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Biomateriales PROTEÍNAS ADSORBIDAS EN BIOMATERIALES

Doctor. Silvia Milena Becerra Bayona Doctor. Víctor Alfonso Solarte David
Biomateriales
Funciones
Biomateriales
Clasificación
Nada es rico sino la riqueza inagotable de la naturaleza. Ella nos muestra solo
superficies, pero tiene un millón de brazas de profundidad.
Ralph Waldo Emerson.
Los átomos y moléculas que residen en la superficie de un biomaterial tienen una reactividad especial y una respuesta biológica directa.

El cuerpo "lee" la estructura de la superficie y responde a la química y organización particular.

Consideraciones generales de superficie

1. Se sabe que la región de la superficie de un material tiene una

reactividad única.

2. La superficie de un material es inevitablemente diferente

del volumen

3. No hay mucha masa total de material en una superficie

Consideraciones generales de superficie

4. Las superficies se contaminan fácilmente

con componentes de la fase de vapor.

5. Las moléculas de la superficie pueden exhibir

una movilidad considerable

Consideraciones generales de superficie
Biomateriales
clasificación

• Rieles
– Fuerte, dúctil
– Alta conductividad térmica y eléctrica
– Opaco, reflectante.

• Polímeros/plásticos:
- - Unión covalente→intercambio de electrones
– Suave, dúctil, de baja resistencia, baja densidad
– Aislantes térmicos y eléctricos
– Ópticamente translúcido o transparente.
Biomateriales
clasificación

• Cerámica
Enlace iónico (refractario): compuestos de elementos metálicos y no metálicos
(óxidos, carburos, nitruros, sulfuros)

– Frágil, vidrioso,
– No conductores (aislantes)
Biomateriales
Clasificación
COMPOSICION
Biomateriales
interacciones del medio

Cuando un material sintético se coloca en un

medio biológico, se inicia una serie de
reacciones casi instantáneamente.

Sangre Bio-
material
Suero (7g/dL) Agua

Proteína (≈700) Actividad biológica

Albúmina
Adsorber
IgG desorber

fibrinectina Intercambio
Desnaturalizar
fibrinógeno
Bio-actividad
trombina
Biomateriales
PROTEÍNAS ADSORBIDAS EN BIOMATERIALES

Respuestas biológicas a los biomateriales implantados

Coagulación de Cuerpo extraño

sangre reacción

Adsorción de proteínas de adhesión a la

superficie de los biomateriales
Adsorción de proteínas a materiales.

Se puede realizar con:

• proteína única
• soluciones multiproteicas
• plasma sanguíneo

Estudia aspectos fundamentales de la adsorción

de proteínas:
• tasas de adsorción
• cambios conformacionales
• respuestas biológicas
• Adhesión celular
Los efectos de la preadsorción con proteínas de adhesión purificadas

POLIESTIRENO

Albúmina fibronectina
Los efectos de la preadsorción con proteínas de adhesión purificadas

Adhesión celular a copolímeros HEMA-EMA

que varía de:

• hidrofílico (rico en HEMA)

• hidrófobo (rico en EMA)

Estos datos son un ejemplo de adhesión celular directa o

no específica en la que las células se adhieren
directamente a las superficies, en lugar de a las
proteínas adsorbidas.

No imita muy bien lo que ocurre con los

biomateriales implantados

Metacrilato de 2-hidroxietilo (HEMA), Metacrilato de etilo (EMA), Fibronectina (CIG), Inmunoglobulina G (IgG)
 Estudios de agotamiento

Una forma biológicamente más relevante de comprender el papel de una proteína de adhesión en las
reacciones a los implantes es estudiar el efecto desu agotamiento selectivode la mezcla compleja

El agotamiento selectivo significa que solo una de las

proteínas se elimina de la mezcla a la vez, lo que hace
que:

• Cromatografía de inmunoadsorción

• Uso de plasma de individuos mutantes que carecen de la

proteína de adhesión de interés

• Degradación enzimática selectiva

Estudios de agotamiento
Mezclas complejas de proteínas.

Una forma biológicamente más relevante de comprender el papel de una proteína de adhesión en las reacciones a
implantes es estudiar el efecto desu agotamiento selectivode la mezcla compleja
Estudios de agotamiento Inhibición de la actividad del receptor con anticuerpos

Ejemplo de plaquetas
Inhibición de la actividad del receptor con anticuerpos

X
Inhibición de la actividad del receptor con anticuerpo
Ejemplo de plaquetas

Anticuerpos contra la glicoproteína

Receptor IIb/IIIa

La integrina principal en la superficie de

plaquetas

Efecto del anticuerpo anti-IIb/IIIa sobre

adhesión de plaquetas a Biomer
preadsorbido con plasma. Adhesión de
plaquetas incubadas en anticuerpo
monoclonal CP-8 [fragmento Fab' monovalente
dirigido contra la glicoproteína (GP)
complejo IIb/IIIa] a Biomer.
 La adsorción transforma la interfaz

Plato de cultivo celular de poliestireno

Poliestireno con hidrófilo

Naturaleza hidrófoba del poliestireno.
adsorbato de proteína
La adsorción transforma la interfaz
 Cinética de adsorción rápida e irreversibilidad

Dodecilsulfato de sodio
detergente (SDS) 1. Fase inicial muy rápida
2. Seguido de una fase más lenta
3. Al acercarse al valor de estado estacionario.

notas

La mayor parte de la proteína adsorbida se une irreversiblemente

La proteína adsorbida solo se elimina cuando se usa un tensioactivo

fuerte (SDS en este ejemplo).

La cinética de adsorción de lisozima a una superficie de sílice.

 Cinética de adsorción rápida e irreversibilidad

COOH
CH3

Interacciones moleculares del fragmento de cadena γ del extremo C de 30 kDa de fibrinógeno con autoensamblado
monocapas con terminal CH3(izquierda) y grupos COOH (derecha)
El modelo monocapa Este comportamiento se denomina

isoterma de Langmuir

ɵes la ocupación fraccional de la superficie (0-1)

Concentración de proteína ([P])
KD es la constante de disociación
 Adsorción competitiva de proteínas a superficies a partir de mezclas de proteínas

Adsorción de mezclas deproteinases selectivo, lo que conduce al enriquecimiento de la fase superficial en ciertas proteínas

Fibrinógeno ("A")

Albúmina (“B”)

Si esta relación es 1, las proteínas tienen la misma afinidad por

la superficie.

si la proporción es mucho menor que uno, se necesita mucha

menos proteína competidora para reducir la adsorción y, por
lo tanto, el competidor tiene una afinidad mucho mayor por la
superficie.

Si la razón es mayor que uno?...

Adsorción competitiva de dos proteínas de una mezcla.

 Adsorción competitiva de proteínas a superficies a partir de mezclas de proteínas

Adsorción de mezclas desustratoses selectivo, lo que conduce al enriquecimiento de la fase superficial en ciertas proteínas

Se ve que la adsorción está en el orden:

albúmina>hemoglobina>fibrinógeno>IgG a 0% EMA

metacrilato de etilo
metacrilato de 2-hidroxietilo (EMA).
(HEMA)

Afinidad diferencial de proteínas a una serie de polímeros: adsorción deFg (línea verde);IgG (línea morada);Alba (línea roja); yHb (línea azul)
desde plasma hasta metacrilato de hidroxietilo – copolímeros de metacrilato de etilo.

Adsorción competitiva de dos proteínas de una mezcla.

El efecto Vroman

Ilustración esquemática del efecto Vroman. Con el transcurso del tiempo, la proteína B es desplazada de la superficie y reemplazada por proteína C a
través de una reacción de intercambio.
El efecto Vroman

El efecto Vroman: (A) adsorción de fibrinógeno a Biomer y vidrio a partir de varias concentraciones de plasma sanguíneo; (B) evolución
temporal de la adsorción de fibrinógeno en vidrio y poli(metacrilato de etilo) (PEMA) a partir de plasma sin diluir.
Las proteínas que se adsorben en superficies sólidas pueden sufrir cambios conformacionales

Baja estabilidad estructural de las proteínas (blandas)

Tendencia a desplegarse para permitir una mayor formación de enlaces con la superficie.
Estudios fisicoquímicos de cambios
conformacionales

“SuaveSe encuentra que las proteínas se adsorben más fácilmente y con más tenacidad que lasdifícil” proteínas.

la proteína es más estable para desplegarse en solución en

baja estabilidad termodinámica
respuesta a condiciones desnaturalizantes
Cambios en las propiedades biológicas de las proteínas adsorbidas
Los principios que determinan la adsorción de proteínas abiomateriales incluyen adsorción monocapa, laactividad
superficial intrínsecay la concentración a granel de la proteína y laefecto de diferentes superficiessobre elselectividad de
adsorción y actividad biológicade la proteína adsorbida.

Más generalmente,todas las proteinasSe sabe que tienen una tendencia inherente adepósito muy rapidly en las superficies como un
adsorbato fuertemente ligado que influye fuertemente en la posteriorinteracciones de muchos tipos diferentes de células con las
superficies.

La importancia de las proteínas adsorbidas en la ciencia de los biomateriales también está bien ilustrada por la cantidad de esfuerzo que se ha
realizado para desarrollar proteínas ".antiincrustante” o materiales repelentes de proteínas en los últimos años