UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS DE LA EDUCACIÓN

BIOLOGÍA GENERAL PRÁCTICA DE LABORATORIO SOBRE LA OBSERVACIÓN

MICROSCÓCOPICA DE BACTERIAS Y HONGOS.

LINA MARCELA DE LA CRUZ GAMEZ

KAREN TATIANA LUGO BANGUERO

VEILES NAYELIS PÉREZ MARRIAGA

LUIS DANIEL HERNÁNDEZ DE ÁNGEL

GUSTAVO ROENES

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

 LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION AMBIENTAL

VALLEDUPAR / CESAR 2021

1. INTRODUCCIÓN
Este trabajo tiene como objetivo identificar cada una de las bacterias, ¿qué formas
presentan? ¿porqué? y entender en qué consisten las formas de vida de un hongo,
¿qué funciones tienen? ¿sus distintas formas? ¿cómo están constituidos?, ¿cómo los
identificamos por medio de su morfología? Esto lo llevamos a cabo por medio de
distintos experimentos.

Primero iniciamos estableciendo los objetivos que tenemos para hacer estos dichos
experimentos, luego hacemos el experimento general para observar
microscópicamente las bacterias y hongos, utilizando un colorante que permita ver sus
formas y estructuras para poder identificarlas, agregando una gota del suero salino
fisiológico estéril, para observar exclusivamente bacterias, las cuales son
extremadamente pequeñas, utilizamos colorantes para clasificar a las bacterias según
su pared celular, donde en el proceso algunas se descolorizarán. Pero, recuperarán el
color, gracias a la aplicación de un colorante, otras no se descolorizarán y obtendrán
un color, para esto utilizamos primero el cristal violeta, el lugol, el alcohol acetona y
por último la safranina todo esto permitirá la clasificación en bacterias gram positivas
y bacterias gram negativas. Una vez finalizamos el experimento anterior, procedemos
a observar hongos, agregando lactofonol para ver sus estructuras y tomamos como
muestra el micelio.

A cada uno de estos procesos, les colocamos sus materiales antes de hacer los
experimentos y comentamos cada una de las características que observamos, las
imágenes de nuestra observación, para luego hacer un análisis e investigación de esas
estructuras que se muestran en las imágenes, tomamos como primordial sus
estructuras de cada uno, además explicamos ciertas cosas que se dan en el
laboratorio y por último hacemos conclusiones de lo que aprendimos en los
experimentos. Todo esto con el objetivo de identificar las distintas formas, estructuras
y especies de hongos y bacterias.

2. OBJETIVOS:
 Comprender de que trata un frotis bacteriano y que procedimiento se lleva acabo
para poder observarlas.
 Identificar mediante la técnica de tinción de Gram los diferentes tipos bacterianos
que se logran observar en la práctica del frotis bacteriano.
 Observar mediante la tinción del celo las estructuras de las hifas que se pueden
encontrar en el cuerpo vegetativo del hongo y los distintos tipos de hongos que se
pueden observar en la práctica.
3. MARCO TEÓRICO:

FROTIS BACTERIANO
Podríamos decir que el frotis bacteriano es una extensión en forma de película delgada
de una suspensión de microorganismos bacterianos que se efectúa sobre una placa de
vidrio transparente o portaobjetos, para su observación bajo un microscopio óptico. La
cual, por medio de una extensión, en forma de película se efectúa con el objeto de separar
los microorganismos en lo posible, ya que si están agrupados la observación no es nítida;
Es por esto que en el estudio de cultivos bacterianos se emplean técnicas de preparación
de frotis, de fijación y de coloración para analizarlos mejor.

A causa del tamaño tan pequeño de los microorganismos, se requiere necesariamente el

uso de un microscopio óptico para su observación, el cual es uno de los instrumentos
más importante en este proceso de observación de microorganismos estos son
indispensables para la observación de los frotis. Pues, emplean lentes ópticas y luz
permitiendo la visualización de las muestras con gran aumento del tamaño; Para este
proceso se necesita la utilización de algunos colorantes debido a que las células vivas no
tienen estructuras mayormente coloreadas, vistas al microscopio óptico son muestras
incoloras, transparentes, y muestran muy poco contraste interno y con su entorno.

Entonces, si hacemos la observación con el microscopio óptico sencillo de campo claro,

sin el uso de técnicas auxiliares de tinción, estaría muy limitada. Sin embargo, ésta solo
se utiliza en algunos casos, como en la observación del movimiento de microorganismos;
Por esta razón que se requiere el uso de colorantes a través de técnicas de tinción, que
aporten contraste para la observación. Las tinciones se efectúan directamente sobre los
frotis o extensiones de las suspensiones de microorganismos sobre los portaobjetos,
previamente secados y fijados.

Entre los fijados encontramos el buen fijado; se utiliza para preservar las estructuras
celulares; provoca inactivación de los microorganismos y adhesión al vidrio del
portaobjetos y en él se encuentra fijación de calor que es capaz de preservar la morfología
externa de las bacterias, pero destruye sus estructuras internas y la fijación química esta
emplea agentes químicos fijadores para lograr la preservación de las estructuras
celulares internas del microorganismo; Unos de los procedimientos más comunes para
efectuar la tinción de un frotis previamente secado y fijado son la tinción positiva o simple,
la tinción diferencial y la tinción negativa.

Existen también técnicas especiales para tinción de estructuras celulares particulares (de
cápsula, de esporas, de flagelos); A continuación, nos fijaremos en una de las técnicas
de tinción para identificar microorganismos es la tinción diferencial en donde encontramos
la tinción de Gram se emplea como prueba preliminar para conocer la forma, el tamaño,
agrupación celular, además del tipo de pared celular. Mediante la prueba de tinción de
Gram, las bacterias con pared celular se clasifican en bacterias Gram positivas y
bacterias Gram negativas.

Los colorantes que se utilizan sobre todo para este proceso en esta práctica son:

Lugol: es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico KI en agua destilada. Se

preparó por primera vez en 1829 y recibe su nombre en honor al médico francés Jean
Guillaume Auguste Lugol.Este producto se emplea frecuentemente
como desinfectante y antiséptico, para la desinfección de agua en emergencias y como
un reactivo para la prueba del yodo en análisis médicos y de laboratorio.

Safranina: La safranina O es un colorante biológico también conocido como dimetil

safranina y rojo básico, al ser una molécula cargada positivamente (catión) es capaz de
combinarse con elementos celulares de cargas negativas. La tinción de safranina O es
de contraste, ya que se usa para diferenciar una estructura celular previamente teñida
con otro colorante. Se utiliza en distintas técnicas histológicas que detectan células
enterocromafines del tracto gastrointestinal, el protoplasma y núcleo de microorganismos
patógenos.

Cristal violeta: Es un colorante orgánico, sintético y alcalino de triamino- trifenilmetano.

Se encuentra como un polvo con brillo metálico verde oscuro. Recibe varios nombres,
entre los cuales se puede mencionar cloruro de hexametil pararosanilina o violeta de
metilo, violeta de anilina, violeta de genciana, etc.

Azul lactofenol: Es un preparado con propiedades de colorante simple. Es utilizado en

laboratorios clínicos para colorear principalmente estructuras fúngicas como, hifas, tubos
germinativos y esporas.
 4. PROCEDIMIENTO GENERAL: OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE
MICROORGANISMOS, BACTERIAS Y HONGOS:

4.1 MATERIALES:

 Porta
 SSF
 Asa de siembra
 Mechero bunsen
 Cultivo
 Pinzas de madera
 Pipeta Pasteur

4.2 METODOLOGÍA:

Procedimiento general de toda tinción

Tomamos una gota de suero salino fisiológico estéril y lo

depositamos sobre la superficie del porta.

Tomamos el asa de siembra las esterilizamos con el

mechero de bunsen, dejamos que se enfrié.

Tomamos la colonia a teñir y realizamos una extensión de los

microorganismos por toda la superficie del porta. Esterilizamos
nuevamente el asa de siembra, con el mechero de bunsen.

Secamos la preparación y con la ayuda de las pinzas de madera

aproximamos la preparación a la llama del mechero.

Esperamos que el suero salino fisiológico se evapore por completo, colocando el porta inclinado
en la llama del mechero, atravesar tres veces la llama del mechero para fijar los microorganismos
el porta.
5. MÉTODOS DE TINCIÓN (TINCIÓN DE GRAM):

5.1 MATERIALES:

 Ensaladera
 Agua destilada
 Pinzas de madera
 Gradilla metálica
 Cristal violeta
 Lugol
 Alcohol- acetona
 Safranina
 Aceite de inversión
 microscopio

5.2 METODOLOGÍA
Procedimiento de tinción de Gram

Colocar una pequeña cantidad de agua destilada en la base de la

ensaladera, para facilitar su posterior limpieza, colocamos la gradilla
sobre la ensaladera

Una vez hacemos esto, comenzamos la tinción agregando el

colorante principal de la tinción, el cual es el cristal violeta, ponemos
el frotis bacteriano sobre la gradilla.

Rociamos toda la superficie del porta con el colorante y lo

mantenemos así durante 1 minuto, tiempo sobre el cual el colorante
cristal violeta penetrará en el citoplasma tanto en las bacterias Gram
(+) y las bacterias Gram (-).

Limpiamos la preparación con agua destilada, para eliminar los

restos de colorante y sacudimos levemente el porta para escurrir el
agua destilada.
 Agregamos lugol, quien actuará como mordiente fijando el color en el interior de
las células bacterianas, rociamos la superficie del porta con el lugol durante un
minuto para actúe.

Eliminamos los restos del lugol agregando agua destilada y luego sacudimos el
porta con el fin de sacar los restos de agua destilada.

Aplicamos alcohol acetona, donde este contenido contiene 50% alcohol y 50%
acetona, este es un decolorante selectivo que va a decolorar las bacterias Gram (-)
y actuara durante 15 segundos.

Limpiamos la preparación con agua destilada para eliminar los restos del
alcohol acetona y la escurrimos.

Aplicamos safranina, un colorante secundario en la tinción de Gram, que va a teñir

únicamente las bacterias que se han decolorado en el paso anterior. Es decir; las
bacterias Gram (-), durante 1 minuto.

Limpiamos los restos de safranina de safranina con agua destilada y sacudimos el

porta para escurrir, lo dejamos secando al aire libre.

Una vez seca, encajamos el porta en la platina del microscopio y comenzamos a

enfocar.

Obviamente para empezar enfocar debemos pasar primeramente a enfocar con el

objetivo 4x, cambiamos al objetivo 10x y empezamos a enfocar, pasamos al objetivo
40x (enfocamos), una vez hecho esto utilizaremos el objetivo de 100x que necesita la
utilización de aceite de inmersión.

Colocamos una gota de aceite de inmersión directamente sobre la preparación y

utilizamos dicho objetivo.
 Una vez terminamos de observar hacemos la limpieza del microscopio, utilizando una
solución limpiadora para el microscopio y el objetivo que utilizamos.

5.3 OBSERVACIONES:

Se pueden observar distintos tipos de bacterias como cocos, con una morfología
redonda, bacilos con una morfología alargada, cocobacilos prácticamente son bacilos
ovalados y espirilos si son bacilos con morfología licoideal. También se puede observar
la disposición en la que se encuentran, diplococos agrupados de dos, tétradas agrupados
en cuatro, en cadenas agrupados varios dobles en cadenas alargados, en racimos
agrupados en montón con una forma redonda y finalmente se pudo observar las
características tintoriales de las bacterias, donde las Gram positivas aparecen de color
violeta y las Gram negativas aparecen de color rosa.
5.4 ANÁLISIS DE RESULTADOS:

Mediante la observación podemos responder que se observan bacterias las cuales se

pueden distinguir mediante su forma celular y pared celular. En la forma celular se
encuentran los cocos, bacilos, espirilos, estos pueden tener distintas formas, dada que la
forma de una bacteria como organismo individual viene dada por la rigidez de su pared,
esta es una característica de cada tipo bacteriano. Pero en sí, quien provoca las distintas
formas de las bacterias es más bien a una forma de adaptación o supervivencia ya que
ellas tienen distintas formas por el hábitat o por las condiciones climáticas en donde
residen.

Las bacterias también se pueden distinguir por su pared celular, las cuales se dividen en
gram positivas y gram negativas. Como se pudo observar, las grampositivas y los
gramnegativas tomaron algunos colores característicos esto se debe principalmente,
porque la pared celular de las bacterias gram negativas está constituida por una capa
fina de peptidoglicano y una membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram
positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no
cuentan con membrana celular externa; así pues, la composición química y el contenido
de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas
explica y determina las características tintoriales. Como pudimos observar, utilizamos la
mezcla de alcohol-acetona, que tiene como función determinante la decoloración ya que
la misma es soluble al complejo que se ha formado violeta cristal-yodo de Gram, se pudo
observar en el experimento que las bacterias Gram positivas no se decoloran. Mientras
que las Gram negativas se decoloran.

Los microorganismos gram negativos tienen espacios en la estructura de su pared celular

y el alcohol-acetona es un solvente lipídico que actúa sobre la membrana exterior de la
pared de la célula y afecta la membrana citoplásmica donde se unen los péptidoglicano.
Además, la delgada capa de péptidoglicano no retiene el complejo violeta cristal yodo lo
cual obliga a las células Gram negativas a decolorarse. Sin embargo, las células Gram
positivas debido a sus gruesas paredes de péptidoglicano y pocos lípidos no son
permeables al decolorador puesto que este deshidrata la pared celular y cierra los poros,
alterando y afectando el pequeño espacio entre las moléculas. El complejo violeta cristal
de yodo queda atrapado dentro de la pared celular tiñendo a las bacterias Gram positivas
de color azul. Luego, la safranina, logra teñir de rosa a las bacterias Gram negativas, las
cuales pierden el colorante cristal violeta después de ese lavado.

6. MÉTODOS DE TINCIÓN (TÉCNICA DEL CELO)

6.1 MATERIALES:

 Celo
 Tijeras
 Porta
 Azul de lactofonol
 Cultivo
 Asa de siembra
 Papel de filtro
 Cubre
 Microscopio

6.2 METODOLOGÍA:

Procedimiento de la técnica del celo

Ponemos una o dos gotas de lactofonol o azul de metileno sobre el porta.

Esterilizamos con el mechero el asa de siembras, dejamos que se enfríe.

Con la ayuda de unas tijeras, pegamos un trozo de celo en el filamento del asa
de siembra.

Ponemos en contacto la cara adhesiva del celo con la periferia del micelio
fúngico, donde vamos a encontrar la cifra reproductora en mayor medida.

Ponemos el celo en contacto con el colorante presionando para que se quede bien
adherido al porta, esterilizamos de nuevo el asa de siembra con el mechero.
 Con la ayuda de un papel absorbente, presionamos sobre la preparación para
eliminar los restos de colorantes y burbujas que no se haya podido formar.

Una vez hacemos esto, la preparación está lista para su observación al microscopio.

Encendemos el microscopio y colocamos la preparación en la platina.

Enfocamos con el objetivo 4x, hasta subir al objetivo 40x, que es el que utilizaremos,
pues nos permitirá la observación de las principales estructuras fúngicas que podemos
encontrar.

Por último, retiramos la preparación y apagamos el microscopio.

6.3 Observaciones:

Se pueden observar esporas, hifas vegetativas, hifas reproductivas que nos servirán en
gran medida para identificar los hongos a nivel de géneros, esencialmente los principales
géneros fúngicos observados como el género penicillium, aspergillus, alternaria,
cladosporium, microsporum, trichophyton, epidermophyton.
6.4 Análisis de resultados:

Cómo pudimos observar en el experimento, existe una gran diversidad de hongos que se
identifican y se clasifican, por géneros. También, tomando como base su morfología,
macro y microscópica. Sin embargo, a pesar de la variedad de especies, todos tienen
una estructura semejante y es que están formados por hifas, el grupo de ellas fue el que
observamos y utilizamos en el experimento. Es decir, el micelio, cada filamento de este
se denomina hifa, las cuales constituyen el cuerpo de los hongos, así se pudo dar cuenta
que el hongo, está constituido por filamentos tubulares microscópicos que se ramifican y
entrecruzan.

También se observó que algunas hifas, se pueden encontrar septadas, con divisores
entre las células, llamadas septos (tabique singular), estos a su vez tienen aberturas
llamadas poros entre las células, con el fin de permitir el flujo de citoplasma y nutrientes
a través del micelio. Pero también algunas no estaban septadas, es decir; formaban una
célula larga con muchos núcleos, si bien no forman tabiques entre los núcleos, sí forman
un tabique en los puntos de ramificación que conectan un filamento a otro, evitando que
toda la red se vea comprometida si una hifa está lesionada.

Las hifas, están rodeadas de una pared celular en forma de tubo que rodea una cavidad
central o lumen, donde se encuentra el protoplasma, al mismo tiempo una membrana lo
rodea. La pared es de consistencia rígida y está compuesta, principalmente, de
hemicelulosas y quitina (dos polímeros fibrilares, el primero de N-acetilglucosamina y el
segundo de glucosa) y podemos decir, que su longitud varía dependiendo de la
disponibilidad de nutrimentos y el tipo de hongo.

Estas se pueden clasificar por su función, como las hifas vegetativas o hifas
reproductoras (observadas en el experimento). Las hifas vegetativas, son muy
importantes y necesarias en los hongos, ya que son las que se encargan de la absorción
de nutrientes necesarias para el crecimiento, estas crecen hacia abajo y penetra el
sustrato a degradar para cumplir su función, estas hifas están muy capacitadas para
absorber de forma osmotrófica las sustancias disueltas en el medio, encargadas de
absorber los nutrientes para el crecimiento, las cuales son aéreas. En cambio, las hifas
reproductivas, crecen hacia la superficie externa del medio y es la encargada de formar
las estructuras reproductoras (endosporitos), pueden ser aéreas y tienen como función,
sostener el desarrollo de las esporas, este se desarrolla en sectores donde se han
agotado los nutrientes lo cual permite al hongo, que sus esporas puedan abandonar ese
lugar para colonizar ambientes más ricos en nutrientes.

En cuanto a las esporas que clasificamos en el experimento como estructura fúngica. En

los hongos, es muy fundamental, pues tienen como función principal asegurar la
dispersión del hongo a otras localizaciones, por lo que germinan cuando se encuentran
en un medio apropiado, donde exista humedad disponible. La germinación, consiste en
una activación del metabolismo, seguido por un abultamiento de la espora de la cual se
origina un pequeño tubo germinativo. El tubo se alarga hasta convertirse en una hifa que
ramifica y continúa desarrollándose hasta dar lugar a un nuevo organismo.

Todas estas estructuras fúngicas, permiten identificar los principales géneros fúngicos, lo
que generalmente tienen estructuras de micelios y tienen el mismo propósito, colonizarse,
reproducirse y sobrevivir a las adversidades de la vida.

7. CONCLUSIONES:

7.1 CONCLUSIÓN 1:

Hemos concluido que conocer las bacterias es muy importante, ya que prácticamente
nos encontramos rodeados de estos microorganismos, que además están fuera y dentro
de nuestro organismo, algunas beneficiándonos y otras perjudicándonos, como lo dice
su propio nombre (microorganismos), son extremadamente pequeños, tanto que al ojo
humano no le es posible observarlas a simple vista, por lo que utilizan el microscopio.

Sin embargo, a través de este muchas veces se observan como muestras incoloras y
transparentes, por lo que se debe utilizar colorantes, es por eso que, en la técnica de
tinción, utilizamos colorantes para poder identificarlas. Además, esta técnica beneficia el
estudio de las mismas, ya que para poder tratarlas en investigaciones se necesita
clasificarlas, por medio de características o diversos criterios como los observados y
analizados en esta práctica. Estas son: según la morfología, la presencia de su pared
celular, en su metabolismo etc.
7.2 CONCLUSIÓN 2:

Aunque a menudo ignoramos estas especies, los hongos cumplen un papel vital en
nuestros ecosistemas. Además, la biodiversidad de estas especies es enorme, mucho
mayor que la de las plantas vasculares. En el análisis se repasan algunas de las
principales características de los hongos.

Sin los hongos no habría continuidad en la vida. De hecho, un medio ambiente sin hongos
sería uno sin plantas. Es de suma importancia estudiar los hongos, ya que desempeñan
un papel cada vez más importante en las enfermedades infecciosas, en especial en los
pacientes inmunodeprimidos. Como hemos visto en temas anteriores cada
microorganismo detectado debe examinarse de forma sistemática.

En general, los hongos tienen una importancia ecológica vital. ... Ellos son
descomponedores de la materia orgánica. Al igual que las bacterias, insectos y gusanos
reciclan nutrientes en la naturaleza y liberan estas sustancias que van a emplear otros
organismos. Podríamos decir que una vida sin hongos, de verdad impactaría mucho, ya
que los hongos son parte de los descomponedores primarios, que se alimentan de
materia muerta que se pueden presentar en animales y plantas, si no existieran
simplemente se acumularía muchos residuos que podrían contaminar el planeta. Es
asombroso, como ellos con sus propias funciones y con solo existir, a través de sus
propósitos de colonizarse, nutrirse y desarrollarse, ayudan demasiado a la salud de cada
uno de los seres vivos en el planeta, además generan nutrientes para el suelo que
permitirán, el desarrollo de especies vegetales y cultivos. Es decir, por esto los hongos
son muy fundamentales e importantes en nuestro planeta tierra.
Referencias:

 https://www.lifeder.com/frotis-
bacteriano/#:~:text=El%20frotis%20bacteriano%20es%20una%20extensi%C3%
B3n%20en%20forma,portaobjetos%2C%20para%20su%20observaci%C3%B3n
%20bajo%20un%20microscopio%20%C3%B3ptico.
 https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-gram.htm
 https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=&ved=2ahU
KEwiUq7fb8oXxAhUJRDABHR2-
BoIQFjAaegQIFBAD&url=https%3A%2F%2Fwww.medigraphic.com%2Fpdfs%2F
invdis%2Fir-2014%2Fir141b.pdf&usg=AOvVaw1D97LxSgxRd2iJVVtgTFuZ
 https://www.slideshare.net/yuriken/informe-microflora
https://www.agenciasinc.es/Noticias/Las-bacterias-se-adaptan-a-las-diferentes-
temperaturas-alterando-sus-membranas-celulares
 https://youtu.be/uy9t5dNWXNw
 https://www.bing.com/search?form=MOZLBR&pc=MOZD&q=para+que+sirve+el+
lactofenol+en+la+identificaci%C3%B3n+de+estruturas+f%C3%BAngica (se
descarga)
 https://es.wikipedia.org/wiki/Hifa
 https://hongosmasquecallampas.wordpress.com/2016/03/01/el-micelio-y-la-
colonia-fungica/
 https://www.lifeder.com/micelio/#:~:text=El%20micelio%20tiene%20una%20impo
rtancia%20vital%20para%20los,crecimiento%20libera%20di%C3%B3xido%20de
%20carbono%20a%20la%20atm%C3%B3sfera.
 https://labdemicrobiologia.wixsite.com/scientist-site/blank-
nzn6g#:~:text=La%20tinci%C3%B3n%20de%20Azul%20de%20lactofenol%20se
%20emplea,c%C3%A9lulas%2C%20en%20este%20caso%20por%20las%20estr
ucturas%20f%C3%BAngicas.
 https://books.google.com.co/books?id=K_ETVnqnMZIC&pg=PA87&dq=%C2%BF
Que+son+los+tipos+de+hifas?&hl=es&sa=X&ved=2ahUKEwivt43Yj4vxAhWFRT
ABHW4fBdIQ6AEwAHoECAkQAg#v=onepage&q=%C2%BFQue%20son%20los
%20tipos%20de%20hifas%3F&f=false
 http://es.scienceaq.com/Biology/100317773.html

 https://www.salud.mapfre.es/pruebas-diagnosticas/otras-pruebas-
diagnosticas/tincion-de-
gram/#:~:text=Las%20Gram%20positivas%20tienen%20una,y%20se%20clasific
an%20como%20Gram%20%2B.
 http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tem
a_2_morfologia.pdf
 https://www.lifeder.com/hifas/
 https://es.wikipedia.org/wiki/Micelio
 https://www.lifeder.com/penicillium/
 https://www.vircell.com/enfermedad/34-aspergillus-fumigatus/
 https://es.wikipedia.org/wiki/Alternaria
 https://www.ecured.cu/Cladosporium
 https://candidiasisweb.com/que-es/microsporum.php
 https://candidiasisweb.com/que-es/trichophyton.php
 https://candidiasisweb.com/que-es/epidermophyton.php

 Hoh, D., 2021. METODOS DE TINCIÓN.. [online] prezi.com. Available at:

<https://prezi.com/7svzgds3qx2j/metodos-de-tincion/> [Accessed 6 April 2016].
 Delgado, A., Milagros, N., Ameri, N., Vergara, C. and Vasquez, Y., 2020. Relación
entre dos métodos de detección del celo y eficiencia reproductiva en vacas
Holstein. [online] Engormix. Available at: <https://www.engormix.com/ganaderia-
leche/articulos/relacion-entre-dos-metodos-t45512.htm> [Accessed 13 June
2021].
 Arapa, M., 2021. PRÁCTICA PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO:
COLORACIONES: SIMPLE Y DIFERENCIAL - TINCION Y MORFOLOGIA DE
HONGOS. [online] Academia.edu. Available at:
<https://www.academia.edu/36971852/PR%C3%81CTICA_PREPARACI%C3%9
3N_DE_UN_FROTIS_BACTERIANO_COLORACIONES_SIMPLE_Y_DIFEREN
CIAL_TINCION_Y_MORFOLOGIA_DE_HONGOS> [Accessed 13 June 2021].
 vdocuments.mx. 2021. La Tincion de Gram - [DOCX Document]. [online] Available
at: <https://vdocuments.mx/la-tincion-de-gram.html> [Accessed 12 December
2014].
 Genome.gov. 2021. Bacteria | NHGRI. [online] Available at:
<https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Bacteria> [Accessed 13 June
2021].
 Slideshare.net. 2021. Informe microflora. [online] Available at:
<https://www.slideshare.net/yuriken/informe-microflora> [Accessed 13 June
2021].
 Tomate, C., 2021. La adaptación de las bacterias frente a variaciones en su
entorno. [online] Xatakaciencia.com. Available at:
<https://www.xatakaciencia.com/biologia/la-adaptacion-de-las-bacterias-frente-a-
variaciones-en-su-entorno> [Accessed 13 June 2021].
 Aguamarket.com. 2021. Formas de las bacterias. [online] Available at:
<https://www.aguamarket.com/diccionario/terminos.asp?Id=3634#:~:text=Formas
%20de%20las%20bacterias%20La%20forma%20de%20una,filamentosa%20o%
20formas%20intermedias%20de%20los%20casos%20anteriores> [Accessed 13
June 2021].
 Lifeder. 2021. Células fúngicas: características, organelos y funciones. [online]
Available at: <https://www.lifeder.com/celulas-fungicas/> [Accessed 13 June
2021].
 Labdemicrobiologia.wixsite.com. 2021. [online] Available at:
<https://labdemicrobiologia.wixsite.com/scientist-site/t-cnicas-y-tipos-de-tinci-n>
[Accessed 13 June 2021].
 González, M., Diamont P, D. and Gutiérrez, B., 2021. Técnica de tinción de
estructuras fúngicas con colorantes vegetales como una alternativa no
contaminante. [online] Ve.scielo.org. Available at:
<http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1316-
33612011000100009&lng=es&nrm=iso&tlng=es> [Accessed 13 June 2021].
 FunG page: los hongos, mas que callampas. 2021. ESPORAS, ELEMENTOS DE
PROPAGACION Y REPRODUCCION DE LOS HONGOS. [online] Available at:
<https://hongosmasquecallampas.wordpress.com/2016/03/08/esporas-
elementos-de-propagacion-y-reproduccion-de-los-
hongos/#:~:text=Las%20esporas%20son%20el%20medio%20de%20propagaci%
C3%B3n%20de,resistir%20condiciones%20adversas%20y%20perseverar%20en
%20el%20tiempo> [Accessed 13 June 2021].
 Cesta y Setas. 2021. ▷ HIFAS - Capítulo 1: Hifas fúngicas. El verdadero cuerpo
de los hongos | 🍄 Cesta y Setas. [online] Available at:
<https://www.cestaysetas.com/c1-hifas-fungicas-el-verdadero-cuerpo-de-los-
hongos/> [Accessed 13 June 2021].
 Labdemicrobiologia.wixsite.com. 2021. [online] Available at:
<https://labdemicrobiologia.wixsite.com/scientist-site/blank-nzn6g> [Accessed 13
June 2021].
 Tabaco, M., 2021. LABORATORIO 3 OBSERVACIÓN MICROSCOPICA DE
HONGOS... [online] Academia.edu. Available at:
<https://www.academia.edu/23840145/LABORATORIO_3_OBSERVACI%C3%9
3N_MICROSCOPICA_DE_HONGOS_> [Accessed 13 June 2021].
 perfil, V., 2021. PRÁCTICA N°2. [online] Algasunicelulares.blogspot.com.
Available at: <https://algasunicelulares.blogspot.com/2017/04/los-hongos-los-
hongos-pertenecen-al.html> [Accessed 13 June 2021].
 Es.scribd.com. 2021. [online] Available at:
<https://es.scribd.com/document/86551409/Observacion-microscopica-de-
hongos> [Accessed 13 June 2021].
 Um.es. 2021. Unidad 2 - Estudio microscópico. [online] Available at:
<https://www.um.es/micologia/unidad_2/u2_etapa_2/index.html> [Accessed 13
June 2021].
 studylib.es. 2021. Práctica 3: Observación de Hongos.. [online] Available at:
<https://studylib.es/doc/4957483/pr%C3%A1ctica-3--observaci%C3%B3n-de-
hongos> [Accessed 13 June 2021].
 Vimeo. 2021. Tinción Gram. [online] Available at: <https://vimeo.com/392115612>
[Accessed 13 June 2021].
 Es.wikipedia.org. 2021. Lugol - Wikipedia, la enciclopedia libre. [online] Available
at: <https://es.wikipedia.org/wiki/Lugol> [Accessed 13 June 2021].
 Medigraphic.com. 2021. [online] Available at:
<https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2012/ir122f.pdf> [Accessed 13 June
2021].
 Lifeder. 2021. Cristal violeta: características, cómo se obtiene y usos. [online]
Available at: <https://www.lifeder.com/cristal-violeta/> [Accessed 13 June 2021].
 Lifeder. 2021. Azul de lactofenol: características, composición, preparación, usos.
[online] Available at: <https://www.lifeder.com/azul-de-lactofenol/> [Accessed 13
June 2021].