Validation des mthodes danalyse quantitative par le profil dexactitude

Validation dune mthode de chimie analytique

Application au dosage des anions fluorure, chlorure, nitrite, bromure, nitrate, phosphate et sulfate par chromatographie ionique
Monique Mayor, Guilhem Bourri1

La validation dune mthode de chimie analytique passe par lestimation de lerreur de justesse, ou biais systmatique, et de lerreur alatoire, quil faut combiner pour vrifier si la mthode remplit les objectifs qui lui ont t assigns. La construction dun modle statistique permet dvaluer quantitativement ces notions, qui peuvent tre visualises graphiquement, suivant la mthode du profil dexactitude (Feinberg, 2010a, b et c), et de se donner les moyens de contrler le maintien dans le temps des performances de la chane de mesure, par la construction des cartes de contrle.

Rsum : La validation dune mthode danalyse passe par diffrentes tapes qui visent :
(i) tester la normalit de la distribution des mesures ; (ii) estimer les composantes de lincertitude de mesure, fidlit, justesse, spcificit ; (iii) dfinir des tests de contrle de la non dgradation des performances de la mthode. Aprs un rappel des dfinitions et des concepts mtrologiques, cet article prsente les diffrentes tapes qui permettent de valider une mthode d'analyse. La mthode consiste en la construction dun modle statistique, dun plan dexprience et lutilisation dun matriau de rfrence certifi (MRC), utilis (i) pour valuer le biais (ou erreur systmatique ), (ii) pour calculer lincertitude compose , somme de lincertitude sur la moyenne ( erreur alatoire ) et de lincertitude sur la valeur exacte du MRC et (iii) pour construire les cartes de contrle. Cette mthode est applique au dosage des anions contenus en solution aqueuse par chromatographie ionique, et le modle choisi est linaire. Les rsultats montrent : (i) que les distributions ne sont pas significativement diffrentes de la loi normale ; (ii) quil existe gnralement un biais significativement diffrent de zro et quil faut corriger ; (iii) quil n'existe aucune liaison entre le biais et la concentration de lanalyte ; (iv) que lintervalle de confiance peut tre calcul par application de la loi de Student avec lincertitude compose. La reprsentation graphique suivant la mthode du profil dexactitude aide visualiser les performances de la mthode pour chacun des analytes. La mthode des ajouts doss permet de vrifier la spcificit de la mthode et dtablir le pourcentage de recouvrement. Les droites de rgression obtenues permettent de corriger les concentrations brutes de lerreur systmatique. Les cartes de contrle permettent de dceler la dgradation des performances dans le temps et la stabilit des talonnages.

Mots cls : Anions, bromure, chimie analytique, chimiomtrie, chromatographie ionique,

chlorure, talonnage, fluorure, statistiques, sulfate, validation.
1

incertitude, nitrate,

nitrite,

phosphate,

UR1119, Gochimie des sols et des eaux - INRA F-13545 Aix-en-Provence 04 42 90 85 42 monique.mayor@aix.inra.fr.

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Introduction
Toute analyse chimique ncessite des procdures de mise au point de mthodes de dosage, dtalonnage et de validation des rsultats. La dmarche Qualit a pour objectif d'assurer la fiabilit et la traabilit des rsultats. Nous prsentons ici le protocole exprimental et les mthodes statistiques utilises pour valider une mthode danalyse. La dmarche est applique ici au dosage danions en solution par chromatographie ionique et peut tre tendue sans difficults d'autres mthodes. Plus prcisment, lobjectif de cet article est dvaluer statistiquement la validit de cette mthode de dosage dans le domaine de concentration de 10-5 10-3 M, et de dcrire les procdures dtalonnage multiparamtrique, de correction de biais, de calcul d'incertitude par lutilisation dtalons certifis et la mthode d'ajouts doss.

1. Principe de la mthode et description de la technique

Le choix d'une mthode analytique doit tre fait en fonction du problme pos. Au centre Inra dAvignon, les travaux de lunit Gochimie des sols et des eaux ncessitent lanalyse des eaux dans les sols hydromorphes et les sols sals. Dans ces milieux, la salinit totale varie trs largement. La chromatographie ionique a lavantage dtre multiparamtrique, de ncessiter peu dchantillon, environ 2 ml, et dtre rapide. Le dtecteur utilis ici est conductimtrique et peu coteux.

Figure 1 : lchange ionique : (1) lanion dplace lluant ; (2) lluant dplace lanion 1.1 Principe de la chromatographie ionique La chromatographie est une technique de sparation despces dans un mlange par partage entre une phase mobile (gaz ou liquide) et une phase stationnaire (liquide ou solide). Chaque solut inject dans la colonne est soumis deux effets antagonistes : lentranement par la phase mobile dans laquelle il est soluble et la rtention par la phase stationnaire avec laquelle il interagit. La sparation est possible grce aux diffrences daffinits de ces composs pour

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les phases mobile et stationnaire. La phase stationnaire, la colonne, est un changeur dions constitu de particules de rsine (figure 1). Lappareil utilis est un chromatographe ionique Dionex hautes performances monocanal modle DX 100 muni dun passeur diluteur Dionex modle AS50, le tout pilot par le logiciel de gestion Chromlon CM-CHM-1-IC version 6.5.

Figure 2 : schma de principe d'un quipement de chromatographie ionique 1.2 Mise au point de la mthode Il est ncessaire avant de valider une mthode doptimiser les conditions danalyse, en faisant varier le dbit, la temprature, en modifiant la nature ainsi que la concentration de lluant, en optimisant le choix de la colonne. On peut ainsi minimiser le temps de lanalyse, fix par le temps du dernier compos lu, tout en prservant une bonne rsolution pour que la mthode reste spcifique, cest--dire quelle produise une rponse uniquement pour lanalyte dintrt.

a. Colonne neuve

b. Colonne dgrade

Figure 3 : dgradation des performances dune colonne de chromatographie ionique. La rsolution de la mthode est le pouvoir de sparation des composs, elle est quantifiable par exemple par le rapport R = d/m, o d est la distance sparant les sommets des 2 pics, et m la moyenne des largeurs la base des pics. Si on considre des pics rapprochs, par exemple les pics du phosphate et du sulfate, il apparat quune rsolution R = 1,12 nest pas suffisante, mais quavec une rsolution suprieure 2, les pics sont bien rsolus. La figure 3 montre la diffrence entre une bonne rsolution et une rsolution incorrecte due la dgradation des performances de la colonne avec le temps.

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2. Thorie, modle statistique et mthodes de traitement des donnes

2.1 Modle statistique La construction dun modle statistique permet dvaluer quantitativement les grandeurs mtrologiques dfinies ci-dessus partir de sries de rsultats exprimentaux. Le modle choisi ici est additif : Rsultat = valeur vraie + erreur systmatique + erreur alatoire. La dmarche choisie consiste dabord tester la normalit de la distribution des rsultats, puis valuer lerreur systmatique, lerreur alatoire, lincertitude compose, la spcificit de la mthode, les limites de dtection et de quantification, lintervalle de confiance du rsultat de mesure, enfin construire la procdure de carte de contrle. 2.2 Mthodes 2.2.a Normalit La normalit est teste en construisant la droite de Henry : si les points sont aligns sur la droite, on ne peut pas infirmer lhypothse de normalit de la distribution. 2.2.b valuation du domaine danalyse La dtermination du domaine danalyse permet de vrifier si la technique est adapte aux valeurs ou aux concentrations recherches. La courbe dtalonnage peut tre linaire mais cela ne fait pas partie des exigences. Lexigence de linarit sapplique la relation entre la concentration calcule et la concentration introduite et non pas la fonction de rponse qui est la relation entre le signal et la concentration introduite. Il est en revanche ncessaire que la fonction de rponse soit strictement croissante ou dcroissante. Le calcul de la courbe dtalonnage par la mthode des moindres carrs suppose la constance de la variance de la rponse toutes les concentrations. 2.2.c Calcul des limites de dtection et de quantification partir dune mesure faite sur un blanc analytique, on calcule lcart type du signal. La limite de dtection LOD correspond la concentration qui conduit un signal dont lintensit est gale 3 fois celle de lcart type du blanc yd = yb +3 sb. La limite de quantification LOQ est calcule en prenant comme valeur du signal 10 fois la valeur de lcart type du blanc yq = yb +10 sb. (ACS, 1980). 2.2.d Calcul des incertitudes Lincertitude de la mesure, qui caractrise la dispersion, est exprime sous la forme dun cart-type s qui est la racine carre de la somme de lensemble des variances associes aux sources derreur : - le biais du rsultat ou erreur systmatique est la diffrence entre lesprance des rsultats dessais et la valeur de rfrence accepte, et dpend de la mthode, de loprateur et de linstrument. Lestimation de lerreur systmatique, cest--dire lincertitude systmatique, est value en utilisant un talon certifi. On obtient alors un facteur de correction, quon applique au rsultat de mesure. Mais comme ltalon certifi (MRC) nest connu quavec

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une certaine incertitude, soit umrc, celle-ci doit tre compte dans lincertitude de mesure. Cette incertitude est donne par lorganisme certificateur, sous la forme de lincertitude largie, Umrc, telle que : U mrc = kmrcumrc . Sauf indication contraire, dment documente, kmrc = 2 pour un niveau de confiance de 95 % (Taylor et Kuyatt, 1994) ; - la fidlit ou erreur alatoire, est dfinie comme la dispersion de la moyenne. Son estimation, ou incertitude alatoire est :

ua = s / n ,

(1)

O n est le nombre de mesures. Le matriau de rfrence certifi doit avoir une matrice identique celle des chantillons. Ceci implique lgalit des variances et peut galement tre test par la mthode des ajouts doss. Dans ces conditions, s est mesur sur le MRC. On obtient donc lincertitude compose :
uc =
2 umrc 2 + ua

U s , ou encore uc = mrc + . (2) k mrc n

2.2.e Calcul de lintervalle de confiance du rsultat

Lintervalle de confiance au seuil (niveau de confiance 1-) dlimite la zone dans laquelle se trouve probablement la moyenne de la population do est extrait lchantillon. On fixe le risque acceptable pour cette affirmation. Lintervalle de confiance 95 % signifie que lon accepte un risque de 5 % de se tromper en affirmant que la moyenne de la population est comprise entre [moyenne - IC et moyenne + IC]. Si x est la grandeur recherche (exemple la concentration) et y la grandeur mesure (exemple la hauteur du pic) et si ltalonnage linaire est donn par la droite de rgression de x par rapport y, alors x = C1 y + C2, et lintervalle de confiance de la moyenne de n mesures est :
x k ( , v )uc ,

(3)

O x est la moyenne corrige de toutes les erreurs systmatiques identifies, k suit une loi de Student degrs de libert, = n 1, est le niveau de confiance, gnralement = 0,05 pour P = 0,95, n est la taille de l'chantillon, et uc est lincertitude compose dfinie ci-dessus. Le produit Uc = kuc est lincertitude largie.
2.2.f Spcificit

La spcificit est la capacit tablir lexistence de la substance analyser en prsence dautres composants prsents. Il sagit de dmontrer que la substance analyse au sein de la matrice est bien lanalyte recherch. La spcificit se fonde sur une absence dinterfrences. Elle sera estime par la mthode des ajouts doss en calculant le pourcentage de recouvrement.

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3. Protocole exprimental
Le protocole exprimental est prsent dans le tableau 1, et lensemble des tapes dans le tableau 2. Tableau 1 : protocole exprimental
Jour 1 Jour 2 Jour 3 Plan dtalonnage Fidlit 3 rptitions des solutions multilments, niveaux 1, 2, 3, 4 Plan de validation Justesse 5 rptitions des solutions certifies, niveaux 1, 2, 3, 4 Spcificit Doser la matrice seule et la matrice + 3 concentrations dajouts doss Jour 4 Plan dtalonnage Fidlit 3 rptitions des solutions multilments, niveaux 1, 2, 3, 4 Plan de validation Justesse 5 rptitions des solutions certifies, niveaux 1, 2, 3, 4 Jour 5 Plan dtalonnage Fidlit 3 rptitions des solutions multilments, niveaux 1, 2, 3, 4 Plan de validation Justesse 5 rptitions des solutions certifies, niveaux 1, 2, 3, 4

Prparation des solutions multilments Mettre les sels dshydrater dans 0, 1 ; 0,25 ; 0,5 et 1 ltuve 105 C mmol/l en Fluorure, pendant 24 h en vue de Chlorure, Nitrite, la prparation de la Bromure, Nitrate, solution multilments Phosphate, Sulfate Dilution de la solution certifie multilment 1 mmol/l au 1/10 ; 1/4 ; 1/2 en Fluorure, Chlorure, Nitrite, Bromure, Nitrate, Phosphate, Sulfate Normalit de la distribution : 30 rptitions de la solution certifie 0,5 mmol/L

- Pour vrifier la normalit de la distribution, nous mesurons 30 fois le matriau de rfrence certifi sous des conditions de rptabilit. - Pour apprcier la fidlit, nous utilisons le plan dtalonnage en faisant 9 rptitions des solutions multilments prpares sans la matrice, 4 niveaux de concentrations, (0,1 mmol/l; 0,25 mmol/l ; 0,5 mmol/l et 1 mmol/l) ; les dosages sont raliss sur 3 jours avec le mme oprateur. Lquation de la droite dtalonnage journalire est utilise pour calculer les concentrations qui serviront pour le calcul de justesse. Le coefficient de variation CV des aires est calcul pour les 7 analytes, ceci pour les diffrents niveaux de concentration. - Pour apprcier la justesse, nous mesurons 15 rptitions du matriau de rfrence certifi multilment (MRC) de valeurs connues, ralises sur 3 jours ceci aux 4 niveaux de concentrations ci-dessus (tableau 1), ce qui permet dapprcier la correction apporter au rsultat obtenu, ainsi que deffectuer les calculs dincertitudes. - Pour apprcier la spcificit et les effets de matrice, nous dosons un chantillon de solution du sol reprsentatif du contexte gochimique tudi, dabord seul, puis aprs addition de lanalyte trois concentrations diffrentes.

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Tableau 2 : rsum des diffrentes tapes de la validation

Principales tapes Vrification de la normalit de la distribution Protocole 30 rptitions du matriau de rfrence certifi : MRC multilment une concentration de 0,5 mmol/l en Fluorure, Chlorure, Nitrite, Bromure, Nitrate, Phosphate, Sulfate sous des conditions de rptabilit. 9 rptitions des Solutions multilments prpares sans la matrice, 4 niveaux de concentrations, dosages raliss 3 jours diffrents avec le mme oprateur. 15 rptitions du matriau de rfrence certifi multilment de valeurs connues raliss sur 3 jours diffrentes, ceci 4 niveaux de concentrations, ce qui permet dapprcier la correction apporter au rsultat obtenu ainsi que les calculs des incertitudes. Tests et calculs

Vrification visuelle et droite de Henry

Plan dtalonnage : Fidlit

Calcul de la moyenne, variance, carttype des 9 mesures et du coefficient de variation CV =

s 100. x

Plan de validation : Justesse

Biais ou erreur systmatique : Diffrence entre rsultat obtenu et valeur fournie par le laboratoire certifi. Erreur alatoire : ua = s / n tenir compte de lincertitude de ltalon

U crm = kcrmucrm
Incertitude de la mesure :

uc = ucrm 2 + ua 2
Spcificit Vrification de labsence dun effet de matrice Intervalle de confiance du rsultat (t de Student) x t ( , )uc Calculer le taux de recouvrement, partir des pentes des droites de Par la mthode des ajouts doss, en dosant rgression et dmontrer la linarit entre un chantillon de solution du sol sans ajout les concentrations calcules et les et avec 3 ajouts successifs. concentrations introduites. LOD : yd = yb +3 sb, A laide de mesures faites sur un blanc LOQ : yd = yb +10 sb, analytique, on dduit la valeur du bruit de Dduire les concentrations de LOD et fond yb qui est la rponse au blanc LOQ partir de la valeur de leur signal terrain grce lquation : x = C1 y + C2 de la droite dtalonnage de chaque lment. Courbe dtalonnage : sassurer que la Et on calcule lcart-type de la rponse au fonction de rponse est strictement blanc terrain sb croissante ou dcroissante.

valuation du domaine danalyse, Limite de Dtection et de Quantification

Pour valider une mthode, il faut : - que les CV dans des conditions de fidlit intermdiaire soient infrieurs une valeur de tolrance, par exemple 10 % ; - que la rgression permettant de relier les concentrations calcules aux concentrations introduites soit parfaitement linaire dans la gamme de concentrations tudies ; - que la diffrence entre le rsultat obtenu et la valeur vraie inconnue de lchantillon soit petite ou du moins infrieure une limite dacceptation : pour cela, les estimateurs de biais et de variance obtenus grce des expriences effectues sur des chantillons connus nous renseignent si la procdure va pouvoir quantifier avec une exactitude suffisante.

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4. Rsultats et discussion
Les rsultats (histogramme et droite de Henry) montrent que lhypothse de normalit de la distribution ne peut pas tre rejete.
4.1 La fidlit

Les rsultats complets pour la fidlit sont reports dans le tableau 3. Toutes les valeurs des coefficients de variation sont infrieures 4 %. La valeur admise dans notre protocole est de 10 %.
Tableau 3 : rsultats du test de fidlit, aux quatre niveaux de concentration des solutions multilments. Valeurs en aires de pics (S min)
Moyenne cart type Variance CV Moyenne cart type Variance CV Moyenne cart type Variance CV Moyenne cart type Variance CV FCl NO2Br Solution multilment 0,10 mmol/l 0,547 0,688 0,526 0,655 0,015 0,017 0,018 0,013 0,000 0,000 0,000 0,000 2,74 % 2,44 % 3,40 % 1,98 % Solution multilment 0,25 mmol/l 1,439 1,883 1,416 1,730 0,032 0,038 0,027 0,032 0,001 0,001 0,001 0,001 2,24% 2,02% 1,88% 1,83% Solution multilment 0,5 mmol/l 2,974 3,750 2,900 3,514 0,094 0,122 0,089 0,104 0,009 0,015 0,008 0,011 3,17% 3,25% 3,09% 2,97% Solution multilment 1 mmol/l 6,167 8,184 6,168 7,682 0,155 0,165 0,105 0,147 0,024 0,027 0,011 0,022 2,51% 2,02% 1,70% 1,91% NO3P-PO43SO42 0,658 0,021 0,000 3,25 % 1,661 0,028 0,001 1,66% 3,409 0,103 0,011 3,03% 7,369 0,140 0,020 1,90% 0,502 0,019 0,000 3,79 % 1,324 0,026 0,001 1,99% 2,747 0,065 0,004 2,38% 5,815 0,126 0,016 2,17% 1,324 0,034 0,001 2,59 % 3,463 0,066 0,004 1,90% 7,104 0,210 0,044 2,95% 15,358 0,338 0,114 2,20%

4.2 La justesse

Les rsultats du test de justesse montrent (non prsents ici, donnes disponibles sur demande) que le biais (estimation de lerreur systmatique) est significativement diffrent de zro, en gnral positif, ce qui correspond une surestimation ; il est ngatif pour le chlorure et pour le fluorure et pour ce dernier, le biais maximum est observ la concentration 0,1 et atteint - 6,2 %, ce qui est considrable. On nobserve pas de variation ordonne du biais avec la concentration. Il faut donc corriger les valeurs mesures de ce biais estim. Une fois corriges de ce biais, les valeurs sont accompagnes dune incertitude compose obtenue selon lquation ci-dessus (q. 2), qui permet de calculer lintervalle de confiance du rsultat. Ici, le nombre de mesures effectues pour estimer la moyenne de la concentration dun chantillon inconnu est de 5. Lintervalle de confiance est donc obtenu par application de lquation (3) avec n = 5, k (0,95 ; 4) = 2,78 et uc lincertitude compose. Les rsultats obtenus montrent que les moyennes journalires sont comprises dans les intervalles de confiance de la moyenne ainsi calculs. Elles peuvent donc tre considres comme des estimations indpendantes de la mme grandeur. Ceci veut dire que les performances instrumentales et que ltalonnage sont rests stables pendant les 3 jours conscutifs des mesures. On peut en dduire galement le nombre de mesures ncessaires pour obtenir un intervalle de confiance sur la moyenne donne, puisquon est dans les conditions de validit de la loi normale.

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4.3 Les profils dexactitude

Une autre reprsentation possible est celle du profil dexactitude (Feinberg, 2000a et b, 2006, 2010a, b, c,). On se fixe une limite dacceptabilit (ici 10 %) et une probabilit de tolrance (95 %). Par exemple pour le sulfate (tableau 4, figure 4) au niveau 3, concentration moyenne du MRC, le biais a une valeur de 3,9 % avant correction et le taux de recouvrement est de 103,9 %.
Tableau 4 : profil dexactitude du sulfate
Avant correction du biais Probabilit tolrance (bta) Limite d'acceptabilit Niveaux Valeur cible Moyenne niveau cart-type de fidlit (sFI) Valeur basse tolrance Valeur haute tolrance Biais (%) Recouvrement (justesse) (%) Limite basse tolrance (%) Limite haute tolrance (%) Limite d'acceptabilit basse Limite d'acceptabilit haute 95 % 10 % 1 0,100 0,101 0,002 0,097 0,105 1,07 101,07 97,18 104,95 90,00 110,00 2 0,250 0,259 0,006 0,246 0,271 3,49 103,49 98,57 108,42 90,00 110,00 3 4 0,500 1,000 0,519 1,020 0,003 0,021 0,512 0,974 0,527 1,066 3,89 2,00 103,9 102,00 102,38 97,42 105,40 106,58 90,00 90,00 110,00 110,00 95 % 10 % 1 0,100 0,097 0,002 0,093 0,101 -2,90 97,10 93,27 100,93 90,00 110,00 Aprs correction du biais 2 0,250 0,249 0,006 0,236 0,261 -0,51 99,49 94,57 104,42 90,00 110,00 3 0,500 0,500 0,004 0,492 0,509 0,05 100,05 98,37 101,74 90,00 110,00 4 1,000 0,981 0,021 0,935 1,027 -1,90 98,10 93,52 102,68 90,00 110,00

a)

b)
Figure 4 : profil dexactitude du sulfate a) avant correction du biais ; b) aprs correction du biais

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La correction du biais (figure 4b) permet de satisfaire plus largement au critre dacceptabilit, et ramne le taux de recouvrement 100 %. Les profils dexactitude pour les autres analytes sont reprsents sur les figures 5 10 et dmontrent que la mthode pour ces lments est parfaitement adapte aux objectifs fixs : elle est donc valide sans avoir affecter un facteur de correction aux futures mesures.

Figure 5 : profil dexactitude du fluorure

Figure 6 : profil dexactitude du bromure

Figure 7 : profil dexactitude du chlorure

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Figure 8 : profil dexactitude du nitrate

Figure 9 : profil dexactitude du nitrite

Figure 10 : profil dexactitude du phosphate

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4.4 La spcificit et labsence deffets de matrice

Elles sont estimes par la mthode des ajouts doss (figure 11 et tableau 5). Dans tous les cas, on observe une trs bonne linarit entre la concentration retrouve et la concentration ajoute. Toutes les valeurs du test de Fisher sont largement suprieures la valeur limite. Les pourcentages de recouvrement obtenus par la mthode des ajouts doss sont dduits des pentes des droites de rgression. Des tests sur les ordonnes lorigine ont montr que cellesci ntaient pas significativement diffrentes de zro. Les pentes des droites de rgression ont donc t recalcules en forant le passage par lorigine. Les pentes des droites de rgression donnent alors directement le pourcentage de recouvrement.

Figure 11 : relation linaire entre concentration retrouve et concentration ajoute par la mthode des ajouts doss. Cas du fluorure

Tableau 5 : pourcentages de recouvrement obtenus par la mthode du profil dexactitude et par la mthode des ajouts doss.
a. moyenne des 4 valeurs de gamme ; b. pente de la droite de rgression force passer par lorigine
Analyte Fluorure Chlorure Nitrite Bromure Nitrate Phosphate Sulfate Profil dexactitude a 98,0 100,0 102,0 102,0 101,6 100,5 102,6 Ajouts doss b 98,3 102,2 96,5 95,0 95,4 97,9 100,2

Les valeurs obtenues par les pentes des droites de rgression sont diffrentes des valeurs obtenues par la mthode du profil dexactitude, et plus loignes de 100 %. Ceci peut tre attribu au fait que la mthode du profil dexactitude a t applique des solutions multilments en solution pure, tandis que la mthode des ajouts doss intgre leffet de matrice sur un chantillon naturel reprsentatif du milieu gochimique tudi. On peut considrer que la mthode du profil dexactitude (figures 4 10) permet de visualiser lordre de grandeur des biais des mthodes, mais quil vaut mieux utiliser les droites de rgression obtenues (figure 11) pour corriger les concentrations brutes, car ces droites tiennent compte de leffet de matrice.

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Dans ces conditions, le rsultat danalyse est simultanment corrig des effets de matrice et du biais suivant la relation :
x = (C1 y + C2 ) / C3 k ( , v)uc ,

(4)

O C1 et C2 sont les coefficients de la courbe de rponse, ici suppose linaire, et C3 le pourcentage de recouvrement divis par 100.
4.5 Les limites de dtection (LOD) et de quantification (LOQ)

Elles sont reportes dans le tableau 6. Par convention : y < LOD : lanalyte nest pas dtect ; LOD < y < LOQ : lanalyte est dtect, mais non quantifiable ; LOQ < y : lanalyte est quantifiable.

Tableau 6 : limites de dtection et de quantification des mthodes (mmol/l)

Analyte LOD LOQ Fluorure 0,018 0,060 Chlorure 0,013 0,045 Nitrite 0,018 0,060 Bromure 0,014 0,047 Nitrate 0,015 0,050 Phosphate 0,019 0,063 Sulfate 0,007 0,024

Les LOD sont toutes de lordre de 15 20 mol/l, sauf celle du sulfate, qui est deux fois plus faible. Ceci est d la pente plus grande de la droite dtalonnage, qui traduit une sensibilit plus grande, du fait que le sulfate est un ion bivalent. La chromatographie ionique semble donc plus performante pour le dosage des sulfates, qui pose problme avec les mthodes traditionnelles comme la nphlomtrie aprs prcipitation du sulfate de baryum.

5. Tests de conformit
Les tests de conformit sont des tests permettant de vrifier que, pendant lanalyse, les performances du systme restent compatibles avec le cahier des charges de la mthode. La vrification permet de sassurer que les carts entre les valeurs indiques par un appareil de mesure et les valeurs connues correspondantes dune grandeur mesure sont tous infrieurs aux erreurs maximales tolres.
5.1 Construction de la carte de contrle et calcul des erreurs maximales tolres.

La carte de contrle est un enregistrement utilis pour contrler la stabilit dune mthode dans le temps. On utilise comme talon de surveillance le Matriau de Rfrence Certifi (MRC) qui a servi au contrle de la justesse. On ralise un nombre assez important de mesures groupes en sries, les rsultats sont reports sur un graphique. Il est prfrable de faire une moyenne sur une trentaine de rptitions au moins et dans ces conditions, les valeurs du t de Student peuvent tre prises gales 2 et 3 respectivement.

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Les limites de surveillance LS et de contrle LC sont calcules suivant les formules : LS = moyenne 2 uc, LC = moyenne 3 uc, et reportes sur la carte. (5) (6)

5.2 Surveillance
La surveillance complte les oprations de vrification et dtalonnage afin de dtecter les drives ventuelles de lquipement entre ces mesures. Il sagit denregistrer les carts entre les valeurs dindication de lquipement de mesure et les valeurs vraies du contrle certifi. Ces oprations de surveillance sont consignes sur des enregistrements tels que la carte de contrle. A chaque nouvelle analyse, le rsultat du contrle est ajout, ce qui permet de vrifier sil est bien lintrieur des limites admises, et ainsi dentreprendre des actions correctives si ncessaire. Cela permet galement de contrler au cours du temps que les valeurs exprimentales sont rparties dune faon alatoire par rapport la moyenne et de nous alerter sur une ventuelle drive de lappareil (Tableau 7).
Tableau 7 : rsum des tapes de la surveillance
Principales tapes 1-Vrification dun taux de rsolution correct R > 1,2 dune bonne rptabilit CV < 5% Protocole Tests

R=

d est la distance sparant les sommets des 2 pics, et m la moyenne des largeurs la base des pics. coefficient de variation

d , m

CV =

Calculer, Moyenne, Variance s2 - Erreur alatoire : ua = s / n - Incertitude de la mesure : 30 rptitions du matriau de rfrence certifi MRC multilment, une concentration de 0,5 mmol/L en Fluorure, Chlorure, Nitrite, Bromure, Nitrate, Phosphate, Sulfate, sous des conditions de reproductibilit

s 100, x

uc = umrc + ua

tenir compte de lincertitude de ltalon

2-Construction de la carte de contrle

3-Surveillance quotidienne

-Intervalle de confiance du rsultat (t de Student) x t ( , ) uc valuer les limites de surveillance et de contrle LS = moyenne 2 uc, LC = moyenne 3 uc Construire la carte de contrle avec les limites infrieures et suprieures des LS et LC en fonction de la valeur moyenne de la solution certifie . Sassurer que les valeurs du MRC sont comprises lintrieur des limites de Insrer dans la squence surveillance analytique le MRC peu Pour les chantillons analyser, sassurer prs tous les 5 chantillons, il que la concentration obtenue est suprieure sert de contrle la Limite de Quantification et se trouve bien lintrieur du domaine danalyse

U mrc = k mrc umrc

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On fait correspondre sur cet enregistrement un point chacune des valeurs dune statistique calcule sur des chantillons successifs ; chacun de ces points a pour abscisse le numro de lchantillon et pour ordonne la valeur de la statistique calcule sur cet chantillon. Le but de ces tests de surveillance est de nous alerter en cas danomalie. Reste dfinir quels seront les critres utiliss pour considrer ce qui sera anormal. Nous dcidons dans notre cas dtre vigilants lorsquune mesure sort des limites de contrle, ce qui dclenchera la rptition du contrle pour confirmer ou infirmer la drive et nous alertera lorsque la rpartition des mesures fait suspecter un comportement non alatoire. Un exemple de test de surveillance donn par le logiciel Chromlon est report sur la figure 12. On peut constater que le contrle ne sort pas des limites autorises.

Figure 12 : test de surveillance quotidienne

Conclusion
La dmonstration de la normalit des distributions ne ncessite pas dtre rpte. Lors de la mise au point de la mthode danalyse, ce test est ncessaire et permet dassurer la validit de lemploi des statistiques classiques et de leur puissance. Nous avons utilis ici un modle statistique linaire, qui permet destimer le biais ou incertitude systmatique ( erreur systmatique) et lincertitude alatoire. Les rsultats montrent que le biais nest pas ngligeable et doit tre corrig. Lemploi dun Matriau de Rfrence Certifi (MRC) simpose cette fin. Ce MRC tant lui-mme connu avec une incertitude, donne par le fabricant, cette incertitude doit tre ajoute lincertitude alatoire, pour donner lincertitude compose. Cest cette dernire qui est utilise pour calculer lintervalle de confiance de la mesure. Ici, comme aucune relation na t observe entre lincertitude compose et la concentration, la valeur de lincertitude compose obtenue pour une valeur de concentration moyenne (milieu de gamme) a t retenue par souci de simplification. La mthode du profil dexactitude visualise lintrt de corriger du biais et les limites dacceptabilit. La mthode des ajouts doss permet destimer le pourcentage de recouvrement et de vrifier la linarit entre concentration retrouve et concentration ajoute dans la matrice mme des chantillons analyss, cest--dire pour des chantillons reprsentatifs des milieux tudis. Les droites de rgression obtenues sont utilises pour corriger des biais systmatiques les concentrations

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brutes donnes par la courbe de rponse. Lincertitude compose est galement utilise pour calculer les limites de lintervalle de confiance acceptables, par une mesure rgulire du MRC, qui sert ainsi effectuer les tests de surveillance et alerter en cas de dgradation des performances de la chane de mesure. Lchantillon doit bien sr dabord se situer au dessus de la limite de quantification LOQ.
Matriel supplmentaire :

Lensemble des donnes et des tableaux peuvent tre fournis sur demande.

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