Instituto Politécnico Nacional

Unidad Profesional Interdisciplinaria de

Laboratorio de Biotecnología Molecular

Profesoras:
Flor Selene Villalobos Escobedo
Aida Margarita Zamora Contreras

Bitácora: Práctica 5 “Extracción de ARN”

Alumno: Cano Pérez Jeimy Melanie

Equipo: 5

Fecha de entrega: 12/10/2022

Objetivo: Extraer ARN de diferentes muestras por métodos físico-químicos.

Diagrama 1. Metodología de extracción de ARN

Tabla de reactivos
Reactivo Función
Cloroformo Favorece en la separación de la fase acuosa y la orgánica y
reduce la interfase entre las mismas.
Etanol La precipitación de ARN con etanol o isopropanol es una
técnica que ayuda a concentrar y desalinizar preparaciones
Isopropanol de ácidos nucleicos en soluciones acuosas.
Nitrógeno liquido Es útil para evitar la actividad de las ribonucleasas.
Trizol Mantiene la integridad del ARN gracias a la inhibición
altamente eficaz de la actividad de RNasa, al tiempo que
destruye las células y disuelve los componentes celulares
durante la homogeneización de muestras.
Medio LB líquido Contiene peptona de caseína y extracto de levadura que
proporcionan al medio los nutrientes necesarios para el
desarrollo óptimo de la mayoría de los microorganismos.
Tabla 1. Función de reactivos

Cuestionario
1. ¿Por qué esta metodología emplea el fenol a pH 6 y no a 8 cómo en casos
anteriores?
Se usa fenol con un pH acido, ya que al estar acidificado provoca que el ADN se
acumule en la interfase entre la fase acuosa y la del fenol, dejando al ARN en la fase
acuosa.
2. Además de lo empleado en este protocolo ¿De qué manera pueden eliminarse el
ADN y las proteínas de la muestra?
Existen kits comerciales basados en cromatografía de intercambio aniónico en fase
sólida, que permiten purificar ARN como la columna de resinas de intercambio
aniónico. La resina consiste en cuentas de sílica con superficie hidrofílica con
tamaño de partícula reducido, hechas con cantidades elevadas de grupos dietil-
amino-etil (DEAE). La purificación se basa en la interacción de estos grupos DEAE
cargados positivamente con los grupos fosfatos (cargados negativamente) del ARN.
Las proteínas y otros contaminantes son retirados con lavados.
3. ¿Qué tipos de ARN existen en la célula y qué funciones cumplen? (Mencionar
al menos 7).
 ARN mensajero: Su función es copiar fragmentos del ADN para sacar dicha
información del núcleo y llevarlo a los ribosomas donde la información
genética pasará a proteínas.
 ARN ribosomal: Su función es leer la secuencia del ARN mensajero y
traducir ese código genético en una serie especificada de aminoácidos, que
crece y forma cadenas largas que se pliegan y forman proteínas.
 ARN de transferencia: Su función es transportar aminoácidos específicos
hasta los ribosomas para conseguir completar ese proceso de traducción.
 ARN mitocondrial: La mitocondria produce la mayor parte de la energía de
la célula y cuentan con su propio material genético, que difiere del material
genético del núcleo.
 ARN nucleolar: Su función es llevar la información sobre la secuencia de
aminoácidos de la proteína desde el ADN hasta el ribosoma.
 ARN de interferencia: Su función es inhibir la acción de determinados
genes.
 ARN catalizador: Su función es operar como biocatalizadores sobre los
propios procesos de síntesis para hacerlos más eficientes.
4. ¿Cómo pueden aislarse los diferentes tipos de ARN?
Al realizar la extracción de ARN de células eucariotas existen dos posibilidades:
extracción de ARN total (ARNm, ARNr, ARNt) y extracción oclusiva de ARNm.
En el primer caso se revisó una metodología para extraer el ARN total que se puede
observar en el Diagrama 1 de este documento. Para el caso del ARNm se puede
emplear el método visto en la pregunta 2 de este documento.
5. ¿Qué aplicaciones tienen los diferentes tipos de ARN?
Existen varias aplicaciones de los distintos tipos de ARN, que contribuyen a
mejorar diferentes ámbitos de la medicina. Por ejemplo: se pueden generar vacunas
de ARN para preparar al sistema inmunitario para futuras infecciones. Una vacuna
 de ARN es aquella cuyo componente principal es una molécula de ARN con
información de un organismo patógeno. El ARN de este tipo de vacunas, al
introducirse en las células, se traduce en proteínas inocuas del agente infeccioso,
que activan el sistema inmunitario y generan linfocitos de memoria para futuras
infecciones. Además, los diferentes tipos de ARN pueden utilizarse como
biomarcadores, tanto el ARNm como los ARN no codificantes pueden ser utilizados
como indicadores de la actividad génica y de la situación celular, esto puede ayudar
a detectar el progreso de una enfermedad. También existen terapias de ARN que se
usan para curar múltiples enfermedades como el cáncer o ciertas enfermedades
raras, en las que existen genes que no se están expresando correctamente, entonces
se usan algunos tipos de ARN que son capaces de alterar esta expresión,
devolviéndola a la normalidad y revirtiendo la enfermedad.
6. Tipos de ARN en la célula y que funciones cumplen
 ARN mensajero: Su función es copiar fragmentos del ADN para sacar dicha
información del núcleo y llevarlo a los ribosomas donde la información
genética pasará a proteínas.
 ARN ribosomal: Su función es leer la secuencia del ARN mensajero y
traducir ese código genético en una serie especificada de aminoácidos, que
crece y forma cadenas largas que se pliegan y forman proteínas.
 ARN de transferencia: Su función es transportar aminoácidos específicos
hasta los ribosomas para conseguir completar ese proceso de traducción.
7. ¿Cómo pueden aislarse los diferentes tipos de ARN con técnicas de Ing.
Genética?
Al realizar la extracción de ARN de células eucariotas existen dos posibilidades:
extracción de ARN total (ARNm, ARNr, ARNt) y extracción oclusiva de ARNm.
En el primer caso se revisó una metodología para extraer el ARN total que se puede
observar en el Diagrama 1 de este documento. Para el caso del ARNm se puede
emplear el método visto en la pregunta 2 de este documento.
8. Coloca una imagen de un gel de agarosa en donde muestres el tipo de ARN se
observa para un procariota y para un Eucariota. Coloca de forma específica
que sería cada banda.
9. ¿Cuál es la finalidad de extraer ARN en biotecnología?
La extracción de ARN de células eucariotas se lleva a cabo para desarrollar estudios
de expresión génica como el análisis de los niveles de ARNm, para el diagnóstico
de enfermedades ocasionadas por virus de ARN o, en el caso de bacterias, para
análisis de expresión de genes o validar la clonación del ADN complementario
(ADNc) en un vector.
10. ¿Cuál es la función del 16SrRNA y 18SrRNA?
El ARNr 16S es el componente estructural central de la subunidad ribosomal 30S de
bacterias y arqueas y es necesario para el inicio de la síntesis de proteínas y la
estabilización del correcto emparejamiento codón-anticodón en el sitio A del
ribosoma durante la traducción del ARNm.
El ARNr 18S es el centro activo de la síntesis de proteínas en la subunidad
ribosomal 40S.
11. ¿Cómo obtengo ARNm y que función tiene?
Una de las formas de obtención de ARNm es utilizar el método visto en la pregunta
2 de este documento y la función del ARNm se menciona posteriormente en la
pregunta 3.
12. ¿Qué son los siRNA?
ARN pequeño de interferencia o ARN de silenciamiento son fragmentos cortos de
21 o 22 nucleótidos de doble cadena de RNA que no codifican proteínas. Reciben
este nombre porque se ha demostrado que se unen al mRNA y posteriormente
bloquean o interfieren la traducción de los mRNA
unidos.
13. ¿Qué son los miRNA?
MicroARN son moléculas de ARN que no codifican para proteínas. Los microRNA
son parte de una creciente familia de pequeñas moléculas de RNA de entre 20 y 25
nucleótidos de tamaño que desempeñan nuevas funciones en la regulación de la
expresión génica.
14. ¿Qué es la transcriptómica?
 Es el estudio de todas las moléculas de ARN en una célula.
15. Fundamentos del TRIZOL
El reactivo TRIZOL mantiene la integridad del ARN gracias a la inhibición
altamente eficaz de la actividad de RNasa.
Después de la homogeneización de la muestra con el reactivo TRIZOL, se añade
cloroformo y la muestra se separa en una capa acuosa superior (que contiene ARN)
y en capas orgánica roja y de interfase inferiores (que contienen ADN y proteínas).
Posteriormente el ARN se precipita desde la capa acuosa con isopropanol, el ADN
se precipita desde la interfase/capa orgánica con etanol y la proteína se precipita
desde el sobrenadante de fenol-etanol con precipitación de isopropanol.

Referencias
Pregunta 1: Falcón, L. I. (s/f). Las herramientas moleculares.
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/530/cap16.pdf
Pregunta 2: Rodríguez, A. S. S., Rizo, A. B. M., & de la Mora, D. A. L. (2013). Biología
molecular. Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud. McGRAW-HILL
INTERAMERICANA EDITORES.
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?
bookid=1473&sectionid=102743658#1118679552
Pregunta 3: Los tipos de ARN. (2021). ADNTRO. https://adntro.com/es/blog/curiosidades-
geneticas/tipos-arn/
Pregunta 4: Rodríguez, A. S. S., Rizo, A. B. M., & de la Mora, D. A. L. (2013). Biología
molecular. Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud. McGRAW-HILL
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Pregunta 5: Chofre, A., & González, R. M. (2022). Conociendo el ARN. Genotipia.
https://genotipia.com/que-es-el-arn/
Pregunta 6: National Human Genome. (2022). ARN (Ácido Ribonucleico). National
Human Genome. https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/ARN
Pregunta 7: Rodríguez, A. S. S., Rizo, A. B. M., & de la Mora, D. A. L. (2013). Biología
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Pregunta 8: Alonso, C. D., Santana, H. G., Vigil, C. A. M., González, Y. S., & Romero, R.
G. M. (2013). Cuantificación de ácido ribonucleico para la realización de la técnica de RT-
PCR. Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia.
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-02892013000300010
Pregunta 9: Rodríguez, A. S. S., Rizo, A. B. M., & de la Mora, D. A. L. (2013). Biología
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Pregunta 12: Thieman, W. J., & Palladino, M. A. (2010). Introducción a la biotecnología.
Pearson.
Pregunta 13: Thieman, W. J., & Palladino, M. A. (2010). Introducción a la biotecnología.
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Pregunta 14: Thieman, W. J., & Palladino, M. A. (2010). Introducción a la biotecnología.
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Pregunta 15: Invitrogen Reactivo TRIzol. (s/f). fisher scientific. Recuperado el 08 de
octubre de 2022, de https://www.fishersci.es/shop/products/ambion-trizol-reagent-2/p-
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