Saber, Universidad de Oriente, Venezuela.Vol. 20 N 3: 276-281.

(2008)

Pseudomonas sp. EN AVES MIGRATORIAS Y RESIDENTES (CHARADRIIFORMES) EN EL ESTADO SUCRE, VENEZUELA

Pseudomonas sp. IN MIGRATORY AND RESIDENT BIRDS (CHARADRIIFORMES) OF THE BOCARIPO-CHACOPATA LAGOON COMPLEX, SUCRE STATE, VENEZUELA
JESSICCA RODRGUEZ1, PEDRO LPEZ2, JORGE MUOZ3, NILYAN RODRGUEZ2, JOS FUENTES
2 1 Postgrado en Biologa Aplicada, Universidad de Oriente, Ncleo de Sucre, Cuman, Sucre, Venezuela. Centro Regional de Investigaciones Ambientales, Universidad de Oriente, Ncleo Nueva Esparta, Venezuela 3 Centro de Investigaciones Ecolgicas Guayacn, Universidad de Oriente, Ncleo de Sucre, Venezuela e-mail: jnrmar@gmail.com

RESUMEN Describir la ora bacteriana de animales aparentemente sanos es un paso esencial para entender la epidemiologa de las enfermedades que pueden afectar a poblaciones naturales. En el caso de aves, la interpretacin de esta informacin se complica con un factor adicional representado por las numerosas especies de aves migratorias que pueden cubrir extensas reas geogrcas. Conocer la existencia de microorganismos con potencial zoontico entre animales silvestres tiene adems un signicado importante en la salud pblica. Las aves se capturarn mediante redes de niebla, el cultivo, aislamiento e identicacin se realizar usando tcnicas microbiolgicas de uso comn en el laboratorio. Se analizaron 40 muestras de heces provenientes de 5 especies de aves del orden Charadriiformes, 4 migratorias: Tringa melanoleuca (n=6), Tringa avipes (n=6), Actitis macularia (n=6), Calidris pusilla (n=6) y una residente: Charadrius wilsonia (n=16). Se procedi a identicar presencia de Bacilos Gram negativos con reaccin positiva a la prueba de la oxidasa y preclasicados como no fermentadores de la glucosa sobre la base de metabolismo en agar TSI. Se aislaron 161 cepas, de las cuales el 31% (n=50) pertenecen a la familia Pseudomonadaceae, se identicaron: Pseudomonas aeruginosa con una prevalencia del 72% (n = 36) y Pseudomonas uorescens con 28% (n = 14). Se demuestra la importancia de la identicacin de estos microorganismos ya que han establecido un reservorio en este grupo de aves, las cuales pueden servir a la vez como agentes de dispersin de enfermedades. PALABRAS CLAVE: Charadriiformes, bacilos Gram negativos, Pseudomonas sp. ABSTRACT The description of bacterial ora of seemingly healthy animals is an essential step to understand the epidemiology of the illnesses that can affect natural populations. In the case of birds, the interpretation of this information is complex with the additional factor of numerous migratory species that can include extensive geographical areas. The presence of microorganisms with zoonotic potential among wild animals has an important meaning for public health. Birds were captured using fog-nets; the cultivation, isolation and identication of bacteria were carried out using microbiological techniques of common use in the laboratory. Forty fecal samples obtained from 5 bird species from the order Charadriiformes, 4 migratory: Tringa melanoleuca (n=6), Tringa avipes (n=6), Actitis macularia (n=6), Calidris pusilla (n=6) and one resident: Charadrius wilsonia (n=16). The bacteria were classied according to the Gram staining technique, shape oxidase test and glucose metabolism in TSI agar. A total of 161 strains were isolated, of which 31% (n=50) belong to the family Pseudomonadaceae. Two species were identied: Pseudomonas aeruginosa with a prevalence of 72% (n = 36) and Pseudomonas uorescens with 28% (n = 14). The importance of the identication of these microorganisms is demonstrated since this group of birds constitutes a reservoir of these bacteria which can cause infection in humans, serving, at the same time, as dispersion agents of disease. K EY WORDS: Charadriiformes, Gram negative rods, Pseudomonas sp.

INTRODUCCIN Conocer la existencia de microorganismos con potencial zoontico entre animales silvestres tiene un signicado importante en la salud pblica (Thomas et al., 2001). Existen factores que apoyan la hiptesis de que las aves migratorias pueden ser las responsables de
Recibido: junio 2007. Aprobado: enero 2008. Versin nal: marzo 2008.

introducir y de difundir microorganismos patgenos entre diferentes continentes. Ellas son consideradas hospederos introductorios, pues presumiblemente transportan el microorganismo hasta nuevos vectores y hospederos a lugares separados por miles de kilmetros de distancia (Rappole y Hublek, 2003). Una variedad de bacterias patgenas pueden ser transportadas asintomticamente

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por animales, incluyendo aves silvestres, entre ellas se encuentran: Salmonella sp., Helicobacter sp. (Waldestrn et al., 2003), Mycobacterium sp. (Bono et al., 2005), Yersinia sp. (Niskanen et al., 2003), Listeria sp. (Quessy y Messier 1992) , Mycoplasma sp. ( Hartup et al., 2001), Campylobacter jejuni (Petersen et al., 2001), Escherichia coli (Holland et al., 1996), Vibrio sp. (Brittingham et al., 1988; Ogg et al., 1989) y Pseudomonas sp. (Brittingham et al., 1988). Existe evidencia que las zoonosis causadas por bacilos Gram negativos estn distribuidas alrededor del mundo y han sido aislados de una gran variedad de orgenes ecolgicos; ellos se encuentran frecuentemente en heces de la fauna silvestre y afecta a un gran nmero de animales, incluyendo aves silvestres y cautivas (Brittingham et al., 1986). Entre las aves de vida libre afectadas se encuentran: paserinos (Maurer et al., 1998), psitacinos, gallinceas (Dodson et al., 1999), aves acuticas (Palmgren et al., 1994) y rapaces (Battisti et al., 1998). Las aves de vida silvestre han sido implicadas como reservorios naturales del grupo de los vertebrados de varios patgenos entricos de humanos incluyendo Campylobacter sp. (Altekruse et al., 1999), Escherichia coli (Waldenstrm et al., 2002) y Salmonella sp. (Palgreen et al., 2004). Ellas son frecuentemente mencionadas como posibles vectores para la transmisin de estas bacterias hasta los animales domsticos y humanos (Dobbin et al., 2005). Ya que las aves silvestres migran y son susceptibles a infecciones pueden funcionar como diseminadoras efectivas de enfermedades a travs de la contaminacin fecal de pastos y supercies de agua, lo cual est bien documentado en la literatura cientca, sobre todo en aguas que no tienen fuentes directas o notables de contaminacin. Debido a este hecho pueden existir distintos modos de transmisin de estos microorganismos al ser humano: a) Contagio por contacto directo con estas fuentes de agua, b) Consumo de productos marinos contaminados y c) A travs de aves de corral y de hospederos mamferos que se encuentran en las proximidades de la zona donde se localizan las aves migratorias que se usaron para esta investigacin. Estos factores facilitan la propagacin de los microorganismos patgenos hasta el hombre. En nuestro pas y especcamente en el estado Sucre no existe un estudio que sirva de base para describir la presencia de bacterias en las aves. Las lagunas costeras son un rasgo siogrco importante de la Pennsula de Araya y son consideradas como uno de los ecosistemas de mayor relevancia por sus funciones ecolgicas (criaderos de peces, proteccin de costas, hbitat de

numerosas especies de aves) donde se desarrollan diferentes actividades impulsadas por su productividad pesquera, atractivo escnico y biodiversidad. Debido a los mltiples usos de este entorno y a que una gran variedad de microorganismos son eliminados peridicamente a travs de las heces de las aves, para los cuales la salinidad no es un factor limitante para su multiplicacin, lo cual representa un riesgo latente de contaminacin para las aguas de este complejo lagunar as como para la fauna acutica que forma parte de este hbitat marino (peces, crustceos, moluscos) y por ende para la poblacin aledaa a este ecosistema. Por estas razones se hace necesario detectar la presencia de Pseudomonas sp. en heces provenientes de aves del orden Charadriiformes para determinar la presencia de este microorganismo como parte de su ora intestinal. MATERIALES Y MTODOS Se recolectaron 40 muestras de heces de aves del orden Charadriiformes. Se clasicaron de la siguiente manera: 6 muestras de Tringa melanoleuca, 6 muestras de Tringa avipes, 6 muestras de Actitis macularia, 6 muestras de Calidris pusilla (migratorias) y 18 muestras de Charadrius Wilsonia (residente). El rea de muestreo se localiza en el complejo lagunar Bocaripo-Chacopata (10 40 N y 63 48 W), ubicada al noroeste de la Pennsula de Araya (Figura 1). Los muestreos se realizaron con una frecuencia mensual, desde enero hasta abril de 2006. Las muestras fueron colocadas en colectores de heces y luego en bolsas plsticas de cierre hermtico, se trasladaron en cavas de anime con hielo al laboratorio de Microbiologa del Centro regional de investigaciones ambientales, estado Nueva Esparta. Para el estudio bacteriolgico las muestras se procesaron inmediatamente despus de su arribo. Anlisis bacteriolgicos Para el aislamiento las muestras fueron sembradas en agar Mac Conkey (Difco) y agar nutritivo, se incubaron de 18 a 24 horas a 37C. Al ser obtenidas las cepas puras fueron repicadas en placas con agar nutritivo para llevar a cabo la oxidasa (Mac Faddin 1990). Adicionalmente se les realiz la coloracin de Gram y se sembraron en agar hierro triple azcar, para efectuar una preclasicacin de las mismas. Familia pseudomonadaceae Pa r a la ide nt if ica cin de m ic roorga n ismos pertenecientes al gnero Pseudomonas se tomaron en cuenta el crecimiento de colonias sospechosas en agar

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Mac Conkey, resultados de la oxidasa y el metabolismo de las cepas en el agar TSI. Adicionalmente se llevaron a cabo pruebas bioqumicas, basadas en las tcnicas descritas por Mac Faddin, 1990: crecimiento en agar sangre a 42 C, color del pigmento, f luorescencia, motilidad (caldo tripticasa soya), crecimiento en NaCl al 6%, descarboxilacin de aminocidos, utilizacin de carbohidratos en medio oxidacin fermentacin con y sin parana (glucosa, manitol, maltosa, fructosa, sacarosa, xilosa), hidrlisis de gelatina al 4%. Los resultados obtenidos de las pruebas bioqumicas diferenciales se compararon con los aportados en la clave de identicacin descrita por Murray et al., 2002. RESULTADOS En el curso de la investigacin se analizaron un total de 40 muestras de aves migratorias (Charadriiformes) logrndose aislar un total de 161 cepas: 31% (n=50) pertenecientes a la familia Pseudomonadaceae (oxidasa positiva y TSI Alc/Alc).

Del 31% (n=50) per tenecientes a la familia Pseudomonadaceae se identificaron: Pseudomonas aeruginosa 72% (n = 36) y Pseudomonas uorescens 28% (n = 14). Charadrius wilsonia Se analizaron 16 muestras, de las cuales se aislaron 15 cepas pertenecientes a la familia Pseudomonadaceae: 87% (n=14) corresponden a Pseudomonas aeruginosa y 13% (n=2) a Pseudomonas uorescens, no se encontraron ambas especies en las muestras analizadas (Figura 2). Tringa melanoleuca Se analizaron 6 muestras, de las cuales se aislaron 12 cepas pertenecientes a la familia Pseudomonadaceae, en el 100% (n=6) de las muestras se identificaron tanto Pseudomonas aeruginosa como Pseudomonas uorescens (Figura 2).

Figura 1. Zona de estudio.

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Tringa avipes Se analizaron 6 muestras, de las cuales se aislaron 8 cepas pertenecientes a la familia Pseudomonadaceae: 50% (n=3) Pseudomonas aeruginosa, 17% (n=1) Pseudomonas uorescens y en el 33% (n=2) de las muestras estudiadas se identicaron ambas especies (Figura 2). Calidris pusilla Se analizaron 6 muestras y se aislaron 7 cepas pertenecientes a la familia Pseudomonadaceae: 66% (n=4) Pseudomonas aeruginosa, 17% (n=1) Pseudomonas uorescens y se encontraron ambas especies en el 17% (n=1) de las muestras analizadas (Figura 2). Actitis macularia Se analizaron 6 muestras de las cuales se aislaron 6 cepas pertenecientes a la familia Pseudomonadaceae: 83% (n=5) Pseudomonas aeruginosa y 17% Pseudomonas uorescens (n=1), no se aislaron ambas especies de una misma muestra (Figura 2). DISCUSIN La ora intestinal de aves silvestres no est bien documentada, particularmente lo relacionado con la familia Pseudomonadaceae y en especies del orden Charadriiformes. En la mayora de los casos la informacin sobre la prevalencia de bacterias en aves silvestres proviene de aves muertas, las cuales son examinadas y se reporta el patgeno causante de la misma, esto seala la

causa de la mortalidad ms no indica la frecuencia real de un microorganismo en la poblacin de aves (Brittingham et al., 1998). Las investigaciones realizadas se enfocan en bacterias enteropatgenas tales como Salmonella (Samuel et al., 2004); Escherichia coli (La Ragione et al., 2002) y Campylobacter (Lvesque et al., 2000) en grupos de aves distintos al orden Charadriiformes. Sin embargo, se considera de importancia la identicacin de las diferentes bacterias que forman parte de la ora intestinal presentes en las heces de este grupo de aves, debido a que aparecen como sus hospederos y al mismo tiempo como vectores; tanto de microorganismos considerados patgenos entricos como de microorganismos que pueden causar distintas afecciones en los seres humanos. Tal es el caso de miembros de la familia Pseudomonadaceae, la cual present un prevalencia muy elevada en este grupo de aves debido a que en todas las muestras de heces provenientes de las cinco especies de aves, se detect la presencia de P. aeruginosa y de P. uorescens. En investigaciones previas ha sido reportada la presencia de esta familia bacteriana, sin embargo no se ha establecido que especies en particular se han detectado. Bowman y Jacobson (1980) aislaron Pseudomonas sp. del 5% de las muestras fecales provenientes de psitacinos. Fiennes (1982) no considera a Pseudomonas sp. como un miembro de la ora intestinal de aves granvoras. Brittingham et al (1998) en un estudio realizado en un paserino (Parus atricapillus), demostraron la prevalencia de varias bacterias, entre ellas Pseudomonas sp. (22%), E. coli (1%), Salmonella spp. (0%), Streptococcus spp. (18%), Staphylococcus spp (15%) y Yersinia spp. (1%). No encontraron diferencias en la prevalencia de Pseudomonas sp. con la dieta sugiriendo que es una especie encontrada raramente en la ora intestinal de aves omnvoras y granvoras.

100 80 60 40 20 0 C. wilsonia T. melanoleuca T. flavipes C. pusilla A. macularia Ambas especies

Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas fluorescens

Figura 2. Frecuencia de Pseudomonas sp. en aves del orden Charadriiformes.

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El orden Charadriiformes est dividido en 3 subrdenes, 18 familias, 85 gneros y 366 especies conocidas, distribuidas por todo el mundo en una amplia variedad de hbitat, aunque la mayora estn asociadas con el agua, tanto dulce como salada. Son aves que van desde un tamao pequeo al mediano a grande. Quiz sus representantes ms conocidos sean las gaviotas de la familia Lariidae. La alimentacin es variada, como corresponde a un grupo con tanta diversidad. Desde las mencionadas gaviotas, que son prcticamente omnvoras, aunque se alimenten principalmente de pescado, hasta los que se alimentan de pequeos invertebrados, crustceos y moluscos, como los limcolas (cuya familia ms numerosa es la Scolopacidae, a la cual pertenecen T. melanoleuca, T. avipes, C. pusilla y A. macularia). Otra familia incluida en este orden es la Charadriidae la cual se puede alimentar de insectos y vegetales, siendo C. wilsonia un representante de esta familia. Todas estas especies tienen hbitos alimenticios tanto diurnos como nocturnos, adems utilizan estrategias distintas y eventualmente presas diferentes (Robert et al., 1989). Estas diferencias en la alimentacin as como los factores estacionales que inuyen en la variedad y cantidad de presas pueden explicar de alguna manera la variacin de los resultados obtenidos en esta investigacin. CONCLUSIONES Se establece por primera vez en Venezuela, y particularmente en el estado Sucre, la presencia de la familia Pseudomonadaceae, con dos especies r e p r e s e nt at iva s: Pse u d o m on a s a e r ug in o sa y Pseudomonas f luorescens. Las cuales, al parecer, forman parte de su ora intestinal. Queda demostrada la importancia de la identicacin de Pseudomonas sp. en este grupo de aves, ya que pueden servir como reservorio y agentes de dispersin de estos microorganismos y por ende de enfermedades. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS ALTEKRUSE S., STERN N., FIELDS P., SWERDLOW. D. 1999. Campylobacter jejuni an emerging foodborne pathogen. Emerg. Infect. Dis., 5: 28 35. BATTISTI A., DI GUARDO G., AGRIMI U., BOZZANO A. 1998. Embryonic and neonatal mortality from salmonellosis in captive bred raptors. J. Wildl. Dis., 34: 6472. BONO M., JEMMI T., BERNASCONI C., BURKI D., TELENTI

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