CROMATOGRAFÍA PARA SEPARACIÓN DE MEZCLAS

DE COLORANTES AZOICOS

CHROMATOGRAPHY FOR SEPARATION OF

MIXTURES OF AZOIC DYES

ANA CORONADO 1 Y JONATHAN DOMÍNGUEZ 2

GRUPO 2 - EQUIPO 4

RESUMEN: En el laboratorio de química orgánica fueron realizadas dos prácticas con distintas
técnicas cromatográficas para separar una mezcla de colorantes azoicos. En ambas prácticas fue
empleada una mezcla de sudán IV con P-Nitroanilina en relación 1:1, es decir, al 50%. En la
primera práctica se aplicó la técnica de cromatografía en capa delgada realizando 10 pruebas
diferentes con 4 solventes y mezclas de estos, además se determinó el de mejor eficiencia para ser
utilizado en la siguiente práctica. La segunda práctica consistió en cromatografía de columna con
gel de sílice de fase estacionaria y tolueno como fase móvil. Tanto en la primera práctica como en
la segunda fueron obtenidos los colorantes de manera individual, identificándose por su color.

PALABRAS CLAVE: Técnicas cromatográficas, separación, colorantes azoicos, sudán IV, P-nitroanilina.

ABSTRACT: In the organic chemistry laboratory, two practices were carried out with different
chromatographic techniques to separate a mixture of azoic dyes. In both practices, a mixture of
sudan IV with P-Nitroaniline was used in a 1:1 ratio, that is, 50%. In the first practice, the thin
layer chromatography technique was applied, carrying out 10 different tests with 4 solvents and
mixtures of these, in addition, the one with the best efficiency was determined to be used in the
following practice. The second practice consisted of column chromatography with silica gel as the
stationary phase and toluene as the mobile phase. Both in the first practice and in the second, the
dyes were obtained individually, identifying them by their color.

KEYWORDS: Chromatographic techniques, separation, azoic dyes, sudan IV, P-nitroaniline.

 mientras que la otra es móvil, resultando
importantes ya que su adecuada selección
1. INTRODUCCIÓN
brinda mayor eficiencia en el proceso
La cromatografía es un método (Chicharro, 2005).
comúnmente empleado en química
En las dos prácticas de técnicas
orgánica que permite la separación,
cromatográficas se realizó la separación
identificación y determinación de los
de una mezcla de colorantes azoicos
componentes químicos en mezclas
identificados como sudán IV y
complejas. Las cromatografías son
P-Nitroanilina.
procesos que abarcan varias técnicas
separativas, basadas en propiedades El primero presenta una mejor
físicas de los distintos materiales, que en reactividad con disolventes apolares y es
interacción con sustancias o mezclas de un colorante de pigmentación roja que se
sustancias, permite descomponer una emplea para realizar la tinción de lípidos,
mezcla y analizar sus constituyentes. Con triglicéridos y lipoproteínas en secciones
el desarrollo de la tecnología, las técnicas congeladas de parafina, con respecto a
cromatográficas se diversificaron y sus propiedades fisicoquímicas se sabe
mejoraron sensiblemente su capacidad que es una sustancia combustible de
para resolver mezclas de distinta difícil inflamación, con una
naturaleza (Sgariglia et al, 2010). hidrosolubilidad de aproximadamente
0,023 mg/l a 25 °C (Roth, 2015).
El método de separación por
cromatografía fue introducido como En cuanto a la P-Nitroanilina sabemos
concepto en 1906 por Mikhalil Tswett, que posee una muy alta polaridad, se
un botánico ruso que empleó el término caracteriza por su color amarillo o
para el proceso que consistía en separar marrón y tener hidrosolubilidad de 1 g /l
pigmentos de extractos vegetales siendo a 30 °C. Este es un colorante empleado
filtrados a través de un sistema en forma industrialmente para la fabricación de
de columna rellena de algún tipo de tintes, en farmacia y en productos
sólido con altas propiedades adsorbentes. pesticidas (Roth, 2016).
Posteriormente fue definida por
Keulemans como un método físico de
separación en el que las dos sustancias
que se separarán son distribuidas en dos
tipos de fases, siendo una estacionaria

Tomado y adaptado de la Revista Caldasia 2023.

Docente titular: Barbara Moreno; Docente auxiliar: Diego Alejandro Silva. 2023-1S
2 MATERIALES Y MÉTODOS

2.1 Materiales
Para la cromatografía en columna
también se utilizó sílica gel como fase
Para llevar a cabo las cromatografías estacionaria; para el montaje se requiere
utilizamos Sudán IV de color rojizo y una bureta, un soporte universal, dos
p-nitroanilina de color amarillo como pinzas para sujetar, algodón, y adicional,
sustancias patrón. Como solventes un rotavapor para separar el eluyente de
utilizamos éter de petróleo, tolueno, la sustancia patrón.
acetato de isopropilo y metil etil cetona
(MEK). Las mezclas de los eluyentes se
realizaron utilizando una proporción 1 a
1 como se explica en el diagrama de flujo
de la figura 1. Las siembras se hicieron
en 10 portaobjetos con sílica gel y se
utilizaron 10 vasos como cámaras
cromatográficas y tapas de vidrio para
cerrar las cámaras.

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2.2 Métodos (diagramas de flujo)

2.2.1 Cromatografía en capa delgada

Figura 1. Diagrama de flujo con el procedimiento para la cromatografía de capa fina.

Tomado y adaptado de la Revista Caldasia 2023.

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2.2.2 Cromatografía en columna

Figura 2. Diagrama de flujo con el procedimiento para la cromatografía en columna.

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3.RESULTADOS Y DISCUSIÓN.

3.1 Resultados de la
cromatografía en capa delgada

Lo primero que se hizo fue ordenar los

eluyentes de acuerdo a su polaridad de
menor a mayor:

Solvente 1 Éter de petróleo

Solvente 2 Tolueno

Solvente 3 Acetato de isopropilo

Solvente 4 Metil etil cetona (MEK) Figura 3. Representación del montaje de la placa
para la cromatografía en capa delgada.
Como se puede ver en la figura 3, se trazó
una línea de 1cm en la parte superior de la
A continuación, procedemos a registrar
placa para que la distancia recorrida fuera
máximo de 5 cm, y una línea de 1cm en la los resultados y a hallar el Rf para cada
parte inferior en donde hicimos las caso.
siembras de los colorantes,
asegurándonos de que no se mezclen con
el eluyente. Las siembras se hicieron de la
siguiente manera:
Solvente 1 - Éter de petróleo
A la izquierda (de color rojo) se ubica el
Sudán IV; en el medio (de color naranja)
se ubica la mezcla patrón; a la derecha (de
color amarillo) se ubica la p-nitroanilina.

El objetivo es comprobar que ese patrón

naranja es una mezcla del colorante rojo y
el colorante amarillo.

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 1 𝑐𝑚
Rf = 2,6 𝑐𝑚
= 0,38
4,6 𝑐𝑚
Rf = = 0,92
Solvente 2 - Tolueno 5 𝑐𝑚

Solvente 4 - M.E.K.

1,6 𝑐𝑚
Rf = 4,6 𝑐𝑚
= 0,34

Solvente 3 - Acetato de Rf =
4,5 𝑐𝑚
= 0,93
4,8 𝑐𝑚
isopropilo

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 4,9 𝑐𝑚
Mezcla A 1+2 Rf = 5 𝑐𝑚
= 0,98

Mezcla C 1+3

2,1 𝑐𝑚
Rf = 4,5 𝑐𝑚
= 0,46
3,2 𝑐𝑚
Rf = = 0,64
Mezcla B 3+4 5 𝑐𝑚

Mezcla D 2+4

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 2,7 𝑐𝑚 4,7 𝑐𝑚
Rf = 3,1 𝑐𝑚
= 0,87 Rf = 5 𝑐𝑚
= 0,94

Mezcla E 1+4
De acuerdo con los factores de retención
obtenidos para cada una de las fases
móviles propuestas en el estudio
experimental en relación a las distancias
recorridas por las sustancias y por los
solventes, se observa que el factor de
retención de menor valor está dado por el
solvente 2 Tolueno, eso se debe a que
presenta una polaridad alta que le permite
interactuar de tal forma con los colorantes
azoicos que logra separar cada uno de
ellos más eficientemente, pues lleva la
P-nitroanilina casi 2cm después de la
linea de inicio y al sudán IV que es una
sustancia apolar lo arrastra a una distancia
mucho más larga. Esto nos permite
3,4 𝑐𝑚
Rf = 3,8 𝑐𝑚
= 0,89 determinar que el tolueno es el solvente
más adecuado para la separación de esta
Mezcla F 2+3 mezcla en específico, por lo que fue el
solvente seleccionado para realizar la
cromatografía de columna.

3.2 Resultados de la
cromatografía en columna

Teniendo en cuenta que el solvente más

eficiente para la separación en la
cromatografía de capa fina fue el tolueno,
esta vez hacemos la cromatografía en
columna con ese mismo solvente y al
final lo comparamos con los otros tres
solventes haciendo una cromatografía en
capa fina con los colorantes separados.

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 Figura 8. Análisis de los resultados de la
cromatografía en columna comparados en una
cromatografía de capa fina para el éter de
petróleo y el tolueno como solventes.
Figura 9. Análisis de los resultados de la

En este punto confirmamos que el cromatografía en columna comparados en una

cromatografía de capa fina para el acetato de
tolueno es el solvente más efectivo para
isopropilo y el MEK como solventes.
separar la mezcla de Sudán IV y
p-nitroanilina tanto por cromatografía de Ahora procedemos a hallar el Rf para las
capa fina como por cromatografía en 4 placas.
columna.

1. Éter de petróleo

0,2 𝑐𝑚
Rf= 2,5 𝑐𝑚
= 0,08

2. Tolueno

2,0 𝑐𝑚
RfSudán IV= 4,3 𝑐𝑚
= 0,46

0,9 𝑐𝑚
Rfp-nitroanilina= 4,3 𝑐𝑚
= 0,21

3. Acetato de isopropilo

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 4,2 𝑐𝑚
Rf= 4,4 𝑐𝑚
= 0,95

4. MEK

4,3 𝑐𝑚
Rf= 4,5 𝑐𝑚
= 0,96

Con lo anterior podemos observar que

cuando utilizamos tolueno, hay una
diferencia muy visible entre la distancia
recorrida por el colorante de color rojo y
la distancia recorrida por el colorante
amarillo, tanto que sus Rf son diferentes,
mientras que con los otros solventes
recorren casi la misma distancia, es decir
que la separación no es efectiva.

4.CONCLUSIONES

● La elección del solvente para la cromatografía es fundamental, ya que si no se elige

el solvente adecuado en la primera práctica, la cromatografía en columna puede
fracasar y no separar la mezcla como se espera.

● El tolueno resultó ser el solvente

más eficiente para el proceso de separación por cromatografía de capa delgada, pues fue el
que demostró un mejor arrastre y

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distinción del color de los colorantes, además con este solvente se obtuvo un coeficiente de
retención de valor menor que el de los otros solventes y el de las mezclas realizadas.

● La cromatografía de columna permite separar de manera mucho más eficiente los

compuestos de la mezcla si lo que se desea es obtener los colorantes por

separado, pues en la cromatografía de placa estos se mantendrán sobre la placa, sin

embargo, depende de objetivos del estudio cuál de las dos cromatografías resultaría más
conveniente.

Químico. Sgariglia; Araceli, M.;

Soberón, J.; Sampietro, D. y Vattuone,
M. (2010). Cromatografía: Conceptos
5. REFERENCIAS
y aplicaciones. Consejo Nacional de
MARMOR SOLOMON. Investigaciones Científicas y Técnicas
Laboratory Guide for Organic (CONICET). Revista Arakuku
Chemistry.D.C heath and Co.
Boston, 1964, pp. 84-89.
98-103, 126-127

Chicharro, M. 2005. Cromatografía,

principios y aplicaciones. Análisis
cámara cromatográfica, el
nivel del eluyente alcanza
6.CUESTIONARIO el sitio de aplicación de la
mancha?
● ¿Qué ocurre si al Si esto pasa, las sustancias de la mancha
introducir la placa en la se diluirán en el eluyente y no ascenderán

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por la placa, lo que implica que no tendría
lugar la separación.
obligando a que entonces se deposite
todo el soluto a separar sobre un punto,
● ¿Cuál es el efecto de la
dañando a la cromatografía.
polaridad en la
cromatografía?
● ¿Cuáles son las diferencias
entre cromatografía
La polaridad del disolvente es el líquida y de gases?
principal factor para controlar el
La diferencia principalmente radica en la
movimiento de los diferentes compuestos
fase móvil, ya que en la cromatografía
en una cromatografía. El orden de
líquida la fase móvil es un líquido y en la
elución del compuesto se incrementa al
de gases es un gas. Además, la
aumentar la polaridad de la fase móvil o
cromatografía líquida puede llevarse a
eluyente. Los solutos más polares
cabo de diversas formas, mientras que, la
quedarán más retenidos puesto que se
cromatografía de gases necesita de una
adsorben más firmemente a los centros
columna para ser llevada a cabo. Esto
activos de la fase estacionaria, mientras
debido a que la retención de las partículas
que los polares se eluyen con mayor
de gases se realiza principalmente por
facilidad.
adsorción a una superficie.

● ¿Cuáles son las

consecuencias de una ● Parámetros de la
columna mal empacada? cromatografía líquida de
Ya que del empaque depende la retención alta eficiencia
de la muestra y el volumen de elución, se Parámetros de las bandas individuales
obtendrían datos erróneos en la VM o V0:
cromatografía. De igual modo si quedan Volumen muerto o volumen extra
espacios vacíos en la columna, puede columna es el volumen entre las
ocurrir un estancamiento en la columna, partículas de fase estacionaria, más el

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volumen de la tubería y el detector. Es el acetato de fenilo en un gel
volumen mínimo del eluyente que
de placa de TLC de sílice
transporta a una sustancia no retenida
desarrollada con
por la fase estacionaria desde el punto de
inyección hasta el detector. diclorometano.

VR: Volumen de retención:

Es el volumen que eluye de la 1. Naftaleno, 2. Acetato de fenilo, 3.

columna desde la inyección de la muestra Ácido butírico. Este orden se debe a la

hasta que se produce el máximo pico polaridad del diclorometano.

correspondiente a una sustancia que

ha interactuado con la fase estacionaria.
● Organice los siguientes
compuestos en orden
Tiempo de retención tR:
Es el tiempo que tarda un soluto creciente de Rf empleando
que interacciona con la fase estacionaria sílica como fase
para emerger de la columna, medido en el estacionaria en
máximo del pico.
cromatografía en capa

Ancho de pico en la base Wb:

delgada: ácido acético,
Se obtiene trazando las acetaldehído, 2-octanona,
tangentes en los puntos de inflexión a decano y 1-butanol.
ambos lados del contorno de banda.

1. Decano
2. 2-octanona,
● En qué orden (de arriba
3. Acetaldehído
hacia abajo) se puede 4. Ácido acético
esperar encontrar los 5. 1-butanol.

siguientes compuestos:
naftaleno, ácido butírico, y

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 ● Qué efecto se produce si se Esto se explica con que el eluyente fue
capaz de disolver ambas sustancias, lo
siembra mucha muestra en
que entonces no tiene sentido realizar
la cromatoplaca.
una separación con ese disolvente.

Si se aplica mucha muestra en la ● De qué manera influye la

cromatografía, al ascender el eluyente es
saturación de la cámara en
posible que se mezcle con la sustancia
el proceso de separación.
patrón y se dificulte la lectura de las
distancias recorridas. También es posible
que puedan combinarse los colorantes
La cámara debe estar saturada con los
patrones.
vapores del eluyente para que éste no se
evapore en la placa, y si esto sucede, se
● Se observa una mancha con incrementa el tiempo para que el eluyente
ascienda por la placa. Dado el caso que se
un Rf de 0,62 después de
use una mezcla de varios componentes
desarrollar la cromatoplaca
como eluyente, si no está saturada la
para una mezcla de cámara, los componentes más volátiles se
reacción. ¿Prueba esto que evaporarían y la composición variará a

usted tiene solamente un través del tiempo, dañando la medición.

producto presente?
Explique. ● Un colorante desconocido
se piensa que puede ser
azul de metileno, ¿cómo se
No basta con tener un Rf de 0.62 para
probar que se tiene un solo producto.
podría comprobar esta
Puede ser que al observarse una sola suposición utilizando un
mancha implique que todas las sustancias procedimiento basado en
se comporten de manera similar al
una técnica
eluyente y no existió una separación..
cromatográfica?

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Se puede lograr una identificación de azul encontrar el que hiciera una mejor
de metileno por cromatografía en capa separación de la muestra.
fina. Se hace una mezcla con otro
colorante, por ejemplo Sudán IV y luego
se requiere de una disolución que se
● La recuperación
utilizará como patrón o referencia que
contiene solo azul de metileno, y otro cuantitativa del producto
patrón que contiene principal de la práctica,
solo Sudán IV, y como eluyente se puede sería más completa si se
usar tolueno. Se siembran la muestra y
recogieran fracciones
los patrones, se mide la distancia
recorrida, y si la distancia del patrón azul
mayores o menores de 8
de metileno, es igual a la distancia de uno mL ¿por qué?
de los componentes de la mezcla, que no
es el Sudán IV, entonces comprobamos
que uno de ellos es azul de metileno. Mayor a 8 ml, para que la mayor parte de
la muestra pase por la columna y así se
junten las fases para realizar evaporación
y obtener una mayor cantidad de la
● ¿Qué debe hacerse para muestra.
encontrar el eluyente
adecuado para una
● Indique algunas de las
sustancia en una
aplicaciones de la
cromatografía en columna?
cromatografía de
Se selecciona de acuerdo con la polaridad
adsorción en columna y
de la muestra, se determina la polaridad
del eluyente y se determinan las demás capa fina.
fases que rodean la columna para evitar
que la muestra no se desplace más de lo
necesario. En nuestro caso, lo estimamos La Cromatografía en capa fina se usa
probando con varios eluyentes hasta para monitorización de una reacción,
poniendo un punto en el cromatograma

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cada cierto tiempo; identificación de un .Tolueno
compuesto, comparando el Rf del .Hexano
compuesto a investigar con el del .Éter de petróleo
compuesto conocido; comprobación de la
Tomado de Manual de prácticas, Química
pureza del compuesto, comparando la
orgánica I, www.organica1.org
muestra con el producto puro, entre
otras.
La Cromatografía en Columna se usa con
fines preparativos, siendo el método más ● Cuál es la diferencia entre
general para la separación y purificación la cromatografía en capa
de compuestos orgánicos, tanto sólidos
fina y la cromatografía en
como líquidos.
papel.

● Escriba una lista de La diferencia es el soporte donde se hace

eluyentes utilizados en la separación cromatográfica. La primera
es un papel donde ponemos en forma
cromatografía en columna
líquida los compuestos que queremos
en orden de polaridad
separar y luego lo metemos en una
decreciente (anote su cámara de vidrio, con una atmósfera de
bibliografía). un disolvente o mezcla de ellos que, una
vez acabado el desarrollo (el líquido sube
por el papel separando los compuestos).
.Agua
.Metanol En la de capa fina, el soporte es una placa
.Etanol de vidrio o óxido de aluminio con una
.Acetona fina capa de producto sólido adherido a la
.Acetato de isopropilo misma.
.Diclorometano
.Cloroformo
.Éter
.Benceno

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 ● Qué fenómenos tiene en cromatografía en
físico-químicos intervienen columna
en una separación
cromatográfica
Una serie eluotrópica consiste en un
listado de diferentes compuestos
pertenecientes a posibles solventes que se
La adsorción física o química. Este
puedan usar en una separación, que
fenómeno consiste en la atracción de las
incluyen solventes no polares y polares,
cargas a la molécula que puede quedar
aumentando en la escala de polaridad
unida mediante fuerzas intermoleculares,
dependiendo de la facilidad de formación
o sitios activos con la superficie para la
de enlaces con las sustancias de igual
cromatografía gaseosa. Para la
características fisicoquímicas. La utilidad
cromatografía líquida, ocurre una
en una columna es la determinación de
interacción intermolecular entre el
posibles eluyentes que puedan separar
eluyente con el componente a separar,
una mezcla de componentes
estos pueden ser mediante puentes de
desconocidos, sobre posibles
hidrógenos o fuerzas van der valls.
componentes en una mezcla, para poder
verificar a cuál de los componentes de la
● Qué es una serie mezcla corresponden.

eluotrópica, qué utilidad

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