Aulas Biotecnológicas

Material de Lectura
Módulo VI Biotecnología Vegetal

Los cultivos celulares y sus aplicaciones

El término genérico “cultivo de tejidos vegetales” involucra a diferentes técnicas de cultivo

de material vegetal diverso, incluyendo a los protoplastos (células desprovistas de su pared
celular), células, tejidos, órganos y plantas completas. Mediante éstas y otras técnicas de
cultivo, es posible obtener plantas libres de microbios en un medio nutritivo aséptico (estéril)
en condiciones ambientales controladas. También se lo conoce como “cultivo in vitro de
plantas” por realizarse en recipientes de vidrio (hoy también de otros materiales).
Las primeras experiencias relacionadas con el cultivo de tejidos vegetales se remontan a
1902, pero recién en 1922 se logró el primer experimento exitoso: la germinación in vitro de
semillas de orquídeas. Luego de la germinación, las plántulas obtenidas se transfirieron a
un medio de cultivo en condiciones asépticas, y así se mantuvieron protegidas del ataque
de patógenos (hongos, virus y bacterias).
Hoy esta técnica tiene numerosas aplicaciones:
● Propagación masiva de plantas, especialmente para especies de difícil propagación
por otros métodos, o en vías de extinción.
● Clonación de individuos de características agronómicas muy deseables durante todo
el año.
● Obtención de plantas libres de virus.
● Producción de semillas sintéticas.
● Conservación de germoplasma (conjunto de individuos que representan la
variabilidad genética de una población vegetal).
● Obtención de metabolitos secundarios.
● Producción de nuevos híbridos.
● Mejora genética de plantas (incluyendo obtención de plantas transgénicas).
● Germinación de semillas.
● Producción de haploides.
● Estudios fisiológicos diversos.

La totipotencialidad celular
La reproducción asexual de plantas por cultivo de tejidos es posible gracias a que, en
general, varias células de un individuo vegetal poseen la capacidad necesaria para permitir
el crecimiento y el desarrollo de un nuevo individuo completo, sin que medie ningún tipo de
fusión de células sexuales o gametas. Esta capacidad se denomina totipotencialidad
celular, y es característica de un grupo de células vegetales conocidas como células
meristemáticas, presentes en los distintos órganos de la planta. La potencialidad de una
célula diferenciada (una célula de conducción, epidérmica, etc.) para generar tejidos nuevos
y eventualmente un organismo completo, disminuye con el grado de diferenciación
alcanzado por esa célula, pero puede revertirse parcial o completamente según las
condiciones de cultivo a las que se la someta.
Las células vegetales crecidas en condiciones asépticas sobre medios de cultivo
adicionados con hormonas vegetales, pueden dividirse dando dos tipos de respuesta:
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● una desdiferenciación celular acompañada de crecimiento tumoral, que da lugar a

una masa de células indiferenciadas denominada callo, la cual bajo las condiciones
adecuadas es capaz de generar órganos o embriones somáticos (llamados así
porque son estructuras similares a un embrión, pero que no se originaron por unión
de gametas).
● una respuesta morfogenética por la cual se forman directamente órganos
(organogénesis) o embriones (embriones somáticos). La primera respuesta se
conoce como organogénesis o embriogénesis indirecta (mediada por un estado de
callo) mientras que la segunda respuesta se considera organogénesis o
embriogénesis directa.

El cultivo in vitro consiste en tomar una porción de una planta (a la que se

denominará explante, como por ej. el ápice, una hoja o segmento de ella, segmento
de tallo, meristema, embrión, nudo, semilla, antera, etc.) y colocarla en un medio
nutritivo estéril (usualmente gelificado, semisólido) donde se regenerará una o
muchas plantas. La formulación del medio cambia según se quiera obtener un tejido
desdiferenciado (callo), crecer yemas y raíces, u obtener embriones somáticos para
producir semillas artificiales. El éxito en la propagación de una planta dependerá de
la posibilidad de expresión de la potencialidad celular total, es decir, que algunas
células recuperen su condición meristemática. (Barceló et al. 1980)

Pasos necesarios para generar plantas a partir de explantos aislados:

En los protocolos utilizados durante el cultivo in vitro se pueden distinguir las
siguientes etapas:
1. Elección de la planta y/o tejido donante de explantos.
2. Establecimiento, que consiste en la desinfección de los explantos
(generalmente con hipoclorito de sodio) y su posterior adaptación al medio
artificial de modo de inducir callo, brote, raíz o embrión somático según se
desee.
3. Multiplicación, para generar una masa vegetal suficiente para la regeneración
del número de plantas necesarias.
4. Enraizamiento, en la que se busca la formación de raíces con el fin de
convertir los brotes o embriones somáticos en plántulas completas.
5. Rusticación, que es la aclimatación de las plántulas obtenidas in vitro a las
condiciones ambientales ex vitro (suelo o algún sustrato inerte) El éxito de la
técnica depende de muchos factores, entre ellos la edad de la planta (a
mayor edad, menor potencial de regeneración), el genotipo y las condiciones
ambientales.

Elementos necesarios para el cultivo de tejidos vegetales

Para llevar adelante este trabajo, se necesitan equipamientos que generen las condiciones
necesarias de esterilidad, como los flujos laminares, que son estaciones de trabajo que
hacen circular aire filtrado y estéril, protegiendo así que se desea trabajar.
Además, se necesita un soporte para el explanto, que puede ser sólido o líquido, y que está
conformado por algún agente gelificante inerte (agar, gelrite, etc.), macro y micronutrientes
esenciales para la supervivencia de la planta, nutrientes (hidratos de carbono, vitaminas),
agentes reguladores del crecimiento y hormonas vegetales (ver Tabla 1) que ayudarán a
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obtener una planta o un órgano en particular, a partir del explanto elegido. Algunos de los
elementos mencionados pueden ser reemplazados por mezclas poco definidas en su
composición (jugo de tomate, agua de coco, etc.), que pueden dar buenos resultados y
generalmente resultan más económicas. La acidez de los medios de cultivo para plantas
suele variar entre pH=5 y 6,5. Luego se regulan las condiciones de temperatura y
fotoperíodo (relación de horas luz y horas oscuridad). (Barceló et al. 1980)

Relación del cultivo in Vitro con la Biotecnología: La micropropagación

La propagación de plantas in vitro es una técnica de la biotecnología muy utilizada en
cultivos de importancia económica. Como fue mencionado anteriormente permite cultivar
células, tejidos, órganos, semillas, embriones y obtener individuos selectos en forma rápida.
Los cultivos son realizados por personal especializado, con agentes específicos (hormonas,
minerales, vitaminas, fuente de carbono, agente gelificante, agua, etc.) y en condiciones
ambientales controladas (temperatura, humedad y luz). Una vez ajustados los protocolos
para la especie o cultivo de interés, es posible automatizar el proceso de modo de llevarlo a
escala industrial. La micropropagación (propagación clonal por cultivo in vitro) constituye
uno de los métodos biotecnológicos que mayores logros ha aportado al desarrollo de la
agricultura. Se aplica en la producción masiva de especies hortícolas, aromáticas,
medicinales, frutícolas, ornamentales y forestales.
Ventajas de la micropropagación
● Posibilita incrementar rápidamente nuevos materiales.
● Permite controlar las condiciones ambientales.
● Permite estudiar diversos procesos fisiológicos.
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● Evita el riesgo de que proliferen agentes patógenos (se realiza en medios

esterilizados).
● Se pueden obtener gran cantidad de individuos en espacios reducidos.
● Permite la obtención de individuos uniformes.
● Facilita el transporte del material.
(Cuaderno 35, colección “El Cuaderno”, programa educativo Por Qué Biotecnología, ArgenBio)

Figura:La micropropagación vegetal. A partir de una planta madre, se obtienen numerosos

explantos que, sujetos a condiciones y medios de cultivo adecuados, darán lugar a nuevas plantas
iguales o similares a la planta original, permitiendo su multiplicación. Tomado de “Biotecnología”,
UNQ 2006

Figura: Cultivo de meristemas. A partir de un meristema aislado, se puede obtener una planta
completa. Tomado de “Biotecnología”, UNQ 2006
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Las plantas transgénicas : ¿Qué es una planta transgénica?.

Una planta transgénica contiene uno o más genes que han sido transferidos (transgenes)
de otra planta no emparentada o de una especie diferente. Las plantas que tienen transgén
también se denominan genéticamente modificadas o cultivos GM. Aunque estas
modificaciones parecen novedosas, en los últimos 10 mil años todos los cultivos han sido
genéticamente modificados con respecto a su estado silvestre, mediante la domesticación,
la selección y el mejoramiento controlado a través de períodos prolongados.
La tecnología de transformación genética permite:
● aportar variabilidad genética de forma controlada y precisa, sin alterar el fondo
genético. Es decir, crear nuevas variedades (cultivares) con características
favorables, sin perder las mejoras logradas anteriormente.
● conocer y/o profundizar acerca de la estructura y función de genes específicos.
● expresar genes de interés no existentes en la especie (ejemplo: la fabricación de
proteínas insecticidas de origen bacteriano en el maíz Bt).
● expresar nuevas formas alélicas (variantes) de genes que ya están presentes en el
genoma.
● modificar los niveles o el patrón de expresión de alguna proteína transfiriendo el gen
correspondiente ya presente en la célula vegetal pero con una secuencia regulatoria
diferente, que facilite la expresión de la proteína.
● inhibir la expresión de genes presentes en el genoma (por ejemplo, la soja
transgénica hipoalergénica en la cual se inhibe o disminuye la expresión del gen que
codifica una proteína alergénica).

Para obtener un cultivo transgénico o genéticamente modificadose siguen varios

pasos.
Los primeros ocurren en un laboratorio, donde se modifican unas pocas células para luego,
a partir de estas, regenerar las plantas modificadas y hacerlas crecer en cámaras de cultivo,
después en invernaderos y finalmente en el campo. Estos pasos pueden resumirse de la
siguiente manera:
1. Identificar en un organismo el gen responsable de la característica deseada.
2. Transferir ese gen de interés a la planta a mejorar usando herramientas como
Agrobacterium tumefaciens (un microorganismo que transfiere genes de forma
natural a las plantas) o la pistola génica.
3. Confirmar que la planta ha sido transformada (contiene el gen nuevo o transgén) y
hacerla crecer.
4. Evaluar el fenotipo y la eficacia (por ejemplo, si fabrica la proteína insecticida y la
planta resiste el ataque de determinada plaga).
5. Realizar todas las pruebas necesarias para garantizar que el cultivo transgénico es
seguro para el ambiente y para la salud de las personas y los animales.
6. Si las evaluaciones mencionadas son exitosas, incorporar la planta transgénica a los
programas de mejoramiento del cultivo para pasar la característica a las mejores
variedades.
Una vez que recibe la aprobación de las autoridades regulatorias, y el cultivo transgénico se
libera al mercado, puede ser sembrado por los productores. Todos estos pasos, desde el
laboratorio hasta la comercialización del cultivo, llevan aproximadamente entre 12 y 14 años
de investigación, desarrollo y evaluación.
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Los cultivos transgénicos hoy

En Argentina los cultivos genéticamente modificados que se siembran a gran escala son
soja, maíz y algodón. Las características que se han incorporado son tolerancia a
herbicidas, resistencia a insectos, o ambas características en la misma planta. A partir de
2019, también se siembra alfalfa transgénica con menor contenido de lignina (que implica
mejor calidad de forraje para la alimentación animal) y tolerancia al herbicida glifosato.
También se produce, a muy pequeña escala, cártamo transgénico para industrializar y
producir quimosina (una enzima que se utiliza en la fabricación de queso). En otros países,
además de los cultivos principales como la soja, maíz, algodón y canola transgénicos se
siembran, en superficies mucho más pequeñas remolacha azucarera, caña de azúcar,
papaya, papa, berenjena, calabacín amarillo, manzana, ananá (piña), clavel y rosa. Entre
las características incorporadas, además de resistencia a insectos y tolerancia a herbicidas
hay resistencia a virus, tolerancia a sequía, color azul (rosa y clavel), color rosa (ananá) y
menos pardeamiento (papa y manzana). (Cuaderno 8, colección “El Cuaderno”, programa
educativo Por Qué Biotecnología, ArgenBio).
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Bibliografía
Colección “El Cuaderno” (cuadernos 8, 26, 35). Programa educativo de ArgenBio
Por qué biotecnología. https://www.porquebiotecnologia.com.ar/el-cuaderno
Barceló et al. (1980) Fisiología vegetal. Editorial Pirámide.
Muñoz de Malajovich, M. A. (2006) Biotecnología. Editorial Universidad Nacional de
Quilmes.