PRACTICA 05. Determinación de Urea y Creatinina

Segunda Metabolismo de Lípidos y Proteínas
Unidad
PRÁCTICA N° - DETERMINACIÓN DEL METABOLISMO DEL
NITRÓGENO -
COMPETENCIA A LOGRAR POR EL ESTUDIANTE.
 Comprende como se demuestra la determinación del metabolismo de nitrógeno, mediante la
determinación de urea y creatinina.
FINALIDAD.
 Realizar la medición sérica de urea por el método de la ureasa y creatinina.
INTRODUCCIÓN.
La urea, es el principal producto del catabolismo de las proteínas y se distribuye en todos los tejidos.
Normalmente no tiene función útil en el organismo, es sintetizada en el hígado y excretado casi
enteramente por los riñones (20 a 40 gramos). La urea en el plasma es filtrada por los glomérulos
renales, pero en condiciones normales aproximadamente el 40% de este filtrado regresa por difusión a
la sangre. La importancia clínica de la urea viene del hecho de una elevada concentración sanguínea
puede estar asociada con una mala función renal. El grado de azoemia depende de la extensión y tipo
de lesión renal.
La concentración de la urea en la corriente sanguínea es el resultado del balance entre el grado de

degradación de las proteínas y el grado de eliminación por los riñones. Los valores normales de urea
en suero (como nitrógeno ureico sanguíneo o BUN) es de 9 – 19 mg/100 ml. Las concentraciones de
urea en sangre total, suero o plasma, son muy similares. La uremia es determinada
colorimétricamente por el uso de ureasa. Este método es altamente específico y aunque está basado
en reacciones de urea, es convencionalmente reportado como nitrógeno ureico.
Los valores de urea se reportan siguiendo la siguiente fórmula: Nitrógeno ureico sanguíneo x 2,14 =
UREA
En sentido inverso, conociendo los valores de urea, se informa el BUN según la siguiente fórmula:
Urea x 0,4665 = Nitrógeno ureico sanguíneo.
La creatina, precursora de la creatinina, aumenta en el cuerpo humano fundamentalmente por

síntesis, aunque una pequeña cantidad pre formada es ingerida con los alimentos. La creatina fosfato
se forma en los miocitos y es un compuesto importante como fuente de energía en la contracción
muscular. Aproximadamente 2% de la creatina fosfato muscular es convertida en creatinina
diariamente; la cantidad total depende de la masa muscular. La creatinina es fácilmente difusible y es
igualmente distribuida en el agua corporal. Es excretada fundamentalmente por el riñón el cual
clarifica el plasma de creatinina. La concentración de creatinina en suero no es afectada por la dieta,
catabolismo de proteínas, edad, sexo o ejercicios. Elevadas concentraciones se producen solamente
cuando la función renal está muy alterada y aunque el mismo tipo de información acerca del
diagnóstico y pronóstico se obtiene por la determinación de nitrógeno ureico o creatinina, esta última
determinación se prefiere porque proporciona mayor información relacionada con el estado de la
función renal, ya que los niveles de creatinina sérica dependen del grado de excreción, siendo la
producción endógena constante.
El suero es depurado de creatinina en el riñón por filtración glomerular proporcionando una buena
base para el test de clearance. La concentración normal en suero varía de 0,5 a 1,4 mg /100 ml, para
el método colorimétrico con desproteinizado. El clearence de creatinina normal es mayor de 100 ml /
min.
La determinación de creatinina tiene utilidad en la práctica médica para la evaluación de la función

renal, la cual puede alterarse por diversas causas; las que pueden ser de origen pre renal como el
shock o la insuficiencia cardíaca; renal, como las glomerulonefritis o la nefropatía diabética o post
renal, como las uropatías obstructivas.
FUNDAMENTACIÓN DE LA TÉCNICA.
 La técnica empleada en la determinación de urea en sangre, es una técnica enzimática, basada en
la siguiente reacción:
Ureasa pH
Urea CO2 + NH3; NH3 + Salicilato + Hipoclorito
Alcalino
Indofenol (verde)
 La creatinina en medio alcalino reacciona con el ácido pícrico produciendo un cromógeno de

picrato de creatinina de color rojo (Reacción de Jaffé). La determinación se realiza en un filtrado de
proteínas obtenido a partir del suero (desproteinizado).
MATERIALES Y EQUIPOS.
Unidad
 Material de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimétricas.
 Equipo de extracción de muestra: guantes, alcohol, algodón, agujas N° 20, jeringas x 5 cc.
 Equipos: centrífuga, micropipetas x 10 ul, baño maría, espectrofotómetro.
 Muestra: suero sanguíneo.
 Reactivos Urea:
- S. Estándar: solución de urea = 0.60 g/l (28.04 mg/dl de BUN).
- A. Reactivo A: Solución conteniendo buffer fosfatos 200 mmol/l, ácido salicílico 750 mmmol/l.
nitroprusiato de sodio 20 mmol/l y EDTA 10 mmol/l.
- B. Reactivo B: solución concentrada de hipoclorito de sodio 10 mmol/l en hidróxido de sodio 0.1
mol/l.
- C. Reactivo C: ureasa ≥ 75 U/ml en solución glicerada.
 Reactivos Creatinina:
- S. Estándar: solución de creatinina = 20 mg/l.
- A. Reactivo A: Ácido pícrico 41.4 mmol/l.
- B. Reactivo B: Buffer glicina/NaOH 1mol/l.
PROCEDIMIENTO.
1. Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de sangre de la
flexura del codo con jeringa hipodérmica de 5 cc y aguja N° 20 en tres momentos:
2. Una vez obtenidas las muestras, colocarlas en tubos de ensayo y dejarlas reposar durante 10
minutos.
3. Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a 3000 RPM
durante 10 minutos.
4. Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.
5. Para la determinación de Urea: Preparar el siguiente sistema, rotulando tubos de ensayo: B
(blanco), S (estándar), D (desconocido) y coloque lo que se indica a continuación:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES
B S D
Muestra (suero / ul) -- -- 10
Estándar (ul) -- 10 --
Reactivo A + C (ml) 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 10 minutos a
temperatura ambiente (18 a 25 °C). Luego agregar:
Reactivo B (ml) 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 10 minutos a
temperatura ambiente (18 a 25 °C). Leer en espectrofotómetro a
570 nm. dentro del plazo de una hora.
6. Para la determinación de Creatinina: Preparar el siguiente sistema, rotulando tubos de ensayo: B

(blanco), S (estándar), D (desconocido) y coloque lo que se indica a continuación:
Desproteinización del suero: Colocar en un tubo 0.4 ml de
suero y agregar 2 ml de Reactivo A. Mezclar por inversión. Dejar
en reposo durante 10 minutos y luego centrifugar a 3000 rpm por
cinco minutos. Transcurrido el tiempo armar el siguiente sistema:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES
B S D
Desproteinizado (ml) -- -- 1.5
Estándar (ml) -- 0.25 --
Agua Destilada (ml) 0.5 0.25 --
Reactivo A (ml) 1.0 1.0 --
Reactivo B (ml) 0.25 0.25 0.25
Mezclar por inversión. Incubar 20 minutos a temperatura
ambiente. Luego leer en espectrofotómetro a 510 nm, llevando a
cero el aparato con agua destilada.
ACTIVIDADES A DESARROLLAR POR EL ALUMNO.

1. Explique bioquímicamente lo encontrado: empleando fotografías o figuras, presente los resultados
obtenidos y realice un análisis de lo observado.
2. Cálculos de los resultados-Urea:
 Cálculo del factor:
0.6 g /l
 F=
S
 Cálculo de la concentración de Urea (g/l) = D x F
3. Cálculos de los resultados-Creatinina:
 Cálculo del factor:
20 mg/l
 F=
S
 Cálculo de la concentración de Creatinina (mg/l) = D x F
Unidad
4. Interpretación de los resultados:
 Valores Referenciales Urea: 0.10 a 0.50 g/l.
 Valores Referenciales Creatinina: 8 a 14 mg/l
PREGUNTAS DE APLICACIÓN.
1. Identifique en cual procedimiento se emplean enzimas y elabore un cuadro e identifique la enzima,
sustrato, cofactores, factores y productos obtenidos; en la reacción estudiada. En otro cuadro
identifique los reactivos empleados.
2. Elabore un mapa conceptual explicando qué influencia tiene la ingesta proteica sobre la
concentración sérica de urea y qué alteraciones en las concentraciones séricas de urea y amoniaco
podrían encontrarse en el coma hepático.
3. Elabore un gráfico y explique el ciclo de la urea y el ciclo de la ornitina.
4. Mediante mapa conceptual explique qué importancia tiene determinar el clearence de creatinina y
elabore un gráfico y explique la formación de creatinina.
5. Analice los datos. Varón de 70 años, que acude con las siguientes lecturas de absorbancia para
urea: Blanco = 0.000, Estándar = 0.149, y Muestra = 0.152; para creatinina: Blanco = 0.015,
Estándar = 0.038, y Muestra = 0.096. Interprete y realice una interpretación global del perfil renal
de este paciente.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1. Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2. Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 7ma Edición, Editorial Omega, España, 2018.
3. Vademecum Wiener Lab, Rosario, Argentina. Disponible: http://files.wiener-lab.com/Vademecum_completo_espanol.pdf.
4. Alpaca H, J García. Guía de Práctica de Bioquímica. UNT 2007.
5. Huamán J. Laboratorio clínico. Procedimiento e interpretación. 2° edición, Trujillo 2018.

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