Antimetabolitos

Introducción
Los antimetabolitos pueden ser definidos como análogos de compuestos de
origen natural que interfieren con su formación o utilización, inhibiendo rutas
metabólica esenciales.
Aunque las enzimas inhibidas por los antimetabolitos se encuentran
presentes en las células normales, alguna selectividad es posible debido a la
alta tasa de división que exhiben las células cancerígenas.
La mayoría de los antimetabolitos interfieren con la síntesis de ácidos
nucleicos por una variedad de mecanismos, entre los que se cuentan:
A) Competencia por los sitios de unión de las enzimas que participan en
procesos biosintéticos esenciales.
B) Incorporación en los ácidos nucleicos, los cuales inhiben su
funcionamiento normal y gatilla el proceso de apoptosis.
 Introducción

A causa de este modo de acción, la mayoría de los antimetabolitos

tienen una alta especificidad en el ciclo celular
 Antimetabolitos de Pirimidinas

Existe un gran número de antimetabolitos basados en pirimidinas.

Usualmente están relacionados estructuralmente a los sustratos endógenos
que ellos antagonizan. La modificación estructural puede encontrarse sobre el
anillo de pirimidina o, si está presente, sobre el grupo azúcar pendiente.
Sus posibles mecanismos de acción son diversos y pueden involucrar:
a) Inhibición de quinasas
b) Inhibición de las enzimas involucradas en la biosíntesis de pirimidinas
c) Incorporación en el ARN o ADN y subsecuentemente causar lectura errónea
d) Inhibición de la ADN polimerasa
Biosíntesis de Nucleótidos de Pirimidina
 5-Fluorouracilo

Uno de los primeros antimetabolitos preparados fue 5-fluorouracilo, una

pirimidina con modificaciones en el anillo. Fue diseñada por Heidelberger
en 1957. El desarrollo de este compuesto se basó en la observación de que
tumores hepáticos de rata utilizaban preferentemente uracilo en vez de
ácido orótico para la biosíntesis de pirimidinas, lo cuál sugirió que el
metabolismo de uracilo podría ser relevante como blanco antitumoral.
 Bioactivación de 5-Fluorouracilo

In vivo el 5-fluorouracilo debe ser activado por conversión al ácido

5-fluoro-2’-desoxiuridílico. En general esto ocurre por conversión
de 5-fluorouracilo a 5-fluorouracilo ribósido el cual es entonces
transformado directamente a 5-fluoro-2’-desoxiuridinmonofosfato
(5-FdUMP)
Ciclo de Timidilato
 Ciclo Catalítico de Timidilato Sintetasa

La síntesis de timidina a partir de uracilo involucra a la enzima timidilato

sintetasa (TS).
El ciclo catalítico de TS involucra un proceso de 2 etapas. Inicialmente, dUMP se
une a su sitio de reconocimiento e induce un cambio conformacional que abre
un sitio de unión adyacente para el cofactor N5,N10-metilen-tetrahidrofolato.
Posteriormente un residuo de cisteína en el sitio activo efectúa una adición de
Michael sobre el sistema carbonilo α,β insaturado de dUMP. El ataque
nucleofílico del enolato formado sobre el catión metileniminio, generado desde
el cofactor, da lugar a un complejo ternario. En seguida una reacción de β
eliminación libera tetrahidrofolato y da origen a un intermediario metilén
binario. El último paso de la secuencia involucra reducción de este complejo por
transferencia de hidruro desde el tetrahidrofolato dando lugar a desoxitimidina
monofosfato (TMP) y dihidrofolato. La reacción total involucra la oxidación de
N5,N10-metilen-tetrahidrofolato a dihidrofolato, el cual debe ser reciclado por
reducción por dihidrofolatoreductasa
Mecanismo de Inhibición de TS
 Mecanismo de Inhibición de TS

El átomo de Flúor (1,47 Å) y el átomo de hidrógeno (1,20 Å) tienen

radios de van der Waals muy similares, lo que permite que 5-
FdUMP se una a TS en el mismo sitio y con la misma afinidad que
dUMP. El fuerte efecto electroatractor del átomo de flúor
incrementa la electrofilia del sistema α,β insaturado, facilitando de
esta manera la adición 1,4 conjugada de la enzima. Sin embargo, la
reacción de β eliminación no es posible debido a la presencia del
átomo de flúor en C-5. Estabilizando por lo tanto el complejo
ternario.
 Mecanismo de Inhibición de TS

Esta inhibición de la enzima timidilato sintetasa (TS) puede conducir a

una deficiencia de timidina, la cuál es esencial para la síntesis de ADN.
Reacciones metabólicas adicionales pueden llevar a la formación de
intermediarios de 5-FU, los cuales serán incorporados en el ADN (5-
FdUTP) y ARN (5-FUTP) y pueden contribuir a las acciones de la droga.
La inhibición de TS y la incorporación de metabolitos de 5-FU en el ADN
resultan en la estabilización de p53, un supresor tumoral proteico que
mantiene la integridad del ADN por activación de genes que detienen el
ciclo celular en respuesta a daño en el ADN o gatillan apoptosis.
Mecanismo de acción antitumoral de 5-FU
Profármacos de 5-FU
Profármacos de 5-FU
Profármacos de 5-FU
 Capecitabina

Capecitabina es un profármaco de 5-FU diseñado para ser activado

específicamente en las células tumorales por un proceso en cascada que
involucra 3 enzimas. A causa del incremento en la lipofilia asociado a la
presencia de la cadena pentiloxicarbonil, este profármaco es rápidamente
absorbido inalterado después de administración oral.
Bioactivación de Capecitabina
 Modulación de la Actividad de 5-FU

Grandes esfuerzos se han realizado para modular la actividad de 5-FU, los cuales
se han centrado en 1) disminuir su degradación, 2) aumentar su potencia como
inhibidor de TS y 3) incrementar la activación de 5-FU
Más del 80% de la droga administrada es degradada en el hígado por la
dihidropirimidina deshidrogenasa (DPD), la cuál reduce el doble enlace de 5-FU
para dar dihidrofluorouracilo (DHFU). Diferentes aproximaciones han sido
desarrolladas para mejorar la bioestabilidad de 5-FU. La primera consiste en la
coadministración de una gran cantidad de uracilo, la cual satura la enzima DPD.
La segunda es la coadministración de 5-FU con inhibidores de la DPD tales
como, 5-cloro-2,4-dihidroxipiridina (CDHP, gimestat) y eniluracilo (5-
etiniluracilo)
Modulación de la Actividad de 5-FU
Modulación de la Actividad de 5-FU
Por otra parte, la acción de TS requiere la presencia de N5,N10-metilen-
tetrahidrofolato. Por esta razón la coadministración de precursores de este
cofactor incrementa la citotoxicidad de 5-FU en muchas líneas celulares de
cáncer.
 Inhibidores de Dihidrofolatorreductasa

El ácido fólico y sus metabolitos son coenzimas de muchas

transformaciones bioquímicas. Un ejemplo importante es su
participación en la transferencia de una unidad de carbono en la síntesis
de novo de ácido timidílico y nucleótidos de purina. En los mamíferos, el
ácido fólico es captado de la dieta y reducido a THF por la enzima
dihidrofolatorreductasa (DHFR) en dos etapas, utilizando NADPH como
cofactor. Transformaciones posteriores conducen a N5,N10-metilén-
tetrahidrofolato; N5,N10-metenil-tetrahidrofolato; 5-
formiltetrahidrofolato y 10-formiltetrahidrofolato, los cuales son
conocidos ácidos folínicos. La inhibición de DHFR conduce a muerte
celular debido al rol esencial que cumplen estos últimos en la síntesis de
timidilato y bases púricas.
 Inhibidores de Dihidrofolatorreductasa

Los inhibidores más potentes de la DHFR son los análogos del

ácido fólico, los que difieren del ligando natural en que poseen
una unidad 2,4-diaminopirimidina como por ejemplo
aminopterina (AM) y metotrexato (MTX). Los inhibidores en los
cuales la cadena lateral termina en un residuo de ácido glutámico
son conocidos como antifolatos clásicos. Otros inhibidores con
sustituyentes lipofílicos son conocidos como antifolatos no
clásicos.
 Inhibidores Clásicos de Dihidrofolatorreductasa

Los inhibidores metotrexato y aminopterina fueron diseñados por reemplazo del

grupo carbonilo en C-4 del sustrato natural (DHF) por un grupo amino. MTX es
casi 3 unidades de pKa más básico que el ácido fólico debido a la presencia de un
grupo amino electrodador conjugado con el fragmento básico guanidina, por lo
tanto se une en un estado protonado. La interacción electrostática y un puente
de hidrógeno adicional que involucra al grupo amino conduce a que la unión a la
enzima sea 1000 veces más fuerte que la de ácido fólico.
Modos de Unión a la Enzima
Modos de Unión a la Enzima
La unión de metotrexato a DHFR es dependiente de la presencia del cofactor
NADPH. La toxicidad selectiva de metotrexato sobre las células cancerígenas se
debe parcialmente a diferencias en la razón de NADPH/NADH con respecto a las
células normales.
Aminopterina fue el 1º antimetabolito en ser introducido en la quimioterapia del
cáncer, pero luego se demostró que metotrexato es menos tóxico y posee
propiedades farmacocinéticas superiores, siendo este producto el único
antifolato en uso clínico.
Metotrexato entra en la célula a través de un carrier de folatos y es
poliglutamatado, incrementando de esta manera su retención intracelular.
Disminución en la poliglutamación se observa en células normales comparada
con células tumorales. Este hecho puede explicar en parte la selectividad de
metotrexato.
Inhibidores No Clásicos de Dihidrofolatorreductasa
La supresión de la cadena de ácido glutámico conduce a compuestos que no son
sustratos para el sistema de transporte activo de folato, los cuales penetran en la
célula por difusión pasiva. Tienen la ventaja de ser activos en células tumorales
resistentes a metotrexato por defectos en el sistema de transporte. Por otra
parte la ausencia de la cadena de ácido glutámico previene la poliglutamación y
por lo tanto estos compuestos no son retenidos en la célula.
Entre estos compuestos, trimetrexato es principalmente utilizado
en el tratamiento de neumonías por pneumocystis carinii y
Toxoplasma gondii, aunque también es usado en el tratamiento de
ciertos cánceres, incluyendo el de colon. Piritrexim está siendo
ensayado en tratamiento de psoriasis, pneumonia y varios tipos de
cáncer.
 Nucleósidos de Pirimidina

Los principales compuestos anticancerígenos pertenecientes a este grupo son

citosin o azacitosin nucléosidos con un anillo de ribosa modificado
 Citarabina

Citarabina es un ejemplo de un antimetabolito de pirimidina en el cuál el grupo

azúcar ha sido modificado. Entre los nucleósidos derivados de arabinosa,
citarabina (grupo 2’-OH con configuración β) es útil en varias leucemias.
Citarabina debe primero ser convertida en su derivado trifosfato. Es el mejor
ejemplo de droga antitumoral que actúa específicamente en la fase S del ciclo
celular. A causa de esta especificidad, una prolongada exposición a
concentraciones citotóxicas es crítica para lograr máxima actividad.
Mecanismo Citotóxico de Citarabina
El cambio en la configuración del carbono 2’ resulta en un compuesto con
múltiples actividades. En primer lugar citarabina trifosfato inhibe la conversión
de ácido citidílico a ácido 2’-desoxicitidílico. También inhibe a ADN polimerasa
dependiente de ADN. Finalmente, citarabina causa un error de codificación
después de su incorporación en ADN o ARN. Citarabina se encuentra disponible
como un polvo estéril soluble en agua para uso intravenoso, intratecal y
subcútaneo. Uno de los principales inconvenientes de citarabina es su corta vida
media debido a la rápida desaminación a su análogo uracilo
(arabinofuranosiluracilo) catalizada por citidin desaminasa.
Metabolismo de Citarabina
 Gemcitabina

Gemcitabina posee 2 átomos de flúor en lugar de el grupo hidroxilo y el átomo

de hidrógeno normalmente presentes en el grupo ázucar de citosina. Exhibe
excelente actividad antitumoral in vivo contra una amplia variedad de tumores
sólidos murinos. Gemcitabina debe ser fosforilada a su análogo trifosfato, la cuál
puede ser incorporada en el ADN. Es metabolizada en gran extensión, siendo su
principal metabolito el análogo uracilo inactivo, 2’-desoxi-2’,2’-difluorouridina.
Activación e Inactivación de Gemcitabina
 Antimetabolitos de Purinas

Los antimetabolitos de purinas al igual que los antimetabolitos de pirimidinas

tienen múltiples modos de acción.
En este sentido, el primer paso irreversible en la biosíntesis de novo de purinas
involucra el desplazamiento nucleofílico de un grupo pirofosfato del grupo
fosforibosilpirofosfato por parte de una molécula de amoníaco generada por
hidrólisis de glutamina. Ambas reacciones son catalizadas por la
fosforibosilpirofosfato amidotransferasa.

Los principales inhibidores de esta enzima son las tiopurinas, las que actúan
através de mecanismos de retroalimentación. Estas drogas antitumorales tienen
un complejo mecanismo de acción, que involucra la inhibición de varias enzimas
relacionadas a la biosíntesis de purinas e incorporación errónea en los ácidos
nucleicos.
Biosíntesis de Nucleótidos de Purina
 6-Mercaptopurina y 6-Tioguanina

Entre los derivados de purinas no naturales evaluados como agentes

antitumorales, 6-mercaptopurina y 6-tioguanina son los más activos. Estos
compuestos se encuentran entre los fármacos antitumorales más antiguos en
uso clínico. MP es utilizado en leucemias linfoblásticas y mieloblásticas; y la más
tóxica TG es empleada en el tratamiento de leucemia no linfocítica aguda.
6-mercaptopurina requiere el metabolismo intracelular por hipoxantin-guanin
fosforibosil transferasa (HGPRT) para ser transformada en ácido tioinosínico, el
cuál exhibe citotoxicidad específica en la fase S del ciclo celular. La activación
intracelular conduce a la inhibición de varias enzimas que pertenecen a la ruta
biosintética de purinas y a la incorporación errónea de nucleótidos en el ADN y
ARN. La droga es convertida in vivo al correspondiente ribonucleótido, 6-
tioinosinato, por la enzima HGPRT. 6-Tioinosinato ha demostrado ser un
poderoso inhibidor de la conversión de 5-fosforibosil pirofosfato en 5-
fosforibosilamina, compuesto involucrado en biosíntesis de purinas. Además 6-
tioinosinato inhibe la conversión de ácido inosínico a ácido adenílico tanto como
la oxidación de ácido inosínico a ácido xantílico. Por lo tanto, la acción total de 6-
MP es la inhibición de la síntesis de novo de purinas.
El mecanismo de acción de 6-MP y su anabolito 6-tioinosinato es sólo una parte
de la actividad, ya que 6-tioinosinato puede ser posteriormente transformado en
su derivado di y trifosfato. Ambos compuestos son inhibidores enzimáticos, y el
derivado trifosfato puede ser utilizado en la síntesis de ADN y ARN en lugar de
guanina y una vez incorporado, inhibir la elongación de la cadena. Finalmente 6-
tioinosinato puede ser sustrato de 3-adenosilmetionina y ser convertido a 6-
metiltioinosinato, el cual es responsable de algunas de las propiedades de 6-MP.
 Metabolismo de 6-Mercaptopurina
La principal ruta degradativa de 6-MP es su S-metilación catalizada por la enzima
tiopurinametiltransferasa (TPMT) y su oxidación al 8-oxo derivado y
posteriormente al ácido 6-tioúrico catalizada por xantin oxidasa.
6-Tioguanina (6-TG) es un antimetabolito estructuralmente relacionado a 6-
mercaptopurina. Tal como 6-MP, 6-TG es primero ribosilada al derivado
monofosfato y entonces transformada en sus derivados di y trifosfato. Cada uno
de estos intermediarios inhibe una amplia variedad de enzimas y procesos que
generalmente correlacionan con la actividad previamente descrita para 6-MP.
Por otra parte el derivado trifosfato ribosilado puede ser incorporado en el ARN
o, después de reducción al 2’-desoxi derivado, en el ADN.