Este documento describe los objetivos y fundamentos teóricos del cultivo de tejidos vegetales. El objetivo general es obtener explantes de tejidos celulares de plantas para desarrollar técnicas de cultivo in vitro. Los objetivos específicos son obtener explantes de plantas de interés y esterilizarlos y pretratarlos. Explica conceptos como explantes, naturaleza de los explantes, y factores a considerar para la selección del explante como el objetivo del cultivo y posibilidad de contaminación.
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Este documento describe los objetivos y fundamentos teóricos del cultivo de tejidos vegetales. El objetivo general es obtener explantes de tejidos celulares de plantas para desarrollar técnicas de cultivo in vitro. Los objetivos específicos son obtener explantes de plantas de interés y esterilizarlos y pretratarlos. Explica conceptos como explantes, naturaleza de los explantes, y factores a considerar para la selección del explante como el objetivo del cultivo y posibilidad de contaminación.
Descripción original:
Práctica de biotecnologia vegetal, cultivo de explantes
Este documento describe los objetivos y fundamentos teóricos del cultivo de tejidos vegetales. El objetivo general es obtener explantes de tejidos celulares de plantas para desarrollar técnicas de cultivo in vitro. Los objetivos específicos son obtener explantes de plantas de interés y esterilizarlos y pretratarlos. Explica conceptos como explantes, naturaleza de los explantes, y factores a considerar para la selección del explante como el objetivo del cultivo y posibilidad de contaminación.
Este documento describe los objetivos y fundamentos teóricos del cultivo de tejidos vegetales. El objetivo general es obtener explantes de tejidos celulares de plantas para desarrollar técnicas de cultivo in vitro. Los objetivos específicos son obtener explantes de plantas de interés y esterilizarlos y pretratarlos. Explica conceptos como explantes, naturaleza de los explantes, y factores a considerar para la selección del explante como el objetivo del cultivo y posibilidad de contaminación.
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Al completar la unidad de aprendizaje el alumno será capaz obtener explanes de diferentes
tejidos celulares de platas para realizar cultivos invito.
OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Objetivo general Obtener explanes de tejidos celulares para desarrollar técnicas de cultivo invito de manera adecuada.
Objetivos específicos
Obtención de explanes de plantas de interés para su micro propagación.
Esterilización de explanes y pretratamientos.
FUNDAMENTO TEÓRICO
Explantes
Tejido vivo separado de su órgano propio y transferido a un medio artificial de crecimiento.
(Figura 1)
La selección del explante es un aspecto clave para tener éxito en el Cultivo de Tejidos, ya que depende de: Su ubicación en la planta El tipo de tejido que contiene Su edad cronológica y fisiológica Su contenido endógeno de hormonas, entre otros. Figura 1.Tejido vivo separado de su órgano propio y transferido a un medio artificial de crecimiento.
Naturaleza de los explantes
Los explantes son de diversa naturaleza, pueden ser porciones de tejido, células sueltas, protoplastos, esporas, granos de polen o semillas. Con excepción de los óvulos y el polen, los explantes están constituidos por tejidos y/o células somáticas. Otros explantes como las yemas adventicias son más bien genéticamente inestables y producen un alto grado de variabilidad en los clones, este procedimiento no es útil para la producción de plántulas con una determinada característica de cultivo, pero si lo es para el fitomejoramiento, ya que mediante esta variación semi–natural, es posible obtener nuevas líneas de cultivo. (Figura 2)
Figura2.Se observan las partes de la planta de las cuales se puede obtener un
Elección del Explante en el Cultivo de explante. Tejidos Vegetales Para la elección del explante apropiado se debe tener en cuenta los siguientes aspectos: Objetivo del cultivo Posibilidad de contaminación con microorganismos Edad fisiológica Tamaño Época del año.
Objetivo del cultivo
Si lo único que se quiere lograr es un sistema de callos para estudiar algún proceso fisiológico, se puede cultivar cualquier órgano, tejido o célula viva. Si lo único que se busca es la inducción de callos– lo ideal es cultivar explantes jóvenes, derivados de semillas en germinación, donde se obtienen respuestas rápidas y, en general, hay menores problemas de contaminación con microorganismos. Obtención de plantas con sanidad controlada, es muy común la utilización del cultivo de tejidos, el explante ideal para ello es el meristema (dependiendo de la especie, de 0,2-0,5mm de longitud) consistente del domo y de un par de primordios foliares.
Posibilidad de contaminación con microorganismos
De ser posible, se deben cultivar explantes de plantas donantes que crecen en condiciones de invernadero, con ello se reduce sustancialmente las tasas de contaminación.
Por otra parte, es recomendable evitar el uso de explantes sucios (raíces, rizomas) que provienen de plantas crecidas en macetas o en el campo, dado que en la mayoría de los casos no es posible conseguir una buena desinfección de los mismos.
Edad fisiológica
Este es un aspecto de gran influencia en la morfogénesis. Como regla general se puede
decir que cuando más joven e indiferenciado se encuentre el explante a cultivar, mejor será su respuesta in vitro.
En el caso de la micropropagación de plantas leñosas, la edad del explante es un factor
crítico. Si los tejidos son jóvenes, la micropropagación tiene mayores posibilidades de ser exitosa que con tejidos maduros. Este hecho genera la necesidad de realizar tratamientos de rejuvenecimiento de las plantas donantes de explantes.
Tamaño
En general, cuanto más grande sea el explante mayores serán las posibilidades de inducir la proliferación de callos o la regeneración directa de órganos. Sin embargo, a mayor tamaño de explante también son mayores las probabilidades de que los cultivos se contaminen con microorganismos.
Ilustración3 Técnica para la obtención de un Explante
También es necesario tener en cuenta que existe un tamaño mínimo del explante, que depende de la especie y del material vegetal, por debajo del cual no es fácil lograr el establecimiento de los cultivos. Los explantes muy pequeños suelen requerir del empleo de medios más complejos o de los denominados medios acondicionados.
Época del año
Es un factor que suelen tener mucha importancia en la micropropagación y que
generalmente está asociado al grado de dormición que presentan ciertos explantes (yemas, por ejemplo) y también con la posibilidad de mayor o menor proliferación de microorganismos.
RESULTADOS Y ANÁLISIS En la presente práctica se realizó la siembra in vitro de tres tipos de planta diferentes, así como sus respectivos explantes. Después de llevar a cabo el procedimiento de siembra de acuerdo al manual de prácticas de laboratorio, se procedió a dejar en la incubadora durante una semana, las cajas petri. Regresando después de este tiempo a revisar las cajas, observamos que en ninguna de ellas hubo crecimiento. Los factores que pudieron influir para evitar el crecimiento de los explantes son la asepsia, tanto del material, como de los alumnos, la preparación adecuada de los medios de cultivo y la temperatura a la que se dejó incubando, posiblemente la incubadora no servía o dejo de mantener la temperatura constante. Debido a esto, se hacen algunas recomendaciones para garantizar el éxito de prácticas posteriores.
Recomendaciones: - revisar que la incubadora se encuentre a la temperatura correcta
- Todo el material a utilizar debe esterilizarse y estar cubierto con papel o aluminio para evitar que este se contamine.
- Se recomienda que solo se encuentren dos personas: uno para que se encargue de sembrar el material in vitro y el otro para que lo apoye pasándole el material esto para evitar que se infecten los medios de cultivo.
CONCLUSIONES
La biotecnología vegetal permite la transferencia selectiva de una mayor variedad de
información genética de una forma precisa y controlada mediante la utilización de técnicas que permiten desarrollar variedades con caracteres específicos deseables y sin incorporar los que no lo son. En el cultivo de tejidos las separaciones de explante y las operaciones relacionadas con su incubación in vitro, depende en gran medida del tipo de explante y del sistema de cultivo empleada; por lo cual las técnicas que se empleen, no son exactamente las mismas para meristemos. Los cultivos en vitro requieren técnicas heterogéneas donde los explante requieren condiciones contraladas y asépticas. Se concluye que si la siembra de material in vitro se realiza de forma aséptica: esterilizando el material a utilizar, desinfectándose las manos con alcohol, los resultados son favorables, es decir el material cultivado no se infecta de hongos o bacterias; también se concluye que probablemente el manejo y uso del material no fue correcto y debido a esto no hubo crecimiento de nuestros explantes en el medio de cultivo.
REFERENCIAS
ECURED. (22 de Marzo de 2018). Obtenido de
https://www.ecured.cu/Explantes_(Biotecnolog%C3%ADa_Vegetal) Levitus, G. E. (12 de Noviembre de 2012). Blogspot. Obtenido de http://fisiolvegetal.blogspot.mx/2012/11/cultivo-de-tejidos-vegetales.html Medina, I. O. (2010). Manual de Cultivo de Tejidos Vegetales para Ingenieros Biotecnólogos.
