Niveles de

organización
en seres vivos
•Organismo

•Organo

•Tejido

•Celula
La Célula: Unidad Básica de Vida
 Dentro Hay Cada Cada gen
del nucleo cromosomas cromosoma esta
esta formado
formado por ADN
por genes
Cariotipo Humano
 Hebras de ADN de
•ADN los 23 cromosoma
unidas medirian mas
de 5 pies
•Nucleosoma 3 billones de
pares de bases

•Fibra de cromatina

80,000 a
•Cadenas de cromatina 100,000 genes

•Cromosoma 23 pares de
cromosomas
 Qué es el ADN??
• Acido Desoxirribonucleico

• Una doble hélice con un

esqueleto de azúcar y fosfatos;
unidos por enlaces de
hidrógeno a las bases
nitrogenadas

• Molécula que contiene el

código de la información
genética
•Esqueleto de
fosfato y azúcar
(desoxiribosa)

•Bases Nitrogenadas:
•Adenina
•Citosina
•Guanina
•Timina
 Quiz 1
• Cual fragmento de ADN tiene Temperatura
de fusion mas alto:
– 1. AGGGTCA

– 2. TTATGCA
Una doble helice muy informativa
• Las tres características que permiten
a la molécula de DNA ser la
depositaria de la información genética
de un organismo son:
• que la molécula de DNA contiene
información basada en el orden y
composición de los nucleótidos que la
forman; ATGC
y que es flexible, lo
que permite que
pueda almacenarse
toda la información
que requiere un ser
vivo para ser como es
y realizar sus
funciones en un
espacio tan pequeño
como el interior de
las células.
que es capaz de pasar
esta información de
generación en
generación gracias a
que cada cadena
puede servir como
molde para fabricar su
complementaria;
Dogma central de la biología molecular
 Replicación de ADN
• Direccion 5’ a 3’
• Watson y Crick propusieron la hipótesis
semiconservativa, según la cual, las nuevas
moléculas de ADN formadas a partir de otra
antigua, tienen una hebra antigua y otra nueva.
 MECANISMO DE REPLICACIÓN DEL
ADN EN PROCARIONTES - Etapa 1
1ª etapa: desenrrollamiento y apertura de la doble hélice en el punto
ORI-C.
Intervienen un grupo de enzimas y proteínas, a cuyo conjunto se
denomina replisoma.

* Primero: intervienen las helicasas que facilitan en desenrrollamiento

* Segundo: actúan las girasas y topoisomerasas que eliminan la tensión

generada por la torsión en el desenrrollamiento.

* Tercero: Actúan las proteínas SSBP que se unen a las hebras molde
para que no vuelva a enrollarse
 MECANISMO DE REPLICACIÓN DEL ADN EN
PROCARIONTES- Etapa 2
2ª etapa. síntesis de dos nuevas hebras de ADN.
* Actúan las ADN polimerasas para sintetizar las nuevas hebras en sentido 5´-3´,
ya que la lectura se hace en el sentido 3´-5´.
* Intervienen las ADN polimerass I y III, que se encargan de la replicación y
corrección de errores. La que lleva la mayor parte del trabajo es la ADN
polimerasa III.
* Actua la ADN polimerasa II, corrigiendo daños causados por agentes físicos.
La cadena 3´-5´es leída por la ADN polimerasa III sin ningún tipo de problemas
(cadena conductora). En la cadena 5´-3´ no puede ser leida directamente, esto se
soluciona leyendo pequeños fragmentos ( fragmentos de Okazaki ) que crecen en
el sentido 5´-3´y que más tarde se unen . Esta es la hebra retardada, llamada de
esta forma porque su síntesis es más lenta.
La ADN polimerasa III es incapaz de iniciar la síntesis por sí sola, para esto
necesita un cebador (ARN) que es sintetizado por una ARN polimerasa
(=primasa). Este cebador es eliminado posteriormente.
 MECANISMO DE REPLICACIÓN DEL
ADN EN PROCARIONTES - Etapa 3

3ª etapa: corrección de errores.

El enzima principal que actua como comadrona (R. Shapiro) es

la ADN polimerasa III, que corrige todos los errores cometidos
en la replicación o duplicación. Intervienen otros enzimas
como:

* Endonucleasas que cortan el segmento erroneo.

* ADN polimerasas I que rellenan correctamente el hueco.

* ADN ligasas que unen los extremos corregidos

 MECANISMO DE REPLICACIÓN DEL
ADN EN EUCARIONTES
• Es similar a la de los procariontes, es decir,
semiconservativa y bidireccional.
• Existe una hebra conductora y una hebra retardada
con fragmentos de Okazaki. Se inicia en la burbujas
de replicación (puede haber unas 100 a la vez.
• Intervienen enzimas similares a los que actuan en
las células procariontes y otros enzimas que han de
duplicar las histonas que forman parte de los
nucleosomas. Los nucleosomas viejos permanecen
en la hebra conductora.
 Transcripción del ADN
• El proceso de síntesis de ARN o transcripción, se efectúa haciendo una
copia complementaria de un trozo de ADN. El ARN se diferencia
estructuralmente del ADN en el azúcar, que es la ribosa y en una base,
el uracilo, que reemplaza a la timina. Además el ARN es una cadena
sencilla.

• Genes constitutivos (House keeping genes) y reguladores.

– La información contenida en el ADN se copia en trozos ó
segmentos. Esta información se trasncribe y la información del DNA
pasa al RNA. Hay gens que se expresan en todas las células y se
dice que son esenciales (establecidos, constitutivos) y otros que
sólo son usados en ciertas situaciones (reguladores). En los
organismos hay gens que se expresan en unos sitios y en otros no,
estADNo regulados a muchos niveles.
• ARN polimerasa y rNTPs (nucleósidos trifosfatos )
– El nivel de transcripción es importante. Este incide en la enzima
ARN polimerasa que une monómeros (ribonucleótidos) del entorno
y forma el ARN. Ella necesita ATP, CTP, GTP y UTP, nucleósidos
trifosfatos (rNTPs) en forma activada que hacen de molde. Como ha
de unir en un orden necesita una plantilla, por lo que se dice es
DNA dependiente. Coloca el ATP enfrente de la timina y así con los
otros. No necesita cebador porque añade ribonucleótidos igual que
la DNA polimerasa en la dirección 5' à 3' uniéndose al OH de
nucleótido anterior. El RNA tiene un extremo (5') con fosfato y otro
con OH (3'). La cadena que copia es la codificante y el molde la
complementaria.

• promotor
– La polimerasa se une a una secuencia llamada promotor que
normalmente está delante de la secuencia que especifica el RNA. El
primer nucleótido que está en el RNA (incluyendo en el promotor)
es el +1 y todas las bases se toman desde ese punto de referencia,
delante - y detrás +. El resto del promotor no se transcribe.
 Video
Capítulo 4
Seccion 4.3
Mecanismo básico de
transcripción
 Regulación de Transcripción
Procariotas
El ADN procariota se organiza en paquetes coherentes denominados
OPERONES, en los cuales se encuentran los genes para funciones
interrelacionadas. El modelo operón de la regulación de los genes procariotas fue
propuesto en 1961 por Francois Jacob y Jacques Monod. El fenómeno que inspiró
la idea fue el de la inducción enzimática. La transcripción se detiene colocando
un obstáculo entre el promotor y los genes estructurales; ese obstáculo es el
operador (una secuencia corta de ADN).
• Un operón consiste en:
• un operador: controla el acceso de la ARN polimerasa al promotor
• un promotor: donde la ARN polimerasa reconoce el sitio de inicio de la
transcripción
• un gen regulador: controla el tiempo y velocidad de transcripción de otros genes
• un gen estructural: codifican las enzimas relacionadas o las proteínas
estructurales
• El gen regulador codifica para una proteína que se pega al operador,
obstruyendo al promotor (y por lo tanto a la transcripción), del gen estructural.
El regulador no tiene que estar adyacente a los otros genes en el operón. Cuando
se remueve la proteína represora, puede producirse la transcripción. El operador
y el promotor son sitios de unión sobre el ADN y no se trasncriben.
• Los operones son inducibles o reprimibles, de acuerdo al mecanismo de control.
En Escherichia coli se identificaron setenta y cinco operones diferentes que
controlan 250 genes estructurales. Tanto la represión como la inducción son
ejemplos de control negativo, dado que la proteína represora detiene (" turn off ")
la transcripción.

• La lactosa, el azúcar de la leche, es hidrolizada por la enzima beta-galactosidasa.

Esta enzima es inducible: solo se produce en grandes cantidades cuando la
lactosa, el sustrato sobre el cual opera, esta presente. En cambio, las enzimas para
la síntesis del aminoácido triptófano se producen continuamente a menos que el
triptófano este presente en el medio de cultivo, se dice en este caso que las
enzimas sintetizadoras de triptófano están reprimidas.
 Video
Capitulo 10
Seccion 10.2
lac operon
 Transcripcion en Eucariotes
• Genes en eucariotas tienen intrones
• Hay tres clases de ARN:
– mARN: ARN mensajero
– tARN: ARN de transferencia
– rARN: ARN ribosomal
 Video
Capitulo 4
Seccion 4.3
Ciclo de vida de mARN
Procesamiento dde ARN
(Splicing)
 Video
Capitulo 11
Seccion 11.2
Procesamiento de mARN
Traduccion- De ARN a Proteinas
• Sintesis de proteinas se lleva a cabo en lso
ribosomas
• Los ribosomas tiene dos unidades:una
liviana y una pesada
 Video
Capitulo 4
Seccion 4.5
Sintesis de proteinas
Donde está la informacion genética??

• Codificada en la secuencia de pares de bases

nitrogenadas!!!!

ATGCATGCATGCCATGCATG
Donde está la informacion genética??
• La estructura de un determinado ADN está definida por
la "secuencia" de las bases nitrogenadas en la cadena de
nucleótidos, residiendo precisamente en esta secuencia
de bases la información genética del ADN.
Donde está la informacion genética??
• El orden en el que aparecen las cuatro bases a lo largo
de una cadena en el ADN es, por tanto, crítico para la
célula, ya que este orden es el que constituye las
instrucciones del programa genético de los
organismos.

NO ES LO MISMO ATGCA

QUE ACGTA
• Conocer esta secuencia
de bases, es decir,
secuenciar un ADN
equivale a descifrar su
mensaje genético.
• Este mensaje necesita
ser decodificado. El
codigo usado por la
célula se conoce como
Codigo Genético.
 El Código Genético
• Cuatro pares de • Codifican los 20
bases
(A,C,T,G) en aminoacidos en
tripletas en el las proteinas
ADN
•La combinacion de tres pares de
bases codifica para un aminoácido
•Ejemplo:
•ACC codifica Treonina
•AAC codifica Asparraguina

•Existen 64 combinaciones de
pares de bases para codificar 20
aminoacidos. Por eso se dice que
el codigo genetico es degenerado
•Ejemplo:
•CCA y CCG codifican
Prolina
 Como se
intepreta la
informacion
genética??
Transmision de la informacion
La informacion
contenida en el ADN
se encuentra pues
empaquetada en lo
cromosomas. Existen
dos tipos de ADN:
El nADN que sufre
recombinacion y el
mtADN que se hereda
por via materna y no
se recombina
Síntesis de Proteínas
Transcripcion
Traduccion
Transferencia
Sintesis de
Proteinas
Activacion
Funcion
Proteinas
•Formadas por secuencia
de aminoacidos.

•Las proteinas son las

biomoléculas encargadas
de llevar a cabo las
funciones celulares:
estructurales, enzimaticas,
comunicación, etc.
 Por lo tanto…..
• Un cambio en • Significa un
la secuencia cambio en la
del ADN proteina

ACT CGA CTA Thr Arg Leu

ACT TGA CCA Thr Trp Pro

Se conoce como
MUTACION!
 Anemia
Falciforme
Ejemplo de
enfermedad
causada por una
mutación en el
ADN
Cambio de
Adenina a •Hemoglobina normal: •Hemoglobina anormal:
Timina en la •Acido glutamico •Valina en
posicion 17 del en posición 6 posición 6
ADN
Sintesis de DNA..como?
• Kary Mullis en 1985
gana nobel por la
implementacion de la
tecnología de PCR
para facilitar la
identificacion de
caracteres moleculares
 EQUIPOS
• Termocicladores
• Cámaras de
electroforesis
• Sistemas de
fotodocumentación
• Secuenciadores
automáticos
• Computadoras
 Heads

Tails

Grease Soap Grease and Soap

La Reaccion en Cadena de la
Polimerasa
¿Qué sucede dentro del tubito?
• La doble hélice es separada en
dos cadenas de nucleótidos, a
los que se incorpora un
fragmento conocido de ADN
en un región predeterminada;
la enzima polimerasa entonces
adiciona los nucleótidos
presentes en el medio de
forma complementaria y en
dirección 5’-3’, formándose
dos nuevas cadenas, repitién
dose estos pasos varias veces
en intervalos llamados ciclos.
Electroforésis
 ELECTROFORESIS
• GELES DE
AGAROSA O
POLIACRILAMIDA
• Se aprovecha el hecho
de que el DNA, tiene
carga - y migra hacia
el polo +
• Donde se pueden
observar las bandas o
fragmentos del tamaño
amplificado.
 PCR MULTIPLES
• ELECTROFORESIS
• TAMANOS
DIFERENTES
• PESOS
DIFERENTES
• MUTACIONES O
CAMBIOS
PCR CUANTITATIVAS
 RFLP’S
• FRAGMENTOS
RESTRICTOS
MEDIANTE
ACCION
ENZIMATICA
• PATRONES DE
ACUERDO A LA
SECUENCIA
 Secuenciacion
• Equipos
automatizados han
facilitado los avances
de las investigaciones
sobre secuenciacion e
identificacion de
especies
Secuenciación Automática
 ANALISIS DE DATOS
• Las herramientas
interpretativas
dependen del
problema
biológico que se
intenta resolver y
de la naturaleza de
la información
genética
 Algunos Problemas Potenciales de la PCR
***Equipo y Técnicos***
◎ ¿Verificar periódicamente su máquina de PCR?
– para obtener una correcta y eficiente amplificación
◎ ¿Está su técnico de laboratorio entrenado correctamente ?
– para evitar errores humanos

***Reactivos de la PCR ***

◎ Falso Negativo debido a: ◎ Falso Positivo debido a:
– Mutación en la Secuencia Viral – Reacción Cruzada
– Pobre diseño o baja calidad – Contaminación Cruzada
– Extracción de DNA pobre ◎ Falta de monitoreo interno del
sistema para asegurar reactivos de
◎ Pérdida de la Capacidad
calidad y eficiencia en la PCR para
Cuantitativa
asegurar la cualidad y la cantidad
de productos que necesitarian.
 La Posibilidad de un falso negativo dentro del
Proceso de la PCR
Plantilla de DNA
Falla en la extracción:
• Demasiado inhibidor de la PCR
• Demasiado DNA o proteina 90 - 95°C Temperatura de Denaturalización
• DNA insuficiente inapropiada
• Error Estadístico • Reduce a la mitad la vida
media de la enzima
Falla en el alineamiento
Temperatura de alineamiento
• Cebador mal diseñado 37 - 65 °C inapropiada
• Reacción no específica
• Reduce la eficiencia de
• Cadena variante
alineamineto
• Generación de reacciones no
específicas
Fallas en la extensión
• Pobre actividad enzimática 70 - 75 °C
• Baja calidad de los
dinucleotidos (dNTP’s)
• Propiedades de la muestra
• Sistema tampón inapropiado
 Estrategias para eliminar los resultados falsos positivos
•Introduce un control interno
•Medida de la OD 260/280
•Estudio estadístico Plantilla de ADN
Fallas en la extracción de ADN:
• Muchos inhibidores de la PCR
• Mucho DNA o mucha proteina 90 - 95°C Temperatura de desnaturalización
• No hay suficiente ADN inapropiada
• Error estadístico • Reducción de la vida media
de la enzima
•Verificar periodicamente los
Falla en el alineamiento •termocicladorres
Temperatura de alineamiento
• Cebador mal diseñado
•Conocimiento del diseño de los 37 - 65°C inapropiada
• Reacción no específica
cebadores o primers • Reduce la eficiencia del
• Cadena variantesobre la secuecia
•Conocimiento alineamiento
•Comparación de la homología con • Genera Reacciones no
La base de Genbank específicas
Fallas en la extensión
• •CC/SC
Pobredel
actividad 70 - 75°C
reactivoenzimática
• •Analisis
Baja calidad de los
de la secuencia
dinucleotidos
•Conocimiento (dNTP’s)
de la enzima
• Propiedades de la muestra
• Sistema tampón inapropiado
La Posibilidad de un falso positivo en el Procedimiento
Contaminación por:
•SOP para evitar la contaminación y técnicos bien
Proceso de Extracción entrenados
•Homogenizadores desechables
•Alícuotar los reactivos
Procedimiento de adición de •Reacción en un solo tubo
reactivos •Puntas libres de aerosoles
•Cuarto independiente para electroforésis
Productos finales de la PCR •Sistema independiente de pipetas para electroforésis
•Tratamiento para tubos y desechos de geles
•Introducir el sistema de dUTP y uracil DNA
glicosylasa
Reacción cruzada: •Tratamiento UV
•Sistema de ensayo flourescente
Otro patógeno relacionado •Busqueda de homologías en Genbank
•Buen diseño de cebadores
•Condiciones de reacción optimizadas
Plantilla no específica •Verificación de la PCR.
Proyecto del Genoma Humano
PGH
 Que es el PGH??
• Es una investigación internacional que busca
seleccionar un modelo de organismo humano por
medio del mapeo de la secuencia de su ADN.
• Se inicia oficialmente en 1990 con un programa
oficial que pretendia obtener la secuencia de los
80,000 a 100,000 genes que codifican la
informacion necesaria para mantener la vida.
 Genoma Humano
• Genoma: Número total de cromosomas que
llevan la información para elaboración d
proteinas requeridas por el organismo.

Genoma humano
– 23 pares de
cromosomas
 Genes
• Cada • Un gen es la unidad
cromosoma
esta formado fisica, funcional y
por genes. fundamental de la
herencia

• En el genoma
humano existen
80,000 a 100,000
genes
Cada Gen es un segmento de
ADN que codifica para una
proteína

•Existen
aproximadamente
3 billones de
pares de bases en
los 46
cromosomas
humanos
 Objetivos del PGH
• Identificar los aproximadamente 100.000 genes
humanos en el DNA.
• Determinar la secuencia de 3 billones de bases
químicas que conforman el DNA.
• Acumular la información en bases de datos.
• Desarrollar de modo rápido y eficiente tecnologías
de secuenciación.
• Desarrollar herramientas para análisis de datos.
• Dirigir las cuestiones éticas, legales y sociales que
se derivan del proyecto.
Porqué es importante el
Proyecto del Genoma
Humano?
•En Medicina
–El conocimiento del genoma humano permitirá
crear nuevos tratamientos para la cura de
enfermedades.
–Posibilidad de mejorar el diagnóstico de
enfemedades, deteccion temprana de
predisposiciones geneticas a enfermedades, el
diseño racional de drogas y terápia génica
• En bioarqueología, evolucionismo y
migración humana
– Tiene su utilidad en las mutaciones de
linaje, migraciones de diferentes grupos
poblacionales basados en el DNA
mitocondrial, mutaciones del
cromosoma. Y, además de comparar los
cambios evolutivos con eventos
históricos.
• En identificación forense
– Para potenciales sospechosos en los cuales el
ADN puede conducir a liberar a personas
que fueran acusadas de crímenes
injustamente, para identificar víctimas de
catástrofes, paternidad y otras relaciones
familiares.
• En agricultura, ganadería y
bioprocesamientos
– Se utiliza para mejorar la resistencia de
cultivos ante insectos, sequías, para hacerlos
más productivos y saludables igualmente para
producir animales más saludables y
nutritivos, elaborar biopesticidas, vacunas
comestibles y nueva limpieza del medio
ambiente de plantas como tabaco.
Sin embargo…

A pesar de los beneficios…

Hay problemas:
•Sociales
•Eticos
•Economicos
•Morales
Los problemas derivados de la
investigación genética son la equidad en
su uso por parte de aseguradoras, seguro
social, escuelas, agencias de adopción,
cumplimiento de la ley, instituciones
militares. A quien pertenece la potestad
del control?
Otro problema es el impacto psicológico y
la estigmatización debido a diferencias
individuales y acerca de cómo influirá a la
sociedad el determinismo genético. El
personal que cuida de la salud aconsejará a
los padres acerca de los riesgos y
limitaciones de la tecnología genética. Qué
tan confiable será, además de útil, la
prueba genético fetal?
Respecto a la terapia génica usada para
tratar o curar trastornos genéticos, se plantea
la pregunta acerca de qué es una
discapacidad o trastorno y quién decide
acerca del mismo.
Las dishabilidades son enfermedades?
Deben ser curadas o prevenidas?
El mejoramiento génico incluye el uso de terapia
genética para suplir caracteristicas como la altura
que un padre podría querer en sus hijos, pero que
no significa la prevención de una enfermedad, sino
la búsqueda de un ser perfecto acorde a un ideal.
Si ésto se vuelve una práctica común, como podría
afectar la diversidad genética?

Finalmente, que consecuencias sociales traería a la

humanidad?