Clase 9 Plasmidos

CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR
Clase 9. Plásmidos. Extracción de ADN
Lic. Luis Augusto Sánchez Chávez

Tecnólogo médico en laboratorio clínico y anatomía patológica
Resúmen
• Fragmento de ADN de tipo circular mayormente o lineal.
• Capacidad autoreplicativa.
• Posee genes no esenciales para un hospedero.
• Otorga características diferentes o complementarias a la que
posee su hospedero.
• Posee una gran cantidad de ADN que no es importante.
• Distribuido en procariotas.
• Su tamaño varia desde 1 Kb a 1000 Kb.
• Pueden tener una sola copia como muchas copias.
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Tipos de vectores
• Plásmidos - Puede transportar fragmentos de ADN relativamente
grandes (10 Kb).
• Bacteriófago lambda - Los vectores fágicos pueden transportar

fragmentos de hasta 20 kb.
• Cósmidos - Pueden transportar casi 50 kb de ADN insertado.
• BAC - Pueden transportar insertos de hasta 300 kb.
• YAC - Pueden transportar insertos de 200 a 3000 kb.

5
INTRODUCCIÓN
• Lederberg acuño el termino “plasmid”

- ”Not all the DNA of bacteria is in its chromosome” (1952)
- Plásmidos son elementos genéticos extracromosomales
• Plasmids son importantes en la biología bacteriana

- Ellos existen naturalmente dentro de la bacteria (Non-essential genes)
- Contiene genes que confieren un ventaja selectiva sobre el organismo
• Herramientas vitales para la manipulación genética

- Tecnología del DNA recombinante (Decade 60’s and 70’s)
- 1975, Cohen and Boyer.
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Nomenclatura
• Antes se basaban en el fenotipo

ColE1. Colicin E1, una bactericina
• Ahora nombres estandarizados
pBR322
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Estructura del plásmido
• Circular Covalentemente Cerrado (CCC)
• Cada vuelta posee menos de 10.4 pb.
• Para resolver el stress: Topoisomerasas.

9
Clasificación de los vectores plasmidicos
En general se pueden clasificar:
1) Vectores plasmidicos extracromosomales
2) Vectores de integración competentes
(Integration – proficient vector)
Microbiología del Mycobacterium tuberculosis - 2011

Clasificación por su función
1. De Fertilidad (F): Capaces de conjugación (contienen el gen para el pilli F)

2. De Resistencia (R): Contienen genes que pueden conferir resistencia a muchos
antibioticos.
3. Plásmidos Col: contienen genes que codifican sustancias que matan bacterias,
ejm Col.
4. Plásmidos Degradativos: capaces de digerir sustancias inusuales. Ejm Tolueno,
ácido salicílico.
5. De Virulencia: Convierten a una bacteria en patógena.
6. Sistemas de adicción: producen venenos de larga vida y antídotos de corta
duración. Las células hijas que retienen una copia del plasmido sobreviven,
mientras que una celula hija que no logra heredar el plasmido, muere o sufre una
reduccion de su rango de crecimiento debido al veneno de la celula parental.
Algunos plásmidos naturales
Cómo se lleva a cabo la replicación en el ADN circular
Mayoría de las bacterias Usado por los virus, Usado por mitocondrias
plasmidos y cloroplasto
No necesita primers
Como se transmiten algunos
plásmidos
Rolling circle replication
Microbiologia básica experimental.
Plásmidos usados con fines de investigación
(ingeniería genética)
Partes:
Origen de
replicación
(ORI).
Marcador
seleccionable.
Sitios de
restricción
(polylinker)
Un plásmido para estos fines también se le llama Vector

Transformación bacteriana
Hay 2 tipos de vectores para
Ingeniería genética
• Vectores de clonación.
• Vectores de expresión
Características y elementos presentes en los vectores de
clonación y expresión
Vector de clonación Vector de expresión
• Pequeños. Facilita la entrada a • Secuencia RBS (sitio de unión a

varios tipos de bacteria. ribosoma). Permite la traducción del
• Alto número de copias. Facilita gen clonado.
la purificación (extracción) • Secuencia para expresión de
• Origen de replicación (OriV) proteínas etiquetadas (Tag)
• Marcador selección. Resistencia • Secuencia para expresión de un
a antibióticos: Kan, Amp, Tet represor de la transcripción.
• Región de sitios múltiples de • Origen de replicación (OriV)
restricción (MCS) • Marcador selección. Resistencia a
• Clonación direccional. antibióticos: Kan, Amp, Tet
• Región de sitios múltiples de
restricción (MCS)
• Clonación direccional.
Plásmidos
usados en
biología
molecular

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Clase 9. Plásmidos. Extracción de ADN

Lic. Luis Augusto Sánchez Chávez

• Bacteriófago lambda - Los vectores fágicos pueden transportar

• Cósmidos - Pueden transportar casi 50 kb de ADN insertado.

• BAC - Pueden transportar insertos de hasta 300 kb.

• YAC - Pueden transportar insertos de 200 a 3000 kb.

• Lederberg acuño el termino “plasmid”

• Plasmids son importantes en la biología bacteriana

• Herramientas vitales para la manipulación genética

• Antes se basaban en el fenotipo

• Ahora nombres estandarizados

• Cada vuelta posee menos de 10.4 pb.

• Para resolver el stress: Topoisomerasas.

1) Vectores plasmidicos extracromosomales

2) Vectores de integración competentes

(Integration – proficient vector)

Microbiología del Mycobacterium tuberculosis - 2011

1. De Fertilidad (F): Capaces de conjugación (contienen el gen para el pilli F)

Un plásmido para estos fines también se le llama Vector

• Pequeños. Facilita la entrada a • Secuencia RBS (sitio de unión a

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