GAMMA - GT LÍQUIDA

MÉTODO DE SZASZ MODIFICADO

Para la determinación “in vitro” de la gamma-GT en suero o plasma
PRINCIPIO
La γ-glutamil transferasa sérica (γ-GT) transfiere el grupo glutamil al cosustrato glicil-glicina y en el proceso se libera 5-amino-2-nitrobenzoato. En condiciones óptimas de reacción la
actividad enzimática es directamente proporcional a la cantidad de 5-amino-2-nitrobenzoato liberado, que se determina espectrofotométricamente.

gamma - GT
L-γ-glutamil-3-carboxi-p-nitroanilida + glicil-glicina → L-γ-glutamil-glicil-glicina + 5-amino-2-nitrobenzoato

UTILIDAD DIAGNÓSTICA PROCEDIMIENTO

En el 90 % de las enfermedades hepáticas se detecta un aumento de la γ-GT. Llevar el reactivo de trabajo y el instrumento a la temperatura de trabajo (25ºC, 30ºC, 37ºC).
Los valores son moderados en cirrosis y mononucleosis infecciosa, mientras que los
aumentos importantes se encuentran en enfermedad hepática obstructiva, colestasis Técnica monorreactiva 25ºC/30ºC/37ºC
intrahepática o cirrosis biliar primaria. R. de trabajo 1,0 mL

Una única prueba de laboratorio no permite establecer un diagnóstico. Los resultados se Muestra 0,1 mL
han de evaluar en el contexto de todos los datos clínicos y de laboratorio obtenidos.
Técnica birreactiva 25ºC/30ºC/37ºC
REACTIVOS Disol. enzimas (A) 1,0 mL
Kit 1 x 50 mL. Ref. 99 35 61. Contiene:
A. 1 x 40 mL Disolución tampón Ref. 99 92 48 Muestra 0,1 mL
B. 1 x 10 mL Sustrato líquido Ref. 99 38 43 Mezclar e incubar aprox. 1 min.

Kit 1 x 125 mL. Ref. 99 10 56. Contiene: Sustrato (B) 0,25 mL

A. 1 x 100 mL Disolución tampón Ref. 99 10 68
B. 1 x 25 mL Sustrato líquido Ref. 99 10 81 Mezclar y poner en marcha el cronómetro.
Transferir a la cubeta de lectura y leer las absorbancias después de 1, 2, 3 min.
Kit 1 x 250 mL. Ref. 99 10 54. Contiene:
A. 2 x 100 mL Disolución tampón Ref. 99 10 68 Determinar la ΔAbs/min promedio de las lecturas.
B. 1 x 50 mL Sustrato líquido Ref. 99 10 82
Lectura
PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO Longitud de onda: 405 nm
Los reactivos A y B, están listos para su uso. Blanco: Agua
En caso de que se quiera trabajar como monorreactivo: mezclar las cantidades deseadas Cubeta: termostatizada, 1 cm de paso de luz
manteniendo la proporción de 4 partes de A (Disol. tampón) + 1 parte de B (Sustrato
líquido). CÁLCULOS
Se utiliza la fórmula indicada para obtener el factor para calcular las U/L:
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO Vt x 106
Tampón Tris pH 8,4 90 mM ΔAbs/min x = U/L
Є x l x Vs
L-gamma-glutamil-3-carboxi-p-nitroanilida 6 mM
Donde:
Glicil-glicina 100 mM
Vt: Volumen total de la mezcla de reacción;
Estabilizantes y conservantes
Vs: Volumen de muestra
l: Paso de luz de la cubeta
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Є: Coeficiente de extinción molar de 5-amino-2-nitrobenzoato a 405 nm: 9500
Los componentes del kit almacenados a 2-8ºC, son estables hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta.
Para el cálculo de las U/L determinar la ΔAbs/min promedio y multiplicar por el factor:
Una vez mezclados los componentes A y B, la disolución monorreactiva es estable 5
semanas a 2-8º C y 3 semana a temperatura ambiente (≤ 25ºC), siempre protegido de la
Metódica monorreactivo U/L = (ΔAbs405 nm / min.) x 1158
luz.
Metódica birreactivo U/L = (ΔAbs405 nm / min.) x 1420
Indicaciones de alteración de los reactivos:
VALORES DE REFERENCIA
Presencia de turbidez o de partículas. Blanco del reactivo de trabajo ≥ 1,75
Temperatura Hombres Mujeres
25 ºC 6-28 U/L 4-18 U/L
MATERIAL NECESARIO NO SUMISTRADO 30 ºC 8-38 U/L 5-25 U/L
Material común de laboratorio. 37 ºC 11-50 U/L 7-32 U/L
Espectrofotómetro, analizador automático o fotómetro termostatizado a 37ºC. Cubeta de
1cm de paso de luz. Los valores indicados son a título orientativo. Se recomienda que cada laboratorio
PRECAUCIONES establezca sus propios valores de referencia.
Los reactivos contienen azida sódica al 0,09%, manipular con precaución.
Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. El calibrador PRESTACIONES. CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
debe considerarse como una muestra humana y por lo tanto potencialmente infeccioso. Las características de funcionamiento del producto dependen tanto del reactivo como del
Utilizar protección adecuada. Se aconseja consultar la ficha de datos de seguridad antes de sistema de lectura manual o automático empleados.
la manipulación del reactivo. La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa Los siguientes datos se han obtenido de forma manual.
local vigente.
Sensibilidad, como límite de detección: 4 U/L
MUESTRA Linealidad: Hasta 600 U/L. Con actividades superiores se aconseja diluir la muestra 1/10
Suero o plasma. Utilizar muestras exentas de hemólisis. con salina (NaCl 0,9%) y repetir el ensayo. Multiplicar por 10.
La actividad gamma-GT-ásica es estable durante 10 días a 2-8ºC. Exactitud, como % de recuperación: 98,4%
Precisión en la serie, como Coeficiente de Variación: 1,77%
Precisión entre series, como Coeficiente de Variación: 2,29%
CONTROL DE CALIDAD
Veracidad: Los resultados obtenidos con el reactivo no presentan diferencias significativas
Es recomendable la inclusión de sueros control, Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) y
al compararlo con el reactivo considerado de referencia.
Seriscann Anormal (Ref. 99 46 85) en cada proceso de medida para verificar los resultados.
Se aconseja que cada laboratorio establezca su propio programa de control de calidad y los
Los datos detallados del estudio de las prestaciones del reactivo están disponibles bajo
procedimientos de corrección de las desviaciones detectadas.
demanda.

AUTOANALIZADORES INTERFERENCIAS
Adaptaciones a distintos analizadores automáticos están disponibles bajo demanda. Sueros hemolizados interfieren en el ensayo. No pueden utilizarse anticoagulantes tipo
EDTA, oxalato o fluoruro, porque inhiben la actividad enzimática.

BIBLIOGRAFÍA
Szasz, G., (1969) Clin. Chem., 15, 124 - 136.
Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 6th Edition, W.B. Saunders, Philadelphia (2018).

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: 10.2019 PRO4-9_GGTL_7
GAMMA - GT LIQUID
SZASZ MODIFIED METHOD
For “in vitro” determination of gamma-GT in serum or plasma

PRINCIPLE
Serum γ-glutamyl transferase (γ-GT) transfer the glutamiy group to cosubstrate glycyl-glycyne producing 5-amino-2-nitrobenzoate. In optimum conditions enzymatc activity is directly
related to amino-2-nitrobenzoate produced that is measured by spectrophotometry.

gamma - GT
L-γ-glutamyl-3-carboxy-p-nitroanilide + glycyl-glycine → L-γ-glutamyl-glycyl-glycine + 5-amino-2-nitrobenzoate

DIAGNOSTIC USE PROCEDURE

In 90% of liver diseases there is a rise of γ-GT levels. The values are moderate in cirrhosis Bring the working reagent and the analyzer to the working temperature (25ºC, 30ºC, 37ºC).
and infectious mononucleosis, while significant increases were found in obstructive liver
disease, intrahepatic cholestasis or primary biliary cirrhosis.
Monoreagent technique 25ºC/30ºC/37ºC
Single test result could not be used to make a clinical diagnosis. It should integrate clinical Working reagent 1.0 mL
and laboratory data.
Sample 0.1 mL
REAGENTS Bireagent technique 25ºC/30ºC/37ºC
Kit 1 x 50 mL. Ref. 99 35 61. Contents:
A. 1 x 40 mL Buffer solution Ref. 99 92 48 Buffer sol.(A) 1.0 mL
B. 1 x 10 mL Liquid substrate Ref. 99 38 43
Sample 0.1 mL
Kit 1 x 125 mL. Ref. 99 10 56. Contents: Mix, incubate for approx. 1 minute
A. 1 x 100 mL Buffer solution Ref. 99 10 68
B. 1 x 25 mL Liquid substrate Ref. 99 10 81 Substrate (B) 0.25 mL

Kit 1 x 250 mL. Ref. 99 10 54. Contents: Mix, read the absorbance after 1 min. and start the stopwatch. Read again the absorbance
A. 2 x 100 mL Buffer solution. Ref. 99 10 68 after 1, 2 and 3 min.
B. 1 x 50 mL Liquid substrate Ref. 99 10 82
Determine the mean of Abs/min of different lectures.
WORKING REAGENT PREPARATION
Reagents A and B are ready-to-use. If a monoreagent procedure is preferred, then Reading
the reagents must be mixed in the ratio: 4 parts of A (Buffer solution) + 1 part of B (Liquid Wavelength: 405 nm
substrate). Blank: Water
Cuvette: Thermostatized 1 cm light path
WORKING REAGENT COMPOSITION
The concentrations in the reagent solution are: CALCULATIONS
Tris buffer pH 8.4 90 mM The formula indicated is used to obtain the factor to calculate the U/L
L-gamma-glutamyl-3-carboxy-p-nitroanilide 6 mM Vt x 106
ΔAbs/min x = U/L
Glycyl-glycine 100 mM Є x l x Vs
Stabilizers and preservatives Vt: Total reaction volume
Vs: Sample volume
STORAGE AND STABILITY
l: Cuvette light path
The components of the kit, stored at 2-8ºC, will remain stable until the expiration date
Є: Extinction coefficient of 5-amino-2-nitrobenzoate at 405 nm: 9500
stated on the label.
The monoreagent is stable 5 weeks at 2-8ºC and 3 weeks at room temperature (≤ 25ºC),
For the calculation of the U/L determine the average Abs/min and multiply by the factor:
when protected from the sunlight.
Monoreagent method U/L = (ΔAbs405 nm / min.) x 1158
Signs of reagent deterioration:
Bireagent method U/L = (ΔAbs405 nm / min.) x 1420
Presence of particles or turbidity in the reagent. Working reagent blank ≥ 1.75.
ADDITIONAL EQUIPMENT REFERENCE VALUES
General laboratory equipment. Assay temp. Men Women
Spectrophotometer or photometer thermostatable at 37ºC. Cuvette: 1 cm light-path. 25 ºC 6-28 U/L 4-18 U/L
30 ºC 8-38 U/L 5-25 U/L
37 ºC 11-50 U/L 7-32 U/L
CAUTION
The reagents contain sodium azide at 0.09%. Handle with care. The stated values are for guidance. Each particular laboratory should establish its own
The safety statements are on the label. It is advisable to look at the SDS before using normal range, using its own instrumentation, blood collection methods and test procedures.
the reagent. The calibrator must be considered as a human sample, and, thus, potentially
infectious. Use adequate protection. PERFORMANCE CHARACTERISTICS
The disposal of the residues has to be made according to local regulations. The performance characteristics depend on the method used. It is recommended to
calculate these data for each particular test protocol. These results have been obtained
SAMPLE using a manual method.
Serum or plasma. Samples free from hemolysis should be used. The gamma-GT-asic
activity will remain stable for 10 days if the sample is stored at 2-8ºC. Sensitivity, as detection limit: 4 U/mL
Linearity: Up to 600 U/L. For higher values, it is recommended to dilute the sample 1/10 in
QUALITY CONTROL saline (NaCl 0.9%) and assay once again. Multiply the final result by 10.
Control serum, Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) and Seriscann Anormal (Ref. 99 46 85) Accuracy: 98.4%
should be included in each test series. Each particular laboratory should establish its own Repetitivity, as Coefficient of Variation: 1.77%
control program. Reproducibility, as Coefficient of Variation: 2.29%
Trueness: Results obtained with this reagent did not show systematic differences when
AUTOANALYZERS
compared with reference reagent.
Adaptations to different autoanalyzers are available on request.
Details of the performance studies are available on request.

INTERFERENCES
Hemolyzed samples will give false results. Fluoride, EDTA, citrate and oxalate inhibit the
enzyme activity.

REFERENCES
Szasz, G., (1969) Clin. Chem., 15, 124 - 136.
Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 6th Edition, W.B. Saunders, Philadelphia (2018).

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Revision: 10.2019 PRO4-9_GGTL_7
GAMMA-GT LIQUIDE
MÉTHODE DE SZASZ MODIFIÉE
Pour la détermination in vitro de la gamma-GT dans le sérum ou le plasma

PRINCIPE
La gamma-glutayltransferase sérique transfère le groupe glutamyl au co-substrat glycyl-glycine et le 5-amino-2-nitrobenzoate est libérée dans le processus.
Dans de conditions optimales de réaction l’activité enzymatique est directement proportionnelle à la quantité de 5-amino-2-nitrobenzoate libéré, qui est déterminé par spectrophotométrie.

gamma - GT
L-γ-glutamyl-3-carboxy-p-nitroanilide + glycyl-glycine → L-γ-glutamyl-glycyl-glycine + 5-amino-2-nitrobenzoate

UTILITÉ DE DIAGNOSTIC TECHNIQUE

Une activité accrue de l’enzyme est détecté dan 90% des maladies hépatiques. Les valeurs Incuber le réactif et l’analyseur à la température de travail. (25ºC, 30ºC or 37ºC).
sont modérés dans cirrhose et mononucléose infectieuse. L’augmentation de l’activité est
élevée dans le cas de maladie obstructive du foie, cholestase intrahépatique ou cirrhose
Technique monoréactif 25ºC/30ºC/37ºC
biliaire primaire.
Un test de laboratoire unique ne peut pas établir un diagnostic. Les résultats doivent être Réactif de travail 1,0 mL
évalués dans le contexte de toutes les données cliniques et de laboratoire obtenus. Échantillon 0,1 mL

RÉACTIFS Technique biréactif 25ºC/30ºC/37ºC

Kit 1 x 50 mL. Réf. 99 35 61. Contenu:
Solution tampon (A) 1,0 mL
A. 1 x 40 mL Solution tampon Réf. 99 92 48
B. 1 x 10 mL Substrat liquide Réf. 99 38 43 Échantillon 0,1 mL
Kit 1 x 125 mL. Réf. 99 10 56. Contenu:
Mélanger et incuber pendant environ une minute
A. 1 x 100 mL Solution tampon Réf. 99 10 68
B. 1 x 25 mL Substrat liquide Réf. 99 10 81 Substrat (B) 0,25 mL
Kit 1 x 250 mL. Réf. 99 10 54. Contenu:
A. 2 x 100 mL Solution tampon Réf. 99 10 68 Mélanger puis mettre en marche le chronomètre.
B. 1 x 50 mL Substrat liquide Réf. 99 10 82 Transférer à la cuvette de lecture puis lire les absorbances toutes les minutes pendant
3 minutes.
PRÉPARATION DU RÉACTIF DE TRAVAIL Déterminer le valeur moyenne de ΔAbs/min.
Les réactifs A et B sont prêts à l’emploi. En cas d’utilisation de la technique monoréactif:
mélanger les quantités souhaitées, mais en maintenant la proportion 4 volumes de A Lecture
(solution tampon) + 1 volume de B (substrat liquide). Longueur d’onde: 405 nm
Blanc: eau
COMPOSITION DU RÉACTIF DE TRAVAIL Cuvette: thermostatée de 1 cm de trajet optique
Les concentrations dans la solution réactive sont les suivantes:
Tampon Tris pH 8,4 90 mM CALCULS
L-gamma-glutamyl-3-carboxy-p-nitroanilide 6 mM En utilisant la formule indiquée pour obtenir le facteur de calcul des U/L:
Glycylglycine 100 mM Vt x 106
Stabilisants et conservateurs ΔAbs/min x = U/L
Є x l x Vs
CONSERVATION ET STABILITÉ Vt: Volume total;
Conservés entre 2-8ºC, les composants du kit sont stables jusqu’à la date de péremption Vs: Volume de l’échantillon;
indiquée sur l’étiquette. Une fois les composants A et B mélangés, cette solution l:Trajet optique.
monoréactive est stable pendant 5 semaines entre 2-8ºC et 3 semaines à température Є: Coefficient d’extinction de 5-amino-2-nitrobenzoato a 405 nm: 9500
ambiante (≤ 25ºC), toujours à l’abri de la lumière.
Calculer la valeur ΔAbs/min obtenue à chaque lecture ainsi que la valeur moyenne. Les
Indications d’altération du réactif:
U/l sont calculées à partir de:
Présence de particules ou de turbidité. Blanc du réactif de travail ≥ 1,75
Méthode monoréactif U/L = (ΔAbs405 nm / min.) x 1158
MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI Méthode biréactif U/L = (ΔAbs405 nm / min.) x 1420
Matériel courant de laboratoire.
Spectrophotomètre, analyseur automatique ou photomètre thermostaté à 37 ºC. Récipient VALEURS DE RÉFÉRENCE
de 1 cm de trajet optique. Température Hommes Femmes
25 ºC 6-28 U/L 4-18 U/L
PRÉCAUTIONS 30 ºC 8-38 U/L 5-25 U/L
Les réactifs contiennent de l’azide de sodium à 0,09 %. Manipuler avec précaution. 37 ºC 11-50 U/L 7-32 U/L
Les indications de sécurité figurent sur l’étiquette des produits. Le calibrateur doit être
considéré comme un échantillon humain et donc potentiellement infectieux. Utiliser des Les valeurs données sont indicatives. Il est recommandé que chaque laboratoire établisse
protections adéquates. Il est conseillé de consulter la fiche de données de sécurité avant de ses propres valeurs de référence.
manipuler le réactif. L’élimination des déchets doit être réalisée conformément aux normes
en vigueur. PERFORMANCE. CARACTÉRISTIQUES DE FONCTIONNEMEN
Le fonctionnement du produit dépend tant du réactif que du système de lecture manuel ou
ÉCHANTILLON
automatique utilisé. Les résultats suivants ont été obtenues avec une methode manuelle.
Sérum ou plasma. Utiliser des échantillons exempts d’hémolyse. L’activité gamma-GT-ase
de l’échantillon est stable pendant 10 jours entre 2-8ºC.
Sensibilité comme limite de détection: 4 U/L
Linéarité: L’essai est linéaire jusqu’à 600 U/L. Pour des concentrations plus élevées,
CONTRÔLE DE QUALITÉ
diluer l’échantillon 1/10 avec une solution saline (NaCl 0,9%). Multipliez le résultat par 10.
Nous recommandons l’inclusion de sérums de contrôle Seriscann normale (Réf. 99 41 48)
Exactitude: le pourcentage de récupération est de 98,4%
et Seriscann anormale (Réf. 99 46 85) dans chaque processus de mesure pour vérifier les
Coefficient de variation dans la série: 1,77%
résultats.
Coefficient de variation entre les séries: 2,29%
Nous suggérons que chaque laboratoire d’établir son propre programme et les procédures
Justesse. Les résultats obtenus avec le réactif ne sont pas significativement différents par
de correction des écarts dans les mesures de contrôle qualité.
rapport au réactif de référence considéré.
AUTOANALYSEURS L’étude détaillée de la performance du réactif est disponible sur demande.
Des adaptations aux différents analyseurs automatiques sont disponibles sur demande.
INTERFÉRENCES
Les sérums hémolysés interfèrent avec l’essai. Ne pas utiliser anticoagulants de type
EDTA, oxalate ou fluorure, car ils inhibent l’activité enzymatique.

BIBLIOGRAPHIE
Szasz, G., (1969) Clin. Chem., 15, 124 - 136.
Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 6th Edition, W.B. Saunders, Philadelphia (2018).

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