Performances de l’imagerie par spectrométrie de masse

MALDI appliquée aux polymères

BANCHET Valentin, BOUCHELAGHEM Massyl, HADJIAT Ines, ALMEIDA Lucas, HOXHA Lia

Projet Bibliographique
M1 Chimie 2019/2020

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 Table des matières

Introduction .....................................................................................................................3

Étude de l’article : MALDI-TOF imaging mass spectrometry of artifacts in “dried droplet”

polymer sample ................................................................................................................5

Étude de l’article : Laser Beam Filtration for High Spatial Resolution MALDI Imaging Mass
Spectrometry ....................................................................................................................7

Étude de l’article: Significant Parameters in the Optimization of MALDI-TOF-MS for

Synthetic Polymers. ........................................................................................................11

Étude de l’article : On the Origin of Increased Sensitivity and Mass Resolution Using Silicon
Masks in MALDI. .............................................................................................................14

Bibliographie ..................................................................................................................22

2
 Depuis plusieurs années des recherches sur l’imagerie par spectrométrie de masse
sont menés afin de rendre cette technique plus efficace dans l’analyse des polymères ou
encore des peptides et des protéines dans les tissus biologiques. Ce rapport dédié à
l’imagerie MALDI présentera les performances de cette technique appliquée aux polymères,
au travers d’articles scientifiques et d’une discussion en fin de rapport nous verrons
comment ces performances peuvent être améliorées en termes de résolution spatiale
(filtration du laser), sensibilité (masque en silicium) ou encore lors de la préparation des
échantillons (méthode dried droplet).

Introduction

Le terme polymère a était utilisé pour la première fois en 1866 par Marcellin
Berthelot[1], un chimiste français. Les polymères constituent une classe de matériaux, il
s’agit d’un enchainement de macromolécules. Les plus connus sont les protéines, le bois, les
acides nucléiques qui sont des polymères naturels, mais aussi les matières plastiques, le
caoutchouc, la peinture qui sont eux fabriqués à l’aide d’un processus chimique, la
polymérisation, ce sont des polymères synthétiques.

De nos jours, les polymères synthétiques représentent une classe de polymère ayant
diverses applications dans le milieu médical ou
encore industriel : plastique, caoutchouc et
élastomères, fibres, peintures ou encore
adhésif. La production de matières plastiques
représente aujourd’hui plus de 300millions de
tonne par ans[2]. Le développement de ces
matières étant indispensable dans notre
univers quotidien, il demande des méthodes
d’analyse rapide et efficaces.

Figure : Production de matières plastiques en 2015 [ 1 ]

La spectrométrie de masse permet une analyse facile et rapide de ces composés en

fournissant des informations sur la masse molaire ou encore les structures de groupe
d’extrémité des polymères synthétiques. De par leur poids moléculaire élevé, l’imagerie
MALDI (Matrix Assisted Laser Desoprtion/Ionization) est la mieux adaptée pour l’analyse de
ces macromolécules.

3
L’imagerie par spectrométrie de masse MALDI permet de de créer des images moléculaire
représentant la distribution de molécules, leur localisation, dans un échantillon. L’utilisation
de la source MALDI permet de produire des ions à partir d’échantillons solide, comme dans
le cas des polymères permettant ainsi de garder leur forme intacte. Comme pour l’analyse
directe, un spectre sera enregistré sur des spots, zone irradiée par le faisceau laser, de
l’échantillon jusqu’à en recouvrir toute la surface. Après analyse complète, une image de la
répartition de la molécule cible ayant un rapport masse sur charge choisis sera construite
via un logiciel [3].
La découverte de la méthode d’ionisation MALDI a été introduite pour la première fois en
1985 par des chercheurs allemands. Il faudra attendre le prix Nobel de 2002 obtenu par le
chercheur japonais Koishi Tanaka qui a démontré qu’avec une combinaison de matrice et de
laser, il était possible d’ioniser une macromolécule tel qu’une protéine [4].
Le principe sur lequel repose l’imagerie MALDI et donc la méthode en elle-même est
récente.
Il est donc nécessaire et « logique » en tant que scientifiques curieux et à la recherche des
meilleures méthodes d’analyse, de vouloir augmenter les performances de cette technique
en termes de sensibilité, résolution spatiale, traitement des données ou capacité de
profiling par exemple.
La plupart des publications sont encore focalisés sur l’applications aux tissus biomédicaux.
Le but de notre travail est de souligner les potentiels de l’imagerie par spectrométrie de
masse MALDI dans le domaine des polymères synthétiques en expliquant ses principes, les
méthodes/paramètres qui permettraient d’améliorer les performances de cette
spectrométrie, en donnant un aperçu des applications récentes et les perspectives d'avenir.
Les articles choisis permettront de définir plus précisément l’imagerie MALDI aux
polymères, gngngngnn selon les articles
Les articles présentés permettront ainsi de répondre à la problématique suivante :
Comment augmenter les performances de l’imagerie par spectrométrie de masse MALDI ?

4
Étude de l’article : MALDI-TOF imaging mass spectrometry of artifacts
in “dried droplet” polymer sample [5]
Par Lia HOXHA

La préparation de l’échantillon afin de mener à bien une analyse quel que soit la méthode
choisie est une étape très importante.
La méthode « dried droplet » est la plus utilisé en spectrométrie de masse MALDI : la
matrice est préparée à partir d’une solution d’eau et de solvant organique, puis elle est
mélangée avec l’échantillon à analyser sous forme liquide et déposé sur la plaque de dépôt
MALDI. Le solvant est ensuite évaporé et l’analyse peut avoir lieu. [6]
Dans le cas de l’imagerie par spectrométrie de masse MALDI des polymères synthétiques, la
méthode reste problématique.

En effet, l’évaporation du solvant selon sa nature ainsi que la surface de la plaque MALDI ou
aura lieu l’analyse conduisent à des expériences peu fiable et non reproductible. C’est ce
qu’illustre l’article étudié dans cette partie.
Lors du dépôt plusieurs phénomènes physico chimique rendent le substrat hétérogène ce
qui fausse la distribution spatiale des masses moléculaires.

Ces mécanismes tels que le flux radial, le flux Marangoni qui est un écoulement du a la
différence de tension superficielle entre les liquides du mélange ou encore des forces
électrostatiques et de Van der Waals sont illustrés dans la figure ci-contre.

Figure : Mécanismes responsables de la distribution spatiale des charges

5
Afin d’illustrer ces phénomènes et comprendre la différence de répartition de polymères
homologues selon le solvant plusieurs expériences sont décrites dans l’article.

Les analyses d’imagerie par spectrométrie de masse MALDI sont menée à partir
d’échantillons de polystyrènes possédant des masses molaires entre 2000 et 5000 g.mol-1
préparés a partir de la méthode « dried droplet » et dissous dans du TétraHydroFurane
(THF), DiMéthylamylamine (DMMA) ou du DiMéthylFormamide (DMF). Dans chaque cas, le
solvant est le même utilisé pour la matrice qui elle est composée de TriFluoroAcétate
d’Argent (AgTFA) et d’Acide alpha Rétinoïque.
Un dépôt de mélange de polystyrène possédant différentes masses a été effectué en faisant
varier le solvant, dans un cas le THF et dans l’autre le toluène. La différence notable dans
cette expérience entre ces deux solvants est le taux d’évaporation.
Dans le cas où le THF est utilisé, l’inégale répartition des masses n’est pas notable car son
évaporation est très rapide. Sachant que le toluène met environ trois fois plus de temps à
s’évaporer, il induit un écoulement radial qui amène les polymères de masse plus élevées
sur les bords du dépôt et donc l’observation d’une intensité plus élevée pour les polystyrène
plus « lourds » à la périphérie des spots et les plus légers vers le centre.

Le même phénomène de mauvaise distribution des charges est observé avec le DMMA
comme solvant qui possèdent un taux d’évaporation inférieur.

L’expérience effectuée avec du DMF comme solvant montre une distribution homogène,
ceci s’explique par le taux d’évaporation encore une fois. Contrairement au THF, le DMF met
environ 2h a s’évaporé et c’est cette évaporation très lente qui ne génère pas assez de force
hydrodynamique pouvant conduire aux mécanismes cités plus haut. En ayant fait
l’hypothèse que ces forces étaient à l’origine de la séparation des masses des polymères
homologues, les observations faites sont bien en accord avec ce qui a été expliqué.
Cependant, ceci n’est valable que pour les polymères et non pour les adduit d’argent qui
eux ne sont pas affectés par cette évaporation, ils sont observables de façon homogène sur
l’image ceci laisse à penser d’un phénomène de mauvaise distribution spatiale des charges
seulement dans le cas des grandes molécules telles que les polymères ici le polystyrène.
Il a été mentionné plus haut que la surface sur laquelle était effectuer le dépôt pourrait
avoir un impact sur la distribution des masses. Une autre expérience est menée afin de
comparer l’influence de différentes surfaces selon leur texture.

Une surface en acier poli et une autre en acier rugueux présentant des rainures sont
comparées et les résultats montrent que la même séparation de charge des polymères
homologues est observée et la seule différence réside dans l’apparition d’une distribution
spatiale différente pour l’acier rugueux due à un phénomène de capillarité.

6
Les expériences menées dans cet article montrent bien que la préparation de l’échantillon
reste capitale pour la qualité de l’analyse afin de palier a ces répartition inégales des masses
il serait plus judicieux de préparer des échantillons sans solvant ou utiliser des méthodes de
vaporisation par exemple. Même si la méthode « dried droplet » est la plus utilisée en
spectrométrie de masse MALDI, en imagerie, elle reste une méthode problématique en ce
qui concerne les polymères et elle peut mener à des erreurs d’analyse.

Étude de l’article : Laser Beam Filtration for High Spatial Resolution

MALDI Imaging Mass Spectrometry[7]
Par Valentin BANCHET

7
 L’utilisation d’un sténopé afin d’augmenter la résolution spatiale en imagerie par
spectrométrie de masse en utilisant la désorption/ionisation laser assistée par matrice
(MALDI) est mise en évidence dans cet article.
La résolution spatiale est un facteur important car celle-ci va jouer sur la qualité de l’image
obtenue, pour certaine application elle doit être inferieure a 10µm, ce qui n’est pas possible
à obtenir avec un spectromètre de masse courant. Dans cet article l’appareil utilisé permet
d’obtenir un diamètre de faisceau laser sur la cible d’au mieux 20µm. Ici, le mode
microsonde est utilisé (acquisition de l’image pixel par pixel) car il s’agit d’une méthode peu
couteuse, facile à mettre en place et ayant une sensibilité ionique par pixel élevé. Pour ce
mode la résolution spatiale finale de l’image dépend principalement du diamètre du
faisceau laser sur la cible ainsi que du pas des zones d’ablations.
Afin d’améliorer cette résolution spatiale il est possible d’utiliser des dispositifs optiques
pour modifier la taille du faisceau laser ou la méthode de suréchantillonnage (utilisation
d’un faisceau laser plus grand que la taille du pixel souhaité). Cependant, ces méthodes
présentent des inconvénients et cet article propose une alternative, la filtration spatiale en
utilisant un sténopé, c’est une méthode simple à mettre en place sur l’appareil utilisé et peu
couteuse. Le sténopé joue le rôle de filtre spatial, il transmet seulement la partie centrale du
faisceau laser qui contient les basses fréquences spatiales.
Lorsqu'une résolution spatiale élevé pour l'imagerie MS est nécessaire, le faisceau laser doit
être concentré en un point le plus petit possible.
La formule ci-dessous permet d’évaluer les conditions de focalisation a utilisé pour
optimiser le spot laser sur une cible mais aussi pour optimiser les paramètres du filtre
spatial. Le diamètre du spot de faisceau laser D(f) dépend du diamètre du faisceau d’entrée
D(0), de la qualité du faisceau M², de la longueur d’onde du laser λ ainsi que de la distance
focale de la lentille f.

Pour obtenir le diamètre du spot de faisceau qui rendrait la résolution spatiale la meilleure,
théoriquement (d’après la formule) il faudrait un sténopé de 10-15um de diamètre qui
serait l’idéal pour la filtration dans le cas d’un faisceau gaussien optimale c’est à dire pour
M²=1.1 et d’une optique de focalisation proche de la limite de diffraction. Des expériences
ont été mené avec des sténopés en céramique de 25,30,40 et 50um et montre que la
meilleure résolution est obtenue lorsqu’on utilise le sténopé de plus faible diamètre soit
25um.

8
 Figure : Fonctionnement du filtre sténopé (a et b) et résultats expérimentaux (c et d)

Le diamètre du filtre sténopé est choisi de manière à ce que la perte d’énergie du laser soit
faible et pour supprimer le bruit de fond qu’on observe sur le profil du faisceau laser avant
que celui-ci traverse le sténopé. (Figure 1-a). Après le passage du faisceau laser au travers
du sténopé, le bruit de fond n’est plus présent.
Sur la figure 1-c, l’image de droite correspond à l’impact du faisceau laser quand celui-ci est
filtré (un nombre de tir de laser suffisant pour bruler la matrice a été effectuer), la zone
d’ablation obtenue est petite, le spectre de masse correspondant est en haut sur la figure 1-
d. L’image de gauche correspond à l’impact de ce même faisceau sur la même zone mais
sans le sténopé, la zone d’ablation s’étends à 20µm de diamètre (en plus du point central il y
a des petits points satellites), le spectre de masse correspondant est situé au milieu sur la
figure 1-d. La différence de résolution spectrale entre les différents spectres de masses et
dû à une différence d’énergie entre le laser avant et après filtration. De plus, la présence des
points satellite à bien un impact sur le spectre de masse final obtenue puisque des pics
supplémentaires sont visibles sur le spectre de masse du milieu.
Ainsi ces expériences ont permis de montrer qu’il est possible d’obtenir une résolution de
5µm en utilisant la méthode de suréchantillonnage avec un faisceau laser qui n’est pas filtré
(figure 1-c gauche) mais aussi que le faisceau filtré donne une image plus claire avec des
détails plus fins, sans points satellites (figure 1-c droite). Ainsi l’utilisation du sténopé est
bien plus efficace que la méthode de suréchantillonnage même si la résolution spatiale
finale obtenue est identique.

9
La filtration spatiale d’un faisceau laser permet d’obtenir une résolution spatiale de 5µm
pour les instruments commerciaux d’imagerie MALDI MS équipés de faisceau laser
possédant un diamètre large. La mise en œuvre d’un filtre spatial avec un sténopé est une
méthode peu couteuse et pratique afin d’obtenir une résolution spatiale plus élevée que
celle de référence fournie par le constructeur d’origine de l’appareil. De plus il est possible
de faire pivoter le filtre hors du chemin du faisceau laser d’une simple rotation. Enfin cette
méthode est valable pour tous les appareils d’imagerie MALDI-MS.

10
 Étude de l’article: Significant Parameters in the Optimization of
MALDI-TOF-MS for Synthetic Polymers. [7]
Par Lucas ALMEIDA

Sensibilité en performances de l’Imagerie MALDI

Cet article va discuter spécialement les propriétés liées à la sensibilité en performance de

l’imagerie MALDI en utilisant le polystyrène (PS). Le rapport signal-bruit S/N (signal-to-noise
ratio) a été utilisé comme l’élément principal d’analyse. Les paramètres étudiés qui ont été
choisi afin de vérifier ses interactions avec le S/N sont: la voltage du détecteur; l’énergie
laser (argon), qui peut occasionner la fragmentation polymérique, alors que des oligomères
de masse souvent plus élevée requièrent des énergies plus élevées pour la désorption; Le
temps de délai; La tension d’extraction; La tension de la lentille (Type Einzel); La
concentration du polymère; La matrice utilisée (l’acide trans-rétinoïque et aussi le Dithranol,
que nous allons appeler AtR et DIT, respectivement). La source qui permet la cationisation
est le Trifluoroacétate d'argent, AgTFA.
La variation instrumental des paramètres cités va diriger cette étude et les résultats
expérimentaux, qui a mis en jeu deux types des matrices en différentes concentrations:
1:75:1, 1:150:1 et 1:225:1 de PS-AtR-AgTFA et 1:40:1, 1:80:1 et 1:120:1 de PS-DIT-AgTFA. Les
rapports S/N ont été calculés pour chaque distribution polymérique en utilisant un pic sur
masse faible, autre sur une masse grande et autre centralisé sur la distribution de masse
moléculaire du polystyrène (MMD, molar mass distribution). La masse du polystyrène
utilisée est 9ku, la voltage d'électro-ionisation était 5kv, avec le flux de 5 µL/min.
Cette figure ci-dessous exprime les moyennes globales de chaque paramètre pour toutes les
données exploités, centralisé sur la masse de 8900 u (masse centrale).

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 L'avancement de cette analyse de sensibilité se déroule lors de changement des
paramètres et l'interaction avec le rapport S/N et, de façon également importante, la
matrice choisie, qui aura l'influence sur les conditions optimales de chaque paramètre.

D’abord, par rapport à la matrice PS-Acide trans-Rétinoïque (PS-AtR-AgTFA), les

figures ci-dessous expriment chaque changement observé avec les moyennes globales de
réponse du S/N (à gauche) et les interactions de chaque paramètre instrumental (à droite),
c’est-à-dire l’effet d’un paramètre dépendra du niveau de l’autre.

Ainsi, les figures permettent d'évaluer que les paramètres plus influents sur la
sensibilité sont la voltage du détecteur et le temps de délai; plus de temps de délai et plus
de voltage du détecteur, plus sera la valeur S/N. Il est aussi important l’influence d’énergie
du laser, que si faible, donnera plus grand rapport S/N. Comme cela, nous pouvons signaler
la configuration optimale instrumentale: grande voltage et temps de délai et l’énergie du
laser faible.
Pareillement, nous avons aussi les figures correspondantes à la matrice PS-Dithranol
(PS-DIT-AgTFA).
Les résultats obtenus sont similaires en général (voltage du détecteur et temps de délai) et
la valeur S/N globale est mineure. Par contre, les effets de l’énergie du laser sont plus
expressifs dans cette matrice et, contrairement la matrice PS-AtR-AgTFA, augmenter
l’énergie du laser donnera un plus grand ratio S/N. Ainsi, c’est possible d’établir aussi
l’importance de la matrice choisi sur la sensibilité. Les configurations optimales pour PS-AtR-
AgTFA sont grande voltage, temps de délai et l’énergie du laser. Pour les deux matrices, les
autres effets qui n'étaient pas décrits sont moins importants.

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 Pour conclure, la tension du détecteur et le temps de délai étaient les variables plus
importantes et influentes sur le polystyrène ; Dans les deux matrices Dithranol et Acide
trans-Rétinoïque, les deux paramètres cités étaient les plus influents, mais l'énergie laser a
également démontré son importance. Le type de matrice utilisée est un paramètre
significatif et les configurations instrumentales afin d’optimiser la sensibilité de l’imagerie
MALDI dépendent de cette interaction polymère-matrice. Les conditions de préparation des
échantillons qui ont résulté les meilleurs ratios S/N ont été 1:120:1 pour PS-DIT-AgTFA et
1:75:1 pour PS-AtR-AgTFA.

13
 Étude de l’article : On the Origin of Increased Sensitivity and Mass
Resolution Using Silicon Masks in MALDI. [8]
Par Ines HADJIAT

Depuis son développement, MALDI a prouvé ses performances dans l’analyse de

biomolécules et de nombreux efforts ont été faits pour étudier le processus de
désorption/ionisation par divers moyens. Malgré une compréhension progressive de la
théorie et l’élaboration de différents modèles de MALDI, un contrôle clair sur la production
d’ions est encore difficile. En effet, la quantité d’ions produits par tir laser par rapport au
volume total de matériaux desorbés est très faible, ce qui signifie que seulement très peu de
molécules desorbées se transformeront en ions détectables au point final. Cela a des
conséquences particulières pour certaines applications, telles que l’imagerie MALDI MS
(limitation dans la sensibilité de Maldi). L’instrumentation sera donc un moyen d’améliorer
la sensibilité en augmentant la transmission des ions et en utilisant des systèmes de
détection plus sensibles.
D’autre part, une fine concentration du faisceau laser (5 à 10 m) permettrait d’atteindre des
images à la résolution spatiale plus élevées.
Cependant, diverses études soulignent une diminution intrinsèque de l’intensité du signal
pour une forte concentration. Plutôt que de concentrer le faisceau laser, nous avons
développé des systèmes de masque de silicium pour diminuer la zone irradiée. Ces études
démontrent une augmentation simultanée de la résolution spectrale et de l’intensité du
signal lors de l’utilisation de masques gravés en silicium de différentes tailles d’ouverture.
Fabrication de masques : Les masques correspondent à de fines lames de silicium (appelé «
Wafers ») dans lesquelles ont été gravées de nombreuses ouvertures de dimensions et de
formes identiques et régulièrement espacées. La réduction de la zone de l’échantillon
analysée sera donc obtenue en coupant une partie du faisceau laser. Les ouvertures
réalisées dans les masques de nos expériences sont de forme carrée, de 60 µm d’épaisseur
et de quelques dizaines à quelques centaines de micromètres de côté.
On distinguera par la suite les masques pour lesquels les ouvertures seront suffisamment
espacées les unes des autres pour supposer que chacune soit irradiée individuellement, des
grilles pour lesquelles plusieurs ouvertures seront irradiées simultanément.

Figure 1 : Masque

14
Maintien sur la plaque d’échantillonnage

Le masque est préalablement posé sur l’échantillon. Il est alors inséré entre le support
d’échantillonnage (lame de verre-ITO) et une lame de laiton, rendus solidaires à l’aide de
bandes de scotch conducteur double-face.
Le masque étant placé sur le support d’analyse de façon à ce que les échantillons soient en
face des ouvertures, l’irradiation de l’échantillon peut se faire aisément en ciblant ces
ouvertures avec le spot laser.

Résolution spatiale : La figure 2 présente des clichés d’échantillons après leur irradiation à
haute énergie en l’absence de masque (a) puis à travers des masques d'ouverture 100 (b),
50 (c) et 25 µm (d). Les zones ablatées sont respectivement environ 3, 20 et 100 fois plus
petites que celle obtenue sans masque.

Figure 2un nom a cette figure ??

Cette différence est évidemment due à l'inclinaison du laser avec l’ensemble masque/cible,
induisant l'émergence d'une zone d'ombre, région que le laser ne peut en principe pas
irradier. Le laser qui équipe le spectromètre de masse arrivant avec un angle de 45° sur
l’échantillon, la zone d’ombre projetée peut être aisément estimée en fonction des
dimensions du masque par des considérations géométriques simples : 60 % pour M100,
100% pour M50 et M25. Dans ces deux cas, la zone d'ombre est en principe aussi grande
que les ouvertures.
Ces écarts peuvent être expliqués par la réflexion du faisceau laser sur les parois des
ouvertures.

15
Le contrôle fin des paramètres (fluence, épaisseur et largeur des ouvertures) gouvernant la
dimension de la zone d'ombre pourrait en principe réduire encore les dimensions des zones
irradiées, donc améliorer la résolution spatiale.

Résolution de masse. La figure 3 montre un zoom de spectres de masse centrés sur les
signaux d’ions de bradykinine protonés et cationisés et enregistrés avec et sans masque, à
l’aide du spectromètre de masse. Il est clairement démontré que l’utilisation du masque
améliore également la résolution de masse. Cela donne, par exemple, la possibilité de
dissocier complètement les pics correspondant aux adduits de bradykinine. Ceci donne par
exemple la possibilité de dissocier complètement les signaux correspondant aux trois
adduits de la bradykinine : [Bradykinine+Na]+, [Bradykinine+K]+ et [Bradykinine+Si]+.

Notez que d’autres paramètres généralement utilisés pour améliorer la résolution ont été
optimisés pour la détection du signal en l’absence de tout masque, ce qui donne des
possibilités d’amélioration ultérieure. Contrairement à la sensibilité, cet effet est plus précis
pour la plus petite ouverture et la fluidité. Plus précisément, l’élargissement du pic d’analyte
avec une fluence croissante est beaucoup moins prononcé avec un masque. Ainsi,
l’amélioration de la résolution de masse ne coïncide pas exactement avec l’amélioration de
sensibilité, qui pourrait suggérer des origines différentes pour les deux effets.

Compte tenu de ces considérations, une explication possible pourrait être que la forme du
faisceau laser se transforme en un profil plus homogène après qu’il a été coupé par le
masque. La matrice entière est ensuite irradiée avec la même fluence laser, conférant une
distribution plus étroite de fluence aux ions désorbés. Dans ce cadre, le profil de faisceau
plus homogène de l’Ultraflex II conduit naturellement à une amélioration plus modeste de
la résolution de masse. Cependant, nous avons observé un comportement très différent en
fonction de la taille de tache choisie.

16
 Figure 3 nom aussi ???

Les grilles : En réduisant suffisamment la distance entre certaines ouvertures, on peut

former des grilles. Par conséquent, l’impulsion laser irradie simultanément plusieurs
ouvertures. Étant donné qu’une surface plus grande est affectée, les grilles devraient fournir
une augmentation supplémentaire de la sensibilité par rapport à un seul masque, mais au
prix de la détérioration de la résolution spatiale. L’avantage de sensibilité est clairement
démontré par la figure 4, qui montre la comparaison des distributions de la fluence du signal
de bradykinine pendant l’irradiation de l’échantillon par le masque d’ouverture de 50 m et
la grille correspondante (distance entre deux ouvertures : 25 m). Cependant, alors que neuf
ouvertures sont simultanément irradiées par le laser, l’intensité du pic de bradykinine ne
fait qu’augmenter par un facteur de 4 au maximum.
Dans le cas de l’Ultraflex II, les diamètres du faisceau laser limitent le nombre d’ouvertures
irradiées à un ou deux au plus. Aucune augmentation de la sensibilité par rapport à un
masque simple n’est alors prévue. Cependant, la grille reste utile car elle facilite le
positionnement délicat du faisceau incliné à l’intérieur des plus petites ouvertures et justifie
son application dans l’étude de la sensibilité avec l’Ultraflex II.

17
Etude de l’article: Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight
mass spectrometric imaging of synthetic polymer sample spots prepared using
ionic liquid matrices.

Les taches d'échantillons de polymère à analyser sont préparés par la méthode courante de
gouttelettes séchées : La matrice, l'échantillon et le sel étaient chacun dissous à une
concentration de 10 mg/mL-1 des solvants à faible point d'ébullition ont été utilisés
(chloroforme, THF), les solutions ont été mélangées dans un rapport de (10: 1: 1), (matrice
/Échantillon / sel), et généralement 0,5 à 2 μL ont été repérés sur la cible à l'aide d'une pipette
Eppendorf, les Sels de potassium (acétate trifluoroacétique ou chlorure) ont été utilisés
comme agents de cationisation. , 10 μL de liquide ionique fraîchement préparé ont été
mélangés avec 10 μL de la solution d'échantillon. Cationisation supplémentaire Aucun sel n'a
été ajouté.
Cependant cette méthode révèle souvent la formation d'anneaux accompagnés par la
ségrégation des molécules de matrice et d'échantillon ainsi que des homologues polymères
eux-mêmes

18
L’expérience effectuée montre qu’initialement avec l’augmentation de la température ainsi
que le taux d’évaporation, les molécules de l’analyste se rapprochent du bord extérieur des
Gouttelettes séchés conduisant automatiquement à la formation de plus petits anneaux
contenant une plus grande quantité d'échantillon associée avec des phénomènes de
transport se produisant pendant que le solvant s'évapore Simultanément, la quantité
d'échantillon au centre du spot diminue, Les résultats sont parfaitement soutenus par les
forces capillaires de Deegan Théorie, surtout à 20 °C sont de plus en plus superposés, par des
phénomènes de transport capillaire. Cependant, à 70 °C, le taux d'évaporation semble être si
élevé que le temps pour Le transport complet de l'échantillon vers la périphérie externe est
Insuffisant. Par conséquent, une quantité considérable de PEG pourrait encore Être trouvée
dans le spot Ainsi, une évaporation extrêmement rapide du solvant en appliquant des
températures plus élevées pourrait éventuellement contourner la formation d'anneau bien
que dans la plupart des applications MALDI, cela ne semble pas fiable.

Les problèmes générés lors de la préparation des spots d'échantillonnage en utilisant la

méthode des gouttelettes séchées et montrer la nécessité pour améliorer le mode de
préparation des échantillons en général, afin de contourner la formation d'anneaux et induite
par laser, sublimation matricielle, l'applicabilité des matrices ioniques a été étudié dans les
expériences d'imagerie MALDI

Et pour cela Trois matrices liquides ioniques (ILM) différentes basées sur des composés
aromatiques conventionnellement utilisés pour MALDI-TOF MS ont été préparés, La
formation de liquides ioniques a été prouvée par MALDI-Masse d'imagerie, où la matrice DHB
(acide 2,5-dihydroxybenzoïque) et acide sinapinique SA, DCTB a été mélangée, Avec du
méthanol pour donner une solution à 200 mM / L et avec une Quantité équimolaire de n-
butylamine (DHB) ou triéthylamine (DCTB, SA). Après mélange par agitation intense (1 min).
On a laissé le solvant s'évaporer à température ambiante Enfin, 2 ml d'éthanol ont été
ajoutés pour réduire la viscosité.

19
Les analyses d’imagerie par spectrométrie de masse MALDI sont menée à partir
d’échantillons de polymère PEG et PMMA :

Figure 1 : Images d'intensité d'ions MALDI enregistrées avec DHB-

IM utilisant différents modes de balayage et polymères (PEG Na + m / z

3036 et PMMA Na + m / z 4030)

Figure 2 : Images d'intensité d'ions MALDI enregistrées avec SA et

SA-IM utilisant différents modes de balayage et polymères (PEG Na +

M / z 3036 et PMMA Na + m / z 4030)

Figure 3 : Images d'intensité d'ions MALDI enregistrées avec

DCTB-IM utilisant différents modes de balayage et polymères (PEG

Na + m / z 3036 et PMMA Na + m / z 4030)

De nombreuse expériences d'imagerie effectué avec plusieurs modes de balayage, sur les
trois matrices ioniques différentes basées sur DHB, SA et DCTB ont été synthétisé, et vérifiés
pour leur adéquation au processus MALDI. Contrairement à matrices cristallines, les matrices
ioniques affiché des performances supérieures. Ils sont stables dans une masse vide du
spectromètre pendant plusieurs heures. De plus, Comme le suggèrent les figures Aucune
inhomogénéité visible à l'intérieur des taches n'est observée, les points d'échantillonnage
préparés sont très homogènes et peuvent être numérisés séquentiellement sans perte
d'intensité ni ségrégation. Comme le montrent les données d'imagerie MALDI.
La synthèse des matrices ioniques étant très simple, ces composés pourraient être une
alternative intéressante pour de nombreux Applications des polymères dans MALDI MS.
Tous les résultats trouvés dans cet article montrent bien que Les matrices liquides ioniques
peuvent être utilisées pour surmonter la ségrégation, un inconvénient typique des
Préparations de gouttelettes séchées. MALDI conventionnel, Les spots d'échantillonnage
homogènes sont faciles à préparer, stables dans le vide MS et, par conséquent, Améliorer la
reproductibilité du MALDI.

20
J'ai trouvé ca qui pourrait eter interessant pour une ouverture par exemple en fin de
rapport :

Perspectives
Les études réalisées jusqu’ici utilisent la technologie de MALDI-UV. Des travaux sont en cours pour
développer l’imagerie MALDI infrarouge [21]. L’imagerie par MALDI-IR permettrait de combiner les
potentialités de l’imagerie MALDI et les récents développements dans l’utilisation des lasers IR [31, 32].
En effet en MALDI-IR, les mécanismes conduisant à l’obtention d’ions en phase gazeuse reposent sur de
l’excitation vibrationnelle, principalement des liaisons O-H et N-H. Ainsi, de nombreux composés sont
potentiellement de bonnes matrices, comme par exemple l’eau. Ce mode autorise donc l’utilisation de
matrices liquides ou solides se rapprochant des conditions physiologiques. De plus, de part la nature des
processus physicochimiques mis en jeu en IR, cette méthode a permis d’obtenir des résultats
prometteurs dans le cadre de l’analyse d’oligonucléotides et d’ADN.

https://www.medecinesciences.org/en/articles/medsci/full_html/2007/03/medsci2007231sp31/medsci2
007231sp31.html

21
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Molecules p30-32 1986. Disponible sur
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PIL7M&sig=ACfU3U2dPx14kMA45OeFEYFWyQ4vMKpkCQ&hl=fr&sa=X&ved=2ahUKEwiX3Y-
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solution_MALDI_Imaging_Mass_Spectrometry

[] Article lucas

[] Article Ines

[] Article Massyl

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