LBO-PCD-006 Demanda Bioquímica de Oxígeno
LBO-PCD-006 Demanda Bioquímica de Oxígeno
LBO-PCD-006 Demanda Bioquímica de Oxígeno
Proceso Laboratorio
Política del proceso Calidad – Ambiental - Seguridad
Actualización y Aprobación
1. TERMINOS Y DEFINICIONES:
DBO: porción de materia orgánica biodegradable de una muestra de agua, en la que se mide la cantidad de oxígeno
(condiciones aerobias) que es utilizado por microorganismos bajo condiciones estándares para la degradación de dichos
materiales.
Muestra: una porción de una matriz ambiental o de fuente que se selecciona de acuerdo con un procedimiento pre-escrito
según el caso, para determinar las características de la matriz.
Muestra simple: son las muestras recogidas en un punto específico y de forma instantánea. Así que representan una “imagen
instantánea” en tiempo y lugar del área muestreo. Las muestras simples se toman en una localización, profundidad y tiempo
seleccionado.
Muestra Compuesta: Es la mezcla de varias muestras simples obtenidas de una misma fuente, tomadas a intervalos
programados y en un mismo punto, las cuales pueden tener volúmenes iguales o ser proporcionales al caudal durante el
periodo de muestreo.
Muestra integrada: La muestra integrada es aquella que se forma por la mezcla de muestras simples tomadas de diferentes
puntos simultáneamente, o lo más cerca posible. Un ejemplo de este tipo de muestra ocurre en un río o corriente que varía en
composición de acuerdo con el ancho y la profundidad.
Agua residual doméstica: Son las procedentes de los hogares, así como de las instalaciones en las cuales se desarrollan
actividades industriales, comerciales o de servicios y que correspondan a:
• Descargas de retretes y servicios sanitarios.
• Descargas de los sistemas de aseo personal (duchas, lavamanos), de las áreas de las cocinas y cocinetas, de las pocetas de
lavado de elementos de aseo y lavado de paredes y pisos y del lavado de la ropa. (no se incluyen los servicios de lavandería
industrial).
Agua residual no doméstica: son aquellas procedentes de las actividades industriales, comerciales o de servicios, utilizadas en
el proceso productivo o de prestación de servicios, distintas a las consideradas como aguas residuales domésticas
Aguas naturales: Aquéllas cuyas propiedades originales no han sido modificadas por la actividad humana; y se clasifican en:
Superficiales, como aguas de lagos, lagunas, pantanos, arroyos con aguas permanentes y/o intermitentes, ríos y sus
afluentes, nevados y glaciares.
Baird, R. Eaton, A. Rice, E. (2017) Standard Methods For the Examination of Water and
Wastewater, Ed 23. 5210 B. Pag 5-5 - 5-10.
ASTM D-888 (2018) Test Method C, Instrumental Probe Procedure— Luminescence-Based
Sensor.
3. DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES:
3.1. GENERALIDADES
La Demanda Bioquímica de Oxígeno es una prueba en la que se utilizan procedimientos estandarizados de laboratorio para
determinar los requerimientos relativos de oxígeno de las aguas residuales, efluentes y contaminadas.
La prueba tiene su aplicación más extendida en la determinación de las cargas residuales en las instalaciones de tratamiento y
en la evaluación de la eficacia de extracción del D.B.O. de tales sistemas de tratamiento.
La prueba mide el oxígeno utilizado durante un período de incubación especificado, para la degradación bioquímica de materia
orgánica, y el oxígeno utilizado para oxidar materia orgánica, como los sulfuros y el ion ferroso. Puede medir también el
oxígeno utilizado para oxidar las formas reducidas del nitrógeno a menos que se impida la oxidación por medio de un inhibidor.
Los procedimientos de siembra y dilución proporcionan una valoración del D.B.O. a un pH entre 6,5 y 7,5.
La D.B.O. se utiliza como un parámetro de evaluación de polución, puesto que sirve para medir y controlar la cantidad de
materiales orgánicos biológicamente asimilables descargados a un cuerpo de agua receptor por un desecho líquido ya sea
doméstico o no doméstico, también es utilizado en ingeniería como criterio para la construcción de plantas de tratamiento de
aguas residuales.
La concentración de D.B.O. en la mayoría de las aguas residuales supera la concentración de oxígeno disuelto en una
muestra saturada de aire. Por lo tanto, es necesario diluir la muestra antes de incubarla para equilibrar de forma adecuada el
requerimiento y suministro de oxígeno. Ya que el crecimiento bacteriano requiere nutrientes tales como nitrógeno, fósforo y
metales traza, se añaden éstos al agua de dilución, la cual es taponada para asegurar que el pH de la muestra incubada se
mantiene en un intervalo adecuado para el crecimiento bacteriano.
La prueba de la DBO5 por el método de incubación en botellas de Winkler no es exactamente una reproducción del ambiente
del agua en estudio, pues mientras las pruebas de bioensayos son sistemas estáticos a los cuales se les controla la
concentración de oxigeno (medio siempre aerobio), temperatura más o menos constante 20 ºC ± 1 ºC, se realiza en la
oscuridad y se le proporciona microorganismos.
El ambiente de la corriente receptora es un sistema dinámico con condiciones de temperatura, población bacteriana, luz solar
y concentración de O.D. difícil de igualar en el laboratorio. Por esta razón al interpretar los resultados de la DBO5 se deben
tener en cuenta las condiciones naturales del cuerpo de agua receptor del desecho líquido descargado.
Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relación de la materia orgánica soluble a la materia
orgánica suspendida, los sólidos sedimentables, los flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la
presencia de compuestos azufrados, peróxido, cloro y las aguas no bien mezcladas. Al momento no existe una forma de
corregir o ajustar los efectos de estos factores.
Los resultados se reportan como DBO5 debido a que no se adiciona inhibidor de nitrificación.
Requerimientos de dilución: Si el agua de dilución es de baja calidad, su DBO aparecerá como DBO de la muestra, efecto que
será amplificado por el factor de dilución, y el resultado tendrá una desviación positiva. El método de análisis debe incluir agua
de dilución de verificación y agua de dilución como blanco para establecer su calidad, mediante la medición del consumo de
oxígeno con una mezcla orgánica conocida, generalmente glucosa y ácido glutámico. La fuente del agua de dilución es
destilada a partir del agua de grifo.
Tome la muestra de tal manera que sea representativa del vertimiento o cuerpo de agua en estudio. Utilice frascos plásticos o
vidrio ámbar de 1000 mL de capacidad. Refrigere la muestra a 4°C hasta el momento del análisis. Lleve las muestras a
temperatura ambiente. Efectué el análisis dentro de las 24 horas siguientes a la toma de muestra.
Las muestras para determinación de la DBO5 pueden degradarse significativamente durante el almacenamiento, entre la
colección y el análisis, resultando valores bajos de DBO5.
Muestras compuestas: Mantener las muestras a 4 oC o menos durante el proceso de composición, que se debe limitar a 24
horas. Aplicar los mismos criterios que para las muestras sencillas, contando el tiempo y las condiciones de almacenamiento
como parte de los resultados.
Agua destilada
Solución tampón de fosfato: Disuelva 8,5 g de KH 2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g de Na2HPO4 .7H2O, y 1,7 g de NH 4Cl
en aproximadamente 500 mL de agua destilada y diluya a 1 L. El pH del buffer preparado debe ser 7,2 sin posteriores
ajustes, permitiendo un intervalo entre 7.1 – 7.3 y verificar el pH de cada preparación. Si se presenta alguna señal de
crecimiento biológico, descarte este reactivo.
Solución de sulfato de magnesio: Disuelva 22,5 g de MgSO4 .7H2O en agua destilada y diluya a 1L. Si se presenta
alguna señal de crecimiento biológico, descarte este reactivo.
Solución de cloruro de calcio: Disuelva 27,5 g de CaCl2 en agua destilada y diluya a 1L. Si se presenta alguna señal de
crecimiento biológico, descarte este reactivo.
Solución de cloruro de hierro (III): Disuelva 0,25g de FeCl3.6H2O en agua destilada, diluya a 1L. Si se presenta alguna
señal de crecimiento biológico, descarte este reactivo.
Ácido Sulfúrico 1 M: En un vaso de precipitados coloque alrededor de 300 mL de agua destilada y agregue muy
lentamente y mientras agita, 28 mL de ácido sulfúrico concentrado; diluya a 1 L.
Hidróxido de Sodio 1M: Disuelva 40 g de hidróxido de sodio en agua destilada y diluya a 1 L.
Solución de glucosa - ácido glutámico: En un beaker coloque alrededor de 2 g de ácido glutámico y en otro 2 g de
glucosa y séquelo a 102 °C – 104 °C durante una hora en el horno. Disuelva 150 mg de glucosa y 150 mg de ácido
glutámico en agua destilada y diluya a 1 L. Almacenar la solución en un frasco de tapa de rosca y preferiblemente estéril, el
tiempo de vida útil es de una semana si se mantiene refrigerado.
Solución cepa o semilla (Polyseed-Interlab): Poner el contenido total de la capsula polyseed en un balón de 500 mL con
agua de dilución para DBO (3.7.1), agitar durante 1 hora y dejar que repose. No filtrar la solución semilla. Mezclar bien la
solución antes de sembrarla para asegurar que la misma cantidad de microorganimos sea agregada a todas las botellas.
Verificar que se encuentre en buen estado los enchufes y conexiones eléctricas de los equipos.
Durante la ejecución del análisis se debe hacer uso de Elementos de Protección Personal (EPP) tales como: guantes,
gafas de seguridad, botas de seguridad, bata, respirador media cara y cartuchos según exposición (vapores, gases,
partículas, etc.), trabajar bajo campana de extracción cuando se trabaje con fuentes que generen vapores o neblinas.
Los documentos del área SEGURIDAD Y SALUD EN EL TRABAJO que se relacionan a continuación permiten tener
presente la ejecución de prácticas y procedimientos seguros en el laboratorio, además de promover un ambiente de trabajo
sano al interior del mismo para prevenir la generación de incidentes y accidentes de trabajo y/o ambientales, así como la
aparición de enfermedades profesionales, por tal motivo es indispensable conocerlos antes de ejecutar el procedimiento:
a) FOR-SST-008 SISTEMA DE SEGURIDAD CINCO PUNTOS.
b) FOR-SST-165 IDENTIFICACIÓN DE PELIGROS, EVALUACIÓN DE RIESGOS Y CONTROLES.
Fichas de seguridad (MSDS): Mantenga las fichas de seguridad de las sustancias utilizadas en la aplicación de esta
metodología, las cuales deben ser conocidas por los analistas o técnicos que manejan estas sustancias.
3.7. PROCEDIMIENTO
La garrafa donde se prepara el agua de dilución debe lavarse antes y después de su uso con agua caliente, enjuagar varias
veces con agua destilada, recoger el agua para el análisis. No aplicar jabón para el lavado.
Use agua destilada o de cualquier otra fuente, pero asegurándose que el agua esté libre de metales pesados especialmente el
cobre y las sustancias toxicas como el cloro, que pueden interferir con las mediciones de DBO.
El agua desionizada a menudo contiene cantidades suficientes de materia orgánica y microorganismos que pueden causar
falla en la comprobación del agua de dilución.
Revise para asegurarse que la concentración de oxígeno disuelto sea al menos 7.5 mg/L, antes de usar el agua para las
pruebas de DBO. Si no es así agregue OD, aireando con aire filtrado libre de orgánico
Llene la garrafa (preferiblemente de vidrio) con agua destilada, la necesaria para el análisis, teniendo en cuenta que el gasto
aproximado es de 300 mL por botella winkler. Reserve el volumen de agua destilada desde el día anterior.
Agregue 1 mL de cada una de las siguientes soluciones, por cada litro de agua de dilución a preparar: Solución tampón de
fosfatos, Solución de sulfato de magnesio, Solución de cloruro de calcio, Solución de cloruro de hierro (III). Verifique que la
temperatura del agua de dilución sea de 20 ± 3 °C.
Si la depleción de OD, en el blanco es superior a 0.20 mg O 2/L, mejorar la calidad del agua purificándola o obteniéndola por
otra fuente.
Tipo de Muestra mL
Residuales domésticas crudas fuertes 0,3 – 0,6 – 1
Residuales domesticas crudas normales 0,5 – 1 – 1,5
Residuales domesticas (estructuras intermedias) 1–2–3
Residuales domesticas tratadas (funcionamiento regular) 2,5 - 5 - 10
Residuales domesticas tratadas (funcionamiento normal) 5 – 10 – 20
Res. domesticas tratadas (excelente funcionamiento) 10 – 20 – 50
Aguas superficiales parcialmente contaminadas 5 a 50
Aguas superficiales no contaminadas 5 - 300
Los mililitros adicionados son por cada 100 mL de la botella Winkler.
Lectura de blancos
- Aliste tres botellas Winkler
- Rotule las botellas como “Blanco” y la fecha de análisis.
- Adicione agua de dilución hasta la mitad del cuello de la botella.
- Calibre el equipo de acuerdo al manual del oxímetro que se va a utilizar para las medidas con la primera botella de blanco.
- Lea el oxígeno inicial (con electrodo de luminiscencia) de los blancos, llene totalmente dejando el sello hidráulico (pequeña
película de agua para impedir el intercambio de oxigeno entre la botella y el ambiente) y forre la parte superior de la botella
con papel aluminio u otro.
- Lea las otras dos botellas (con electrodo luminiscencia) de blancos como muestras y registre los datos en el formato LBO-
FOR-PCD-006-01 e incube a 20 ± 1°C por cinco días.
- Utilice una de las botellas del blanco para calibrar el oxímetro al quinto día y lea el oxígeno disuelto residual de los blancos,
blanco con cepa, estándares y muestras.
Lectura de muestras
Preparación de diluciones: Utilizando el agua de dilución preparada como en el numeral anterior, hacer al menos tres
diluciones de muestra preparada estimados para producir una DO residual mayor 1,0 mg/L y una captación de DO de al
menos 2,0 mg/L después de 5 días incubación, producen los resultados más confiables
Después de establecer la cantidad de muestra que necesita de acuerdo a las diluciones a realizar, agite la muestra para
homogenización completa y sirva en un vaso de precipitados la muestra, a todas las muestras se le debe medir el pH y si
éste no se encuentra entre 6.0 y 8.0, lleve la muestra a una temperatura de 20°C ± 3°C, luego ajuste el pH entre 7.0 y 7.2,
usando solución de ácido sulfúrico (H2SO4) o de hidróxido de sodio de concentración tal que la cantidad de reactivo no diluya
la muestra en más del 0,5 por 100.
3.1.4 Cálculos
Donde;
Evitar las muestras que contengan cloro residual; tomarlas antes del proceso de cloración; en algunas muestras, el Cloro se
elimina si se dejan 1 o 2 horas a la luz, lo cual puede suceder durante el transporte y manejo de la muestra. Para muestras
en las cuales el Cloro residual no se disipa en un tiempo razonablemente corto, eliminar éste por adición de solución de
Na2SO3.
Determinar el volumen requerido de solución Na 2SO3 en una fracción de 100 a 1000 mL de muestra neutralizada añadiendo
10 mL de 1+1 ácido acético o 1+50 H 2SO4, 10 mL de solución de yoduro potásico (K) (10g/100mL), y titulando con la
solución de Na2SO3 hasta el punto final del almidón yodo para el residuo. Añadir a la muestra neutralizada el volumen
relativo de la solución Na2SO3 determinada por la prueba anterior, mezclar y después de 10 a 20 minutos, comprobar el cloro
residual de la muestra.
.7. CONTROL
Por cada grupo o lote de muestras, evalúe la técnica y la calidad de los reactivos, correr en la prueba, la solución estándar de
ácido glutámico-glucosa de 198 mg O2/L. Grafique en las respectivas cartas de control LBO-FOR-PCD-001-04.
- El consumo de oxígeno en los cinco días para los blancos sin cepa debe ser < 0.2 mg O 2/L y preferiblemente no más de 0.1
mg O2/L.
- El consumo de oxígeno para agua de dilución más cepa en buenas condiciones debe estar entre 0,6 – 1,0 mg O 2/L, teniendo
en cuenta que este límite no es tan estricto debido a que se resta al consumo de oxígeno del estándar y las muestras.
- El estándar debe encontrarse en 198 ± 30,5 mg O 2/L.
- El OD residual de las muestras debe ser > 1.0 mg O2/L y una captación de DO de al menos 2,0 mg O2/L
- Cuando todas las diluciones resultan con un OD residual < 1 mg/L, seleccione la botella que tenga la concentración de OD
más baja (dilución más grande) y se reporta como: DBO mg/L > (DBO calculada a partir de las ecuaciones anteriores).
Si los residuos generados en el desarrollo del procedimiento presentan desechos sólidos y/o líquidos tales como: ácidos,
bases, estándares, solventes, entre otros, estos se deben disponer en los recipientes destinados para tal fin y ubicados en el
lugar especificado de acuerdo con Plan de Gestión Integral de Residuos.
El resumen de actividades se menciona a continuación:
Preparación de soluciones,
patrones y agua de dilución
Ir a actividad
Responsable: Laboratorio 3
¿Cumple requisito? 2. Controlar condición ambiental y
continuar con aireación
Ir a actividad
Responsable: Analista o auxiliar Lab. 5
¿Cumple requisito?
4. Cambiar alícuota de muestra
Responsable: Laboratorio
Resultado confiable al
5. Incubar por 5 días, hacer lectura
área ambiental
final y revisar controles establecidos
5. ACTIVIDADES POSTERIORES E INTEGRANTES DE OTROS PROCESOS:
6. REGISTROS:
LBO-PCD-01 CONTROL Y
ASEGURAMIENTO DE LA Digital y Laboratorio
3 años
CALIDAD DE LABORATORIO físico ambiental
AMBIENTAL
LBO-FOR-PCD-006-01
DEMANDA BIOQUÍMICA DE Digital y Laboratorio
2 años
OXÍGENO – INCUBACIÓN físico ambiental
(5DÍAS)
LBO-FOR-PCD-006-02 HOJA DE
CÁLCULO DEMANDA Laboratorio
Digital 2 años
BIOQUÍMICA DE OXÍGENO – ambiental
INCUBACIÓN (5DÍAS)