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PRÁCTICA

DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE MOLÉCULAS

ORGÁNICAS: LÍPIDOS

INTRODUCCIÓN

Los lípidos son moléculas orgánicas formadas principalmente por carbono e hidrógeno, y
en menor proporción oxígeno. Además, pueden contener también fósforo, nitrógeno y
azufre. Es un grupo de sustancias muy heterogéneas que solo tienen en común que son
insolubles en agua, pero solubles en solventes orgánicos como benceno, éter, cloroformo,
etc.
Los lípidos más importantes en los seres vivos son los triglicéridos y fosfolípidos (que
contienen ácidos grasos), componentes fundamentales de la estructura de las membranas
celulares y los esteroides (que no poseen ácidos grasos en su composición) y forman parte
de moléculas como el colesterol y las hormonas esteroideas como es el caso de las
hormonas sexuales femeninas (estrógenos y progesterona) y masculinas (testosterona).

Los lípidos se pueden clasificar de diferentes maneras:

 Según la presencia o No de ácidos grasos: Saponifibles y No Saponificables
 Según la presencia o No de dobles enlaces entre los carbonos: Insaturados y
Saturados.

Clasificación de los Lípidos según la presencia

de doble enlaces

INSATURADOS SATURADOS
SI presentan NO presentan
dobles enlaces dobles enlaces

Insaturaciones Insaturaciones
en Trans en Cis
  Según la capacidad del organismo de producirlos o No: Esenciales y No esenciales,
los No esenciales hay que ingerirlos con la dieta pues el organismo no es capaz de
producirlos, como por ejemplo los ácidos Omega 3, 6 y 9 y los NO esenciales se
producen en el organismo

DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS

OBJETIVOS GENERALES

♦ Determinar cualitativamente la presencia de lípidos en muestras biológicas.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

♦ Identificar las características de solubilidad de los lípidos

♦ Reconocer algunas propiedades químicas de los lípidos

♦ Distinguir las características de tinción de los lípidos que permiten identificarlos.

MATERIALES
 Agua
 Marcador permanente
 Sudan III *
 Aceite 20 mL
 NaOH 20% *
 Manteca de cerdo 15 mL
 Tinta china roja
 Alcohol

 Una olla amplia donde quepan los

frascos de vidrio

 Alcohol

Frascos o vasos vacios de vidrio ó plásticos transparente. Para prácticas presenciales usaremos
tubos de ensayo (5)
 1 jeringa de 10 mL, o algún medidor de que permita medir cantidades de 5 a 10 mL (Puedes
usar los que vienen en los jarabes infantiles que ya no utilices)

 Celular, cámara o similar para poder grabar el procedimiento y tomar fotos de los
 resultados de tus experimentos

* Los materiales marcados con * serán entregados a los estudiantes

DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS
Solubilidad. Materiales

Fuente: Los autores

Solubilidad. Procedimiento

1. Rotular los frascos como Agua y Alcohol

2. Colocar 5 ml de aceite en cada frasco

3. Colocar 5 ml de agua en el frasco rotulado como agua, agitar vigorosamente.

4. Colocar 5 ml de alcohol en el frasco rotulado como alcohol, agitar vigorosamente.

5. Reposar 5 a 10 minutos.

6. Observar, anotar y fotografiar tus observaciones

 Fuente: Los autores
Saponificación. Materiales

Fuente: Los autores

Saponificación. Procedimiento

1. Rotular el frasco (tubo de ensayo) como saponificación.

2. Colocar en este 15 mL de manteca de cerdo y 15 mL de hidróxido de sodio al 20%
(NaOH 20%)
3. Agitar fuertemente y colocar el tubo en baño maría por 20 – 30 minutos. (Colocas la
olla con agua a hervir, colocar dentro el frasco de vidrio donde previamente
mezclaste el NaOH 20% con la manteca de cerdo), cuando comience a ebullir el
agua comienzas a tomar el tiempo.
4. Transcurrido este tiempo, se puede observar en el frasco (tubo de ensayo) tres capas:
la inferior clara, que contiene la solución de sosa sobrante junto con la glicerina
formada; la superior amarilla de aceite no utilizado, y la intermedia, de aspecto
grumoso, que es el jabón formado.
 Fuente: Los autores

Tinción de las grasas. Materiales.

Fuente: Los autores

Tinción de las grasas. Procedimiento

1. Rotular los frascos (tubos de ensayo) como Tinta y Sudan III
2. Colocar en los dos frascos (tubos de ensayo) 2 mL de aceite.
3. Añadir en el frasco (tubo de ensayo) rotulado como Sudan III 4 gotas de solución de Sudán
III; y al rotulado con tinta 4 gotas de tinta roja.
4. Agitar y dejar reposar.
5. Se observará que en el tubo con Sudán III el aceite aparece teñido.
 Fuente: Los autores
CUESTIONARIO

1. ¿Por qué el aceite se disuelve en alcohol y no en agua?

2. Al realizar el experimento de solubilidad en un tubo de ensayo al dejarlo en
reposo el aceite se coloca en la fase superior y el agua en la inferior. ¿Por qué?
3. ¿Cuál es la fórmula química que explica la reacción de saponificación?
4. ¿Qué es el reactivo de Sudán? Pon al menos un ejemplo de un examen de
laboratorio donde se utilice este reactivo. ¿Cuál es la importancia de los ácidos grasos
polinsaturados? Ponga ejemplos.
5.

8
PRÁCTICA

DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE MOLÉCULAS ORGÁNICAS:

CARBOHIDRATOS

INTRODUCCIÓN

La mayor parte de la materia orgánica de las células está constituida por cuatro tipos
principales de macromoléculas: los ácidos nucleicos, las proteínas, los carbohidratos y los
lípidos.

Los glúcidos o carbohidratos son moléculas formadas por C, H y O, donde los átomos
de carbono están unidos a radicales hidróxilo o alcohol (-OH) y a radicales hidrógenos (-
H). El nombre de Hidratos de carbono o carbohidratos, se debe a que la mayoría de
ellos responde a la fórmula (CH 2O)n. En todos los glúcidos siempre hay un grupo
carbonilo C=O, que puede ser un grupo aldehído ( ) o un grupo cetona ( ),
pudiendo definirse a los glúcidos como polihidroxialdehídos o polihidroxicetonas.

Los carbohidratos se clasifican según su tamaño molecular, desde los más pequeños o
azúcares simples: monosacáridos (glucosa, galactosa y fructosa), los cuales pueden estar
formados moléculas de entre 3 a 6 átomos de carbono, como se mencionó antes la posición
del grupo funcional carbonilo los diferencia en Aldehídos y Cetonas; los intermedios u
oligosacáridos, formados por la unión de hasta nueve monosacáridos, donde se encuentran
disacáridos como la maltosa, sacarosa y lactosa, y las moléculas con más de 10 átomos
de carbono en su estructura llamadas polisacáridos, como ejemplo tenemos el almidón,
glucógeno y la celulosa. Los polisacáridos pueden estar formados solo por un solo
monosacárido y se denominan homopolisacáridos como por ejemplo el glucógeno,
formado por glucosa y que es la forma en que se almacena la glucosa en las células
animales o por diferentes monosacáridos, y se denominan heteropolisacáridos, como por
ejemplo la heparina sustancia anticoagulante que está presente en las células cebadas o
mastocitos.

Los de monosacáridos se unen entre sí mediante enlaces de tipo O-glucosídico, y con los
aminoácidos mediante enlaces N-glucosídicos. Cuando los carbohidratos están unidos a
otra molécula como lípidos (glucolípidos) o proteínas (glucoporteínas), se denominan
Heterósidos.
El carácter reductor de los monosacáridos viene determinado por la posibilidad de su
grupo carbonilo de reaccionar con agentes oxidantes como el Cu++.

Disacáridos comunes.
 Tomado de: https://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/enlace-glucosidico
Los polisacáridos, como el almidón, reaccionan con el yodo presente en el Lugol y forman
cadenas de poliyoduro Esta reacción es el resultado de la formación de cadenas de
poliyoduro, formando un color azul oscuro a negro.

DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS

OBJETIVOS GENERALES

♦ Determinar cualitativamente la presencia de carbohidratos

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

♦ Diferenciar azúcares reductores de no reductores.

♦ Demostrar la hidrólisis del enlace glucosídico de la sacarosa

♦ Identificación de polisacáridos

MATERIALES
 Marcador permanente  1 jeringa de 5mL, o algún medidor de
que permita medir cantidades de 1 a
 Sacarosa (Azúcar de mesa blanca 1 5mL (Puedes usar los medidores que
cucharada) vienen en los jarabes infantiles que ya
no utilices)
 Glucosa *
 Cuchillo o Bisturí.
 Almidón (fécula de maíz)
 Ácido acético (vinagre blanco)
 Leche entera
 Isodine solución o Lugol
 1 Papa
 Una olla amplia donde quepan los
 1 Naranja frascos de vidrio
  Frascos o Vasos de vidrio transparente grabar el procedimiento y tomar fotos
pequeños para los experimentos que se de los resultados de tus experimentos
deben poner en baño de maria**
 Servilletas de papel de cocina
 Celular, cámara o similar para poder
 Encendedor o Fósforos

Los materiales marcados con * serán entregados al estudiante.

**Para prácticas presenciales usaremos tubos de ensayo

PROCEDIMIENTO
Antes de comenzar debes preparar la solución de Sacarosa

Solución de sacarosa

1. Medir 1 cucharada de azúcar de mesa BLANCA (este es un ensayo colorimétrico

por eso puedes usar azucar morena) añadir en un recipiente para mezclar con 1
cucharada de agua remover hasta disolver.

1) Reacción de Benedict. Fuente: Los autores

1. Rotular 4 frascos como leche, azúcar, naranja y glucosa. (OJO yo no tenia glucosa
por eso no aparece en las imágenes)
2. Colocar 1 mL de cada muestra a analizar (leche, solución de sacarosa, naranja y
glucosa) en cada frasco que previamente rotulaste con el nombre de la muestra a
añadir.
 3. Añadir 1 mL de reactivo de Benedict y mezclar con un palillo o similar. (OJO NO
debes utilizar el mismo para mezclar, debe ser uno diferente o lavarlo antes de
reusarlo)
4. Calentar el frasco en baño maría entre 5 -10 min.
5. Observar si hay cambio de coloración de la solución (La escala a continuación te
permite saber si hay presencia o no de azúcares reductores).
6. Toma fotos o Video y Anota sus resultados
Reacción de Benedict. Materiales

Fuente: Los autores

Reacción de Benedict. Procedimiento

 Fuente: Los autores

Fuente: Los autores

 Fuente: Los autores

Interpretación de los Resultados

Negativo Trazas de azúcares reductores. Moderado. Alto

2) Azúcares no reductores

1. Rotular el frasco como H o Hidrólisis

2. Añadir 1mL de la solución de Sacarosa que preparaste previamente

3. Provocar hidrólisis de la sacarosa agregando 20 gotas de ácido acético (vinagre

blanco) incubar 5 a 10 min en baño maría.

4. Sacar del baño de maria

5. Adicionar 1 mL de reactivo de Benedict

6. Calentar nuevamente en baño de María 5 – 10 minutos

7. Observar si ocurre algún cambio. Tomar fotos o video de tus resultados

La reacción positiva nos dice que hemos conseguido romper el enlace O-glucosídico de
la sacarosa.

Azúcares no reductores. Materiales

Fuente: Los autores

Azúcares no reductores. Paso a Paso

Fuente: Los autores

Fuente: Los autores

3) Reacción de Lugol:
Este método se usa para identificar polisacáridos. El almidón en contacto con unas
gotas de Isodine solución o Lugol toma un color azul-violeta característico.

Reacción de Lugol. MATERIALES

Fuente: Los autores
 1. Preparar la solución de almidón, en el frasco rotulado como almidón: Mezclar 1
cucharada de fécula de maíz y 1 cucharada de agua. Remover para mezclar

2. Rotular los frascos como Almidón y Papa.

3. Pelar y picar la papa en cuadritos.

4. Añadir en el frasco rotulado como papa 2 cucharadas de papa picada en cuadritos

pequeños. (Deben ser aproximadamente la misma cantidad de papa en cuadritos
que de solución de almidón.)

5. Añadir 15 gotas de lugol en el frasco con almidón y 15 gotas en el frasco donde

tienes la papa en cuadritos.

6. Observar si ocurre algún cambio. Tomar fotos o video de tus resultados.

Reacción de Lugol. PASO A PASO

Fuente: Los autores

 Fuente: Los autores

Si la disolución del frasco se torna de color azul-violeta, la reacción es positiva.

CUESTIONARIO

1. Menciona dos ejemplos de cetonas y dos de aldehídos con su estructura química.

2. ¿Cuál es el fundamento de la reacción de Benedict? ¿Qué tipo de glúcidos dan

positivo en esta reacción?

3. ¿Qué explicación tienes los diferentes colores obtenidos en tus muestras al aplicarles
Reactivo de Benedict?

4. Tenemos 2 pacientes A y B, ambos diabéticos, al realizarle Benedict a la orina de la

mañana en ayunas el paciente A dio verde mientras que el B dio naranja. Explica e
Interpreta estos resultados.

5. ¿Que color toma la sacarosa al realizarle la hidrólisis y agregarle Reactivo de Benedict?

¿Por qué?

6. ¿Qué otro tipo de métodos son utilizados para la detección de carbohidrato y qué
determina cada uno?

7. ¿A qué se debe la coloración producida por el Lugol en el almidón y la papa?

 ACTIVIDAD

1. Menciona dos ejemplos de cetonas y dos de aldehídos con su estructura

química.

R/ EJEMPLOS DE CETONAS:

EJEMPLOS DE ALDEHIDOS:

2. ¿Cuál es el fundamento de la reacción de Benedict? ¿Qué tipo de glúcidos dan

positivo en esta reacción?

R/ El fundamento de esta reacción radica en que, en un medio alcalino, el ion

cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del
grupo aldehído del azúcar (-CHO) a su forma de Cu+.
La glucosa, la fructosa y la maltosa al someterse a la Reacción de Benedict dan
un resultado positivo debido a que presentan un precipitado de color rojo ladrillo o
anaranjado (óxido cuproso) lo cual es la evidencia de un azúcar reductor.

3. ¿Qué explicación tienes los diferentes colores obtenidos en tus muestras al

aplicarles Reactivo de Benedict?

R/ Cuando se añade el reactivo de Benedict al azúcar reductor, y se aplica calor,

el color de la mezcla cambia a naranja o ladrillo intenso mientras mayor sea la
abundancia de azúcares reductores. Un cambio a color verde indica la presencia
de menos azúcares reductores.

4. Tenemos 2 pacientes A y B, ambos diabéticos, al realizarle Benedict a la orina

de la mañana en ayunas el paciente A dio verde mientras que el B dio naranja.
Explica e Interpreta estos resultados.

R/ El paciente A tiene un menor contenido de azucares reductores, queriendo

decir que el paciente B tiene mayor contenido de azucares reductores que el
 paciente A, pero podemos decir que no tiene en exceso las cantidades de
azucares reductoras.

5. ¿Que color toma la sacarosa al realizarle la hidrólisis y agregarle Reactivo de

Benedict? ¿Por qué?

R/ El color de la sacarosa luego de agregarle el reactivo de benedict y realizarle la

hidrolisis terminaría siendo Naranja, debido a que al momento de realizarse la
hidrolisis podemos observar que en presencia de (HCl) y en caliente, la sacarosa
se hidroliza, es decir, incorpora una molécula de agua y se descompone en los
monosacáridos que la forman, glucosa y fructosa, que así son reductores y
cuando se realiza o se agrega el reactivo de benedict nos proporciona un
resultado negativo, ya que no presentó el precipitado rojo ladrillo característico de
un azúcar reductor, pero presenta el color naranja (concentración moderada),
debido a que es un disacárido formado por glucosa y fructosa las cuales aparecen
al momento de realizar la hidrolisis y se une por medio de sus carbonos
anoméricos

6. ¿Qué otro tipo de métodos son utilizados para la detección de

carbohidrato y qué determina cada uno?

R/ Ensayo de Molisch: Este es un ensayo para el reconocimiento general de

carbohidratos en el cual los polisacáridos y los disacáridos se hidrolizan con acido
sulfúrico concentrado hasta monosacáridos y se convierten en derivados del
furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con a-naftol formando un
color purpura violeta.
Ensayo de Barfoed: Esta es una prueba que permite diferenciar entre
monosacáridos y disacáridos reductores, también contiene un ion cúprico el cual
se reduce hasta oxido cuproso de una manera más rápida con los monosacáridos
que con los disacáridos.
Ensayo de Seliwanoff: Este es un ensayo específico para cetosas y se encuentra
basado en la conversión de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior
condensación con resorcinol formando de esta manera complejos coloreados.
Ensayo de Bial: Es un reactivo que contiene orcinol en ácido clorhídrico el cual va
a formar complejos de coloración solo con las pentosas.
Este ensayo también permite identificar los carbohidratos y determinar el grado de
pureza de los mismos.

7. ¿A qué se debe la coloración producida por el Lugol en el almidón y la papa?

R/ La coloración que produce el Lugol en el almidón y en la papa se debe a que el

yodo se introduce entre las espiras de las moléculas de almidón y papa (este
reactivo se encarga de identificar sustancias como otros polisacáridos), de esta
manera entre mayor sea la cantidad de almidón y de papa, más intensa va a ser la
coloración.
Resultados de Benedict:
1. Cuales muestras fueron positivas

R/ Las muestras positivas fueron: glucosa y naranja.

2. Por qué las muestras positivas fueron positivas

R/ Las muestras fueron positivas ya que como se observó en el laboratorio el

proceso en el cual fue que se tomaron las muestras se les agrego un ml de
Benedict, luego se llevan al baño de María durante 10 minutos y pasado ese
tiempo se pueden observar los cambios en las muestras y si analizamos dichas
muestras teniendo en cuenta la escala colorimétrica nos podemos dar cuenta que
los colores que se obtienen en la glucosa y en la naranja están en el rango de los
positivos.

3. Sabiendo que BENEDICT es semicuantitativa, ¿Cuál de las muestras tiene mayor

concentración de AZÚCARES REDUCTORES?

R/ La muestra que tiene mayor concentración de azúcares reductores es la

muestra de Naranja.

Toma un pantallazo del video e identifica en ella tus respuestas señalando los
positivos y negativos.
 Negativo Positivo Negativo Positivo

1. Comparado con el primer ensayo de la sacarosa, ¿Que diferencias ves con el ensayo de la
hidrolisis?

R/ La principal diferencia que se presenta es el cambio de color de VERDE a NARANJA,

podemos decir que otra diferencia es que en el proceso del reactivo de Benedict en la
sacarosa normal se aplica antes del baño de maría, y el proceso en el que lleva a cabo la
hidrolisis el reactivo de Benedict se le aplica después del baño de maría, además de que en
el proceso de la hidrolisis se tiene que aplicar ácido acético o vinagre
2. ¿Por que crees que ocurrio este cambio? Usa el principio de la reaccion y lo explicado en el
video

R/ Podemos decir que en el proceso de la sacarosa normal y la sacarosa hidrolizada, el

reactivo de benedict se invierte ( Se aplica antes del baño de maría y en el proceso de la
hidrolisis se lleva a cabo después) ya que se fundamenta en que los azucares reductores en
condiciones alcalinas forman enodioles y los enodioles son poderosos agentes reductores,
ya que reducen los iones cúpricos y los iones cuprosos que es la base de la reacción y
debido a esto la sacarosa al no ser un azúcar reductor el resultado sale negativo, pero al
momento de romper el enlace glucosídico en el proceso de la hidrolisis, que es la diferencia
entre un azúcar reductor de un azúcar no reductor el resultado sale positivo.

3. ¿Cual de los 2 ensayos tiene mayor concentracion de azucares reductores? ¿Por que?

R/ El ensayo que tiene la sacarosa hidrolizada contiene la mayor concentración de azucares

reductores, porque se comprobó a través de la cuenta semicuantitativa el color de cada
resultado, ya que en la hidrolisis se rompe el enlace glucosídico dando como resultado
azucares reductores y por ende da positivo ante la reacción de Benedict.
 Negativa Positiva
LUGOL
1. Comparado con el control negativo ¿que diferencia ves en el ensayo de
fecula de maíz?

R/ El ensayo de fécula de maíz se tornó de un color oscuro o azul negroso debido

a que si hay presencia del almidón y por ende podemos determinar que es una
reacción positiva utilizando el reactivo de Lugol, mientras que con la glucosa se
tornó de un color naranja ya que la prueba del Lugol es para determinar almidón y
ese es un monosacárido, por lo que ya se sabe que su resultado será negativo.

2. ¿Porque crees que ocurre esta diferencia? Usa el principio de la reacción y

lo explicado en el video

R/ La reacción de Lugol es utilizada para la identificación de polisacáridos, el

almidón en contacto con el reactivo de Lugol se torna de un color azul
característico ya que es positiva, mientras que la glucosa siendo un monosacárido
se torna de color naranja dando un resultado negativo.

LUGOL-PAPA
1. Comparado con el ensayo de fecula de maiz ¿El ensayo de la papa
presenta alguna diferencia?

R/La principal diferencia física es que la muestra con la fécula de maíz esta en
estado liquido y la muestra de papa se encuentra en estado sólido, en el proceso
se diferencian ya que la muestra en estado liquido se le agregan 4 gotas del
reactivo y a la muestra que se encuentra en estado solido se le agregan 20 debido
a la diferencia física y a la cantidad de muestra que se observa, pero dando el
mismo resultado (positivo en ambos casos)

2. Si existe ¿por que crees que ocurre esta diferencia? Usa el principio de la
reacción y lo explicado en el video

R/ Las pocas diferencias que se encontraron fueron físicas (la fécula de maíz está
en estado líquido y la muestra de papa se encuentra en estado sólido) y en su
procedimiento (la muestra en estado líquido se le agregan 4 gotas del reactivo y a
la muestra que se encuentra en estado sólido se le agregan 20)