UNIVERSIDAD ESTATAL AMAZÓNICA

Unidad de Organización Curricular: Básica.

Campo de Estudio: Tronco común.
INFORME DE PRÁCTICAS DEL COMPONENTE PRÁCTICO-
EXPERIMENTAL
Nombre del Estudiante: NAJELY BRAVO
Asignatura: BIOQUÍMICA Calificación:

Fecha del informe: 04/08/2023

N° Práctica: 3
Título de la Práctica: IDENTIFICACION DE
BIOMOLÉCULAS ENERGÉTICAS Y NITROGENADAS,
EN DIFERENTES MUESTRAS (Determinación de proteínas
mediante el método Kjeldahl)
Introducción Las proteínas son un componente abundante en todas las células, y

casi todas excepto proteínas de almacenamiento son

importantes para las funciones biológicas y la estructura

celular. Las proteínas de los alimentos son muy complejas.

Muchos han sido purificados y caracterizados. Las proteínas

se pueden clasificar por su composición, estructura,

función biológica o propiedades de solubilidad. Por ejemplo,

las proteínas simples contienen sólo aminoácidos tras la

hidrólisis, pero las proteínas conjugadas también

contienen componentes no aminoácidos. Las proteínas

tienen conformaciones únicas que podrían ser alteradas por

desnaturalizantes tales como calor, ácido, álcali, urea

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8M, guanidina-HCl 6M, disolventes orgánicos y detergentes.

La determinación de la proteína en una muestra es basada en

la determinación de nitrógeno. Generalmente es realizada

por el proceso de digestión Kjeldahl (autor del método:

Johan Kjeldahl). Este método determina el contenido de

nitrógeno orgánico, o sea, el nitrógeno proveniente de otras

fuentes además de la proteína, tales como: nucleicos,

alcaloides, lípidos y carbohidratos nitrogenados. Como estos

otros componentes generalmente están presentes en

cantidades menores, el método Kjeldahl es un método

químico útil en la determinación de proteína.

Durante el proceso de descomposición ocurre la

deshidratación y carbonización de la materia orgánica

combinada con la oxidación de carbono a dióxido de

carbono. El nitrógeno orgánico es transformado a amoniaco

que se retiene en la disolución como sulfato de amonio. La

velocidad del proceso puede ser incrementarse adicionando

sales que abaten la temperatura de descomposición (sulfato

de potasio) o por la adición de oxidantes (peróxido de

hidrógeno, tetracloruro, persulfatos o ácido crómico) y por la

adición de un catalizador.

(Nollet, 1996).

El método de Kjeldahl consta de las siguientes etapas:

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 Desarrollo o MATERIALES Y MÉTODOS:
procedimiento
MUESTRAS:

· Muestra de alimento

EQUIPOS:

· Balanza

· Destilador.

· Unidad de digestión

Equipo de valoración.

REACTIVOS:

· Ácido sulfúrico

· NaOH 60%

· HCl 0.1 N.

PROCEDIMIENTO:

DIGESTIÓN

· Pesar la muestra y registrar.

· Introducir la muestra en un matraz Kjeldahl.

· Colocar en el aparato de digestión hasta que la

muestra tome un color verdoso.

· Retirar el matraz cuando quede completamente

digerido.

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 DESTILACIÓN:

· Colocar la muestra en la parte superior.

· Se añaden 5 mL de hidróxido de sodio al 60 % para

neutralizar el pH de la muestra y convertir el NH4 + en

NH3.

· Una corriente de vapor de agua se burbujea en la

muestra y arrastra el NH3 formado.

· Muestra ya digerida con ácido sulfúrico 98 %

· El NH3 se captura en 50 mL de ácido bórico al 4 %

conteniendo 6 - 7 gotas de indicador· Cuando el NH3

reacciona con el ácido bórico, la solución vira de rojo violeta

a verde (pH 4,4-5,8) debido al cambio del indicador al pasar

de la forma ácida a la forma básica. · En la solución de ácido

bórico se capturan alrededor de 150 mL del condensado.

Esto puede llevar aprox. 5 minutos

VALORACIÓN:

· Valorar con HCl 0,1 N hasta que la solución tenga un

ligero color violeta. Con la concentración y el volumen de

HCl gastado en la valoración, podemos calcular el número

de moles de átomos de nitrógeno en la muestra y luego el %

de proteína.

Las principales reacciones de cada etapa por el método

Resultados
micro Kjeldahl

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Consiste en tres etapas:

Digestión: el objetivo es romper todos los enlaces de

nitrógeno de la muestra y convertir todo en nitrógeno unido

orgánicamente en iones amonio (NH4+). El carbono

orgánico y el nitrógeno forman dióxido de carbono y H2O.

La materia orgánica se carboniza dando lugar a la formación

de una espuma negra. Al transcurrir la digestión, la espuma

se descompone y finalmente se convierte en un líquido claro

que indica que la reacción química ha finalizado. La muestra

se mezcla con ácido sulfúrico a temperatura entre 350 y 380

ºC. cuanto más alta sea la temperatura, más rápido será el

proceso de digestión. La digestión también puede acelerar

con la adición de sales y catalizadores. Se añade ácido

sulfúrico de potasio para así aumentar la velocidad y la

eficiencia del procedimiento de digestión. También podemos

añadir agentes oxidantes para mejorar aún más la velocidad.

Al finalizar la digestión, se deja enfriar la muestra a

temperatura ambiente, se diluye con H2O y se trasvasa a la

unidad de destilación.

Destilación: tras este proceso los iones de amonio (NH4+) se

convierten en amoniaco (NH3) mediante la adición de un

álcali (NaOH). El amoniaco (NH3) es transportado al vaso

receptor por medio de una corriente de vapor de agua. El

vaso receptor para el destilado se llena con una solución de

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ácido bórico formando iones amonio disuelto.

 La solución absorbente más comunes es el ácido

bórico [B(OH)3] en solución acuosa al 2-4%. El

amonio es capturado cuantitativamente por la

solución de ácido bórico formando iones amonio

solvatados.

 Así mismo puede utilizarse otros ácidos, dosificados

con precisión, como el ácido sulfúrico o clorhídrico

para capturar el amonio en forma de iones solvatados.

Valoración:

La concentración de los iones amonio capturados puede

determinar por medio de dos tipos de valoracion:

Cuando se utiliza el ácido bórico como solución absorbente,

posteriormente se lleva a cabo una valoración acido-base

utilizado una solución estandarizada de ácido sulfúrico o

clorhídrico y una mezcla de indicadores. El rango de

concentración de la solución utilizada varía entre 0,001N a

0,5N dependiendo de la cantidad de iones amonio presentes.

El punto final de la valoración también se pueden

determinar potenciométrica mente con un electrodo de pH.

Esta coloración se llama valoración directa.

Cuando se utiliza una solución valorada de ácido sulfúrico

como solución absorbente, el ácido sulfúrico residual (es

decir, el exceso que no reacciona con NH3) se valora con una

solución estandarizada de hidróxido sódico y la cantidad de

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amoniaco se calcula por diferencia. Esta valoración se llama

valoración indirecta o por retroceso.

“ML blanco” se refiere al mililitro del álcali consumidor en

la valoración por retroceso de un blanco, si la solución

receptora es ácido clorhídrico o ácido sulfúrico

estandarizados, o se refiere a mililitros de solución valorada

de ácido para titular un blanco si la solución receptora es

ácido bórico.

REACTIVOS:

Ácido sulfúrico concentrado

Sulfato de cobre pentahidratado

Hidróxido de sodio 605

Sulfato de sodio anhidro

Ácido bórico al 2%

Solución de ácido clorhídrico 0.1N

Indicador Shiro Tashiro

Para la aceleración del proceso digestivo ¿Qué reactivos

puedo utilizar?

La digestión también se puede acelerar con la adición de

sales y catalizadores. Se añade sulfato de potasio y sulfato de

sodio para aumentar el punto de ebullición de ácido

sulfúrico y se añaden catalizadores para aumentar la

velocidad y la eficiencia de procedimiento de digestión.

También se pueden añadir agentes oxidantes para mejorar

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aún más la velocidad.

El tiempo de digestión depende de la estructura química de

la muestra, la temperatura, las cantidades de sal sulfato y

catalizador.

¿Por qué se le denomina determinación de proteínas por

método micro Kjeldahl?

En los análisis de rutina se suele determinar el contenido de

nitrógeno total y expresar el conjunto de sustancias

nitrogenadas como “% de nitrógeno total” o como “% de

proteínas”. La estimación del contenido de proteínas de los

alimentos a partir de la determinación del contenido de

nitrógeno total no siempre es correcta, pero en general el

contenido de compuestos nitrogenados no proteicos es

pequeños comparado con el de las proteínas en la mayoría

de los alimentos.

La determinación de proteínas:

Digestión: el objetivo de este procedimiento es romper todos

los enlaces de nitrógenos de la muestra y convertir todo el

nitrógeno unido orgánicamente en iones amonio (NH4+). El

carbono orgánico y el hidrogeno forman dióxido de carbono

y agua. En este proceso la materia orgánica se carboniza

dando lugar a la formación de una espuma negra. Durante la

digestión, la espuma se descompone y finalmente se

convierte en un líquido claro que indica que la reacción

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 química ha terminado.

Proteínas (-N) + H2SO4(NH4)2SO4 + CO2 + H2

DESTILACION

Durante el proceso de destilación los iones amonio (NH4+)

se convierten en amoniaco (NH3) mediante la adición de un

álcali (NaOH). El amoniaco (NH3) es arrastrado al vaso

receptor por medio de una concentración de una corriente de

vapor de agua.

Valoración:

+ ¿+2H2O

2- ¿+2Na

H2SO4(residual) + 2NaOHSO4

La función del ácido bórico y en que etapa se emplea

Se emplea en la destilación

El NH3 se captura en ácido bórico al 4% contenido indicador

de Tashiro.

Cuando el NH3 reacciona con el ácido bórico, la solución

vira de rojo violeta a verde (pH4, 4-5,8) debido al cambio de

indicador al pasar de la forma acida a la forma básica.

En la solución de ácido bórico se captura el condensador.

Conclusiones El método de Kjeldahl es un proceso para determinar el

contenido en nitrógeno (proteínas) y consiste en tres

etapas, Digestión: El nitrógeno orgánico se convierte en

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 NH4.

Destilación: NH3 es destilado y recogido en un recipiente

receptor y Valoración: Se determina el Nitrógeno.

Olaya, D. G. (2017). Determinacion de Proteinas Por El Metodo de

Kjeldahl. SCRIBD.
https://es.scribd.com/document/350709514/Determinacion-
de-Proteinas-Por-El-Metodo-de-Kjeldahl
Bibliografía Villegas, E. R. (2021). DETERMINACIÓN DE PROTEINAS POR EL MÉTODO
DE KJELDAHL. Puno: STUDOCU. https://www.studocu.com/es-
mx/document/universidad-nacional-del-altiplano-de-puno/
ingenieria-agroindustrial/informe-5-determinacion-de-
proteinas-por-el-metodo-de-kjeldahl/14437313

Anexos

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Página 13 de 16
Página 14 de 16
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Firma del estudiante

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