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    Reporte Terminado Bacteriologia

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    REPORTE TERMINADO BACTERIOLOGIA

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    LICENCIATURA EN QUIMICO FARMACO BIOLOGO

    UNIVERSIDAD SALAZAR
    TURNO MATUTINO.

    SINTESIS DE PRACTICA DE LABORATORIO 1 y 2.


    “EXUDADO FARÍNGEO “
    “TINCION DE GRAM”
    “OBSERVACION MICROSCOPIO”
    “INOCULACION”

    Presenta
    Osorio Galdámez Yadira del Carmen
    De la cruz Rodríguez Iván
    Ramos Mejía Karoll Stephany
    De león Escalante Yaretzy

    Tercer Semestre de la Licenciatura en Químico Fármaco Biólogo.

    Docente:
    Q.F.B. Gerardo Becerra Victorio

    Fecha de la práctica de laboratorio: 21 y 28 de septiembre del 2024


    Tapachula, Chiapas a 5 de octubre del 2024

    www.ieschtapachula.edu.mx
    Introducción

    En las prácticas de laboratorio de bacteriología, el objetivo principal fue que


    conociéramos y domináramos las técnicas de toma de muestras de exudado
    faríngeo, tinción de Gram e inoculación en distintos medios de cultivo. Estas
    prácticas son esenciales para el diagnóstico bacteriológico, ya que permiten
    identificar microorganismos presentes en muestras biológicas. Las sesiones de
    laboratorio, realizadas el 21 y 28 de septiembre, se centraron en el exudado
    faríngeo, la tinción de Gram, y técnicas de inoculación. A continuación, se detallan
    los procedimientos llevados a cabo.

    La tinción de Gram es una técnica fundamental en microbiología que permite


    clasificar las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas. Se
    basa en las diferencias en la estructura de la pared celular de las bacterias, lo que
    influye en su capacidad para retener el colorante. A través de un proceso de tinción
    que involucra cuatro pasos, incluyendo la aplicación de colorantes y un agente de
    decoloración, se logra distinguir entre las dos categorías, lo cual es crucial para la
    identificación de microorganismos. La tinción de Gram sigue siendo un pilar en el
    diagnóstico clínico y en la investigación microbiológica, proporcionando información
    esencial para comprender la diversidad y el comportamiento de las bacterias en
    diferentes entornos que podemos conseguir a través de diferentes medios de
    cultivo. Uno de los mayores propósitos de esta práctica es la obtención de cultivos
    puros, lo que nos facilita la identificación de bacterias y microorganismos, siendo
    esencial para su estudio y caracterización.

    La inoculación es el proceso mediante el cual se introduce un microorganismo,


    como bacterias o virus, en un medio de cultivo, con el fin de obtener un crecimiento
    controlado de dicho organismo. Este método es esencial para aislar y estudiar
    microorganismos, permitiendo su identificación y caracterización. La inoculación se
    lleva a cabo utilizando técnicas estériles para evitar la contaminación y puede
    realizarse en diferentes tipos de medios, como líquidos o sólidos, dependiendo del
    organismo que se desee cultivar.
    Objetivo

     Conocer y aplicar técnicas correctas para la toma de muestras de exudado


    faríngeo.
     Realizar frotis bacterianos de las muestras obtenidas.
     Aplicar la técnica de tinción de Gram para la identificación de bacterias.
     Inocular las muestras en medios de cultivo específicos.
     Identificar los microorganismos presentes en las muestras mediante el
    análisis de los resultados.

    Material y reactivos

    Laboratorio.

    Cantidad Protección personal Cantidad Materiales

    2 Guantes desechables 2 Mechero de Bunsen

    1 Cubrebocas 1 Alcohol al 70% (100 ml)

    1 Bata de laboratorio 1 Encendedor

    Cantidad Medios de cultivo 1 Franela


    estériles:

    5 Agar Sal y Manitol (1 1 Asa bacteriológica


    placa) redonda

    1 Agar MacConkey (1 placa) 1 Asa bacteriológica de


    punta

    Cantidad Kit para tinción de Gram 2 Hisopos estériles

    1 Cristal violeta Abatelenguas estéril


    3 Yodo Lugol Portaobjetos

    1 Alcohol acetona Solución salina

    1 Safranina Puente para tinción de


    Gram

    Cantidad Tubos de ensayo con


    medios de cultivo:

    1 Caldo nutritivo

    1 Medio de agar inclinado

    Procedimiento

    Parte 1: Exudado Faríngeo y Tinción de Gram (21 de septiembre)

    1. Cuidados y recomendaciones previos a la toma de muestra:


    Colocación previa de bata, gorro, guantes y cubrebocas necesario para protección
    en el laboratorio.
    El paciente no debe asearse la boca y no debe ingerir alimentos antes de la prueba.

    2. Preparación del área de trabajo.


    Se realizó la limpieza y esterilización del área de trabajo mediante el flameo con
    mecheros de Bunsen y el uso de alcohol al 70%. Se mantuvieron prendidos dos
    mecheros para asegurar un área séptica. La preparación del área de trabajo es
    fundamental para prevenir contaminaciones cruzadas entre las muestras y asegurar
    la calidad de los resultados.
    Esterilización del área

    3. Toma de muestra de exudado faríngeo:

    La toma de muestra de exudado faríngeo se realizó en un paciente siguiendo las


    normas de bioseguridad. Se preguntó al paciente acerca de los síntomas,
    antecedentes de alergias y automedicación. Se le explicó al paciente el
    procedimiento de la toma de muestra, indicándole las posibles molestias que puede
    llegar a sentir. Se indicó al paciente inclinar ligeramente la cabeza hacia atrás,
    respirar profundo y pronunciar de forma prolongada ‘ah’. Con ayuda de un
    abatelenguas estéril se presionó suavemente la lengua hacia abajo, seguidamente
    se introdujo un hisopo estéril para raspar la parte posterior de la garganta, evitando
    el contacto con el paladar o las paredes bucales para no contaminar la muestra. Se
    repitió este proceso para obtener dos muestras del mismo paciente.

    4. Inoculación en medio de cultivo (Agar Sal y Manitol):


    Una muestra fue inmediatamente inoculada en una placa de Agar Sal y Manitol por
    medio de técnica de agotamiento. Para ello, se pasó el hisopo suavemente sobre la
    superficie del agar sal y manitol, realizando movimientos en zigzag hasta la mitad,
    rotando 90°, y volviendo a depositar la muestra. Se rotuló y selló la placa
    adecuadamente. Esta placa fue incubada boca abajo a 37°C durante 48 horas. El
    objetivo del medio de cultivo es aislar y permitir el crecimiento de bacterias
    grampositivas que puedan fermentar el manitol, como Staphylococcus aureus.

    Inoculación de la muestra
    Incubación

    5. Realización del frotis bacteriano:


    Se utilizó la segunda muestra para realizar un frotis. Para ello, se colocó una gota
    de solución salina sobre un portaobjetos y se frotó el hisopo de la muestra. Este
    portaobjetos fue sometido a un flameo leve para fijar la muestra y que las bacterias
    queden adheridas a la superficie del vidrio.

    Fijación de la muestra

    6. Tinción de Gram:
     Con la muestra lista para el proceso de tinción, se colocó el portaobjetos
    sobre el puente para tinción.
     Se cubrió de cristal violeta el portaobjetos con la muestra durante 1 minuto,
    seguido se enjuago con agua para eliminar el exceso de colorante.
     Luego, se aplicó yodo Lugol sobre el frotis durante 1 minuto y nuevamente se
    enjuagó con agua.
     El decolorante (alcohol cetona) fue aplicado de forma indirecta mientras se
    lavaba bajo el chorro de agua.
     Finalmente, se añadió safranina durante 1 minuto y se lavó una vez más, y se
    dejó secar al aire la preparación.

    Frotis con cristal violeta Frotis con yodo Lugol

    Secado de frotis al aire


    Alcohol cetona de forma indirecta
    Frotis con safranina
     El portaobjetos se secó y quedó listo para observación microscópica.
     Posteriormente se llevó el frotis al microscopio, agregando 1 gota de aceite
    de inmersión al objetivo 100x para observar la morfología y tinción de las
    bacterias.

    En esta primera tinción, se observó la presencia de células sin identificar


    estructuras bacterianas claras.

    Parte 2: Inoculación y Observación de Colonias (28 de septiembre)


    Previa esterilización del área de trabajo con alcohol 96° y flameo. Se dejan los

    mecheros encendidos para mantener el entorno estéril.

    1. Análisis de las placas incubadas:

    Después de 48 horas de incubación, se observaron las placas de Agar Sal y


    Manitol. Se notó el crecimiento de colonias pequeñas de color blanco, lo que sugiere
    la presencia de bacterias grampositivas capaces de fermentar el manitol. El medio
    de cultivo mostró un cambio de color que indicaba la fermentación del manitol, lo
    que es característico de Staphylococcus aureus.

    2. Tinción de Gram de las colonias:

    Se tomó una muestra de una colonia en Agar Sal y Manitol, se realizó un nuevo
    frotis.

    Fijación de las bacterias


    Depósito de colonia del cultivo

    Esterilización de asa bacteriológica Toma de muestra del


    cultivo
    Con la muestra preparada, realizó nuevamente el proceso de tinción de Gram.
    Observación microscópica:
    1. Se inició la observación a 40x para localizar posibles bacterias.
    2. Después, se aumentó a 100x utilizando una gota de aceite de inmersión para
    mejorar la resolución

    OBSERVACION EN EL MICROSCOPIO

    3. Se observaron pequeños círculos morados en gran cantidad, probablemente


    Staphylococcus. Se sospecha que el exceso de muestra en la preparación
    pudo dificultar una observación más clara

    3. Técnicas de Inoculación:
    Para continuar con la identificación y preservación de las bacterias, se realizaron
    tres técnicas de inoculación:
     Estriado por agotamiento: Se colocó sobre la llama del mechero la punta del
    asa bacteriológica hasta que estuviera rojo, se dejó enfriar por unos
    segundos. Seguidamente, se recogió una colonia del cultivo y se depositó en
    una nueva placa de Agar MacConkey se realizó el estriado por agotamiento
    en cuadrantes para obtener colonias aisladas.

    Esterilización de asa bacteriológica Toma de muestra del


    cultivo

    Flameo de asa bacteriológica

    Técnica de
    estriado

     Inoculación en caldo nutritivo: Con el asa bacteriológica estéril, se introdujo


    una pequeña cantidad de la colonia en un tubo con caldo nutritivo.
     Inoculación en agar inclinado (agar Mueller Hinton): Se recogió una pequeña
    cantidad de la colonia con el asa bacteriológica estéril. Posteriormente, se
    destapó y se flameó la boca del tubo. Se introdujo el asa bacteriológica en la
    base, y se fue deslizando a lo largo del medio inclinado. Se cerró el tubo y se
    flameo el asa bacteriológica.

    Toma de muestra del


    Esterilización de asa bacteriológica
    cultivo
    Sembrado de la muestra en caldo Flameo de asa bacteriológica
    nutritivo

    Sembrado de la muestra en agar


    Flameo de la boca del
    inclinado
    tubo

    Flameo de asa bacteriológica


    Todos los medios de cultivo se incubaron a 37°C por 48 horas.

    Resultados

    Tabla 1. Crecimiento Bacteriano en Medios de Cultivo

    Medio de Cultivo Resultado de Crecimiento

    Crecimiento de colonias pequeñas y


    Agar Sal y Manitol
    blancas

    Agar MacConkey No hubo crecimiento

    Caldo Nutritivo Pendiente de análisis

    Agar inclinado
    Pendiente de análisis
    (MacConkey)
    Discusión

    Conclusión

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