Practica 8 Acidos Nucleicos

Prácticas de Biología General Mgr.
Soledad Bornás Acosta

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PRACTICA 7
ACIDOS NUCLEICOS
1. INTRODUCCIÓN
Los ácidos nucleicos son polímeros lineales que están constituidos por unidades básicas
llamados nucleótidos, los cuales están formados por bases nitrogenadas (púricas o
pirimidínicas), pentosas (ribosa o desoxirribosa) y un grupo fosfato.
El ácido desoxirribonucleico (ADN) es el más abundante y se encuentra a nivel del núcleo
y los ácidos ribonucleicos (ARN) actúan a nivel del citoplasma. El interés de estudio de
estos ácidos nucleicos permite elucidar el código genético, conocer el mecanismo y control
de la síntesis de proteínas y transmisión de la información genética de la célula madre a
las células hijas.
El ADn es el responsable de la transmisión de los caracteres hereditarios. Está formado
por dos cadenas de polinucleótidos, enrolladas en espiral a lo largo de un eje común. Las
dos cadenas de la doble hélice corren direcciones opuestas y están unidas por puentes de
hídrógeno a través de las bases nitrogenádas. La estructura secundaria que presenta el
ADN puede desnaturalizada por agentes químicos o físicos.
El primer paso en la el aislamiento y purificación del ADN, por lo general consiste en
homogeneizar las células y aislar los núcleos, utilizando una solución salina con EDTA
para evitar la degradación. Durante la extracción también se utiliza un detergente aniónico,
solución salina concentrada y solventes orgánicos, los cuales permiten liberar al ADN
mediante la lisis celular. Al final del experimento se precipita el material genético añadiendo
etanol.
2. OBJETIVOS
 Aislamiento del ADN por acción de soluciones salinas y solventes orgánicos.
3. MATERIALES Y METODOS
3.1. MATERIALES
3.1.1. Materiales biológicos
 Timo (res), hígado (pollo) o gónadas (choros)
3.1.2. Materiales de vidrio

 Tubos de ensayo
 Probeta esmerilada
 Vaso de precipitación
 Pipetas
 Pipeta pasteur
3.1.3. Reactivos
 Solución salina (NaCl 0,15M / EDTA 0,1M) pH=8
 Lauril sulfato de sodio 10% o 25% (detergente aniónico)
 NaCl 5M
 Solución de Cloroformo / Alcohol Isoamílico (24:1 v/v)
 Alcohol etílico 95% (helado).
3.1.4. Equipos y otros

 Centrífuga
 Gradilla
 Cocina eléctrica
 Bisturí
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 Mortero
 Termómetro
 Guantes quirúrgicos
 Gorra
 Mascarilla
4. PROCEDIMIENTO
 En un mortero homogenizar 2g de timo, hígado o gónadas con 10ml de Solución
salina (NaCl 0,15M / EDTA 0,1M) pH=8.
 Transferir el homogenizado a una probeta esmerilada de 50ml y mezclar con 2ml de
Lauril Sulfato de Sodio (detergente aniónico).
 Colocar la probeta en baño maría a 60°C durante 10 minutos.
 Añadir a la probeta 6ml de NaCl 5M y mezclar.
 Luego agregar la solución de Cloroformo / Alcohol Isoamílico (24:1 v/v) en un
volumen igual al obtenido en la etapa anterior. Agitar vigorosamente.
 Centrifugar a 10 000 rpm por 5 minutos. Separar el sobrenadante con cuidado y
colocarlo en un tubo de ensayo.
 Luego proceder a agregar dos volúmenes de alcohol etílico 95% (helado) lentamente.
Con una varilla de vidrio enrollar el ADN.
5. RESULTADOS
 Realizar los dibujos, debidamente rotulados e interpretar los resultados por cada paso
de la extracción del ADN.
6. CONCLUSIONES
7. CUESTIONARIO
7.1. ¿Cuál es el propósito de utilizar la solución salina (NaCl 0,15M / EDTA 0,1M) pH=8?
7.2. ¿Qué función cumple el detergente aniónico en el aislamiento del ADN?
7.3. ¿Por qué se utiliza el NaCl 5M durante el aislamiento del ADN?
7.4. ¿Qué importancia tiene el uso de la solución de Cloroformo / Alcohol Isoamílico (24:1
v/v) y el alcohol etílico helado durante el experimento?
7.5. ¿Cuál es la razón de que la muestra biológica debe fresca o extraído de un espécimen
recién sacrificado?
8. BIBLIOGRAFIA

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3.1.2. Materiales de vidrio

3.1.4. Equipos y otros

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