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    Examen de Ingeniería Bioquimica

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    victorrubenlopezsantos
    Este documento presenta los resultados de dos experimentos de cinética enzimática. El primer experimento estudia la inhibición de la fosfatasa alcalina bovina por el inhibidor Bromolevamisol. Los resultados muestran que es un inhibidor competitivo con un Ki de 16 mM. El segundo experimento evalúa la hidrólisis de sacarosa por sacarasa. Los datos sugieren inhibición por sustrato a bajas y altas concentraciones, lo que se explica por un mecanismo de doble unión del sustrato.

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    victorrubenlopezsantos
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    Este documento presenta los resultados de dos experimentos de cinética enzimática. El primer experimento estudia la inhibición de la fosfatasa alcalina bovina por el inhibidor Bromolevamisol. Los resultados muestran que es un inhibidor competitivo con un Ki de 16 mM. El segundo experimento evalúa la hidrólisis de sacarosa por sacarasa. Los datos sugieren inhibición por sustrato a bajas y altas concentraciones, lo que se explica por un mecanismo de doble unión del sustrato.

    Descripción original:

    Examen con 4 ejercicios complejos de cinética enzimática

    Título original

    Examen de ingeniería bioquimica

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    Este documento presenta los resultados de dos experimentos de cinética enzimática. El primer experimento estudia la inhibición de la fosfatasa alcalina bovina por el inhibidor Bromolevamisol. Los resultados muestran que es un inhibidor competitivo con un Ki de 16 mM. El segundo experimento evalúa la hidrólisis de sacarosa por sacarasa. Los datos sugieren inhibición por sustrato a bajas y altas concentraciones, lo que se explica por un mecanismo de doble unión del sustrato.

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    FUNDAMENTOS DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA

    EXAMEN DE CINÉTICA ENZIMÁTICA (UNIDAD 2)


    Nombre ________________________________________________________ Fecha ________::
    (40%) .- Se realizaron estudios de inhibición para la fosfatasa alcalina presente en el suero bovino.
    Se varió la concentración del sustrato p-nitrofenilfosfato (p- NFP) en ausencia y en presencia de tres
    concentraciones de inhibidor enzimático (Bromolevamisol). Realizar los cálculos y elaborar las
    gráficas que permitan determinar:
    a) El valor de Km y Vmax para cada experimento
    b) El tipo de inhibición y valor de Ki para el inhibidor.
    c) Explique claramente el fundamento bioquímico de esa inhibición y matemáticamente deduzca la
    expresión de velocidad.

    Vrxn (mmol min-1 Vrxn (mmol Vrxn (mmol Vrxn (mmol


    -1
    mgProt ) min mgProt ) min mgProt ) min-1 mgProt-1)
    -1 -1 -1 -1

    Sin Inhibidor 8 mM de I 16 mM de I 40 mM de I

    Sustrato
    p-NFP
    (mM)

    0.1 0.231 0.210 0.191 0.158

    0.3 0.431 0.369 0.309 0.239

    0.7 0.607 0.488 0.425 0.277

    1.3 0.751 0.599 0.467 0.304

    1.8 0.811 0.657 0.530 0.319

    2.6 0.912 0.657 0.546 0.328

    4.1 0.957 0.688 0.561 0.351

    5.8 0.981 0.741 0.558 0.344

    (40%) 2.- La sacarasa hidroliza sacarosa en glucosa y fructosa. Fueron evaluadas diferentes
    concentraciones de sacarosa y la respectiva cantidad de azúcares liberados durante los primeros 5
    min de la reacción fueron registrados:
    Sustrato (g/dm3) Azúcares liberados en 5 min (mg/ml)
    48.9 0.95
    67.0 1.05
    98.5 1.2
    199.1 1.35
    299.6 1.15
    400.2 0.85
    Observe detenidamente los resultados, ¿a bajas concentraciones, hay inhibición por sustrato?,
    ¿a elevadas concentraciones, hay inhibición por sustrato?
    El siguiente mecanismo fue sugerido para ese efecto:

    E+S ES

    ES + S ESS

    ES E+

    a) Derive la ecuación de velocidad empleando las consideraciones de Michaeles y Menten y


    sobre la ecuación obtenida realice el tratamiento de Lineweaver – Burk.
    b) Empleando la ecuación de Lineweaver – Burk obtenida y las consideraciones analizadas en
    los datos y el mecanismo, determine los parámetros cinéticos CON y SIN efecto de inhibición.
    Explique de forma concreta las consideraciones que usted defina al momento de utilizar la
    ecuación de L-B.

    (20%) 3.- Analice la tabla de resultados siguiente, describa claramente el procedimiento


    matemático que se realizó para el cálculo de los valores obtenidos en las columnas 5, 6 y 7.
    Analice lo calculado en las columnas 5, 6 y 7, describa claramente qué significa/qué
    indica/qué información aporta cada uno de esos cálculos.
    EL VALOR ES 145

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