Cours 27102015 PH

Chromatographie de partage
- Greffage est souvent incomplet avec des pourcentages variables

- Prsence de rsidus silanols libres Si-OH: interactions hydrophiles
parasites
- Gnant pour les composs basiques: liaison hydrogne
- Reproductibilit, forme des pics
Principe du
End-capping
Domaine utilisation silice greffe 2 < pH <8
Evolution des phases
- Principe :
La sparation des soluts est fonde sur leur patage entre une
phase stationnaire et une phase mobile
CS
K=
= coefficient de distribution = coefficient de partage
CM
Et k = K VS
VM
Chromatographie de partage = extraction liquide/liquide
-- utilisation de 2 solvants non miscibles
-- un fix des particules de faible diamtre:
- augmentation surface dchange
- amlioration sparation : N
Les phases mobiles
Tampon: fix le pH de la phase

mobile
- Exemples de compositions de phases mobiles :
-Tampon phosphate
- Tampon actate
Chromatographie
- Tampon citrate
Chromatographie
Polarit
de (SM)
phases inverse
- Tampon
formiate
Polarit de phases normale
Hexane/dichloromthane/thanol
80/15/5 %
Hydrophobe / Hydrophile
(Relative)
Eau (Tampon) /mthanol

80/20 %
Hydrophobe / Hydrophile
(Relative)
- Principe :
Phase stationnaire est
- polaire: chromatographie de partage en polarit de phases
normale
sparation de composs polaires
- apolaire: chromatographie de partage en polarit de
phases inverse
sparation de composs apolaires
- Partage en polarit de phases normales :

Phase stationnaire hydrophile
O-H O
Si
H
H
O-H O
O-H
H
H
H
Eau des solvants
Phase mobile hydrophobe

Hxane /Dichlomthane
Compos hydrophile
Compos hydrophobe
Ordre dlution
Hydrophobe
Hydrophile
Temps de rtention peut tre trs lev avec asymtrie
- Partage en polarit de phases normales :

Utilisation de colonne de silice greffe avec des greffons prsentant
un caractre hydrophile
- Partage en polarit de phases normale :
Hydrophile
Hydrophobe
- Partage en polarit de phases inverse :

Influence de la force luante du solvant
Phase mobile
hydrophile
C18H37
Si
R
R
Silice greffe
hydrophobe
Eau/mthanol ou Eau/actonitrile ou Eau/THF 80/20 %
- Partage en polarit de phases

inverse :
Phase stationnaire greffe avec des
groupements apolaires:
- C8
- C18 +++
- Phnyle
Phase mobile: % variable

- eau ou tampon
- mthanol ou actonitrile ou THF

Choix de la phase mobile est empirique : classification dHildebrand
2 < k < 10
d
G: grande
Ordre dlution
Hydrophile
Hydrophobe
Reverse Phase: RP
Hydrophobie

Influence du caractre hydrophobe du solut sur la rtention
Ordre dlution
Hydrophile
Hydrophobe
BDCQ
Hydrophilie et
Bis desethylchloroquine
BDCQ
tR
Cyt
Cyt
H
Mono desethylchloroquine
MDCQ
Chloroquine CQ

Influence de la fraction volumique du solvant (% solvant)
Augmentation du pouvoir luant

Influence du pH de la phase mobile
RCOOH + H2O
Influence du pH de la phase mobile
Ka=
RCOO- + H3O+
[ RCOO- ]. [H3O+]
[ RCOOH]
pKa = -log Ka
R-COO-
pH = pKa - 2 100 % RCOOH

pH = pKa + 2 100 % RCOO-
R-COOH
pka = 4,2
pka = 4.8
pka = 3
pka = 4.1
- Chromatographie de partage : +++ utilise

- polarit de phases normale
- rserve la sparation des composs polaires
- possibilit dutiliser silice non greffe et greffe (amine,cyanopropyle)
- lution plus hydrophobe au plus hydrophile
- moins polyvalente et moins reproductible
- polarit de phases inverse
- Reverse Phase (RP) avec phase greffe C18,C8, phnyle
- lution plus hydrophile au plus hydrophobe
- reproductible et polyvalente
- soluts sparer solubles dans eau ou solvants polaires
- applicables la sparation de nombreux composs: mdicaments,
vitamines, polluants
Chromatographie avec formation de paires dions

-Cas particulier de la chromatographie de partage en polarit de
phase inverse: chromatographie avec appariement dions
-Adapts la sparation des composs ionisables :
- acides faibles: acides carboxyliques
- bases faibles: amines
- Ajout dun contre-ion (CI) la phase mobile
- concentration 10-3 10-2 mmol/L
- composs chargs chane hydrophobe
Solut
Contre ion
Phase mobile
(Tampon pH fix, % mthanol ou actonitrile)
Paire ion
Interactions hydrophobes
Si
Phnomne de partage

Contre ion donn une concentration donne
-
+ +
+
+
-
- nombre de molcules de CI
- hydrophobie du solut : logP
+
-
Variations de lhydrophophie de
la paire dions
Hydrophobie croissante
R
Solut
Phase mobile
(Tampon pH fix, % mthanol ou actonitrile)
Contre ion
Si
Interaction ionique
Si
Phnomne dchanges dions dynamiques
Influence de la concentration en contre ion
Influence de la fraction volumique du solvant
Concentration en CI
Exemple de sparations de diffrents acides faibles
Exemple de sparations de catcholamines et mtabolites

Conditions dapplication
- pH de la phase mobile tel que le compos sparer soit totalement
ionis
- Concentration habituelle en CI 10-3 10-2 mmol/L

- Quand la concentration en CI augmente, k augmente donc les tR
augmentent
-Augmentation de la fraction volumique du solvant diminue les temps

de rtention , mais annule la sparation, baisse de la slectivit ()
- Pas de gradient en chromatographie de paires dions
Ne pas confondre avec la chromatographie dchange dions

Cours 27102015 PH

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Cours 27102015 PH

Transféré par

Informations du document

Description originale:

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Cours 27102015 PH

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Chromatographie de partage

- Greffage est souvent incomplet avec des pourcentages variables

- Reproductibilit, forme des pics

Evolution des phases

Les phases mobiles

Tampon: fix le pH de la phase

Eau (Tampon) /mthanol

- Partage en polarit de phases normales :

Eau des solvants

Phase mobile hydrophobe

Temps de rtention peut tre trs lev avec asymtrie

- Partage en polarit de phases normales :

- Partage en polarit de phases normale :

- Partage en polarit de phases inverse :

- Partage en polarit de phases

Phase mobile: % variable

- Partage en polarit de phases inverse :

- Partage en polarit de phases inverse :

- Partage en polarit de phases inverse :

Augmentation du pouvoir luant

- Partage en polarit de phases inverse :

- Partage en polarit de phases inverse :

Influence du pH de la phase mobile

pH = pKa - 2 100 % RCOOH

- Chromatographie de partage : +++ utilise

Chromatographie avec formation de paires dions

Chromatographie avec formation de paires dions

Chromatographie avec formation de paires dions

Chromatographie avec formation de paires dions

Phnomne dchanges dions dynamiques

Chromatographie avec formation de paires dions

Influence de la concentration en contre ion

Chromatographie avec formation de paires dions

Influence de la fraction volumique du solvant

Chromatographie avec formation de paires dions

Exemple de sparations de diffrents acides faibles

Chromatographie avec formation de paires dions

Exemple de sparations de catcholamines et mtabolites

Chromatographie avec formation de paires dions

- Concentration habituelle en CI 10-3 10-2 mmol/L

-Augmentation de la fraction volumique du solvant diminue les temps

Ne pas confondre avec la chromatographie dchange dions

Vous aimerez peut-être aussi