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    Bitacora 1

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    melani cano
    Este documento describe una práctica de extracción de ADN de diferentes muestras utilizando métodos físico-químicos. Explica la metodología de extracción, incluyendo los reactivos utilizados y su función. También incluye preguntas sobre los pasos del proceso de extracción, la precipitación del ADN con etanol, la utilidad de obtener el material genético de una célula y las diferencias en los métodos para extraer ADN de diversas muestras como tejido vegetal, bacteriano y animal.

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    melani cano
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    Este documento describe una práctica de extracción de ADN de diferentes muestras utilizando métodos físico-químicos. Explica la metodología de extracción, incluyendo los reactivos utilizados y su función. También incluye preguntas sobre los pasos del proceso de extracción, la precipitación del ADN con etanol, la utilidad de obtener el material genético de una célula y las diferencias en los métodos para extraer ADN de diversas muestras como tejido vegetal, bacteriano y animal.

    Descripción original:

    Bitacora de laboratorio

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    Este documento describe una práctica de extracción de ADN de diferentes muestras utilizando métodos físico-químicos. Explica la metodología de extracción, incluyendo los reactivos utilizados y su función. También incluye preguntas sobre los pasos del proceso de extracción, la precipitación del ADN con etanol, la utilidad de obtener el material genético de una célula y las diferencias en los métodos para extraer ADN de diversas muestras como tejido vegetal, bacteriano y animal.

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    Este documento describe una práctica de extracción de ADN de diferentes muestras utilizando métodos físico-químicos. Explica la metodología de extracción, incluyendo los reactivos utilizados y su función. También incluye preguntas sobre los pasos del proceso de extracción, la precipitación del ADN con etanol, la utilidad de obtener el material genético de una célula y las diferencias en los métodos para extraer ADN de diversas muestras como tejido vegetal, bacteriano y animal.

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    de 5

    Instituto Politécnico Nacional

    Unidad Profesional Interdisciplinaria de


    Biotecnología

    Laboratorio de Biotecnología Molecular

    Profesoras:
    Flor Selene Villalobos Escobedo
    Aida Margarita Zamora Contreras

    Bitácora: Práctica 3 “Extracción de ADN”

    Alumno: Cano Pérez Jeimy Melanie

    Equipo: 5

    Fecha de entrega: 12/10/2022

    Objetivo: Extraer ADN de diferentes muestras por métodos físico-químicos.


    Metodología

    Diagrama 1. Metodología de extracción de ADN genómico

    Tabla de reactivos
    Reactivo Función
    Acetato de Sodio (3M) Funciona como buffer. Nos permite realizar la lisis para
    liberar al ADN del interior de la célula.
    Etanol absoluto Al tener una muestra de volumen pequeño para precipitar el
    ADN se recomienda hacer la extracción en frío para poder
    recuperar la mayor cantidad de ADN posible. Se usa etanol
    como solvente para evitar la co-precipitación de las sales.
    El alcohol disminuye la constante dieléctrica
    Etanol 70% del solvente acuoso, provocando una disminución en la
    solubilidad del ADN, que en
    presencia de altas concentraciones de sales, precipita. Esto
    permite concentrar el ADN.
    Fenol (equilibrado con Su función es formar las fases orgánica y acuosa,
    Tris 1M pH 8.0). desnaturalizar proteínas e inactivar nucleasas.
    Cloroformo
    Agua desionizada Su función es hidratar el ADN para mantenerlo en solución.
    TE (pH 8.0) El buffer TE aumenta la estabilidad del ADN en muestras
    almacenadas a largo plazo o de uso frecuente, pues inhibe
    DNasas presentes en la muestra.
    Medio LB líquido Contiene peptona de caseína y extracto de levadura que
    proporcionan al medio los nutrientes necesarios para el
    desarrollo óptimo de la mayoría de los microorganismos.
    Tabla 1. Función de reactivos

    Cuestionario
    1. ¿Cuál es la función de cada uno de los reactivos y pasos que se llevan a cabo
    durante la práctica?
    La función de cada uno de los reactivos usados en la práctica se encuentra en la
    Tabla 1 y la metodología en el Diagrama 1.
    2. ¿Por qué precipitan los ácidos nucleicos al adicionar etanol? ¿Qué otro alcohol
    puede emplearse?
    Los grupos fosfato debido a su carga negativa tienden a repelerse, esto permite
    disolver el ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la
    molécula, sin embargo, al agregar etanol esta capa hidratante se rompe, quedando
    expuestos los grupos fosfato, favoreciendo la unión con cationes como Na+ (sales),
    estas reducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y permiten que
    el ADN se precipite. También puede emplearse isopropanol para precipitar ácidos
    nucleicos
    3. ¿Cuándo es mejor resuspender el ADN con agua y cuándo con TE?
    Cuando se busca almacenar las muestras de ADN por un periodo largo de tiempo es
    preferible utilizar el TE ya que aumenta la estabilidad del ADN.
    Por el contrario, cuando se busca almacenar la muestra por un periodo corto de
    tiempo es mejor resuspender el ADN en agua desionizada.
    4. ¿Qué utilidad tiene obtener todo el material genético de una célula?
    Al obtener el material genético podemos realizar distintos análisis genéticos
    mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) como:
     Determinar la presencia de genes marcadores en organismos genéticamente
    modificados.
     Determinar la presencia de mutaciones asociadas a enfermedades genéticas.
     Determinar la presencia de ADN o ARN perteneciente a microorganismos o
    virus.
    5. ¿En qué organelos de las células eucariontes es posible encontrar ADN?
    En células eucariotas el ADN se encuentra principalmente en el núcleo de la célula,
    sin embargo, también puede encontrarse en las mitocondrias.
    6. ¿En qué difieren los métodos de obtención de ADN? si la muestra es: una
    escena del crimen, un hueso de dinosaurio, un cultivo bacteriano, tejido vegetal
    y tejido animal
     Escena del crimen: Los biólogos forenses extraen el ADN de las muestras
    en laboratorios especializados. Cada país decide la metodología a utilizar en
    sus laboratorios para analizar los marcadores genéticos, conocidos como
    repeticiones cortas en tándem.
     Hueso de dinosaurio: En la obtención de ADN de una muestra de hueso es
    necesario realizar ciertos pasos previos como el lavado de la muestra, la
    pulverización y una desmineralización. Posterior a esto se puede realizar el
    método de extracción de ADN.
     Cultivo bacteriano: Para la extracción de ADN bacteriano se pueden
    utilizar diferentes metodologías como: salting, que utiliza altas
    concentraciones de sales para la lisis celular, el uso Chelex 100 que es una
    resina quelante que captura iones metálicos polivalentes en soluciones o
    también la metodología fenol-cloroformo o extracción con solventes
    orgánicos.
     Tejido vegetal: En este caso primero debe romperse la pared celular y
    posteriormente la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la
    célula. Después debe romperse la membrana nuclear para dejar libre al
    ADN.
     Tejido animal: Existen distintos métodos de extracción de diferentes tipos
    de tejidos, como: la hidrólisis con proteinasas, exposición a ultrasonidos o
    usando detergentes o álcalis.

    Referencias
    Pregunta 1: Falcón, L. I. (s/f). Las herramientas moleculares.
    http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/530/cap16.pdf
    Pregunta 2: Abyntek. (2017). Precipitación de DNA con etanol vs isopropanol. Abyntek.
    https://www.abyntek.com/precipitacion-de-dna-con-etanol-vs-isopropanol/

    Pregunta 3: Matzumura, P. D., Núñez, L. G., Yáñez, A. L., & Rivera, N. Y. E. (2013). Técnicas
    Básicas de Biología Molecular. http://publicacionescbs.izt.uam.mx/DOCS/biomolec.pdf

    Pregunta 4: Cribb, P. (2019). Métodos de extracción y purificación de ácidos nucleicos.


    https://docs.google.com/presentation/d/1K7bP245wLeNoo5quy8b0ABH5JOEg_XnD/edit?
    usp=sharing&ouid=109600488075474591264&rtpof=true&sd=true

    Pregunta 5: Genetic Alliance. (2009). Información Genética Básica. National Library of


    Medicine. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK132204/

    Pregunta 6:
     ADN. (s/f). INTERPOL. https://www.interpol.int/es/Como-trabajamos/Policia-
    cientifica/ADN
     ICMP. (2022). Manual sobre Métodos de Extracción de ADN de Restos Óseos
    Humanos No Identificados.
    https://www.icmp.int/wp-content/uploads/2022/08/Handbook-Mexico.pdf
     Cuan, A. G., & Cárdenas, A. M. (2018). Evaluación de métodos de extracción de
    ADN bacteriano en muestras fecales de pacientes diagnosticados con infección por
    Helicobacter pylori. Revista Biociencias, 13, 7–16.
     Giménez, R., & Gogorcena, Y. (2013). DESCUBRE EL ADN DE LAS FRUTAS QUE
    COMEMOS.
    https://digital.csic.es/bitstream/10261/94991/1/GogorcenaY_NochInv_2013.pdf
     González, N., Rodríguez, N., Torres, W., O’Callaghan, J., & De Jesús, R. (2011).
    PROTOCOLO SENCILLO PARA LA EXTRACCiÓN DE ADN GENÓMICO DE
    TEJIDO DE OREJA DEL RATÓN Y LA RATA, USANDO LA ENZIMA
    BROMELINA. Revista Científica, 21.
    https://www.redalyc.org/pdf/959/95918239007.pdf

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