Biochimie du Systme Cardiovasculaire.

Jeanne Ngongang Yonkeu Biochimiste.

Plan du cours

1) Les protines sriques. 2) Les lipoprotines sriques. 3) Les enzymes sriques.

Les protines sriques:Prsentation.

Les protines sont des molcules trs reprsentatives dans le systme cardiovasculaire. Lanalyse quantitative et qualitative de ces protines peuvent tre utiles dans le diagnostic et le pronostic de plusieurs maladies. Do limportance de leur tude.

Objectifs.
A la fin de ce cours, ltudiant doit tre capable de : 1) Classifier les protines plasmatiques. 2) Dcrire les principales techniques danalyse des protines sanguines.. 3) Se familiariser un trac de protinogramme.

Plan
Introduction. Mthodes danalyse quantitative des protines sanguines. Mthodes danalyse qualitatives. Classification des protines.
Albumines. Globulines
Protines de transport Marqueurs de linflammation Marqueurs tumoraux Anti protases Les immunoglobulines.

Plan (suite)
Exploration et physiopathologie.
Bilan ( Dosage des protines totales, dosage des protines spcifiques, lectrophorse des protines sriques) Hypo protinmies
Hypo albuminmie Hypo globulinmies

Hyper protinmies
Hyper gamma globulinmies (Monoclonale s et polyclonales)

Les Protines sriques. Introduction

Protines sriques= grande partie matire soluble du plasma. Proprits physico chimiques diffrentes. Fonctions biologiques diffrentes. Holoprotine et htroprotines. Globulaires et fibreuse. 2 groupes: Albumines et globulines

Protines sriques: Etude.

Analyse qualitative: mise en vidence dune prsence dune protine donne. Analyse quantitative: doser et connaitre la concentration exacte.

Protines sriques: Mthodes dtude.

Relargage: (Sulfate de Mg ,; sulfate de NH4) Log S= -K()

Protines sriques: Mthodes dtude.

Solvants organiques (Actone, ther, mthanol, thanol) Ethanol (06 fractions de Cohn) Ultracentrifugation (Laborieuse et coteuse).

Protines sriques: Mthodes dtude.

Electrophorse Immuno lectrophorse Immunodiffusion radiale. Immunoprcipitation Immuno enzymatique. Radioimmunologique. Chromatographie

Etude des protines plasmatiques.

Albumine. 55-60% protines sriques. PM 69 000 daltons. 546 aa Prsence groupement SH. Rle:
Pression oncotique Transport ( mdicament, bilirubine, AG, hormones thyrodiennes. Taux moyen 40-45 g/l

Etude protines plasmatiques: Glycoprotines de transport.

Transferrine ou sidrophiline Bta globuline .Transport du fer 1,5 -3 g/l PM 90 000 D(peut passer dans lurine) Anmie hypochrome ds syndrome nphrotique. Diminue dans lintoxication thylique chronique.

Etude protines plasmatiques

Cruloplasmine. Alpha 2 Globuline. Transport du Cuivre (protine bleue) Pas dintrt pour tre dans les profils protiques. Diminution importante ds maladie de Wilson.(Dpt de Cu dans les noyaux gris centraux, le foie , la corne)

Etude des protines plasmatiques. Transcortine.

Alpha 1 globuline. PM 56000D. Transport du cortisol Conc autour de 70 mg/l.

Etude des protines sriques:

Protines inflammation= Protines de la phase aigue

Orosomucode = (glycoprotine acide alpha 1) Alpha 1 globuline. PM 40 000 D Riche en sucre et en acide sialique. Concentration 0,6-1,2 g/l. Augmantation RAA

Etude des protines sriques:

Protines inflammation= Protines de la phase aigue

Haptoglobine ( HP).
Alpha 2 Globuline. 4 sous units. Complexe Hb- Hp activit proxydasique. Conc 0,5- 1,5 g/l Diminue ds la hmolyses. Augmente ds tat inflammatoire.

Etude des protines sriques:

Protines inflammation= Protines de la phase aigue

Protine C Ractive (crp).

Prcipite au contact polysaccharide C du pneumocoque. Marqueur prcoce de linflammation. Dlai dapparition 2-4 h. Rle: activation du complment, facilite la phagocytose, module la multiplication des lymphocyte.
Conc 0-6 mg/l Infections nonatales, surveillances post opratoire

Etude des protines sriques:

Protines inflammation= Protines de la phase aigue

Fibrinogne.
6 chaines, PM 330 000 D. Conc. 2,5 3,5 g/l Intrt dans le processus inflammatoire. Intrt dans lhmostase.

Etude des protines sriques:

Protines inflammation= Protines de la phase aigue

Srum Amylode A ( SAA)

120 000 D Apparition prcoce dans toute inflammation aigue.

Etude des protines sriques: Les anti protases.

Inhibiteurs des protases sriques ( tissus et polynuclaires ) Alpha 1 anti-trypsine ou anti-protase. Plusieurs phnotypes: MM, ZZ, SS, OO. Conc 2-4 g/l. Augmentation: inflammation Diminution: bronchopneumopathie, emphysmes, cirrhoses infantiles.

Etude des protines sriques: Les anti protases. Alpha 2 macroglobuline. PM 750 000 D. Combinaison avec plasmine, collagnase,
trypsine, chymotrypsine,protases bactriennes. Conc 2- 3,5 g/l Augmentation ds Syndrome nphrotique. Augmentation ds linflammation aigu.

Etude des protines sriques: Les marqueurs tumoraux.

Molcules fabriques par les cellules tumorales et prsente dans la circulation sanguine. X cellules cancreuse entraine production dhormones Transformation noplasique ractive certains gnes .

Etude des protines sriques: Les marqueurs tumoraux.

Marqueur idal: Fabrication par la tumeur elle-mme Permettre le diagnostic. Apprcier la masse tumorale. Apprcier lextension mtastatique. La plupart permettent :
Diagnostic Surtout surveillance volution des cancers.

Etude des protines sriques: Les marqueurs tumoraux: intrt clinique

Marqueurs Normalit

Cancer

Diagnostic

Pronostic Suivi

ACE AFP PSA CA15-3 CA 125 CA 19-9

hCG

< 7 g/l < 10 g/l <4 g/l 25 U/ml <35 U/ml < 35 U/ml < 0,4 g/l

Colon Foie Prostate Sein Ovaire Pancras

0 + 0 0 ++

+ ++ + + + +++
++

++ +++ +++ ++ ++

Testicule ++

+++

Protines sriques: Immunoglobulines.

Gamma globulines : Anticorps. Fabrication par les plasmocytes et les lymphocytes B. Trs htrogne.
IgG IgA IgM IgD IgE

Etude des protines sriques: Les microglobulines.

Zone alpha 1 et alpha 2 globulines. 12 OOO D Urine, salive, LCR CMH classe 1 1,2-2 mg/l. Augmentation ds les cancers.

Exploration.
1) Dosages protiques.
Protines totales. 65 -75 g/l. Protines particulires.
Dosages isols. Profil protiques:
Profil largi Profil minimum

Exploration.
Protinogramme.( Electrophorse)
Nom
Albumine Alpha1 Alpha2 Bta

%
58,1 3,5 9,1 12,5

g/l
41,9 2,5 6,5 9,0

Normes
61-69 1-4 6-10 7-13

g/l
33,5-52 0,5-3 3,3-7,5 3,8-9,8

Gamma

16,8

12,1

11-18

6-13,5

Variations pathologiques: Hypo protinmies.

Hypo albuminmies. 1) Dfauts de synthse . Carences nutritionnelles( kwashiorkor, marasme,
malabsorption, maldigestion, cachexie cancreuse).

Atteintes hpatocellulaire grave (Cirrhoses, ictres graves). Syndromes inflammatoires. Synthse anormale des autres protines ( effet
de compensation)

Variations pathologiques: Hypo protinmies.

Hypo albuminmie. 2) Dperditions

Rnale Digestive Perte cutane.

Variations pathologiques: Hypo protinmies. Hypo gamma globulinmies.

Acquise ( dperdition rnale ou digestive).

Primitive: Dficit immunitaire

Variations pathologiques:
Hyperprotinmies: Hyperglobulinmies
Hyperglobulinmies diffuses et polyclonales. Dysglobulinmies monoclonales.
Mylome plasmocytaire ou maladie de Kahler. Macroglobunmie de Waldenstrm. Maladie des chanes lourdes. Gammapathies monoclonales bnignes

Les lipoprotines plasmatiques. Les lipoprotines plasmatiques sont des globulines utiles dans lexploration des troubles cardiovasculaires. Do limportance de l tude de leurs structures et de leurs mtabolismes.

Objectifs
A la fin de ce cours, ltudiant doit tre capable de : 1) Connatre la structure des principales lipoprotines dintrt clinique. 2) Connatre les diffrents modes de classification. 3) Dcrire sommairement le mtabolisme de chaque classe de lipoprotines. 4) Se familiariser aux mthodes dexploration.

Plan
Introduction. Structure des lipoprotines. Classification des lipoprotines Mtabolisme.
Chylomicrons. VLDL et LDL. Lpa HDL.

. Exploration des lipides et des lipoprotines.

Bilan systmatique. Bilan orient.

 Dans un srum normal jeun les lipoprotines se rpartissent dans un gradient de concentration saline en trois principales zones de densit :
les VLDL (Very Low Density Lipoproteins) : moins de 15 % des lipoprotines du plasma jeun, les LDL (Low Density Lipoproteins) : 55 % des lipoprotines du plasma jeun, les HDL (High Density Lipoproteins) : 30 % des lipoprotines du plasma jeun.

 Les HDL sont subdivises en trois zones d'ingale importance :

les HDL1 les plus lgres reprsentent une fraction mineure contenant une entit lipoprotinique appele Lp(a) les HDL2 plus denses ont une concentration variable. Cette fraction est habituellement beaucoup plus importante chez l'enfant et la femme que chez l'homme les HDL3 reprsentent la fraction la plus dense et quantitativement la plus importante des HDL, de concentration peu prs identique dans les deux sexes.

 IDL (Intermediate Density Lipoproteins) reprsente une sous-fraction de densit intermdiaire entre celle des LDL et des VLDL quantitativement mineure jeun. Les chylomicrons s'isolent une densit infrieure celle des VLDL. Ils existent chez le sujet normal pendant les priodes post-prandiales expliquant la lactescence du srum. Les chylomicrons sont constitus 90 % de triglycrides d'origine alimentaire. Les diamtres moyens (exprims en nanomtres) des lipoprotines, diminuent en relation inverse avec la densit. Mais dans chaque zone de densit, la taille des lipoprotines est trs htrogne.

Lipoprotines du plasma humain

Les apoprotines du plasma sanguin

Les apolipoprotines sont des glycoprotines de masse molculaire trs variable allant de 550000 daltons pour l'apoB100 6500 pour l'apoC-I.

 Les apolipoprotines A-I n'existent jeun qu'au niveau des HDL o elles reprsentent 65 % des apolipoprotines, leur taux srique est de 1,4 0,3 g/L. Les apoB100 se rpartissent exclusivement dans les lipoprotines de basse densit : elles reprsentent 100 % des apolipoprotines des LDL et une fraction mineure (30 %) dans les VLDL. Leur concentration dans le srum est de 1 0,3 g/L correspondant principalement (90 %) celles des apoB des LDL. Les apoC (C-I, C-II, C-III) et les apoE, se rpartissent entre les VLDL, IDL et les HDL. Les chylomicrons sont constitus d'apoA-I, A-II, C, E d'origine hpatique et des apoB48 et apoA-IV d'origine exclusivement intestinale.

 Les apolipoprotines, par leurs points isolectriques varis, donnent aux lipoprotines des mobilits diffrentes en lectrophorse :
les HDL riches en apoA migrent parmi les -globulines, on les appelle -lipoprotines, les LDL, au contraire, migrent parmi les -globulines et sont appeles -lipoprotines, les VLDL migrent entre les -lipoprotines et les lipoprotines : on les dsigne par 2-lipoprotines ou pr--lipoprotines.

Mtabolisme des chylomicrons

 Les apoC-II incluses dans la couche priphrique des chylomicrons permettent leur reconnaissance et leur dgradation plasmatique trs rapide par les lipoprotines lipases (LPL). Ces enzymes sont synthtises par les tissus adipeux et musculaire et aprs leur scrtion restent fixes aux cellules endothliales, flottant librement dans la lumire des capillaires irrigant ces tissus. Les acides gras librs lors de l'hydrolyse des triglycrides pntrent dans les tissus sous-jacents : les cellules musculaires les utilisent comme substrats nergtiques et les cellules adipeuses les restrifient sous forme de triglycrides de rserve.

Mtabolisme des chylomicrons.

L'hydrolyse des triglycrides des chylomicrons, cre une dpltion du volume central induisant des dformations. Des replis de la couche priphrique se forment par accollement de zones adjacentes et se dtachent dans la circulation sous la forme de disques forms de phospholipides, cholestrol et apolipoprotines de petite masse (apoC, apoA principalement) constituants des HDL naissantes discodales ou pr--HDL.

Mtabolisme des chylomycrons

Les difices rsiduels enrichis en apoB48 et E sont reforms autour des esters de cholestrol et des molcules restantes de triglycrides. Ces remnants de chylomicrons de diamtre trs rduit (400 600 ) sont encore appels -VLDL intestinales (de densit VLDL, mais de mobilit lectrophortique ) et sont dgrads par le foie qui les captent grce des rcepteurs reconnaissant les apoE.

Mtabolisme des VLDL et des LDL

Commentaires
La synthse des VLDL est ralise de faon continue par les cellules hpatiques permettant le scrtion permanente des triglycrides de synthse endogne. Naturellement cette synthse augmente considrablement aprs les repas, pour revenir un tat basal jeun. La dgradation plasmatique des VLDL est identique celle des chylomicrons, dpendante des lipoprotine lipases. Celles-ci sont actives par les apoC-II prsentes la surface des VLDL et l'hydrolyse des triglycrides assure un apport rgulier d'acides gras aux tissus adipeux et musculaire.

Commentaires
Comme dans la dgradation des chylomicrons l'hydrolyse des triglycrides induit des replis de l'enveloppe priphrique qui sont librs dans la circulation, constituant un dpart des apolipoprotines C. Des difices plus petits, enrichis en apoB100 et E, se restructurent autour des esters de cholestrol et des molcules restantes de triglycrides. Les remnants de VLDL ainsi forms sont des difices plus petits que les VLDL, appels IDL ou -VLDL hpatiques.

Commentaire
Le mtabolisme des IDL suit immdiatement celui des VLDL. Deux voies mtaboliques peuvent transformer les IDL : la voie des rcepteurs, la lipase hpatique. Une grande quantit des IDL formes est internalise et dgrade dans le foie via les rcepteurs B/E (rcepteur LDL) assurant la reconnaissance des apoE sous leur isomorphe normal E3/E3. Ces rcepteurs sont distincts des rcepteurs prcdemment dcrits pour le catabolisme des remnants de chylomicrons, car ils reconnaissent les apoE et les apoB100.

Commentaires
Une quantit plus faible de particules IDL est dgrade dans la circulation par la lipase hpatique (LH ou triglycride lipase hpatique) dont la structure est homologue de celle des LPL mais qui est exclusivement synthtise par les cellules hpatiques. La LH permet la transformation des IDL en LDL qui doivent donc tre considres comme des produits terminaux du catabolisme des VLDL et des IDL.

Commentaires
La reconnaissance des LDL par leurs apoB100 se fait au niveau des rcepteurs prcdemment dcrits pour les IDL (rcepteur LDL), mais pour les LDL cette captation bien que principalement hpatique, a lieu aussi dans toutes les cellules de l'organisme.

Endocytose des LDLs

Mtabolisme des VLDL et des LDL

Rcepteur des LDL

Commentaires
Les cellules qui ont besoin de cholestrol pour leur mtabolisme, expriment leur surface une protine (rcepteur) capable de reconnatre les lipoprotines porteuses d'apoB ou d'apoE (riches en cholestrol), puis de les faire entrer dans la cellule (internalisation) o elles sont digres par les lysosomes librant le cholestrol que la cellule va utiliser. Ce rcepteur est une glycoprotine de 839 acides amins pesant 160000 daltons. De l'extrmit NH2-terminale l'extrmit COOH-terminale, on distingue cinq domaines : domaine de liaison, riche en cystines comprenant quatre sites de fixation du ligand (LDL), domaine homologue avec le rcepteur de l'EGF (epidermal growth factor), domaine de liaison de chanons glucidiques, domaine transmembranaire, domaine cytoplasmique.

Rcepteur scavenger
Lorsque les LDL sont oxydes au cours de leurs transport plasmatique, elles ne peuvent plus tre reconnues par le rcepteur apoB/apoE. Elles sont alors prises par un rcepteur de polyanions, exprim la surface des macrophages, appel ce titre rcepteur boueur (scavenger). La captation des LDL oxydes par les macrophages est une des premires tapes de la formation des plaques d'athrome.

Rcepteur boueur ou scavenger

Mtabolisme des HDL

Commentaires
Les HDL naissantes ont une structure discodale compose d'une couche unique replie sur elle-mme, de molcules de phospholipides, de cholestrol et d'apolipoprotines. L'origine des HDL est mixte, tissulaire et plasmatique :
le foie scrte des HDL discodales essentiellement composes d'apoE ;

dans la circulation les replis forms partir des lments de surface des chylomicrons et des VLDL, lors de l'hydrolyse des triglycrides, reprsentent une source importante d'HDL discodales contenant principalement des apoA-I et apoC

Commentaires.
Les HDL discodales riches en phospholipides peuvent s'enrichir en molcules de cholestrol qu'elles soustraient aux cellules priphriques. Une enzyme plasmatique la Lcithine Cholestrol Acyl-Transfrase (LCAT) estrifie ces molcules excdentaires de cholestrol qui cessent d'appartenir l'enveloppe priphrique des HDL et migrent au centre des difices, transformant les HDL discodales en HDL3 sphriques. Les HDL3 leur tour sont capables de capter des molcules de cholestrol membranaire et aprs nouvelle action de la LCAT se transforment en difices de plus en plus riches en esters de cholestrol. Les HDL2 ainsi obtenues ont une densit plus lgre et un diamtre plus grand que les HDL3.

Commentaires.
La captation du cholestrol membranaire par les HDL ralise ce que l'on appelle le transport reverse du cholestrol car les HDL2 ainsi formes sont en grande partie reconnues et dgrades dans les cellules hpatiques par l'intermdiaire de rcepteurs qui reconnaissent les apoA-I prsentes dans la structure des HDL. Le cholestrol ainsi retourn au foie est limin dans la bile ou dgrad en acides biliaires. Dans ce transport reverse de cholestrol, seules certaines HDL ne contenant pas d'apoA-II mais constitues d'apoA-I, appeles lipoparticules LpA-I, sont capables d'induire ce mouvement du cholestrol hors des cellules.

Les enzymes du mtabolisme des LP

Commentaires
La lipoprotine lipase est une enzyme plasmatique spcifique, ce qui veut dire que le plasma est le compartiment dans lequel elle est active physiologiquement. La lipoprotine lipase (LPL) est l'enzyme qui permet l'hydrolyse des triglycrides des lipoprotines plasmatiques : chylomicrons, VLDL. L'enzyme est synthtise par les cellules musculaires et adipeuses. Elle sort des cellules et se fixe sur les cellules endothliales des capillaires qui irriguent les tissus qui utilisent les acides gras libres comme nutriments.

Commentaires
La LPL catalyse l'hydrolyse des triglycrides situs dans la lipoprotine immobilise. L'apolipoprotine C-II est un cofacteur ncessaire de cette activit. La srumalbumine fixe les acides gras librs par la LPL et permet leur transport jusqu'aux cellules qui les utilisent (cellules musculaires ou adipocytes). Les maladies molculaires de la LPL conduisent l'accumulation de chylomicrons riches en triglycrides, dans le sang, mme loin des repas.

Les enzymes du mtabolisme des LP.

Commentaires.
Dans le foie (espace de DISSE), une autre lipase, appele lipase hpatique ou triglycride lipase hpatique, hydrolyse les glycrides des lipoprotines IDL et HDL. Elle possde simultanment une activit de lipase et de phospholipase A2. Elle achve l'hydrolyse des acides gras des lipoprotines lgres et prpare la captation des LDL par leur rcepteur.

Les enzyme du mtabolisme des LP

ACAT
Toutes les cellules de l'organisme (surtout le foie) accumulent du cholestrol sous forme d'esters de cholestrol dans les vacuoles lipidiques. Cette estrification est due l'activit d'une acyl-CoA cholestrol acyl transfrase (ACAT) qui a pour substrats le cholestrol des membranes des organites intracellulaires et l'olyl-CoA du cytoplasme.

LCAT
La lcithine cholestrol acyl transfrase (LCAT) est une enzyme plasmatique spcifique (dont le lieu d'activit est le plasma) qui hydrolyse les lcithines des lipoprotines plasmatiques et produit des esters de cholestrol.

LCAT
Elle catalyse le transfert de l'acide gras (habituellement polyinsatur) estrifiant la fonction alcool secondaire d'une lcithine (phosphatidyl choline), sur la fonction alcool de carbone 3 du cholestrol. Les lcithines sont hydrolyses en lysolcithines, beaucoup plus polaires, tandis que le cholestrol est estrifi ce qui le rend presque totalement apolaire. Ce changement de polarit permet au cholestrol estrifi de s'accumuler dans l'intrieur des particules de lipoprotines et diminue la surface de ces particules donc leur confre une forme sphrique.

LCAT
Cette enzyme agit ainsi sur les pr--HDL discodales (voir Mtabolisme des HDL (I) ) et les HDL3 qui ont capt le cholestrol des membranes des cellules priphriques ( transport inverse du cholestrol ). Les HDL2, enrichies en esters de cholestrol, sont les produits finaux de l'action de la LCAT et conduisent le cholestrol vers le foie pour l'excrtion dans la bile.