UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
Profesora: Luz Mery Buitrago A.
Práctica de laboratorio

IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS

INTRODUCCIÓN

QUÍMICA DE LOS AMINOÁCIDOS

Propiedades ácido-básicas: Tal como su nombre lo indica, los aminoácidos son compuestos orgánicos que
contienen grupos amino y carboxilo y por lo tanto poseen propiedades ácidas y básicas. Desde el punto de
vista químico, sería posible la existencia de un gran número de aminoácidos, sin embargo, en la naturaleza se
encuentra solo una veintena de ellos. De los 22 o más aminoácidos en proteínas, casi todos son α-
aminoácidos, es decir, que el grupo amino está presente en el átomo de carbono-α.

Los aminoácidos poseen propiedades diferentes a los compuestos orgánicos de bajo peso molecular y
semejan más bien sales inorgánicas, en general, son fácilmente solubles en medio acuosos, pero solo
ligeramente solubles o insolubles en solventes orgánicos. Sus puntos de fusión son muy altos comparados
con los compuestos orgánicos de bajo peso molecular y la mayoría tienen un punto de fusión por encima de
200°C. Para explicar estas observaciones se supone que, en solución neutra, los aminoácidos existen como
iones doblemente cargados, conocidos como zwitteriones, y no como moléculas no ionizadas.

Los puntos de fusión altos pueden explicarse en términos de la alta energía requerida para romper los
enlaces iónicos en la red cristalina. Los compuestos análogos tales como ácidos sustituidos o aminas
sustituidas, lo mismo que ésteres de aminoácidos, son no polares y tienen puntos de fusión muchos más
bajos. Algunas otras propiedades físicas confirman también que casi todos los aminoácidos alifáticos existen
como zwitteriones. La fuerte carga positiva en el grupo NH3+ induce una tendencia a que el grupo COOH
pierda un protón, y, por tanto, los aminoácidos son ácidos fuertes. Por ejemplo, el pKa de la glicina es mucho
más bajo que el del ácido acético y otros aminoácidos que contienen una cadena lateral alifática tienen
valores de pK semejantes a la glicina.

Algunos aminoácidos contienen grupos ionizables en la cadena lateral R, lo cual afecta las características
físicas bien sea que el aminoácido se encuentra libre en solución o combinado con otros en una proteína. En
efecto las cargas de las proteínas está determinada en gran parte por los grupos ionizables de la cadena
lateral de los aminoácidos.

Punto isoeléctrico. Los aminoácidos migran en un campo eléctrico y esta propiedad constituye la base de
uno de los métodos para su separación, la dirección y magnitud de la migración depende en gran parte de la
forma iónica predominante del aminoácido en solución, la cual a su vez esta determinada por el pH del
amortiguador usado para electroforesis.

El pH al cual la carga neta es cero y no ocurre migración en un campo eléctrico se conoce como el punto
isoeléctrico. Para los aminoácidos este es usualmente el mismo que el punto isoiónico, definido como pH al
cual las cargas positivas y negativas son iguales, cuando se considera solamente el equilibrio de grupos
cargados con H+. En el caso de las proteínas estos dos puntos no siempre son lo mismo, puesto que a los
aminoácidos pueden unirse iones diferentes al H+. Para aminoácidos que contienen solamente un grupo
COOH y un –NH2 como grupos ionizables, el punto isoeléctrico (pI) se encuentra en la mitad de los valores
pK para estos grupos.
Actividad óptica. El átomo de carbono α es asimétrico para todos lo aminoácidos excepto la glicina, así que
fuera de esta, todos los aminoácidos poseen actividad óptica. Por semejanza con el ácido glicérico L

Cuando el --CH2 OH es reemplazado por otros grupos, surgen dos familias de aminoácidos, las series D y L.
Todos los aminoácidos presentes en las proteínas tienen configuración L mientras la forma D se encuentra en
antibióticos y en la pared celular de algunas bacterias.

Las letras L y D se refieren a la configuración absoluta con respecto al carbono asimétrico y no a la actividad
óptica. La temperatura, la presencia de electrolitos y el pH afectan la rotación específica, el signo y la
magnitud de la rotación pueden llegar a invertirse cambiando el pH.
Algunos aminoácidos tales como isoleucina, treonina e hidroxilisina contienen un segundo átomo de carbono
asimétrico y presentan más de dos configuraciones.

Reacciones generales de los aminoácidos. Los aminoácidos dan todas las reacciones típicas de los
compuestos que contienen grupos aminos y carboxilo, aún bajo condiciones en las que la forma zwitterion
está presente solo en cantidades pequeñas.

REACCIÓN DE NINHIDRINA

La Ninhidrina reacciona con los α –L aminoácidos libres a un pH entre 4 y 9, formando CO2, NH3 y un
aldehído. El amoniaco producido en la reacción se combina con una molécula de ninhidrina reducida y otra en
forma oxidada, formando un compuesto de color azul. Los aminoácidos prolina (P) e hidroxiprolina también
reaccionan con la Ninhidrina, pero en este caso, se obtiene un color amarillo en vez del azul característico.

REACCIÓN XANTOPROTEICA

Es característica de los aminoácidos que contienen un núcleo aromático como tirosina, fenilalanina y
triptófano. Los anillos aromáticos se someten a nitración, lo cual conlleva a formación de los derivados nitro
de color amarillo, el cual se vuelve naranja por la adición de álcalis. La mayoría de las proteínas también dan
positiva la reacción xantoproteica.

REACCIÓN DE MILLON

Esta prueba la dan los compuestos que poseen grupos fenólicos como la tirosina, la prueba positiva en una
proteína indica la presencia de este aminoácido en la estructura de la misma. Al calentar el reactivo de Millón
(mezcla de nitrato y nitrito mercúricos disueltos en ácido nítrico concentrado), con el aminoácido forma un
precipitado rojo.

PRUEBA DE ACETATO DE PLOMO (PARA AMINOÁCIDOS AZUFRADOS)

Los aminoácidos (cisteína, metionina y cistina) por tener grupos azufrados, el primero mercapto, el segundo
metiltio y el último un puente disulfuro; producen precipitados al tratarlos con acetato de plomo después de la
reacción.
 REACCIONES QUÍMICAS DE LOS AMINOÁCIDOS

1. Sanger
2. Desaminación oxidativa
3. Sorensen 1. Formación de sales
4. Base de Shiff H 2. Formación de amidas
5. Ninhidrina N2H – C –COOH 3. Formación de esteres
6. Ácido nitroso R 4. Formación de anhídridos
7. Bromuro e cianógeno 5. Descarboxilación
8. Cloruro de Dansilo
9. Con CO2
10. Formación de amidas
11. Reacción de Edman

Azufre reducido Nitroprusiato de sodio

Acetato de plomo Ninhidrina
Erlich Pauly
Folin Ciocalteu Sakaguchi
Hopkins cole Sullivan
Millon Xantoproteica

MATERIALES POR GRUPO DE TRABAJO

8 Tubos de ensayo- gradilla

1 Espátula
1 Agitador
1 vaso de precipitado (250 mL)
3 pipetas (1, 5 y 10 mL)

1 pinzas para tubo

1 termómetro
1 placa de calentamiento

REACTIVOS

Glicina (1 g/L), tirosina (1 g /L), triptófano (1 g /L), cisteína (1 g/L), asparagina(1 g/L)

 Solución de Ninhidrina fresca

 NaOH 40%
 NaOH 10%
 Ácido nítrico concentrado
 Reactivo de Millon
 Acetato de plomo 10%

Clara de huevo 1:6 con agua destilada

Leche 10 mL por grupo de trabajo
PROCEDIMIENTO

REACCIÓN DE NINHIDRINA

Rotule 4 tubos de ensayo identificando cada uno como: blanco, glicina, tirosina, clara de
huevo (diluida 1:6). A cada uno de los tubos de ensayo agregue 1 mL de las respectivas
sustancias que indica el rótulo usando agua destilada para el tubo marcado como blanco.
Caliente suavemente. A cada tubo agregar 0.5 mL de la solución de Ninhidrina. Calentar
al baño de maría por 10 minutos. Observe la coloración que se forma

REACCIÓN XANTOPROTEICA

Rotule 4 tubos de ensayo identificando cada uno como: blanco, triptófano, tirosina, clara
de huevo (diluida 1:6). A cada uno de los tubos de ensayo agregue 2 mL de las
respectivas sustancias que indica el rótulo usando agua destilada para el tubo marcado
como blanco. Agregar 2 mL de ácido nítrico concentrado a cada uno de los tubos de
ensayo y calentar hasta que hierva suavemente. Agregar cuidadosamente gota a gota
hidróxido de sodio al 40% hasta alcalinizar. El cambio de coloración, de amarillo en
medio ácido a naranja en solución alcalina, se constituye en prueba positiva para el
ensayo.

REACCIÓN DE MILLON

Rotule 4 tubos de ensayo identificando cada uno como: blanco, glicina, tirosina, clara de
huevo (diluida 1:6). A cada uno de los tubos de ensayo agregue 1 mL de las respectivas
sustancias que indica el rótulo usando agua destilada para el tubo marcado como blanco.
Añadir 1 mL de reactivo de Millón a cada uno de los tubos (cuide que no quede el reactivo
en las paredes); Caliente en baño de agua en ebullición por 10 min. Observe los colores
desarrollados y anote los resultados.

PRUEBA DE ACETATO DE PLOMO (PARA AMINOÁCIDOS AZUFRADOS)

Rotule 4 tubos de ensayo identificando cada uno como: blanco, cisteína, asparagina, clara
de huevo (diluida 1:6). En cada uno agregue 2 mL de la solución correspondiente, 2 mL
de NaOH 10% y 0.5 mL de acetato de Plomo al 10%. Caliente en baño de agua a
ebullición por 5 min. La formación de un precipitado gris oscuro o negro es prueba positiva
para aminoácidos azufrados.
RESULTADOS Y CONSULTA

1. Consultar otras reacciones con las cuales se puedan identificar aminoácidos por la presencia de grupos
funcionales en el radical.

2. Consultar las ecuaciones químicas de las reacciones de las pruebas realizadas.

BIBLIOGRAFIA

 ALEMANY, M Y FONT, S. Prácticas de Bioquímica. España: alhambra, 1983.

 BACCA, C. Bioquímica. Manual de Laboratorio. Universidad INCCA de Colombia. Colombia: Unidad
Editorial. 2011
 DEVLIN, T. Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. 3 ed. España. Reverté, 1999.
 DIAZ, J., JUAREZ, M. Bioquímica. Un enfoque básico aplicado a las ciencias de la vida. México: Mc
Graw-Hill, 2007.
 HICKS J. bioquímica. 2 ed. México: Mc Graw- Hill Interamericana, 2008
 PLUMMER, D. Introducción a la bioquímica práctica. México: Mc Graw-Hill Latinoamericana S.A. 1981