Métodos Espectroscópicos

La espectroscopía es la ciencia que estudia la interacción entre la materia y la energía

radiada, mientras que la espectrometría es el método utilizado para adquirir una medición
cuantitativa del espectro. La espectroscopia (scopy significa observación) no genera
ningún resultado, es el enfoque teórico de la ciencia. La espectrometría (metry significa
medición) es la aplicación práctica donde se generan los resultados, mide la intensidad de
la radiación utilizando un dispositivo electrónico. Los métodos espectroscópicos analíticos
se basan en medir la cantidad de radiación producida o absorbida por las especies de
interés.

Introducción a los métodos espectroquímicos

1. Propiedades de la radiación electromagnética

La radiación electromagnética es una forma de energía transmitida como una onda(con

sus propiedades) a través del espacio a grandes velocidades. La luz es la radiación
electromagnética en la región UV/visible y a veces en la región IR, que no requiere un
medio de transmisión, puede viajar a través del vacío. Consisten en oscilaciones
perpendiculares del campo eléctrico y del campo magnético.

E = h · v → h: constante de Planck (6,63·10^(-34) J·s), E: energía, v: velocidad

I = intensidad de radiación (nº fotones x unidad de área)
2. Espectro electromagnético

Región Intervalo de λ

UV 180 - 380 nm

Visible 380 - 780 nm

IR cercano 0.78 - 2.5 μm

IR medio 2.5 - 50 μm1

1
1 μm = 10^(-6) m 1 nm = 10^(-9) m
 3. Mediciones espectroscópicas

Los espectroscopistas utilizan las interacciones de la radiación con la materia para obtener
información sobre una muestra. Normalmente la muestra es estimulada con el analito en su
estado más bajo, el estado basal. El estímulo causa que algunas de las especies del
analito experimenten una transición hacia un estado mayor de energía o estado excitado.
Adquirimos información sobre el analito midiendo la radiación electromagnética emitida
conforme este regresa a su estado basal o midiendo la cantidad de radiación
electromagnética absorbida como resultado de su excitación.
-Espectroscopia de emisión: calor o energía eléctrica como estimulantes.
-Espectroscopia de quimioluminiscencia: reacciones químicas como estimulantes.
Resultados de las mediciones graficados en espectros (radiación emitida vs. f o λ).

Espectroscopia de absorción molecular ultravioleta y visible

Cada especie molecular es capaz de absorber sus propias frecuencias
características de radiación electromagnética. Este proceso de absorción transfiere
energía a la molécula y da como resultado una disminución en la intensidad de la
radiación electromagnética incidente.
Absorción de la radiación ↔ atenuar el haz de radiación el. incidente (↓
energía)
La espectroscopía por absorción molecular se basa en la medición de la
transmitancia 𝑇 o de la absorbancia 𝐴 de soluciones que están en celdas
transparentes que tienen una longitud de trayectoria de 𝑏 cm. Normalmente, la
concentración de un analito absorbente se relaciona en forma lineal con la
absorbancia según la ley de Beer:
𝑃0
𝐴 = − 𝑙𝑜𝑔 𝑇 = 𝑙𝑜𝑔 𝑃
= ε𝑏𝑐

Por lo regular, la T y la A, no pueden medirse en el laboratorio porque la solución del analito

debe estar en un recipiente o cubeta transparente.
La ley de Beer, indica cuantitativamente que la cantidad de atenuación depende de la
concentración de las moléculas absorbentes y de la longitud de la trayectoria donde ocurre
la absorción. Conforme la luz atraviesa un medio que contiene un analito absorbente,
este analito es excitado y la intensidad va disminuyendo. Para una solución de analito a
una concentración dada, cuanto mayor sea la longitud del medio por el cual pasa la luz, más
absorbentes y mayor será la atenuación.
Definiciones en espectrometría:
➢ Atenuar = disminuir la energía x unidad de área del haz de radiación. En el modelo
del fotón, atenuar = disminuir el nº de fotones x segundo del haz.
➢ La radiación monocromática es la radiación de un solo color, es decir, a una única
longitud de onda o frecuencia. En la práctica, es virtualmente imposible producir un
solo color de luz.
➢ La absorbancia, 𝐴, de una disolución se relaciona con la transmitancia de manera
logarítmica. Si la absorbancia aumenta → la transmitancia disminuye.

1. Medición de transmitancia y absorbancia

Para ser medidas, la disolución estudiada debe mantenerse en un contenedor (celda o
cubeta). Pueden ocurrir pérdidas por reflexión y dispersión en las paredes de la celda las
cuales pueden ser sustanciales. Para compensar estos efectos, se compara la energía del
haz transmitido a través de una celda que contiene la disolución del analito con una que
atraviesa una celda idéntica la cual solo contiene el disolvente o un blanco de reactivos. Así
obtenemos una absorbancia experimental que se aproxima a la absorbancia real de la
disolución, es decir,
𝑃0 𝑃𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
𝐴"𝑟𝑒𝑎𝑙" = 𝑙𝑜𝑔 𝑃
≃ 𝑙𝑜𝑔 𝑃𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛

2. Espectros de absorción

Un espectro de absorción es una gráfica de absorbancia

con respecto a la longitud de onda. La absorbancia
también puede ser graficada contra el número de onda o la
frecuencia. También encontramos gráficas con log 𝐴 para
comparar disoluciones de distintas concentraciones.
Gráfica con absortividad molar como función de onda es
independiente a la concentración y se utilizan para
moléculas determinadas para la identificar especies.
Se utiliza el visible para las muestras que tienen color, y el ultravioleta para las muestras
incoloras. El color de una disolución se relaciona con su espectro de absorción.

La imagen muestra un diagrama parcial de los niveles de energía para el

sodio que muestra las principales transiciones de absorción atómica.
Las transiciones (flechas de color entre los niveles) ocurren cuando el
único electrón externo del sodio es excitado desde su estado basal
(orbital 3s) hacia los estados excitados (orbitales 3p, 4p, y 5p). Las
excitaciones son provocadas por la absorción de fotones de radiación
cuyas energías coinciden con la diferencia entre las energías de los
estados excitados y del estado basal 3s. Las transiciones entre dos
orbitales distintos se denominan transiciones electrónicas. Los
espectros de absorción atómica no suelen registrarse por las dificultades instrumentales.

3. Absorción molecular

Las moléculas experimentan tres tipos de transiciones cuantizadas según si son excitadas
por radiación ultravioleta, visible o infrarroja. En la radiación ultravioleta y visible, la
excitación ocurre cuando un electrón es promovido hacia un orbital de un nivel de energía
mayor. La energía ℎ𝑣 de un fotón debe ser la misma que la diferencia de energía entre dos
orbitales.

𝑀 + ℎ𝑣 → 𝑀 *

Además de las transiciones electrónicas, las moléculas muestran dos tipos de transiciones
de radiación inducida: transiciones vibracionales y transiciones rotacionales. Las
transiciones vibracionales se deben a que una molécula tiene una multitud de niveles
energéticos cuantizados, o estados vibracionales, asociados con los enlaces que mantienen
unida a la molécula.
La espectroscopia de absorción molecular en el ultravioleta y el visible, fue uno de los
primeros métodos para el análisis cuantitativo y la determinación de estructuras. Hay otras
técnicas mejores para el análisis estructural pero la espectroscopia de absorción UV-visible
lo supera en el análisis cuantitativo.

La radiación de la zona del espectro de UV y de visible tiene suficiente energía para excitar
_
los 𝑒 de valencia de una molécula. Es una técnica de análisis molecular.

Moléculas que absorben en el UV-Visible según el tipo de electrones:

1) Electrones de órbitas cerradas (no participan en los enlaces)

2) Electrones covalentes de enlace simple (electrones sigma)
3) Electrones no enlazantes (n) de capa externa de elementos como N, O, S,
haluros….
4) Electrones en orbitales pi (dobles i triples enlaces)

_
Los 𝑒 no enlazantes o con orbitales pi realizan transiciones electrónicas en el UV-visible.

Esquema instrumental

1. Fuentes:

Para mediciones de absorción molecular es necesario tener una fuente continua cuya
potencia radiante no cambie en forma brusca en un intervalo considerable de longitudes de
onda, es necesario un espectro continuo.

a. Descarga eléctrica. Lámparas de deuterio e hidrógeno (UV):

La excitación eléctrica del deuterio o hidrógeno a baja presión produce un espectro continuo
en la región ultravioleta. Producir el espectro requiere formar antes una especie molecular
excitada y luego disociarla para dar dos especies atómicas y un fotón ultravioleta.

*
𝐷2 + 𝐸𝑐 → 𝐷2 → 𝐷' + 𝐷'' + ℎ𝑣

También existe la lámpara de tungsteno-halógeno (yodo), denominada tubo de descarga,

y son las más utilizadas. Acostumbran a estar ambas lámparas.

Utilizan un espectro de emisión con un máximo. Para poder hacer medidas a cualquier zona
del espectro, se utiliza un doble fajo de luz que pasa por la muestra y por una referencia.

b. Térmica. Lámparas de filamento de tungsteno (visible):

Es la fuente más común de radiación visible. En la mayor parte de los instrumentos de

absorción, la temperatura de trabajo del filamento es 2870 K; así, la mayor parte de la
energía emitida corresponde a la región del infrarrojo. La lámpara de filamento de tungsteno
es útil para la región de longitudes de onda comprendida entre 350 y 2500 nm. El
inconveniente que tiene es su baja intensidad.

2. Sistema óptico

Selecciona una longitud de onda de la radiación policromática.

Por lo regular, si desea la más alta sensibilidad, las medidas de absorbancia

espectrofotométricas se hacen a una longitud de onda correspondiente a un pico de
absorción porque el cambio en la absorbancia x unidad de concentración es mayor en ese
punto. Además, la absorbancia es casi constante con longitud de onda a una absorción
máxima, lo cual produce un buen cumplimiento de la ley de Beer.

Hay dos tipos de seleccionador de onda:

a. Filtros (dos tipos)

i. Filtros de interferencia (Fabry-Perot)

En la región UV, visible e infrarroja, se basa en la interferencia

óptica para obtener una banda de radiación estrecha, de 5 a
20 nm de ancho. (↑ λ)

ii. Filtros de absorción

En la región visible, más baratos, se usan para absorber porciones seleccionadas del
espectro. Los anchos de banda efectivos de los filtros de absorción varían desde 30 a 250
nm.

b. Monocromadores

Permiten variar de manera continua la longitud de onda

de la radiación en un amplio intervalo, conocido como el
barrido del espectro.

Red de difracción:

Permite la variación de la λ de radiación. Es una red

para la región UV y visible tiene casi siempre de 300 a
2000 hendiduras/mm, y lo más común son 1200 a
1400.

Ley de Bragg:

𝑛 · λ = 𝑑 (𝑠𝑒𝑛 α + 𝑠𝑒𝑛 β)

d y n son constantes tal que, para un ángulo de incidencia fijo α, existe

un fajo monocromático difractado, β, para cada λ que no presenta
interferencias.

Para poder detectar todas las radiaciones monocromáticas en las redes de difracción hay
dos opciones:

1. Ir moviendo la red (monocromador): con una brecha (grieta) de salida. Muy flexible.
2. Tener diferentes brechas de salida (policromador). Simultáneo, pero fijo. Sólo rutina.

Introducción de la muestra.

El contenedor de la muestra (líquida o en disolución) tendrá siempre ventanas transparentes

para la región de interés. Para la región visible se usan cubetas de vidrio de silicato o de
plástico y para la región ultravioleta cubetas de cuarzo o sílice fundida.
El disolvente no ha de presentar interferencias ni absorción en la
zona de trabajo, su límite de transmisión viene dado por la λ con la
que se obtiene el 100% de transmisión.

El detector pretende convertir la señal óptica que detecta en una

señal eléctrica. Este, debería presentar un amplio intervalo de λ,
tener una ↑sensibilidad, una ↑relación señal/ruido y con respuestas
rápidas y constantes.

Los detectores de fotones pueden presentar tanto fototubos como

tubos fotomultiplicadores, los cuales proporcionan los resultados del
efecto fotoeléctrico.

En el fototubo, el nº de fotoelectrones expulsados del fotocátodo x

unidad de tiempo, debido el voltaje aplicado y atraídos por el ánodo,
es proporcional a la energía radiante del haz incidente.

El cátodo está recubierto por un mat. ionizable (metal alcalino) y el

ánodo en forma de filamento, se encuentran dentro de un recipiente
hermético de vidrio con una ventana de cuarzo por donde pasa la
radiación, la cual llega al cátodo, que desprende fotoelectrones que
van al ánodo y después vuelven al cátodo generando una corriente
eléctrica.

El tubo fotomultiplicador, parecido al fototubo pero con una serie de

electrodos y dínodos, como ánodo. Los fotoelectrones van de uno en
uno a cada dínodo (+potencial que el anterior) cada vez +acelerados
produciendo así una amplificación electrónica.

_
El efecto fotoeléctrico se basa en la emisión de 𝑒 en irradiar un material con radiación
electromagnètica.

1 2
ℎ · 𝑣 = ℎ · 𝑣0 + 2
·𝑚·𝑣

El diodo Array se basa en el uso de una red de difracción fija (policromador) que dispersa la
radiación sobre la superficie de los diodos, que recibirán una ≠ λ cada uno.

El espectrómetro se centra en convertir las intensidades radiantes en señales eléctricas a

partir de un monocromador o policromador y un transductor.
TIPOS DE ESPECTRÓMETROS

Espectrofotómetro: permite medir la relación entre la energía radiante de 2 rayos, además

podemos variar la λ continuamente (posible registro de espectros de absorción).

Fotómetro: uso de un filtro para seleccionar la λ, más simples.

APLICACIONES

En el análisis cualitativo, nos permite obtener información sobre los grupos funcionales a
partir de la forma del espectro, también podemos utilizar un patrón para la excitación del
_
los 𝑒 enlazantes en caso de tener interferencias.

_ _
Según el tipo de 𝑒 : -𝑒 de órbitas cerradas o internos (no participan en los enlaces)

_ _
-𝑒 covalentes de enlace simple (𝑒 sigma)

_
-𝑒 no enlazantes (de capa externa de N, O, S y haluros)

_
-𝑒 de orbitales π (participan en dobles y triples enlaces)

Moléculas y grupos funcionales que absorben en el UV-Visible: CROMÓFOROS

*(Cromo = color , se creía que solo los compuestos con color podían estudiarse pero en la
región ultravioleta pueden ser incoloros.)
*(Cromóforo: región molecular donde la diferencia de
energía entre dos orbitales atómicos entra dentro del rango
del espectro visible.)
Absorben en el UV: todos los compuestos orgánicos con
cromóforos (no lineales). Disoluciones incoloras con
− − 2−
cromóforos, con aniones inorgánicos: 𝑁𝑂3 , 𝑁𝑂2 , 𝐶𝑂3 ...) o

con metales de ε ↓.

Absorben en el Visible: disoluciones con color.

Moléculas y grupos funcionales que absorben en el UV-Visible:

(obtendremos senyal en caso de tener, doble enlace, triple enlace

o anillos aromáticos).

Tenemos diferentes diferencias de energías absorbidas para cada

compuesto y con la λ podemos identificarlos, según el espectro
UV-Visible podemos, una vez identificados los grupos funcionales,
determinar la estructura que conforma cada onda.

FACTORES QUE AFECTAN EL ESPECTRO DE ABSORCIÓN

Deben conocerse las siguientes características para no afectar a la

muestra.

- Concentraciones elevadas: si ↑c las moléculas interaccionaran entre ellas y la

distribución de cargas puede verse afectada alterando su capacidad de absorción
(ley Beer solo útil para disoluciones diluidas <0,01M).
- Radiación policromática: ley Beer solo útil para radiaciones monocromáticas, la ley
puede verse desviada en caso contrario.
- Variación del pH:

1) Una parte absorbe y la otra no HA (absorbe) ↔ H+ + A-(no absorbe)

2) Ambas absorben pero a ≠ λ (punto coincidente → punto isosbéstico

donde espectros coinciden, tienen el mismo coeficiente de absorción molar).

- Reacciones fotoquímicas: A + h · v ↔ B
- Reacciones con otros componentes: A + B ↔ AB
- Temperatura: termocromismo (radiaciones infrarrojas que son absorbidas por la
materia). A ↔ B
Análisis con derivatización donde un compuesto no presenta absorción el la zona del
espectro, por lo que hará falta una reacción de derivatización tal que permite obtener una
especie absorbente. Muy utilizadas en metales en forma de quelatos.

analito + reactivo cromogénico ↔ especie absorbente

(tenga o no color el reactivo, la especie final tendrá, con exceso de reactivo y Keq ↑)

En el análisis cuantitativo, nos basamos en la ley de Beer por la relación de absorbancia

y concentración. Se caracteriza por su uso en compuestos orgánicos e inorgánicos,
sensibilidad mejorable, ↑ selectividad y ↑ precisión.

Procedimiento en el MÉTODO DIRECTO:

1) Seleccionar disolvente: evitar interferencias, no absorción en la zona de trabajo y

según λ con 100% transmisión un límite.
2) Obtener espectro total: observamos gráfico absorbancia - λ
3) Seleccionar λ𝑎𝑏𝑠: equivaldrá al máximo, sin tener en cuenta las cercanas a 0.

(Pasos de 1-3 generalmente preestablecidos)

4) Preparar patrones: calibración de la máquina con 0% de T o 100% de T, con una

composición en medio iónico +similar a la muestra.
5) Cálculo de la recta de calibrado: uso de los datos de los patrones para recta (en
caso de presentar interferencias (sulfato y fosfato→especie incolora→↓A) para
contrarrestar efectos de matriz uso de la adición estándar)

𝐴 = 𝐴𝑥 + 𝐴 = 𝑎·𝑏·𝐶𝑥 (𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛𝑎𝑑𝑎 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑒𝑛) + 𝑎·𝑏·𝐶𝑒𝑠𝑡 (𝑝𝑒𝑛𝑑𝑒𝑛𝑡)

𝑒𝑠𝑡

6) Obtención de los resultados

MEZCLAS

Aplicamos análisis multicomponente, donde medimos A de cada n λ tal que:

λ1 → 𝐴1 = 𝑏 · (ε𝑎1 · 𝐶𝑎 + ε𝑏1 · 𝐶𝑏) , λ𝑘 → 𝐴𝑘 = 𝑏 · (ε𝑎𝑘 · 𝐶𝑎 + ε𝑏𝑘 · 𝐶𝑏) ...

Donde finalmente, el componente a tendrá 𝐴(λ𝑎) = 𝑏· Σε𝑖(λ𝑖) · 𝐶𝑖

Procedimiento en el MÉTODO INDIRECTO:

Realizaremos valoraciones espectroscópicas con la reacción: A + V → P

(estudiamos el gráfico de A en función de V(ml))

Los resultados podrán ser: ε(𝐴) = ε(𝑃) → ε(𝑉) > 0 (sin señal en A y P)

ε(𝐴) = ε(𝑉) → ε(𝑃) = 0 (con señal en A y V, sin P)

ε(𝐴) = ε(𝑉) → ε(𝑃) > 0 (sin señal en A y V).

Espectroscopia de fosforescencia molecular (EMISIÓN)

La fosforescencia es un fenómeno de fotoluminiscencia parecido a la fluorescencia. La
diferencia entre estos dos fenómenos, viene dada por el espín de los electrones y la
diferencia entre un estado singlete y un estado triplete. Ordinariamente las moléculas que
no son radicales libres existen en el estado basal con sus espines electrónicos
apareados.
Un estado electrónico molecular donde todos los espines de los electrones están apareados
es un estado singlete. El estado basal de un radical libre, por otro lado, es un estado
doblete, ya que el electrón impar puede asumir dos orientaciones en el campo magnético.
Cuando un par de electrones se excitan a un nivel energético mayor, se puede producir un
estado de singlete o de triplete.
En el estado de singlete excitado, el espín del electrón promovido sigue siendo opuesto al
del electrón restante. En el estado de triplete, los espines de los dos electrones se
desaparean y se vuelven paralelos.
En la imagen se muestran los estados de los espines
electrónicos de las moléculas. En a) el estado electrónico
basal donde los espines siempre están apareados y el
estado es un estado de singlete. En b) y c) los estados
electrónicos excitados. Si los espines permanecen
apareados está en un estado de singlete excitado b)pero,
si se desaparean está en un estado de triplete excitado c).
Las transiciones desde el estado de singlete excitado al
estado de singlete basal producen fluorescencia molecular. Esta transición
singlete-singlete es +probable por lo tanto, el tiempo de vida de un estado de singlete
−5
excitado es corta (>=10 s).
Las transiciones de un estado de triplete excitado a un estado de singlete basal producen
fosforescencia molecular. Debido a que la transición triplete-singlete produce un
cambio en el espín del electrón, es -probable. Por lo que, el estado de triplete tiene un
−4 4
tiempo de vida más largo (de 10 a 10 s).
El tiempo de vida largo de la fosforescencia es una de sus desventajas. Para aumentar la
eficiencia, la fosforescencia se realiza a bajas temperaturas en medios rígidos, como los
vidrios. Otro método es absorber el analito en una superficie sólida o encerrarlo en una
cavidad molecular (micela o cavidad de ciclodextrina), la cual protege el estado de triplete.
Técnica conocida como fosforescencia a temperatura ambiente.
Por su baja intensidad, la fosforescencia se aplica menos que la fluorescencia.
La instrumentación para la fosforescencia es más compleja que la que se utiliza para
fluorescencia. Los instrumentos de fosforescencia retrasan la medición de fosforescencia
hasta que la fluorescencia ha decaído a casi cero. Los instrumentos de fluorescencia tienen
fosforoscopios, que permiten que se utilice también para mediciones de fosforescencia.

Espectroscopia de absorción atómica al UV-visible.

En la espectroscopia de emisión, los átomos del analito son excitados mediante calor o
energía eléctrica. La energía suele ser proporcionada por un plasma, una llama, una
descarga de baja presión o por un láser de alta energía.
Esquema instrumental

A una temperatura suficientemente alta, la mayoría de los compuestos se rompen para dar
átomos en fase gaseosa. La absorción atómica (AA) es la absorción de radiación
electromagnética de partículas atómicas. La muestra se ha de atomizar, convertirla en vapor
atómico (2000-3000K) antes del proceso de absorción.
FUENTE DE RADIACIÓN: emite radiación electromagnética discontínua (luz
monocromática)
En AA se emplean lámparas específicas (dos tipos) dependiendo del elemento que se va
a determinar, las cuales son capaces de emitir una línea atómica característica:

· Lámpara de cátodo vacío (cátodo hueco): específica para cada

elemento y +común para la medición de absorción atómica.

Dentro hay un gas noble puro (He, Ne, Ar (1-2mm Hg)).

El gas se ioniza al crear la diferencia de potencial entre ánodo y cátodo,

bombardeando el interior del cátodo hecho con el metal o recubierto por
el elemento de interés. Así se arrancan los átomos de la superficie del cátodo que están
en un estado excitado y al volver a su estado fundamental, emiten sus bandas
características, que suelen pertenecer a la zona del UV y visible.

Se usan con frecuencia como fuente en la espectrometría de fluorescencia atómica.

Estas fuentes tienen la ventaja de eliminar interferencias porque no hay dos elementos
que presenten absorción a las mismas λ (el espectro de átomos gaseosos consiste en
líneas estrechas con anchuras de 0,001 nm).
· Lámparas de descarga sin electrodos (EDL): Una pequeña cantidad del elemento o sal
del mismo, se encuentra sellada en el interior de un bulbo de cuarzo colocado dentro de un
cilindro cerámico sobre el que se enrolla la antena de un generador de radiofrecuencia. Al
aplicar un campo de radiofrecuencia, su energía asociada hará que se vaporicen y
exciten los átomos en el interior del bulbo, emitiendo su espectro característico.
INTRODUCCIÓN DE LA MUESTRA:
1) Nebulizador + atomizador (Llama):
La muestra (mín. 1-2 ml) se introduce en forma de
aerosol generado a partir de una disolución,
utilizando técnicas de nebulización neumáticas: la
disolución es aspirada por un capilar y es pulverizada
por el impacto de un gas a presión, generalmente el
oxidante.

Se crea una caída presión en el papilar por la elevada velocidad a través del
extremo del capilar y la muestra se ve forzada a subir por el capilar (ya que Patm >
Pcapilar), se produce el efecto Venturi.

A este tipo se les llama quemador de flujo laminar,

proporcionan una llama estable con una trayectoria larga
que aumenta la sensibilidad y la reproducibilidad. El
aerosol, el oxidante y el combustible se queman en un
quemador provisto de una ranura que produce una llama
de 5 a 10 cm de longitud (b).
La mezcla de la muestra como aerosol y el oxidante
se mezclan con el combustible en el nebulizador
donde hay pantallas de mezcla o deflectores, en los
que chocan las gotas más grandes y son purgadas.
Preparación de la muestra i atomización:
Temperatura de la llama: tiene que producir atomización pero no excitación/emisión ni
ionización

La mezcla más utilizada es acetileno-aire, para elementos fácilmente

atomizables (Cu, Pb, Zn, Cd), mientras que para elementos que necesitan
temperaturas más elevadas, se utiliza la mezcla acetileno-oxigeno.
La temperatura de la flama no es homogénea.

2) Generador de hidruros + atomizador (Llama):

Sistema que genera un flujo continuo de vapor, consta de una bomba

peristáltica que continuamente bombea muestra y reactivos a un tubo manifold
(tubomúltiple) donde se produce la mezcla. Esta fluye a través de un tubo serpentín donde
se forma el hidruro del elemento e hidrógeno. El gas portador (Ar o N2) introduce el hidruro
y el hidrógeno en un recipiente separador gas-líquido para obtener el hidruro gaseoso,
este es transportado a la celda de absorción de cuarzo montada sobre el mechero y
calentada con llama aire-acetileno o eléctricamente. El vapor es atomizado en la llama
produciendo la absorción de luz.
Analito en un estado de oxidación particular para máx. sensibilidad (muestra, los
estándares y el blanco se tratan antes para tener el analito en el estado de oxidación
apropiado por ej, el As+5 a As+3).
1. Formación radicales H·
𝑁𝑎𝐵𝐻4 + 3 𝐻2𝑂 + 𝐻𝐶𝑙 ↔ 𝐻3𝐵𝑂3 + 𝑁𝑎𝐶𝑙 + 8𝐻·

2. Formación del hidruro del elemento E

𝑛+
8𝐻· + 𝐸 ↔ 𝐸𝐻𝑛(𝑔) + 𝐻2

3) Horno de Grafito (atomizador sin flama):

En este sistema, la atomización tiene lugar en un tubo

de grafito abierto en ambos extremos con un orificio central para la introducción de la
muestra con un inyector automático. Este se ajusta a dos contactos eléctricos en los
extremos y se mantienen dentro de un módulo refrigerado por agua. Dos corrientes de gas
inerte circulan por el módulo: una corriente externa que evita la entrada de aire exterior y
permite que dentro del tubo se alcance la atomización de la muestra y una corriente interna
que fluye los extremos del tubo y sale por el orificio central.

La cantidad de analito se introduce con microjeringa entre 1-100 μL, se utiliza para
líquidos y este horno tiene menor ruido de fondo.

Existen dos tipos de hornos de grafito: con plataforma incorporada y sin plataforma. Los
hornos provistos de plataforma (Plataforma L'vov → calentamiento por calor irradiado y
no por contacto. ↑sensibilidad por el calentamiento homogéneo de la muestra) poseen una
pieza de grafito pirolítico sólido que contiene una depresión central para contener el
líquido. La muestra se evapora y se calcina sobre la plataforma según el programa de
temperatura establecido previamente.

1. 110 ºC : evaporación Dte. (disolvente) en ~ 20 s.

2. 1400 ºC : calcinación MO (muestra orgánica) en ~ 60 s.
3. 2100 ºC : atomización y medida en ~ 10 s.

Existe un mínimo de contacto físico entre el tubo y la plataforma, ya que la plataforma es

sostenida sólo por los bordes. El efecto de la plataforma es retrasar la atomización de la
muestra. Se controla dentro del tubo la ∆𝑇, ya que un aumento brusco retrasa la
atomización, la muestra no tiene el tiempo de contacto suficiente con la pared del horno. Así
se obtienen picos más reproducibles.
Análisi cuantitativo directo Ley de LAMBERT-BEER:

𝐼
𝐴 = − 𝑙𝑜𝑔 𝐼0
= ε𝑏𝑐

RECTAS DE CALIBRADO:

1. Elección disolvente
2. Características según el fabricante (en función de esto, escogemos la λ).
3. Elección λ trabajo (sensibilidad y intensidad)
4. Recta calibrado con patrones (matriz semblante)
5. Interpolación señal muestra

Los límites de detección en AA: llama entre 1-20 ppb (ng/mL); horno de grafito
0.002-0.01 ppb.

Rangos de trabajo: están entre ppbs y ppms.

ADICIÓN ESTÁNDAR

Tipus de analitos:

- Todos los metales

- Algunos no metales (B, P)

El fabricante da el rango de trabajo para cada λ óptima y para cada lámpara.

Exactitud: el error relativo de AA de llama es del orden de 1-2%

Aplicaciones: METALES

➔ Análisi de aguas (dureza, Fe, Si, Al…)

➔ Análisis de metales en productos alimenticios
➔ Análisis de sólidos
➔ Análisis clínicos

Aplicaciones: METALES EN DISOLUCIÓN

Interferencias:

1) Espectrales

Elementos con longitud de onda similar: Por ejemplo, en el análisis de Cu se utiliza

la línea de 324.754 nm; pero si hay Europio, que tiene una línea de 324.753 nm, es
preciso utilizar otra λ aunque sea menos sensible para evitar interferencias.
 2) Químicas: formación de especies estables (no atomizables)

2+ 3−
3 𝐶𝑎 + 2 𝑃𝑂4 ⇔ 𝐶𝑎3(𝑃𝑂4)2 (sal no volátil)

Soluciones:

- Temperaturas de llama más altas

- Adición de productos quelantes (una sustancia que forma complejos con
iones de metales pesados) (EDTA):

3−
𝐶𝑎3(𝑃𝑂4)2 + 3 𝐸𝐷𝑇𝐴 ⇔ 3 𝐶𝑎𝐸𝐷𝑇𝐴 (𝑠𝑎𝑙 𝑣𝑜𝑙á𝑡𝑖𝑙) + 2 𝑃𝑂4

3) Ionización (metales alcalinos)

Una fracción de los átomos se encuentran ionizados a la T de trabajo, lo que

provoca una disminución en la absorción, ya que el átomo y el ión absorben a λ
diferentes; ésto se solventa utilizando llamas menos energéticas.

Espectroscopia de emisión atómica al UV-visible.

Procesos:

Esquema instrumental:

ESPECTROSCOPIA DE EMISIÓN CON FUENTE DE PLASMA:

Las fuentes de plasma son de elevada energía, altamente sensibles y reproducibles, y con
intervalos de linealidad elevados.

Introducción de muestra:

1. Nebulizador + atomizador →

2. Generador de hidruros + atomizador

Solo aplicable a aquellos elementos susceptibles de

generar hidruros (As, Bi, Sb, Se, Sn, Te).
→→→→
Formación del hidruro de elemento E:
𝑛+
𝑁𝑎𝐵𝐻4 + 3𝐻2𝑂 + 𝐻𝐶𝑙 + 𝐸 ⇔ 𝐸𝐻𝑛(𝑔) + 𝐻2
ATOMIZADOR

Plasma:
- gas ionizado (en un 1%)
- eléctricamente neutro en su conjunto
- confinado en un campo electromangético

Obtenció del plasma:

Se obtiene cuando se somete al gas a una descarga eléctrica, sus iones pasan a ser
plasma y son capaces de absorber la potencia de una fuente externa y mantener una
temperatura tal que la ionización adicional sustenta el plasma indefinidamente.
↓
Generador de radiofrecuencias en una corriente de gas:
plasma inducido por acoplamiento o plasma acoplado inductivamente (ICP)

Es una técnica de emisión atómica

↓
La formación de un plasma acoplado inductivamente sigue los pasos siguientes:
1. El gas (Ar) fluye por un tubo de cuarzo.
2. Rodeando la parte superior del tubo hay una bobina de inducción alimentada por un
generador de radiofrecuencias que originan un campo magnético.
3. La ionización del gas se inicia mediante una chispa.
4. El campo magnético induce los iones y electrones a moverse en órbitas circulares.
5. Los electrones acelerados (por calentar el gas)colisionan con los átomos y
transfieren energía.
6. Los electrones absorben suficiente energía del campo eléctrico para
mantener la temperatura y asegurar la continuidad del plasma.
Se utilizan corrientes eléctricas de gas que pasan a través de tres tubos
concéntricos:
- Uno como refrigerante (el exterior)
- Uno para mantener el plasma (gas plasmógeno)
- Uno para introducir la muestra en el plasma (el más interior)

INSTRUMENTACIÓN:
La antorcha del plasma o pluma tiene un gradiente vertical de temperatura, está sobre la
bobina de inducción.

Plasma: tiene un núcleo no transparente, blanco brillante y muy

intenso.
Al penetrar la muestra en el plasma, se producen la
desolvatación, volatilización, atomización y excitación, y la
muestra excitada emite su señal característica. +temperatura
del plasma que en la llama en AA → atomización es más
completa y menos interferencias (conc. interf. <<< conc. e-)

PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS
Ventajas:
- Pocas interferencias, de matriz y entre analitos, ya que la mayoría disminuyen al
aumentar la temperatura de la fuente.
- Permite la determinación de elementos que forman compuestos refractarios
(resistentes a la descomposición térmica) como B, P, Ti, V, Al, W, U, Zr, Nb.
- Permite la determinación de metales y no metales como B, P, S y de Cl, Br, I.
- Rango de linealidad elevado (unos 5-6 órdenes de magnitud de concentración).
Por ejemplo, el Cu a 324.75 nm puede ser determinado entre 0.002 y 200 ppm (en
AAS entre 0.1 y 5 ppm).
 - Ausencia de autoabsorción (el centro de la llama está más caliente que el exterior
y los átomos no excitados del exterior absorben radiación emitida de la llama). No se
da ya que la temperatura de la sección transversal del plasma es constante.
- Reproducibilidad similar.
- ↑Sensibilidad.
- Capacidad de análisis multielemental. En AAS se determina un analito cada vez,
en ICP se detectan tantos elementos como detectores (60 analitos/muestra máx.).

Inconvenientes:
- Interferèncias. Ionización (a concentraciones bajas).
- Autoabsorción (a concentraciones altas).
Centro del plasma más caliente que los laterales → átomos excitados envueltos de
átomos no excitados.

- Interferencias. Espectrales (por

la determinación multielement):
escoger otras λ.
ANÀLISI CUANTITATIVA DIRECTA
Rectas de calibrado:
● Calibración directa
● Método de adiciones estándar
● Patrón interno: se añade a la muestra una cantidad conocida de una sustancia
patrón diferente a los analitos a determinar y se compara la respuesta del
instrumento con la respuesta de concentraciones conocidas del analito.
↓
Problemas con la matriz de les muestras

ICP
Aplicacions.
↓ Metalls i no metalls (dades en μg/L (ppb)) . TAULA COMPARATIVA LD (ppb) entre AAS y ICP ↓

Características de los
métodos espectroscópicos →

Límites de detección típicos

para las principales técnicas →

← Costes
aproximados de
la
instrumentación
Intervalo analítico de trabajo (intervalo de concentraciones en
el qué se puede trabajar sin recalibrar el sistema) →

MÉTODOS DE SEPARACIÓN

Centrados en la eliminación de interferencias en estudiar un analito.

1. Destilación: ebullición selectiva y condensación según la volatilidad.

2. Extracción líquida: solución orgànica + solución acuosa (immiscibles),
introducimos un reactivo (TODGA) que hace reaccionar al analito.
3. Extracción sólida: uso del “eluant” de manera que el analito queda retenido en este
mientras que la fase sólida y líquida restante de la muestra pasa de largo.
4. Cristalización: generar presión sobre el elemento estudiado para poder solidificar el
analito y poder así extraerlo.
5. Precipitación: Uso de una solución conocida que hace precipitar el analito de la
muestra sin interaccionar con el resto de la muestra.
6. Cromatografía: distribución de los componentes en dos fases (FE y FM) de manera
que una queda fija, FE, mientras que la otra es móvil,FM.

CROMATOGRAFÍA

Se estudian mezclas, con 2 o + analitos, para cuantificar o identificar sus

diferentes componentes. Condiciones:

- muestra debe ser soluble en la FM (líquido o gas)

- muestra debe poder interaccionar con la FE (sólida o líquida)

Según las diferentes interacciones analito-FE se dan diferentes equilibrios,

diferentes velocidades → diferentes tiempos de salida

Al salir, son detectados por el detector que según la respuesta obtenida por el aparato se
obtendrá el cromatograma.

Este gráfico nos permite distinguir los diferentes componentes o sus características, los
picos +separados = +efectivos.
CALIDAD DE LA SEPARACIÓN

Según el tiempo de retención del componente se realiza un análisis cualitativo mientras que
la amplitud del pico sirve para el análisis cuantitativo.

N = nº de platos teóricos, la columna cromatográfica está formada N platos teóricos, una

série de capas estrechas horizontales. Entre plato y plato se mueve el soluto, realizando así
diferentes equilibrios según la composición de este. La eficacia de la cromatografía vendrá
dada por la capacidad de dar picos estrechos.
𝑡 2 2 6
+N = +separación = mejor estudio → 𝑁 = 16 · ( 𝑤𝑟 ) (𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 10 − 10 )
𝑏

𝑅𝑠(resolución): grado de separación de la base del pico (según 𝑡𝑟 y 𝑤𝑏)

2 · (𝑡2−𝑡1)
𝑅𝑠 = 𝑤1+𝑤2
(cuanto + cerca de 1,5, mejor será la medida, +pegado a la base)

A partir de las medidas obtenidas por los picos de la cromatografía se pueden identificar los
componentes de mezclas complejas espectroscópicas.

Para un análisis cuantitativo utilizamos, generalmente, el método de calibración con patrón

externo. Preparamos una série de patrones (similares a la problema) y se realiza
cromatograma y representamos (recta calibrado) de el área o altura del pico según su
concentración (eliminar interferencias, puntos, y R=0.999).

TIPOS DE CROMATOGRAFÍA

1) Según la disposición de la FE

· Plana: +sencillo, FE (papel poroso o sólido) sobre una placa de

vidrio por la que se desplaza la FM por capilares o gravedad.

· Columna: FE dentro de un tubo de vidrio o metal (columna) por el

que circula la FM por gravedad o presión.

2) Según la finalidad

· Preparativa: separar y recolectar diferentes fracciones de

compuestos, purificar muestra para otros análisis.

· Analítica: separar, detectar y cuantificar los componentes de muestra complejas.

3) Según la FM

· FM = líquido → CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

INSTRUMENTOS:

Inyector: de 2 tipus (cambios constantes de uno al otro):

·LOAD: FM de la bomba→columna directa (con el loop siempre lleno)

·INJECT: FM de la bomba→loop→columna

Detector: utilizado para separar los ruidos y detectar el analito, ↑sensibilidad,

respuesta rápida, poco selectivo y volumen interno mínimo.Según el analito:

·D. de ABSORCIÓN UV-VIS (c.orgánicos)

·D. de FLUORESCENCIA UV-VIS (c.aromáticos)

·D. CONDUCTIMÉTRICO (c.iónicos)

·D. de ÍNDICE DE REFRACCIÓN (universal): miden la diferencia del índice de

refracción entre la FM y el FM+analito.

FE:

La técnica +utilizada es la HPLC en la que se introduce la FM a presión en la bomba

(+sensible, efectiva, exacta y ↑aplicabilidad).

La espectrometría de masas permite separar iones según su masa, los analitos

separados por cromatografía se introducen en el espectrómetro situado junto a la
columna. (cada pico de la espec es un trozo del comp.)
 FM: +polar H2O y -polar Hexano FE:+polar Si y -polar 𝐶18

a) CROM. DE ABSORCIÓN: (solutos no polares)

FE: sólido

FM: disolventes orgánicos

b) CROM. DE EXCLUSIÓN: (solutos con ↑pesos moleculares)

FE: gel poroso

FM: disolventes orgánicos (permeación) o acuosos (filtración)

c) C. INTERCAMBIO IÓNICO: (solutos iónicos con ↓pesos moleculares)

FE: resina(cargada + o -) → +uso = copolímero de estireno-divinilbenceno

FM: disoluciones acuosas tamponadas

Los iones de la muestra interaccionan con la resina,

Intercambiadores: para ↓anión aminos, para ↑anión ion amonio cuaternario,

para ↓catión grupo carboxílico, para ↑caión grupo sulfúrico.

Se centra en la retención, elución y regeneración del analito.

El uso de cambios de pH o gradientes, hace que el

analito de la columna interaccione con la resina y
vaya al detector.

La mayoría de los detectores son de conductividad,

el índice de refracción en los azúcares (sin grupos
cromóforos, x2 enlace, no UV)

d) CROM. DE PARTICIÓN: (solutos no iónicos i ↓polar)

FM y FE en soluciones diferentes immiscibles.

De fase normal De fase inversa

FE: líquido polar FE: liquido apolar

FM: líquido apolar FM: líquido polar

*similares disuelven similares → los compuestos +parecidos

a la FE reaccionan y salen +tarde

-f.normal obtenemos primero compuestos apolares

-f.inversa obtenemos primero compuestos polares

 La cromatografía puede realizarse isocrática, con FM de composición constante o
de gradiente, con FM con composiciones diferentes o variantes. Y la FM líquida la
conseguimos a partir de filtrado o desgasificación de He.

·FM = gas→ CROMATOGRAFÍA GASES

CROMATOGRAFIA DE GASES

Fase móvil (FM) ⇉ Gas ⇒ gas portador, no interacciona solo transporta

Fase estacionaria (FE) ⇉ si interacciona
● Líquido ⇒ cromatografía GAS - LÍQUIDO (CGL)
● Sólido ⇒ cromatografía GAS - SÓLIDO (CGS)
Separación en base a:
1) Volatilidad de los analitos
- La volatilidad depende del punto de ebullición de cada analito.
- Volatilidad ⇔ Temperatura.
- El aumento de la temperatura provoca una aceleración del cromatograma.
- Las especies con temperatura de ebullición más elevadas, salen más tarde
en el cromatograma.
- Nos interesa que los picos tengan una buena separación pero que el proceso
sea rápido.

2) Solubilidad en la FE ⇒ Polaridad
- Esta se utiliza cuando las volatilidades (puntos de ebullición) son muy
similares, entonces la FE interviene.
- Las especies tienen una mayor interacción si són más similares
estructuralmente con la FE, por lo tanto: más parecido a la FE → más se
“entretiene” en la FE → sale más tarde en el cromatograma.

SERIE ELUOTRÓPICA
hexano < yodometano < propanona < etanol < agua
Orden eluciónde la especie ⇒ Orden de polaridad

HCs < Haluros de HCs < éteres < cetonas < alcoholes < ácidos carboxílicos < agua

ESQUEMA INSTRUMENTAL:
 1. Tipos de columnas

Capilar o tubular abierto ↑

2. Fases móviles
Debe ser un gas inerte, que no interaccione con los analitos (transportador) y
compatible con el detector.

- Hidrógeno
- Helio (+ común)
- Nitrógeno
- Mezcla de gases: Argón - Metano
3. Fases estacionárias

a. Cromatografía Gas - Líquido:

Muestra líquido volátil fase gas(entra por el capilar y se volatiliza) la FE será:
➔ Líquido sobre matriz sólida inerte.
➔ Estable a la temperatura de trabajo → temperaturas altas (200-300 ºC).
 ➔ Reacciones reversibles con analito → el analito debe interaccionar, entrar y
salir todo el rato fácilmente → baja viscosidad.
➔ Similitud estructural con analito,(analito no polar = FE no polar).

Fases estacionarias comerciales:

◆ POLIDIMETILSILOXANO: Apolar. T < 350 ºC. Uso general →
Hidrocarburos, Hidrocarburos aromáticos policíclicos, bifenilos
policíclicos.
◆ POLI(FENILMETIL)SILOXANO: Polaridad intermedia. T < 250 ºC. →
Drogas, esteroides, pesticidas.
◆ POLIETILENGLICOL CARBOWAX: Polar. T < 250 ºC. → Ácidos
libres, alcoholes, éteres.

b. Cromatografía Gas - Sólido:

Separación: equilibrios de adsorción. Sirve
para cuando tengo muestras en gas. La
FE será:
➔ Sólida.
➔ Estable a la temperatura de
trabajo.
➔ Reacciones reversibles con los analitos.
➔ Superficie elevada: separación por adsorción→ +superficie=+
interacción.

4. Inyectores

5. Detectores
1. Detector de conductividad térmica (TCD)
conductividad térmica → resistencia. Universal, ppm y
3
rango de trabajo: 10
 2. Detector de ionización de flama (FID)
7
Solo compuestos orgánicos, ppb y rango de trabajo: 10
Al principio el potencial es constante, en entrar el analito el
potencial cambia, da radicales libres (con carga).

3. Detector de Captura Electrónica (ECD)

- Compuestos con alta afinidad electrónica
(halogenados,..)
- ppt
2
- Rango de trabajo: 10
+ −
𝑁2 + β ⇔ 𝑁2 + 𝑒

↓
entra el analito
↓
− −
𝑀 + 𝑒 ⇔ 𝑀 + 𝑒𝑛𝑒𝑟𝑔𝑖𝑎
− +
𝑀 + 𝑁2 ⇔ 𝑀 + 𝑁2 + 𝑒𝑛𝑒𝑟𝑔𝑖𝑎

Tabla resumen
de detectores →

APLICACIONES DE LA CG

1. Análisi de gases nobles: CGS + TCD

2. Análisi de compuestos organoclorados en el aire: CGL + ECD
3. Análisi de hidrocarburos saturados en muestras de sedimentos: CGL + FID
4. “Para datar momias”.
POLARIDAD:
Es una medida del campo eléctrico producido por la separación de cargas dentro de la
molécula. Las fases estacionarias polares contienen grupos funcionales como -CN, -CO, y
-OH. Las fases estacionarias de hidrocarburos y los siloxanos dialquil son no polares,
mientras que las fases de poliéster son altamente polares. Los analitos polares incluyen
alcoholes, ácidos y aminas; los solutos de mediana polaridad incluyen éteres, cetonas y
aldehídos. Los hidrocarburos saturados son no polares.