Este documento describe las bacterias anaerobias. Brevemente resume que:
1) Las bacterias anaerobias se desarrollan en ausencia de oxígeno y utilizan diferentes sustancias como aceptores finales de electrones en la respiración anaerobia.
2) Forman parte de la flora normal del tracto gastrointestinal, la cavidad oral, la piel y los genitales femeninos.
3) Incluyen géneros como Clostridium, Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium y otros.
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1) Las bacterias anaerobias se desarrollan en ausencia de oxígeno y utilizan diferentes sustancias como aceptores finales de electrones en la respiración anaerobia.
2) Forman parte de la flora normal del tracto gastrointestinal, la cavidad oral, la piel y los genitales femeninos.
3) Incluyen géneros como Clostridium, Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium y otros.
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1) Las bacterias anaerobias se desarrollan en ausencia de oxígeno y utilizan diferentes sustancias como aceptores finales de electrones en la respiración anaerobia.
2) Forman parte de la flora normal del tracto gastrointestinal, la cavidad oral, la piel y los genitales femeninos.
3) Incluyen géneros como Clostridium, Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium y otros.
Este documento describe las bacterias anaerobias. Brevemente resume que:
1) Las bacterias anaerobias se desarrollan en ausencia de oxígeno y utilizan diferentes sustancias como aceptores finales de electrones en la respiración anaerobia.
2) Forman parte de la flora normal del tracto gastrointestinal, la cavidad oral, la piel y los genitales femeninos.
3) Incluyen géneros como Clostridium, Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium y otros.
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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
Universidad del Perú (DECANA DE AMÉRICA)
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Departamento Académico de Microbiología y Parasitología
MICROBIOLOGIA GENERAL
Bacterias Anaerobias
Prof. Víctor Crispín Pérez
Los primeros 1000 mill. en anaerobiosis O<0.5% O: 5-10% Respiración • Obtención de energía por oxidación de sustratos reducidos (DH2) • Donante y aceptor de electrones • Según el tipo de donante de ee: – Quimiolitotrofos: donante es sustancia inorgánica – Quimiorganotrofos respiradores el donante es una sustancia orgánica • Según el aceptor final de electrones: – O2: respiración aerobia – Distinto del O2 / O-combinado: respiración anaerobia (Membr. Celular sin citocromo- oxidasa) Respiración anaerobia
CO2 Síntesis ATP Compuesto orgánico Flujo de carbono
Biosíntesis Flujo de electrones
NO3- Aceptores de SO4= electrones orgánicos
NADH + H+ + 2 NO3- NAD+ + 2 NO2- + H20
Respiración anaerobia Bacterias anaerobias • Desarrollo en ausencia de cantidades significativas de oxígeno (O2) y bajo condiciones de potenciales redox (Eh) muy reducidos • No utilizan O2 para obtener su energía. • Realizan respiración anaerobia o fermentación • Para algunas el oxígeno es bactericida y para otras es bacteriostático. • Los mecanismos de acción tóxica del oxígeno son diversos (H2O2, radical superoxido, etc.) • Enzimas: catalasa y superóxido dismutasa (SOD) Toxicidad del Oxígeno
O2 + e- → O2- Radical superóxido
O2- + e- + 2 H+ → H2O2 Peróxido de hidrógeno
. H2O2 + e- + H+→ H2O + OH Radical hidroxilo
(Durante fagocitosis: macrófagos y PMN usan
estos derivados para destruir patógenos) Protección contra los tóxicos del Oxígeno • Superóxido dismutasa: 2O2- + 2 H+ → H2O2 disminuye el radical superóxido • Catalasa: 2H2O2 → 2H2O + O2 • Peroxidasa: H2O2 + Sust. reducido → H2O + Sust. oxidado • Vitamina E, C, glutatión Bacterias anaerobias • Esporas resisten el oxígeno • Obligados: - Estrictos: O2 < 0.05 % C. haemolyticum, C. novyi - Moderados: O2: 0 – 5 % B. fragilis - Tolerantes: O2: 0 - ? C. histolyticum, C. tertium • Aerotolerantes: desarrollo escaso en aire ambiental o en estufa con 5 – 10 % de CO2; buen desarrollo en anaerobiosis Distintos aceptores de electrones, y sus productos
Aceptor Producto final
Nitrato Nitritos, óxidos de N y N2 Sulfato Sulfuros Azufre Sulfuros CO2 Ácido acético CO2 Metano Fumarato Succinato Fe3+ Fe2+ Bacterias Anaerobias • Generalmente metabolismo fermentativo (compuestos orgánicos como aceptores finales de electrones) • Distribución amplia: suelo, agua, lagos, pantanos, aguas residuales, excrementos animales (tracto gastrointestinal) • Hombre: cavidad oral, alrededor de dientes, TGI (colon: 1000/ 1 coliforme, TGU (vagina), piel • Bacterias mas frecuentes en la microflora • Membranas mucosas Flora Normal Anaerobia Cavidad oral y TRS: Bacilos gram-negativos: Piel: Porphyromonas Prevotella, Propionibacterium acnes Fusobaterium nucleatum – Cocos gram-positivos Peptostreptococcus Actinomyces 100:1 (ANA/AER)
Lactobacillus Estreptococos Lactobacillus Areas frecuentemente comprometidas Mas importantes !! Bacterias anaerobias I Esporulados: bacilos gram positivos: Clostridium II No esporulados: a) Bacilos gram positivos c) Bacilos gram negativos Actinomyces (curvados y espiralados) Bifidobacterium Bacteroides (Prevotella) Eubacterium Prophyromonas Lachnospira Borrelia Lacatobacillus Butyrivibrio Propionibacterium Campylobacter b) Cocos gram positivos Fusobacterium Peptococcus Leptotrichia Peptostreptococcus Selenomonas Ruminococcus Succivibrio Sarcina Treponema Streptococcus d) Cocos gram negativos Acidaminococcus Veilonella Importancia de las anaerobias
• Resistencia a la colonización patógena
– Depletan el oxígeno – Depletan nutrientes – Producen enzimas y toxinas • Producción de vitamina K • Absorción grasa • Regulación del colesterol Infección anaerobia: características Generales
• Producción de pus fétida
• Formación de abscesos • Gran destrucción de tejidos • Polimicrobianas • Próximo a superficie mucosa • Producción de gas (crepitación) • Necrosis Estudio de anaerobios 1. Morfología de la célula y de la colonia (Cultivo) 2. Producción de pigmento 3. Formación de endosporas 4. Beta-hemólisis en agar de sangre 5. Picaduras en el medio 6. Fluorescencia con la luz ultravioleta 7. Movilidad 8. Índice de crecimiento 9. Olor característico del cultivo 10. Producción de catalasa 11. Crecimiento en presencia de bilis al 20% 12. Patrones específicos de la susceptibilidad a los antibióticos 13. Efectos del cultivo en agar yema de huevo 14. Producción de indol 15. Hidrólisis de la esculina 16. Subproductos metabólicos característicos de la fermentación de la glucosa (identificación por cromatografía de gases) 17. Producción de toxinas Cultivo de bacterias anaerobias: • Requieren condiciones de anaerobiosis, con potencial redox bajo • Eh bajo, se logra con medio reductor: - Medios de cultivo con sustancias reductoras: cisteína (0.5 – 0.8%), sulfito ferroso, caldo tioglicolato • Cultivo en medio semisólido en profundidad: en tubos de 10-13 mm x 180- 200 mm Medios de cultivo con sustancias reductoras
Cisteína (0.5 – 0.8%)
Sulfito ferroso Caldo tioglicolato Cultivo de bacterias anaerobias • Medios de cultivo enriquecidos (extracto de levadura, sangre, suero, líquido ascítico) y con restos de tejidos de órganos vitales: cerebro, corazón, riñón, hígado, carne magra Cooked meat medium Cultivo de bacterias anaerobias • En condiciones de anaerobiosis por eliminación del O2 (del aire) mediante procedimientos físicos y químicos: i) Generación de vacío: bomba de vacío ii) Bloqueo del ingreso del aire (con parafina estéril) iii) Método del pirogalol alcalino Método del pirogalol alcalino
Medio de Cultivo Base
Mesa
iii) Transformación del O2 ambiental en agua:
- Mezcla alcalina: carbonato potasio 3 g pirogalol 3 g tierra de infusorios 15 g (sobre conteniendo 3 g de mezcla por placa) Jarra Anaeróbica • Reacción: NaHCO3 + Ac cítrico + BHNa + H2O 2H2 y CO2 Pd • 2H2 + O2 2H2O
• Es usual colocar un indicador de anaerobiosis.
• Se obtiene un ambiente libre
de oxígeno
(Jarra Gaspak) Conversión del O2 en CO2
Por reacción química del oxígeno contenido en un recipiente cerrado, Al encender la vela el oxígeno se Convierte en CO2 Cámara para anaerobios Mezcla de gases H2 (5 %), CO2 ( 5-10 %) y N2 (85-90 %) Cultivo de anaerobios: Identificación
Procedimiento a seguir con cada colonia:
Prueba de tolerancia Descripción al oxígeno (CA) macroscópica (en agar chocolate en frasco con vela) Colonia Coloración de Gram Identificacion presuntiva Gram
Bacteria Color Porphyromonas Rosa o naranja P. gingivalis No fluorece Prevotella pigmentadas Roja Fusobacterium sp Cromatograma (de gases) De productos metabólicos y componentes de la pared celular Bacterias según col. Gram Intra Wall Gram+ Gram- Acid Fast Cellular Less
Cocci Rod Spiral Rod Cocci M.t. Rickettsia Mycoplasma
S. a. A A.i. C.d. Straight S. e. B L. m. B.c. C.t. S. s. Pn C.p. C.d. Vibrio Vir Campylobacter +O2 +/-O2 -O2 Other Helicobacter
P.a. Enteric Bact.
Resp. Zoo GU Bordetella. Yersinia H. ducreyi H. influenzae Pasteurella Gardnerella Legionella Brucella Calymmatobacterium Francisella Streptobacillus Anaerobios de Importancia Clínica
