La reacción antígeno-anticuerpo se produce cuando un antígeno se une al anticuerpo
específico que lo reconoce. Esta unión puede manifestarse de varias formas como la
neutralización de toxinas, la precipitación al formar agregados, o la aglutinación de partículas o
células. Las técnicas como la inmunodifusión, electroforesis, inmunofluorescencia y fijación de
complemento se basan en medir las manifestaciones físicas de la unión antígeno-anticuerpo.
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La reacción antígeno-anticuerpo se produce cuando un antígeno se une al anticuerpo
específico que lo reconoce. Esta unión puede manifestarse de varias formas como la
neutralización de toxinas, la precipitación al formar agregados, o la aglutinación de partículas o
células. Las técnicas como la inmunodifusión, electroforesis, inmunofluorescencia y fijación de
complemento se basan en medir las manifestaciones físicas de la unión antígeno-anticuerpo.
La reacción antígeno-anticuerpo se produce cuando un antígeno se une al anticuerpo
específico que lo reconoce. Esta unión puede manifestarse de varias formas como la
neutralización de toxinas, la precipitación al formar agregados, o la aglutinación de partículas o
células. Las técnicas como la inmunodifusión, electroforesis, inmunofluorescencia y fijación de
complemento se basan en medir las manifestaciones físicas de la unión antígeno-anticuerpo.
La reacción antígeno-anticuerpo se produce cuando un antígeno se une al anticuerpo
específico que lo reconoce. Esta unión puede manifestarse de varias formas como la
neutralización de toxinas, la precipitación al formar agregados, o la aglutinación de partículas o
células. Las técnicas como la inmunodifusión, electroforesis, inmunofluorescencia y fijación de
complemento se basan en medir las manifestaciones físicas de la unión antígeno-anticuerpo.
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Reacción antígeno anticuerpo
Condori López Paola E.1 1 Univ. Tercer Año Facultad de Odontología UMSA
Resumen
Es la complementariedad de su estructura, que hace posible que un antígeno se una con el
anticuerpo específico y forme el complejo antígeno-anticuerpo. En las reacciones antígeno- anticuerpo se distinguen 2 fases: la primera consiste en la unión del antígeno con el anticuerpo y la segunda es la manifestación que resulta de dicha unión. La primera fase se realiza por la combinación de áreas pequeñas tanto del antígeno como del anticuerpo, denominadas respectivamente determinante antigénico y sitio activo, que al unirse forman un complejo antígeno-anticuerpo. La reacción es reversible siguiendo la ley de acción de masas, existen factores externos que pueden modificar dicha unión, como son: el pH, la temperatura y la fuerza iónica.
Las técnicas de identificación de antígenos o de anticuerpos se basaron en la reacción de
ambos elementos y en la medición de sus manifestaciones físicas como fenómenos naturales de la unión entre antígeno y anticuerpo in Vitro.
Palabras clave:
Antígeno, Anticuerpo, Aglutinación.
INTRODUCCIÓN El antígeno es una sustancia extraña que se introduce al interior de nuestro organismo provocando una respuesta inmunitaria estimulando la producción de anticuerpos, la reacción antígeno-anticuerpo es la especificidad en la que un antígeno solo puede combinarse con el anticuerpo que lo induce a una estrecha relación. La unión entre éstos se lleva a cabo en la formación de un enlace entre la región fijadora del antígeno de la inmunoglobulina y el determinante antigénico.
Esta reacción antígeno-anticuerpo puede conducir in vivo a la neutralización del efecto tóxico de una toxina bacteriana o a la inhibición de la multiplicación de un virus, también puede ser observable directamente como la formación de un precipitado o la aglutinación celular, a la vez puede presentar reacciones biológicas subsiguientes a las anteriores (lisis bacteriana).
PROPIEDADES DE LA UNIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO 1.- Especificidad: capacidad de los anticuerpos para diferenciar entre antígeno (epttopos) estructuralmente muy próximos o parecidos. Los anticuerpos reaccionan de forma más eficaz con los antígenos que desencadenaron su producción (antígenos homólogos), que con antígenos similares u otros antígenos (antígenos heterólogos). Los elementos estructurales del epitopo que destacan de la masa central del inmunógeno se comportan como inmunodominantes, y son particularmente significativos en la determinación de la especificidad. Estos anticuerpos son muy discriminadores y distinguen fácilmente entre dos moléculas que difieren en un carbono, o incluso entre isómeros de la misma molécula.
2.- Afinidad: fuerza de unión entre el antígeno y el anticuerpo en el inmunocomplejo
elemental definida por la suma de las fases de unión y repulsión que concurren en los lugares de interacción. Los complejos inmunitarios de escasa afinidad son más persistentes in vivo y tienden a inducir fenómenos de autoinmunidad. Los complejos de alta afinidad son eliminados con más eficacia y no tienden a inducir fenómenos autoinmunitarios.
3.- Avidez: fuerza de unión de un antígeno polivalente con su población de anticuerpos de
especificad múltiple; es decir, la afinidad global de todas las moléculas que constituyen el retículo o complejo antígeno-anticuerpo.
EXPRESIÓN DE LA UNION ANTIGENO-ANTICUERPO IN VITRO Dependiendo de la naturaleza del antígeno y del anticuerpo y de las condiciones de la reacción se pueden observar diferentes tipos de reacciones serológicas:
1. Reacción de Neutralización
Mediante anticuerpos específicos (sueros) se pueden neutralizar antígenos como toxinas, virus o enzimas, su unión provocará la neutralización y ast no podrá ejercer su efecto toxico. Los anticuerpos neutralizantes requieren un solo tipo de combinación con el antígeno para poder actuar y ast pueden ser univalentes, bivalentes o multivalentes. Un antisuero que contiene anticuerpos neutralizantes contra una toxina se denomina "antitoxina".
2. Reacción de Precipitación
La reacción de precipitación ocurre cuando se combina un anticuerpo divalente, con un
antígeno soluble y conlleva a la formación de agregados que precipitan en un punto de concentración óptima entre ambos. Estas reacciones de precipitación son fácilmente observables "in vitro", especialmente mide concentraciones de anticuerpos. Para que la precipitación ocurra en forma máxima se necesita que tanto el antígeno como el anticuerpo estén en concentraciones óptimas, cuando cualquiera de los reaccionantes están en exceso no se pueden formar grandes agregados antígeno-anticuerpo.
Según su clasificación son:
2.1. Inmunodifusión Pasiva
a. Prueba del anillo o prueba de la interfase: se realiza deslizando unas gotas de la solución de antígeno sobre la superficie de un suero sin diluir, si se produce la reacción aparece un anillo de precipitación en la interfase suero.
b. Difusión en Gel: técnica de uso frecuente y son:
Difusión simple en tubo: se realiza en un gel de Agar, que
contiene el anticuerpo o el antígeno solidificado en el interior del tubo, sobre cuya superficie se añade, en fase líquida, una solución de antígeno o de anticuerpo según el caso.
Doble difusión en tubo: idéntica a la anterior con la diferencia
entre la columna de Agar que contiene el anticuerpo y la fase que contiene el antígeno se interpone una columna de Agar, en cuyo espesor se produce el encuentro de ambos reactantes.
Doble difusión en placa: se realiza en pocillos perforados en una
capa de Agar, en los que se vierten soluciones de antígenos o anticuerpos y la difusión periférica en el espesor del Agar de ambos reactante se encontrará a cierta distancia de los pocillos, produciendo bandas de precipitación.
2.2. Inmunodifusión Activa
a. Contrainmunoelectroforesis: se realiza en geles de Agar, en la placa se abren dos
pocillos; uno contendrá antígeno y el otro anticuerpo, luego la placa es sometido a un campo electroforético, antígeno y anticuerpo emigran uno hacia el otro hasta encontrarse y producir una banda de precipitación si existe especificidad entre los dos reactantes.
b. Electroinmunoanálisis
Electroinmunodifusión en dos dimensiones: los antfgenos son
sometidos a un campo electroforético en un gel que contiene el anticuerpo. El anticuerpo permanece fijo y el antígeno emigra en el gel formándose precipitados en forma de "cohetes".
Electroforesis cruzada de Laurell: se realiza una electroforesis de
las proteínas a diferenciar. Una vez efectuada la separación, la placa de Agar se adhiere a otra que contiene los antígenos y se somete a una electroforesis cruzada, produciéndose una precipitación en forma de cohetes.
3. Reacción de Aglutinación
Cuando un antígeno particulado (bacterias, células o hematíes) reacciona con su anticuerpo
específico (divalente por lo menos), se observa la formación de grumos o agregados de estas partículas, esto se conoce como aglutinación. En estas reacciones el determinante antigénico está sobre la superficie de una partícula o de una célula.
Estas reacciones son más sensibles que las de precipitación para detectar pequeñas cantidades de anticuerpos, debido a que relativamente pocas moléculas de anticuerpo pueden unir efectivamente un gran número de partículas de antígeno en grumos gruesos macroscópicamente visibles. Es por esto que cuando queremos aumentar la sensibilidad de una reacción de un antígeno soluble con su anticuerpo específico, se transforma el antígeno soluble en particulado adsorbiéndolo o uniéndolo químicamente a partículas como esferas de látex o arcilla coloidal y de esta manera pueden ser detectados los anticuerpos por reacciones de aglutinación, conocido como AGLUTINACIÓN PASIVA.
También se pueden aglutinar glóbulos rojos y este fenómeno se conoce como
HEMAGLUTINACIÓN.
4. Reacción de Inmunofluorescencia
Es una técnica donde las moléculas de anticuerpos son convertidos en sustancias
fluorescentes, uniéndoles químicamente a compuestos orgánicos fluorescentes tales como isotiocianato de fluorescencia (fluorescencia verdosa) o rodamina (fluorescencia rojiza). Esto no altera la especificidad del anticuerpo pero hace posible su detección cuando está unido a células o tejidos usando un microscopio para fluorescencia. Los anticuerpos fluorescentes son de considerable utilidad en microbiología diagnóstica.
Para demostrar la presencia de antígenos o células bacterianas utilizando anticuerpos
fluorescentes, existen dos procedimientos: el método directo y el indirecto.
4.1. En el método directo, el anticuerpo marcado se utiliza para añadir contra el antígeno específico. La preparación cubierta con una solución del anticuerpo fluorescente, se incuba durante un tiempo en una estufa, para que se produzca la reacción antígeno-anticuerpo. Se lava y se observa en el microscopio de fluorescencia.
4.2. En el método indirecto, la presencia del anticuerpo específico sobre la
superficie de la célula es detectada por el uso de otro anticuerpo fluorescente dirigido contra el anticuerpo específico.
5. Reacción de fijación de Complemento
Una propiedad importante del sistema del complemento es que sus componentes son enzimáticamente alterados durante la reacción, de modo que no reaccionarán en una nueva secuencia de reacciones, es decir si el complemento es consumido durante las reacciones antígeno-anticuerpo esto es llamado FIJACIÓN DE COMPLEMENTO y ocurre cuando un anticuerpo de tipo IgG o IgM reacciona con el antígeno en presencia de complemento, aun cuando éste no sea requerido en la reacción.
La prueba de fijación de complemento se lleva a cabo en dos fases. En la fase primera se
mezclan el suero del paciente (previamente calentado a 56°C.) y el antígeno en presencia de una cantidad determinada de complemento; esta mezcla es generalmente incubada durante 30 minutos a 37°C. Si se forman los complejos antígeno-anticuerpo, el complemento es fijado.
En la segunda fase se añade el sistema indicador que consiste en glóbulos rojos de carnero y anticuerpos contra glóbulos rojos de carnero. La ocurrencia de hemolisis indica que el complemento no fue utilizado por lo tanto, en la fase 1 no se ha producido una reacción Ag-Ac específica. En cambio, la ausencia de hemolisis, indica que el complemento ha sido fijado y por lo tanto que en la fase 1 se ha producido una reacción Ag-Ac, en este caso se considera una reacción de fijación del complemento positiva, mientras que en el primer caso se considera negativa la reacción de fijación de complemento.
Reacción antígeno-anticuerpo Cuando los anticuerpos reconocen a los antígenos, se unen a ellos en una reacción llamada antígeno-anticuerpomediante enlaces de Van der Waals, fuerzas hidrofóbicas o iónicas. Existen varios tipos de reacciones -: •Precipitación. Los antígenos son macromoléculas con varios determinantes antigénicos (antígenos polivalentes) disueltos en los líquidos corporales. Cuando se unen a los anticuerpos, forman complejos antígeno-anticuerpo insolubles, que precipitan, lo que favorece que los fagocitos puedan destruirlos . •Aglutinación. Los antígenos (aglutinógenos) se encuentran en la superficie de bacterias u otras células, y cuando se unen con los anticuerpos originan puentes entre ellos, formándose agregados (aglutinación), lo que facilita su destrucción. Ésta es la reacción que ocurre cuando se hacen transfusiones entre grupos sanguíneos incompatibles. •Neutralización. El anticuerpo se une al antígeno eliminando los efectos negativos que tiene sobre el organismo invadido. •Opsonización. Los microorganismos o las partículas antigénicas son fagocitadas más rápidamente por losfagocitos si tienen anticuerpos en su superficie. Los microorganismos recubiertos de anticuerpos se dice que están opsonizados. Las opsoninas son moléculas que recubren los microorganismos facilitando su fagocitosis, pero no siempre son moléculas específicas como los anticuerpos, sino que también pueden ser moléculas inespecíficas como las proteínas del complemento. Las proteínas del complemento se llaman así porque ayudan o complementan a los anticuerpos. Este sistema está formado por unas 20 proteínas plasmáticas del tipo de las globulinas, que, a diferencia de los anticuerpos, siempre están presentes en el plasma. Estas proteínas intervienen en la opsonización de células ajenas al organismo y en la lisis de otros patógenos. Cuando una proteína del sistema del complemento se fija al complejo antígeno-anticuerpo, comienza la activación del resto de proteínas del sistema del complemento, formándose un enzima que rompe la membrana de la célula invasora provocando su lisis.
