ASIGNACIÓN 2. 3ER PARCIAL. PARCIAL.

EJERCICIO 1
En cuántos kilojoule por mol aumenta la energía de O2 cuando absorbe radiación
UV de longitud de onda de 147 nm? ¿Qué aumento de energía experimenta el CO2,
cuando absorbe radiación infrarroja de número de onda 2300 cm-1?

Datos Fórmulas
1) 𝛥𝐸𝑂2 =? 𝐾𝐽 / 𝑚𝑜𝑙 𝑐
𝛥𝐸 = ℎ𝑣 = ℎ
𝜆
2) 𝛥𝐸𝐶𝑂2 =? 𝐾𝐽 / 𝑚𝑜𝑙
𝑐
𝛥𝐸 = ℎ𝑣 = ℎ = ℎ𝑐𝑣̃
𝜆𝑂2 = 147 𝑛𝑚 𝜆
1
𝑣̃ =
𝜆

Sustitución
𝑚
2.998𝑥108
𝛥𝐸 = (6.626𝑥10−34 𝐽. 𝑠) [ 𝑠
−9 𝑚 ]
147 𝑛𝑚 (10 )
𝑛𝑚
𝐽
𝛥𝐸 = 1.35𝑥10−18
𝑀𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎
𝐽
𝛥𝐸 = (1.35𝑥10−18 )(6.023𝑥1023 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎/𝑚𝑜𝑙)
𝑀𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎

𝛥𝐸 = 814 𝐾𝐽/𝑚𝑜𝑙
100𝑐𝑚
𝛥𝐸𝑐𝑜2 = (6.626𝑥10−34 𝐽. 𝑠)(2.998𝑥108 𝑚. 𝑠)(2300 𝑐𝑚−1 ) ( )
𝑚
𝐽 𝐾𝐽
𝛥𝐸𝑐𝑜2 = 9.6𝑥10−20 = 28
𝑀𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎 𝑚𝑜𝑙

Resultado
𝛥𝐸 = 814 𝐾𝐽/𝑚𝑜𝑙
𝐽 𝐾𝐽
𝛥𝐸𝑐𝑜2 = 9.6𝑥10−20 = 28
𝑀𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎 𝑚𝑜𝑙
 ASIGNACIÓN 2. 3ER PARCIAL. PARCIAL. EJERCICIO 2

Hallar la absorbancia y transmitancia de una disolución 0,00240 M de una sustancia

que tiene una absortividad molar de 313 M-1 cm-1, en una cubeta de 2,00 cm de
camino óptico.

Datos Formula
ε = 313 M −1 𝑐𝑚 −1 A = εbc
𝑏 = 2.00 𝑐𝑚 𝑃0
𝐴 = log ( ) = − log 𝑇
𝑃
𝑐 = 0.00240 𝑀
‘

𝑐 = 0.00240 𝑀

Sustitución
A = (313 M −1 𝑐𝑚 −1 )(2.00 𝑐𝑚)(0.00240 𝑀)= 1.50

log 𝑇 = −𝐴

𝑇 = 10log 𝑇 = 10−𝐴 = 10−1.50 = 0.0316

Resultado
A= 1.50

𝑇 = 0.0316
 ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA-VISIBLE (UV-VIS)

Espectroscopia ultravioleta-visible (UV-Vis) es uno de las más populares técnicas

analíticas porque es muy versátil y capaz de detectar casi cualquier molécula. Con
espectroscopía UV-Vis, la luz de UV-Vis se pasa a través de una muestra y se mide
la transmitancia de la luz por una muestra. De la transmitancia (T), la absorbancia
se puede calcular como A =-log (T). Un espectro de absorbancia se obtiene que
muestra la absorbancia de un compuesto en diferentes longitudes de onda. La
cantidad de la absorbancia a cualquier longitud de onda es debido a la estructura
química de la molécula.

UV-Vis se puede utilizar de una manera cualitativa, para identificar grupos

funcionales o confirmar la identidad de un compuesto haciendo coincidir el espectro
de absorbancia. También puede ser utilizado de manera cuantitativa, como
concentración del analito se relaciona la absorbancia con la ley de Beer.
Espectroscopía UV-Vis se utiliza para cuantificar la cantidad de ADN o proteínas en
una muestra, para análisis de aguas y como un detector para muchos tipos de
cromatografía. Cinética de las reacciones químicas se miden también con
espectroscopía UV-Vis tomando medidas repetidas de UV-Vis con el tiempo. UV-
Vis son generalmente mediciones con un espectrofotómetro. UV-Vis es también un
detector muy popular para otras técnicas analíticas como la cromatografía, pueden
detectar muchos compuestos.

Por lo general, UV-Vis no es la técnica de espectroscopia más sensible, porque no

mucha luz es absorbida sobre una longitud de ruta corta. Otras técnicas de
espectroscopia tales como de fluorescencia tienen mayor sensibilidad, pero no son
como generalmente aplicables, como la mayoría de las moléculas no es
fluorescente. UV-Vis tiene una sensibilidad similar a otras mediciones de
absorbancia, tales como espectroscopia de infrarrojo.
¿Cómo funciona un espectrofotómetro UV-Vis?

Fuente de luz

Como técnica basada en la luz, es esencial una fuente estable capaz de emitir luz
en una amplia gama de longitudes de onda. Una sola lámpara de xenón se usa
comúnmente como fuente de luz de alta intensidad para los rangos UV y visible. Sin
embargo, las lámparas de xenón son, asociados con costos más altos y son menos
estables en comparación con las lámparas de tungsteno y halógenas.

Para instrumentos que emplean dos lámparas, se usa comúnmente una lámpara de
tungsteno o halógena para luz visible mientras que una lámpara de deuterio es la
fuente común de luz ultravioleta. Como se necesitan dos fuentes de luz diferentes
para escanear las longitudes de onda UV y visible, la fuente de luz en el instrumento
debe cambiar durante la medición. En la práctica, este cambio ocurre típicamente
durante el escaneo entre 300 y 350 nm donde la emisión de luz es similarde ambas
fuentes de luz y la transición se puede hacer más suavemente.

Selección de longitud de onda

En el siguiente paso, se deben seleccionar ciertas longitudes de onda de luz

adecuadas para el tipo de muestra y el analito para la detección para el examen de
la muestra a partir de las amplias longitudes de onda emitidas por la fuente de luz.
Los métodos disponibles para esto incluyen:

 Monocromadores:
Un monocromador separa la luz en una banda estrecha de longitudes de
onda. La mayoría de las veces se basa en rejillas de difracción que se pueden
girar para elegir ángulos entrantes y reflejados para seleccionar la longitud
de onda de luz deseada. La frecuencia de surco de la rejilla de difracción a
menudo se mide como el número de surcos por mm. Una frecuencia de surco
más alta proporciona una mejor resolución óptica pero un rango de longitud
de onda utilizable más estrecho. Una frecuencia de surco más baja
 proporciona un rango de longitud de onda utilizable más grande pero una
peor resolución óptica. De 300 a 2000 ranuras por mm se pueden utilizar con
fines de espectroscopía UV Vis, pero es típico un mínimo de 1200 ranuras
por mm. La calidad de las mediciones espectroscópicas es sensible a las
imperfecciones físicas en la rejilla de difracción y en la configuración óptica.
Las rejillas de difracción tienden a tener más defectos que las rejillas de
difracción holográfica flameadas. 3 Las rejillas de difracción holográfica
flameadas tienden a proporcionar mediciones de calidad significativamente
mejor. 3

 Filtros de absorción:
Los filtros de absorción generalmente están hechos de vidrio de color o
plástico diseñado para absorber longitudes de onda de luz particulares.

 Filtros de interferencia:
También llamados filtros dicroicos, estos filtros de uso común están hechos
de muchas capas de material dieléctrico donde se produce la interferencia
entre las capas delgadas de materiales. Estos filtros se pueden usar para
eliminar longitudes de onda indeseables por interferencia destructiva,
actuando así como un selector de longitud de onda.

 Filtros de corte:
Los filtros de corte permiten que pase la luz por debajo paso corto o por
encima paso largo de una determinada longitud de onda. Estos se
implementan comúnmente mediante filtros de interferencia.
  Filtros de paso de banda
Los filtros de paso de banda permiten el paso de una variedad de longitudes
de onda que se pueden implementar combinando filtros de paso corto y paso
largo.
Los monocromadores se usan más comúnmente para este proceso debido a
su versatilidad. Sin embargo, los filtros se usan a menudo junto con los
monocromadores para reducir aún más las longitudes de onda de la luz
seleccionada para obtener mediciones más precisas y mejorar la relación
señal / ruido.

Análisis de muestra

Cualquiera que sea el selector de longitud de onda que se utilice en el

espectrofotómetro, la luz pasa a través de una muestra. Para todos los análisis,
medir una muestra de referencia, a menudo denominada "muestra en blanco", como
una cubeta llena con un disolvente similar que se utiliza para prepararla muestra,
es imperativo. Si se usa una solución tamponada acuosa que contiene la muestra
para las mediciones, entonces la solución tamponada acuosa sin la sustancia de
interés se usa como referencia. Al examinar cultivos bacterianos, los medios de
cultivo estériles se usarían como referencia, el instrumento utiliza automáticamente
la señal de la muestra de referencia para ayudar a obtener los valores reales de
absorbancia de los analitos.

Es importante conocer los materiales y las condiciones que se utilizan en los

experimentos de espectroscopia UV-Vis. Por ejemplo, la mayoría de las cubetas de
plástico son inapropiadas para los estudios de absorción de UV porque el plástico
generalmente absorbe la luz UV. El vidrio puede actuar como filtro, a menudo
absorbiendo la mayor parte de UVC 100‑280 nm 2 y UVB 280‑315 nm 2 pero
permitiendo algo de UVA 315‑400 nm 2 para pasar. Por lo tanto, se requieren porta
muestras de cuarzo para el examen UV porque el cuarzo es transparente a la
mayoría de la luz ultravioleta. El aire también puede considerarse un filtro porque
las longitudes de onda de la luz inferiores a 200 nm son absorbidas por el oxígeno
molecular. Se requiere una configuración especial y más costosa para mediciones
con longitudes de onda inferiores a 200 nm, que generalmente implican un sistema
óptico lleno de gas argón puro. También hay disponibles sistemas sin cubeta que
permiten el análisis de volúmenes de muestra muy pequeños, paraejemplo en
análisis de ADN o ARN.

Detección

Una vez que la luz ha pasado a través de la muestra, se utiliza un detector para
convertir la luz en una señal electrónica legible. Generalmente, los detectores se
basan en recubrimientos fotoeléctricos o semiconductores.

A revestimiento fotoeléctrico expulsa electrones cargados negativamente cuando se

expone a la luz. Cuando se expulsan electrones, se genera una corriente eléctrica
proporcional a la intensidad de la luz. Un tubo fotomultiplicador PMT 4 es uno de los
detectores más comunes que se utilizan en la espectroscopia UV-Vis. Una PMT se
basa en el efecto fotoeléctrico para expulsar inicialmente electrones al exponerse a
la luz, seguido de la multiplicación secuencial de los electrones expulsados para
generar una corriente eléctrica más grande. Los detectores PMT son especialmente
útiles para detectar niveles de luz muy bajos.

Fig 1. Diagrama esquemático de un sistema de Fig 2. Diagrama esquemático de un sistema de

espectroscopia UV-Vis basado en cubetas. espectroscopia UV-Vis sin cubeta.
Aplicaciones

 Determinación de grupos funcionales en moléculas orgánicas

 Análisis de muestras bioquímicas
 Determinación de metales en compuestos de coordinación
 Análisis de semiconductores
 Medidas de color
 Determinación cuantitativa
 Seguimiento de la cinética de procesos químicos y bioquímicos
Referencias

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experimentales en ciencias físicas. Elsevier; 2000: 347-377. Doi : 10.1016 / B978-
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4. Mortimer Abramowitz y Michael W. Davidson. Photomultiplier Tubes. Expresiones

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