el campo de modelación QSAR. Éstas 2014), representados en la Figura 5 a continuación.
son el análisis comparativo de campo molecular (CoMFA) y el análisis
comparativo de índices de similitud molecular (CoMSIA). Los El primer principio de la regulación que establece la OECD, se refiere
métodos CoMFA y CoMSIA son análisis 3D-QSAR con la a definir adecuadamente las variables a modelar (propiedades
particularidad del tipo de descriptores moleculares que se emplean para fisicoquímicas, efectos biológicos o medioambientales). De esta forma,
definir las estructuras químicas. CoMFA emplea los campos se pretende asegurar la transparencia en la determinación de los
potenciales de Lennard-Jones y Coulomb para calcular las energías parámetros a modelar, ya que pueden haberse obtenido a través de

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 Goya-Jorge E, de Julián-Ortiz JV, Gozalbes R.
diferentes protocolos experimentales, o bajo distintas condiciones. La Es así como el modelado QSAR, como importante método alternativo
falta de homogeneidad en los datos puede acarrear consecuencias en el a la experimentación animal es aprobado, bajo determinadas directrices,
desarrollo de los modelos y errores en las predicciones, de ahí la por entidades científicas y regulatorias. Su aplicación ha sido propuesta
importancia que tiene definir el punto de medición. En el segundo para la identificación de múltiples actividades toxicológicas que incluye
principio se establece que los algoritmos empleados no sean ambiguos, a la disrupción endocrina. A continuación, se expone una revisión de
tanto aquellos que definen los descriptores moleculares como los que los principales modelos QSAR disponibles para tres importantes
se emplean en la construcción de las series y los propios modelos mecanismos de disrupción endocrina.
estadísticos de QSAR. El establecimiento del dominio de aplicabilidad
es un elemento fundamental, que como tercer principio supone la La disrupción endocrina a través de métodos QSAR:
declaración de un espacio de confiabilidad en el cual los modelos selección de casos de estudio
desarrollados son capaces de generar predicciones acertadas con una El desarrollo de modelos QSAR depende de la información disponible,
alta probabilidad. La validación propiamente dicha es el cuarto ya que sus inferencias se basan en la extrapolación de los datos
principio, referido a que todo modelo QSAR debe presentar una existentes para predecir la actividad de compuestos no testeados. Esta
adecuada bondad de ajuste, robustez y predictividad, sustentado por es la razón por la cual el mayor número de estudios QSAR en el
criterios estadísticos que demuestren el desempeño del modelo contexto de la disrupción endocrina se basa en el mecanismo más
(validación interna), y su capacidad para predecir (validación externa). abordado, la acción de compuestos químicos como moduladores de los
Por último, aun cuando es recomendable, el quinto principio está sujeto receptores estrogénicos.
a las particularidades de cada tipo de modelo QSAR. En este paso final
de control y retroalimentación se sugiere, cuando sea posible, En esta revisión se han querido compendiar, debido a su importancia,
interpretación mecanicista o teórica, que suele implicar el análisis de métodos QSAR recientes de otros mecanismos de interrupción del
los descriptores más significativos empleados en la modelación sistema endocrino. Como se encuentra esquematizado en la Figura 6,
(Tropsha, 2010). los tres ejemplos seleccionados representan las principales rutas

Figura 5: Principios establecidos por la OECD para la validación de los modelos QSAR.

Figura 6: Mecanismos de disrupción endocrina seleccionados para el análisis de los modelos QSAR reportados en la literatura.

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 Revisión de los modelos computacionales que relacionan la estructura química con la disrupción del sistema endocrino
potenciales de toxicidad endocrina y en el contexto de hormonas en particular de los estudios QSAR, es el cribado virtual de grandes
estrogénicas, tiroideas y androgénicas, indistintamente. bases de datos de compuestos con la finalidad de encontrar los llamados
“compuestos líderes” de la actividad modelada. Esta utilidad,
En el primer mecanismo objeto de estudio, relacionado con la particularmente ventajosa en el contexto farmacológico, ha sido
interrupción de la biosíntesis de estrógenos, se analizan los modelos aprovechada por varios estudios de predicción de los efectos de
QSAR desarrollados para predecir la inhibición de la enzima citocromo compuestos químicos sobre la enzima aromatasa.
P450 aromatasa. Compitiendo con las hormonas tiroideas, la unión de
compuestos químicos a la proteína transportadora transtiretina, o la Dawood et al. cribaron 1 720 constituyentes fitoquímicos presentes en
interrupción de este mecanismo de transporte hormonal es la segunda 29 plantas medicinales y otros productos naturales usados en la
ruta potencial de disrupción endocrina abordada. Por último, se medicina tradicional egipcia. La disrupción endocrina y/o el potencial
analizan los más recientes métodos QSAR enfocados en la modulación, terapéutico de estos compuestos naturales mediada por la inhibición de
y especialmente el antagonismo sobre el receptor de andrógenos. la enzima aromatasa, fue predicha de esta forma empleando modelos
QSAR (Dawood et al., 2018). En el trabajo de Xie et al., el cribado
3.1 Estudios QSAR basados en los efectos sobre la enzima virtual de la “NCI2000 database” lo desarrollaron con los modelos
aromatasa farmacofóricos previamente y la actividad inhibitoria de los seis
La interrupción de las rutas biosintéticas de hormonas es un mecanismo compuestos identificados fue predicha a través de los modelos 3D-
potencial de disrupción endocrina. Sin embargo, la información QSAR diseñados (Xie et al., 2014). Barigye et al. cribaron 1 593
químico-biológica disponible hoy día procede en su mayoría de compuestos y realizaron la validación experimental in vitro de 10
estudios farmacológicos (Mori et al., 2018). La principal aplicación sustancias predichas como inhibidores activos de la aromatasa según el
terapéutica de la inhibición de la enzima P450 aromatasa ha sido en consenso mayoritario de los modelos que propusieron. Esta última
enfermedades neoplásicas asociadas a la producción de estrógenos constituye la más rigurosa validación del poder predictivo de los
como es el caso del cáncer de mama (Adhikari et al., 2017b). modelos QSAR, conocida como validación experimental prospectiva
(Barigye et al., 2018).
Diversos estudios QSAR han pretendido dilucidar la relación entre los
rasgos químico-estructurales y los efectos inhibidores de los Finalmente, vale la pena señalar, que no solo la inhibición de la enzima
compuestos sobre la CYP19A1. Los más significativos publicados en aromatasa ha sido considerada variable respuesta en el estudio de la
la última década se encuentran resumidos en la Tabla 1 a continuación. disrupción endocrina por este mecanismo. La habilidad de actuar como
ligandos de la enzima, y que no implica información acerca de sus
De la modelación QSAR reportada entre 2010-2020 en la literatura efectos agonistas/antagonistas ha sido también recomendada en el
basada en la inhibición de la enzima aromatasa y representada en los análisis toxicológico. Como ejemplo representativo, Du H et al.
37 ejemplos de la Tabla 1, destacan los siguientes elementos: modelaron la capacidad de enlace a la aromatasa de 1 552 compuestos
diversos obteniendo una elevada robustez y predictividad en los
1. Los modelos lineales, particularmente la regresión lineal múltiple
modelos QSAR resultantes (Du et al., 2017). Estas estimaciones son
o el método de mínimos cuadrados parciales, son las metodologías
importantes en las fases preliminares de priorización de compuestos, así
estadísticas preferidas en el estudio QSAR de la inhibición de la
como en el análisis de los riesgos potenciales. Sin embargo, modelos
enzima aromatasa, probablemente por su simplicidad e
que logren predecir el efecto consecuente de la interacción con la
interpretabilidad.
enzima aportan una información mucho más relevante desde el punto
2. Se ha apostado por la alta capacidad predictiva de los métodos de de vista biológico.
aprendizaje automático como redes neuronales o máquinas de
soporte vectorial tanto en problemas de regresión como en
3.2 Estudios QSAR basados en los efectos sobre la transtiretina
problemas de clasificación. Varios modelos QSAR han pretendido dilucidar la relación entre
xenobióticos, fundamentalmente contaminantes ambientales, y la
3. Aun cuando la mayoría de los modelos han llevado a cabo la
validación interna, muchos no fueron validados con el uso de proteína transtiretina, encargada del transporte de la hormona tiroidea.
series externas o con metodologías de 5 o 10-folds como es Los modelos de regresión en su mayoría están basados en porcentajes
recomendado para garantizar la confiabilidad y capacidad de inhibición de la unión transtiretina-tiroxina, o valores de IC50 para
los compuestos objeto de análisis. Mientras tanto los estudios
predictiva.
categóricos suelen basarse en resultados de ensayos de potencia
4. En la mayoría de los modelos disponibles, los descriptores competitiva con la hormona, asignando dos o más clases a estos efectos
moleculares empleados son conocidos y fácilmente interpretables. (ej. activo/inactivo o bajo/moderado/alto) (Kar et al., 2017). En la Tabla
2 se encuentran resumidos los principales modelos QSAR de disrupción
5. Metodologías innovadoras en la parametrización de las del mecanismo de transporte de la hormona tiroxina.
estructuras han sido propuestas como el análisis multivariante de
imágenes empleando la transformada discreta bidimensional de Algunos elementos destacables en la modelación QSAR de la
Fourier o descriptores derivados de hipótesis toxicofóricas. disrupción de la TTR son:
6. Aun cuando la complejidad y el volumen de los datos ha ido en 1. La mayor parte de los compuestos cuya evaluación experimental
aumento, el uso de bases de datos de congéneres con limitado se encuentra disponible para la modelación son sustancias que, por
dominio de aplicabilidad sigue siendo habitual. Especies químicas otros mecanismos, han sido sugeridas como potenciales
como flavonoides, cumarinas, benzimidazoles, bis-sulfonamidas, interruptores endocrinos, ej. poli y perfluorocarbonos (PFCs) y los
naftoquinonas y arilsulfonamidas han sido modeladas con sus polibromodifenil éteres (PBDEs).
respectivos derivados estructurales cercanos en series que no
sobrepasan los 60 compuestos químicos. 2. Descriptores interpretables han sido empleados en todos los
trabajos con la finalidad de dilucidar su relación con la disrupción
7. Hasta el momento, la base de datos más diversa reportada en la de la transtiretina.
inhibición de la enzima aromatasa cuenta con 973 compuestos, e
incluye esteroides y estructuras no esteroidales. Modelos de 3. El escaso volumen de información disponible para este mecanismo
regresión y de clasificación han sido diseñados a partir de esta conlleva a que la regresión lineal, especialmente el método de PLS
base de datos y estrictamente validados para la predicción de y la clasificación basada en k-vecinos más cercanos (técnicas
nuevas entidades con actividad desconocida. además muy interpretables), sean las metodologías estadísticas
más comúnmente empleadas.
Una de las principales aplicaciones de los modelos computacionales, y

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 Goya-Jorge E, de Julián-Ortiz JV, Gozalbes R.

Tabla 1. Modelos QSAR de compuestos inhibidores de la aromatasa.

n.º Base de Datos a Descriptores b Método QSAR Validación c Ref.

Algunos de los siguientes:
3 modelos GFA R =0.68-0.71, Q2int=0.64-0.69,
2
Jurs_FNSA_3+0.063, NCOSV,
(regresión) Q2ext=0.62-0.67
Hbondacceptor-
1 116 compuestos diversos (Roy and Roy, 2010)
2, 4.134-AlogP,
G/PLS
Jurs_PNSA_3+34.086, AlogP-4.273, R2=0.69, Q2int=0.63, Q2ext=0.63
(regresión)
Jurs_FNSA_1-0.414, Chiralcenters.
2 modelos
Parámetros energéticos y electrónicos R2=0.82-0.87, Q2int=0.63-0.79,
2 57 flavonoides SW-MLR (Narayana et al., 2012)
del enlace ligando-receptor Q2ext=0.81-0.83
(regresión)
Acc=71.67 %
3 280 esteroides Sn=0.76
MW, RBN, nCIC, Qm, nHDon, nHAcc,
Sp=0.67 (Nantasenamat et al.,
TPSA, HOMO, LUMO, LogP, Energy, DT (clasificación)
Acc=76.79 % 2013a)
HOMO-LUMO gap, dipole moment
4 690 no-esteroides Sn=0.58
Sp=0.82
MLR R2=0.81, Q2int=0.76,
5
(regresión) Q2ext=0.65
-Número de anillos
47 triazoles ANN R2=0.82, Q2int=0.76, (Nantasenamat et al.,
6 -ALogP
(análogos del letrozol) (regresión) Q2ext=0.65 2013b)
-HOMO-LUMO
SVM R2=0.88, Q2int=0.83,
7
(regresión) Q2ext=0.66
E_ADJ_equ, SC_1, CIC, Jurs_TASA, GFA-PLS
8 12 benzimidazoles R2=0.99, Q2int=0.96 (Dai et al., 2014)
Shadow_XZ (regresión)
n=31
MLR
9 Algunos o todos los descriptores R2=0.99, Q2int=0.99,
(regresión)
siguientes: Q2ext=0.99
-RBN n=30
ANN
10 -nCIC R2=0.99, Q2int=0.98,
(regresión)
-nHDon Q2ext=0.99 (Nantasenamat et al.,
44 flavonoides
-nHAcc n=33 2014)
SVM
11 -ALogP R2=0.99, Q2int=0.98,
(regresión)
-Energy Q2ext=0.98
-Dipole moment n=26
DT
12 Acc=84.62%
(clasificación)
Sn=0.85
Método R2=0.63–0.71
(Worachartcheewan et
13 973 compuestos diversos Descriptores basados en SMILES Monte Carlo Q2int=0.62–0.70
al., 2014a)
(regresión) Q2ext=0.61-0.66
R2=0.96
F10[N-O], MAXDP BELe1, Inflammat- MLR (Worachartcheewan et
14 34 cumarinas disustituidas Q2int=0.92
50, B10[C-O], H-047, Psychotic-80. (regresión) al., 2014b)
Q2ext=0.73
R2=0.99
PLS c=10
15 descriptores CoMFA Q2int=0.66
(regresión)
Q2ext=0.64
66 esteroides (Xie et al., 2014)
R2=0.99
PLS c=17
16 descriptores CoMSIA Q2int=0.60
(regresión)
Q2ext=0.84
PLS c=6 R2=0.92, Q2int=0.83,
17 45 flavonoides Descriptores CoMFA (Awasthi et al., 2015)
(regresión) Q2ext=0.71
Acc=80.83 ± 0.71%
180 Sn=0.88±0.02
18
esteroides C-025, ESpm13r, ESpm14u, ESpm10r, Sp=0.75±0.03
Efficient linear
ESpm12x, ESpm15d, Spm10x, H-050, MCC=0.63±0.01 (Shoombuatong et al.,
method (ELM)
nBM, MATS6p, MATS6e, GATS6m, 2015)
(clasificación) Acc=80.76± %0.33
GATS6p, piPC07, GGI1
474 diversos Sn=0.83±0.01
19
(no esteroides) Sp=0.73±0.01
MCC=0.54±0.01
R2=0.99
CoMFA PLS c=7
20 Q2int=0.74
(modelo farmacofórico) (regresión)
84 diversos Q2ext=0.63
(Xie et al., 2015)
(no esteroides) R2=0.93
CoMSIA PLS c=6
21 Q2int=0.71
(modelo farmacofórico) (regresión)
Q2ext=0.67
76 compuestos: R2=0.83
-diarilalquilimidazoles nTB, BEHv2, ATS3m, ATS7m, nCp, MLR R2pred=0.70 (Ghodsi and
22
-diarilalquiltriazoles G(N…N), Hyd.E, G(O…O), SRW07 (regresión) Q2ext=0.91 Hemmateenejad, 2016)
R2=0.90
SW-MLR
23 SaaN, JGI7, MATS8c, CLogP, CMR Q2int=0.86
(regresión)
Q2ext=0.85
R2=0.87
“fingerprints” moleculares PLS c=6 Q2int=0.76
24
(hologramas) (regresión) Q2ext=0.61
67 no esteroides (análogos del
(Adhikari et al., 2017a)
letrozol) Acc=88.0%
Model bayesiano
25 Fragmentos Subestructurales Sen=0.89
(clasificación)
Spe=0.88
R2=0.94
PLS c=7
26 descriptores CoMFA Q2int=0.54
(regresión)
Q2ext=0.62
11 compuestos R2=1.00 (Prachayasittikul et al.,
27 Mor04m, H8m, Mor08e, G1v, SIC2 MLR
(1,4-naftoquinonas) Q2int=0.98 2017)

62 Rev. Toxicol (2020) 37: 55 - 68

 Revisión de los modelos computacionales que relacionan la estructura química con la disrupción del sistema endocrino

Acc=88.74%
ANN
28 Sn=0.86
(clasificación)
Sp=0.91
Acc=84.23%
LDA
29 Sn=0.72
(clasificación)
Sp=0.95
Descriptores basados en el análisis
Acc=85.14%
multivariado de imágenes (MIA) SVM
30 973 compuestos diversos Sn=0.76 (Barigye et al., 2018)
empleando la transformada discreta (clasificación)
Sp=0.93
bidimensional de Fourier (2D-DFT)
Acc=84.68%
BT
31 Sn=0.81
(clasificación)
Sp=0.88
Acc=85.59%
kNN
32 Sn=0.82
(clasificación)
Sp=0.88
R2=1.00
PLS c=3
33 16 esteroides Q2int=0.49
Descriptores derivados de hipótesis (regresión)
Q2ext=0.21
farmacofóricas (Dawood et al., 2018)
R2=1.00
34 (PHASE) PLS c=5
25 no esteroides Q2int=0.34
(regresión)
Q2ext=0.09
35 MLR R2=0.80 (Leechaisit et al., 2019)
17 bis-sulfonamidas GATS6v, Mor03m
(regresión) Q2int=0.68

aLogP, HBA, HBD, RB, HAC, RC, MLR R2=0.83 (Fantacuzzi et al.,
36 30 arilsulfonamidas
PSA, E-state, MR, Polar (regresión) Q2int=0.76 2020)
a
Número de compuestos usados en la modelación (incluyendo series de entrenamiento y de validación)
b
Descriptores que se incluyeron en los modelos finales. Para más detalles, se recomienda consultar las referencias de cada modelo o el Handbook (Todeschini and Consonni, 2000)
c
En modelos de regresión: el coeficiente de correlación (R 2), el coeficiente de validación interna (generalmente resultantes de la validación cruzada) (Q2int) y el de validación externa
(Q2ext). En modelos de clasificación, solamente se muestran los resultados de la validación con la serie de predicción a través de la exactitud (Acc), sensibilidad (Sn), especificidad (Sp)
y el coeficiente de correlación de Matthews (MCC).

Tabla 2. Modelos QSAR de compuestos moduladores de la transtiretina.

n.º Base de Datos a Descriptores b Método QSAR Validación c Ref.

Diversos:
24 poli y perfluorocarbonos -propiedades moleculares R2=0.61 (Weiss et al.,
1 PLS c=2
(PFCs) -índices topológicos y de carga Q2int=0.41 2009)
-tiempos de retención (HPLC)
17 R2=0.96
(Papa et al.,
2 Polibromodifenil éteres Qpmax, MATS6v MLR Q2int=0.93
2010)
(PBDEs) Q2ext=0.90
n=20
Accclase1 = 87.5%
Accclase2 = 100%
k-NN k=3
Accclase3 = 100%
Sn=1.00
Sp=0.87 (Kovarich et
3 29 PBDEs DISPe, nArOH
n=29 al., 2011)
Accclase1 = 83.3%
Accclase2 = 88.9%
k-NN k=3
Accclase3 = 100%
Sn=0.94
Sp=0.83
(Yang et al.,
4 28 PBDEs Descriptores CoMSIA PLS c=4 R2=0.98, Q2int=0.75, Q2ext=0.93
2011)
Acc=100%
AMW, HATS6m
Sn= Sp=1.00
Acc=100%
nH, HATS6m
Sn= Sp=1.00 (Kovarich et
5 19 PFCs k-NN k=1
Acc=90% al., 2012)
nH, F06[C-O]
Sn=1.00, Sp=0.75
Acc=100%
T(F..F), HATS6m
Sn= Sp=1.00
n=53
6 nArOH, (F03[Br-Br]), HATS6m k-NN k=5 Acc=89%
53 halogenados (Papa et al.,
Sn=1.00, Sp=0.86
(PFCs & PBDEs) 2013)
n=32
7 R5u, F07[C-O], nArOH MLR
R2=0.89, Q2int=0.81
47 compuestos Diversos:
R2=0.86, Q2int=0.84, (Yang et al.,
8 -36 fenólicos Ej: log D, MW, nX, EHOMO, ELUMO, qH+, qC−, PLS c=2
Q2ext=0.93 2013)
-11 no ionizables qO−
Acc=79%
9 PLS c=5 Sn=0.94
14 descriptores 2D Sp=0.69
-Propiedades fisicoquímicas Acc=82%
(Zhang et al.,
10 178 compuestos diversos ej. hidrofobicidad, carga parcial. kNN k=4 Sn=0.78
2015)
-conteo de fragmentos: Sp=0.85
ej. hidroxilos, átomos de halógeno Acc=77%
11 SVM Sn=0.90
Sp=0.73
R2=0.86, Q2int=0.64, (Kar et al.,
12 15 PFCs IC3, ∑ 𝛽′𝑆 GFA-MLR
Q2ext=0.73 2017)

Rev. Toxicol (2020) 37: 55 - 68 63

 Goya-Jorge E, de Julián-Ortiz JV, Gozalbes R.

Acc=100%
Sn=1.00 (Kar et al.,
13 24 PFCs Me, nCsp2, H-050 LDA
Sp=1.00 2017)
MCC=0.87
29 compuestos
R2=0.93, Q2int=0.67, (Yang et al.,
14 -24 PFCs HATS6m, qO−, A- PLS
Q2=0.65 2017)
-6 ácidos grasos
a
Número de compuestos usados en la modelación (incluyendo series de entrenamiento y de validación)
b
Descriptores que se incluyeron en los modelos finales. Para más detalles, se recomienda consultar las referencias de cada modelo o el Handbook (Todeschini and Consonni, 2000)
c
En modelos de regresión: el coeficiente de correlación (R 2), el coeficiente de validación interna (generalmente resultantes de la validación cruzada) (Q 2int) y el de validación externa
(Q2ext). En modelos de clasificación, solamente se muestran los resultados de la validación con la serie de predicción a través de la exactitud (Acc), sensibilidad (Sn) y especificidad
(Sp).

El estudio de clasificación de Zhang et al. es posiblemente el más través de metodologías de dinámica molecular fue propuesta por Wu Y
completo hasta el momento para este mecanismo debido al número de et al. en la clasificación de compuestos activos/inactivos sobre el
estructuras y los diversos métodos aplicados. Los autores desarrollaron receptor androgénico. La combinación de estas simulaciones con
además un cribado virtual y seleccionaron un grupo de 23 compuestos estudios QSAR resultó en una significativa mejora de la capacidad
para llevar a cabo una validación experimental in vitro de los efectos predictiva de los modelos respecto a metodologías QSAR
que denominaron “alteradores de la hormona tiroidea” (mediados por convencionales (Wu et al., 2016). Sin embargo, este estudio fue
la TTR). En el cribado se analizaron 485 contaminantes orgánicos desarrollado exclusivamente con flavonoides, por tanto, se necesitan
presentes en el polvo que fueron extraídos de la literatura y 433 pruebas adicionales para asumir generalizaciones o corroborar la
potenciales metabolitos -determinados in silico- de los mismos. Cuatro aplicabilidad que tiene esta propuesta en un espacio químico más
nuevos compuestos químicos interruptores fueron identificados amplio.
combinando las metodologías in silico/in vitro. En este trabajo se
sugirió además la importancia de la activación metabólica para el A propósito de esta necesidad, en un trabajo de Trisciuzzi et al. se
enlace a la transtiretina (Zhang et al., 2015). sugiere un innovador y práctico protocolo para el desarrollo de modelos
in silico altamente predictivos como clasificadores de la actividad
Por otro lado, los estudios de Yang et al. han dilucidado la importancia androgénica. Estos autores emplearon el acoplamiento molecular
de las formas químicas y la ionización de éstas en las interacciones con (conocido como docking), que consiste en la predicción de la energía y
TTR. El primer trabajo estuvo enfocado en compuestos fenólicos de los modos de enlace entre ligandos y proteínas . La exigente
mientras que el siguiente abordó diversos PCFs. En ambos estudios se validación externa de los modelos y la aplicación de éstos en el cribado
concluyó que las diferencias entre formas neutras y aniónicas de los de más de 55 mil compuestos químicos relevantes (debido al grado de
compuestos influyen en la capacidad de enlace con la proteína exposición humana a los mismos), corroboró su capacidad predictiva.
transportadora TTR (Yang et al., 2017, 2013). Además, la integración de diferentes métodos computacionales se
definió como una importante pauta para la interpretación mecanicista
3.3 Estudios QSAR basados en los efectos sobre el receptor de de los resultados (Trisciuzzi et al., 2017).
andrógenos
Por otro lado, desde hace varias décadas, diferentes métodos QSAR han
Los andrógenos, entre otras muchas funciones, participan en el sido empleados en la predicción de la capacidad de enlace al AR, la cual
desarrollo y el mantenimiento de la próstata. La expresión del receptor resulta útil fundamentalmente en análisis preliminares de riesgo
androgénico es por tanto una importante diana terapéutica en (Loughney and Schwender, 1992; Waller et al., 1996).
patologías y malignidades prostáticas, en las cuales se han enfocado
diversos estudios de descubrimiento de fármacos. Además, dada su Conclusiones
notable importancia fisiológica, la inhibición del AR deriva en
Miles de productos químicos y mezclas que hoy día se emplean en
reacciones adversas que conllevan a su inclusión como un potencial
alimentos, suplementos nutricionales, fármacos, cosméticos, envases,
mecanismo de disrupción endocrina. Sin embargo, la información
productos agrícolas, etc. representan un riesgo potencial como
actual disponible ha derivado en su mayoría de estudios
interruptores endocrinos. La evaluación del riesgo de disrupción
farmacológicos enfocados en el tratamiento del cáncer de próstata a
endocrina es altamente compleja, y las tentativas de aunar esfuerzos
través del efecto anti androgénico de compuestos químicos (Heinlein
para el análisis y la legislación de estos tóxicos son aún insuficientes.
and Chang, 2004). Los más recientes estudios QSAR enfocados en la
Además, la información experimental disponible es limitada y en
inhibición del receptor de estrógenos se encuentran resumidos en la
algunos casos contradictoria, incrementando las dificultades en el
Tabla 3.
establecimiento de pautas apropiadas.
La predicción del antagonismo sobre el receptor androgénico ha sido
Considerando el número significativo de compuestos químicos con
estimada empleando métodos computacionales para grandes bases de
potencial efecto tóxico sobre el sistema endocrino, resulta necesario y
datos de compuestos cuya información biológica deriva de ensayos in
ventajoso el uso de métodos alternativos que garanticen el análisis
vitro principalmente (Vinggaard et al., 2008). En la última década el
rápido, certero y menos costoso de sustancias. Los modelos
estudio de Li et al. destaca debido al amplio espacio químico modelado
computacionales no sólo permiten a los investigadores reducir el
que lo sitúa como una importante herramienta predictiva del
número de experiencias en el laboratorio, sino que además asisten y
antagonismo sobre el receptor androgénico tanto en el panorama
extraen la información relevante de los resultados experimentales.
farmacológico como toxicológico. Los autores de este trabajo
fusionaron varias estrategias de cribado virtual y demostraron la El empleo de metodologías predictivas, particularmente modelos
efectividad de esta combinación en comparación con metodologías quimioinformáticos es recomendado en todas las normativas vigentes
clásicas (H. Li et al., 2013). para el control toxicológico de compuestos químicos. Desde hace
algunos años, diversos estudios QSAR han sido descritos en la
Otros trabajos recientes han aportado modelos de predicción que, aun
predicción de la disrupción endocrina.
con un menor número de compuestos, permiten la estimación del efecto
inhibitorio en % relativos o en IC50. Son especialmente importantes Los modelos QSAR empleados en la predicción de la actividad
desde la perspectiva de la disrupción endocrina, la predicción de inhibitoria sobre la enzima aromatasa han sido revisados (Adhikari et
derivados de contaminantes (ej. PCBs, PBDEs) o de compuestos al., 2017c; Shoombuatong et al., 2018). De igual forma, varias
presentes en altas dosis en la dieta humana como los flavonoides. revisiones han considerado de forma general los mecanismos de
disrupción endocrina y la importancia de las metodologías QSAR para
Una combinación de las diferentes interacciones ligando-receptor a

64 Rev. Toxicol (2020) 37: 55 - 68

 Revisión de los modelos computacionales que relacionan la estructura química con la disrupción del sistema endocrino

Tabla 3. Modelos QSAR de compuestos antagonistas del receptor androgénico.

n.º Base de Datos a Descriptores b Método QSAR Validación c Ref.

Acc=77.60%
1 DT Sn=0.74
Sp=0.71
De 5 a 30 descriptores diversos Acc=80.90%
2 ANN Sn=1.00
Sp=0.79 (H. Li et al.,
1220 compuestos diversos INDUCTIVE Acc=80.90% 2013)
MOE & DRAGON agregación de
3 Sn=0.92
Bootstrap (bagging)
Sp=0.71
Acc=70.80%
4 kNN Sn=0.81
Sp=0.71
(X. Li et al.,
5 23 PCBs Descriptores CoMSIA PLS c=6 R2=0.95, Q2int=0.67
2013)
análisis de campo molecular (MFA)
6 CH3/334, H+/467, CH3/543, H+/600, CH3/193, R2=0.84, Q2int=0.79
CH3/187, CH3/606
análisis de superficie del receptor (RSA)
60 compuestos diversos PLS c=8 (Suresh, 2013)
7 TOT/1380, TOT/1104, TOT/2615, TOT/1618, R2=0.91, Q2int=0.86
TOT/1974, TOT/2150, TOT/2344
descriptors 2D R2=0.86,
8
CH3/77, CH3/156, CH3/127, CH3/141, H+/171 Q2int=0.74
53 R2=0.95 (Wu et al.,
9 Descriptores CoMSIA PLS c=3
flavonoides Q2int=0.60 2016)
R2=0.92
(Yang et al.,
10 20 bisphenols nROH, Vs,max, ELUMO MLR Q2int=0.82
2016)
Q2ext=0.85
36 derivados 7α sustituidos de R2=0.76 (Wang et al.,
11 IC5, GATS5e, DISPp, HATS3u GA-MLR
DHT Q2int=0.66 2017)
R2=0.69
11 Descriptores CoMFA PLS c=1
Q2int=0.38 (Wu et al.,
21 PBDEs
R2=0.61 2017)
12 Descriptores CoMSIA PLS c=1
Q2int=0.23

a
Número de compuestos usados en la modelación (incluyendo series de entrenamiento y de validación)
b
Descriptores que se incluyeron en los modelos finales. Para más detalles, se recomienda consultar las referencias de cada modelo o el Handbook (Todeschini and Consonni, 2000)
c
En modelos de regresión: el coeficiente de correlación (R 2), el coeficiente de validación interna (generalmente resultantes de la validación cruzada) (Q2int) y el de validación externa
(Q2ext). En modelos de clasificación, solamente se muestran los resultados de la validación con la serie de predicción a través de la exactitud (Acc), sensibilidad (Sn) y especificidad
(Sp).

el análisis de riesgo y la predicción de la toxicidad (Vuorinen et al., relationships of letrozole-based analogs. Can. J. Chem. 95, 1285–
2015). Además, la disrupción del receptor de estrógenos, a través de 1295. https://doi.org/10.1139/cjc-2017-0419
múltiples variables respuesta y bioensayos, se ha modelado en diversas
ocasiones (Porta et al., 2016) y sus resultados, junto a otros receptores 2. Adhikari, N., Amin, S.A., Saha, A., Jha, T., 2017b. Combating breast
nucleares y diversas técnicas computacionales se han revisado también cancer with non-steroidal aromatase inhibitors (NSAIs):
(Ruiz et al., 2017). Sin embargo, esta es la primera vez, que, a nuestro Understanding the chemico-biological interactions through
conocimiento, se revisan los modelos QSAR disponibles en el estudio comparative SAR/QSAR study. Eur. J. Med. Chem. 137, 365–438.
de la disrupción de la TTR. También es el primer compendio que https://doi.org/10.1016/j.ejmech.2017.05.041
analiza, en forma de casos de estudio, exclusivamente la modelación 3. Adhikari, N., Amin, S.A., Saha, A., Jha, T., 2017c. Combating breast
QSAR de la disrupción endocrina mediada por los tres mecanismos de: cancer with non-steroidal aromatase inhibitors (NSAIs):
inhibición de la aromatasa, modulación de la transtiretina y del receptor Understanding the chemico-biological interactions through
androgénico. comparative SAR/QSAR study. Eur. J. Med. Chem. 137, 365–438.
Muchos de los modelos disponibles para estos tres mecanismos se https://doi.org/10.1016/j.ejmech.2017.05.041
encuentran rigurosamente validados y sus predicciones pueden 4. Awasthi, M., Singh, S., Pandey, V.P., Dwivedi, U.N., 2015.
contribuir en gran medida al estudio de la disrupción endocrina. Molecular docking and 3D-QSAR-based virtual screening of
Especialmente importante es el uso de las herramientas QSAR en la flavonoids as potential aromatase inhibitors against estrogen-
selección de los compuestos a probar de forma experimental. Además, dependent breast cancer. J. Biomol. Struct. Dyn. 33, 804–819.
las predicciones combinadas de estos mecanismos y otros como los https://doi.org/10.1080/07391102.2014.912152
estrogénicos pueden proveer de una visión general que garantice la
prohibición de sustancias altamente preocupantes. 5. Balaguer, P., Delfosse, V., Bourguet, W., 2019. Mechanisms of
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proyecto PROTECTED (http://protected.eu.com/), financiado por el 6. Barigye, S.J., Freitas, M.P., Ausina, P., Zancan, P., Sola-Penna, M.,
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68 Rev. Toxicol (2020) 37: 55 - 68

 *Los apartados de resultados y discusión pueden redactarse
Revista de ------------ conjuntamente.

Toxicología
Conclusiones. Breves obtenidas directamente del trabajo.
Agradecimientos. Si fueran necesarios, particularmente a las
entidades financiadoras.
Bibliografía. La exactitud de las referencias bibliográficas es
responsabilidad de los autores. Sólo deberían incluirse referencias
ÓRGANO OFICIAL DE LA ASOCIACIÓN ESPAÑOLA DE TOXICOLOGIA relacionadas estrechamente con el trabajo. Todas las referencias listadas
deben ir citadas en el texto.
Las referencias bibiográficas se referencian en el texto con el apellido
INSTRUCCIONES A LOS AUTORES del autor y año de publicación si el autor de la obra es uno solo (Font,
2005). En caso de ser dos los autores de la publicación se citarán los
Los manuscritos, en español o inglés, se someterán por el editor a apellidos de ambos (Font y Ruiz, 2009). Si son tres o más los autores se
dos expertos que actuarán como revisores externos a la revista, pondrá el apellido del primer autor et al., año (Tolosa et al., 2013). Las
cuyas observaciones se trasladarán al autor para la reescritura del referencias a distintos trabajos en una misma cita se separan con punto
original en caso de ser aceptados. y coma y son ordenadas cronológicamente: (Rodriguez et al., 2012;
Serrano et al., 2013). Si existieran varias referencias de un autor/es o
El texto debe ser claro y conciso, cuidando la ortografía y la autora/s en un mismo año se consignarán con las letras a, b, c, etc.,
utilización de abreviaturas (SI). Tanto la forma como el contenido después del año.
deberán ser cuidadosamente revisados antes de su envío. Se
utilizará interlineado a doble espacio, letra tipo Times New En el apartado de bibliografía se recogen todas las referencias por orden
Roman de 12 puntos, sin sangrías en los párrafos, con alfabético y del modo indicado a continuación. La bibliografía irá citada
justificación completa, con márgenes amplios, en tamaño DIN A4, de la siguiente forma:
preferiblemente en archivo Word. Todas las páginas irán numeradas
correlativamente. 1. Artículos de revistas.-
Manuscritos en español: Título, Apellido/s e inicial/es del nombre Estructura general: Autor/es. Título del artículo. Abreviatura
del autor/es, Institución/es, Resumen, Palabras Clave, Title, internacional de la revista. Año; volumen (número), página inicial-final
Abstract, Key Words, Introducción, Material y Métodos, del artículo.
Resultados, Discusión, Conclusiones, Agradecimientos, Ejemplo: Tolosa J, Font G, Mañes J, Ferrer E. Presencia de
Bibliografía, Tablas, Leyendas de las Figuras. micotoxinas Fusarium en pescado de acuicultura. Rev. Toxicol. 2013;
Manuscritos en inglés: Title, Family name/s and First name/s 30 (2), 193-197.
initial/s, Abstract, Key Words, Título, Resumen, Palabras Clave, 2. Libros y otras monografías.-
Introduction, Materials and methods, Results, Discussion,
Acknowledgements, References, Tables, Leyends of figures. Estructura general: Autor/es.Título del libro. Edición. Lugar de
publicación: Editorial; año. La primera edición no es necesario
El manuscrito se estructura, por tanto, en los siguientes apartados consignarla. La edición siempre se pone en números arábigos y
(por favor, no use mayúsculas más que en la primera letra del título abreviatura: 2ª ed. Si la obra estuviera compuesta por más de un
y apartados): volumen, debemos citarlo a continuación del título del libro: Vol. 3.
Título descriptivo del artículo (no en mayúsculas) y Title, además -Capítulo de libro.
de una versión corta del título.
Autor/es del capítulo. Título del capítulo.
Apellido/s e inicial/es del nombre del autor/es. En: Director/Coordinador/Editor del libro. Título del libro. Edición.
Institución/es donde se ha realizado el trabajo, distinguiéndolas Lugar de publicación: Editorial; año. Página inicial-final del capítulo.
con numerales en superíndice. Marcar con un asterisco el autor de Ejemplo: Cameán AM, Repetto M. Introducción y conceptos. En
contacto e incluir su correo electrónico, teléfono y fax. Cameán AM, Repetto, M. (Eds.), Toxicología alimentaria. Díaz De
Resumen y Abstract. Las versiones en español e inglés serán lo Santos, Madrid, España. 2006. p.1-18.
más informativas posible, en un solo párrafo, con una pequeña -Comunicación presentada a un congreso.
introducción, la identificación de los métodos, los resultados
abreviados y particularmente las conclusiones del trabajo. Su Autor/es de la Comunicación/Ponencia. Título de la
lectura dará una idea clara del mismo. Ninguno debe sobrepasar Comunicación/Ponencia. Título oficial del Congreso. Publicación.
las 250 palabras ni incluir abreviaturas, referencias o tablas. Editorial; año. Página inicial-final de la comunicación/ponencia.
Palabras Clave y Key Words tras cada resumen, con hasta cinco Ejemplo: Saladino, F., López, M., Manyes, L., Fernández-Franzón, M.,
palabras separadas por punto y coma. Meca, G. El uso de antimicrobianos naturales para el aumento de la vida
útil del pan de molde. XXICongreso
Español
y
V
Iberoamericano

Introducción: descripción de los orígenes y bases del estudio. de
Toxicología. Rev. Toxicol. 32 (1). Asociación Española de
Material y Métodos. Se evitarán descripciones de todo aquello que Toxicología; 2015, p32.
pueda encontrarse en la bibliografía citada. Deben describirse de 3. Material electrónico.- Artículo de revista en Internet.
forma concisa los individuos y series estudiados, criterios de
selección, procedimientos, duración y número de repeticiones de Autor/es del artículo. Título del artículo. Nombre de la revista [revista
los ensayos, equipo y materiales utilizados y cuantos datos puedan en Internet] año [fecha de consulta]; volumen
precisarse para la repetición del estudio. Deben especificarse las (número): [Extensión/páginas]. Dirección electrónica.
técnicas analíticas y los métodos estadísticos. Para sustancias
químicas o fármacos se citará el nombre genérico conforme a la Ejemplo: Francés I, Barandiarán M, Marcellán T, Moreno L.
IUPAC. Si se utiliza una marca registrada, se hará constar el nombre Estimulación psicocognoscitiva en las demencias. An Sist Sanit Navar
genérico y el nombre del fabricante. [revista en Internet] 2003 septiembre-diciembre. [Acceso 19 de octubre
de 2005]; 26(3). Disponible en:
Resultados. Se presentarán las observaciones realizadas, sin http://www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/vol26/n3/revis2a.html
interpretarlas, así como el análisis estadístico. Los datos numéricos
se pueden presentar en tablas o figuras, pero sin repetirlos entonces -Monografía en Internet.
en el texto. Autor/es o Director/Coordinador/Editor. Título [monografía en
Discusión: en ella se considerarán los resultados presentados Internet]. Edición. Lugar de publicación: Editor; año [fecha de
comparándolos con otros publicados, las razones que apoyan la consulta]. Dirección electrónica.
validez de los mismos, su aplicación práctica y las directrices para Ejemplo: Moraga Llop FA. Protocolos diagnósticos y terapéuticos en
nuevas investigaciones. Dermatología Pediátrica. [Monografía en Internet]. Madrid: Asociación
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Autor/es. Título [sede Web]. Lugar de publicación: Editor; Fecha de Figuras
publicación [fecha de actualización; fecha de acceso]. Dirección
electrónica. - Los pies de las figuras se incluyen en el documento principal del
Ejemplo: Fisterra.com, Atención Primaria en la Red [sede Web]. La manuscrito, tras las tablas, numerados consecutivamente (1, 2…) y
Coruña: Fisterra.com; 1990- [actualizada el 3 de enero de 2006; acceso deben ser lo suficientemente descriptivos como para hacerlos
12 de enero de 2006]. Disponible en: http://www.fisterra.com comprensibles sin necesidad de consultar el texto.
-Parte de una página de un sitio o sede Web. - Las figuras propiamente dichas se envían comprimidas en formato
Título de la página [sede Web]. Lugar de publicación: Editor; Fecha WinZip. Las imágenes se enviarán digitalizadas, preferiblemente en
de publicación [fecha de actualización/revisión; fecha de acceso]. formato TIFF, JPEG o PNG de al menos 300 p.p.p.de resolución (pero
Título de la sección [número de páginas o pantallas]. Dirección no mucho más) para el tamaño final.
electrónica.
Dado que actualmente la revista únicamente se edita en versión
Ejemplo: American Medical Association [sede Web]. Chicago: The digital, las figuras deberán enviarse en color. Los símbolos
Association; c1995- 2002 [actualizado 5 de diciembre de 2005; acceso
19 de diciembre de 2005]. AMA Office of Group Practice Liaison; identificadores preferidos en las figuras son círculo, cuadrado y
[aproximadamente 2 pantallas]. Disponible en: http://www.ama- triángulo abiertos o llenos.
assn.org/ama/pub/category/1736.html.
- Las figuras deben tener suficiente calidad. No contendrán los títulos
–Base de datos en Internet. ni referencia a su número ni tendrán innecesariamente espacio en
Institución/Autor. Título [base de datos en Internet]. Lugar de blanco alrededor.
publicación: Editor; Fecha de creación, [fecha de actualización; fecha
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Ejemplo: PubMed [base de datos en Internet]. Bethesda: National - Las figuras publicadas previamente deben contar con el permiso escrito
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-Parte de una base de datos en Internet. MeSH Browser [base de datos modificaciones en los artículos recibidos, siempre que no alteren el
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[acceso 19 de diciembre de 2005]. Meta-analysis; unique ID D015201 sentido de los mismos, para adaptarlos al estilo de la revista.
[aproximadamente 3 pantallas]. Disponible en:
http://www.nlm.nih.gov/mesh/MBrowser.html. Ficheros actualizados
semanalmente. Los trabajos se enviarán a través de la plataforma de la
Para otras situaciones no recogidas en este texto se puede consultar revista: http://rev.aetox.es/wp/index.php/envio-articulo/
la siguiente dirección
http://www.fisterra.com/herramientas/recursos/vancouver/#ejemplos
Tablas El Equipo Editorial: revista@aetox.es
- Deben ser tan claras y simples como sea posible. Directora:
- Las tablas se incluyen tras la bibliografía, en el documento principal Dra. Guillermina Font Pérez. Universitat de València.
del manuscrito, en páginas independientes, numeradas Dpto. de Medicina Preventiva y Salud Pública, Ciencias de la
Alimentación, Toxicología y Medicina Legal.
correlativamente (1, 2…).
Avda. Vicente Andrés Estellés s/n 46100 Burjassot. Valencia
- Los títulos deben ser suficientemente descriptivos para hacerlos
Subdirectora:
comprensibles sin consultar el texto. Dra. Emilia Ferrer García. Universitat de València
- La información adicional puede incluirse como nota al pie de tabla o
figura. Editores asociados:

- Las tablas debieran ser lo suficientemente cortas para evitar dividirlas. Dra. María P. Míguez Santiyán. Universidad de Extremadura
Dr. Juan Carlos Rios Bustamante. Pontificia Universidad Católica de
Chile

ASOCIACIÓN ESPAÑOLA DE TOXICOLOGÍA

Rev. Toxicol. 37 (1), 1-68 (2020)
ISSN 0212-7113

Incluido en Scopus, Latindex, REDALYC, REDIB, IBECS, ICYT, Index Copernicus, IME, Recolecta, EMBASE/ Excerpta Medica y Chemical Abstracts
 Presidenta: Dra. Ana Cameán Fernández
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Vicepresidenta: Dra. Mª José Ruiz Leal
Facultat de Farmàcia. Universitat de València.
Secretaria: Dra. Emma Martínez López.
Facultad de Veterinaria. Universidad de Murcia.
Tesorera: Dra. Ángeles Jos Gallego.
Facultad de Farmacia.Universidad de Sevilla.
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Dra. Mónica Fernández Franzón Dra. Ana Isabel Morales Martín

Universitat de València.Valencia Universidad de Salamanca. Salamanca

Dr. Rafael Balaña Fouce Dra. Rosario Moyano Salvago

Universidad de León. Leon Universidad de Córdoba. Córdoba

Dra.Silvia Pichardo Sánchez Dra. Ana Maria Bermejo Barrera

Universidad de Sevilla.Sevilla Universidad de Santiago de Compostela. La Coruña

Dr. Fernando Gil Hernández Dr. Francisco Soler Rodríguez

Universidad de Granada. Granada Universidad de Extremadura. Cáceres

Directora: Subdirectora:
Dra. Guillermina Font Pérez. Dra. Emilia Ferrer García.
Universitat de València. Valencia Universitat de València. Valencia
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Dra. María P. Míguez Santiyán.
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Dr. Juan Carlos Rios Bustamante
Pontificia Universidad Católica de Chile