MEDIOS DE CULTIVO

SELECTIVOS Y
DIFERENCIALES

Microbiología General
Nubia Pilar Sarmiento Torres
Universidad de Pamplona
2018
 MEDIOS SELECTIVOS

Permiten el crecimiento de determinadas

bacterias e inhiben el desarrollo de otras ya
que poseen sustancias inhibidoras.
 MEDIOS DIFERENCIALES

Permiten diferenciar microorganismos de una

misma especie debido a que por sus
componentes ponen de manifiesto
características especiales de las bacterias.
MEDIOS SELECTIVOS
AGAR BAIRD PARKER
 AGAR BAIRD PARKER

• En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el

extracto de carne constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el
extracto de levadura aporta vitaminas del complejo B, la glicina y
el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos.
• Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito
de potasio y al cloruro de litio, los cuales inhiben el desarrollo
de la flora acompañante. La yema de huevo permite demostrar la
actividad lecitinásica.
• Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y
originan colonias de color grisáceo-negro, y dan reacción sobre la
yema de huevo produciendo alrededor de la colonia una zona
opaca que a menudo tiene una zona clara mas externa.
• Se pueden encontrar cepas no lipolíticas, que presentan igual
características de colonias pero sin la zona opaca y clara.
• Se debe confirmar la presencia de S. aureus mediante pruebas
bioquímicas.
AGAR SALADO MANITOL
 AGAR SALADO MANITOL
• Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta
concentración salina. Los estafilococos coagulasa positiva
hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen
rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos
coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona
roja o púrpura. Las colonias sospechosas, se repicarán en un
medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles,
posteriormente, la prueba de la coagulasa.
• En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona,
constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y
minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el
cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el
agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora
acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
 AGAR SALADO MANITOL
• Las bacterias que crecen en un medio con alta
concentración de sal y fermentan el manitol,
producen ácidos, con lo que se modifica el pH del
medio y vira el indicador de pH del color rojo al
amarillo.
• Los estafilococos crecen en altas concentraciones de
sal, y pueden o no fermentar el manitol.
• Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el
manitol y se visualizan como colonias amarillas
rodeadas de una zona del mismo color.
• Los estafilococos que no fermentan el manitol, se
visualizan como colonias rojas, rodeadas de una
zona del mismo color o púrpura.
AGAR SELECTIVO Bacillus
cereus
 AGAR SELECTIVO Bacillus
cereus
• Bacillus cereus, ha sido implicado en toxoinfecciones
alimentarias, particularmente asociado al consumo de
arroz contaminado, y también en algunos procesos
infecciosos en seres humanos y animales.
• En el medio de cultivo, el contenido de peptona es bajo
(0.1%), y la adición de piruvato de sodio y emulsión
de yema de huevo mejora el aislamiento y
esporulación de esta bacteria. Para verificar la
utilización del manitol, se usa un indicador de pH, azul
de bromotimol. Este medio es selectivo, por el
agregado del suplemento para Bacillus cereus con el
que se obtiene una concentración final de 100 U de
Polimixina B por ml de medio.
 AGAR SELECTIVO Bacillus cereus

• El diagnóstico primario se basa en la morfología y color

de la colonia, en la precipitación de la lecitina hidrolizada
y en la falta de utilización del manitol por Bacillus
cereus.
• Las colonias típicas de B. cereus son crenadas,
filamentosas de aproximadamente 5 mm de diámetro a
las 24 horas de incubación, y tienen un color turquesa
(peacock blue) rodeado por un precipitado de hidrólisis
de yema de huevo. A las 48 horas de incubación
presentan el color con centro grisáceo.
AGAR MOSSEL
 AGAR MOSSEL
• Bacillus cereus, ha sido implicado en toxoinfecciones alimentarias,
particularmente asociado al consumo de arroz contaminado, y
también en algunos procesos infecciosos en seres humanos y
animales.
• El medio de cultivo, contiene los nutrientes necesarios para el
apropiado desarrollo bacteriano.
• Es diferencial debido a la presencia de manitol. Bacterias
fermentadoras de manitol, acidifican el medio produciendo el viraje
del indicador de pH rojo de fenol del rojo al amarillo, mientras las
bacterias que no lo fermentan, producen colonias del color del medio.
• La adición de emulsión de yema de huevo, mejora el aislamiento y
la esporulación de esta bacteria, además favorece y facilita la
visualización de las colonias de B. cereus ya que se produce un halo
de precipitación de la lecitina hidrolizada alrededor de las mismas.
• Puede lograrse el aislamiento selectivo de B. cereus, inhibiendo el
desarrollo de la flora acompañante presente en la muestra, por el
agregado del suplemento para Bacillus cereus con el que se obtiene
una concentración final de 100 U de Polimixina B por ml de medio.
 AGAR MOSSEL

• Bacillus cereus presenta colonias de tamaño

aproximado de 5 mm, rojas, rugosas y secas, con halo
de precipitación sobre fondo rosa-púrpura.
• Estas características son útiles para diferenciar B.
cereus de bacterias que utilizan el manitol (colonias
amarillas), pero no permiten diferenciar Bacillus cereus
de Bacillus anthracis, Bacillus mycoides, Bacillus
pseudomycoides y Bacillus thuringiensis, por eso será
necesario realizar pruebas bioquímicas para la
identificación de este microorganismo.
AGAR EMB
 AGAR EMB
• Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague
con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el
aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies
de bacilos Gram negativos. La diferenciación entre
organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y
aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los
indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un
efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas.
• Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp.
presentan un característico brillo metálico. Las cepas que
utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia
azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son
incoloras. En este medio se obtiene además, un buen
desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.
AGAR XLD
 AGAR XLD
• XLD Agar es un medio selectivo y de diferenciación. Contiene
extracto de levadura como fuente de nutrientes y vitaminas.

• Utiliza el desoxicolato de sodio como agente selectivo y,

por consiguiente, inhibe los microorganismos gram positivos.
La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan
prácticamente todos los entéricos, excepto Shigella, y esta
propiedad hace posible la diferenciación de dicha especie. La
lisina se incluye para permitir la diferenciación del grupo
Salmonella de los organismos no patógenos, dado que, sin
lisina, Salmonella fermentaría rápidamente la xilosa y no se
distinguiría de las especies no patógenas. Cuando la
Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada
por la enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio
a un pH alcalino que imita la reacción de Shigella.
• Para evitar el cambio similar en los organismos
coliformes positivos a la lisina, se añaden lactosa y
sacarosa para producir ácido en exceso . Para
aumentar la capacidad de diferenciación de la fórmula,
se incluye un sistema indicador de H2S, formado por
tiosulfato sódico y citrato férrico amónico, para la
visualización del ácido sulfhídrico producido, lo que
origina la formación de colonias con centros de color
negro. Los organismos no patógenos no productores de
H2S no descarboxilan la lisina; por tanto, la reacción
ácida producida por dichos organismos evita el
oscurecimiento de las colonias, lo que sucede sólo con
pH alcalino o neutro .
AGAR BISMUTO SULFITO
 AGAR BISMUTO SULFITO
• Es una modificación del Medio Wilson Blair, utilizado para la
detección de Salmonella, en particular Salmonella typhi de
muestras clínicas.

• La Peptona y el Extracto de carne aportan nitrógeno, vitaminas,

minerales y amino ácidos esenciales para el crecimiento. La
Dextrosa es el carbohidrato fermentable y provee de carbono y
energía. El indicador de Bismuto sulfito y el verde Brillante son
inhibidores de bacterias Gram positivas y de algunas bacterias
del grupo coliformes. El Agar bacteriológico es el agente
solidificante.

• El sulfato ferroso se incluye para la producción de H2S. Cuando

el H2S esta presente, el hierro es precipitado dando colonias
positivas características de color marrón a negro con brillo
metálico. Las placas deben ser uniformes, opacas, de color
crema-verde palo.
AGAR HEKTOEN
 AGAR HEKTOEN
• Este medio se considera moderadamente selectivo y es
particularmente útil para el aislamiento de las especies de Shigella.
La presente formulación difiere de la original en la eliminación del
desoxicolato de sodio y la reducción de la concentración de sales
biliares. Además, la concentración de peptona ha sido aumentada, a
fin de compensar los efectos inhibitorios de las sales biliares.

• . Esta formulación se recomienda como uno de diversos medios de

placas para el cultivo de la familia Enterobacteriaceae a partir de
muestras fecales. Las sales biliares hacen que el medio sea
selectivo, inhibiendo los microorganismos grampositivos y
reduciendo el crecimiento de algunos microorganismos gram-
negativos diferentes de Salmonella y Shigella. Se incluyen lactosa,
sacarosa y salicina para una óptima diferenciación según el color de
las colonias y del medio adyacente a éstas.
 AGAR HEKTOEN

• La Salmonella y la Shigella no fermentan estos

compuestos de carbono y, por tanto, no ocasionan
un cambio de color en el sistema indicador del pH,
en tanto que los microorganismos como la E. coli,
por ejemplo, que fermentan uno o más de tales
compuestos hasta convertirlos en ácidos, causan un
cambio de color a amarillo o anaranjado.
• El citrato férrico de amonio y el tiosulfato sódico del
medio permiten detectar la producción de sulfuro de
hidrógeno por la Salmonella. El sistema indicador del
pH consta de fucsina ácida y azul de bromotimol.
AGAR CROMOGENICO
Salmonella
 AGAR CROMOGENICO
Salmonella
• AGAR CROMOGENICO SALMONELLA es un medio cromogenico
selectivo, utilizado para la detección y presunta identificación de
especies de Salmonella a partir de muestras clínicas.
• Los medios utilizados tradicionalmente, para diferenciar especies
de Salmonella del resto de la familia Enterobacteriaceae, basados
en la capacidad de producir H2S asociada a su inhabilidad de
fermentar la lactosa no son realmente adecuados, ya que existen
más de 2000 especies de Salmonella que no tienen estas
características
• La peptona de Caseína y el Extracto de carne aportan nitrógeno,
vitaminas y aminoácidos esenciales par el crecimiento. La mezcla
de cromogenicos y el citrato sódico, inhiben microorganismos
gram positivos, Proteus y Coliformes. El Agar bacteriológico es el
agente solidificante.
 AGAR CROMOGENICO
Salmonella

• Los medios cromogenicos para identificar especies de

Salmonella, están basados en la combinación de dos
substratos cromogenicos diferentes, que facilita su
rápida identificación. El magenta-caprilate que es
hidrolizado por las especies de Salmonella y el X-gal
sustrato de la enzima β- D galactosidasa.
AGAR CROMOGENICO E. coli
 AGAR CROMOGENICO E. coli
• MUG PLUS® agar es un medio cromogénico selectivo para la
detección simultánea confirmativa de coliformes totales/fecales y
E.coli en aguas y alimentos (cromógenos según ISO 16649-
1:2001, AFNOR V08053)

• Tras 18-24 horas de incubación a 35-37 ºC aproximadamente (ó

44,5 ºC aproximadamente para C. fecales), los resultados que se
obtienen son:

• E.coli: Colonias de azul oscuro a añil (Salmon GAL y X-

Glucurónido positivo) que resultan indol positivas (puede
comprobarse directo en la colonia).

• Coliformes: Colonias rosas- rojas (Salmon GAL positivo) + las

azules (E.coli).
 AGAR CROMOGENICO E. coli

• Otras enterobacterias, incluidas algunas Salmonellas:

Colonias incoloras, excepto cepas como las Salmonella
Beta-D glucuronidasa positivas, que aparecen de color
azul claro a turquesa.

• Muchas cepas de Shigella y de Campylobacter crecen

con colonias verdes, pero también son interesantes al
ser microorganismos propios de aguas no potables.

• Unas pocas cepas de Enterococcus durans crecen con

colonias rojas, pero también indican contaminación
fecal del agua.
AGAR CHROMOCULT
AGAR SALMONELLA - SHIGELLA
 AGAR SALMONELLA -
SHIGELLA
• El agar Salmonella-Shigella es una modificación del agar citrato
desoxicolato descrito por Leifson. Se le considera un medio
moderadamente selectivo según el nivel de inhibición de los
microorganismos gram positivos y Enterobacteriaceae diferentes de
Salmonella y Shigella, que inhibe por contenido de sales biliares,
verde brillante y citratos.
• La diferenciación de los organismos entéricos se logra mediante la
incorporación de lactosa en el medio. Los organismos que
fermentan lactosa producen ácido que, en presencia del indicador
rojo neutro, propicia la formación de colonias de color rojo. Los
organismos no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras.
• El tiosulfato sódico y el citrato férrico permiten la detección de
producción de ácido sulfhídrico, como lo demuestran las colonias
con centros de color negro.
.
AGAR MAC CONKEY
 AGAR MAC CONKEY

• El agar MacConkey es un medio de cultivo

selectivo y diferencial para bacterias diseñado
para aislar selectivamente bacilos Gram negativos
y entéricos (encontrados normalmente en el tracto
intestinal) y diferenciarlos en base a la
fermentación de la lactosa. El cristal violeta y las
sales biliares inhiben el crecimiento de organismos
grampositivos, lo que permite la selección y el
aislamiento de bacterias gramnegativas. Las
bacterias entéricas que tienen la habilidad de
fermentar lactosa pueden ser detectadas
utilizando el carbohidrato lactosa y el indicador de
pH rojo neutro.
 AGAR MAC CONKEY

• Los ingredientes necesarios para este medio son los

siguientes: sales biliares (medio inhóspito para el
crecimiento de bacterias Gram positivas, excepto
Enterococcus y algunas especies de Staphylococcus),
colorante cristal violeta (inhóspito para cierto tipo de
bacterias Gram-positivo), indicador rojo neutro (el cual
marca microorganismos que fermenten la lactosa),
lactosa, peptona y cloruro sódico.