INTRODUCCION

La citometría de flujo es un método analítico que permite la medición rápida de ciertas

características físicas y químicas de células o partículas suspendidas en líquido que producen una
señal de forma individual al interferir con una fuente de luz. Una de las características analíticas
más importantes de los citómetros de flujo es su capacidad de medir múltiples parámetros
celulares, como el tamaño, forma y complejidad y, por supuesto, cualquier componente celular o
función que pueda ser marcada con un fluorocromo.
Las aplicaciones más relevantes de la citometría de flujo en la práctica médica se relacionan con
la hematología e inmunología clínicas, midiendo parámetros como número y clasificación de
células sanguíneas. Esta técnica es empleada también en el conteo de subpoblaciones de
linfocitos en pacientes con el virus de la inmunodeficiencia humana, así como la caracterización
de leucemias agudas y síndromes linfoproliferativos crónicos, entre otros padecimientos.
En los últimos 20 años, el análisis de enfermedades pulmonares de origen inmunológico por
citometría de flujo ha jugado un papel importante en el entendimiento y diagnóstico de
enfermedades como sarcoidosis, neumonía eosinofílica o neumonitis por hipersensibilidad. Las
aplicaciones de la citometría de flujo son numerosas, lo cual ha permitido el empleo de estos

instrumentos de manera amplia en los campos, tanto de la investigación biológica como médica a
La citometría de flujo se ha extendido en los campos de la medicina, biología celular y de la
separación celular para posteriores estudios genómicos y funcionale.

El estudio de la expresión de moléculas de adhesión en la membrana citoplasmática constituye otro

ejemplo de la utilidad de esta aplicación de la citometría de flujo en el diagnóstico clínico. Así, la
demostración del déficit selectivo de CDIla, de CD54 y CDIlb, unidos a otros estudios funcionales son ho
yde gran ayuda en el diagnóstico de pacientes afectos de inmunodeficiencias congénitas, hemoglobinuria
paroxística nocturna y de la enfermedad de Chediak-Higashi, respectivamente.

El tipaje dirigido frente al antígeno HLA-B27, la cuantificación de receptores de progesterona/célula en

los tumores de mama, el recuento de células"stem" en muestras de sangre periférica y de médula ósea
obtenidas para posterior transplante, la detección de la incorporación "in vivo" e "in vitro" de la
bromodeoxiuridina y/o de la yododeoxiuridina en células para valorar la síntesis de ADN o la capacidad
de recuperación de ADN dañado por diferentes agentes representan otros ejemplos claros de la utilidad de
la determinación de antígenos mediante citometría de flujo en el diagnóstico clínico.

Cuantificación de ácidos nucleicos

La cuantificación de ácidos nucleicos mediante el empleo de diferentes compuestos químicos
fluorescentes capaces de unirse de forma específica al ADN, al ARN o a ambos representa desde
el punto de vista cronológico, una de las primeras aplicaciones de la citometría de flujo.
Cuantificación de ADN
En la actualidad existe un gran número de fluorocromos capaces de unirse al ADN celular En
líneas generales, la cuantificación de ADN proporcionados tipos de información biológica
distintos: por un lado, nos orienta sobre la existencia o no de anomalías clonales de ADN
aneuploidias de ADN y, por otra parte, nos permite conocer la distribución de una población a 10
largo de las distintas fases del ciclo celular. La gran cantidad de estudios clínicos realizados hasta
la fecha han puesto de manifiesto que además de proporcionar una información de gran valor
sobre la biología de células normales y patológicas, la cuantificación del ADN celular mediante
citometría de flujo posee gran impacto clínico en el área de la patología tumoral al contribuir al
diagnóstico y a la valoración pronóstica de estos pacientes.
(Weber, 2016).
Cuantificación de ARN
La cuantificación de ARN mediante citometría de flujo empleando diferentes fluorocromos
como el naranja de tiazol, la tioflavina T o la pironina Y tiene especial relevancia en el
diagnóstico clínico por su utilización como técnica de rutina para el recuento de reticulocitos,
con el fin de conocer el equilibrio entre producción y destrucción de eritrocitos y en líneas
generales la producción celular de la médula ósea. En relación con las técnicas clásicas, la
citometría de flujo ofrece no sólo la posibilidad de realizar un recuento de reticulocitos de gran
precisión (contaje de10.000 células en pocos segundos) sino que además proporciona una
información sobre el contenido relativo de ARN de cada reticulocito detectado lo que refleja en
gran medida su estadío madurativo. (Leniutt, 2015)
Pese a que esta sea la aplicación más extendida de la cuantificación de ARN en el diagnóstico
clínico hay que recordar que la cuantificación simultánea de ADN y ARN mediante
Citometría de flujo proporciona también una información de gran utilidad para el conocimiento
de la actividad metabólica celular que en ocasiones posee importante repercusión clínica. Así,
estudios recientes han demostrado la utilidad de esta determinación en el estudio in vitro del
efecto sinérgico de diferentes drogas antibalísticas y factores de crecimiento celular.
(Leniutt, 2015).
Otras aplicaciones de la citometría de flujo:

En la actualidad las aplicaciones experimentales de la citometría de flujo son muy diversas.

De ellas hay algunas que presentan una clara utilidad clínica destacando el cariotipo de flujo, la
separación de cromosomas y los estudios de hibridación in situ para secuencias específicas de
ADN y/o ARN. 122 El cariotipo de flujo representa un complemento y a la vez una alternativa a
los métodos clásicos de estudio de los cromosomas en metafase. Para ello los cromosomas son
aislados a partir de preparaciones de metafases y teñidos con un fluorocromo -análisis
unidimensional dos -estudio bidimensional-, empleándose habitualmente el yoduro de propidio
o el bromuro de etidio y la combinación del Hoechst 33258 y la cromomicina-A3,
respectivamente. (Leniutt, 2015.

Finalmente, los cromosomas en suspensión son analizados al pasar de uno en uno por delante de
la fuente de luz del citómetro. En relación con otras técnicas, la citometría de flujo ofrece ciertas
ventajas que hacen de ella una alternativa válida para la detección de anomalías cromosómicas.
En este sentido, proporciona una elevada precisión analítica -en pocos minutos pueden
analizarse más de 100.000 cromosomas-y una alta capacidad de resolución -pemite
distinguir diferencias en el contenido de ADN de un cromosoma superiores a 2 megabases-o Por
ello, además de su potencial empleo en la identificación de anomalías
cromosómicas compensadas de gran valor diagnóstico como la traslocación 9/22 de la
leucemia mieloide crónica, su utilidad es manifiesta en el estudio de los polimorfismos
individuales y de los "micro cromosomas" humanos.(Leniutt, 2015).

La citometría de flujo también permite identificar, caracterizar y separar poblaciones celulares

(Mattanovich & Borth, 2006).

Los equipos que pueden realizar este trabajo se denominan Cell Sorters.En la clínica, esta técnica
tiene una importante función en la purificaciónde células que posteriormente serán
transplantadas a pacientes con ciertas patologías. Tal es el caso de la nueva terapia aprobada por
la FDA para tratar linfoma de linfocitos B, la cual consiste en el transplante de linfocitos T con
receptores de antígeno modificados (CAR-T, por sus siglas en inglés) (Androulla & Lefkothea,
2018; Schuster et al., 2017). Este proceso implica purificar los linfocitos T del paciente y
modificarlos genéticamente para expresar un receptor de superficie específico para un antígeno
de cáncer, que a su vez se encuentra fusionado con un dominio proteico que activa al linfocito T.
Posteriormente, los linfocitos CAR-T se expanden y se reinfunden en el paciente como una
inmunoterapia para

atacar a células cancerosas (Androulla & Lefkothea, 2018).

Conclusiones.

Citometría de Flujo
La aplicación de estudios realizados a través de la técnica de citometría de flujo representan
en la actualidad un apoyó clínico de gran valor, a través de los mismos pueden
desarrollarse estudios de los marcadores de las leucemias linfoides, los cuales han
mejorado enormemente la precisión del diagnóstico, ya que proveen información específica
que toma en cuenta el linaje y el estado de maduración de las células malignas, aumentando el
conocimiento del médico tratante. Dicho de otra forma, el campo de aplicación de este tipo de
instrumentos crece rápidamente día a día ya que son numerosas las áreas de la biología
medicina que se benefician de su uso.
En definitiva, es importante entender que la obtención de suspensiones cromosómicas de elevada
pureza mediante citometría de flujo ha permitido formidables avances en el conocimiento del
genoma humano y en la obtención de sondas moleculares aplicables a diagnóstico citogenético
de diversas patologías

Bibliografia.

Referencias del artículo

BARRERA RAMIREZ, LOURDES MARÍA et al.CITOMETRÍA DE FLUJO: VÍNCULO ENTRE LA
INVESTIGACIÓN BÁSICA Y LA APLICACIÓN CLÍNICA.  Rev. Inst. Nal. Enf. Resp. Mex. [online].
2004, vol.17, n.1, pp.42-55. ISSN 0187-7585.

Leniutt, K. (2015). Aplicaciones de la Citometría de Flujo. Review of the Epidemiology., 33.Lera y Suatt.
(2015). Status of the Epidemiology of Atrial. Med Clin North, 17 -40.