Guia Inmuno

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO - FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
ESCUELA DE MEDICINA HUMANA - CURSO INMUNOLOGIA BASICA

MANUAL DE PRACTICAS INMUNOLOGIA BASICA
PRÁCTICA 01
BIOSEGURIDAD Y SEÑALIZACIÓN EN EL LABORATORIO
INTRODUCCIÓN
El Centro para el Control y Prevención de Enfermedades (CDC) de los Estados Unidos, especifica
cuatro niveles de bioseguridad para el manejo de agentes biológicos, los cuales son conocidos
como Niveles de bioseguridad, la clasificación de cada laboratorio identifica el riesgo
biológico que representan para la salud los agentes que ahí se manejan.
Nivel de Bioseguridad 1: En este nivel se trabaja con agentes que presentan un peligro
mínimo para el personal del laboratorio y para el ambiente. En este nivel no se requiere equipo
especial ni tampoco un diseño específico de las instalaciones. El laboratorio no está
necesariamente aislado de las demás instalaciones del edificio. El trabajo se realiza generalmente
en mesas de trabajo abiertas. Por lo general, los materiales contaminados se desechan en
recipientes de residuos abiertos. Incluye varios tipos de bacterias y virus como la hepatitis canina,
Escherichia coli no patógena, Staphylococcus epidermidis, Lactobacillus bulgaricus,
Streptococcus lactis, Sacharomyces cerevisiae, Penicillium roqueforti, así como algunos
cultivos de células.
Nivel de Bioseguridad 2: En él se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el

ambiente y el personal de laboratorio tiene entrenamiento específico en el manejo de agentes
patógenos como las bacterias Bordetella pertussis, Clostridium botulinum, Clostridium
tetani, Corynebacterium diphtheriae, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus,
Streptococcus, Micobacterias oportunistas, Haemophilus influenzae, Yersinia enterocolitica,
Salmonelas gastroenteríticas, Shigella, Legionella, Borrelia, Neiserias patógenas, Vibrio,
Treponema pallidum y virus como Adenovirus, Parvovirus B19, Rotavirus, Virus de la hepatitis
A, Virus de la gripe, Virus del sarampión, Virus de las paperas, Virus de la rubéola. . El acceso al
laboratorio es restringido cuando se está realizando algún trabajo. Se toman precauciones
extremas con instrumentos punzocortantes contaminados. Ciertos procedimientos en los cuales
pueden salpicar los agentes o aerosoles se llevan a cabo en gabinetes de trabajo biológico.
Nivel de Bioseguridad 3: Este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clínicos de

diagnóstico, laboratorios universitarios de investigación, en el cual se realiza trabajo con agentes
exóticos o que pueden causar un daño serio y potencialmente mortal como resultado de la
inhalación o exposición a los mismos, como las bacterias Bacillus anthracis, Brucella,
Escherichia coli (verotoxigénica), Francisella tularensis, Mycobacterium tuberculosis,
Mycobacterium leprae, Rickettsias, Salmonella ser. Typhi, Shigella dysenteriae ser. 1,
Yersinia pestis; y los virus Virus de la encefalitis de California, Virus de la encefalitis equina
americana, Virus de la estomatitis vesicular, Virus de la hepatitis B, Virus de la hepatitis C, Virus
de la hepatitis D, Virus de la fiebre amarilla, VIH. El laboratorio cuenta con un diseño y
características especiales y todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo
de protección. El personal de laboratorio tiene una formación específica en el manejo de
patógenos y agentes potencialmente letales, y son supervisados por científicos competentes con
experiencia en el trabajo con estos agentes. El acceso al laboratorio está restringido.
Nivel de Bioseguridad 4: Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biológicos
que representan un alto riesgo individual de contagio y que además son un riesgo para la vida. Por
lo regular los científicos que trabajan aquí, utilizan trajes
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especiales que cubren la totalidad de sus cuerpos y que además tienen una leve sobrepresión
para evitar que entren partículas infecciosas al mismo si es que éste llega a desgarrarse.
Además, las instalaciones están en un edificio separado o en un área controlada dentro de un
edificio, que está completamente aislado de las demás áreas del edificio. Las enfermedades
infecciosas que se manejan en el nivel 4 son: Virus de la viruela, Virus de la fiebre
hemorrágica de Crimea (Congo), Virus de Marburg, Virus Ébola.
OBJETIVO GENERAL
 Aprender las normas de bioseguridad aplicadas al laboratorio de inmunología.
Objetivos Específicos.
 Familiarizar al estudiante con las normas de bioseguridad en el laboratorio de
inmunología.
 Hacer conocer la importancia de los riesgos biológicos del manejo de material
infeccioso.
 Aplicar los conocimientos en la resolución de casos de accidente ocupacional con
material infeccioso.
NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA
1. Requisito indispensable: Antes de realizar cada práctica leer cuidadosamente el

protocolo de la práctica para familiarizarse con el trabajo que va a desarrollar. Al
conocer el protocolo disminuye la posibilidad de que ocurran accidentes y además puede
aprovechar el tiempo de manera eficaz.
2. Prohibido: Comer, beber, fumar y distraer al profesor a la hora de la práctica.
Prohibido el acceso a toda persona ajena al área.
3. Protección: Llevar el equipo de protección personal necesario. Esto garantiza que
cualquier accidente que pueda ocurrir sea de menor gravedad, de no acatar las reglas no
se permitirá acceso a la práctica.
4. Material y Equipo: Debe llevar aquellos materiales estrictamente necesarios para la
práctica que va a desarrollar. Ser cuidadoso con todo el material y equipo que utilice
para evitar accidentes y deterioro del mismo en las prácticas.
5. Limpieza: Dentro del área que se va a trabajar se comienza limpiando el área de trabajo
y se repite este procedimiento después de que se haya terminado. El material de desecho
depositarlo en el lugar que corresponde y el material reutilizable lavarlo y desinfectarlo.
6. Higiene: Durante la sesión de trabajo lavarse las manos con agua y jabón antes de
hacer cualquier procedimiento y al finalizar repita el mismo procedimiento para
mantener buenas condiciones higiénicas.
7. Desechos: Si utiliza guantes, frascos de medicamentos vacíos, jeringas, cubre bocas,
portaobjetos, cubreobjetos, etc., no reciclar y desecharlos.
8. Indisciplina: Se sancionará con la expulsión parcial o total del alumno, según el caso
lo requiera.
9. Responsabilidades: En caso de accidente o lesión, avisar inmediatamente al
profesor o responsable de la práctica para que pueda auxiliar con rapidez y eficacia al
alumno.
RECOMENDACIONES:
1. Todo material biológico humano se manipula como si fuera potencialmente

infeccioso.
2. Protección personal: bata y guantes. Las heridas se traen cubiertas con apósitos
impermeables. La ropa de calle es un elemento adicional de
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protección, se desaconseja el pantalón corto o el calzado abierto.

3. El cabello largo debe estar atado atrás o arreglado de manera que no entre en contacto
con las manos, con las muestras, con los contenedores ni con el equipo.
4. Para trabajar, se colocan las muestras, reactivos etc. en la parte delantera de la zona
de trabajo, así se evita golpearlos con los brazos en un descuido.
5. Antes de utilizar un reactivo, se observa si tiene símbolos y avisos sobre su toxicidad
y riesgo de manejo (generalmente en recuadros de color naranja).
6. En el laboratorio no se debe comer, beber, aplicarse cosméticos u oler reactivos o
muestras directamente.
7. No arrojar a la papelera o desagüe material usado sin consultar al profesor. Los
residuos y el material punzante (puntas de pipeta, agujas, hojas de bisturí,
cubreobjetos y similares) se desechan en los contenedores repartidos por las mesas.
8. La ropa protectora (bata) no debe ser usada en las áreas que no son de laboratorio
(pasillos, biblioteca, etc.).
9. Las manos deben ser lavadas después que se han quitado los guantes y antes de dejar
el laboratorio, así como en cualquier momento después de manipular material
conocido o sospechoso de estar contaminado.
10. Las superficies de trabajo deben estar limpias y descontaminadas con un
desinfectante adecuado (etanol 70%) al final del trabajo y después de cualquier
salpicadura de material potencialmente infeccioso.
11. Todo material contaminado, sólido o líquido, debe ser descontaminado antes de
descartarlo o de reusarlo.
ACCIDENTES:
1) Las salpicaduras o derrames en la piel intacta se deben lavar inmediatamente con

jabón y agua abundantes.
2) Las salpicaduras a mucosas (ej. a la boca), deben lavarse con agua corriente durante
15 minutos. Las salpicaduras a los ojos se lavarán de inmediato con frasco lavaojos o
con agua corriente manteniendo los ojos muy abiertos con los dedos.
3) Las inoculaciones percutáneas (ej. arañazo o corte con instrumental usado) deben
lavarse con agua y jabón, dejar, en su caso, fluir la sangre libremente
3 minutos, desinfectar con povidona yodada y cubrir con un apósito impermeable. En
todos los casos se comunicará el incidente al profesor.
MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICO INFECCIOSOS (RPBI)
Los residuos peligrosos biológico infecciosos (RPBI), son los que contienen bacterias, hongos,
virus, parásitos, microorganismos capaces de causar infecciones, efectos nocivos para la salud
y el medio ambiente.
Los RPBI se clasifican en:

1. Residuos de sangre y sus derivados: plasma, suero, etc.
2. Cultivos y cepas almacenadas de agentes infecciosos: vacunas, placas de cultivo,
etc.
3. Residuos patológicos: residuos de tejidos, órganos, partes y fluidos corporales, etc.
4. Residuos no anatómicos derivados de la atención a pacientes y de los laboratorios:
torundas, guantes, cubrebocas, tubos, etc.
5. Residuos de objetos punzocortantes usados o sin usar: navajas, jeringas, pipetas Pasteur,
porta y cubreobjetos, etc.
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Color y tipo de envase requerido para cada uno de los tipos de RPBI:
Tipo de residuos Estado físico Envasado Color

Sangre Sólidos Bolsas de plástico Rojo
Cultivos y cepas de Líquidos Recipientes Rojo
agentes infecciosos. herméticos
Residuos no anatómicos
Patológicos Sólidos Bolsas de plástico Amarillo
Patológicos Líquidos Recipientes Amarillo
herméticos
Objetos Sólidos Recipientes rígidos Rojo
punzocortantes
SEÑALIZACIÓN EN EL LABORATORIO
Se entiende por señalización de seguridad y de salud a la que referida a un objeto, actividad o

situación determinadas, proporcione una indicación o una obligación relativa a la seguridad o la
salud en el trabajo mediante señal en forma de panel, un color, una señal luminosa o acústica, una
comunicación verbal o una señal gestual, según proceda. Pictograma es la imagen que describe
una situación u obliga a un comportamiento determinado utilizado sobre una señal en forma de
panel o sobre una superficie luminosa. En principio, los lugares de trabajo deben ser señalizados
con los pictogramas que se ajusten a las características de las tareas que se lleve a cabo en el
laboratorio/ taller.
Requisitos de utilización
 La altura y posición de las señales deberá tener en cuenta su relación con el ángulo
visual.
 El lugar del emplazamiento de la señal debe estar iluminado, ser accesible y
fácilmente visible.
 Las señales deben retirarse cuando deje de existir la situación que las justifica.
CLASIFICACIÓN DE PICTOGRAMAS:
1. Señales de advertencia
 Forma triangular.
 Pictograma negro sobre fondo amarillo, bordes negros.
2. Señales de prohibición.
 Forma redonda
 Pictograma negro sobre fondo blanco, bordes y banda rojos
3. Señales de obligación.
 Forma redonda
 Pictograma blanco sobre fondo azul
4. Señales de relativas a los equipos de lucha contra incendios.

 Forma rectangular o cuadrada
 Pictograma blanco sobre fondo rojo.
5. Señales de salvamento o socorro.

 Forma rectangular o cuadrada.
 Pictograma blanco con fondo verde.
4
TAREAS DE LABORATORIO:
1. Esquematizar dos pictogramas de cada uno de los 5 tipos expuestos
5
2. De forma sencilla esquematice el laboratorio con sus pictogramas y diga el

significado de cada uno. Sugiera cambios.
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PRÁCTICA 02
TOMA DE MUESTRA PARA LA OBTENCIÓN DE SUERO Y PLASMA
INTRODUCCIÓN
El sistema hematopoyético (Hema = sangre, poyesis = producción, fabricación) es el

sistema encargado de la formación de la sangre. La sangre es un tejido líquido, compuesto por
agua y sustancias orgánicas e inorgánicas (sales minerales) disueltas, que forman el plasma
sanguíneo y tres tipos de elementos formes o células sanguíneas: glóbulos rojos, glóbulos
blancos y plaquetas.
Los glóbulos rojos, los glóbulos blancos y las plaquetas que conforman la sangre se producen
en la parte esponjosa (médula roja) de algunos huesos del esqueleto (esos son: el esternón, los
huesos del cráneo, las costillas, el hueso ilíaco y las terminaciones de los huesos de los
miembros superiores e inferiores.
En la médula ósea roja de los huesos se encuentran las células hematopoyéticas

pluripotenciales de las que derivan todas las células de la sangre. Hasta los 5 años de edad estas
células tienen su origen en, prácticamente, todos los huesos del cuerpo. Después de los 20
años, los glóbulos rojos, blancos y plaquetas son producidos principalmente por la médula de
los huesos planos, como las vértebras, el esternón y las costillas.
Se puede realizar un examen físico o químico de la sangre, para lo cual se la obtiene por
punción venosa o por punción del pulpejo del dedo (sangre capilar) con lanceta estéril. Para
casi todo el trabajo hematológico se utiliza sangre total. Ello exige el uso de anticoagulantes,
los cuales impiden que el calcio actúe en la coagulación, sea precipitándolo como sal insoluble
(oxalatos) o fijándolo en forma no ionizada (citrato, EDTA). La heparina actúa como agente
antitrombínico, o sea neutraliza a la trombina. Así mismo, casi todas las determinaciones
bioquímicas en el laboratorio utilizan suero, el cual se obtiene tomando la muestra en un tubo
de ensayo y se lo deja coagular, para la separación del suero.
Usualmente en adultos se utilizan las venas del pliegue antecubital del brazo, pero también
pueden ser otras zonas como, por ejemplo: del antebrazo, dorso de la mano, dorso del pie, etc.
La práctica tiene por objetivos:
1. Adiestrar al alumno en la extracción de muestras de sangre del antebrazo para la

obtención de sangre total, suero y/o plasma.
2. Realizar extendidos sanguíneos en láminas portaobjetos.
MATERIAL Y MÉTODOS
1. Equipo necesario para la venopunción: Equipo Vacutainer.
 Tubos de vacío diseñados para llenarse con un volumen predeterminado de sangre
por medio de vacío, esto garantiza una adecuada relación entre sangre y anticoagulante.
Los tapones de goma están codificados por color de acuerdo con el aditivo que
contienen así, por ejemplo, los tubos morados (EDTA) son los más utilizados para
hematología rutinaria y los tubos celestes (citrato) para pruebas de coagulación.
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 Agujas especiales para adaptador.

 Adaptador para tubos de vacío.
 Jeringuillas de 3, 5 y 10 cc.
 Agujas: Están numeradas dependiendo de su calibre. Para colección de sangre para
hemogramas, se recomienda una aguja de diámetro de 0.8mm (21G) para evitar daño a
las células. Las agujas de 0.9-1.1mm de diámetro (20G-19G) se utilizan normalmente
para punción venosa en adultos.
 Torniquete: Generalmente una liga plana de látex.
 Alcohol: Etílico o isopropílico al 70%.
 Algodón
 Gasas y/o vendas adhesivas
 Dispensador de agujas
2. Etiquetado de los tubos
Un adecuado etiquetado de los tubos es esencial para que los resultados de los análisis
concuerden con el paciente correcto. Los elementos clave en el etiquetado para
garantizar la calidad de la muestra pre-analítica son:
 Nombre o iniciales del paciente
 Número de identificación del paciente
 Fecha y hora de la toma de muestra
 Iniciales del flebotomista
3. Punción venosa
La punción venosa permite extraer una mayor cantidad de sangre para las pruebas
necesarias en hematología. Las venas de elección suelen ser las de la cara anterior del
antebrazo (vena cubital, vena cefálica y la vena basílica) porque resulta fácil acceder a
ellas.
Preparación del paciente
 Instruya al paciente sobre la técnica para tomar la muestra. Valore la existencia

de problemas hemorrágicos o de circulación, o alergias.
 Evite puncionar en un área con hematoma, fístulas, quemaduras, escoriaciones
de la piel, cicatrices o del costado en que se ha realizado mastectomía reciente.
 Avisar al paciente que al introducir la aguja sentirá dolor.
 Extienda completamente el brazo con la superficie palmar hacia arriba.
4. Punción capilar
Es utilizada para extraer pequeñas cantidades de sangre en determinaciones de

hemoglobina, hematocrito y frotes periféricos. Hay dos lugares de donde realizar esta
punción: el lóbulo de la oreja, la yema del dedo.
Metodología
 Tome la muestra de las yemas de los dedos o lóbulo de la oreja.
 Desinfecte el sitio de la punción, séquelo y puncione la piel con una
lanceta estéril que no debe penetrar más de 2 mm.
 Deseche la primera gota de sangre. Tome las gotas subsecuentes en un
microtubo y prepare las laminillas con esa muestra.
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5. Algunos anticoagulantes utilizados en el laboratorio

 Oxalatos: Los oxalatos de amonio y potasio se utilizan en mezcla de 3 partes del
primero por 2 del segundo. La sal de amonio aumenta el volumen de los GR y la de
potasio lo disminuye, por tanto, es muy usado en hematología. El oxalato de potasio
sólo se utiliza en bioquímica.
 Citratos: Se utiliza la sal disódica al 3.8% (peso x volumen) en proporción de una
parte de la sal por nueve de sangre.
 Dextrosa-citrato ácida: En las transfusiones de sangre y en pruebas
hematológicas para preservar los antígenos de los GR.
 Sequestrene: Sal dipotásica o disódica del EDTA. Por quelación impide que se
ionice el calcio por lo que ejerce una acción anticoagulante muy intensa.
 Fluoruro: Se combina con el calcio impidiendo su acción. Puede
usarse también como conservador cuando la muestra tenga que ser guardada.
 Desfibrinación: Se lleva a cabo en un matraz utilizando perlas de vidrio, a las
cuales queda adherido la fibrina formada por coagulación. Este proceso es útil para
el estudio de GB, GR y plaquetas. Se obtiene también buena cantidad de suero.
CUESTIONARIO:
1. ¿Cuál es el calibre de la aguja utilizada para el procedimiento de venopunción?
2. ¿Por qué se utiliza una ligadura en el brazo para realizar la extracción sanguínea?
3. Como se debe de introducir el bisel de la aguja y ¿Por qué?
4. Defina que es un anticoagulante
5. ¿Qué diferencia hay entre suero y plasma?
6. ¿Qué hacer en caso de no tener vena visible para la extracción sanguínea?
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7. Componentes de los tubos vacutainer que se muestran y sus usos:
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COLOQUE SUS FOTOS DE LA PRÁCTICA TOMA DE MUESTRA
11
PRÁCTICA 03
EL HEMOGRAMA
INTRODUCCIÓN
Erlich fue el primero en utilizar colorantes simples de anilina, aunque sus preparados ya no
se utilizan en la actualidad. Lanner, en 1 889, encontró que el precipitado obtenido por la
mezcla de eosina y azul de metileno podía disolverse en alcohol metílico para formar un
colorante útil, que combinaba algunas propiedades de los dos colorantes iniciales.
Romanowsky, 1 890, encontró que al mezclar una solución de azul de metileno madura,
con eosina (policromía), y disolviendo el precipitado en alcohol metílico, se obtenía un
colorante de uso más amplio que el de Lanner, que podía teñir los núcleos celulares y los
gránulos de las plaquetas (a los que la mezcla de Lanner no coloreaba).
Colorantes modernos a los de Romanowsky; por ejemplo, los colorantes de Wright,

Leishman, etc., son semejantes, en principio, al método original de Romanowsky, la
diferencia principal estriba en el método de obtención de la policromía del azul de
metileno.
El estudio cito morfológico de extendidos coloreados de la sangre pone de manifiesto el

producto final de un maravilloso y complicado proceso de maduración que tiene lugar en el
sistema hematopoyético, y que se encuentra representado por los eritrocitos, los leucocitos
y las plaquetas.
Cada profesional de la salud debe entrenarse y aprender a observar todos los elementos del
frotis sanguíneo, mientras lleva a cabo el recuento diferencial. Debe formar el hábito de
verificar en cuanto al tamaño, forma y concentración de hemoglobina en eritrocitos,
además si existe un grado importante de anisocitosis o poiquilocitosis, hipocromía,
microcítocis, macrocitocis e hipercromía aparente, etc. En cuanto a plaquetas se debe tener
en cuenta si se encuentran en cantidades normales (de 3 a 8 por 100 glóbulos rojos), si son
normales o si hay formas gigantes o extrañas. Asimismo, en cuanto a leucocitos se debe
considerar si son maduros o atípicos; si su número es normal, aumentado (leucocitosis) o
disminuido (leucopenia).
En los frotis muy gruesos, los leucocitos son pequeños, difíciles de teñir, siendo imposible
su reconocimiento. Aun en los mejores frotis, a causa de la diferencia de tamaño, densidad,
etc., los leucocitos muestran una distribución particular. Los monocitos grandes y los
polimorfonucleares (PMN) predominan en los bordes y al final de la extensión, mientras
que los linfocitos, más pequeños, se distribuyen en forma más uniforme en la parte media.
El hemograma consta de 2 partes: recuento leucocitario y la fórmula leucocitaria. El

recuento leucocitario consiste en determinar el número total de leucocitos x mm3 y, la
fórmula leucocitaria tiene por objetivo determinar los porcentajes de las distintas clases de
leucocitos normales y anormales en la sangre. A partir de los porcentajes puede incluso
calcularse el número real de cada clase de leucocitos por mm3 de sangre (valor absoluto),
conociéndose el total de leucocitos.
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Por ejemplo:
Si se tiene 60% de neutrófilos segmentados y el recuento total de leucocitos es de 20
000, entonces el valor absoluto de neutrófilos segmentados sería: 60/100 x 20 000 = 12
000.
La práctica tiene por objetivos:

1. Hacer recuentos de leucocitos y plaquetas.
2. Colorear extendidos de muestras de sangre.
3. Reconocer células sanguíneas y establecer la fórmula leucocitaria
MATERIAL Y MÉTODOS:
1. PREPARACIÓN DE EXTENDIDOS:
MATERIAL:
 Sangre total (con anticoagulante).
 Láminas portaobjetos.
PROCEDIMIENTO:
 Preparar una lámina cuyo ancho se ha reducido unos 5 mm. y que servirá como
"lámina extensora".
 Colocar a 1 cm. del extremo de una lámina bien limpia y seca, una gota pequeña de
sangre total o directamente de la aguja, jeringa o del dedo; por delante de ella colocar
un extremo de la lámina extensora en ángulo de 30º y retroceder hasta que toque la
gota que se extenderá a lo ancho de la primera lámina, luego deslizar la lámina
extensora siempre en ángulo de 30º, en forma rápida y uniforme hacia el otro extremo.
 Si el ángulo entre las láminas es mayor, el frotis será más grueso y viceversa.
 Dejar secar las láminas a temperatura ambiente y rotular.
2. COLORACIÓN DE EXTENDIDOS SANGUÍNEOS: (Método de Wright)
PROCEDIMIENTO:
 El frotis bien seco y rotulado se coloca sobre la gradilla de coloración.

 Cubrir la lámina con un volumen de colorante y dejar por un minuto (4-5 gotas)
 Diluir el colorante con dos volúmenes de agua tamponada pH. 6.4, mezclar bien,
observándose la formación de una escarcha metálica y dejar por 6 minutos.
 Lavar con agua corriente y dejar secar colocando la lámina verticalmente.
NOTA: Los tiempos indicados pueden variar de acuerdo a la antigüedad del colorante.
3. RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS SANGUÍNEAS:

MATERIAL:
 Láminas con extendidos sanguíneos coloreados.

 Microscopio óptico.
PROCEDIMIENTO:
 Colocar las láminas coloreadas al microscopio, colocar una gota de aceite de cedro y
observar con objetivo de inmersión.
 Reconocer los diversos tipos de células sanguíneas y dibujar.
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4. RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS
MATERIAL:
 Hemocitómetro (Cámara de Neubauer)

 Pipeta de glóbulos blancos (de Thoma)
 Diluyente: Líquido Turk (Ácido acético 2-3% más gotas de violeta de genciana: La
solución hipotónica del ácido acético destruye los GR y la violeta de genciana hace
observar mejor los GB, a los que tiñe ligeramente).
PROCEDIMIENTO:
 Mezclar bien la sangre con el anticoagulante.

 Llenar con sangre la pipeta de GB hasta la marca de 0, 5 y limpiar la punta.
 Introducir la pipeta en el diluyente de glóbulos blancos y llenar la pipeta hasta la marca
de
11. Hacer rotar para que se movilice la perla mezcladora.
 No permitir que ingrese aire ni se escape sangre.
 Tapar ambos extremos de la pipeta y mezclar manualmente por 1 minuto.
 Preparar la cámara de Neubauer con su laminilla cubre-cámara.
 Agitar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas para luego colocar una gota pequeña cerca de
un extremo abierto de la cámara, para que se llene por capilaridad.
 Dejar en reposo por 3 minutos:
 Enfocar la cuadrícula de Glóbulos blancos y luego con el objetivo de 40X contar en los
cuatro cuadrados grandes angulares.
 La enumeración incluye las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas
limitantes superior e izquierda en el cuadrado grande de recuento y no se consideran
las de los limites inferior y derecho.
Nº de Leucocitos = G. blancos contados en 4 cuadrados x mm3

Áreas contadas X altura cámara X dilución de sangre
Nº de Leucocitos = Glóbulos contados

4 x 1/10 x 1/20
Nº de Leucocitos = Glóbulos contados x 50 x mm3
VALORES NORMALES: de 5 000 a 1 0 000 x mm3
5. RECUENTO DE PLAQUETAS: (método indirecto)
PROCEDIMIENTO:
 De la lámina de hemograma contar 20 campos con más o menos 100 GR/campo.

 Hacer recuento de plaquetas en cada campo.
 Sacar promedio de plaquetas por campo, que corresponde al número de
plaquetas por 100 glóbulos rojos.
 Confrontar con la Tabla de Relación entre Hematocrito y Número de glóbulos rojos y
con dichos datos, calcular el número de plaquetas por mm3
EJEMPLO: Se observa 10 plaquetas por 100 glóbulos rojos como promedio:
Si el paciente tiene 35% de Hematocrito, según la tabla te corresponde 3'850 000 de

glóbulos rojos. Por tanto, el número de plaquetas se obtiene:
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Si en 100 G. R-----------------------10 plaquetas

En 3' 850 000 G.R. x mm3--------------------X
X = 3' 850 000 G.R. por mm3 X 10 plaquetas

100 G.R.
X = 385 000 plaquetas x mm3
TABLA: RELACIÓN ENTRE HEMATOCRITO Y NÚMERO DE GLÓBULOS ROJOS

(PARA RECUENTO DE PLAQUETAS)
Hto. (%) Nro. G.R. Hto. (%) Nro. G.R.
28 3'140 000 41 4'510 000

30 3'330 000 42 4'620 000
31 3'410 000 43 41730000
32 3'520 000 44 4'840 000
33 3'630 000 45 4'950 000
34 3'740 000 45,5 5’000,000
35 3'850 000 46 5'060 000
36 31960000 47 51170000
37 4'070 000 48 51280000
38 4'180 000 49 5'390 000
39 4'290 000 50 5'500 000
40 4'400 000
Fórmula Leucocitaria:
Como los granulocitos generalmente están en los márgenes del extendido y los linfocitos en el
centro, se recomienda el método utilizado por Schíling, que consiste en tomar cuatro puntos
marginales distintos recorriendo el campo en zig-zag desde el borde hacia la parte central, y
contar 25 a 50 elementos en cada uno de los cuatro puntos.
Tabla: Fórmula leucocitaria normal
TIPO CELULAR %
Granulocito Neutrófilo abastonado 2a5
Granulocito Neutrófilo segmentado 45 a 65
Granulocito Eosinófilo 1a4
Granulocito Basófilo 0a1
Linfocitos 20 a 45
Monocitos 4a8
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Estas cifras pueden variar por condiciones climáticas, altura, raza, emociones, dolor, edad, etc.
Conociendo la relación numérica y la cantidad total de leucocitos por milímetro cúbico, es fácil
establecer la fórmula absoluta de cada tipo celular de la siguiente manera:
Fórmula absoluta = Recuento global leucocitario x % variedad de célula.

100
CÁMARA DE NEUBAUER
PIPETAS PARA GLÓBULOS ROJOS Y BLANCOS
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TÉRMINOS USADOS:
 Leucopenia: Disminución del número total en el recuento de leucocitos.

 Leucocitosis: Aumento del número total en el recuento de leucocitos.
 Neutropenia: Disminución del número absoluto de neutrófilos. Aplasia medular.
Mieloptisis de la médula ósea. Agentes citotóxicos.
 Trombocitopenia: Disminución del número total en el recuento de plaquetas.
 Linfocitosis: Aumento del número absoluto en el recuento de leucocitos. Infecciones
virales agudas, como la mononucleosis infecciosa, hepatitis, citomegalovirus. Otras
infecciones agudas, como la tos ferina. Infecciones por protozoos, como la toxoplasmosis
y la enfermedad de Chagas.Infecciones bacterianas crónicas como la tuberculosis o la
brucelosis. Cáncer, especialmente del sistema linfático
 Monocitosis: Tuberculosis. Endocarditis bacteriana. Enfermedades virales como
sarampión, rubeola. Colagenosis. Neoplasias.
 Desviación a la izquierda: Significa el aumento de las formas inmaduras (en banda o
cayado, y juveniles) dentro de los neutrófilos. Puede observarse en: infecciones e
intoxicaciones.
 Desviación a la derecha: Corresponde a la hipersegmentación nuclear. La mayoría de
polimorfonucleares presenta más de 5 lobulaciones. Ocurre en: Anemia perniciosa.
Hipersegmentación constitucional hereditaria. Reacciones mieloides de la sepsis.
Afecciones hepáticas. Leucemia mieloide. En la agonía.
 Eosinofilia: Infecciones parasitarias. Reacciones alérgicas. Enfermedades cutáneas.
Neoplasias.
17
CUESTIONARIO
1. Explique el fundamento del colorante de Wright.
2. Cómo haría el recuento de G.B. si no cuenta con la pipeta de Thoma.
3. Ud. cuenta 10 campos de 100 G.R. c/u y cuenta un total de 25 plaquetas. Si se tiene el dato
que el paciente tiene 40 de Hto. ¿Cuál es en Nro. de plaquetas por mm 3? Escriba sus
cálculos
4. Dibuje las células sanguíneas observadas en práctica, señalando su nombre.
18
5. Pegue fotos de células observadas en práctica, señalando su nombre y

aumento.
19
PRÁCTICA NO. 04
VÍAS DE INOCULACIÓN EN ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
INTRODUCCIÓN
La bioética tiene como objetivo conectar la reflexión ética con la investigación científica, con
la finalidad de construir una ciencia con conciencia al servicio integral del hombre. La
experimentación clínica, constituye un valor en sí misma que debe ser buscado lícitamente por
los científicos y que no se contrapone con la instancia ética en cuanto al objetivo común de
ambas que es la búsqueda de la verdad para el hombre y para su salud.
La elección de especies animales se basa en diversas consideraciones. Se debe tomar en cuenta

si la especie en cuestión es susceptible a la enfermedad contra la cual estamos elaborando el
producto. Es importante, además, considerar el costo de los animales, así como el de su
mantenimiento, el tamaño y docilidad de los mismos, etc. Un factor importante en bioterios
(unidades en donde se crían estos animales) y en laboratorios, es el manejo adecuado, tanto
para evitar heridas por mordeduras y arañazos, etc., como para evitar el excesivo sufrimiento
de los mismos.
Los animales de experimentación han proporcionado modelos para la realización de diferentes

investigaciones en diferentes áreas de las ciencias de la vida. Los animales deben tratarse con
seriedad y cuidado y si el sacrificio es parte de la experimentación ésta debe de realizarse bajo
un protocolo de eutanasia apropiado. El manejo de estos animales varía de especie a especie.
Las especies que más se utilizan en el laboratorio son el cobayo, ratón albino, rata albina y el
Hamster, de ellos ofrecen mayor dificultad la rata y el ratón porque al sentirse capturados
muerden. El cobayo y Hamster son sumamente dóciles.
La inoculación de sustancias es una práctica generalizada, y en el área de la inmunología las

inoculaciones representan la práctica más extendida, pero también existen pruebas
diagnósticas, los test alérgicos que demandan cierto conocimiento de las diferentes vías de
inoculación. Asimismo, la toma de muestras sanguíneas es un procedimiento de rutina en la
mayor parte de los laboratorios de inmunología, ya que a través de este procedimiento se
obtienen células, fluidos y moléculas tanto para la investigación como para el diagnóstico.
OBJETIVO
 Aprender el manejo adecuado de los animales más comunes de laboratorio.
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Y VENOPUNCIÓN (SANGRADO)
1. Inoculación y venopunción intravenosa en ratón y rata. Introduzca al ratón en un

tubo de paredes lisas y con un orificio de salida en la tapa donde se extrae la cola. Limpie
la cola con una torunda y agua caliente, para que la vena caudal se dilate e inocule con una
jeringa de tipo tuberculina usando una aguja de 25. Para la venopunción se procede de la
misma manera e incluso se puede cortar un pedazo de la cola.
20
2. Inoculación intraperitoneal en ratón, rata o cobayo. Sujete al animal con la mano,
con la parte ventral hacia arriba, incline la cabeza hacia abajo, con la idea de que las
vísceras se desplacen hacia abajo, limpie la región peritoneal con una torunda y agua
caliente; posteriormente, con una torunda desinfecte la zona, con la ayuda de una jeringa
tipo tuberculina con aguja delgada, se procede a la inoculación de la sustancia a probar. Al
introducir la aguja debe percibir que perfora los dos planos (piel y pared abdominal).
3. Inoculación subcutánea en rata, ratón o cobayo. Con la ayuda de unas pinzas, se

inmoviliza al animal por atrás de las orejas, fije las pinzas del lado opuesto y jale la cola.
Con los dedos pulgar e índice forme un pliegue de la piel e introduzca la guja por este
pliegue.
4. Inoculación intramuscular. Se utiliza como una vía de administración sistémica, en

estudios de liberación lenta (formulaciones oleosas) y en valoración de vacunas.
La inyección debe hacerse en una masa grande, alejada de vasos sanguíneos y
nervios mayores. Se hará entre la cara lateral y la craneal de los músculos del muslo.
Inyecte lentamente, retire la aguja y dé masajes en la zona.
5. Punción cardiaca. Anestesiar al animal, limpiar la zona izquierda del tórax, localizar el
corazón y extraer lentamente la sangre usando una jeringa con aguja del número 20 x 32.
FOTOS QUE MUESTRAN LAS VÍAS DE INCOCULACIÓN
INOCULACIÓN O SANGRADO INTRAVENOSA INOCULACIÓN INTRAPERITONEAL
21
PUNCIÓN CARDIACA
22
TAREA DE LABORATORIO: COLOCAR SUS FOTOS DE LA PRÁCTICA
CUESTIONARIO:
1. Anote los usos de la inoculación.
2. Anote los usos de la venopunción.
23
PRÁCTICA 05
FAGOCITOSIS IN VIVO
INTRODUCCIÓN
La fagocitosis se inicia con la adherencia de células fagocíticas al endotelio vascular. Estas son
células especializadas, que pueden ser macrófagos o PMN. Los mismos serán estimulados para
que produzcan citoquinas (IL-1, TNF, IFN). La quimiotaxis es la etapa de movilización y
reclutamiento de leucocitos, por medio de la interacción celular, a la zona o tejido lesionado. El
fagocito se adhiere levemente a la superficie del endotelio (previamente activado por las
citocinas), a través de uniones moleculares de baja afinidad entre receptores en el leucocito y
selectinas sobre la superficie endotelial (selectina E y selectina P, por ejemplo).
El flujo sanguíneo laminar empuja a los leucocitos así adheridos en dirección de la corriente
sanguínea. El fagocito se despega de las interacciones corriente-arriba y sus ligandos de
membrana se unen a nuevas selectinas corriente-abajo. El resultado es un movimiento neto a lo
largo de la superficie endotelial. Otras moléculas que participan en esta movilización son las
moléculas de adhesión vascular (VCAM-1) presentes en el endotelio, cuyos ligando
correspondiente muestran preferencia por los linfocitos T y eosinófilos.
En un punto específico, determinado por la presencia y activación de quimiocinas, los

fagocitos movilizados establecen interacciones intercelulares de gran afinidad con el endotelio
por medio de integrinas y otros ligando endoteliales. En especial las moléculas endoteliales
LFA-a, CR3 y VLA-4 se adhieren a ligando específicos sobre los fagocitos, entre ellos VCAM-
1 e ICAM-1. La expresión de estos ligando sobre la superficie del fagocito es regulada por
proteínas inflamatorias, como el TNF y la IL-1.
Es en ese punto de movilización lenta cuando los fagocitos, atraídos por gradientes de
concentración de las quimiocinas, atraviesan el epitelio vascular hacia el foco de infección
patógena. Los receptores sobre la membrana de los fagocitos actúan como mecanismos de
adherencia sobre los microorganismos, sea a productos microbianos específicos o sobre
opsoninas (opsonización) del sistema inmune del hospedador.
La unión a receptores de adherencia promueve señales de comunicación intracelular que

resultan en la evaginación de la membrana del fagocito rodeando al receptor y su ligando
patogénico. Al rodear por completo al complejo receptor-molécula, la membrana se une en sus
extremos y libera al interior de la célula un fagosoma. Esto puede ocurrir en más de un punto
de la membrana celular.
Una vez que el fagolisosoma es formado comienza la desintegración del micororganismo,

proceso que se realiza por mecanismos dependientes o independientes de Oxígeno. El primero
se da tras activarse rutas metabólicas que consumen oxígeno, como el sistema de la NADPH
oxidasa, el cual produce la liberación de radicales libres del oxígeno, que se constituyen en el
principal mecanismo bactericida para los microorganismos. En el segundo caso se liberan
enzimas hidrolíticas que destruirán al antígeno.
OBJETIVO
1. Comprender el proceso de fagocitosis in vivo y aplicar los conocimientos en casos
de daño tisular, o invasión de múltiples microorganismos o sustancias.
24
MATERIAL Y MÉTODOS:
1. De laboratorio:
 Tubos de ensayo.
 Mechero y asa bacteriológica, en anillo.
 Centrífuga
 Solución salina fisiológica estéril
 Tubo Nº 3 de Mc. Farland
 Estufa y Baño María
 Agujas hipodérmicas
 Tabla de disección
 Estuche de disección
 Láminas porta-objetos
 Soporte de coloración
 Colorante de Wright y azul de metileno
 Agua destilada
 Microscopio
 Aceite de cedro
2. Biológico:
 Cultivo de Escherichia coli
 Rata blanca adulta
PROCEDIMIENTO:
1. Obtención del inóculo bacteriano
 Sembrar la cepa de E. coli en caldo nutritivo e incubar a 37 ºC por 18 horas

 Centrifugar a 1500r.p.m. durante 15 minutos, eliminar el sobrenadante y agregar
solución salina fisiológica (repetir esta acción tres veces)
 Hacer una suspensión del cultivo equivalente a la turbidez del tubo Nº 03 del
Nefelómetro de McFarland
 Llevar la suspensión a baño maría a 85 ºC durante 60 min.
2. Inoculación: PRIMERA FASE

 Inoculación de 1 mL de suspensión de E. coli (cultivo muerto), mezclado con
saponina (50/50), vía intraperitoneal en ratas blancas adultas.
 Dejar reposar las ratas 48 horas.
3. Inoculación: SEGUNDA FASE

 A la misma rata, inoculación de E. coli (cultivo vivo), vía intraperitoneal.
 Dejar reposar las ratas 4 horas
4. Disección de las ratas

 Luego, diseccionar la rata para la obtención de líquido intraperitoneal con hisopos
estériles.
 Extender los hisopos sobre 4 láminas portaobjetos, secar al mechero.
 Colorear con Wright o azul de metileno y observar al microscopio.
 Dibujar sus resultados y preparación de su informe.
25
TAREA DE LABORATORIO
1. ¿Cuál es la finalidad de inocular primero el germen muerto?
2. ¿Cuál es el papel de la saponina?
3. ¿Por qué se inocula por segunda vez el germen vivo?
4. COLOCAR LAS FOTOS DE SU PROCEDIMIENTO
26
27
5.- DIBUJAR SUS OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS, SEÑALANDO LO QUE

OBSERVA
6.- COLOCAR SUS FOTOS DE OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS
28
PRÁCTICA 06
HIPERSENSIBILIDAD TIPO 1: SHOCK ANAFILACTICO
INTRODUCCIÓN
Laanafilaxia esunsíndrome deaparición bruscay afectaciónplurisistémica cuyaincidenciaglobalno se conoce

con toda precisión. La anafilaxia constituye una reacción inflamatoria de instauración generalmente inmediat
causada por la liberación masiva de mediadores inflamatorios (histamina, prostaglandinas, serotonina, factor
activador de plaquetas, leucotrienos) de leucocitos basófilos y mastocitos,comoconsecuenciadelaunión de
anticuerpos tipo inmunoglobulina E (IgE) frente a determinados antígenos. Tales mediadores son
causantes de manifestaciones clínicas que según la vía de acceso y el grado de difusión intracorporal del
alérgeno (sustancia extraña), pueden adoptar una forma localizada como la rinitis o el asma,o generalizada
como el eritema, diaforesis, palidez o cianosis, vasodilatación sistémica, hipotensión, shock, etc.
La unión Ag.-Ac. (Anticuerpo tipo IgE) es uno de los mecanismos fisiopatológicos más importantes que
se involucran en el desarrollo de la anafilaxia, por lo cual los modelos que desarrollan las reacciones
de hipersensibilidad tipo1 asociadas a esta interacción han cobrado vital importanciaenlaevaluación
preclínica de sustancias con efectos antianafilácticos.
En la producción del choque anafiláctico experimental existen dos periodos marcados. El primero
llamado “Sensibilizante” es producido por la inyección de un antígeno generalmente, albúmina de
huevo, por vía intraperitoneal o subcutánea, seguida de un periodo de latencia que permitirá al anticuerpo
formado fijarse en los tejidos. El segundo periodo o desencadénate es producido dos a tres semanas después
de la sensibilización con una dosis de antígeno mayor e inyectado por vía venosa. El cobayo es el animal más
usado para la demostración de anafilaxis, debido a que permite visualizar con claridad todas las
manifestaciones de esta reacción.
La serie de manifestaciones que serán observadas en el cobayo dependeránprincipalmente de dos factores

pato-genéticos: contracción de la musculatura lisa y aumento de la permeabilidad capilar; y las
manifestaciones externas consistirá en un cuadro caracterizado por: Intranquilidad, disnea, dificultad
para respirar, rascado del hocico, trastornos esfinterianos, etc.
OBJETIVO
1. Demostrar al alumno una de las manifestaciones más dramáticas de la combinación antígeno-

anticuerpo (Reacciones de Hipersensibilidad-I).
MATERIALES
 Ovoalbúmina
 Cobayo
 Mechero y asa bacteriológica, en anillo
 Solución salina fisiológica estéril
 Agujas hipodérmicas N°21
 Jeringasde 5 ml
 Equipo de disección
 Algodón
 Alcohol yodado
29
PROCEDIMIENTO
1. Dosis sensibilizante: Inyectar 1.mL de una solución al 50% de albumina de huevo vía
intraperitoneal. Dejar reposar al cobayo por 21 días.
2. Dosis desencadenante: Después de los 21 días inyectar el doble de la dosis
sensibilizante, vía intracardiaca.
3. Observar los síntomas del choque anafiláctico e interpretar los resultados
4. Tan pronto como el animal deje de respirar, lleve a cabo la necropsia. Observe el corazón y
los pulmones primero, observe otrosórganosbrevemente y describa cualquier otrohallazgo
positivo.
1. Anotar resultados de sus observaciones
SINTOMAS OBSERVACION
Intranquilidad,
Disnea
Dificultad para respirar
Rascado del hocico
Erizado pelos de nuca
OTROS:
NECROPSIA OBSERVACION
Corazón
Pulmones
Hígado
Riñones
Otros órganos
30
2. Esquematice y explique la fase sensibilizante y la fase desencadenante
3. Colocar sus fotos de la fase sensibilizante:
31
4. Colocar sus fotos de la fase desencadenante (síntomas y necropsia)
32
33
PRÁCTICA 07
SISTEMA SANGUÍNEO ABO Y FACTOR RH
INTRODUCCIÓN
En 1818, James Blundell, Fisiólogo Inglés, hizo la primera transfusión de hombre a hombre y
para 1875 ya se habían hecho unas 350 transfusiones en humanos. En 1899 Shattock informó
sobre la aglutinación de eritrocitos de algunas personas con el suero de otras e interpretó este
fenómeno como anormal. Fue Karl Landsteiner, quien descubrió las diferencias de la sangre entre
grupos de personas y con su teoría sobre la especificidad de las reacciones serológicas (1900) dio
inicio a la era inmunológica de la historia de la transfusión sanguínea.
Lanomenclaturaaceptadaen1928porla LigadelasNacionesfueladeJansky,quienpropuso cuatro

grupossanguíneos:(A, B, O, AB). Eldescubrimientodelosgrupossanguíneosrevolucionó laprácticade la
transfusión sanguíneapuestoqueyaconestehallazgo eraposibleseleccionar los donantes mediante pruebas
pretransfusiónales in vitro. El avance en la tecnología permitió el almacenamiento seguro de sangre y
dio lugar a la formación del primer banco de sangre en Estados Unidos en el Cook Country Hospital
de Chicago en 1937. En los últimos años se ha logrado avanzar al grado de permitir la
transfusióndemúltiplesfraccionesdesangre.
Las membranas de las células del organismo humano, incluyendo los eritrocitos, están formadas
por varias capas de moléculas lipídicas, proteicas, y carbohidratos distribuidos en tal forma que permiten una
separación entre elmedio intracelular yelmedio extracelular. Muchasde estassustancias, esdecir,
glicolípidos yglicoproteínas tienencapacidad antigénica yconstituyen los llamados grupos sanguíneos. Se
cree también que algunos grupos sanguíneos son proteínas puras, pero es posible que dichas
sustancias solo sean las portadoras de los determinantes antigénicos y que siempre necesiten de
lípidos o carbohidratos para efectuar como antígenos completos.
Estos antígenos de la membrana están determinados genéticamente. Los genes que controlan la
estructura de un antígeno en particular, ocupan un lugar correspondiente (loci) en un par de
cromosomas homólogos, en esta forma para todos los genes que se encuentran en cromosomas
autosómicos un individuo puede ser homocigoto o heterocigoto. El único grupo sanguíneo que no
es autosómico es el sistema XG cuyos genes están en el cromosoma X.
Estos antígenos pueden formar parte de la membrana del glóbulo rojo como ser el antígeno Rh
que es una lipoproteina o estar adherido a la superficie de los glóbulos rojos, como los antígenos
ABO que químicamente son lipopolisacáridos. Algunos antígenos sanguíneos (Ej. ABO) están
presentes en la mayoría de los tejidos y líquidos corporales y otros como el Rh, K, etc. limitados y
formando parte de las membranas de los glóbulos rojos. Hoy en día se conocen más de 15
sistemas de grupos sanguíneos distintos como muchas variantes dentro de cada sistema, la
mayoría tienen 2 o 3 alelos pero por ejemplo el Rh tiene por lo menos 28 alelos.
Los antígenos A y B son glicoproteínas, producidas por genes alelicos en un locus único,
localizados en la parte proximal del brazo corte del cromosoma 9. Los antígenos correspondientes
se encuentran aparentemente adheridos a la membrana de los glóbulos rojos. La especificidad
antigénica es conferida por el azúcar, terminal; Ej. Azúcar N- aceteilgalactosamina proporciona la
especificidad antigénica A y el azúcar galactosa determina la actividad B. Los antígenos ABO
están presentes en todos los tejidos excepto el sistema nervioso central, de donde se deduce la
importancia de dicho sistema en
34
transfusión de eritrocitos, leucocitos, plaquetas y transplantes de tejidos, también se encuentran

presentes en las secreciones, como polisacáridos solubles. El polisacárido presente en las
secreciones es químicamente idéntico al presente en los glóbulos rojos.
SISTEMAS SANGUÍNEOS ESTABLECIDOS
SISTEMA SANGUÍNEO ABO
35
OBJETIVOS
1. Adiestrar al alumno en la determinación del grupo sanguíneo ABO y Rh
2. Capacitar al alumno en la interpretación clínica de resultados en relación al sistema ABO
y Rh
MATERIAL
 Portaobjetos. Rotulador para vidrio

 Lancetas estériles desechables
 Papel de filtro
 Alcohol de 96°
 Sueros anti-A, anti-B y anti-D
 Algodón
 Sangre obtenida por punción
PROCEDIMIENTO
Determinación del grupo hemático:

1. Masajear enérgicamente la yema de un dedo y limpiar con algodón humedecido en
alcohol. Dejar unos segundos que evapore y pinchar con la lanceta estéril. Sobre el
portaobjetos, depositar tres gotas de aproximadamente
0.5 cm de diámetro, bien separadas.
2. Sobre cada gota de sangre de la lámina porta se pipetean 10 µl del Ac
correspondiente. El orden recomendable es (de izquierda a derecha): anti-A, anti-B,
anti-D.
3. Mezclar bien la sangre y el Ac con una punta limpia para cada gota.
4. Casi instantáneamente podrá ver los resultados de A y B.
5. Para D, espere al menos tres minutos moviendo la lámina porta ligeramente. En caso
de duda, visualice con transiluminador omicroscopio.
1. Explique a qué tipo de reacción serológica corresponde la determinación del grupo
sanguíneo.
36
2. Explique porque una persona del grupo A no puede ser donador para un receptor del grupo B.
3. Explique porque el grupo “O” es considerado donador universal.
37
4. Explique porque el grupo “AB” es considerado como receptor universal.
5. Usando cuadrado de Punnet, establezca la descendencia entre un padre grupo “A” y la madre
grupo “B”
6. Usando cuadrado de Punnet, establezca la descendencia entre un padre del grupo “O” y la
madre del grupo “AB”
7. Con esquemas, explique en qué consiste la eritroblastosis fetal, proceso que puede
presentarse en algunos embarazos como consecuencia del factor Rh.
38
COLOQUE SUS FOTOS DE LA PRÁCTICA
Grupo Genotipo
"A" AA, AO
"B" BB, BO
"AB" AB
"O" OO
39
40

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UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO - FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

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BIOSEGURIDAD Y SEÑALIZACIÓN EN EL LABORATORIO

Nivel de Bioseguridad 2: En él se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el

Nivel de Bioseguridad 3: Este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clínicos de

NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA

1. Requisito indispensable: Antes de realizar cada práctica leer cuidadosamente el

1. Todo material biológico humano se manipula como si fuera potencialmente

protección, se desaconseja el pantalón corto o el calzado abierto.

1) Las salpicaduras o derrames en la piel intacta se deben lavar inmediatamente con

MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICO INFECCIOSOS (RPBI)

Los RPBI se clasifican en:

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4. Señales de relativas a los equipos de lucha contra incendios.

5. Señales de salvamento o socorro.

2. De forma sencilla esquematice el laboratorio con sus pictogramas y diga el

TOMA DE MUESTRA PARA LA OBTENCIÓN DE SUERO Y PLASMA

El sistema hematopoyético (Hema = sangre, poyesis = producción, fabricación) es el

En la médula ósea roja de los huesos se encuentran las células hematopoyéticas

La práctica tiene por objetivos:

1. Adiestrar al alumno en la extracción de muestras de sangre del antebrazo para la

 Agujas especiales para adaptador.

2. Etiquetado de los tubos

Preparación del paciente

 Instruya al paciente sobre la técnica para tomar la muestra. Valore la existencia

Es utilizada para extraer pequeñas cantidades de sangre en determinaciones de

5. Algunos anticoagulantes utilizados en el laboratorio

1. ¿Cuál es el calibre de la aguja utilizada para el procedimiento de venopunción?

3. Como se debe de introducir el bisel de la aguja y ¿Por qué?

4. Defina que es un anticoagulante

5. ¿Qué diferencia hay entre suero y plasma?

6. ¿Qué hacer en caso de no tener vena visible para la extracción sanguínea?

7. Componentes de los tubos vacutainer que se muestran y sus usos:

COLOQUE SUS FOTOS DE LA PRÁCTICA TOMA DE MUESTRA

Colorantes modernos a los de Romanowsky; por ejemplo, los colorantes de Wright,

El estudio cito morfológico de extendidos coloreados de la sangre pone de manifiesto el

El hemograma consta de 2 partes: recuento leucocitario y la fórmula leucocitaria. El

La práctica tiene por objetivos:

2. COLORACIÓN DE EXTENDIDOS SANGUÍNEOS: (Método de Wright)

 El frotis bien seco y rotulado se coloca sobre la gradilla de coloración.

3. RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS SANGUÍNEAS:

 Láminas con extendidos sanguíneos coloreados.

4. RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS

 Hemocitómetro (Cámara de Neubauer)

 Mezclar bien la sangre con el anticoagulante.

Nº de Leucocitos = G. blancos contados en 4 cuadrados x mm3

Nº de Leucocitos = Glóbulos contados

VALORES NORMALES: de 5 000 a 1 0 000 x mm3

5. RECUENTO DE PLAQUETAS: (método indirecto)

 De la lámina de hemograma contar 20 campos con más o menos 100 GR/campo.

EJEMPLO: Se observa 10 plaquetas por 100 glóbulos rojos como promedio:

Si el paciente tiene 35% de Hematocrito, según la tabla te corresponde 3'850 000 de

Si en 100 G. R-----------------------10 plaquetas

X = 3' 850 000 G.R. por mm3 X 10 plaquetas

X = 385 000 plaquetas x mm3

TABLA: RELACIÓN ENTRE HEMATOCRITO Y NÚMERO DE GLÓBULOS ROJOS

Hto. (%) Nro. G.R. Hto. (%) Nro. G.R.