PR Aq Iifase

Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA 1
ESPECTROFOTOMETRIA DEL VISIBLE

ANALISIS DE HIERRO
I OBJETIVOS
• Preparar las soluciones stock, madre y patrones
• Construir una curva de absorción y de calibrado
• Seleccionar la longitud de onda de trabajo y verificar la ley Beer
• Analizar el contenido de hierro en un alimento.
• Evaluar estadísticamente los resultados obtenidos
II GENERALIDADES
Gran cantidad de iones inorgánicos que presentan color en solución acuosa absorben suficiente
energía radiante en la región visible, lo que permite su determinación espectrofotométrica directa,
incluso en muy bajas concentraciones. Pero no todos los iones metálicos presentan color propio,
y otros tienen poco color.
Los colores de muchos cationes se pueden intensificar por formación de compuestos complejos
al hacerlo reaccionar con determinados reactivos denominados cromóforos. Muchos reactivos
que producen color han sido empleados para la determinación de hierro, en algunos se efectúa
la determinación directa de hierro (III), mientras en otros se aprovecha la formación de complejos
muy coloreados entre hierro (II) y diversos ligandos orgánicos.
Entre los diversos reactivos más importantes para la determinación espectrofotométrica del
hierro figuran el reactivo 1, 10 fenantrolina y sus análogos como el 4, 7 difenil 1, 10 fenantrolina
(batofenantrolina). El ligando orgánico, tiene la estructura siguiente C 12H8N2, donde tres de estos
ligandos están coordinados con un catión de hierro (II), por los pares de electrones sobre los
átomos de nitrógeno, para formar el complejo indicado, que en forma abreviada se escribe así:
Fe+2 + 3 FeNa =========➔ Fe (fen)3 +2
Analito ligando complejo rojo anaranjado
Cada átomo de nitrógeno de la fenantrolina forma un enlace coordinado con el hierro (II) y que
hay un total de 6 enlaces de este tipo. El complejo se llama tris 1, 10 fenantrolina, hierro II.
El hierro está contenido en el pigmento de la sangre (hemoglobina) y sirve principalmente para
el transporte del oxígeno y la hematopoyesis. El hierro se encuentra en hígado, riñones, corazón,
carne, productos elaborados con cereales integrales, verdura verde, espinacas, etc. En los
productos farmacéuticos se tiene la presencia de hierro como sulfato ferroso y estos productos
son empleados en caso de anemia ferropénica (profilaxis y tratamiento) y como suplemento
dietético.
Las lentejas son legumbres originarias de Asía, poseen alto valor energético, es un alimento rico
en proteínas, son fuentes de hidratos de carbono, tiene poca cantidad de grasas, son ricas en
fibra, lo que ayuda a combatir el estreñimiento, son fuentes de hierro evitando la aparición de
anemias, son ricas en potasio para el buen funcionamiento del sistema nervioso y reduce el nivel
de azúcar en la sangre, lo que ayuda entre quienes padecen de diabetes.
Ca 100 gramos de lentejas contiene:
proteínas 23.8 g
Hidratos de
54.00 g
carbono
fibra 11.7 g
zinc 3.1 mg
potasio 737 mg
fosforo 240 mg
hierro 9 mg
1.- Interferencias
Las principales interferencias son plata (I), cobalto (II), cobre (II) y níquel (II) se ha demostrado
que una mezcla de ácido cítrico y ácido etileno di amino tetraacético (EDTA) puede emplearse
para enmascarar plata (I), cobre (II), y níquel (II) y una gran cantidad de iones metálicos comunes.
También resultan interferentes los oxidantes enérgicos como cianuros, nitritos, y fosfatos. La
adición en exceso de hidroxilamina elimina los errores debido a estas sustancias.
III FUNDAMENTO
El método de la fenantrolina consiste en reducir el hierro al estado ferroso con el reactivo orgánico
cloruro de hidroxilamina en un medio ácido ajustado a más o menos 3.5, con solución buffer, en estas
condiciones se agrega el reactivo complejante 1, 10 fenantrolina; formándose un compuesto complejo
de fierro fenantrolina de color rojo naranja, y que es medido luego espectrofotométricamente a una
longitud de onda de 510 nm. La formación cuantitativa del complejo se observa en el margen de pH
comprendido entre 3 y 9 pero se recomienda un pH próximo a 4 para evitar la precipitación de diversas
sales de hierro.
IV ARREGLO EXPERIMENTAL
El circuito básico del equipo instrumental es el siguiente:
V APARATOS
• Espectrofotómetro : Shimadzu 160 - A
• Cubeta : 1 Cm. De trayecto óptico
• Región de trabajo : Espectro visible
• Longitud de onda : 510 nm
• Blanco : Solución de reactivos y disolvente menos hierro.
VI REACTIVOS
• Solución de Hidroxilamina. - Disolver 10.0 gramos de reactivo en 100 ml de agua destilada
• Solución buffer. - Disolver 250 gramos de acetato de amonio en 150 ml de agua destilada, añadir
700 ml de ácido acético glacial.
• Solución de fenantrolina. - Disolver 0.250 gramos de 1, 10 fenantrolina monohidratada en 100
ml de agua destilada, agitando y calentando a 80 oC. Se evita el calentamiento si se añade 2 gotas
de ácido clorhídrico en el agua destilada.
• Solución Stock de hierro. - La solución se prepara a partir del sulfato ferroso amoniacal [FeSO 4
(NH4)2SO4.6H2O]. Para ello se disuelve 0.7020 gramos del reactivo, calidad analítica, en 50 ml de
agua destilada y 1 ml de ácido sulfúrico concentrado, pasar a una fiola en un litro, diluir
exactamente hasta el enrase y homogenice. La concentración de la solución es de 0.1 mg de hierro
por mililitro de solución (0.1 mg Fe / ml de solución).
VIII TECNICA
1.- Preparación de soluciones estándares o patrones
Estas soluciones se deben preparar instantes antes del análisis porque son inestables. Disponer de
5 matraces aforados de 50 ml y rotular del uno al cinco; agregar a la fiola número 1, 0.5 ml, agregar
a la segunda fiola, 1.0 ml, a la tercera 1.5 ml, y a la cuarta fiola 2.0 ml de la solución Stock. A la quinta
fiola no se le añade dicho reactivo (solución blanco).
Se agrega a cada fiola, 3 ml de solución de hidroxilamina, 3 ml de solución de fenantrolina y ajuste el

pH de la solución a 3.5 con la solución buffer; diluya cada solución con agua destilada hasta el aforo,
se tapa la fiola, se agita y se deja en reposo durante media hora. El color de la solución es rojo
anaranjado.
CUADRO DE SOLUCIONES
No volumen Buffer Fenantrolina Concentraci Volume
estánda del Stock ml Ml Hidroxilamina ml ón mg/ml n final
r ml ml
1 0.5 3 3 0.001 50.0
2 1.0 3 3 0.002 50.0
3 1.5 3 3 0.003 50.0
4 2.0 3 3 0.004 50.0
5 0.0 3 3 0.000 50.0
2.- Determinación de la longitud de onda analítica

Una vez iniciada el encendido del instrumento y aparece en pantalla el menú básico de funciones,
seleccionar la función “ESPECTRO “y ajustar en esta función los parámetros analíticos de:
λS = 600 NM λ E = 400 NM
SUPERIOR = + 0.700 A INFERIOR = + 0.00 A
Determinar la longitud de onda de trabajo en la curva espectral mediante el barrido con el cursor.
3.- Preparación de la muestra

Pesar exactamente, 6.0000 g de la muestra y calcinar en una mufla a 550 o C hasta la obtención de
cenizas blancas. Disolver con 10 ml de HCl 6 M, calentando suavemente evitando llegar a sequedad.
Diluir con más o menos 20 ml de aguas destilada y calentar. Filtrar si es necesario y recibir los filtrados
en una fiola de 100 ml enrasar y homogenizar la solución con agua destilada.
Medir una alícuota de 25.0 ml, colocarla en una fiola de 50.0 ml y darle el mismo tratamiento que las
soluciones estándar hasta obtener el color. Esta solución de la muestra en estudio está lista para ser
sometida a medición en el aparato.
4.- Medición de la Muestra

Seleccionar en el menú principal el modo “CUANTITATIVO “y ajustar los parámetros analíticos de
medición a la longitud de onda de trabajo y del número de standard por medir empleando como blanco
la solución No 5 (Blanco).
IX CALCULOS
1.- Método Gráfico
Presionar la tecla COPY para obtener la curva de calibrado y en él se plotea el valor de absorbancia
de la muestra en la curva para determinar su concentración. Calcular la concentración final de la
muestra teniendo en cuenta las diluciones efectuadas.
2.- Método Analítico

Seguir los procedimientos de acuerdo con los pasos señalados:
a) Cálculo de las absortividades de las soluciones estándar
Emplear la ecuación base de las leyes fotométricas:
A = a.b.c
Calcular las absortividades de las soluciones standard.
a1 = A1 / C1
a2 = A2 / C2
a3 = A3 / C3
a4 = A4 / C4
Luego calcular la absortividad media:
a m = a1 +a2+ a3+ a4
4
b) Cálculo de la concentración de la muestra
En la ecuación: A = am.b.c.
Se despeja C que corresponde a la concentración de la muestra:
C muestra = A muestra
am x b
c) Cálculo de la concentración de la muestra teniendo en consideración las

diluciones efectuadas
Calcular la concentración de la muestra tomando en cuenta las diluciones realizadas a la solución

problema.
d) Expresión del resultado

1.- En miligramos de hierro por mililitro
X CUESTIONARIO
1.- Efectué la reacción entre el hierro (II) y el reactivo fenantrolina
2NH2OH + 2OH-+2Fe+3 → 2Fe+2 + N2 + 4H2O
2.- Para qué sirve el blanco y como está constituido en la determinación de hierro por el método de la
fenantrolina
El hierro II reacciona con la 1-10 fenantrolina para dar un complejo anaranjado rojizo muy
estable, La hidroxilamina sirve, dentro de un intervalo de pH limitado, como un excelente
reactivo para la reducción del hierro III
3.- Si una muestra contiene hierro (II) y hierro (III), diseñe una técnica mediante un diagrama de
bloques para analizar estos componentes por separado.
Teniendo en cuenta el anterior flujograma, podemos dividir el sistema de acuerdo con la molécula que
nos interese por le medio de la absorbancias en la que reaccionan.
4.- Que tipos de interferencia puede presentarse en un análisis espectrofotométrico

Las interferencias que se pueden producir en espectroscopia de absorción atómica se clasifican en:
físicas químicas, de ionización y espectrales.
Un ejemplo de estas interferencias se observa en la determinación de Mg y Cu en presencia de ácido
fosfórico. A mayor concentración de H3PO4 la viscosidad de la solución aumenta, disminuyendo la
velocidad de aspiración de ella y una fracción menor llega a la llama, produciéndose una absorbancia
menor de la muestra.
Disociación incompleta de la molécula formada o formación de una sal difícil de fundir. Reacción
espontánea de los átomos libres con otros átomos o radicales presentes en el medio ambiente.
Las interferencias espectrales de línea ocurren cuando hay superposición de dos líneas atómicas o
cuando éstas no son resueltas por el monocromador.
Un ejemplo para el primer caso se tiene en la determinación de trazas de zinc en una matriz de hierro,
debido a que la línea de absorción del hierro (213.86 nm) se superpone a la línea de resonancia del
zinc (213.86 nm).
5.- Calcular la absortividad molar del complejo rojo anaranjado fe-fenantrolina, si se trató un volumen
alícuota de 5 ml de una solución estándar con un total de 20 microgramos de hierro y luego se diluyó
a un volumen final de 10 ml. La absorbancia de la solución medida a 510 nm es de 0.4 y se empleó
una celda de 1 cm
6.- Que otros métodos espectroscópicos del visible conoce para la determinación de hierro, señale
sus fundamentos brevemente
Ultravioleta-Visible (UV- VIS)
El primer espectrofotómetro UV VIS entró en uso general en la década de 1940 siendo una de las
técnicas de laboratorio más comunes (Yücesoy, 2000). La espectroscopía UV trata con las
interacciones de radiación ultravioleta con la muestra, está basada sobre la absorción de radiación
electromagnética a longitudes de onda en el rango 200-400 nm
Infrarrojo (IR)
Con la construcción en 1930 del primer prototipo de espectrofotómetro IR se inició un interés creciente
por la espectroscopía infrarrojo (Derrick et al, 1999), siendo la técnica espectroscópica más usada
en análisis de suelos (Nocita et al, 2015). Se basa en la absorción de radiación electromagnética de
longitudes de onda en el rango de 780-2500 nm. La absorción de radiación infrarroja depende sobre
el cambio neto en el momento dipolar de la molécula como consecuencia de su movimiento
vibracional.
Resonancia Magnética Nuclear (RMN)
Los primeras aplicaciones de la espectroscopía de RMN se registraron en el año de 1946
convirtiéndose en una de las metodologías más útiles en diferentes campos del conocimiento, desde
cinética hasta superconductividad (Becker, 1993). La principal limitación de la espectroscopía RMN
es la baja sensibilidad en la detección y mayor consumo de tiempo, comparado a cristalografía de
rayos X o espectroscopía de masas.
ESPECTROMETRÍA DE MASAS (EM)
Los primeros equipos de espectrometría de masas (EM) se remontan a 1912 cuando J. J. Thomson
construyó el primer espectrómetro de masas y se empezaron a comercializar hacia 1942, este
instrumento mide la relación masa/carga de los electrones, y cuyos desarrollos permitieron demostrar
la existencia de isótopos y han permitido analizar macromoléculas de interés biológico usando
técnicas de ionización como ionización y desorción de matriz asistida por láser (MALDI, por sus sigla
en inglés) e ionización electrospray (ESI, por sus sigla en inglés) (Griffiths, 2008).
7.- Calcular la concentración del analito Fe determinado en la práctica mediante el método de

regresión lineal
Informe de laboratorio No 4
Determinación de Hierro
Fecha: 28/09/21 No GRUPO: _________
Análisis:
• Preparación de las soluciones patrones de hierro
• Seleccionar la longitud de onda de trabajo
• Analizar el contenido de hierro en un alimento
• Evaluar los resultados obtenidos
Método:
Espectrofotométrico de la Fenantrolina
Muestra: Lentejas Peso de Muestra= 4.0000 g
Contenido teórico: 9 mg /100%
1.- PREPARACION DE LAS SOLUCIONES PATRONES
No volumen Buffer Fenantrolina Concentraci Volume
estánda del Stock ml Ml Hidroxilamina ml ón mg/ml n final
r ml ml
1 0.5 2 3 3 0.001 50.0
2 1.0 2 3 3 0.002 50.0
3 1.5 2 3 3 0.003 50.0
4 2.0 2 3 3 0.004 50.0
5 0.0 2 3 3 0.000 50.0
Solución stock = 1ml = 0.1 mg de Fe.
2.- MEDICIÓN DE PATRONES A LONGITUD DE ONDA ENTRE 450-600 nm

LONGITUD DE ONDA ABSORBANCIA
450 0.078
460 0.090
470 0.126
480 0.144
490 0.180
500 0.204
510 0.216 MAYOR ABS
520 0.205
530 0.190
540 0.170
550 0.140
560 0.110
570 0.090
580 0.080
590 0.065
600 0.062
3.- OBTENCIÓN DEL ESPECTRO DE ABSORCIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA

LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO
FIGURA # 1
ESPECTRO DE ABSORCIÓN
Espectro de Absorcion
0.25
0.216
0.204 0.205
0.2 0.19
0.18
0.17
PICO MAS
0.144 ALTO
ABSORBANCIAS
0.15 0.14
0.126 ABS 0.216
0.11 Λ 509 nm
0.1 0.09 0.09

0.078 0.08
0.0650.062
0.05
0
425 445 465 485 505 525 545 565 585 605 625
LONGITUD DE ONDA
4.- MEDICIÓN DE LAS SOLUCIONES PATRONES
TABLA DE MEDICIÓN DE SOLUCIONES PATRONES
No patrón Concentración mg/mlAbsorbancia

Fe
1 0.001 0.215
2 0.002 0.354
3 0.003 0.507
4 0.004 0.678
5.- CURVA DE CALIBRACIÓN
FIGURA# 2
CURVA DE TITULACIÓN
CURVA DE TITULACION
0.8
0.678
0.7
0.6
0.507
ABSORCIONES
0.5
0.4 0.354
0.3 0.215
0.2
0.1
0
0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025 0.003 0.0035 0.004 0.0045
CONCENTRACION
ANALISIS DE LA MUESTRA
DATOS
MUESTRA LENTEJAS
PESO DE MUESTRA 4.000 g
VOLUMEN INICIAL 100.0 ml
VOLUMEN ALICUOTA 25.0 ml
VOLUMEN FINAL 50.0 ml
LONGITUD DE ONDA 509 nm
BLANCO TODOS LOS REACTIVOS MENOS HIERR0
TECNICA DE ANALISIS
1.- Pesar 4.0000 g de muestra de lentejas, calcinar a 550 oC por espacio de 3-4 horas,
hasta obtención de cenizas
2.- Las cenizas disolverlas con HCl 6 M. Calentar suavemente hasta semis quedad en
cocinilla eléctrica a temperatura controlada.
3.- Diluir con más o menos 30 ml de agua destilada y llevar nuevamente a calentamiento
en una cocina eléctrica.
4.- Si hay residuos sólidos en la solución filtrar. Los filtrados trasvasarlos a una fiola de
100 ml.
5.- De la solución se mide un volumen alícuota de 25.0 ml y se deposita en una fiola de

50.0 ml y se DA el tratamiento igual que los patrones
CUADRO DE SOLUCIONES MUESTRAS

volumen de
No solución de Buffer Hidroxilamina Fenantrolina
Volumen final ml
grupo muestra de Ml ml ml
ml (alícuota)
1 25.0 2 3 3 50.0
2 25.0 2 3 3 50.0
3 25.0 2 3 3 50.0
4 25.0 2 3 3 50.0
5 25.0 2 3 3 50.0
6.- A LA SOLUCION SE LE HACE UN AJUSTE A pH 3.5

7.- LA FIOLA POR 50 ML SE DILUYE LA SOLUCIÓN, SE ENRASA Y SE

HOMOGENIZA.
8.- Preparada las soluciones problemas se procede a medir su absorbancia en el

espectrofotómetro.
TABLA DE RESULTADOS EXPERIMENTALES DE LA MUESTRA
No grupo Peso de muestra g ABS

1 4.0360 0.341
2 4.0358 0.339
3 4.0362 0.342
4 4.0361 0.342
5 4.0359 0.340
6 4.0358 0.339
7 4.0002 0.315
CÁLCULOS
1. Método gráfico
No patrón Concentración mg/mlAbsorbancia
Fe
1 0.001 0.215
2 0.002 0.354
3 0.003 0.507
4 0.004 0.678
Por las diluciones

Concentración de la muestra: 0.0019
1. Diluciones
• Cálculo de la concentración para las diluciones
0.0019 mg/ml x 50 ml =25 ml x C2
C2= 0.0038 mg/ml
0.0038 mg/ml x 100 ml = 0.38 mg Fe
• Cálculo del peso de hierro en miligramos por ciento
Mg %Fe = x mg Fe x 100%
Peso de muestra en g
Mg %Fe = 0.38 mg Fe x 100%

4.0360g muestra
TABLA DE RESULTADOS DEL ANÁLISIS

(Método gráfico)
No GRUPO mg %hierro
1 9.41
2 9.05
3 9.30
4 9.35
5 9.20
6 9.15
7 9.30
2.- MÉTODO ANALÍTICO

A = a. b.C
Cálculo de la absortividad media

a1 = 0.215 = 215.0
(1 cm) (0.001 mg/ml)
a2 = 0.354 = 177.0
(1 cm) (0.002 mg/ml)
a3 = 0.507 = 169.0
(1 cm) (0.003 mg/ml)
a4 = 0.678 = 169.5
(1 cm) (0.004 mg/ml)
a m = 182.625 ml/cm x mg
• Cálculo de la concentración de la muestra
Cmuestra = 0.341 = 0.00187 mg/ml Fe

(1cm) (182.625 ml/cm x mg)

0.0019 mg/ml x 50 ml =25 ml x C2
C2= 0.0038 mg/ml
0.0038 mg/ml x 100 ml = 0.38 mg Fe
• Cálculo del peso de hierro en miligramos por ciento
Mg %Fe = x mg Fe x 100%
Peso de muestra en g
Mg %Fe = 0.38 mg Fe x 100%

4.0360g muestra
No GRUPO mg %hierro
1 9.25
2 9.01
3 9.28
4 9.28
5 9.17
6 9.20
7 9.24
GRAFICA DE RESULTADOS
mg % Hierro
9.28 9.28
9.3 9.25 9.24
9.25 9.2
9.17
9.2
9.15
9.1
9.05 9.01
9
8.95
8.9
8.85
1 2 3 4 5 6 7
mg % Hierro
DISCUSIÓN DE RESULTADOS:
TRATAMIENTO ESTADÍSTICO DE DATOS
1.- EXACTITUD
a) ERROR ABSOLUTO (Ea)
E=/X/-/A/
Donde:
/x/ = valor medido
/A/ = valor verdadero = 9 mg/100%
TABLA DE ERROR ABSOLUTO
No grup /x/ - /A/ = E ERROR

1 9.25 - 9.00 = 0.25 exceso
2 9.01 9.00 = 0.1 exceso
3 9.28 9.00 0.28 exceso
4 9.28 9.00 0.28 exceso
5 9.17 9.00 0.17 Exceso
6 9.20 9.00 0.20 exceso
7 9.24 9.00 0.24 Exceso
b) ERROR RELATIVO (Er)
% Er = /x/ - /A/ x 100%

/A/
TABLA DE ERROR RELATIVO
No grupo % ERROR relativo

1 0.028
2 0.001
3 0.031
4 0.031
5 0.019
6 0.022
7 0.027
2.- MEDIDA DE TENDENCIA CENTRAL
A) MEDIA ARITMÉTICA O PROMEDIO (M)
MEDIA ARITMÉTICA
No grupo /X/
1 9.25
2 9.01
3 9.28
4 9.28
5 9.17
6 9.20
7 9.24
M = x1 + x2+x3+x4+x5 = ∑ X =
N N
M = 9.20
A) MEDIANA (Me)
colocar datos en orden creciente, por ser el número de casos impar se
toma como mediana el valor impar (3). Si el número de casos es par se
toma la media de los valores centrales
No grupo /X/
1 9.25
2 9.01
3 9.28
4 9.28
5 9.17
6 9.20
7 9.24
La mediana es igual
Me= 9.28
3.- MEDIDAS DE DISPERSION

A) RANGO O INTERVALO
R = VALOR mayor – VALOR menor

= 9.28 - 9.01 = 0.27
B) DESVIACIÓN ABSOLUTA (DA)
No grupo /x/ - /M/ = DA

1 9.25 9.20 = 0.05
2 9.01 9.20 0.19 valor
dudoso
3 9.28 9.20 0.07
4 9.28 9.20 0.07
5 9.17 9.20 0.03
6 9.20 9.20 0.0
7 9.24 9.20 0.4
El resultado de 9.01 es el valor que presenta mayor dispersión 0.19. Es un VALOR

SOSPECHOSO PARA SER DESCARTAD0
DESVIACIÓN ABSOLUTA DE LOS VALORES ACEPTADOS

1 9.01 9.25 = 0.24
2 9.25 9.25 0.00
3 9.24 9.25 0.01
4 9.20 9.25 0.05
5 9.28 9.25 0.03
6 9.28 9.25 0.03
7 9.17 9.25 0.08
Se aísla el valor considerado sospechoso de ser descartado
Media aritmética de los cuatro valores aceptados
M = 9.25
Desviación media
DM = 0.00+0.03+0.03+0.08 = 0.035
4
C) Test 4d (rechazo de datos)
Si: DA del valor dudoso > 4 DM el valor se rechaza
0.24 > 4 x0.035
0.24 > 0.14
El resultado del grupo 1 de 9.01 se rechaza.
ESPECTROFOTOMETRIA DEL VISIBLE

ANALISIS DE FOSFORO
I OBJETIVOS
• Preparar las soluciones stock y patrones
• Construir una curva de absorción
• Determinar la longitud de onda de trabajo
• Obtención de la curva de calibración y verificación de la ley Beer
• Determinar cuantitativamente la concentración de ácido fosfórico disueltos en bebidas
gasificadas disponibles en el mercado.
II GENERALIDADES
Las bebidas gasificadas son bebidas saborizantes, efervescentes, sin contenido de alcohol.
Contienen agua, azúcar, edulcorantes artificiales, ácidos como fosfórico, cítrico, málico, tartárico,
cafeína, colorantes, saborizantes y conservantes.
El pH promedio es 2.4 y el ácido fosfórico crea un medio ácido que mejora la absorción de CO2,
reduciendo la presión que genera CO2 y permitiendo así el embotellamiento, el ácido fosfórico tiene
un sabor amargo que es compensado con el agregado de azúcar, se asocia a pérdida de calcio.
El H3PO4 es una sustancia que contienen los refrescos de cola, es un aditivo, que se emplea como
antioxidante, cantidades elevadas de fósforo en la dieta, tienen un efecto desmineralizaste del hueso,
ya que el fósforo es un ácido que precipita con el calcio, reduciendo su absorción por parte de nuestro
cuerpo.
Por ello, no se recomienda abusar del consumo de estas bebidas dada la importancia del calcio, en
el correcto desarrollo y mantenimiento de la masa ósea. El H3PO4 que se encuentra
muy diluido no es tóxico, inodoro, y se emplea para dar sabor ácido a muchos refrescos, como la coca
cola, a la cual se le agrega aproximadamente 0.95 % de H3PO4
III FUNDAMENTO
El método radica en que en disolución ácida se tiene una reacción de los fosfatos con molibdato de
amonio para formar el compuesto de molibdato de fósforo como fosfomolibdato de amonio. La
reacción es la siguiente:
H3 PO4 + 12(NH4)2 Mo O4 + 21 H+ --→ (NH4)3PO4.12MoO3 + 21 NH4+ + 12 H2O
Por reducción exclusiva de los molibdofosfatos con ácido ascórbico, el molibdeno se reduce a azul
de molibdeno. El color azul formado está en proporción directa con el fosfato presente y se mide
espectrofotométrica a una longitud de onda de 830 nm.
El azul de molibdeno es una solución coloidal de color azul oscuro de una mezcla de óxidos mixtos
de molibdeno (VI) y (IV) correspondiendo a la fórmula MoO2.3MoO3, la coloración es estable unas
12 horas. El compuesto azul soluble cuya absorbancia es medida espectrofotométricamente es
proporcional a la cantidad de fósforo presente en la muestra
El circuito básico del equipo instrumental es el siguiente:
V APARATOS
• Espectrofotómetro : Shimadzu 160 A
• Cubeta : 1 Cm. De trayecto óptico
• Región de trabajo : Espectro visible
• Longitud de onda : 830 nm
• Blanco :
• Solución de reactivos y disolvente menos fósforo
VI REACTIVOS
• Solución de Heptamolibdato de amonio (NH4)6Mo7O24.4H2O
Disolver 0.156 gramos de reactivo en 5 ml de agua destilada calentando a unos 60 oC.
• Solución de ácido ascórbico
Disolver 0.2112 gramos de ácido ascórbico hasta un volumen final de 10 ml de agua destilada,
(debe prepararse ser fresca)
Solución de H2SO4
Medir 2.2 ml de H2SO4 concentrado y diluir en 15 ml de agua destilada
Solución Reductora
Mezclar las tres soluciones anteriores y enrasar a 50.0 con agua destilada.
• Solución Stock de fosfato disódico de 100 ppm de P (Na 2HPO4.12H2O = 357.98 g/mol))
La solución se prepara a partir del Na 2HPO4.12H2O. Para ello se disuelve 0.28888 gramos del
reactivo, calidad analítica, en 50 ml de agua destilada y, pasar a una fiola de 250 ml, diluir
exactamente hasta el enrase y homogenice. La concentración de la solución es de 100 ppm de
fósforo
Solución de trabajo de 4 ppm P
De la solución de 100 ppm de P preparar por disolución la solución de 4 ppm de P. Medir 1.0 ml y
llevar a fiola de 25 ml, diluir, enrasar y homogenizar la solución.
VIII TECNICA
Estas soluciones se deben preparar instantes antes del análisis porque son inestables. Disponer de
5 matraces aforados de 10 ml y rotular del uno al cinco. Preparar las soluciones patrones e incubar
durante 30 minutos a 50 oC (baño maría), con lo que la solución debe tomar un color azul.
CUADRO DE SOLUCIONES PATRONES

Volumen de la Volumen
Volumen final Concentración
No patrón solución de solución
ml ppm P
4ppm P Reductora ml
1 1.0 4.0 10.0 0.400
2 2.0 4.0 10.0 0.800
3 3.0 4.0 10.0 1.200
4 4.0 4.0 10.0 1.600
5 5.0 4.0 10.0 2.000
Una vez iniciada el encendido del instrumento y aparece en pantalla el menú básico de funciones,
seleccionar la función “ESPECTRO “y ajustar en esta función los parámetros analíticos de:
λS = 900 NM λ E = 600 NM
SUPERIOR = + 0.500 A INFERIOR = + 0.00 A
Determinar la longitud de onda de trabajo en la curva espectral mediante el barrido con el cursor.

Desgasificar aproximadamente 10 ml de la muestra con vacío y agitación constante. Medir
exactamente 1.0 ml de refresco desgasificado y aforar a 50 ml.
Medir una alícuota de 1.0 ml, colocarla en una fiola de 10.0 ml y añadirle 4 ml de la solución reductora
y enrasar a volumen de 10.0 ml. incubar por espacio de 30 minutos a 50 oC, hasta desarrollo de color
azul (fiola sin tapa) . Homogenizar.
4.- Medición de la Muestra

Seleccionar en el menú principal el modo “CUANTITATIVO “y ajustar los parámetros analíticos de
medición a la longitud de onda de trabajo y del número de standard por medir empleando como blanco
la solución No 5 (Blanco). Medir las absorbancias de cada muestra problema a la longitud de onda de
trabajo de 830 nm
IX CALCULOS
Obtener la curva de calibrado y en él se plotea el valor de absorbancia de la muestra en la curva
para determinar su concentración. Calcular la concentración final de la muestra teniendo en cuenta
las diluciones efectuadas.

Seguir los procedimientos de acuerdo con los pasos señalados:
b) culo de las absortividades de las soluciones estándar
Emplear la ecuación base de las leyes fotométricas:
A = a.b.c
Calcular las absortividades de las soluciones standard.
a1 = A1 / C1
a2 = A2 / C2
a3 = A3 / C3
a4 = A4 / C4
Luego calcular la absortividad media:
a m = a1 +a2+ a3+ a4
c) Cálculo de la concentración de la muestra
En la ecuación: A = am.b.c.
Se despeja C que corresponde a la concentración de la muestra:
C muestra = A muestra
am x b
d) Cálculo de la concentración de la muestra teniendo en consideración las

diluciones efectuadas
Calcular la concentración de la muestra tomando en cuenta las diluciones realizadas a la solución

problema.
e) Expresión del resultado

1.- En miligramos de fósforo por ciento
mg% = peso de P x 100 $

volumen de muestra
X CUESTIONARIO
1.- Señale que otros métodos conoce para determinar fósforo
El método de aminoácidos es un método común utilizado y los medidores que usan este
método miden hasta 30 mg/L de fosfato y 15 mg/L de fósforo. Los medidores que utilizan el
método del molibdindadadate pueden medir fósforo hasta 32.6 mg/L o cerca de 100 mg/L
como fosfato
2.- Formule la reacción de formación del azul de molibdeno

12 Na2MoO4 + H2PO4 + 24 H → H3P (Mo3O10)4 + 24 Na + 12 H20
H3P (Mo3O10)4 + 2 e- + 2 H + → H5P (Mo3O10)4
H5P (Mo3O10)4 + 2 e- + 2 H + → H7P (Mo3O10)4
3.- Que papel desempeña en el análisis el HCl

Es una sustancia química de uso frecuente en el laboratorio; se utiliza como reactivo en
diferentes reacciones químicas y en la preparación de muestras para el análisis de laboratorio
en este caso actúa como estabilizador de pH
4.- Que otros reactivos químicos pueden utilizar en la preparación de la solución stock de
fósforo.
A partir de la sal: Disolver en agua ultrapura 0,2195 g de KH2PO4 anhidro y diluir a 1000 mL
en balón volumétrico. Almacenar en nevera a 4°C ± 2ºC en frasco de vidrio. 1,00 mL = 50,0g
PPO4–3.
5.- Que efectos genera la presencia de H3PO4 en las bebidas de cola

Entre los componentes tóxicos se destaca el ácido fosfórico, que tiene un efecto corrosivo.
La aparición de diabetes mellitus, anemia, pérdida del esmalte de los dientes,
envejecimiento y obesidad, forman parte de los efectos dañinos a la salud. La sustitución
por otras bebidas más inocuas forma parte del tratamiento.
Determinación de Fósforo
Fecha: 06/10/21 No GRUPO: _________
Análisis:
• Preparar las soluciones de 100ppm, 4 ppm, y soluciones patrones de P
• Determinar su curva de absorción
• Determinar su longitud de onda de trabajo
• Medir las soluciones patrones
• Construir la curva de calibrado y verificar la Ley Beer
• Determinar el contenido de ácido fosfórico en porcentaje
• Evaluar los resultados medidos
Método:
Espectrofotométrico del ácido ascórbico
Muestra: Coca Cola Volumen de muestra: 1.0 ml

Contenido teórico: 0.95% H3PO4
DATOS:
• Volumen de muestra = 1.0
• Volumen inicial = 50.0 ml
• Volumen alícuota = 1.0 ml
• Volumen final = 10.0 ml
• Blanco = todos los reactivos menos el Fosforo
• Longitud de onda de trabajo = 850 nm

No patrón Volumen de la Volumen de la Volumen final Concentración
solución de solución de ml ppm P
4ppm 4ppm
1 1.0 4.0 10.0 0.400
2 2.0 4.0 10.0 0.800
3 3.0 4.0 10.0 1.200
4 4.0 4.0 10.0 1.600
5 5.0 4.0 10.0 2.000
6 0.0 4.0 10.0 0.0
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO DE ABSORCIÓN

A uno de los patrones hacer llegar luz de 750 a 920 nm y medir para cada longitud de
onda su respectivo valor de absorbancia.
TABULACION DE DATOS DE MEDICIÓN DEL PATRÓN
Longitud de onda nm ABS

750 0.580
760 0.600
770 0.760
780 0.783
790 0.800
800 0.813
810 0.828
820 0.840
830 0.820
840 0.810
850 0.800
860 0.790
870 0.770
880 0.730
890 0.710
900 0.700
910 0.690
920 0.630
GRAFICO DE ESPECTRO DE ABSORCION
Espectro de Absorcion
1
0.9
0.8
0.7
0.6
Absorvancia
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
740 760 780 800 820 840 860 880 900 920 940
Longitud de onda
FUENTE: Elaboración propia

TABLA DE MEDICIÓN DE LOS PATRONES
No PATRÓN CONCENTRACIÓN ppm P ABS

1 0.4 0.123
2 0.8 0.244
3 1.2 0.362
4 1.6 0.483
5 2.0 0.603
Longitud de onda de trabajo=820 nm
GRAFICO DE DATOS DE MEDICION DE PATRONES
Curva de calibracion
0.7
0.603
y = 0.2998x + 0.0033
0.6
R² = 1
0.483
0.5
Absorvancias
0.4 0.362
0.3 0.244
0.2 0.123
0.1
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Concentracion
Fuente: Elaboración propia
PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES MUESTRAS
Volumen e Volumen Volumen Solución Volumen

No muestra
muestra ml inicial alícuota reductora final
1 1.0 50.0 1.0 4.0 10.0
MEDICION DE LAS SOLUCIONES MUESTRAS
No GRUPO ABS
1 0.35
2 0.40
3 0.50
4 0.45
5 0.20
6 0.42
7 0.30
Longitud de onda de trabajo: 820 nm
CÁLCULOS
1.- MÉTODO GRÁFICO (Curva de calibración)

0.7
0.603
y = 0.2998x + 0.0033
0.6
R² = 1
0.483
0.5
Absorvancias
0.4 0.362
0.3 0.244
0.2 0.123
0.1
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Concentracion

• Cálculo de la absortividad media
a1 = 0.123 = 0.3075
(1 cm) x (0.4 mg/L)
a2 = 0.244 = 0.3050
(1 cm) x (0.8 mg/L)
a3 = = 0.362 = 0.3017
(1 cm) x (1.2 mg/L)
a4 = 0.483 = 0.3019
(1 cm) x (1.6 mg/L)
A5 = 0.603 = 0.3015
(1 cm) x (2.0 mg/L
a m = 0.3035 L/cm x mg
Cmuestra = = 0.4 = 0.1214mg/L

(1 cm) (0.3035L/cm x mg
0.1214mg/L x 10 ml = 1ml x C2
C2 = 1.214 mg/L
1.214mg/L x 0.050L = 0.0607mg P
• Cálculo del peso de ácido fosfórico en porcentaje

0.0607 mg P x 1g (97.97 g H3PO4 )
% H3PO4 = 1000mg x (30.97 g P ) x 100% = 1.3128

1ml de muestra
N° MUESTRA %H3PO4
1 0.91
2 1.04
3 1.30
4 1.17
5 0.51
6 1.09
7 0.78
% DE H3PO4
1.4 1.3
1.17
1.2 1.04 1.09
1 0.91
% DE H3PO4
0.78
0.8
0.6 0.51
0.4
0.2
0
1 2 3 4 5 6 7
MUESTRA
Fuente: Elaboración propia
1.- EXACTITUD
c) ERROR ABSOLUTO (Ea)
E=/X/- /A/
Donde:
/x/ = valor medido
/A/ = valor verdadero = 0.95 %
No grup /x/ - / A/ = ERROR

1 0.91 0.95 -0.04 defecto
2 1.04 0.95 -0.09 defecto

3 1.30 0.95 -0.35 defecto
4 1.17 0.95 -0.22 defecto
5 0.51 0.95 -0.45 defecto
6 1.09 0.95 -0.14 Defecto
7 0.78 0.95 -0.17 defecto
d) ERROR RELATIVO (Er)
% Er = /x/ - /A/ x 100%

/A/

1 -4.21
2 9.47
3 37.14
4 23.16
5 -46.32
6 14.74
7 -17.89
B) MEDIA ARITMÉTICA O PROMEDIO (M)
MEDIA ARITMÉTICA
No grupo /X/
1 0.91
2 1.04
3 1.30
4 1.17
5 0.51
6 1.09
7 0.78
M = x1 + x2+x3+x4+x5 + X6 = ∑ X =
N N
M = 0.74
B) MEDIANA (Me)
colocar datos en orden creciente, por ser el número de casos impar
se toma como mediana el valor impar (3). Si el número de casos es
par se toma la media de los valores centrales
No grupo /X/
1 0.91
2 1.04
3 1.30
4 1.17
5 0.51
6 1.09
7 0.78
La mediana es igual
Me= 0.74

D) RANGO O INTERVALO
= 0.74 - 0.74 =0.00
E) DESVIACIÓN ABSOLUTA (DA)

1 0.91 0.74 0.17
2 1.04 0.74 0.3
3 1.30 0.74 0.56
4 1.17 0.74 0.43
5 0.51 0.74 -0.23
6 1.09 0.74 0.35
7 0.78 0.74 0.04
Los resultados obtenidos presentan una desviación estándar pequeña, el nivel de

dispersión es mínimo. Por lo que los resultados obtenidos ninguno es un valor
dudoso, todos los datos son aceptados.

1 0.91 0.74 0.17
2 1.04 0.74 0.3
0.56
3 1.30 0.74 sospechoso
4 1.17 0.74 0.43
5 0.51 0.74 -0.23
6 1.09 0.74 0.35
7 0.78 0.74 0.04

M = 0.17
Desviación media
DM = 0.00+0.03+0.03+0.08 =0.17
4
F) Test 4d (rechazo de datos)

Si: DA del valor dudoso > 4 dm el valor se rechaza
DA (0.17) > 4 (0.17) dm
DA (0.17) > 0.70 dm
El valor de 0.56 no se rechaza porque la prueba de 4D es mayor al valor.
ESPECTROFOTOMETRIA DEL ULTRAVIOLETA

ANALISIS DEL ACIDO ACETILSALICILICO
I OBJETIVOS
• Construir una curva de absorción y de calibrado.
• Analizar y determinar el grado de pureza del Ácido acetilsalicílico en una aspirina.
II GENERALIDADES
Este acetil derivado del ácido salicílico se obtiene por la reacción de este ácido con el anhídrido
acético. La reacción de formación es la siguiente:
OH OCOCH3
(CH3 CO)2 O + C6 H4 ----------→ C6 H4 + CH3 - COOH
COOH COOH
Anhidrido acético ácido salicílico ácido acetilsalicílico ácido acético
El ácido acetilsalicílico llamado también éter acético del ácido salicílico, aspirina o ácido orto-
aatoxibenzoico, son cristales blancos en pequeñas tablas o agujas, inodoros, de sabor ligeramente
ácido, estables en ambiente seco, pero se hidrolizan gradualmente en medio húmedo
transformándose en ácido salicílico y ácido acético, y se vuelve perceptible el olor del segundo. Se
funde a unos 135o C, pero el punto de fusión varía según las condiciones en que se haga el ensayo.
Su solución alcohólica no se tiñe de color violado con el cloruro férrico (en lo que se diferencia del
ácido salicílico).
Un gramo de ácido acetilsalicílico se disuelve en unos 300 mililitros de agua destilada, en 5 ml. de
alcohol de 90o en 17 ml. de cloroformo y en 10 a 15 ml. de éter. En las soluciones concentradas de
acetato de amonio y en las soluciones de carbonatos e hidróxidos alcalinos es soluble con
descomposición.
Se emplea en el tratamiento sintomático del dolor articular muscular. En la fiebre reumática, produce
alivio sintomático del dolor y disminuye el grado de inflamación articular, suprime la fiebre. Se usa
también como antipirético en procesos infecciosos, tóxicos o de deshidratación.
II FUNDAMENTO
El ácido acetilsalicílico no disociado interacciona con la energía radiante en la región que corresponde
al ultravioleta presentando dos picos en la curva de absorción. Un pico primario a una longitud de
onda de 230 nm y el otro secundario a 275 nm.
La medición espectrofotométrica en esta región del espectro se realiza a la longitud de onda de 230
NM.
V APARATOS
• Espectrofotómetro : Shimadzu 160 - A
• Cubeta : 1 cm. De trayecto óptico
• Región de trabajo : Espectro Ultravioleta
• Longitud de onda : 230 NM

• Blanco : agua
VI MATERIALES
• Fiola de 50, 100.0 y 250 ml.
• Pipetas graduadas de 1, 2, 5 y 10 ml.
• Mortero de porcelana.
VII REACTIVOS
• Solución Stock de Ácido Acetilsalicílico de 0.25 mg / ml.
Pesar exactamente 250 miligramos de ácido acetilsalicílico grado reactivo analítico, disolver en
agua destilada agitando fuertemente y llevar a una fiola de 1000.0 ml de capacidad. Enrasar y
homogenizar.
• Solución de Ácido clorhídrico 1 N.
VIII TECNICA
Preparar 3 Fiola de 50 ml. y agregar a la fiola # 1, 1.0 ml., a la fiola # 2 añadir 2.0 ml. y a la fiola # 3
agregar 3.0 ml. respectivamente de la solución Stock de ácido acetilsalicílico cuya concentración es
1 ml = 0.25 mg. AAS. Agregar al 50 % de su capacidad la solución de HCl 1N y enrasar con agua
destilada. Agitar adecuadamente para homogenizar la solución.
No Volumen Volumen Concentración

Standard del Stock aforado AAS mg/ ml.
1 1.0ml 50.0 ml 0.005
2 2.0ml 50.0ml 0.010
3 3.0ml 50.0ml 0.015

Tomar 10 pastillas de muestra, triturar, homogenizar adecuadamente y pesar exactamente 80
miligramos de muestra. Disolver en agua fría con agitación constante por espacio de 5 a 10 minutos.
Filtrar cuidadosamente para separar el insoluble, lavar adecuadamente el residuo sólido. La solución
filtrada llevar a un volumen de 100.0 ml. en fiola.
Medir una alícuota de 1.00 ml., colocarlo en una fiola de 50.0 ml, agregarle HCl 1N hasta el 50% de
su volumen. Enrasar con agua destilada. Agitar para homogenizar la solución y rotular debidamente.
IX CALCULOS
1.- Método gráfico
Presionar la tecla COPY para obtener la curva de calibrado y en ella se plotea el valor de absorbancia
de la muestra en la curva para determinar su concentración. Calcular la concentración final de la
muestra teniendo en cuenta las diluciones efectuadas.

Seguir los procedimientos de cálculo de acuerdo con los pasos señalados en la sesión anterior:
a) Cálculo de las absortividades del estándar

b) Cálculo de la concentración de la muestra
c) Cálculo de la concentración de la muestra teniendo en consideración las diluciones efectuadas
d) Expresar el resultado del análisis en miligramos de ácido acetilsalicílico y en porcentaje de este.
X CUESTIONARIO
1.- Señalar que tipos de compuestos absorben radiación UV
Se utiliza de manera general en la determinación cuantitativa de los componentes de soluciones de
iones de metales de transición y compuestos orgánicos altamente conjugados.
2.- Indicar como se clasifica la región del UV

La radiación UV se clasifica en tres tipos principales: ultravioleta A (UVA), ultravioleta B (UVB) y
ultravioleta C (UVC). Debido a que la radiación UVC es absorbida por la capa de ozono de la Tierra,
no presenta tanto riesgo.
3.- Cuáles son las aplicaciones analíticas más importantes de los métodos del UV
estandarización de colores de diversos materiales, como plásticos y pinturas, detección de niveles de
contaminación en aire y agua, y determinación de trazas de impurezas en alimentos y en reactivos.
Además, que permite determinar la concentración de un compuesto en solución.
4.- ¿Qué limitaciones tiene la espectroscopia de absorción uv como técnica de análisis cualitativo?
Sólo pueden analizarse las muestras cuando están en disolución. Presenta diferentes tipos de
interferencias. Solo pueden analizarse elementos de uno en uno.
5.- (a) Preparar una curva de calibrado para la determinación de monoclorobenceno, utilizando los
datos tabulados a continuación:
Concentración ppm Absorbancia

1.2 0.24
2.5 0.50
3.7 0.71
5.1 0.97
7.2 1.38
9.8 1.82
(b) Se analizan tres muestras de cloro benceno obteniéndose unas transmitancias de 90, 85 y 80%,
respectivamente, en las mismas condiciones experimentales empleadas en la obtención de la curva
de calibrado. ¿Cuál es la concentración de cloro benceno en cada muestra?
6.- Explique el fundamento de la determinación del método de análisis.

La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las
radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración.
INFORME DE LABORATORIO No 6
Determinación del Acido acetil salicílico
Fecha: 12/10/2021 Grupo: ________
Análisis:
• Preparación de las soluciones patrones de ácido acetil salicílico
• Analizar el contenido de ácido acetil salicílico en un producto farmacéutico
Método: espectrofotométrico del ultravioleta
Muestra: Aspirina comercial Bayern Peso de Muestra: 671.53 mg/tableta
Contenido Teórico: 500 mg AAS/tableta
DATOS:
• Peso de la tableta = 671.53 mg/tableta
• Peso de muestra = 80.0 mg
• Volumen inicial = 100.0 ml
• Volumen alícuota = 1.0 ml
• Volumen final = 50.0 ml
• Solución stock AAS = 0.25 mg/ml
•
No patrón Volumen de la Volumen Volumen final Concentración

solución stock solución ml mg/ml AAS
HCl 1 N
1 1.0 25.0 50.0 0.005
2 2.0 25.0 50.0 0.010
3 3.0 25.0 50.0 0.015
4 blanco 25.0 50.0
DETERMINACIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO
Longitud de onda ABS

200 1.770
210 1.125
220 0.692
230 0.738
240 0.387
250 0.198
260 0.067
270 0.034
280 0.094
290 0.053
300 0.070
310 0.023
320 0.010
330 0.098
ESPECTRO DE ABSORCION
2
1.8
1.6
1.4
absorbancias
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
200 220 240 260 280 300 320 340
longitud de honda
TABLA DE MEDICIÓN DE LOS PATRONES
No PATRÓN
CONCENTRACIÓN mg/ml ABS
AAS
1 0.005 0.301
2 0.010 0.602
3 0.015 0.900
Longitud de onda de trabajo = 230 nm
CURVA DE CALIBRACIÓN
Curva de Calibracion
1 0.9
0.9
y = 59.9x + 0.002
0.8
R² = 1
0.7 0.602
Absorbancia
0.6
0.5
0.4 0.301
0.3
0.2
0.1
0
0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.014 0.016
Concentracion
PREPARACIONES DE LAS SOLUCIONES MUESTRA
No Peso promedioPeso eVolumen Volumen Volumen Volumen

muestra tableta mg muestra inicial alícuota HCl 1 M final
mg ml ml ml ml
1 671.53 80.0 100.0 1.0 25.0 50.0
MEDICION DE LAS SOLUCIONES MUESTRAS
No GRUPO PESO DE ABS

MUESTRA
1 80.0 mg 0.700
2 80.0 mg 0.698
3 80.0 mg 0.701
4 80.0 mg 0.699
5 80.0 mg 0.702
6 80.0 mg 0.703
7 80.0 mg 0.705
CÁLCULOS:
1.- MÉTODO GRÁFICO (Curva de calibración)
Curva de Calibracion
1 0.9
0.9
y = 59.9x + 0.002
0.8
R² = 1
0.7 0.602
Absorbancia
0.6
0.5
0.4 0.301
0.3
0.2
0.1
0
0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.014 0.016
Concentracion
• Cálculo de la absortividad media
a1 = 0. 301 = 60.2
(1 cm) x (0.005 mg/ mL)
a2 = 0. 602 = 60.2
(1 cm) x (0.010 mg/ mL)
a3 = 0.900 = 60.0
(1 cm) x (0.015 mg/mL)
a m = 60.13 mL/cm x mg
Cmuestra = 0.701 = 0.01165mg/mL

(1 cm) (60.13 mL/cm x mg
0.01165mg/mL x 50 ml = 1ml x C2
C2 = 0.5825 mg/L
0.5820 mg/mL x 0.100 L = 58.25 mg AAS
a) Cálculo de mg AAS/tableta
58.25 mg AAS x 671.53 mg muestra = 489.38 mg AAS/tableta

80 g muestra 1 tableta de AAS
b) Porcentaje de pureza de AAS
% = 489.38 mg AAS x 100% = 72.88 %

671.53 mg muestra
No Muestra % AAS mg AAS / tableta

1 74.94 489.80
2 72.59 487.28
3 72.86 489.30
4 72.65 487.87
5 72.99 490.21
6 73.12 491.05
7 72.66 487.90
METODO REGRESION LINEAL

1 72.81 488.86
2 72.62 487.67
3 72.93 489.77
4 72.73 488.37
5 73.04 490.47
6 73.13 491.06
7 72.92 487.90
TABLA DE RESULTADOS DE ECUACIÓN DE CORRECION


1 74.37 499.45
2 72.50 486.86
3 72.88 489.38
4 72.65 487.87
5 72.98 490.17
6 73.75 495.25
7 70.63 474.27
TABLA DE RESUMEN DE RESULTADOS
N° MUESTRA mg AAS / tableta mg AAS / tableta mg AAS / tableta

1 489.80 488.86 499.45
2 487.28 487.67 486.86
3 489.30 489.77 489.38
4 487.87 488.37 487.87
5 490.21 490.47 490.17
6 491.05 491.06 495.25
7 487.90 487.90 474.27
Título del gráfico

Series1 SERIE 2 SERIE 3
1; 499.45
6; 495.25
6; 491.06
491.05
mg AAS/Tableta
1; 488.86
489.8 3; 489.38
489.77 490.47
490.21
5; 490.17
1; 3; 489.3
2; 4; 487.87
4; 488.37 7; 487.9
2; 487.67
2; 487.28
486.86
7; 474.27
0 1 2 3 4 5 6 7 8
N° muestra
1.- EXACTITUD
e) ERROR ABSOLUTO (Ea)

E=/X/- /A/
Donde:
/x/ = valor medido
No grup /x/ - / A/ = E ERROR

1 74.94 70.00 4.94 exceso
2 72.59 70.00 2.59 exceso
3 72.86 70.00 2.86 exceso
4 72.65 70.00 2.65 exceso
5 72.99 70.00 2.99 exceso
6 73.12 70.00 3.12 exceso
7 72.66 70.00 2.66 exceso
f) ERROR RELATIVO (Er)
% Er = /x/ - /A/ x 100%

/A/

1 0.071
2 0.037
3 0.041
4 0.038
5 0.043
6 0.045
7 0.038
C) MEDIA ARITMÉTICA O PROMEDIO (M)
MEDIA ARITMÉTICA
No grupo /X/
1 74.94
2 72.59
3 72.86
4 72.65
5 72.99
6 73.12
7 72.66
M = x1 + x2+x3+x4+x5 = ∑ X =
N N 7
M = 73.11
C) MEDIANA (Me)
No grupo /X/
1 74.94
2 72.59
3 72.86
4 72.65
5 72.99
6 73.12
7 72.66
La mediana es igual
Me= 73.11

G) RANGO O INTERVALO

=74.94 - 72.59 =
H) DESVIACIÓN ABSOLUTA (DA)

1 74.94 73.11 1.83
2 72.59 73.11 -0.52
3 72.86 73.11 -0.25
4 72.65 73.11 -0.46
5 72.99 73.11 -0.12
6 73.12 73.11 0.01
7 72.66 73.11 -0.45


1 74.94 73.11 1.83
sospechoso
2 72.59 73.11 -0.52
3 72.86 73.11 -0.25
4 72.65 73.11 -0.46
5 72.99 73.11 -0.12
6 73.12 73.11 0.01
7 72.66 73.11 -0.45

M = 1.79
Desviación media
DM = -0.52, -0.25, -0.46, -0.12, 0.01, -0.45= 1.79
6
I) Test 4d (rechazo de datos)

1.79 > 4 x 1.79
1.79 > 7.16
El resultado del grupo 1 de 1.83 no se rechaza
ESPECTROFOTOMETRIA DEL ULTRAVIOLETA

DETERMINACION DE ACIDO BENZOICO
I OBJETIVOS
• Preparación de las soluciones madre y patrones de ácido benzoico
• Obtener su espectro de absorción
• Seleccionar la longitud de onda de trabajo.
• Obtener la curva de calibración
• Determinar el contenido de ácido benzoico en un producto conservado
II GENERALIDADES
En la industria alimentaria existen un conjunto de factores causantes de alteraciones en los
alimentos, crecimiento y actividad de los microrganismos (bacterias, levaduras, y mohos),
actividad enzimática y otras reacciones químicas del propio alimento, infestación por
insectos, parásitos y roedores, almacenamiento a temperaturas inadecuadas, reacciones
con el oxígeno, y la luz solar.
De todas las mencionadas la causada por macroorganismo, es una de las más
preocupantes, porqué además de echar a perder los nutrientes pueden dar lugar a
intoxicaciones, los conservantes químicos previenen las alteraciones. El ácido benzoico es
una de las sustancias conservadoras químicas más antiguos utilizados en la industria de
cosméticos, fármacos y alimentos.
El benzoato de sodio fue el primer conservante químico aprobado para su uso en los
alimentos por la FDA, administración de alimentos y medicamentos de USA. Las ventajas
de su uso son por su bajo costo, facilidad de incorporación en los productos, no tiene color,
baja toxicidad, inhibe la actividad de los microorganismos, tales como las levaduras,
bacterias, y mohos.
El benzoato es una sal blanca, cristalinas, soluble en agua, ligeramente soluble en alcohol,
es empleado en alimentos ácidos como los aderezos para ensaladas, bebidas carbonatadas,
mermeladas, jugos de fruta, condimentos, medicamentos, y conservas.
La salsa de tomate es un producto alimenticio que contiene puré de tomate, azúcar, vinagre,
sal, cebolla y ajo u otras especies. A fin de asegurar el cumplimiento de las normas legales
se deben examinar las muestras de salsa de tomate respecto a los conservadores
permitidos, como bióxido de azufre y ácido benzoico, conservadores no permitidos, por
ejemplo, ácido sórbico y contaminación metálica, debido a cobre, plomo, o arsénico.
La mayor parte de las muestras caen dentro de los siguientes límites:
• Sólidos totales 20 - 40 %
• Sólidos de tomate 6 - 17 % (min. 6 %)
• Cenizas 2.9 - 4.0
• Sal 1.6 - 3.6
• Azúcares totales 10 - 25
• Acidez total (como ácido acético) 0.8 - 3.0
• Cobre menos de 5 ppm ( máximo 20 ppm)
El ácido benzoico (122.12 g/ mol) se utiliza comúnmente como conservador en forma de
sales de sodio, o potasio, pero para el objeto de la reglamentación la cantidad presente se
calcula como el ácido mismo. El ácido benzoico retarda el crecimiento de levaduras y mohos,
el ácido no disociado es el agente eficaz.
III FUNDAMENTO
El método se basa en medir espectrofotométricamente el ácido benzoico extraído en forma
discontinua y en medio ácido por medio del disolvente orgánico cloroformo. La muestra en
estudio se mide en la región del ultravioleta a la longitud de onda de trabajo a 242 nm.
APARATOS
• Espectrofotómetro : Shimadzu 160 A con barrido automático e impresora
• Cubeta : 1 cm. De trayecto óptico
• Región : Ultravioleta
• Longitud de onda : 242 NM
• Blanco : cloroformo
VI MATERIALES
• Fiolas de 10 ml.
• Bureta por 25 ml.
• Pipeta por 2, 5, 10 ml.
• Embudo de separación
VII REACTIVOS
• Cloroformo
• Solución saturada de cloruro de sodio acidificada con HCl (pH= 3 - 4 )
• Solución de HCl 0.001 M
• Solución stock de ácido benzoico de 250 ppm
Calidad reactivo analítico, pureza 99.9%, se pesa 62.5 miligramos, se diluye y enrasa con cloroformo
en una fiola de 250 ml, agite para homogeneizar la solución.
VIII TECNICA
1.- Preparación de soluciones o patrones
Preparar 4 Fiolas de 50 ml. y preparar las soluciones patrones midiendo 5, 10, 15 y 20 ml de la
solución stock de ácido benzoico. Llevar al enrase con cloroformo y homogenizar la solución.
Soluciones Patrones de ácido Benzoico
No patrón Volumen a medir Volumen final ml Concentración en

ml ppm
1 5.0 50.0 25.0
2 10.0 50.0 50.0
3 15.0 50.0 75.0
4 20.0 50.0 100.0

Seleccionar la función “ESPECTRO” en el modo básico del menú y ajustar los parámetros analíticos
siguientes:
1.- INTERVALO DE LONGITUD DE ONDA

λ S = 300 NM λ E = 200 NM
2.- RANGOS DE ABSORBANCIA

UPPER = + 1.00 LOWER = 0.00 A
Graficar la curva de absorción y efectuar un barrido con el cursor y determinar su longitud de onda de
trabajo. Usar como blanco cloroformo
3.- Medición de las muestras

Pesar exactamente 5.0000 gramos de muestra, se trata con una solución de 50 ml de cloruro de sodio
saturada y ligeramente acidificada con ácido clorhídrico hasta obtener más o menos un pH 3 - 4 en
un embudo de separación.
Agite y agregue aproximadamente 20 ml de cloroformo, se agita fuertemente para que el ácido

benzoico pase de la fase acuosa a la orgánica. Deje en reposo para permitir la separación de las dos
fases. Separe la fase orgánica llevándola a otro embudo de decantación cuidando de que no pase la
fase acuosa ni la emulsión formada. Repita nuevamente el ensayo agregando sobre la fase acuosa
del primer embudo mes o menos 15 ml de cloroformó. Agitar, separar y llevar la fase orgánica para
que incremente el solvente de segundo embudo. Repetir por tercera la extracción con 10 ml de
cloroformo. Juntar los extractos de cloroformo en un embudo de pera
Lavar por tres veces la fase orgánica con el componente extraído, con solución ligeramente ácida de
ácido clorhídrico (0.001 M) con porciones de 40, 30 y 20 ml de solución. Llevar la solución orgánica a
una fiola de 50ml completando hasta el aforo con cloroformo. Homogenice la solución.
Seleccionar en el menú básico de funciones el modo “CUANTITATIVO” y ajustar los parámetros
analíticos de medición a la longitud de onda de trabajo y del número de patrones por medir empleando
como blanco cloroformo. Medir los valores de absorbancias que presentan cada solución problema.
IX CALCULOS
Presionar la tecla COPY para obtener la curva de calibrado y en ella se plotea el valor de absorbancia
de la muestra para determinar su concentración.
X CUESTIONARIO
1.- Indicar las limitaciones que presenta el agua como disolvente en la región uv
Las desventajas son cambia su estado físico y algunas propiedades lo que provoca que no sea estable
y provoque malas lecturas.
2.- Porqué el ácido benzoico absorbe radiación UV

Cuando la frecuencia de la radiación es adecuada para producir una transición (vibracional,
electrónica. Espectro vis-UV del ácido benzoico (izq).
3.- Señale razones porque se utiliza disolventes orgánicos en estos métodos

Porque son compuestos orgánicos volátiles que se utilizan solos o en combinación con otros agentes,
para disolver materias primas, productos o materiales residuales, utilizándose como agente de
limpieza, para modificar la viscosidad, como agente tensoactivo, como plastificante, como
conservante o como portador de otras sustancias que, una vez depositadas, quedan fijadas y el
disolvente se evapora.
4.- Porque razones se emplean celdas de material de cuarzo en la espectroscopia UV

Una celda es un recipiente que se utiliza para realizar lecturas espectrofotométricas a muestras
líquidas, pero, para su correcto funcionamiento requieren estar completamente limpias y sin
ralladuras; además, la elección del material de fabricación es importante dependiendo del método
espectrofotométrico que se utilice, además al ser un material casi transparente dejan realizar bien las
lecturas.
5.- Se trataron 2 ml de una muestra de orina que contiene fosfatos, después de la disolución se diluyó
a 100 ml, la medida fotométrica de una alícuota de 25 ml dio una absorbancia de 0.428. Calcular la
concentración de fosfatos como fosforo en mg / ml si la absortividad molar es de 750 (la medición se
efectuó en celda de 1 cm)
Determinación de Acido Benzoico
Fecha : 07/12/2020 Grupo: ________
Análisis:
• Preparación de las soluciones patrones de ácido benzoico
• Obtener su espectro de absorción
• Seleccionar la longitud de onda de trabajo.
• Obtener la curva de calibración
• Determinar el contenido de ácido benzoico en un producto conservado
Método: Espectrofotométrico del Ultravioleta
Muestra: Salsa de Tomate Kétchup Peso de muestra: 5.0000 g

Contenido teórico:
• Peso de la muestra: 5.0000 g

• Volumen final : 50.0 ml
Soluciones patrón de Acido Benzoico

N° patrón Volumen por Volumen final Concentración
medir (ml) (ml) (ppm)
1 5.0 50.0 25.0
2 10.0 50.0 50.0
3 15.0 50.0 75.0
4 20.0 50.0 100.0
DETERMINACIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO
Longitud de onda Absorbancia

200 0.135
210 0.119
220 0.117
230 0.120
240 0.470
250 0.190
260 0.138
270 0.179
280 0.156
290 0.017
300 0.003
Espectro de absorcion
0.47
0.5
0.45
0.4
0.35
ABSORBANCIAS 0.3
0.25 0.19 0.179
0.2 0.156
0.135 0.119 0.138
0.15 0.117 0.12
0.1
0.05 0.017 0.003
0
180 200 220 240 260 280 300 320
LONGITUD DE ONDA
TABLA DE RESULTADOS DE LOS PATRONES
No Patrón Concentración ppm AB Absorbancia

1 25.0 0.401
2 50.0 0.803
3 75.0 1.203
4 100.0 1.604
CURVA DE CALIBRACION
2
1.8 1.604
1.6
1.4 1.203
ABSORBANCIAS
1.2
1 0.803
0.8
0.6 0.401
0.4
0.2
0
0 20 40 60 80 100 120 140
CONCENTRACION PPM AB
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PROBLEMA

1.- Pesar 5.0000 g de la muestra de Kétchup
2.- TRASVASAR LA MUESTRA CON 30 ML DE NaCl ACIDIFICADO CON HCl A pH

3-4
3.- PRIMERA EXTRACCIÓN

COLOCAR LA SOLUCIÓN PROBLEMA EN UN EMBUDO DE PERA DE 125 ML Y AGREGAR
30 ML DE CLOROFORMO EN UNA PRIMERA EXTRACCIÓN. AGITAR FUERTEMENTE Y
LUEGO DEJAR EN REPOSO PARA QUE SE SEPAREN LA FASE ACUOSA Y
CLOROFÓRMICA (COLOR NARANJA).
DECANTAR LA SOLUCIÓN CLOROFORMICA Y DESPOSITAR EN OTRO EMBUDO DE
SEPARACIÓN.
4.- SEGUNDA EXTRACCIÓN

REALIZAR UNA SEGUNDA EXTRACCIÓN CON 15 ml DE CLOROFORMO Y EJECUTAR LAS
MISMAS OPERACIONES. DECANTAR AL EMBUDO LA SOLUCIÓN DE LA FASE
ORGÁNICA, JUNTÁNDOLA CON LA PRIMERA EXTRACCIÓN
SEGUNDA EXTRACCIÓN CON CLOROFORMO
5.- TERCERA EXTRACCIÓN

REALIZAR UNA TERCERA EXTRACCIÓN CON 10 ml DE CLOROFORMO.
6.- JUNTAR LA PRIMERA, SEGUNDA, Y TERCERA EXTRACCIÓN EN EL EMBUDO

DE SEPARACIÓN, PARA LAVARLAS CON HCl 0.001 M
6.- EL EMBUDO DE SEPARACIÓN QUE CONTIENE LAS TRES EXTRACCIONES

CLOROFORMICAS LAVARLAS CON HCL 0.001 M CON VOLÚMENES DE 40 ML.
AGITAR FUERTEMENTE Y DEJAR EN REPOSO PARA SEPARACIÓN DE LAS
FASES.
7.- PRIMER LAVADO

LA SOLUCIÓN ORGÁNICA DEPOSITARLA EN UN SEGUNDO EMBUDO, AÑADIRLE 30 ML
DE HCL 0.001 M, AGITAR Y SEPARAR.
8.- SEGUNDO LAVADO

REPETIR LA OPERACIÓN DE LAVADO CON 20 ML DE LA SOLUCIÓN LAVADORA.
9.- TERCER LAVADO

DESPUES DEL LAVADO LA FASE ORGÁNICA CONTENIDA EN EL EMBUDO SEPARARLA
Y RECIBIRLA EN UNA FIOLA DE 50 ML (LIBRE DE AGUA), DILUIRLA Y ENRASAR CON
CLOROFORMO.
10.- MEDICIÓN DE LAS MUESTRAS

SE MIDE LAS MUESTRA A LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO DE 242 nm, EMPLEANDO
COMO BLANCO CLOROFORMO.
TABLA DE RESULTADOS DE MEDICIÓN DE LAS MUESTRAS
No Grupo Absorbancia Peso de muestra g
1 0.602 5.0020
2 0.599 5.0032
3 0.600 5.0040
4 0.610 5.0025
5 0.607 5.0010
6 0.608 5.0037
CÁLCULOS
1. METODO GRAFICO
2
1.8 1.604
1.6
1.4 1.203
ABSORBANCIAS
1.2
1 0.803
0.8
0.6 0.401
0.4
0.2
0
0 20 40 60 80 100 120 140
CONCENTRACION PPM AB

a) Absortividad
a1 = 0.401 = 0.0160
1 cm x 25 mg/L
A2 = 0.803 = 0.0161
1 cm x 50 mg/L
A3 = 1.203 = 0.0160
1 cm x 75 mg/L
A4 = 1.604 = 0.0160
1 cm x 100 mg/L
A m = 0.0160 L/cm x mg
TABLA DE ABSORTIVIDADES
No Patrón Concentración ppm AB Absorbancia ABSORTIVIDAD

1 25.0 0.401
2 50.0 0.803
3 75.0 1.203
4 100.0 1.604
b) Concentración de la muestra
Cm = 0.602 = 37.625 mg/ L

(1 cm) (0.0160 L/cm x mg)
C) Dilución
37.625 mg /L x 0.050 L = 1.8812
c) resultado en mg/ %
mg% AB = 1.8812 mg x 100% = 37.63
5.0000g muestra
3.- METODO DE REGRESIÓN LINEAL

N°
METODO REGRECION LINEAL
de muestra
Mg/% acido benzoico
1 37.59
2 37.41
3 37.35
4 38.09
5 37.30
6 37.97
7 37.50
TABLA DE RESULTADOS
N° METODO METODO METODO
de muestra ANALITICO GRAFICO REGRECION LINEAL
Mg/% Mg/% Mg/%
acido benzoico acido benzoico acido benzoico
1 37.62 40.18 37.59
2 37.41 37.98 37.41
3 37.36 37.36 37.35
4 38.13 38.12 38.09
5 37.94 37.92 37.30
6 37.97 36.97 37.97
7 37.50 37.60 37.50
38.2 38.13
38.1
37.94 37.97
38
METODO ANALITICO
37.9
37.8
37.7 37.62
37.6 37.5
37.5 37.41
37.36
37.4
37.3
37.2
0 1 2 3 4 5 6 7 8
MUESTRAS
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
1.- EXACTITUD
g) ERROR ABSOLUTO (Ea)
E=/X/-/A/
Donde:
/x/ = valor medido

No /x/ - /A/ = E ERROR

grupo
1 37.62 40 -2.38 defecto
2 37.41 40 -2.59 defecto
3 37.36 40 -2.64 defecto
4 38.13 40 -1.87 defecto
5 37.94 40 -2.06 defecto
6 37.97 40 -2.03 defecto
7 37.50 40 -2.5 defecto
h) ERROR RELATIVO (Er)
% Er = /x/ - /A/ x 100%

/A/

1 -0.060
2 -0.065
3 -0.066
4 -0.047
5 -0.052
6 -0.051
7 -0.063
D) MEDIA ARITMÉTICA O PROMEDIO (M)
MEDIA ARITMÉTICA
No grupo /X/
1 37.62
2 37.41
3 37.36
4 38.13
5 37.94
6 37.97
7 37.50
M = x1 + x2+x3+x4+x5 = ∑ X =
N N 7
M = 37.70
D) MEDIANA (Me)
No grupo /X/
1 37.36
2 37.41
3 37.50
4 37.62
5 37.94
6 37.97
7 38.13
La mediana es igual
Me= 37.62

J) RANGO O INTERVALO

= 38.13 – 37.36 =0.77
K) DESVIACIÓN ABSOLUTA (DA)

1 37.36 37.70 -0.08
2 37.41 37.70 -0.29
3 37.50 37.70 -0.34
4 37.62 37.70 0.43
5 37.94 37.70 0.24
6 37.97 37.70 0.27
7 38.13 37.70 -0.2


M = 9.25
Desviación media
1 37.36 37.70 -0.08
2 37.41 37.70 -0.29
3 37.50 37.70 -0.34
4 37.62 37.70 0.43
5 37.94 37.70 0.24
6 37.97 37.70 0.27
7 38.13 37.70 -0.2
DM = -0.08, -0.29, -0.34, 0.24, 0.27, -0.2= 0.067

4
L) Test 4d (rechazo de datos)

0.43 > 4 x0.067
0.43 > 0.26
El resultado del grupo 4 de 37.62 se rechaza.
APELLIDOS Y NOMBRES: CASTRO DIAZ DIANA CAROLINA

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Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA 1

ESPECTROFOTOMETRIA DEL VISIBLE

Fe+2 + 3 FeNa =========➔ Fe (fen)3 +2

Analito ligando complejo rojo anaranjado

Se agrega a cada fiola, 3 ml de solución de hidroxilamina, 3 ml de solución de fenantrolina y ajuste el

2.- Determinación de la longitud de onda analítica

3.- Preparación de la muestra

4.- Medición de la Muestra

2.- Método Analítico

a) Cálculo de las absortividades de las soluciones estándar

Emplear la ecuación base de las leyes fotométricas:

Calcular las absortividades de las soluciones standard.

Luego calcular la absortividad media:

b) Cálculo de la concentración de la muestra

Se despeja C que corresponde a la concentración de la muestra:

c) Cálculo de la concentración de la muestra teniendo en consideración las

Calcular la concentración de la muestra tomando en cuenta las diluciones realizadas a la solución

d) Expresión del resultado

1.- En miligramos de hierro por mililitro

4.- Que tipos de interferencia puede presentarse en un análisis espectrofotométrico

7.- Calcular la concentración del analito Fe determinado en la práctica mediante el método de

1.- PREPARACION DE LAS SOLUCIONES PATRONES

2.- MEDICIÓN DE PATRONES A LONGITUD DE ONDA ENTRE 450-600 nm

LONGITUD DE ONDA ABSORBANCIA

3.- OBTENCIÓN DEL ESPECTRO DE ABSORCIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA

0.1 0.09 0.09

4.- MEDICIÓN DE LAS SOLUCIONES PATRONES

TABLA DE MEDICIÓN DE SOLUCIONES PATRONES

No patrón Concentración mg/mlAbsorbancia

5.- CURVA DE CALIBRACIÓN

5.- De la solución se mide un volumen alícuota de 25.0 ml y se deposita en una fiola de

CUADRO DE SOLUCIONES MUESTRAS

6.- A LA SOLUCION SE LE HACE UN AJUSTE A pH 3.5

7.- LA FIOLA POR 50 ML SE DILUYE LA SOLUCIÓN, SE ENRASA Y SE

8.- Preparada las soluciones problemas se procede a medir su absorbancia en el

TABLA DE RESULTADOS EXPERIMENTALES DE LA MUESTRA

No grupo Peso de muestra g ABS

Por las diluciones

0.0038 mg/ml x 100 ml = 0.38 mg Fe

• Cálculo del peso de hierro en miligramos por ciento

Mg %Fe = 0.38 mg Fe x 100%

TABLA DE RESULTADOS DEL ANÁLISIS

2.- MÉTODO ANALÍTICO

Cálculo de la absortividad media

• Cálculo de la concentración de la muestra

Cmuestra = 0.341 = 0.00187 mg/ml Fe

• Cálculo de la concentración para las diluciones

0.0038 mg/ml x 100 ml = 0.38 mg Fe

• Cálculo del peso de hierro en miligramos por ciento

Mg %Fe = 0.38 mg Fe x 100%

TABLA DE RESULTADOS DEL ANÁLISIS

a) ERROR ABSOLUTO (Ea)

TABLA DE ERROR ABSOLUTO

No grup /x/ - /A/ = E ERROR

b) ERROR RELATIVO (Er)

% Er = /x/ - /A/ x 100%

TABLA DE ERROR RELATIVO

No grupo % ERROR relativo