La mucosa recibe el nombre de encía o gíngiva y está formada (de fuera hacia

dentro) por un epitelio plano o escamoso estratificado sin queratina, por debajo
hay tejido conjuntivo laxo y denso, muchos capilares sanguíneos, tejido linfoide
disperso o agrupado, glándulas salivales grandes y pequeñas, predominando
células como los fibroblastos, fibrocitos, histiocitos, macrófagos, células
plasmáticas y linfocitos.
Pónga una gota de agua en el centro de un portaobjetos., tome una muestra del
interior de la boca, frotando con suavidad la mucosa de la cara interna de tu
mejilla con el extremo de un palillo de madera, mezcle el material obtenido con
la gota de agua del porta y extiéndala sobre  un portaobjetos.  Fije la muestra
calor, para ello, pasa el portaobjetos sobre la  llama del mechero suavemente
varias veces hasta que el agua se evapore. El porta se sujeta  pinzas y nunca debe
quemar si lo ponemos en el dorso de la
mano.      Coloque el porta en el soporte de tinción colocado encima de la
bandeja plástica. Deposite unas gotas de azul de metileno sobre la preparación y
deja que actúe el colorante  durante 5 minutos. Sirviéndose del gotero, lave con
agua la preparación hasta  que no destiña.  Coloque el portaobjetos y observa la
preparación al microscopio.

Identifique los componentes celulares  que se pueden observar, escribiendo la

amplificación con los que se ha realizado la  observación.

Video células epiteliales de la mucosa oral

Busque las características y funciones de las células de los tejidos epiteliales

animales.

Células de epidermis de cebolla

Las cebollas ( Allium cepa )  parecen materiales muertos cuando usted las
compra en el mercado.  En realidad son bulbos formados por células vivas de las
cuales pueden crecer raíces y hojas cuando las cebollas se plantan  o se
almacenan en sitio húmedo.
Corte un bulbo de cebolla en cuatro partes.  Se observa que cada parte se separa
por si sola en capas llamadas catáfilos.  Tome uno de estos catáfilos con la
superficie cóncava hacia usted y rómpala, entonces vera que se desprende con
facilidad una capa muy delgada y transparente que es la epidermis.

Tome un fragmento de epidermis y colóquelo en un portaobjetos con una gota

de agua de modo que la superficie que estaba en contacto con el catáfilo quede
hacia arriba.  Coloque sobre él un cubreobjetos.  Dibuje bajo el campo de
observación en Alto poder.
Ahora  saque la preparación del microscopio y coloque una gota de lugol en el
borde del cubreobjeto para que la solución penetre por difusión.  Extraiga el
líquido sobrenadante con papel toalla.  Dibuje bajo el campo de observación en
alto poder tratando de identificar las estructuras subcelulares observadas

Video: Pared celular y nucleo

Observación de Levaduras

Tome un poco de levadura y colóquelo sobre el portaobjetos, agréguele una gota

de agua y cúbralo con el cubreobjetos.  Observe primero con el objetivo de bajo 
poder y luego con el de alto poder.  ¿Qué aspecto tiene las células de levadura y
qué estructuras logra visualizar en ellas?
Tome la preparación anterior y agregue una gota de Lugol sin levantar el
cubreobjetos, deje que  difunda el colorante y luego observe usando diferentes
objetivos.  Dibuje bajo el aumento de 40X y señale las estructuras observadas.

Video:  Saccharomyces cerevisiae

¿Cuáles estructuras puede observar mejor con o sin lugol?

Observación de Células Sanguíneas

Como todo tejido, la sangre se compone de células y componentes extracelulares

(su matriz extracelular). Estas dos fracciones tisulares vienen representadas
por:

Los elementos formes —también llamados elementos figurados—: son

elementos semisólidos y particulados representados por células y componentes
derivados de células, y por el plasma sanguíneo: un fluido traslúcido y
amarillento que representa la matriz extracelular líquida en la que están
suspendidos los elementos formes.

Los elementos formes constituyen alrededor del 45% de la sangre. Tal magnitud
porcentual se conoce con el nombre de hematocrito (fracción "celular"),
adscribible casi en totalidad a la masa eritrocitaria. El otro 55% está
representado por el plasma sanguíneo (fracción acelular).

 
Los elementos formes de la sangre son variados en tamaño, estructura y
función, y se agrupan en:

1.     Las células sanguíneas, que son los glóbulos blancos o leucocitos, células
que "están de paso" por la sangre para cumplir su función en otros tejidos;
2.      Los derivados celulares, que no son células estrictamente sino fragmentos
celulares; están representados por los eritrocitos y las plaquetas; son los únicos
componentes sanguíneos que cumplen sus funciones estrictamente dentro del
espacio vascular.

Procedimiento

Con la lanceta estéril realice una punción en un pulgar, depositando una gota de
sangre en la parte central de un portaobjetos.  Coloque un portaobjetos como
indica el dibujo y deslícelo sobre toda la superficie del porta de manera que se
pueda obtener una fina película de sangre. Coloque el frotis de sangre sobre la
bandeja y añada unas gotas de alcohol absoluto, esperar hasta que que el alcohol
se evapore para fijar la preparación.

Cubra con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar
la desecación del colorante agregando más liquido.   Lave la preparación y
añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1 minuto. Volver a lavar hasta que
no queden restos de colorante. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy
lento de la llama del mechero.

Video: La Sangre

1. Identifique en los dibujos los distintos tipos de células sanguíneas.

2. ¿De qué color aparece teñido el núcleo de los leucocitos?

3. ¿Qué forma tienen los glóbulos rojos? ¿Tienen núcleo?

Protozoarios y algas:

Las algas y los protozoarios son organismos unicelulares de mayor tamaño que
las bacterias.  Las primeras son consideradas como vegetales y los segundos
como animales.
Cuando las algas alcanzan determinado tamaño se reproducen por división
celular; las dos células hijas pueden separarse o permanecer en cadenas
formando filamentos  o masas den forma de colonias.
Coloque una gota de cultivo de microorganismos sobre el portaobjetos, coloque
una laminillas y obsérvela al microscopio.

¿Qué diferencias encuentran entre las algas y el protozoario que esta

observando? ( pida a su porfesor que le ayude en la identificación )

Algunos organismoa a observar en las preparaciones

  Epithemia ( una Diatomea )

 Cymatopleura ( una Diatomea )

Observación de células vegetales (Membrana de una cebolla).

b) Observación de Cloroplastos ( Elodea)

Con10x se observan solo los cloroplastos

Con40x se observan citoplasmas, cloroplastos y paredes celulares. Los

cloroplastos se mueven debido a la fotosíntesis.

c) Observación de Células Estomáticas ( hoja de cucaracha)

con 10X se observaron células epidérmicas y estomáticas

Con 40x se observan los componentes de una estoma las cuales son las células
oclusivas y las acompañantes, y su función es intercambio de gases entre el
ambiente y la planta.

d) Observación de Inclusiones (Cotiledones de una caraota)

Las estructuras observadas son amiloplastos

e) Células Sexuales ( Antena de cayena)

se observan las células sexuales de la planta

se observan los granos de polen, su función es fecundar el ovulo de la planta.

f) Observación de una célula animal ( sustancia blancuzca de la boca)

Se observan células epidérmicas.

CONCLUSION de lo observado

• Las células siempre están en conjunto t se relacionan entre si, nunca son entes
aislados.

• Las células reservan sustancias como el almidón ya que todos los seres vivos
necesitan tener reservas en las cuales recurrir cuando las condiciones
ambientales no son propias.

• Dependiendo del tejido en donde se encuentran las células se puede decir que
tienen diferentes funciones.

• Todas las células vegetales están limitadas externamente por una pared
celular, debajo de la cual se encuentra la membrana celular y el citoplasma
donde se puede observar un núcleo y los cloroplastos.
Las células animales carecen de pared celular cloroplastos y vacuolas, y las
células vegetales no tienen centriolo si no centrosoma.
Publicado por Celen en 16:40

21 DE AGOSTO DE 2009

Aislamiento de cloroplastos
Los cloroplastos, al igual que las mitocondrias, son orgánulos que se originaron como
organismos endosimbióticos en la célula eucariota primitiva (teoría endosimbiótica). Luego,
contienen estructuras genéticas propias, incluyendo el ADN.

Presentan una doble membrana externa y un tercero sistema de membranas en su interior, las
membranas del tilacoide.

Fotografía de Xanthidium armatum de Proyecto Agua en Flickr

En el cloroplasto ocurre un proceso endotérmico: la utilización de la energía de la luz para

fabricar hidratos de carbono que conocemos como fotosíntese, y que con fines didácticos se
divide arbitrariamente en dos grupos de reacciones denominadas reacciones fotodependentes
(fase luminosa), que ocurre en los tilacoides y en las que se absorbe energía luminosa por
parte de la clorofila y otros pigmentos, conservándola en forma de energía química en la
molécula de ATP y poder reductor en forma de NADPH y reacciones fotoindependentes (fase
oscura), en la que a partir de la energía y poder reductor formado previamente se reduce lo
CON El2 a glucosa. El ATP y NADPH producidos durante la fotosíntese también pueden ser
utilizados para la síntesis de otros compuestos orgánicos.

Una célula vexetal típica contiene diferentes tipos de orgánulos y moléculas, luego el estudio de
la función o de las características de un componente específico debe normalmente comenzar
por un proceso de purificación.

El primer paso es normalmente la lisis, o la ruptura traumática, de las células pero siendo lo
suficientemente suaves como para liberar el orgánulo o molécula deseada intacta. Esto pode
hacerse mecánica, quimicamente o usando agentes biológicos.

La lisis celular se hace normalmente en la presencia de un tampón biológico de apropiado

potencial osmótico y pH, a menudo se añaden inhibidores de proteasas y el procedimiento
general se realiza la temperaturas bajas (aprox. 4 ºC) con el propósito de demorar la
degradación de los componentes celulares. El aislamiento de los cloroplastos se lleva a cabo
en condiciones de luz débil para minimizar la fotodestrucción de la clorofila.

Una vez lisadas las células vegetales hace falta separar los componentes celulares o
moleculares que se precise. Existen diversidade de técnicas que permiten la separación:
centrifugación, diálisis, decantación, cromatografía y electroforesis. Normalmente se utiliza una
combinación de varios disteis métodos para retirar el material no deseado.

Método:

Previamente:

1.Material de vidrio que se vaya a utilizar debe de estar frío (mantener en cama de hielo picado)
y los reactivos deben de conservarse en cámara fría (4 ºC).

2.Preparar un baño de agua caliente.

3.Lavar las hojas de espinaca con agua de la llave. Aclarar la conciencia en agua destilada, la
lo menos dos veces. Secar suave y totalmente al aire sobre papel de filtro.

4.Seleccionar varias hojas y retirar partes dañadas se las hubiera.

5.Pesar 10 g del tejido vegetal seleccionado eliminando previamente los nervios centrales.

6.Corta el tejido muerto como sea posible. Colocar en el interior del morteiro frío conteniendo
25 mL de solución de extracción y aplastar con nitrógeno líquido hasta formar una pasta fina.

A partir de ahora realizar todas las operaciones sobre una bandeja con hielo picado.

1.Filtra la solución sobre uno matraz Erlenmeier de 100 mL a través de un embudo con 4 capas
de gasa y presiona a pulpa vexetal para recuperar toda la solución de extracción.

2.Reparte la suspensión verde en dos tubos de centrífuga que contengan exactamente la

misma cantidad de solución1. Colocarlos enfrentados en la centrífuga y centrifuga durante 2
minutos a 1500 rpm para aglomerar las células y fragmentos celulares.

3.Decantar el sobrenadante en nuevos tubos de centrífuga y recentrifugar esta solución a 2600

rpm durante 7 minutos. El aglomerado formado durante esta centrifugación contiene los
cloroplastos. Decanta y rechaza el sobrenadante.

4.Resuspender el aglomerado con los cloroplastos en 5 mL de solución de suspensión fría. Si

fuera necesario utiliza coidadosamente una varilla de vidrio para desorganizar el aglomerado.

5.Cubrir el tubo con una lámina de papel de aluminio y mantener en frío.

6.Recoger 2 mL de la suspensión obtenida en un tubo de ensayo y al baño maría llevarlo a

ebullición (mantener el resto de la solución en oscuridad y frío). Enfriar el tubo fervido
rapidamente dentro de un vaso con agua fría. Los cloroplastos hervidos permanecen inactivos.
Determinación de la concentración de clorofila

7.Pipetear 5 mL de acetona al 80% en un tubo de ensayo y añadir 0.5 mL de la solución de

cloroplastos ser ferver, agitar y dejar reposar 5 mí.

Medir la absorbancia de la solución a 465 y 663 nm.

8.Anotar los resultados en la siguiente tabla.

Longitud de onda
Absorbancia
465 nm
1,201

663 nm
0,997

9.Calcular la concentración de clorofila en la suspensión de cloroplastos de acuerdo con la

fórmula:

clorofila (ug/mL) = 20.2 x Abs465 8.02 x Abs663 =

clorofila (ug/mL) = 20,2 x 1,201 8,02 x 0,997 = 32,256 ug/mL

10.Del tubo no fervido recoger, con una pipeta pasteur, unas gotas de solución y colocarlas en
un puerta de microscopio, cubrir con un portaobjetos y comprobar al microscopio el estado de
la solución.
11.Guardar los tubos obtenidos en oscuridad y frío (4 ºC) para realización de la siguiente
práctica.