Práctica 2 Microbiología Equipo 5

Gggg
Universidad de Guanajuato
Laboratorio de
Microbiología
División de Ciencias Naturales y Exactas

NELI03013
Practica 2: Preparación de material y medios de
cultivo
Docente: Dr. Bernardo Franco Bárcenas
Equipo 5
Integrantes:
Cynthia Donají Negrete Palacios
Cecilia Patricia Magno Paleo
José Angel Rosas Arroyo pág. 1
Práctica 2
Preparación de material y medios de cultivo
Objetivo
El alumno empleará las técnicas más adecuadas para la esterilización de material
que se usa en el laboratorio de microbiología y conocerá las condiciones para
trabajar en ambientes estériles.
El alumno aprenderá las técnicas para la preparación, esterilización y distribución
de diferentes medios de cultivo. Conocerá y aplicará los parámetros usados para el
control de calidad del proceso de esterilización.
Fundamento:
Los microorganismos son seres fascinantes, gracias a su gran adaptabilidad
pueden desarrollarse en cualquier parte o medio, algunos de ellos contribuyen con
cierta actividad metabólica esencial del cuerpo humano, otros son pieza
fundamental para una gran cantidad de líneas de investigación y procesos
industriales. No obstante, algunos generan efectos adversos a la salud, un evento
bastante vigilado en los hospitales de todo el mundo, a fin de evitar infecciones
nosocomiales en pacientes atendidos en el lugar. En virtud de lo anterior, la
necesidad de eliminar o inhibir la proliferación de estos microorganismos en
espacios específicos impulsó la generación de una gran cantidad de métodos tanto
físicos como químicos apropiados para diversas necesidades. Aunado a ello, el
interés tanto por conocer cómo entender a estos seres trajo consigo la creación de
los distintos medios de cultivo, una herramienta vital para su aislamiento,
caracterización y conservación. Por lo tanto, la importancia que implica el
conocimiento y uso de los métodos de esterilización, en conjunto, con los medios
de cultivo infringen en el actuar cotidiano de cualquier microbiólogo en el planeta,
de ello depende el correcto análisis de una muestra o de un evento de particular
interés.
Resultados y cuestionario
1. ¿Cuál es el método más apropiado para esterilizar o desechar el siguiente

material?:
Material Método
Solución de vitaminas Filtración
Cajas de Petri de plástico de desecho Radiación ionizante (Cobalto 60, rayos
x y luz UV)
o tratamiento químico
Aceite mineral Filtración o calor seco
Sangre para transfusión de un Tratamiento químico o incineración
paciente a otro
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Ropa contaminada con Hervir, calor húmedo
microorganismos
Cajas de Petri de plástico nuevas y Irradiación
limpias
Talco Calor seco
Instrumental de cirugía Algunos se incineran si son partes
desechables
Esterilización con calor seco
Sangre de desecho Incineración
Cadáveres de animales de Incineración
experimentación
2. ¿Con qué finalidad se les pone a las pipetas un filtro de algodón?

Se debe de realizar con las pipetas, matraces y tubos con la finalidad de evitar el
acceso de microorganismos del ambiente a su interior, es importante recalcar que
estos tapones se deben de proteger con papel o puede remplazar con papel
aluminio.
3. Con respecto a la esterilidad ¿cómo deben obtenerse los líquidos biológicos (por
ejemplo, sangre o líquido cefalorraquídeo) para preparar un medio de cultivo?
Se deben de obtener con cuidado y tomando todas las medidas de asepsia. Por
ejemplo, se debe utilizar guantes estériles durante la extracción, se debe de
desinfectar con alcohol el área de donde se extraerá ya que en la piel existen
muchos microorganismos, además el sitio de extracción debe estar desinfectado
en su totalidad, evitando de esta manera el desarrollo infecciones en pacientes
atendidos en el lugar.
4. ¿Cuál es el indicador biológico utilizado en el método de esterilización con óxido

de etileno?
Esporas viables de Bacillus sterothermophilus en ampolletas, estas son inactivadas
a 121 °C durante 12 minutos, posteriormente se incuban las esporas y se analizan
para determinar si sobrevivieron o no.
5. ¿Cuál es el diámetro de poro de los filtros utilizados para filtrar soluciones

que no pueden ser esterilizadas y cuál es la limitación de usar filtración? Y
¿Cuánto miden las bacterias más pequeñas que se conocen?, dar genero y al
menos un ejemplo de especie.
Se usan membranas de poros de 0.22 μm, sirven para esterilizar soluciones de
sustancias sensibles al calor, sin embargo, los virus y algunas bacterias pequeñas
como:
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Género Tamaño Ejemplo Foto
(μm)
Bdellovibrio 0.2 - 0.5 Bdellovibrio bacteriovorus
Rickettsia rickettsii,
Rickettsias 0.1- 1
Clamidia 0.2 - 0.4 Chlamydia trachomatis
Espiroquetas 0.1 - 0.6 Leptospira
6. De acuerdo con la utilización de fuentes de carbono, los organismos se clasifican

en: Autótrofos y Heterótrofos.
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7. Los organismos se clasifican con respecto a la utilización de fuentes de
Carbono
8. Proporcione una definición microbiológica de lo que es un factor de crecimiento,

el cual es muy diferente en vertebrados.
Todos los microorganismos al igual que los seres vivos necesitan ciertas
condiciones en su ambiente para poder crecer y sobrevivir. El factor de crecimiento
varía en cada microorganismo, dicho se refiere al conjunto de moléculas orgánicas
específicas en ciertas cantidades estimulan su crecimiento. Cabe resaltar que no se
utilizan como fuente de energía, estos factores suelen ser vitaminas, aminoácidos,
coenzimas o precursores esenciales que los microrganismos adquieren del medio
o deben de ser adicionados al medio de cultivo, ya que los microrganismos no
pueden sintetizarlos.
9. ¿Qué es un medio mínimo?

Se refiere a un medio que posee solo una fuente de carbono necesaria para el
microorganismo empleado y el medio basal que está formado de compuestos
inorgánicos.
10. ¿Cuál es el propósito general del uso de los medios de cultivo?

Se utilizan para cultivar macroorganismo de interés, sirven como alimento o soporte
físico para que se desarrollen. Su uso se centra en el estudio y desarrollo de líneas
de investigación ya que se pueden caracterizar y aislar; así mismo, furto de su rápida
multiplicación se puede trabajar con muchas generaciones en solo día. Por otro
lado, los resultados obtenidos han sido trascendentes en el estudio de los procesos
metabólicos y genéticos en organismos más complejos, como lo es la especie
humana.
11. Mencione otros gelificantes aparte del agar-agar para los medios de cultivo Se
usa gelatina o sílica gel.
12. ¿Por qué las cajas de Petri deben incubarse con la tapa hacia abajo?
Se apoya sobre la tapa ya que de este modo el agar queda en la parte superior y al
condensarse el vapor de agua que generan los microorganismos por su
metabolismo, cae sobre la tapa evitando que los microorganismos se diluyan y así
se mantienen fijos al sustrato.
13. ¿Por qué considera usted que el medio de agar sangre no lo ofrecen las casas
comerciales completo y solo venden la base? Explique su respuesta con respecto
al componente principal de este medio.
Esto se debe a que el componente principal es una infusión de corazón de ternera
(comúnmente) por lo que es realmente complicado que las casas comerciales la
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vendan, en su lugar solo ofrecen los productos base y la infusión de sangres se
debe de conseguir por cuenta propia.
14. El medio de cultivo preparado es: selectivo, diferencial, mínimo, completo.

Diferencial
Posibles Resultados…
La caja Petri que se muestra a la izquierda es ideal, es decir, no está contaminada

con algún microorganismo, sin embargo, al compararla con las muestras de la
derecha se observan diversos grados de contaminación por bacterias y hongos. En
primer lugar, la caja 1 muestra diversas colonias bacterianas posiblemente, las
cuales incidieron en el cambio de color del agar en comparación con el control
(imagen de la izquierda), es probable que la acidez del medio se modificó debido a
la presencia de estos microorganismos. De igual manera, este fenómeno se
visualiza notoriamente en la placa 2, donde se aprecia (lo que determinamos como
un hongo) claramente un cambio en el color del agar, probablemente se encuentra
acidificando el medio, en este caso nosotros llegamos a la conclusión de que ambas
placas (1 y 2) deberían ser desechadas. En el caso de la placa 3 y 4 tienen cierto
grado de contaminación, pese a ello, el agar no presenta alteraciones significantes,
en sentido estricto también deberían desecharse, pero podrían ser empleadas para
su estudio, determinar los microorganismos presentes y su posible procedencia ya
que muchas veces muchas veces se eliminan las placas y no se tiene la curiosidad
por conocer al microorganismo. La importancia de esto radica en que se podría
descubrir algún tipo nuevo de hongo o bacteria que se desarrolló en el medio de
cultivo. Consideramos que las placas se pudieron contaminar por medio de malas
técnicas de esterilización del material, o bien por no tener cuidado al momento de
trabajar con ellas, algunos aspectos relacionados con la idea anterior son el hecho
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de hablar durante el proceso, no mantener un distancia adecuado con respecto al
mechero o el área de trabajo no se le limpió antes de comenzar la sesión.
Observaciones:
Área de Trabajo:
 Seguir al pie de la letra el protocolo de
trabajo del laboratorio.
 Colocar las pertenencias no necesarias
para el desarrollo de la práctica en un
lugar específico declarado por el docente.
 Limpiar el área donde se va a llevar a
cabo la experimentación con algún
desinfectante, de preferencia con etanol
al 70%.
 Tener muy presente la higiene en cualquier ámbito, pero en el desarrollo de
cultivos es demasiado importante para evitar contaminar los diversos medios.
 Para el adecuado desarrollo experimental, predeterminar únicamente el
material necesario.
 Finalizando la sesión, limpiar nuevamente el área donde se trabajó con el
material de limpieza, además de colocar en lugares ya predeterminados los
materiales que se utilizaron.
 Lavado de manos nuevamente, para evitar la interacción entre
microorganismos o residuos de sustancias.
Esterilización de Material:
 Tener conocimientos previos como en todo tipo de tratamientos,
específicamente con el uso en este caso de la autoclave para
evitar accidentes.
 Tener en cuenta las capacidades de la autoclave que se
encuentra en el laboratorio.
 El material previo a la esterilización debe de estar limpio
para reducir la carga microbiana y de esta manera contribuir al
proceso de esterilización.
 Protección adecuada al material, para que una vez estéril
no se contamine (utilizar papel kraft).
 El material que se utiliza tiene procedimientos distintos
para su adecuada esterilización.
 El tiempo de esterilización es particular y dependiente del material.
 Para casos específicos como lo son los tubos de ensayo, evitar cerrar por
completo los tapones ya sean de aluminio o de polietileno de alta densidad.
 Colocar cantidades pertinentes de algodón en matraces, tubos y pipetas
(8x16 y 5x7 para formar las torundas de algodón sucesivamente).
pág. 7
 Para un volumen mayor de pipetas y cajas de
Petri se utilizan cilindros metálicos, colocar
siempre las cajas en posición invertida.
Preparación de medios de Cultivo:

 HIGIENE en todo momento e importante
mencionar que el simple hecho de estar
hablando mientras se realiza el proceso
se corre el riesgo de contaminar el medio.
 Cada tipo de medio requiere
preparaciones y cantidades específicas:
Medios Generales. Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran
variedad de microorganismos.
Medios de enriquecimiento. Son aquellos que favorecen el crecimiento de u
determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el
crecimiento de los demás.
Medios Selectivos. Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de
microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de manifiesto
propiedades que un determinado tipo de microorganismos posee.
 Los medios líquidos se reparten en los recipientes adecuados (tubos,

matraces, etc.). En caso de ser un medio sólido y se ha de distribuir
en tubos o en matraces será necesario fundir el agar en baño María u
horno microondas, una vez fundido y homogenizado, se distribuye en
caliente a los tubos o matraces (no en cajas Petri) se tapa y se
esteriliza en el autoclave.
 Cuando se encuentra listo el medio, se debe pasar el cuello del matraz
o tubo de ensayo donde se encuentra contenido por el mechero de 2
a 3 veces, posteriormente se pasa a las cajas vertiendo hasta la mitad
o un tercio de su capacidad (depende el medio).
 La boquilla del matraz o tubo debe de pasarse por el mechero cada
vez que se vierta el contenido por cada caja de Petri.
 Las cajas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estéril
dentro de ellas y en un ambiente aséptico (por ejemplo en la
proximidad de la llama de un mechero Bunsen) es conveniente
homogenizar el medio en el transcurso de la operación para evitar que
el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual
en todas las placas.
 Cuando ya se tiene el medio en las cajas, se tapan y se dejan
solidificar con la tapa hacia arriba.
pág. 8
 Cuando se incuben las cajas, estas cambian de posición y se deben
de dejar con la tapa hacia abajo a 37° por 24 horas.
 Importante el etiquetado de cada cultivo, cada laboratorio tiene su
forma (lenguaje) o simbología.
Conclusión:
Durante el desarrollo de la práctica, aprendimos técnicas de esterilización que a
pesar de que no se realiza de manera práctica se tienen los conocimientos
necesarios para llevarlo a cabo, aunado a esta conocimientos teóricos de la técnica
para preparar cultivos, las técnicas de trabajo con ato grado de higiene e incubación
de estos medios. Para desarrollarlos se debe tomar en cuenta los factores que van
a contribuir en el crecimiento y supervivencia de los microrganismos, con el fin de
obtener buenos resultados (sin contaminaciones principalmente), para que al
momento de estudiarlos se logre apreciar sus características propias y aumentar
nuestra confianza al momento de llevarlo a cabo.
Es de suma importancia conocer los parámetros usados para el control de calidad
de procesos de esterilización, aunado a conocer la forma de preparación de los
medios de cultivo, todo esto es esencial para nuestra formación como profesionales
de la ciencia, ya sea en el área de investigación, clínicos o cualquier otra estos
conocimientos son fundamentales
Bibliografía:
 Baron EJ and Thompson
RB. Specimen collection, transport and processing: Bacteriology.
Manual of Clinical Microbiology. ASM Press, 2010
 Atlas, R. M. & Bartha, R. Y. (2002). Ecología microbiana y Microbiología
ambiental. España: Pearson Educación, S. A.
 Hernández, A. (2003). Microbiología industrial (No. 660.62 H557m). San
José, CR: EUNED.
 Manual de toma de muestras para estudio bacteriológico, parasitológico y
micológico. Depto. de Laboratorio Clínico de Hospital de Clínicas. OPS, 2004
pág. 9

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1. ¿Cuál es el método más apropiado para esterilizar o desechar el siguiente

2. ¿Con qué finalidad se les pone a las pipetas un filtro de algodón?

4. ¿Cuál es el indicador biológico utilizado en el método de esterilización con óxido

5. ¿Cuál es el diámetro de poro de los filtros utilizados para filtrar soluciones

Bdellovibrio 0.2 - 0.5 Bdellovibrio bacteriovorus

Clamidia 0.2 - 0.4 Chlamydia trachomatis

Espiroquetas 0.1 - 0.6 Leptospira

6. De acuerdo con la utilización de fuentes de carbono, los organismos se clasifican

8. Proporcione una definición microbiológica de lo que es un factor de crecimiento,

9. ¿Qué es un medio mínimo?

10. ¿Cuál es el propósito general del uso de los medios de cultivo?

14. El medio de cultivo preparado es: selectivo, diferencial, mínimo, completo.

La caja Petri que se muestra a la izquierda es ideal, es decir, no está contaminada

Preparación de medios de Cultivo:

 Los medios líquidos se reparten en los recipientes adecuados (tubos,

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