Spectro Photo M È Tre

CHAPITRE 6 :
LE SPECTROPHOTOMETRE
CHAPITRE 6 : LE SPECTROPHOTOMETRE
Objectifs pédagogiques :
‐ Citer les principaux éléments d
Citer les principaux éléments d’un
un
spectrophotomètre
‐ Décrire les procédures d’entretien
p p
d’un spectrophotomètre
‐ Savoir changer l’ampoule d’un
spectrophotomètre
t h t èt
II‐ Généralités sur le spectrophotomètre
Généralités sur le spectrophotomètre
1‐ Définition et utilité:
et utilité:
Le mot spectrophotomètre est dérivé du latin spectrum,
qui signifie image et du grec phos ou photos, qui
qui signifie image, et du grec phos ou photos qui
signifie lumière.
Le spectrophotomètre est un des principaux appareils
Le spectrophotomètre est un des principaux appareils
utilisés dans les domaines du diagnostic biologique et de
la recherche.
Il utilise les propriétés de la lumière et son interaction
avec les substances. Le spectrophotomètre est utilisé au
laboratoire pour le dosage des paramètres biochimiques
tels que : glucose, créatinine, transaminases, …
2‐ Principaux éléments d’un spectrophotomètre :
Le schéma de la figure 1 décrit la relation entre les différents
Le schéma de la figure 1 décrit la relation entre les différents
éléments d’un spectrophotomètre. Les éléments les plus importants
sont :
‐ La source lumineuse (lampe à vapeur de mercure, lampe à arc au
xénon, lampe à filament de tungstène) ;
‐ Le monochromateur (fentes, réseau) : c’est un ensemble
d’éléments qui sert à décomposer la lumière blanche en radiations
de différentes longueurs d’onde, dont l’une est utilisée pour lire le
résultat de l’analyse
‐ La cuve
L (à f
(à faces parallèles en verre, quartz ou plastique) ou porte‐
llèl l i )
échantillons
‐ Le système détecteur
Le système détecteur : détection de la lumière transmise I (cellules
: détection de la lumière transmise I (cellules
photoélectriques, tubes photoélectriques, photodiodes.)
‐ Le système de lecture
Le système de lecture : Micro‐ampèremètre ou affichage digital de
: Micro‐ampèremètre ou affichage digital de
l’absorbance ou de la concentration.
Schéma de principe du spectrophotomètre
3- Principaux types de spectrophotomètre
3 1 Spectrophotomètre à lecture tube par tube
3-1-
Légende
A : Cuve de mesure
B : couvercle
C : Incubateur
D : Imprimante
E : Rouleau de papier
d imprimante
d’imprimante
F : Afficheur
alphanumérique
G : Clavier
3-2- Spectrophotomètre à aspiration automatique
II - BONNES PRATIQUES D’UTILISATION
D UTILISATION DU SPECTROPHOTOMÈTRE
1- Allumer l’appareil et attendre environ 10 minutes avant son

emploi
l i
2- Eviter les allumages et extinctions intempestives
3- Etalonner le spectrophotomètre chaque fois qu qu’une
une nouvelle
série d’échantillons doit être analysée.
4. Fermer toujours
j la chambre de mesure p pendant la lecture p pour
assurer une mesure correcte.
5. Eviter de réutiliser les cuves à usage unique.
6 E
6. Eviter
it d’
d’utiliser
tili d
des cuves en plastique
l ti sii on ttravaille
ill avec d
des
solvants organiques.
7 Nettoyer soigneusement les cuves en verre après usage
7. usage.
Jeter celles qui sont rayées.
8. Utiliser des réactifs de bonne qualité.
q
III- ENTRETIEN COURANT SUR LE SPECTROPHOTOMETRE
L’entretien du spectrophotomètre doit se faire avant tout

conformément aux recommandations du fabricant
fabricant. L’entretien
L entretien de
base qui peut se faire au laboratoire est le suivant :
3-1- Entretien journalier

- Nettoyer l’extérieur du spectrophotomètre, y compris les
touches de commande et les écrans.
- Nettoyer soigneusement les cuves en verre après usage. Jeter
celles qui sont rayées sur la face transparente
- Recouvrir l’appareil avec une housse pour éviter la poussière
3-2- Entretien hebdomadaire
•Effectuer
Eff t un rinçage
i avec une solution
l ti dét
détergente
t ou
fongicide
3-3-Entretien semestriel
•Dépoussiérer
p l’appareil
pp (p
(par un technicien spécialiste)
p )
•Remplacer le cordon de la pompe d’aspiration (par un
technicien spécialiste)
•Nettoyer
N tt la
l cuve de
d mesure (par
( un technicien
t h i i spécialiste)
é i li t )
3-4- Entretien annuel

•Nettoyer la source de lumière et le capteur (par un technicien
spécialiste)
p )
•Remplacer la lampe halogène si possible
IV PRATIQUE
IV-
•Présentation d’un
d un spectrophotomètre
•Changement d’ampoule
•Nettoyage de l’extérieur
l extérieur de l’appareil
l appareil
•Changement de papier imprimante.
•Remplacement de tuyaux
•Nettoyage général
VI- GLOSSAIRE :
Absorption : Phénomène physique qui se produit lorsque les

atomes ou les molécules d’une substance absorbent de la lumière
(photons).
L absorbance : est une mesure mathématique de l’absorption

L’absorbance l absorption,
exprimée en unités de densité optique (DO).
Intensité : Quantité de lumière émise par une source dans une
direction donnée par unité de temps.
Longueur d’onde : Distance entre les crêtes d’une onde
onde. Elle
détermine la nature des différentes formes d’énergie de
rayonnement dans le spectre électromagnétique.
électromagnétique
Trajet optique : Distance parcourue par la lumière visible ou
ultraviolette au travers d’un
d un échantillon dans une cellule d’analyse
d analyse
(cuve ou puits).

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1- Allumer l’appareil et attendre environ 10 minutes avant son

L’entretien du spectrophotomètre doit se faire avant tout

3-1- Entretien journalier

3-4- Entretien annuel

Absorption : Phénomène physique qui se produit lorsque les

L absorbance : est une mesure mathématique de l’absorption

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