POE Practica 4 Diaz Escobar

Procedimiento No 4 Pág 1 de 5
Universidad Javeriana
Microbiologia farmaceutica Revisión No
Heidy Diaz Hernandez 1
Yisela Escobar Cortes
Procedimiento operativo estándar(POE) Área: Control de calidad
CONTROL MICROBIOLÓGICO DE MATERIAS PRIMAS

INSUMOS
Tabla de contenido
1.Objetivo
2.Alcance
3.Responsabilidad
4.Frecuencia
5.Documentos de referencia
6.Contenido
6.1.Fundamento
6.2.Definiciones
6.3.Condiciones de seguridad
6.4.Equipos
6.5.Materiales y reactivos
6.6.Procedimiento
6.7.Interpretación de resultados
7.Registro de capacitaciones
8.Registro de revisiones
1.Objetivo
Realizar un control microbiológico de materias primas e insumos a una muestra por medio
de la técnica de recuento de unidades formadoras de colonias.
2.Alcance
Este documento describe el procedimiento para realizar control microbiológico a las
materias primas e insumos utilizados en la industria farmacéutica.
3.Responsabilidad
El estudiante es responsable de ejecutar adecuadamente los procedimientos aquí
explicados y de registrar los resultados en la forma descrita en el registro de la práctica
cuatro.
El profesor es el encargado de supervisar que el procedimiento se realice correctamente.
4.Frecuencia
El presente documento se deberá aplicar cada vez que se vayan a realizar pruebas de
control microbiológico para materias primas.
5.Documentos de referencia
-Metodología práctica 4.Control microbiológico de materias primas e insumos. Microbiología
farmacéutica. Facultad de ciencias. Pontificia Universidad Javeriana.
-USP 30. FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS DE AMÉRICA. NF 25. Vol 1. Pág
140-144
-Fundamentos Britanialab
6.Contenido
6.1.Fundamento
El control microbiológico es un requerimiento fundamental que garantiza la calidad de un
producto y la seguridad del consumidor, se lleva a cabo para estimar el número de
microorganismos viables presentes en cualquier tipo de materia prima e insumo usados en
un producto farmacéutico. Se evalúa cada materia prima e insumo, usando medios de
cultivo como Agar Sabouraud, Agar Plate Count, Agar Sangre, Agar EMB y después de la
incubación se realizan los ensayos necesarios para estimar el número de microorganismos
aerobios viables presentes en dichas materias primas e insumos
6.2.Definiciones
- Materia prima: las materias primas para la industria farmacéutica son los reactivos,
ingredientes activos, catalizadores, solventes y aditivos empleados en la elaboración
de fármacos, medicamentos, y productos que contienen complementos nutricionales
que contribuyen a procurar la salud.
6.3.Condiciones de seguridad
Los estudiantes deben utilizar los elementos de protección personal requeridos para el
laboratorio de docencia (nivel 1) los cuales son: Guantes, bata antifluidos, cofia, tapabocas.
6.4. Equipos
Balanza
Incubadora
6.5. Materiales y reactivos

-10 mL o g de muestra
-130 mL de agua peptonada al 0,1%
-Agar Sabouraud
-Agar Plate Count
-Agar Sangre
-Agar EMB
-Frasco Schott
-Tubos 16x150mm
-Cajas de Petri grandes
-Micropipeta
-Puntas azules
-Pipeta graduada 10 mL
-Pipeteador
6.6.Procedimiento
1.Pesar 10 g o medir 10 mL de la materia prima a evaluar y agregarlos al frasco
Schott con 90 ml de agua peptonada al 0,1%
2.Homogeneizar y dejar incubar la mezcla por 10 minutos
3.Realizar diluciones seriadas (factor de dilución 10) hasta 10-4 en agua peptonada,
volumen final de 10 ml
4.Sembrar por duplicado en superficie las diluciones en agar Sabouraud y llevar a

incubar por 8 días a 25°C
5.Sembrar por duplicado en profundidad las diluciones en cajas de Petri vacías,

verter 20-25 ml de agar Plate Count fundido, dejar solidificar y llevar a incubar por 48
horas a 37°C
6.Incubar las diluciones a 37°C por 48 horas
7.Pasadas las 48 horas, sembrar en superficie (0,1 ml) las diluciones en agar sangre
y agar EMB e incubar por 48 horas a 37°C
8.Luego del tiempo de incubación, revisar las cajas, realizar recuento de las colonias
crecidas, coloración de Gram e informar el recuento.
6.7.Interpretación de resultados
Agar Sabouraud: Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de

hongos patógenos y saprófitos. También es útil para el cultivo de levaduras. Interpretación:
Describir las características típicas de las colonias y subcultivar en medios apropiados para
identificación.
Agar Plate Count: Medio de cultivo recomendado para el recuento de bacterias aeróbicas
en aguas, aguas residuales, productos lácteos y otros alimentos. También es recomendado
como medio general para determinar poblaciones microbianas.
Agar Sangre: Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de numerosos

microorganismos. Al ser suplementado con sangre ovina, permite el crecimiento de
microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualización de reacciones de
hemólisis.
Para el medio de cultivo conteniendo sangre, observar las reacciones de hemólisis:
-Hemólisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso
alrededor de la colonia en estudio. Es debido a la oxidación de la hemoglobina a
metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el peróxido de hidrógeno generado por
los microorganismos.
-Hemólisis beta: lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante alrededor
de la colonia en estudio.
-Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no presenta
modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia en estudio
Agar EMB: Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos
de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las
especies de la familia Enterobacteriaceae.
Interpretación: -Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color

negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico.
-Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del medio,
incoloras.
Al verificar la aptitud del Método de Recuento en Placa, se debe obtener un recuento medio
de cualquier organismo de prueba que no difiera en un factor mayor de 2 del valor del
control definido en Inoculación y Dilución en la ausencia del producto. Al verificar la aptitud
del Método del NMP, el valor calculado a partir del inoculo debe estar entre los límites de
confianza de 95% de los resultados obtenidos con el control.
Si los criterios mencionados anteriormente no pueden cumplirse para uno o más de los
organismos analizados con cualquiera de los métodos descritos, usar el método y las
condiciones de prueba que más se aproximen a los criterios para examinar el producto.
7.Registro de capacitación
Hago constar que he leído y comprendido el presente procedimiento y por lo tanto me
comprometo a su exacto cumplimiento.
Fecha Nombre Firma
8.Registro de revisiones

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CONTROL MICROBIOLÓGICO DE MATERIAS PRIMAS

6.5. Materiales y reactivos

2.Homogeneizar y dejar incubar la mezcla por 10 minutos

4.Sembrar por duplicado en superficie las diluciones en agar Sabouraud y llevar a

5.Sembrar por duplicado en profundidad las diluciones en cajas de Petri vacías,

6.Incubar las diluciones a 37°C por 48 horas

Agar Sabouraud: Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de

Agar Sangre: Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de numerosos

Interpretación: -Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color

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