MODULO III SUBMÓDULO 2

REALIZA ANÁLISIS
INMUNOLÓGICOS 3er PARCIAL
QBP EDGARDO SALVADOR ACEVEDO
CASARRUBIAS
AGLUTINACIÓN PASIVA O INDIRECTA

En este caso los antígenos o anticuerpos son acoplados en forma artificial a partículas que solo
funcionan como soporte , las partículas más utilizadas para este propósito son los eritrocitos ,
partículas de poliestireno (látex ) y bentonita.
• El látex es una suspensión coloidal de partículas esféricas de poliestireno cuyas superficies
están cargadas negativamente; en condiciones adecuadas estas partículas son capaces de
adsorber substancias químicas, particularmente proteínas.
• El uso de las partículas de látex como soporte de antígenos o anticuerpos, con respecto al
uso de eritrocitos, tiene la ventaja de ser un método que consume menos tiempo, que
permite una lectura muy rápida y que proporciona reactivos que permanecen estables por
mucho más tiempo.
AGLUTINACIÓN PASIVA O INDIRECTA
EJEMPLOS DE PRUEBA DE AGLUTINACIÓN PASIVA
O INDIRECTA

• Factor reumatoide (FR)

• Proteína c reactiva (PCR)
• Detección de HGC
• Antiestreptolisina O ( ASO)
• Detección de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi
PRUEBA DE FACTOR REUMATOIDE

• En el suero de personas con ciertos padecimientos (artritis reumatoide, fiebre reumática y en

general procesos inflamatorios) aparecen anticuerpos dirigidos contra las propias
inmunoglobulinas, principalmente IgG. A estos anticuerpos se les conoce como factor
reumatoide y los más abundantes en estado libre en el suero pertenecen a la clase IgM, la
determinación se lleva acabo con partículas recubiertas con IgG.
REACTIVOS PARA EL FACTOR REUMATOIDE
TÉCNICA DE FACTOR REUMATOIDE
• 1.-Se coloca un agota del suero problema en la placa de aglutinación.
• 2.-Se añade una gota de reactivo de látex-IgG.
• 3.-Se mezcla con un aplicador de madera.
• 4.-De la misma manera y en la misma placa se prepara un testigo negativo y otro positivo ,
sustituyendo el suero problema con solución salina y con un suero positivo conocido.
• 5.-La placa se oscila suavemente.
• 6.-Se busca la presencia de aglutinación .
• Resultados:
• El testigo negativo debe de presentar una suspensión uniforme y el testigo positivo deben
aparecer grumos .El suero problema se compara con los testigos y se reporta como
positivo o negativo según sea el caso.
LECTURA DEL FACTOR REUMATOIDE
PROTEÍNA C REACTIVA (PCR)

• Esta proteína (PCR ) aparece en el plasma a consecuencia de distintos procesos

patológicos donde se presenta inflamación o necrosis , por ejemplo durante la fase aguda
de infecciones bacterianas. La aparición de PCR puede descubrirse a las 18 – 24 hrs
después del inicio de la enfermedad .alcanza un máximo durante la fase aguda y
disminuye simultáneamente con la severidad de la enfermedad.
• La presencia de PCR se puede determinar con partículas de látex recubiertas con
anti-PCR.
REACTIVOS DE LA PROTEÍNA C REACTIVA
ANTIESTREPTOLISINA (ASO)

• La antiestreptolisina O es un examen de sangre para medir

los anticuerpos contra estreptolisina O (ASO, por sus siglas en inglés), una
sustancia producida por la bacteria Streptococcus betahemolítico del grupo A.
Los anticuerpos son proteínas que nuestros cuerpos producen cuando detectan
sustancias nocivas, tales como las bacterias
Streptococcus pyogenes

MECAMISMOS DE PATOGENICIDAD:
Presencia de estructuras
Producción de enzimas
Producción de toxinas
MECANISMOS DE PATOGENICIDAD
REACTIVOS PARA ANTIESTREPTOLISINA
DETECCIÓN DE LA HORMONA GONADOTROPINA
CORIÓNICA (HGC) PRUEBA DE EMBARAZO

• La gonadotropina coriónica humana (GCH ) es una hormona que aparece en

la orina de mujeres embarazadas o en ciertos procesos neoplásicos. La
determinación de GCH se puede realizar inmunológicamente mediante varias
pruebas, la aglutinación directa de látex es una de ellas ; se utilizan
partículas de látex recubiertas con anti-GCH.
PRODUCCIÓN DE HGC
AGLUTINACIÓN DIRECTA DE LÁTEX
INHIBICIÓN DE LA AGLUTINACIÓN DE PARTÍCULAS
DE LÁTEX
PRUEBA INMUNOCROMATOGRÁFICA
PRUEBA DE INMUNOCROMATOGRÁFICA DE
EMBARAZO
PRUEBAS DE PRECIPITACIÓN
Se presentan cuando un antígeno multivalente en estado soluble , se une con su anticuerpo
específico y así dar lugar a la formación de un complejo insoluble , se realizan en dos
estados en medio líquido o semisólido ( Gel ).
La reacción de precipitación en medio semisólido ( en gel ) se le conoce como
inmunodifusión : Esta consiste en la difusión a través del gel de un antígeno y su
anticuerpo específico con la consiguiente aparición de una banda o halo de precipitado en
el sitio en donde se alcanzan las concentraciones optimas de ambos reactivos.
Inmunodifusión : Alude a una reacción de precipitación que tiene lugar entre un anticuerpo
y un antígeno en un gel de agar ,se emplean habitualmente dos técnicas :La
inmunodifusión radial o Técnica de Mancini y la de inmunodifusión doble o Técnica de
Ouchterlony en agar .
BANDAS Y HALOS DE PRECIPITACIÓN
PRUEBA DE INMUNODIFUSIÓN RADIAL

Conocida como técnica de Mancini y cuantifica antígenos ; se añade al agar el anticuerpo

específico después la mezcla se vierte y se gelifica, se excavan pocillos en el agar y se
añaden cantidades conocidas de antígeno estándar ; el antígeno desconocido de prueba se
añade a un pocillo diferente y se deja la placa durante 24 hrs. Hasta que alcance el
equilibrio formando un anillo de precipitación : El tamaño del anillo de precipitación
resultante que rodea a las diferentes diluciones de antígeno es proporcional a la cantidad de
antígeno existente en el pocillo.
PRUEBA DE MANCINI
INMUNO DIFUSIÓN RADIAL
PRUEBA DE INMUNODIFUSIÓN DOBLE

• Conocida como técnica de Ouchterlony se basa en el principio de que la

difusión tanto del anticuerpo como del antígeno puede formar
inmunocomplejos fácilmente observables , las soluciones difunden hacia
fuera y cuando se encuentran se combinan y precipitan , formando las
bandas de precipitación.
PRUEBA DE OUCHTERLONY
PRUEBA DE OUCHTERLONY
INMUNOELECTROFORESIS

• En este procedimiento los antígenos se separan por electroforesis en un gel; las

proteínas cargadas positivamente se desplazan hacia el electrodo negativo ( Ánodo ) y
las de carga negativa hacia el electrodo positivo ( Cátodo ) , después se excava un canal
cerca de los pocillos y se llena con antisuero :Se incuba la placa , los anticuerpos y
antígenos difundirán y terminarán por formar bandas o arcos de precipitación.
INMUNOELECTROFORESIS
INMUNOELECTROFORESIS
CONTRAINMUNOLECTROFORESIS

• Los antígenos y sus anticuerpos simultáneamente se someten a la acción de un campo

eléctrico en un gel , al encontrarse reaccionan y desarrollan bandas de precipitación en
poco tiempo.
CONTRAINMUNOLECTROFORESIS
CONTRAINMUNOLECTROFORESIS
INMUNOFLUORESCENCIA

• Es un proceso en el cual unos colorantes llamados fluorocromos (Rodamina B ,Isotiocianato

de fluoresceína ) se exponen a la luz UV para provocar en ellos fluorescencia y que emitan
luz visible , se pueden unir a moléculas de anticuerpos sin modificar la capacidad del
anticuerpo de unirse a su antígeno específico ; los fluorocromos se pueden unir también a
antígenos ,existen dos clases principales de pruebas con anticuerpos fluorescentes : la directa
y la indirecta .
INMUNOFLUORESCENCIA
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

• Se basa en la capacidad del Complemento de fijarse a complejos Antigeno – Anticuerpo y se

interpreta a través de lisis de eritrocitos sensibilizados con anticuerpos específicos y la
capacidad del complemento para producir lisis de eritrocitos sensibilizados con anticuerpos
específicos.
PRUEBA DE FIJACIÓN DE COMPLEMENTO
FIJACIÓN DE COMPLEMENTO
LECTURA DE LA FIJACIÓN DE COMPLEMENTO
PRUEBAS INMUNOENZIMÁTICAS (ELISA)
• Esta prueba implica ligar diversas enzimas marcadoras a antígenos o anticuerpos. Se han
convertido en una de las pruebas serológicas mas empleadas para la detección de
anticuerpos o de antígenos .Esta prueba implica ligar diversas enzimas marcadoras a los
antígenos o anticuerpos .Se emplean dos métodos básicos ; la Prueba de doble anticuerpo en
sándwich y la Inmunoadsorción indirecta.
• Ensayo por Inmuno Adsorción Ligado a una Enzima
• Enzima
• Ligada
• Inmuno
• Adsorbida
• Ensayo
ELISA DOBLE ANTICUERPO EN SÁNDWICH

• Se emplea para la detección de antígeno , en esta prueba se coloca el anticuerpo específico

en los pocillos de una placa ; después se añade la muestra problema ( Antígeno ) y si este
reacciona con el anticuerpo es retenido al lavar el pocillo para eliminar el antígeno libre ; se
añade un conjugado de Enzima – anticuerpo específico de antígeno y finalmente se agrega el
sustrato que reacciona con la enzima conjugada , produciendo color (positivo ) para
cuantificarlo ; si el antígeno no está presente no hay producción de color (negativo ).
PRUEBA DE DOBLE ANTICUERPO EN SÁNDWICH
DETECCIÓN DE HGC (ELISA)
INMUNOADSORCIÓN INDIRECTA (ELISA)

• Se utiliza para detectar anticuerpos ,en este caso se incuba el antígeno adherido a los
pocillos de las placa , se añade el suero problema para detectar anticuerpos y si existen los
anticuerpos específicos se unen la antígeno . Los anticuerpos no unidos se eliminan por el
lavado , después se agrega un anti – anticuerpo marcado con la enzima para después
añadir el sustrato que producirá color ( positivo ) el cual se cuantifica , cuando no se
presenta color la prueba es negativa.
INMUNOADSORCIÓN INDIRECTA (ELISA)
RADIOINMUNOANÁLISIS (RIA)

• Se ha convertido en un instrumento importante en la investigación biomédica y en la

práctica clínica por ejemplo en cardiología ,banco de sangre , diagnóstico de alergias y
endocrinología esta técnica emplea un antígeno purificado , que se marca con un
radioisótopo y que compite con un antígeno estándar no marcado o con el un antígeno de la
muestra experimental ; evidentemente la competición se establece entre ambos antígenos por
unirse con los anticuerpos :la reactividad asociada al anticuerpo se detecta después por
medio de analizadores de radioisótopos y auto radiografía.
APARATO DE RIA
ENFERMEDADES RELACIONADAS CON EL SISTEMA
INMUNE

• A veces, una persona puede tener una respuesta inmune aunque no exista una
amenaza real. Esto puede provocar problemas
como alergias, asma y enfermedades autoinmunes. Si tiene una enfermedad
autoinmune, su sistema inmunitario ataca por error a las células sanas de su
cuerpo. Ejemplos:
• Hipersensibilidades
• Enfermedades autoinmunes o autoinmunitarias
• Inmunodeficiencias
ALTERACIONES DEL SISTEMA INMUNE
HIPERSENSIBILIDADES

• La hipersensibilidad es una respuesta inmunitaria exagerada que tiene como consecuencia

lesión tisular y que se manifiesta en el individuo en el segundo contacto o en contactos
posteriores con el antígeno.
• Las reacciones de hipersensibilidad se pueden clasificar como inmediatas y retardadas ,
también se pueden clasificar de acuerdo a los síntomas clínicos y la información respecto a
los sucesos inmunológicos que tienen lugar durante las reacciones , estas se clasifican como
hipersensibilidades tipo I , II , III , IV.
HIPERSENSIBILIDAD TIPO I

• Se caracteriza por la aparición de una reacción alérgica inmediatamente después del

segundo contacto del individuo con el antígeno responsable (alergeno).
• Las reacciones alérgicas aparecen cuando un individuo que ha producido inmunoglobulina E
en respuesta a un antígeno inocuo (alergeno) y vuelve a tener contacto con el mismo
alérgeno.
• La IgE se liga a los receptores de las células llamadas mastocitos causando posteriormente
de granulación liberándose ciertas sustancias como la histamina , leucotrienos ,heparina
,prostaglandinas ,tromboxanos provocando la contracción del músculo liso , vaso dilatación
, aumento de la permeabilidad y secreción de moco .
HIPERSENSIBILIDAD TIPO I
HIPERSENSIBILIDADES
HIPERSENSIBILIDADES
HIPERSENSIBILIDAD TIPO I
ALERGENOS
PRUEBAS EPICUTANEAS
PRUEBAS EPICUTANEAS DE PARCHE
HIPERSENSIBILIDAD TIPO II

• Reciben en general el nombre de reacción citotóxica o citolítica, porque su consecuencia es

la destrucción de células del huésped por lisis o por mediadores tóxicos, las IgG o IgM se
dirigen contra la superficie celular o contra el antígenos asociados a tejidos, habitualmente
estimulan la vía del complemento y diversas células efectoras ejemplo en las transfusiones
sanguíneas equivocadas.
HIPERSENSIBILIDAD TIPO II
HIPERSENSIBILIDAD TIPO III

• Implica la formación de inmunocomplejos, normalmente estos complejos son retirados de

forma eficaz por los monocitos del sistema mononuclear fagocítico. En presencia de
cantidades excesivas de antígenos solubles , la retirada de los complejos Antígeno –
Anticuerpo puede ser ineficaz , su acumulación puede llevar a cabo una reacción de
hipersensibilidad por el complemento que desencadena diversos procesos inflamatorios ;
ésta inflamación produce lesiones en especial en los vasos sanguíneos (vasculitis ) , en las
membranas basales glomerulares del riñón ( glomerulonefritis ) , en las articulaciones (
artritis ).
HIPERSENSIBILIDAD TIPO III
HIPERSENSIBILIDAD TIPO IV

• Implica reacciones de inmunidad retardada mediada por células T , en especial una

subpoblación denominada células T de hipersensibilidad retardada (TDTH ) en acumularse
cerca de los antígenos , para esto es necesario un día o más.
• Esto ocurre cuando los antígenos , especialmente los que se ligan a células tisulares , son
fagocitados por macrófagos y después presentados a receptores de la superficie de las
células TDTH ; el contacto entre el antígeno y las células TDTH hace que la célula
prolifere y libere citocinas que atraen linfocitos , macrófagos y basófilos al tejido afectado
.Pueden producirse daños tisulares considerables ejemplo la aplicación de la tuberculina ,
dermatitis alérgica de contacto , algunas enfermedades auto inmunitarias , rechazo de
trasplantes
HIPERSENSIBILIDAD TIPO IV
ENFERMEDADES AUTOINMUNES O
AUTOINMUNITARIAS

• El organismo en condiciones normales es capaz de distinguir sus propios antígenos de los

antígenos extraños no propios , y no establece un ataque inmunitario contra ellos ; éste
fenómeno recibe el nombre de tolerancia inmunológica : En ocasiones el organismo pierde
la tolerancia y organiza un ataque inmunitario anormal con anticuerpos o con células T
contra antígenos de los propios tejidos, son enfermedades con frecuencia mortales.
• Ejemplos: La fiebre reumática, anemia hemolítica auto inmunitaria, púrpura
trombocitopénica auto inmunitaria , lupus eritematoso ,artritis reumatoide, esclerosis
múltiple etc.
ARTRITIS REUMATOIDE
LUPUS ERITEMATOSO
INMUNODEFICIENCIAS

• La integridad del sistema inmunitario es esencial para la defensa contra organismos

infecciosos y sus productos tóxicos y por lo tanto la supervivencia de los individuos. Los
defectos en uno o más de los componentes del sistema inmunitario pueden provocar
enfermedades graves y a menudo mortales, que se denominan colectivamente
inmunodeficiencias y se clasifican como inmunodeficiencia primaria o congénitas e
inmunodeficiencia secundaria o adquirida.
INMUNODEFICIENCIA PRIMARIA O CONGÉNITA

Son defectos congénitos que originan una mayor susceptibilidad a las infecciones y que se manifiestan
habitualmente de forma precoz en la primera o segunda infancia , aunque a veces se detectan clínicamente más
tarde ejemplos :
-Anomalías del desarrollo y función de los linfocitos B con una producción deficiente de anticuerpos.
-Agamaglobulinemia ligada al cromosoma X, se caracteriza por la ausencia de gammaglobulina en la sangre.
-Déficit selectivo de isotipos de inmunoglobulinas, siendo la más común la deficiencia de la IgA.
-Hipogammaglobulinemia que se caracteriza por los defectos en la respuesta de anticuerpos frente a infecciones.
-Defectos primarios de los linfocitos T, se caracteriza por la deficiencia en la maduración de linfocitos T.
-Inmunodeficiencias combinadas graves, se caracteriza por defectos en el desarrollo o la función de los
linfocitos T y B, linfopenia.
-Alteraciones congénitas de los fagocitos y otras células de la inmunidad innata.
AGAMAGLOBULINEMIA LIGADA AL CROMOSOMA X
INMUNODEFICIENCIAS SECUNDARIAS O ADQUIRIDAS

• Se desarrollan como consecuencia de la malnutrición , el cáncer diseminado , el tratamiento

con fármacos inmunosupresores o las infecciones de las células del sistema inmunitario ,
especialmente por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) ,agente etiológico del
síndrome de inmunodeficiencia adquirida ( SIDA ).
CANDIDIASIS EN PACIENTES CON VIH
INMUNIDAD FRENTE A BACTERIAS

• La principal respuesta inmunitaria protectora frente a las bacterias extracelulares está

formada por anticuerpos específicos que opsonizan las bacterias para su fagocitosis y activan
el sistema de complemento; las toxinas producidas por estas bacterias son neutralizadas y
eliminadas por anticuerpos específicos.
• Las bacterias intracelulares son capaces de sobrevivir y replicarse en el interior de las células
del huésped incluyendo los fagocitos; la inmunidad está mediada principalmente por células
y está formada por linfocitos T CD4+ que activan a los macrófagos y por los linfocitos T
CD8+ que lisan a las células infectadas.
 INMUNIDAD FRENTE A HONGOS

• La respuesta protectora consta de inmunidad mediada por células y de anticuerpos: por lo

general, los hongos son fácilmente eliminados mediante un sistema inmunitario competente,
por lo que estas se ven con frecuencia en personas con inmunodeficiencias.
INMUNIDAD FRENTE A VIRUS

• La inmunidad natural contra los virus está mediada por interferones de tipo I y células NK.
• Los anticuerpos específicos protegen frente a los virus al inicio del curso de la infección y si
los virus son liberados a partir de células infectadas muertas. El principal mecanismo de
defensa frente a las infecciones establecidas especialmente con virus no citopáticos está
formado por CTL específicos, estos lisan de forma eficaz las células infectadas y pueden
contribuir al daño tisular incluso cuando el virus no es perjudicial por sí mismo.
INMUNIDAD FRENTE A PROTOZOARIOS Y
HELMINTOS

• Los protozoarios y helmintos dan lugar a infecciones crónicas y persistentes ya que la

inmunidad natural frente a ellos es débil y los parásitos han desarrollado múltiples
mecanismos para evitar y resistir la inmunidad específica.
• La inmunidad celular hace frente a los protozoarios que viven dentro de las células huésped;
mientras que los helmintos se eliminan gracias a los anticuerpos IgE y a la muerte mediada
por eosinófilos, así como por otros leucocitos.