Memoire Ounis

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE
MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE

SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE L’ARBI BEN MHIDI-OUM
MHIDI OUM EL BOUAGHI
FACULTE DES SCIENCES EXACTE ET SCIENCE DE NATURE ET DE LA VIE
DEPARTEMENT DE BIOLOGIE
N° d’ordre……..
N° de série……..
Mémoire présenté pour l’obtention du diplôme de master
en Biologie
OPTION : Biotechnologie végétale
Thème
Evaluation du contenu phénolique et des

activités biologiques de Teucrium
crium polium
Présenté par :
Ounis Roumaissa et Bouma

Boumaza Djamila
Devant le jury :
Présidente : Mme Adjel Farah MCB Univ.OEB
Rapporteur : Mme Karouche Saida MCB Univ.OEB
Examinatrice : Mme Amokrane Assia MAA Univ.OEB
Co -Rapporteur : Dr. khaldi sofiane médecin microbiologiste
Année universitaire : 2017-2018

Dédicace
Je dédie cette thèse
Aux êtres les plus chers : Mes parents,
A MON PERE,
Mon plus haut exemple et mon modèle de persévérance pour aller
toujours de l’avant et ne jamais baisser les bras. Pour son enseignement
continu à m’inculquer les vraies valeurs de la vie et pour ses précieux
conseils.
J’espère que cette thèse sera à la hauteur de tes attentes et qu’elle soit
l’accomplissement de tous tes efforts
A MA MERE,
Pour son affection, sa patience, sa compréhension, sa
disponibilité, son écoute permanente et son soutien sans égal dans les
moments les plus difficiles de ma vie.
Là où je suis arrivée aujourd’hui c’est à vous MES CHERS
PARENTS que je le dois, que Dieu vous garde.
A ma tendre et chère belle-sœur
belle : Noussaiba et la petit layan.
A mes chers frères : Bassem et Hatem
A mes amis et collègues : Salah, Abla, Meryem, maryouma

maryouma, Rahma,
Rayhana
ayhana, Ilham, rime, Mourad, Youssef.
A ma partenaire Djamila
Romaissa
Dédicace
Je dédie cette thèse
A ma mère,
A ma chéré mère qui était la source d’amour

le motif et le grand soutien dans ma carrière universitaire.
A ma tendre et chère belle-sœur
belle :
Salima
Mon sœur zoubida
A mes chers frères
A mes amis et collègues : amel, kanza , rime,
rayhana ,ilham , lamia,rahma
mourad ,roumaissa
sabrina
Djamila
Remerciements
Avant toute chose, je remercie Dieu, le tout puisant, pour m’avoir
donner la force et la patience.
Mes vifs remerciements vont à Dr Mahalli Saida née Karouche sa
précieuse participation et son soutien à tout moment.
Sa validité, ses grandes qualités scientifiques et humaines ont contribué

au bon déroulement de ce travail. Ses critiques et ses compétences
étaient fortes et rassurantes.
Nous remercions les membres du jury d’avoir accepté de juger notre

modeste travail :
Dr la présidente Mme Adjel Farah et l'examinatrice Mme Amokrane

Assia.
Nous remercions également tous les membres de laboratoire de

l’université d’O.M.B
qui nous ont beaucoup aidés à réaliser ce travail dans des bonnes
conditions.
Nous voudrons aussi exprimer toute notre gratitude

gratitude et nos
remerciements à tous les Employés existés pendant le travail en
laboratoire de l’hôpital Ain fakroun pour leurs orientations et le
leurs
conseils.
Nous remercions également le médecin Spécialiste en microbiologie Dr.

khaldi sofiane.
Merci à mes parents sans qui tout cela

n’aurait été possible. Merci de m’avoir permis d’aller aussi loin dans
mes études et de m’avoir soutenu et supporté tout au long de ces années.
Sommaire
Résumés
Liste des abréviations
Liste des figures
Liste des tableaux
Introduction…………………………………………………………………………..1
Partie bibliographique
Chapitre I : Tecrium polium
I. La famille des lamiaceae …………………………………………………………6
I.1.Présentation………………………………………………………………………6
I.1.1. Famille des lamiaceae …………………………………………………………6
I.2. Systématique des lamiacées …………………………………………………….7
I.3.Intérêt nutritionnel et pharmacologique ………………………………...……..8
I.4.Chimie des Lamiaceae …………………………………………………………..8
I.5.Genre Teucrium………………………………………………………………….9
I.5.1. Présentation……………………………………………….…………………..10
I.5.2. Systématique ………………………………………………………...……….10
I.5.3. Description de la plante …………………………………………………..…10
I.5.3. Description de la plante ……………………………………………..………11
I.5.5. Propriétés pharmacologiques des Teucrium ……………………………….11
I.5.6. Données pharmacologiques………………………………………………….12
Anti-nociceptive, antispasmodique……………………………………….12
Antidiabétique……………………………………………………...……..13
Antifongique………………………………………………………………13
Antipyrétique, Antimicrobien…………………………………………….13
Cytotoxique…………………………………………..……………………13
I.5.7. Données toxicologiques ……………………………………………….……..14
I.5.8. Toxicité du Teucrium………………………………………………………..15
I.5.9. Reconnaissance botanique ……………………………………….…………15
I.5.10. Description botanique ……………………………………………………..16
I.5.11. Situation géographique ….……………………………………………...16
I.5.12. Utilisations dans la médecine traditionnelle …………………………..16
I.5.13. Travaux antérieurs sur Teucrium polium …………………………..…17
Chapitre II : Métabolites secondaires

II. Métabolites secondaire………………………………………………….…..19
II.1. Définition ………………………………………………………………….19
II.2. Classification des métabolites secondaires ………………………………19
II.3. Polyphénols …………………………………………………….………….19
II.3.1. Définition………………………………………………………..………..19
II.3.2. Structure chimique ……………………………………..……………….20
II.3.3. Classification des polyphénols ………………………………………….20
II.3.3.1. Acides phénoliques ……………………………………………..……..20
Acide phénols dérivés d’acide benzoïque……………………………..20
Acide phénols dérivés d’acide cinnamique ………………...……….20
II.4. Flavonoïdes…………………………………………………………………20
II.4.1. Définition …………………………………………………………………20
II.4.2 Structure des flavonoïdes ………………………………….……………..21
II.4.3. Classification des flavonoïdes ……………………………………………21
II.5. Les lignanes…………………………………………………………….……23
II.5.1. Définition ………………………………………………………………….23
II.5.1.1. Structure des lignanes ……………………………………...…………..24
II.6. Les stilbènes…………………………………………...…………………….24
II.6.1. Définition ……………………………………………………...…………..24
II.7. Les coumarines …………………………………………….……………….24
II.7.1. Définition …………………………………………………………………..24
II.8. Les tannins …………………………………………….…………………….24
II.8.1. Définition ……………………………………………….…………………24
II.8.2. Classification……………………………………………………………….25
A.Tanins hydrolysables………………………………….…………….25
B. Tanins condensées…………………………………………………25
II.9. Les alcaloïdes ………………………………………………………………26
II.9.1. Définition ………………………………………………………..…….….26
II.9.2. Classification ……………………………………………………..………26
A. Selon l'origine biosynthétique ………………………………….……26
B. Selon leur composition chimique et structure moléculaire ………..27
II.10 Terpénoïdes………………………………………………………..……….27
II.10.1. Définition…………………………………………………..…………….27
II.10.2. Structure des terpenoïdes ……………………..………………………27
II.10.3. Classification …………………………………………………..………28
II.10.3. 1.. Monoterpènes ………………………………………..……………..28
II.10.3.2. Sesquiterpènes ………………………….……………………………28
II.10.3.3. Diterpènes …………………………………………………………….28
II.10.3.4 Triterpènoïdes et stéroïdes ……………………..……………………28
II.10.3.5. Saponines………………………………………………………….….29
II.10.3.6. Tétraterpènes (comme Caroténoïdes) ……………………..……….29
a. Caroténoïdes ………………………………………….…………29
Chapitre III: les antioxydants

III.1. Définition du stress oxydant……………………………………………..31
III.2. Les radicaux libres ………………………………………………….……31
III.2.1. Définition ……………………………………………………………….31
III.2.2. Les types des radicaux libres ………………………………………….31
II.2.2.1. Les sources des Ero et Era ……………………………………………32
II.2.2.2. Les sources exogènes ………………………………………………….32
II.2.2.3. Les sources endogènes ………………………………………………...32
II.2.2.a. La xanthine oxydoréductase (XOR) ……….………………………...32
II.2.2.b. L’oxyde nitrique synthase (NOS) …………………………………….33
II.2.2.c. La lipooxygénase …………………………………………..…………..33
II.2.2.d. La NADPH oxydase (Nox) ……………………………………...…….33
II.2.2.e. Le peroxysome …………………………………….………………..33
II.2.2.f. Les ions métalliques …………………………………………………34
II.2.2.4. Les rôles des ERO et ERA ………………………………..………..34
Rôles physiologiques des ERO …………………………………..…..34
Rôles pathologiques des ERO (cibles des radicaux libres) ….……..35
II.3. Les antioxydants ……………………………………………………...…35
II.3.1. Les antioxydants enzymatiques………………………………………36
Le Superoxyde dismutase (SOD)……………………….…………….36
La Catalase (CAT)…………………………………………….………36
La Glutathion peroxydase (GPx) et la Glutathion réductase (GR…36
II.3.2. Les antioxydants non enzymatiques ………………………………..36
La Vitamine C …………………………………………………….….37
La vitamine E ……………………………………………..…………37
Les caroténoïdes …………………………………….……………….37
Les polyphénols …………………………………………………….…37
Partie expérimentale
Chapitre I : Matériels et Méthodes
Chapitre 1 : Matériel et méthodes ……………………………………..……….40
I.1.Matériel
végétal……………………………………………………………………………….40
I.1.a. Situation géographique de la zone Ouledgacem…………………………..40
I.1. Analyse qualitative ………………………………………………………..….41
I.1.1. Screening phytochimique…………………………………………………..41

I.1.1.1. Extraction…………………………………………………………………41
I.1.1.2. Identification des huiles volatiles………………………………………..41
I.1.1.3. Identification des stérols et triterpènes…………………………………41
I.1.1.4. Identification des flavones aglycones……………………….…………..42
I.1.1.5. Identification des anthracenosides…………………………………...…42
I.1.1.6. Identification des coumarines……………………………………….….42
I.1.1.7. Identification des polyuronides…………………………………..……42
I.1.1.8. Identification des tanins…………………………………………………42
I.1.1.9. Identification des saponines…………………………………………….42
I.1.1.10. Identification des alcaloïdes…………………………………………….43
I.1.2. La chromatographie sur couche mince (CCM)………………………….43
I.1.2.1. Principe……………………………………………..……………………..43
I.1.2.2. Mode opératoire …………………………………………………………44
a. Phase stationnaire…………………………..……………………….44
b. Phase mobile…………………………………………………….…44
c. Système essayés…………………………………………………….44
I.1.2.3. Dépôt………………………………………………………………………..44
a. Développement des plaques ………………………..………………45
I.1.2.4. Révélation…………………………………………………………………..45
I.1.3. Préparation de l’échantillon végétal………………………………………..46
I.2.analyse quantitative …………………………………………………..……….46
I.2.1. Extraction……………………………………………………………………..46
I.2.1.1. Extraction des polyphénols………………………………….……………46
I.2.1.2. Calcul du rendement……………………………………………………….47
I.2.1.2. Préparation de l’extrait total aqueux (ETA)……………………………..47
I.2.2. Dosage des polyphénols totaux des extraits…………………………..……48
I.2.2.2. Mode opératoire……………………………………………………….…..48
I.2.2.3. Expression des résultats………………………………………………..…49
I.2.3. Dosage des flavonoïdes………………………………………..…………….49
I.2.3.1. Principe……………………………………………………………….……49
I.2.3.2. Mode opératoire…………………………………………..……………….50
I.2.3.3. Expression des résultats………………………………………..…………50
I.3. Activités biologiques …………………………………………..………………50
I.3.1. Activité antioxydante ………………………………………………………..50
I.3.1.1. Piégeage du radical libre par DPPH ……………………………….…….50
I.3.1.1.1. Mode opératoire………………………………………………..………..51
I.3.1.1.2. Expression des résultats………………………………………………….52
I.3.2. Activité antibactérienne……………………………………………………...52
I.3.2.1. Souches bactériennes………………………………………………..……..53
Trois souches de références…………………………………………….…53
Cinq souches cliniques……………………………………………………..53
I.3.2.2. Milieux de culture………………………………………..………………..55
I.3.2.3. Préparation d’une solution………………………………………...………56
I.3.2.4. Méthode de diffusion en milieux gélose…………………………………...56
Préparation de l’inoculum bactérien……………………………………..56
Ensemencement……………………………………………………………56
Lecture des antibiogrammes…………………………………..………….57
I.4.Analyse statistique…………………………………………………………...….57
Chapitre II : Résultats et discussion
I. Analyse qualitative ………………………………………………………………59
I.1.Screening phytochimique……………………………………………….………59
I.1.1. Etude comparative sur la plante Teucrium polium …………………..……62
II.2. Résultat de la chromatographie sur couche mince………………………….63
II. Analyse quantitative …………………………………………………….…….. 66
II.1. Rendement d’extraction …………………………………………………….. 66
II.1.2. Quantification des composés phénoliques …………………………………68
II.1.2.1. Résultats de dosage des composés phénoliques totaux……………….…68
II.1.2.2. Résultats de dosage des flavonoïdes……………………………………...71
Corrélation entre la teneur en polyphénols totaux et le pouvoir anti-
radicalaire………………………………………………………………………….. 73
II.2. L’activité biologique …………………………………………………………..77
II.2.1. L’activité antioxydante ………………………………………………..……77
II. 2.1.1. Le pouvoir réducteur des composés phénoliques ………………………77
Test de piégeage du radical libre DPPH………………………………….77
Détermination d’IC50 …………………………………………………….81
III.3.2. L’activité antibactérienne……………………………………………….…82
III.3.2.1. Résultats de l’antibiogramme……………………………..……………..88
Solvant et réactifs :
% : pourcentage
MeOH : Méthanol
DMSO : Dimethylsulfoxyde.
DPPH : 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle.
DO : Densité optique.
CCM : Chromatographie sur Couche Mince
E.Aq : extrait aqueux.
E.M : extrait méthanol.
R.E : rendement.
Mg/ml : milligramme par millilitre
Mm : millimètre
Rf : Rapport frontal
UV : Ultra-Violet
Ml : millilitre
ATCC : American type culture collection = Collection américaine des cultures type.
MeOH : Méthanol
Mg : Magnésium
mg/ml : milligramme par millilitre.
NaCo3 : Carbonate soduim
NH4OH : Ammoniaque
NMU : N-nitrosomèthylurèe
NO • : Oxyde nitrique
O2 - : Anion superoxyde
OH : Hydroxyle
ONOO- : Peroxynitrite
ORAC: Oxygen Radical Absorbance Capacity
P : Potassium
Pal :phenylalanine amonialyase
Phe : phényle alanine
PPO : peroxydase
R : Rendement
Rf: rapport frontal
RL : Radicaux libres
ROO.-: Peroxydes
SOD : Superoxyde-dismutase
TAL : tyrosine ammonialyase
TRAP: Radical-Trapping Antioxidant Parameter
UV: Ultra-violet
Zn : Zinc
Introduction
Introduction :
Au travers des âges, l’homme a pu compter sur la nature pour subvenir à ses
besoins de base : nourriture, abris, vêtements et également pour ses besoins médicaux.
L’utilisation thérapeutique des extraordinaires vertus des plantes pour le traitement de
toutes les maladies de l’homme est très ancienne et évolue avec l’histoire de
l’humanité (Gurib-Fakim, 2006).
L’Algérie recèle d’un patrimoine végétal important par sa richesse et sa

diversité dans les régions côtières, les massifs montagneux, les hauts-plateaux, la
steppe et les oasis sahariennes : on y trouve plus de 3000 espèces végétales. Parmi ces
ressources naturelles les plantes aromatiques et médicinales occupent une large place
et jouent un grand rôle dans l’économie nationale. Elles sont utilisées dans différents
domaines : industrie alimentaire, conserverie, pharmaceutique, et phytothérapie
(Duraffourd et al., 1997).
Parmi la diversité de plantes méditerranéennes, se trouvent de nombreuses

espèces médicinales, dont la plupart appartient à la famille des Lamiaceae (environ
260 genres, pour un nombre d’espèces estimé entre 6 500 et 7 000 (Spichiger, 2004).
Les remèdes naturels, et surtout les plantes médicinales, ont été pendant
longtemps le principal, voir l’unique recours traditionnel pour soigner diverses
pathologies, et comme matière première pour la médecine moderne (Ould EL Hadj et
al., 2003). Les plantes médicinales constituent un groupe numériquement vaste de
plantes économiquement importantes. Selon l’Organisation Mondiale de la Santé
(OMS), près de 6377 espèces de plantes sont utilisées en Afrique, dont plus de 4000
sont des plantes médicinales, ce qui constitue 60 % de la médecine traditionnelle en
Afrique (OMS, 2003).
Les plantes médicinales contiennent un grand nombre de molécules actives

d'intérêt multiple mis à profit dans l’industrie, alimentation, cosmétologie et en
dermopharmacie. Parmi ces molécules, on retrouve, les coumarines, alcaloïdes, acides
phénoliques, tannins, lignanes, terpènes et flavonoïdes (Bahorun, 1997). Les
flavonoïdes possèdent potentiellement des activités biologiques, antinflammatoires,
anticancérigènes, antimicrobiennes et anti-oxydantes (Atikbekkara et al., 2007).
2
Introduction
La plante choisie dans notre travail est de la famille Lamiaceae, nommée

Takmazzut par les Touareg, est très appréciée pour parfumer le thé. Comme
l’armoise, elle fait l’objet d’un commerce avec l’Afrique noire. En médecine
traditionnelle, elle a une place importante en raison de ses indications thérapeutiques.
Notre présente étude s’inscrit dans ce contexte et a porté sur une étude
phytochimique permettant d’identifier certains groupes chimiques bioactifs contenus
dans deux différentes préparations des extraits aqueux, méthanoïques
et l’analyse (qualitative et semiquantitative) de certains métabolites secondaires : les
flavonoïdes et les polyphénols, et une contribution à la mise en évidence de leurs
activités biologiques.
Le présent manuscrit, s’articule autour de trois parties :

 La première consiste en une revue bibliographique dans laquelle sont détaillés
les chapitres suivants : Teucrium polium, les métabolites secondaires et le
stress oxydatif.
 Dans la deuxième partie, nous avons envisagé la partie expérimentale qui se
déroule en quatre axes:
Dans le premier axe, nous avons réalisé l’extraction et l’analyse qualitatif à l’aide de
screening phytochimique de quelques composés bioactifs.
Dans le deuxième axe, nous avons déterminé les teneurs en composés phénoliques
(phénols totaux, flavonoïdes).
Nous sommes intéressés à évaluer le pouvoir antioxydant d’extrait de plante par
DPPH dans le troisième axe.
Dans le quatrièmes axe nous sommes intéressés à évaluer le pouvoir antimicrobienne
d’extrait de plante par (DMSO).
 Enfin, dans la troisième partie, nous avons rapporté les résultats obtenus, les
rendements, les composants trouvés, les teneurs des composés phénoliques et
l’étude de l’activité antioxydante, antibactérienne ainsi que leurs discussions et
nous finirons par une conclusion.
3
Etude bibliographique Chapitre I : tecrium polium
I. La famille des lamiaceae :
I.1.Présentation
La famille des Lamiaceae (labiées) du Latin (Labia) lèvre signifiant que les
fleurs ont une forme caractéristique à deux lèvres (Naghibi et al., 2005 ; Couplan,
2000), comprend environs 6970 espèces réparties en 240 genres (Meyer et al., 2004).
Cette famille est l'une des premières à être distinguées par les botanistes (Pistrick,
2002) et ceci par la particularité de ses caractères.
Ce sont généralement des plantes herbacées odorantes, à tiges quadrangulaires feuilles

en général, opposées sans stipules. Le plus souvent hermaphrodites, les fleurs
pentamères (Meyer et al., 2004) sont généralement réunies en cymes axillaires plus ou
moins contractées simulant souvent des verticilles, ou encore condensées au sommet
des tiges, et simulant des épis fruit constitué par 4 akènes plus ou moins soudés par
leur face interne (Messaili, 1995).
I.1.1. Famille des lamiaceae :
La famille des Lamiacées (Lamiaceae) ou Labiées (Labiatae) est une importante

famille de plantes dicotylédones, qui comprend environ 4000 espèces et près de 210
genres (Naghibi et al., 2005).
Cette famille comporte de nombreuses plantes exploitées pour les essences ou

cultivées pour l’ornementation et la plupart de ces espèces sont aussi bien utilisées
dans la médecine traditionnelle que dans la médecine moderne (Judd et al., 2002).
La famille des lamiacées contient une très large gamme de composés comme les
terpénoïdes, les iridoïdes, les composés phénoliques, et les flavonoïdes. Les huiles
essentielles et plus précisément les courtes chaines des terpénoides sont responsables
de l’odeur et la saveur caractéristique des plantes (Naghibi et al., 2005).
Cette famille est donc caractérisée par :
- une corolle gamopétale irrégulière à deux lèvres, la supérieure formée de

deux pétales, l'inferieure de trois.
- quatre étamines dont deux plus longues ;
6
- ovaire de deux carpelles recoupés par une cloison et comprenant ainsi quatre
loges à une graine chacun (tétrachaine) ;
- des feuilles opposées et, souvent, une tige de section carrée.
Ces caractères varient selon les genres : corolle presque régulière (Mentha) où
Unilabiée (Teucrium) ; deux étamines (Salvia) (Quezel et Santa, 1963 ; Ozenda,
1977). Elles sont surtout des plantes méditerranéennes (Carrubba et al., 2006), qui ne
se rencontrent guère que dans la région présaharienne et dans l'étage supérieur du
Hoggar, sauf les trois espèces Marrubium deserti, Salvia aegyptiaca et Teucrium
polium qui sont plus largement répandues (Ozenda, 1977). La famille des Lamiaceae
est très importante dans la flore algérienne, mais certains genres sont difficiles à
déterminer en raison de la variabilité extrême des espèces (Quezel et Santa, 1963).
I.2. Systématique des lamiacées :
C’est une famille très importante dans la flore d’Algérie, ces espèces sont
souvent des plantes herbacées, ou sous-arbrisseaux à poils glanduleux, en général
aromatiques. Leur tige est carrée, certaines espèces sont dressées, d'autres couchées
portent des feuilles opposées ou verticillées. Les fleurs bisexuées, irrégulières,
groupées à l'aisselle des feuilles en inflorescences plus ou moins allongées ou en
inflorescences terminales plus ou moins denses, à calice tubuleux ou en cloche
persistant, à corolle à tube très développé, ordinairement caduque et à 2 lèvres.
Le fruit sec se séparant en quatre articles contenants chacun une graine

(Guignard, 1998.).
La classification des lamiacées selon Quezel et Santa, en (1963) :
Règne : Végétal.
Embranchement : Phanérogames.
Sous-embranchement : Angiospermes.
Classe : Eudicotylédones.
Sous classe : Gamopétales.
Ordre : Lamiales.
Famille : Lamiaceae.
7
I.3.Intérêt nutritionnel et pharmacologique :
Cette famille est l'une des principales sources de légumes et de plantes

médicinales du monde entier. Les espèces de Mentha, Thymus, Salvia, Origanum,
Coleus et Ocimum sont utilisées comme des légumes, des arômes alimentaires et dans
l'industrie du bois. En culture ornementale d'intérieur, on retrouve quelques espèces
du genre Savory (Satureja hortensis), crosne de Tubifera, Salvia et Coleus (Meyer et
al., 2004 ; Messaili, 1995).
Notons également que plusieurs espèces de cette famille sont utilisées en

médecine traditionnelle et moderne, comme Lavandula, Teucrium, Thymus et Salvia
(Naghibi et al., 2005). Plusieurs travaux, réalisés in vitro et in vivo, rapportent des
résultats intéressants pour certaines molécules antioxydantes d'origine végétale telles
que les dicatéchols, la curcumine, les triterpènes pentacycliques et les flavonoïdes
(Hasani et al., 2007 ; Gabrieli et al., 2005 ; Djeridane et al., 2007 ; Lopez et al., 2007
; Özkan et al., 2007).
I.4.Chimie des Lamiaceae
La famille des Lamiaceae est très étudiée du point de vue chimique, ce qui a
permis d’isoler un grand nombre de substances connues pour leurs diverses activités
biologiques, telles que les huiles essentielles, les terpenoïdes, les composés
phénoliques et les flavonoïdes (Naghibi et al., 2005).
Les huiles essentielles sont des mélanges complexes constitués de plusieurs

dizaines, voire plus d’une centaine de composés, principalement des terpènes. Ces
derniers sont construits à partir de plusieurs entités isopréniques, constituant une
famille très diversifiée tant au niveau structural que fonctionnel (Bruneton, 1999).
Les huiles essentielles les plus étudiées dans la littérature pour leurs propriétés
antibactériennes et antifongiques appartiennent à la famille des Lamiaceae : thym,
origan, lavande, menthe, romarin, sauge, etc... (Sosa et Tonn, 2006). Certains
terpénoïdes, de courte chaîne, d’huiles essentielles sont responsables de l'odeur et
goût dans ces plantes (Harborne et al., 1986 ; Bruneton, 1999).
8
Plusieurs études sur l’effet bactériostatique, spasmolytique et anti-
inflammatoire de Teucrium sont rapportées dans la littérature. Cet effet est
probablement dû à la présence de plusieurs monoterpènes du cyclopentanoide dans
leur huile essentielle (Ricci et al., 2005). A titre indicatif, les huiles essentielles de
Mentha rotundifolia (L.) Huds obtenues par entraînement à la vapeur d'eau, à l'échelle
semi pilote, analysées par GC-MS et GCFID, ont montré l'existence des composés
majoritaires suivants : L’oxyde de pipéritone et l’oxyde de piperiténone (Brada et al.,
2007).
I.5.Genre Teucrium
I.5.1. Présentation
Le nom générique des germandrées désigne en Latin "teucrion" en grec

"tєυкріon" troie, ou de teucros, prince troyen qui aurait découvert les propriétés
médicinales de la plante (Couplan, 2000).
Le genre Teucrium fait partir des genres les plus importants de la famille des
Lamiaceae. Ce genre est réparti en 340 espèces et variétés. D'un point de vue
taxonomique, elles sont identifiables grâce à la forme du calice et inflorescence
(Velasco-Negueruela et Perez-Alonso, 1990 ; Grubesic et al., 2007).
Il s’agit d’un grand genre qui diffère des autres que dans ses Corolles formées
d'une lèvre supérieure fendue et à étamines redressées au-dessus de cette fente, de
sorte que la corolle parait n'avoir qu'une lèvre inférieure à cinq lobes (Ozenda, 1977).
Un grand nombre de travaux ont été publiés récemment sur la taxonomie de ce

genre basé sur des études morphologiques (itiorescences et calice) (El Oualidi, 1991),
micromorphologiques (trichomes) (Grubesic et al., 2007), mais les relations au sein
du groupe restent confuses (Harborne, 1986).
Nom scientifique : Teucrium polium L.
Nom commun : mountain germander (Anglais), pouliot de montagne, germandrée
Tomenteuse, germandrée blanc-grisâtre (Français) ; poliot, camendrio di montagna,
9
timo bianco, polio primo (Italien), j‘ada, khayata, Katabet ledjrah (Arabe).
Nom latin : Teucrium polium L, synonymes : Teucrium tomentosum, Teucrium
gnaphalodes, Teucrium chamaedrys et Teucrium capitatum (Autore et al., 1984 ;
Rasekh et al., 2005).
I.5.2. Systématique :
Position systématique de Teucrium polium (Caddick et al., 2002 ;Autore et al., 1984)
Règne : Plantae
Ordre : Lamiales
Famille : Lamiaceae
Genre : Teucrium
Espèce : Teucrium polium L.
I.5.3. Description de la plante :
Teucrium polium est une espèce très variable ; de nombreuses sous espèces
ont été décrites dont certaines sont parfois érigées au rang d'espèce (Naghibi et al.,
2005). C’est une plante herbacée vivace à odeur poivrée par frottement. Les tiges sont
de 10-30 cm de hauteur, blanches-tomenteuses portant des feuilles opposées sessiles,
linéaires-lancéolées ou oblongues, en coin et entières à la base et à dents arrondies en
haut. Ces feuilles, blanches tomenteuses sur les deux faces ont les bords enroulés. Les
fleurs forment des inflorescences compactes globuleuses ou ovoïdes serrées (Figure
1). Le calice brièvement tomenteux, à des dents courtes, la supérieure obtuse ; Corolle
à lèvre supérieure tronquée et à lobes supérieurs pubescents (Boulard, 2003).
10
Figure 1 : Aspect morphologique (partie végétative : Fleurs et feuilles

feuilles)
de Teucrium polium L. (Boulard, 2003)
I.5.4. Origine et répartition géographique
Le Tamier est une plante originaire d’Afrique du Nord, Asie occidentale,

Europe centrale et méridionale et Proche-Orient,
Proche Orient, son demeure dans les bois et sous
sous-
bois, les haies, les taillis broussailles, barrières,
barr à basse altitude (Kova et al., 2007).
Pareillement, la Germandrée tomenteuse est originaire du sud-ouest
sud ouest d’Asie, d’Europe
et d’Afrique du nord (abandonnément trouvée dans le secteur Irano
Irano-Turanien
principalement méditerranéen et occidental). Elle pousse dans les pelouses arides, les
Rocailles de basse altitude, collines et les déserts arides (Abdollahi et al., 2003).
I.5.5. Propriétés pharmacologiques des Teucrium :
Le genre Teucrium est très utilisé en pharmacopée traditionnelle depuis plus

de 2000 ans (Abdollahi et al., 2003) dans de nombreuses régions du monde
monde. Les
propriétés pharmacologiques de certaines espèces de ce genre ont été démontrées dans
des études scientifiques. Les maladies pour lesquelles ces espèces sont utilisées sont
très diverses. On peut citer :
- Leurs utilisations traditionnelles dans le traitement symptomatique de troubles

digestifs et dans celui des états neurotoniques des adultes et des enfants notamment en
cas de trouble mineurs de sommeil (Bruneton,
(B 1999).
11
- Les espèces de Teucrium sont amères et astringentes (Özkan et al., 2007 ;Abdollahi
et al., 2003), utilisées comme antirhumatismaux diurétique, diaphorétique, tonique,
antipyrétique et antispasmodique. - Beaucoup d'entre elles sont utilisées dans la
médecine populaire comme anti-inflammatoires, antihypertenseurs et anorexies
(Grubesic et al., 2007), ainsi qu’antidiabétique, antiseptique, anthelminthique et
carminative (Ghraibeh et al., 1988).
- L’espèce Teucrium montbretii est utilisée traditionnellement comme cicatrisant,
anti-inflammatoire et dans le traitement du cancer. L’activité antioxydante a été
également démontrée (Özkan et al., 2007).
- Plusieurs études sur les activités antimicrobiennes, spasmolytiques, antipyrétiques et

anti-inflammatoires ont été menées sur Teucrium marum (Ricci, et al., 2005 ; Eisner
et al., 2000). L'étude de Eisner et al., (2000) a montré que certains monoterpènes
contenus dans Teucrium marum, exercent une activité anti-insecticide. De même
certains travaux font état de traitement du paludisme, dans le passé (Camarda, 1990 ;
yokou et Margaris, 1986).
I.5.6. Données pharmacologiques :
Plusieurs recherches ont démontré certains effets pharmacologiques attachés à

l’utilisation de germandrée tomenteuse, parmi lesquelles on invoque l’action
antibactérienne,anti-inflammatoire,anti-ulcerogène,anti-nociceptive, antispasmodique,
antidiabétique, diurétique, hypolipidémique, antifongique, antagoniste du calcium et
cytotoxique (Autore et al., 1984 ; Suleiman et al., 1988); Abdollahi et al., 2003 ;
Esmaeili et Yazdanparast, 2004). Récemment, quelques rapports dans la littérature
dévoilent des effets antioxydants des extraits bruts de T. polium (Ljubuncic et al.,
2006).
Par conséquent, d'autres investigations sont nécessaires maintenant pour élucider le
mécanisme de l'action pharmacologique et identifier les composants bioactifs
responsables de telles actions afin d'expliquer leur efficacité thérapeutique.
Anti-nociceptive, antispasmodique
L’extrait aqueux des parties aériennes de T. polium a montré des effets

antispasmodiques et anti-nociceptifs. D’autres études affirment des propriétés
antiviscérales de son extrait éthanolique contre la douleur comparables à ceux de
l’hyoscine et de l'indométhacine ; et suggère son emploi en thérapies
12
anti-spasmodiques chez l’homme. La présence des flavonoïdes et des stérols pourrait

être responsable de l'activité anti-inflammatoire de cette plante (Abdollahi et al., 2003
; Kaileh et al., 2007).
Antidiabétique :
L'extrait aqueux de T. polium a montré un effet hypoglycémiant chez les rats. La

propriété insulinotropique de cet extrait a été encore évaluée, in vitro, en utilisant des
îlots pancréatiques de rat (Esmaeili et Yazdanparast, 2004). Les données ont indiqué
que l’extrait brut aqueux est capable de réduire le taux du glucose sérique
principalement en augmentant la sécrétion d'insuline par le pancréas par comparaison
aux îlots témoins. Cependant, les composés responsables de l'activité hypoglycémique
ne sont pas encore élucidés (Rasekh et al., 2001 ; Shahraki et al.,2006).
Antifongique :
L’extrait de T. polium a été employé dans le traitement des abcès fongiques (Esmaeili
et Yazdanparast, 2004).
Antipyrétique, Antimicrobien :
L’extrait éthanolique de T. polium présente un effet antipyrétique contre la levure et

le pyrexia de carragénine. Le mécanisme du l’hyperthermie de carragénine a été liée à
un dégagement des prostaglandines au site de l'injection par l'irritant en inhibant la
synthèse de prostaglandines au niveau périphérique (Shakhanbeh et Atrousse, 2000).
Cette hypothèse est renforcée par le fait que cet extrait peut empêcher la formation
d'œdème. Cependant, l’extrait de T. polium a montré une remarquable activité
antibactérienne contre les bactéries Gram positive et Gram négative. D'autre part, il
présente des degrés élevés de résistance à nombreux agents antimicrobiens (Autore et
al., 1984 ; Aggelis et al., 1998).
Cytotoxique :
Les résultats montrent que l’extrait éthanolique de T. polium dispose un potentiel

anti-tumoral très efficace par l’inhibition, in vivo, de la génération de colonies de
quelques lignées cellulaires en milieu d’agarose et la suppression de leur croissance
(Nematollahi-Mahani et al., 2004). Toutefois, l’extrait aqueux de T. polium augmente
la cytotoxicité négociée contre N-méthyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine sur des cultures
13
de cellules primaires des hépatocytes des rats et réduit significativement les index
mitotiques et les cellules nécrotiques (Khader et al., 2007).
I.5.7. Données toxicologiques :
Les auteurs ont pu démontrer expérimentalement que la nécrose hépatique

peut être provoquée par un extrait de germandrée
germandrée tomenteuse enrichi en diterpènes et
que l’administration préalable d’activateurs ou d’inhibiteurs du cytochrome P450
augmente ou diminue la toxicité (Mattéi et al., 1995 ; Mazokopakis et al., 2004) ;
l’activation des furano néoclérodanes semble donc le préalable indispensable à
l’action toxique. Les diterpènes provoquent la mort rapide et massive des cellules par
apoptose en augmentant le calcium intracellulaire en stimulant diverses enzymes
calcium dépendantes (endonucléases, transglutaminase). Cette implication du noyau
furanique n’est pas surprenante : le mécanisme de l’hépatotoxicité reporté par Stickel
et al., en (2005) stipule que le cytochrome P450 3A active les furano néoclérodanes de
la germandrée
andrée tomenteuse en époxydes toxiques qui peuvent être neutralisés par
conjugaison avec le glutathion ; en cas contraire, les époxydes provoquent une
déplétion en glutathion et thioprotéines, interagissent avec les protéines hépatiques et
mènent à la mort
rt de cellules de foie par l'induction de l’apoptose.
Figure 2 : Mécanisme d’action toxique des furano-diterpénoides

furano diterpénoides extraits à partir de
Teucrium polium (Stickel et al., 2005).
14
I.5.8. Toxicité du Teucrium :
Certaines espèces sont toxiques pour le foie (Stickel et al., 2001). On citera
l’exemple d’une femme de 37 ans traitée à 2 reprises et à six mois d'intervalle,
pendant une dizaine de jours à chaque fois par des infusions de germandrée Teucrium
chamaedrys. La conséquence de ce traitement est une dégradation rapide de la
fonction hépatique qui a conduit les médecins à pratiquer une transplantation de foie.
L’organe atteint présentait une nécrose massive les causes habituelles ayant été
écartées, le rôle déclenchant de la seconde administration a mené à soupçonner
fortement Teucrium polium (Bruneton, 2001).
La nécrose hépatique peut être provoquée par un extrait de germandrée
enrichi en diterpènes et que l'administration préalable d'activateurs ou d'inhibiteurs du
cytochrome P 450 augmente ou diminue la toxicité : l'activation des furano-
néoclérodanes semble donc le préalable indispensable à l'action toxique. La teucrine
A est hépatotoxique mais le mélange des tétrahydroteucrine est dépourvu de toxicité.
Les diterpénes provoquent la mort rapide et massive des cellules par apoptose en
augmentant le calcium intracellulaire et en stimulant diverse enzymes calcium
dépendantes cette implication du noyau furanique n'est pas surprenante (Bruneton,
1999).
A Tamanrasset, on n'a pas mentionné la toxicité de la plante Teucrium

polium geyrii. Elle y est d’ailleurs très couramment utilisée aussi bien en usage
pastoral que médicinal, aucune toxicité n’ayant été signalée (Benchelah et al., 2004).
I.5.9. Reconnaissance botanique
Les Teucrium sec polium constituent un groupe d'espèces très peu

différenciées dont beaucoup de taxons, et l'on pense qu'elle contient 125 taxa
(BRUNO et al., 2003), notamment de la sous-sec. Polium, sont encore en cours de
spéciation. La variation morphologique, chimique, cytologique et biographique au
sein de certains groupes d'espèces très affines (El Oualidi, 1991).
Les sous-espèces Teucrium polium geyrii Maire et Teucrium polium
helichrysoides maire, seraient peut-être une seule et même espèce. Pour les Touaregs,
il s'agit de Takmazzut et de Akmazzu, Takmazzut étant le féminin de Akmazzu. Les
deux plantes sont souvent désignées sous le nom Takmazzuten, qui est le pluriel de
Takmazzut (Ozenda, 1983).
15
I.5.10. Description botanique :

Plante vivace souvent pérenne, velue, recouverte de poils laineux qui lui
donnent une couleur gris bleuté. De taille 20 à 30 cm. L'aspect de la plante est très
variable, en général on la rencontre en touffe dense, à tiges nombreuses et ramifiées
qui porte de petites feuilles allongées, aux bords dentelés un peu enroulés sur eux-
mêmes. D’autres pieds sont beaucoup plus velus et les feuilles plus développées
(Benchelah et al., 2004). Feuilles laineuses oblongues au bord dentelé, le bord des
feuilles est souvent enroulé en dessous. Fleurs laineuses, blanches ou jaunâtres en
grappes à l'extrémité des rameaux (Sahki, 2004 ; Ashnagar et al., 2007).
Plantes extrêmement variables, suivant le degré de ramifications, la couleur
des fleurs, celle des poils laineux qui recouvrent toute la plante ; on a décrit de très
nombreuses sous -espèces, reliées d’ailleurs par tous les intermédiaires (Ozenda,
1983).
I.5.11. Situation géographique :
Teucrium polium pousse en abondance dans le Sud-ouest de l'Asie, Europe et

l'Afrique de Nord (Hasani et al., 2007). C'est une plante méditerranéenne, commune
dans l'Atlas saharien, le Tefedest et les montagnes du Hoggar, moins fréquent ailleurs
(plus rare dans le piémont plus rare au Sahara septentrional, au Tassili des Ajjer, au
Tedemait). Elle pousse surtout dans les lits pierreux des oueds et dans les roches, en
Altitude entre 1200 et 2600 mètres (Sahki et Sahki, .2004 ; Ozenda, 1977).
I.5.12. Utilisations dans la médecine traditionnelle :
En médecine traditionnelle africaine, cette espèce est utilisée dans les périodes
de stress, car il permet de se relaxer, de se détendre, d'être serein et plein d'énergie.
Elle permet la relaxation des muscles en augmentant leur force, la diminution de
l'anxiété et la lutte contre la fatigue et l'agressivité. De plus, elle favorise le sommeil
et permet également de stimuler la mémoire, d'augmenter sa concentration et sa
lucidité. Elle possède également une action bénéfique sur la digestion. Ses propriétés
antistress et antioxydante permettent de lutter contre le vieillissement de la peau. Elle
est aussi bien conseillée pour les personnes stressées, ainsi que les personnes de plus
de 50 ans et les sportifs (Lagnika, 2005).
16
Ses feuilles sont utilisées en cuisine et à des fins médicinales, en particulier

pour le traitement des troubles intestinaux et gastriques. Il a également fait preuve
d'un soulagement dans le cas de la douleur viscérale. Les études n'ont pas réussi à
montrer un intérêt de l'utilisation de Teucrium polium pour les diabétiques (Ashnagar
et al., 2007).
La plante est utilisée comme dépuratif et remède des maladies du foie et de

l'hypertension et dans le traitement des ulcères gastéro-duodénaux et de
l’hyperlipidémie (Parsaee Et Shafiee- Nick, 2006 ; Stella Et Al., 2010).
Comme les armoises, les germandrées ont autrefois fait l’objet d’un commerce.
Elles font partie, avec le Cymbopogon, des plantes les plus prisées au Tassili car c'est
une plante parfumée très appréciée et recherchée des touaregs, c'est l'aspirine des
touaregs (Parfume agréablement le thé), indiquée pour régulariser les battements du
cœur. Elle est également broutée par les herbivores (Benchelah et al., 2004).
Teucrium polium L. a été reconnue depuis longtemps en médecine populaire dans le

traitement physiopathologique de nombreuses conditions (Panovska et al., 2007),
telles que les inflammations et les rhumatismes. Son extrait a montré des pouvoirs
hypotenseurs (Kamel et Sandra, 1994), antispasmodique, antibactériens et
antipyrétique diaphorétique, tonifiant, des effets analgésiques (kawashty et al., 1997)
et des effets antioxydants (Hasani et al., 2007 ; Bezić et al., 2011).
L'extrait aqueux de Teucrium polium a longtemps été utilisé en Iran pour le traitement
du diabète et possède des effets hypolipidémiques (Esmaeili et Yazdanparast, 2004 ;
Ardestani et Yazdanparast, 2007).
I.5.13. Travaux antérieurs sur Teucrium polium :
L’espèce Teucrium polium L. (Lamiaceae) a fait l'objet de plusieurs enquêtes durant

ces dernières années (Hasani et al., 2007). Ces enquêtes ont révélé la présence de
différentes classes de composés tels que les esters d'acides gras, les diterpènes, les
monoterpènes, les sesquiterpènes, les polyphénols et les flavonoïdes (cirsimaritine,
cirsilol, cirsilineol, le 5-hydroxy-6,7,3', 4'-tetraméthoxyflavone, salvigenine,
apigenine- 5- galloylglucoside, apigénine-7-glucoside, vicenine et luteoline-7-
glucoside) (Velasconegueruela et Perez-Alonso, 1990).
17
Etude Bibliographique Chapitre II : Métabolites Secondaires
II. Métabolites secondaire

II.1. Définition :
Les métabolites secondaires sont des molécules organiques complexes synthétisées par
Les plantes autotrophies (Boudjouref., 2011). Ce sont caractérisés généralement par de Faible
concentration dans les tissus végétaux (généralement quelques pourcents du carbone Total, si
on exclue la lignine de cette catégorie) (Newman et Cragg., 2012). Aussi N’exercent pas de
fonction directe au niveau des activités fondamentales de la plante (Guignard., 1996).
Biosynthétisés à partir de métabolites primaires et jouent un rôle majeur dans les interactions
de la plante avec son environnement, contribuant ainsi à la survie de l'organisme dans son
écosystème (Peeking et al 1., 987). En 1987 Plus de 8500 métabolites secondaires
Sont déjà connus. Les plus grands groupes sont les alcaloïdes, les terpénoïdes, les stéroïdes et
Les composés phénoliques. Ils présentent une énorme valeur économique (en particulier pour
L’industrie pharmaceutique et la cosmétique) (Peeking et al., 1987).
II.2. Classification des métabolites secondaires :
On peut classer les métabolites secondaires en trois grands groupes : les composés
phénoliques, les terpènes et les alcaloïdes. Chacune de ces classes renferme une très grande
diversité de composés qui possèdent une très large gamme d'activités en biologie humaine
(Krief ., 2003 ., Haven et al., 2000).
II.3. Polyphénols :
II.3.1. Définition :
Les composés phénoliques ou les polyphénols (PP) constituent une famille de

molécules très largement répandues dans le règne végétal. Sont des produits du métabolisme
secondaire des plantes, depuis les racines jusqu’aux fruits. Ce qui signifie qu’ils n’exercent
pas de fonctions directes au niveau des activités fondamentales de l’organisme végétal,
comme la croissance, ou la reproduction (Fleuriet ., 1982 Yusuf .,2006).
Les polyphénols sont des produits de la condensation de molécules d’acétyl-coenzyme

A et de phénylalanine. Cette biosynthèse a permis la formation d’une grande diversité de
molécules qui sont spécifiques d’une espèce de plante, d’un organe ou d’un tissu particulaire
(Nkhili., 2009).
Ils ont largement distribué et comportant au moins 9000 structures connues différentes
(Bahorun., 1997). Ces corps jouent un rôle fondamental car sont des éléments importants de
qualités sensorielles (couleur et caractères organoleptiques) et nutritionnelles des végétaux,
tels que les légumes, les fruits, les céréales ou les fruits secs, ainsi que dans les boissons, le
19
café, le cacao ou le thé. Une alimentation équilibrée fournit à l’Homme environ un gramme de
polyphénols chaque jour, soit dix fois plus que de vitamine C et 100 fois plus que de
caroténoïdes ou vitamine E (Scalbert et al., 2005).
II.3.2. Structure chimique :
La structure chimique des polyphénols est comparable à tous les polyphénols. Ils sont
caractérisés par un ou plusieurs noyaux aromatiques hydroxylés. Les polyphénols sont classés
en différents groupes en fonction du nombre de noyaux aromatiques qui les composent et des
substitutions qui les relient (Manallah., 2012).
II.3.3. Classification des polyphénols :
On distingue les acides phénoliques (phénols simples), les flavonoïdes, les lignanes, les
stilbènes, les coumarines et les tannins (Glombitza .,1985 ; Harborne., 1980 ; Goodwin., 1988
; Porter ., 1989; Boros ., 2010).
II.3.3.1. Acides phénoliques :
Les acides phénoliques, ou acides phénols ont une fonction acide et plusieurs
fonctions phénols, Ils sont incolores et plutôt rares dans la nature (HASLAM ., 1994). Ils se
divisent en deux classes: les dérivés de l'acide benzoïque (les acides hydroxycinnamiques) et
les dérivés de l'acide cinnamique (les acides hydroxybenzoïques) (Pandey et Rizvi., 2009).
Acide phénols dérivés d’acide benzoïque :
Sont des hydroxybenzoiques et ont une structure générale de base de type (C6-C1), ces
molécules existent souvent sous forme d'esters ou de glycosides (Harrar.,2012). Les plus
répandus sont : l’acide salicylique et l’acide gallique (Bruneton ., 1999).
Acide phénols dérivés d’acide cinnamique :
Les acides phénols dérivés de l’acide cinnamique sont souvent estérifiés.
Les plus courants sont l’acide cinnamique, l’acide caféïque, l’acide férulique, l’acide p
Coumarique et l’acide synaptique (Haslam ., 1994).
II.4. Flavonoïdes
Le terme flavonoïde (de flavus, ‹‹ jaune ›› en latin) désigne une très large gamme de
composés naturels appartenant à la famille des polyphénols (Bouakaz.,2006). Ils constituent
des pigments responsables des colorations jaune, orange et rouge de différents organes
végétaux (Havasteen ., 2002).
Ces diverses substances se rencontrent à la fois sous forme libre (aglycone) ou sous
forme de glycosides. On les trouve, d’une manière générale, dans toutes les plantes
vasculaires (Erlund., 2004), où ils peuvent être localisés dans divers organe : racine, tiges,
20
bois, feuilles, fleurs et fruits. Et jouent un rôle important dans la protection des plantes
(Bruneton ., 1993).
Les flavonoïdes
avonoïdes se trouvent également dans plusieurs plantes médicinales. Des
remèdes à base de plantes renfermant ces composés sont utilisés en médecine traditionnelle à
travers le monde entier (Delporte et al., 1999).
II.4.2 Structure des flavonoïdes :
Flavonoïde, est un terme générique pour des composés basés sur un squelette à 15
atomes de carbone qui fait de deux cycles phényles C6, les cycles A et B, connectés par un
pont à trois carbones (structure en C6-C3-C6).
C6 C6). Ce dernier est situé entre les cycle
cycles A et B est
communément cyclisé pour former le cycle C (cycle centrale). Les atomes de carbone dans les
cycles C et A sont numérotés de 2 à 8, et dans le cycle B de 2' à 6' (Bruneton1
(Bruneton1., 999).
Figure 03 : Structure de base d'un flavonoïde (Heller

(H et Forkmann
orkmann ., 1993).
II.4.3. Classification des flavonoïdes :

La nature chimique des flavonoïdes dépend de leur classe structurale, de degré
d'hydroxylation et de méthylation, de degré de polymérisation, des substitutions et des
conjugaisons sur le cycle C, c'est-à-dire,
c'est la présence de double liaison C2--C3, du groupe 3-O
et la fonction 4-oxo (Yao et al ., 2004 ; Tsimogiannins et Oreopoulou., 2006
2006). En basant sur
leur squelette, les flavonoïdes peuvent être divisés en différentes classes : anthocyanidines,
flavonoles, isoflavonoles, flavones, isoflavones, flavanes, isoflavanes,
isoflavanes, flavanols, isoflavanols,
flavanones, isoflavanones et aurones (Havsteen ., 2002 ; Edenharder et Grünhage
Grünhage., 2003)
21
Tableau 01 : Différentes classes de flavonoïdes (Nkhili., 2009).
Flavonols Flavones
Flavan-3-ols Flavanones
Chalcones Aurones
Flavanonols Anthocyanes
22
II.5. Les lignanes

Le terme lignane à l’origine présenté par Haworth en 1936. Les lignanes sont les
dimères des unités de phenylpropane (C6 C4) (Benarous.,
( 2009).
Les lignanes constituent une classe importante de métabolites secondaire dans le règne
végétal. La distribution botanique des lignanes est large : plusieurs centaines des composés
ont été isolés dans environ soixante-dix
soixante familles. Chez les gymnospermes, Ils sont surto
surtout
rencontrés dans les bois alors que chez les Angiospermes, ils ont été identifiés dans tous les
tissus, Ils ont été découvert dans toutes les parties des plantes : les racines, les feuilles, les
fruites est les graines (Midoun ., 2011).
II.5.1.1. Structure des lignanes :
Les lignanes sont répartis en huit groupes structuraux, classés selon le mode d’incorporation
du (ou des) atome (s) d’oxygène dans le squelette carboné et selon le type de cyclisation
(Umezawa ., 2003).
Figure 04 : Structures chimiques de lignine (scalbert et Williamson

illiamson., 2000).
II.6. Les stilbènes

Les stilbènes sont des phytoalexines, composés produits par les plantes en réponse à
l'attaque par les microbes pathogènes fongiques, bactériens et viraux. Les sources principales
des stilbènes sont les raisins, les vins, le soja et les arachides (Crozier et al., 2006). Les
stilbènes sont des composés phénoliques contenant au minimum deux nnoyaux aromatiques
reliés par une double liaison, Le resvératrol et le ptérostilbène font partie de la famille des
stilbènes et sont des composes synthétisés par la plante suite à un stress, Ces molécules
peuvent s’oxyder
’oxyder sous l’action d’enzymes oxydase et les peroxydases (Perret
erret., 2001).
23
Figure 05 : Structure chimique de stilbène (Perret., 2001)

II.7. Les coumarines
Les coumarines tirent leur nom de « coumarou », nom vernaculaire de fève tonka ((Dipterix
ordorota Wild., Fabaceae) dont les fèves contiennent 1 à 3% de coumarine, d’où fut isolée en
1982 (Bruneton., 1993). Le squelette de base des coumarines est constitué de deux cycles
accolés avec neuf atomes de carbone (Ford et al., 2001).
Les coumarines sont des molécules largement répandues dans tout le règne végétal, sont des
2H-1-benzopyran-2-ones,
ones, considérées comme étant
étant les lactones des acides 22-hydroxy-7-
cinnamiques (Benayache., 2005).
2005)
Figure 06 : Structure d’une molécule de coumarine (Cowan

(Cowan., 1999).
II.8. Les tannins :

II.8.1. Définition
Les tanins sont des composés phénoliques complexes, hydrosolubles ayant un poids
moléculaire compris entre 500 et 3000 Da (Kamra
(K et al.,., 2006). Ces composés naturellement
produits par les plantes et se caractérisent par leur facilité à se combiner aux protéines
(Makkar ., 2003; Mangan ., 1988; Mcsweeney
M et al., 2001).Grâce à la présence de plusieurs
groupements hydroxyles phénoliques (Khenaka.,
(K 2011), Aussi à d’autre polymères
24
organiques tels que des glucides, des acides nucléiques, des stéroïdes et des alcaloïdes, pour
former avec eux des complexes stables (Haslam
(H ., 1998).
II.8.2. Classification
Les tannins sont des macromolécules qui se divisent selon leur structure en deux
groupes distincts. Les tannins hydrolysables et les tannins condensés (Mueller
(Mueller-Harvey et Mc
Allan., 1992 ; Bruneton ., 1999; Hagerman ., 2002).
A. Tanins hydrolysables :
Sont des hétéro polymères possédant un noyau central constitué d'un polyol, il s'agit
souvent d'un D-glucose;
glucose; comme leur nom l'indique, ces substances s'hydrolysent facilement
en milieux acides et alcalins ou sous l'action d'enzymes
d'enzym (telle que la tannase), pour donner des
glucides et des acides phénoliques (Leinmuller
(L et al., 1991).
Figure 07 : Structure générale de tanins hydrolysable (Gilbert

(G et Norris
orris., 1968).
B. Tanins condensées
Ce sont des tanins non hydrolysables (Dits catéchiques et proanthocyaniques), ils sont
Plus complexes que les tanins galliques, ils possèdent un squelette phényl
phényl-2- chromane de
flavonoïdes (Alilou., 2012). Il est admis aujourd’hui que ces tanins sont constitués par le
mélange de produits de polymérisation oxydative
ox ydative de catéchines (flavan
(flavan-3ols) et de
proanthocyanes (flavan-3,4- dioles), on peut les qualifier encore de tanins flavaniques
(Richter., 1993).
25
Figure 08 : Structure générale de tanins condensés (Gilbert et Norris.

Norris., 1968).
II.9. Les alcaloïdes

La définition admise des alcaloïdes est celle donnée par Winterstein et Trier en 1910.
Un alcaloïde est une substance organique azotée d’origine végétale à caractère alcalin et
présentant une structure moléculaire hétérocyclique
h complexe (Badiaga ., 2011).
Généralement, les alcaloïdes sont produits dans les tissus en croissance : jeunes feuilles,
jeunes racines. Puis, ils gagnent ensuite des lieux différents et, lors de ces transferts, ils
peuvent subir des modifications. Ainsi, la nicotine, produite dans les
les racines, migre vers les
feuilles où elle est diméthyle.. Chez de nombreuses plantes, les alcaloïdes se localisent dans
les pièces florales, les fruits ou les graines, ces substances sont trouvées conce
concentrées dans les
vacuoles (Krief., 2003). Ce sont des composés
composés relativement stables qui sont stockés dans les
plantes en tant que produits de différentes voies biosynthétiques (Mauro
(Mauro., 2006). teneur est
très variable, généralement comprise entre 0.1% et 2 à 3% du poids sec de la drogue (R
(Roux et
Catier., 2007). Les alcaloïdes existent rarement à l’état libre dans la plante, mais le plus
souvent ils sont combinés à des acides organiques ou à des tanins (Ziegler
(Ziegler et Facchini .,
2008).
II.9.2. Classification :
A. Selon l'origine biosynthétique :
On distingue trois
is types d’alcaloïdes :
 Alcaloïdes vrais : d’après certains auteurs, ils sont issus seul règne végétal. Ils
existent à l’état de sels et l’on peut ajouter qu’ils sont bio synthétiquement formés à
partir d’un acide aminé (Bruneton
runeton ., 1999).
26
 Pseudo-alcaloïdes : ils représentent le plus souvent toutes les caractéristiques des

alcaloïdes vrais, mais ne sont pas dérivés des acides aminés (Bruneton ., 1999).
 Proto-alcaloïdes : Les proto-alcaloïdes sont des amines simples dont l’azote n’est pas
inclus dans un hétérocycle, ils ont un caractère basique et sont élaborés in vivo à partir
d’acide aminé. Ils sont souvent appelés « amines biologiques » et sont soluble dans
l’eau. (Badiaga ., 2011).
En pratique, il est admis que ne sont pas des alcaloïdes : les amines simples, les bétalaïnes, les
peptides, les acides aminés, les amino-sucres, les porphyrines, les alkylamines et les
arylakylamines. (Rakotonanahary ., 2012).
B. Selon leur composition chimique et structure moléculaire :
Les alcaloïdes peuvent être divisés en plusieurs groupes.
 Phénylalanines : comme capsaicine chez piment, colchicine chez colchique.
 Alcaloïdes isoquinoléiques : comme : morphine, éthylmorphine, codéine et
Papavérine continues dans l'opium du pavot ; et des alcaloïdes indoliques : ergométrine,
ergotamine et ergotoxine de l'ergot des céréales (Gonzalez et al., 1984).
 Alcaloïdes quinoléiques : se trouvent dans les écorces de Cinchona (Donatien.,
2008).
 Alcaloïdes pyridiques et pipéridiques: par exemple: ricinine chez ricin.
 Alcaloïdes dérivés du tropane : comme scopolamine et atropine chez la belladone.
 Alcaloïdes stéroides: racine de vératre, douce-amère ou acontie (aconitine) par
exemple (Gonzalez et al., 1984).
II.10 Terpénoïdes
Appelés aussi terpènes, constituent un vaste groupe de métabolites secondaires, sont
des hydrocarbures naturels, de structure cyclique ou de chaine ouverte (Hellal ., 2011). Le
terme de terpénoïde est attribué à tous les composés possédant une structure moléculaire
construite d’un monomère à 5 carbones appelé isoprène, ces composés sont majoritairement
d’origine végétale (Malecky ., 2005). Synthétisés par les plantes, organismes marins, les
champignons et même les animaux (Benaissa., 2011).
L’exploitation de ces composés s’effectuait sous forme d’huiles extraites de plantes
(huiles essentielles) par le moyen de la distillation (Malecky ., 2005).
II.10.2. Structure des terpenoïdes :
Les terpènes sont des hydrocarbonés naturels, de structure soit cyclique soit à chaîne
ouverte : leur formule brute est (C5HX) n dont le x est variable en fonction du degré
27
d’instauration de la molécule et n peut prendre des valeurs (1-8)

(1 8) sauf dans les pol
polyterpènes
qui peut atteindre plus de 100 (le caoutchouc). La molécule de base est l’isoprène de formule
C5H8.Le terme terpénoide désigne un ensemble de substances présentant le squelette des
terpènes avec une ou plusieurs fonctions chimiques (alcool, aldéhyde,
aldéh yde, cétone, acide, lactone,
etc.) (Malecky ., 2005.Benaissa ., 2011).
( alsamiglia et al., 2007).

Figure09 : Structure de la molécule d’isoprène (Calsamiglia
II.10.3. Classification :
Selon le nombre d’unités isopréniques qui les constituent, on distingue : les terpènes
ou monoterpènes en C10, les sesquiterpènes en C15, les diterpènes en C20, les triterpènes
C30, et les tétraterpènes C40 (Guignard.,
( 1996).
II.10.3. 1.. Monoterpènes :
Sont volatils entrainables à la vapeur d'eau, d'odeur souvent agréable et représentent la
majorité des constituants des huiles essentielles, parfois plus de 90%; ils peuvent être
acycliques (Mycènes, ocyméne), monocycliques (terpinéne, p-ciméne
p ciméne ) ou bicycliques
(pinéne, sabinéne ) (Bruneton ., 1999).
II.10.3.2. Sesquiterpènes :
Les sesquiterpènes sont des molécules à 15 atomes de carbone constituées de trois
unités isopréniques et dérivant du Farnésyl diphosphate (FPP) (Wink., 2003); il s'agit de la
classe la plus diversifiée des terpènes, elle contient plus de 3000 molécules com
comme par
exemple: β-caryophylléne, β-bisaboléne,
bisaboléne, α-humuléne, α-bisabolol, farnes ol
ol.
II.10.3.3. Diterpènes :
Les diterpènes sont formés de quatre unités isoprènes (C20H32) ((Hernandezochoa,
2005), il comprend les gibbérellines (phytohormones du développement impliquées dans des
processus cellulaires fondamentaux tels que la germination (Graebe.,1987).
( 1987).
II.10.3.4 Triterpènoïdes et stéroïdes :
Les triterpènes sont des composés en C30 issus de la cyclisation de l'époxysqualène ou
28
Du scalène (Krief., 2003). Les stéroïdes sont dérivés de triterpènes tétracycliques et possèdent
un squelette cyclopentaperhydro phénanthrène. Beaucoup de stérols se produisent sous forme
de glycosides caractérisés par les saponines stéroïdiens (Hanson., 2003).
II.10.3.5. Saponines (Groupes de stéroïdes) :
Le mot saponine est dérivé du mot latin sapo. Les saponines ont reçu leur nom du fait
qu’elles produisent une mousse semblable à celle du savon (Hart et al., 2008), Ils sont des
Glycosides à poids moléculaire élevé, regroupant un ensemble complexe et chimiquement très
Diversifié de molécules triterpèniques ou stéroïdes. Elles se composent d’une fraction
Aglycone hydrophobe (un noyau stéroïdique ou triterpénique) liée à une chaîne mono ou
Polysaccharidique hydrophile (Wallace ., 2004).
II.10.3.6. Tétraterpènes (comme Caroténoïdes) :
a. Caroténoïdes :
Les caroténoïdes sont des pigments rouges ou jaunes (Hanson ., 2003), possédant un
Chromophore caractéristique (au moins 10 doubles liaisons conjuguées) expliquant leur
Couleur jaune-orangée et leur sensibilité à l'oxydation. Pour cela, les caroténoïdes sont
Employés en industrie agro-alimentaire principalement pour leur pouvoir colorant (safran
:Crocus sativus L.) mais on peut aussi noter qu'ils sont préconisés en cas de photo dermatose
Puisqu’ils interfèrent avec les processus de photo-oxydation (Krief ., 2003).
29
Etude Bibliographique Chapitre III : L’activité Antioxydante
III.1. Définition du stress oxydant :

Le stress est défini comme un déséquilibre de la balance entre la formation des
radicaux libres (caractère pro-oxydant) et la capacité du corps à les neutraliser, à réparer les
dommages oxydatifs (système antioxydant) et à réguler leur production (Zweier et al., 2006).
III.2. Les radicaux libres :
III.2.1. Définition :
Un radical libre est une espèce chimique (atome ou molécule) possédant, sur sa couche
externe, un ou plusieurs électrons célibataires, qui lui confère une réactivité (demi-vie courte)
vis-à-vis d’autres molécules, soit à capter un autre électron ; c’est alors un radical oxydant,
soit à le céder ; c’est alors un radical réducteur. Il ne faut pas penser que tous les radicaux
libres sont extrêmement réactifs, cette réactivité étant très variable selon la nature du radical.
Ces espèces radicalaires sont produites d’une manière continue au sein de notre organisme,
dans le cadre de nombreux phénomènes biologiques (Favier, 2003 ; Fontaine, 2007).
III.2.2. Les types des radicaux libres :
Les radicaux libres peuvent être dérivés de l’oxygène (Espèce réactive d’oxygène :
ERO) ou d’autres atomes comme l’azote (Espèce réactive d’azote : ERA). Il convient de
distinguer un ensemble restreint de composés radicalaires qui jouent un rôle particulier en
physiologie et que nous appellerons radicaux primaires (Afanas'ev, 2009). Les autres radicaux
libres, dits radicaux secondaires, se forment par réaction de ces radicaux primaires sur les
composés biochimiques de la cellule. D'autres espèces dérivées de l'oxygène ou l’azote ne
sont pas des radicaux libres, mais sont aussi réactives et peuvent être des précurseurs de
radicaux (Orban et al., 2007) (voir tableau 2).
Tableau 2 : Les différents types des espèces réactives (Fontaine, 2009).
Espèces radicalaires Espèces non radicalaires

Nom Symbole Nom Symbole
Anion superoxyde O2•- Peroxyde d’hydrogène H2O2
Radical hydroxyle OH• Peroxyde organique ROOH
Radical peroxyle ROO• Acide hypochlorique HOCl
Radical alkoxyle RO• Oxygène singulet O2
Monoxyde d’azote NO• Peroxynitrite ONOO-
31
II.2.2.1. Les sources des Ero et Era :

Divers types cellulaires et tissus donnent naissance aux radicaux libres par des
réactions enzymatiques ou par auto-oxydation au cours de leur métabolisme normal et parfois
en réponse à un stimulus spécifique. Deux sources peuvent être citées :
II.2.2.2. Les sources exogènes :
L’organisme humain est soumis à l’agression de différents agents capables de donner
naissance à des radicaux libres. Des toxiques tels que le monoxyde d’azote (NO) et le dioxyde
d’azote (NO2) présents dans l’environnement. Le goudron, le tabac et les polluants industriels
participent également à la genèse de radicaux libres (Münzel et al., 2006, Durackova, 2008).
Les rayonnements X ou γ peuvent par différents mécanismes faire apparaître des radicaux
libres en scindant la molécule d’eau en deux radicaux. Les polluants de l’air, comme la fumée
des cigarettes et les contaminants industriels, constituent une source importante d’ERO, ils
attaquent et causent des endommagements dans l’organisme que ce soit par interaction directe
avec la peau ou après inhalation dans les poumons. Une large variété de xénobiotiques
(toxines, pesticides, herbicides, etc…) peuvent contribuer à la production des ERO qui se
forment comme un des produits de leur métabolisme in vivo (Desikan et al., 2003 ;
Lykkesfeldt et Svendsen, 2007).
II.2.2.3. Les sources endogènes :
À côté des sources exogènes des radicaux libres, les métabolismes intracellulaires
(endogènes) sont des sources plus importantes d’ERO et ERA. Ils sont produits en continu
durant toute la vie de chaque cellule dans l’organisme.
L’une des sources physiologiques majeures de O2•- est représentée par la chaîne respiratoire
mitochondriale. Elle est une source permanente d’ERO (Garcia, 2005).
II.2.2.a. La xanthine oxydoréductase (XOR) :
Est une enzyme qui génère les ERO en réduisant l’hypoxanthine en xanthine et la
xanthine en acide urique, l’oxygène moléculaire agit comme un accepteur d’électrons
produisant ainsi l’anion superoxyde. La XOR joue un rôle crucial dans la génération de l’O2•-
et de H2O2 (Mahony et al., 2013). Cette enzyme est présente dans le sang, les cellules
endothéliales des capillaires sanguins et de façon très importante dans le foie et les intestins.
La localisation cellulaire de la xanthine oxydase est principalement cytoplasmique (Quiney et
al., 2011).
L'hyperuricémie est la pathologie la plus citée impliquant la XOR, c'est un état
pathologique qui résulte de la surproduction (par XOR) ou l'excrétion (troubles des tubules
32
rénaux) d'acide urique qui forme des cristaux microscopiques insolubles dans les vaisseaux
capillaires des articulations. Ces cristaux provoquent une inflammation et une douleur aiguë,
caractéristique de l'arthrite goutteuse aiguë (Jetanalin et Lee, 2013 ; Newcombe, 2013).
L’inhibiteur le plus important de la XOR est l’allopurinol qui a montré une activité inhibitrice
de la XOR en réduisant les taux sériques et urinaires de l’acide urique. Il a été utilisé comme
médicament de choix pour le traitement de la goûte et de l’hyperuricémie primaire et
secondaire. L'allopurinol est un analogue de l'hypoxanthine, à faible concentration, est à la
fois un substrat et un inhibiteur compétitif de la XOR (Hille, 2010 ; Chen et al., 2011).
II.2.2.b. L’oxyde nitrique synthase (NOS) :
Est une enzyme représentée par trois isoformes : neuronale (nNOS), inductible
(iNOS) et endothéliale (eNOS). Les trois isoformes de NOS sont des générateurs importants
du radical NO• (Dröge, 2002 ; Quiney et al., 2011). Ce radical serait un médiateur utilisé par
les neurones, les cellules endothéliales ou les macrophages (Del Rio et al., 2002). Il permet la
production d’autres RNS tel que le peroxynitrite (ONOO) (Favier, 2003).
II.2.2.c. La lipooxygénase :
Présente une source importante de production d’ERO dans les parois vasculaires. Cette
enzyme catalyse l’oxydation des acides gras polyinsaturés ou des acides gras estérifiés
comme les esters de cholestérol et celles trouvées dans les phospholipides pour donner des
dérivés d’acides gras hydroperoxydes toxiques pour la cellule (Madamanchi et al., 2005 ;
Maccarrone, 2008).
II.2.2.d. La NADPH oxydase (Nox) :
Est une hémoprotéine formée du cytochrome b558, présent dans la membrane
plasmique, et d’autres sous unités protéiques présentes dans le cytosol. Elle se trouve dans
différents types cellulaires; les cellules phagocytaires, les fibroblastes, les cellules
endothéliales et les cellules de muscles lisses. La NADPH oxydase phagocytaire joue un rôle
fondamental dans la réponse immunitaire et plus précisément dans la lutte contre les micro-
organismes. En effet, lors de la phagocytose, cette enzyme présente dans la membrane
plasmique des phagocytes catalyse la formation d’O2•- (Guzik, 2010 ; Touyz et al., 2010).
II.2.2.e. Le peroxysome :
Est une source importante de production d’H2O2 cellulaire. Cet organite contient de
nombreuses enzymes qui le génèrent. Toutefois, il est utilisé comme substrat par la catalase
peroxysomale afin d’assurer des réactions de peroxydation d’autres substrats. Ces réactions
sont importantes dans les processus de détoxification présents dans le foie et le rein (Sandalio
et al., 2013).
33
II.2.2.f. Les ions métalliques :

Comme le fer et le cuivre sous leurs formes réduites, sont de remarquables promoteurs
du processus radicalaires in vitro: ils transforment l’H2O2 en OH•. Les destructions cellulaires
(hémolyse, cytolyse hépatique) pouvant donc engendrer un stress oxydant par la libération des
métaux. La formation du OH•, le radical libre le plus réactif, à partir du H2O2 en présence de
fer ferreux est dite réaction de Fenton (Fontaine, 2007).
II.2.2.4. Les rôles des ERO et ERA :
Le paradoxe des ERO et ERA en biologie est qu’ils constituent des espèces
extrêmement dangereuses susceptibles d’engendrer un nombre considérable de maladies, tout
en étant des espèces indispensables à la vie.
Rôles physiologiques des ERO :
Selon Dröge, (2002), les radicaux libres ont les fonctions physiologiques suivantes
(voir tableau 3):
Tableau 3 : Les principaux rôles physiologiques des radicaux libres
Espèce Quelques rôles physiologiques
NO• - Relaxation des muscles lisses
- Autres fonctions GMPc dépendantes (modulation des fonctions des
protéines kinases, phosphodiestérases, et des canaux ioniques)
- Activation des MAPK des cellules endothéliales et monocytes
- Protection contre l’apoptose par inhibition de certaines caspases
O2•¯ - Transduction du signal
et - Relaxation du muscle lisse
dérivés - Activation du NF-κB responsable de l’expression du gène de l’IL-2
- Activation de la protéine kinase C
-Amélioration des fonctions immunologiques par amplification du signal
intracellulaire dans les lymphocytes T
- Induction de l’adhésion des leucocytes aux cellules endothéliales
- Induction et exécution du phénomène d’apoptose
- Induction de l’expression de la p21; inhibiteur du cycle cellulaire.
1O2 -Amélioration des fonctions immunologiques des lymphocytes.
34
Rôles pathologiques des ERO (cibles des radicaux libres) :

Lors d’un stress oxydant, les ERO non « détoxifiés » par le système antioxydant
attaquent et endommagent par oxydation les macromolécules contenues dans les cellules,
notamment les lipides, les protéines, l’ADN directement à leur contact (Koechlin-Ramonatxo,
2006).
Les lipides et principalement leurs acides gras polyinsaturés sont la cible privilégiée de
l’attaque par le HO•. Ce dernier est capable d’arracher un hydrogène sur les carbones situés
entre deux doubles liaisons. Cette réaction est appelée peroxydation lipidique qui aboutit à la
formation de nombreux dérivés toxiques. Parmi ces dérivés, le malondialdéhyde ayant une
demi-vie plus longue que celle des radicaux libres et qui diffuse facilement. Il peut former des
liaisons avec les bases de l’ADN et est lui-même mutagène, et il provoque aussi une
augmentation croissante de la perméabilité des membranes cellulaires induisant une altération
irréversible des propriétés fonctionnelles de la cellule, pouvant aller jusqu’à la lyse complète
(Fontaine, 2007 ; Miwa et al., 2008).
Les protéines sont aussi sensibles aux attaques radicalaires. Les radicaux libres sont
capables de réagir avec différents acides aminés des chaînes des protéines. Les plus sensibles
à leur action sont les acides aminés aromatiques tels que le tryptophane, la tyrosine et
l’histidine, sur lesquels le OH• s’additionne, modifiant la conformation de la protéine
(Schnackenberg, 2002). Sur les acides aminés contenant un atome de soufre tels que la
cystéine et la méthionine, l’oxydation par les radicaux libres conduit à la formation de ponts
disulfures. De nombreux enzymes cellulaires et protéines de transport vont ainsi êtres oxydées
et inactivées. Les protéines modifiées par oxydation perdent leurs propriétés biologiques, et
deviennent beaucoup plus sensibles à l’action des protéases (Durackova, 2008).
L’ADN est une molécule très sensible à l’attaque par les radicaux de l’oxygène.
L’attaque radicalaire peut entraîner l’oxydation des bases, engendrant un grand nombre de
bases modifiées, mais le stress oxydant peut aussi attaquer la liaison entre la base et le
désoxyribose, créant un site abasique, ou attaquer le sucre lui-même, créant une coupure de
chaine simple brin (Fontaine, 2007 ; Orban, 2007).
II.3. Les antioxydants :
L’équilibre entre les effets positifs et négatifs des ERO est particulièrement fragile. La
production des ERO est strictement régulée par notre organisme qui a développé des moyens
de défense antioxydants de protection contre les effets potentiellement destructeurs des ERO.
Un antioxydant peut être défini comme toute substance capable, à concentration relativement
35
faible, d’entrer en compétition avec d’autres substrats oxydables et ainsi retarder ou empêcher
l’oxydation de ces substrats (Berger, 2006).
Les cellules utilisent de nombreuses stratégies anti-oxydantes et consomment beaucoup
d’énergie pour contrôler leurs niveaux d’espèces réactives de l’oxygène. La nature des
systèmes antioxydants diffère selon les tissus et les types cellulaires et selon qu’on se trouve
dans le milieu intracellulaire ou extracellulaire. Les défenses antioxydantes de notre
organisme peuvent se diviser en systèmes enzymatiques et systèmes non enzymatiques
(Goudable et Favier, 1997).
II.3.1. Les antioxydants enzymatiques
Il s’agit principalement de trois enzymes ; le superoxyde dismutase (SOD), la catalase (CAT)
et la glutathion peroxydase (GPx). Ces enzymes ont une action complémentaire sur la cascade
radicalaire au niveau du O2●- et du H2O2, conduisant finalement à la formation de l’eau et de
l’oxygène moléculaire (Lehucher-Michel et al., 2001).
Le Superoxyde dismutase (SOD) : est une enzyme primaire essentielle qui réagit
contre les produits toxiques de métabolisme cellulaire, et catalyse la dismutation de l’anion
superoxyde en H2O2 (Seib et al., 2006). Cette enzyme existe sous trois formes selon sa
localisation et son cofacteur métallique: une forme cytosolique et nucléaire associées aux ions
cuivre et zinc (Cu/Zn-SOD), une forme mitochondriale associée au manganèse (Mn-SOD) et
une forme extracellulaire (EC-SOD) (Comhair et Erzurum, 2002 ; Bartosz, 2005). La forme
Cu/Zn-SOD se trouve aussi dans les peroxysomes et dans l’espace intermembranaire
mitochondriales (Warner et al., 2004).
La Catalase (CAT) : la catalase se trouve dans les hématies et dans les peroxysomes
de nombreux tissus et cellules (Kohen et Nyska, 2002). Cette enzyme catalyse la
transformation du peroxyde d'hydrogène en eau et oxygène moléculaire (Bartosz, 2005).
La Glutathion peroxydase (GPx) et la Glutathion réductase (GR) : Ces deux
enzymes sont localisées dans le cytosol et dans les mitochondries. La glutathion peroxydase
(GPx) agit en synergie avec la SOD puisque sont rôle est d’accélérer la dismutation du H2O2
en H2O et O2 et la réduction de divers hydroperoxydes lipidiques. Lors de cette réaction deux
molécules de glutathion réduit (GSH) sont oxydées en glutathion disulfure (GSSG) (Sastre et
al., 2005 ; Jacquot, 2013).
Le glutathion disulfure (GSSG) ainsi produit est à nouveau réduit par la glutathion réductase
(GR) utilisant le NADPH comme donneur d’électron (Mates et al., 1999 ; Foyer et al., 2008).
36
II.3.2. Les antioxydants non enzymatiques :

La Vitamine C : est hydrosoluble et localisée dans le cytosol et le fluide
extracellulaire, elle capte directement l’O2•- et l’OH-• (Comhair et Erzurum, 2002). Elle
empêche l’oxydation des LDL produites par divers systèmes générateurs d’espèces réactives
de l’oxygène (ERO) (neutrophiles activés, cellules endothéliales activées, myéloperoxydase)
(Foyer et al., 2008). Elle peut aussi réduire le radical α-tocophérol et ainsi permettre une
meilleure efficacité de la vitamine E (Evans, 2000 ; Limbach et Guilland, 2007).
La vitamine E : est constituée de quatre isomères de tocophérol, α, β, γ et δ, avec une
activité antioxydante variable (Limbach et Guilland, 2007). La forme α est la plus active, elle
est liposoluble et se fixe à la membrane cellulaire et inhibe la chaîne de réactions de
peroxydation des lipides en capturant un radical lipidique peroxyle (LOO°). Elle devient à son
tour un radical moins actif que le LOO° et pourra alors être pris en charge par une autre
molécule antioxydante (Evans, 2000 ; Zelek et al., 2010).
Les caroténoïdes : sont des pigments liposolubles jaunes, orangée à rouge, synthétisés
par les plantes et les microorganismes. En plus de leur activité de provitamine A, les
caroténoïdes sont capables d’inactiver l’oxygène singulet et les radicaux libres en neutralisant
l’électron non apparié, les transformant ainsi en molécules ou ions stables (Yeum et al., 2009
; Tanumihardjo, 2013).
Les polyphénols : sont des métabolites secondaires d'un poids moléculaire élevé. Ils
sont largement distribués dans le règne végétal, ont des propriétés antioxydantes, et en
particulier la classe des flavonoïdes. Les flavonoïdes peuvent agir de différentes façons dans
les processus de régulation du stress oxydant : par capture directe des espèces réactives de
l’oxygène, par chélation de métaux de transition comme le fer (empêchant ainsi la réaction de
Fenton) ou par inhibition de l’activité de certaines enzymes responsables de la production des
ERO comme la xanthine oxydase (Charles, 2013).
37
Partie expérimentale Chapitre 1 : Matériel et méthodes
Chapitre 1 : Matériel et méthodes :
I.1.Matériel végétal :
Le matériel végétal est constitué de la partie aérienne de la plante Teucrium

polium qui a été récolté de la région Ouled Gacem-Ain mlila (Est
st d’Algérie) en
Novembre 2017 (période de floraison).
Les feuilles sont séchées à l’ombre dans un endroit sec et aéré et à

température ambiante pendant quelques jours. Puis le matériel végétal a été broyé à
l’aide d’un broyeur électrique et pesé. Le broyat obtenu a été conservé dans des
sachets en papier à température ambiante, dans un endroit sec et à l’abri de l’humidité
et de la lumière jusqu’à son utilisation.
Figure 10 : la plante Teucrium polium de la région Ouled

uled Gacem
I.1.a. Situation géographique de la zone Ouledgacem:
Ouled Gacem est une commune de la daïra Ain mlila de la wilaya d'Oum El
El-
Bouaghi en Algérie. Les coordonnées géographiques
hiques de cette commune sont :
Latitude : 36.0341, Longitude : 6.66578. Elle se caractérise par un climat
méditerranéen avec été chaud (Classification de Köppen : Csa). (Anonyme 1)
40
Figure 11 : carte de localisation de la région d’étude
I.1. Analyse qualitative :

I.1.1.
.1. Screening phytochimique :
Les techniques de détection utilisables pour un screening des substances

actives doivent être rapides, simples, reproductibles et sensibles afin de ne mettre en
œuvre qu’une faible quantité de matière végétale.
végétale. Ces méthodes sont donc limitées à
la détection de quelques groupes chimiques. Elles n’ont d’ailleurs qu’une valeur
indicative, et une confirmation ultérieure par des méthodes plus précises et plus
sélectives est indispensable (Wagner et Bladt, 2001).
I.1.1.1.
.1.1. Extraction :
Selon Zellagui et al., (2012c) et avec quelque modification, 25g de plante

séchée en poudre a été extraite avec n-hexane
n hexane (pendant 24 h), ce dernier a été
combinés, filtrés et concentrés jusqu'à 40-50
40 50 ml. Le produit végétal sec restant ét
était
extrait par trois fois avec le méthanol pendant 20 à 40 minutes. Le résidu de produit
végétal était alors extrait avec de l'eau chaude pendant 20 minutes.
I.1.1.2.
.1.2. Identification des huiles volatiles :
L’extrait n-hexane
hexane a été évaporé à sec. La présence
présence d’une odeur plaisante
indique la présence d’une huile volatile.
I.1.1.3.
.1.3. Identification des stérols et triterpènes :
Le résidu n-hexane
hexane est dissous dans 0.5ml d’anhydride acétique puis l’ajout de
0.5ml de chloroforme, puis 1ml d’acide sulfurique concentré (réaction de
41
Liebermann). L’apparition d’un anneau rouge indique la présence de stérols et

triterpènes.
I.1.1.4. Identification des flavones aglycones :
A l’extrait (n-hexane, méthanoïque ou aqueux) on ajoute 2 ml de méthanol à

50˚C, puis on y ajoute 2 copeaux de magnésium et 5 gouttes d’HCl concentré. Une
coloration rouge ou orange confirme la présence des flavones aglycones (Réaction de
Shibata).
I.1.1.5. Identification des anthracenosides :
1ml de NH4OH à 25% a été ajouté à l’extrait choisi (réaction de Bortraegen).

Après l’agitation, l’apparition d’une couleur rouge indique la présence
d’anthracenosides.
I.1.1.6. Identification des coumarines :
L’extrait méthanoïque a été dissous après le séchage dans l’eau chaude. La

solution est partagée en deux volumes égaux, dont l’un contient la référence et le
second est rendu alcalin avec 0.5 ml d’une solution d’ammoniaque diluée à 10%avec
l’eau distillée. L’événement d’une fluorescence intense sous UV indique la présence
des coumarines.
I.1.1.7. Identification des polyuronides :
2 ml de l’extrait ont été ajoutés goutte à goutte dans un tube à essai, ou 10 ml

d’acétone ont déjà été placés. L’observation d’un précipité indique la présence des
polyuronides.
I.1.1.8. Identification des tanins :
1 ml d’extrait aqueux à été dilué avec de 2ml d’eau, on ajoute 3 gouttes de solution
diluée de chlorure ferrique. L'apparition d'un bleu-noir ou couleur verdâtre indique la
présence de tanins.
I.1.1.9. Identification des saponines :
A 1 ml de l'extrait aqueux, on a ajouté quelques volumes d'eau distillée dans

un tube à essai. La solution a été agitée vigoureusement et l’apparition d’une mousse
42
persistante stable pendant 2 min témoigne la présence des saponines (Sabri et al.,
2012).
I.1.1.10. Identification des alcaloïdes :
A 5 mg de poudre végétal, on a ajouté une quantité d’HCl 1%. Et mettre en

bain-marie pendant 15 à 20 min. ensuite le filtrat est divisé sur deux tubes :
Pour tube 1 : on ajoute quelque goutte de réactif de Dragondroff
Et pour tube 2 : on ajoute NaCo3 puis l’addition de chloroforme ensuite,
enlever la phase aqueuse et l’ajout des gouttes de réactif de Dragondroff. L’apparition
d’une précipitation indique la présence des alcaloïdes (1986,‫) اﻟﺸﺤﺎت‬.
I.1.2. La chromatographie sur couche mince (CCM) :
La chromatographie est une méthode physique de séparation basée sur les

différences d'affinités des substances à analyser à l'égard de deux phases, l'une
stationnaire ou fixe, l'autre mobile. Selon la technique chromatographique mise enjeu,
la séparation des composants entraînés par la phase mobile, résulte soit de leur
adsorption et de leur désorption successive sur la phase stationnaire, soit de leur
solubilité différente dans chaque phase (Antonot et Marchel, 1998).
A l’origine, la CCM a été utilisée pour la séparation des substances colorées

(d’où son nom). Aujourd’hui, elle est considérée comme une méthode puissante pour
les analyses qualitatives et quantitatives. Aussi, permet-elle de suivre l’évolution
d’une réaction et de tester la pureté d’un solvant (Delmeyda, 2001).
I.1.2.1. Principe :
La séparation des constituants du dépôt se fait à l’aide de deux phases : une

phase mobile qui est un solvant ou un mélange de solvant ; et une phase stationnaire
qui est un adsorbant de 0.25 mm d’épaisseur, maintenu sur une plaque de verre ou de
plastique rigide. L’échantillon à analyser doit se trouver dans un solvant volatil.
Le dépôt se fait alors sur une extrémité de la phase stationnaire. Les extraits de
notre échantillon sont alors posés sur ce premier. Les constituants de l’échantillon
sont alors élués par la phase mobile qui monte par capillarité vers le haut de la plaque
(Delmeyda, 2001).
43
I.1.2.2.. Mode opératoire :

a. Phase stationnaire :
Dans notre cas, nous avons utilisé des plaques de silice (phase normale)
prêtent à l’emploi de longueur 10 cm, pour les trois extraits : n-hexane,
n hexane, méthanoïque
et chloroformede tecriumpolium.
tecriumpolium
b. Phase mobile :
On essaie plusieurs solvants et on choisit ceux qui donnent la meilleure

séparation (migration).
c. Système essayés :
Tableau 4 : les systèmes solvant utilisés
N Systèmes solvants Proportion

1 n-hexane/dièthylèther 1 :1
2 n-hexane/chloroforme/MeOH 7 :4 :1
3 MeOH/chloroforme 9 :1
I.1.2.3. Dépôt :
L'échantillon est déposé à l'aide d'un tube capillaire en appuyant légèrement et

brièvement l'extrémité, Pour augmenter la quantité déposée, il est toujours préférable
d'effectuer plusieurs dépôts au même point, en séchant rapidement entre chaque
application
cation plutôt que de déposer en une seule fois un grand volume d'échantillon qui
produirait une tache plus large (Antonot et Marchel, 1998).
Figure 12 : Mode de dépôtt pour une plaque de CCM
44
a. Développement des plaques :
Les plaques sont placées en position verticale ou légèrement inclinées dans la

cuve de CCM, quand cette dernière est saturée en vapeur du solvant d’élution. Le
bord de la plaque où a été effectué le dépôt est trempé dans un fond du solvant
approprié.
Les différents constituants de l’échantillon déposé migrent avec des vitesses

différentes. Dans le cas idéal, on obtient autant de tâches que les constituants sur le
trajet de migration du solvant.
solvant
Figure 13 : Cuve de CCM.
I.1.2.4. Révélation :
Dans la présente étude, la visualisation des taches (spots) se fait sous UV à

254 nm et/ou365nm puis déterminée alors, pour chaque constituant, le rapport frontal
(Rf) :
Rf = D1/D2
D1 : Distance parcourue par le soluté

D2 : Distance parcourue par le front de solvant.
45
I.1.3.. Préparation de l’échantillon végétal

I.2.analyse quantitative :
I.2.1. Extraction :
L’extraction est une étape très importante avant l’analyse quantitative et

qualitative proprement dite. Elle est choisie
choisie en fonction des composées
phytochimiques à étudier.
I.2.1.1. Extraction des polyphénols :
L’extraction des polyphénols a été réalisée selon le protocole d’Alanis et al.,

(2005). Ainsi pour l’extraction des composés phénoliques, on a choisi le méthanol qui
a été recommandé et fréquemment employé (Falleh et al ., 2008).
Figure 14 : la poudre végétale
50g
0g de la poudre subit une macération dans 500
00 ml de méthanol à 80%. Une
agitation manuelle simple a été effectuée au début pour assurer que toute la surface de
la poudre est imprégnée par le solvant. Après une période d’incubation dde 48 heures à
température ambiante, le mélange hétérogène est filtré par papier filtre.
Ainsi, l’extrait récupéréest
est soumis à une évaporation à basse pression à 60 C avec un
rotavapeur de type Heizbad HB digit (Thiaw et al., 2015).
Les composés restés accolés à la paroi du ballon d’évaporation, sont repris par
le méthanol récupéré, puis la solution obtenue est laissée au repos jusqu’ au séchage
complet.
La figure suivante montre le procédé d’extraction des polyphénols :
46
Macération 24h (Méthanol 80%)
Extrait brut
Filtaration
Evaporation
Extrait méthanoïque
Résidu végétal
Figure 15 : protocole d’obtention d’extrait méthanoïque (Andualem et al., 2014).
I.2.1.2. Calcul du rendement :
Le rendement d’extraction est calculé par la formule donnée :
R (%) = 100 Mext / M éch
Où :
R : est le rendement en pourcentage

Mext: est la masse de l’extrait après évaporation du solvant en mg
M éch: est la masse sèche de l’échantillon végétal en mg (Mahmoudi et al., 2012)
I.2.1.2. Préparation de l’extrait total aqueux (ETA) :
La préparation de cet extrait a été faite selon la méthode décrite par (khettaf et
al., 2016) qui consiste à macérer 50 g de poudre végétale dans 500 ml d’eau distillée.
Le macérât est homogénéisé pendant (20 min) à l’aide d’un agitateur magnétique de
type IKAMAG-RCT. La solution est laissée reposer sur la plaque chauffante pendant
15 minutes. Le mélange est d’abords filtré sur une gaz et ensuite sur papier filtre.
47
Après la filtration, l’extrait récupéré est soumis à une centrifugation, et est divisé dans
des boites de pétri en verre et soumis à congélation ; la solution obtenue est
lyophilisée en utilisant un lyophilisateur pour obtenir une poudre (Khettaf et
al., 2016).
I.2.2. Dosage des polyphénols totaux des extraits :

Le dosage des polyphénols totaux a été effectué par le réactif colorimétrique Folin-
Ciocalteu selon la méthode citée par (Singleton et Ross. ,1965).
I.2.2.1.Principe :
L’ensemble des composée phénoliques est oxydé par le réactif Folin-Ciocalteu. Ce
dernier, est de couleur jaune, constitué par un mélange d’acide phosphotungstique
(H3PW12O40) et l’acide phosphomolybdique (H3PMO12O40) qui sont réduit lors de
l’oxydation des phénols en mélange d’oxyde bleus de tungstène et de molybdène
(Ribéreau-Gayon,1968). La coloration bleue produite est proportionnelle au taux de
composés phénoliques, et possède une absorbance maximale à environ 765 nm (Ojeil
et al., 2010).
La réaction d’oxydation est accélérée en milieu alcalin (dans notre cas, par un
ajout de carbonate de sodium) et pour réaliser les courbes de calibration, l’acide
gallique est souvent pris comme références (Collin et al., 2011).
I.2.2.2. Mode opératoire :
Un volume de 200μl de chaque extrait ou de dilution a été mélangé à 1ml de

Folin-Ciocalteu (dilué 10%). Les solutions ont été mélangées et incubées pendant 4
minutes. Après l’incubation,800μl de la solution de carbonate de sodium (Na2CO3 à
7,5%) a été ajoutée. Le mélange final a été secoué puis incubé pendant 2h dans
l’obscurité à température ambiante. Ainsi, l’absorbance de la couleur bleue résultante
a été mesurée à λ max=765 nm avec un spectrophotomètre de type Optizin 3220 UV-
Vis. Les expériences sont répétées 2 fois et sont rapportés à une courbe étalon et
exprimés en équivalent d’acide gallique.
Le blanc est préparé de la même façon sauf que l’extrait est remplacé par le
solvant.
48
I.2.2.3. Expression des résultats :

La concentration des polyphénols totaux est calculée à partir de l’équation de
régression de la gamme d’étalonnage, établie avec le standard étalon, exprimée en
microgrammes équivalent d’acide gallique par milligramme d’extrait (μg
(μg EAG /mg)
I.2.3. Dosage des flavonoïdes :
La méthode de trichlorure d’aluminium (AlCl3) cité par (Djeridane et al.,

2006) ainsi que (Boudiaf,
Boudiaf, 2006) est utilisé pour quantifier les flavonoïdes dans notre
extrait.
La raison principale pour laquelle on a choisi cette classe de polyphénols,

réside dans le fait que les flavonoïdes constituent la classe poly phénoliques la plus
importante, avec plus de 5000 composés déjà d’écrits (Gomez-Caravaca
Caravaca et al.,
2006).
I.2.3.1. Principe :
Les flavonoïdes possèdent

possèdent un groupement hydroxyle (OH) libre, en position 5
qui est susceptible de donner avec le groupement CO, un complexe coloré avec le
chlorure d’aluminium.
Après l’ajout de la solution de chlorure d’aluminium(AlCl3), une couleur

jaunâtre se forme. Cette coloration est due à la formation du complexe entre le
chlorure d’aluminium et les flavonoïdes ; ceci se traduit par le fait que le métal (Al) a
perdu deux électrons pour s’unir à deux oxygènes de la molécule phénoli
phénolique agissant
comme donneurs d’électrons (RibéreauGayon ; 1968).. La formule du complexe
entre le chlorure d’Aluminium et un composé phénolique O-hydroxycarbonylé
O hydroxycarbonylé est
présentée comme suite :
Figure 16 : Réaction du Chlorure d’aluminium et les Flavonoïdes.
49
Le trichlorure d’aluminium (AlCl3) entraine la formation d’un complexe jaune

avec les flavonoïdes. Ce dernier présente une absorption maximale à 430 nm dont
l’intensité est proportionnelle à la quantité des flavonoïdes présents dans l’échantillon.
I.2.3.2. Mode opératoire :
1 ml de chaque échantillon ou de dilution ainsi que du standard (préparée dans

le méthanol) sont ajoutés à 1 ml de la solution d’AlCl3 (2 % dissous au méthanol).
Après dix minutes d’incubation à l’obscurité, l’absorbance a été mesurée au λ max =
430 nm. Les expériences sont répétées deux fois.
I.2.3.3. Expression des résultats :
La quantification des flavonoïdes a été établie en fonction d’une courbe

d’étalonnage linéaire (y=ax+b) réalisé par un standard étalon la quercétine à
différentes concentrations de 1.75 à 36µg/ml dans les mêmes conditions que
l’échantillon. Les résultats sont exprimés en microgrammes d’équivalent de
quercétine par milligramme d’extrait (µg EQ/mg).
I.3. Activités biologiques :
I.3.1. Activité antioxydante :

I.3.1.1. Piégeage du radical libre par DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil) :
Afin d’étudier l’activité antiradicalaire de notre extrait, nous avons utilisé la

méthode basée sur le DPPH, selon le protocole de (Masuda et al., 1999).
La méthode 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl (DPPH) est un test standard utilisé

pour évaluer les propriétés antioxydantes. Elle est basée sur la mesure de la capacité
des antioxydants à piéger le radical 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil (DPPH). Ce dernier
est un radical stable soluble dans le méthanol ou éthanol qui présente une absorption
caractéristique à 517 nm qui lui confère une coloration violette, cette couleur passe du
violet au jaune lorsque le DPPH est réduit en diphenypicrylhydrazine par un capteur
de radicaux libres, dont l’intensité de la couleur est inversement proportionnelle à la
capacité des antioxydants présents dans le milieu (SanchezMoreno, 2002 ; Maataoui
et al., 2006).
Ce changement de couleur est suivi par spectroscopie UV-visible.
50
La réaction
on peut être résumée sous la forme de l’équation :
DPPH + AH DPPH + A+
DPPH-H
Où AH est un composé capable de céder un hydrogène au radical DPPH pour le

transformer au DPPH-H.
Du point de vue méthodologique, le test au radical libre DPPH est recommandé pour
des composés contenant les groupes SH, NH et OH (Salah et al., 1995)
1995).
Figure 17 : L'oxydation des radicaux DPPH.
I.3.1.1.1. Mode opératoire :
Le protocole expérimental utilisé est celui de Brand-williams

williams et al., (1995). La
solution du DPPH est préparée par solubilisation de 4 mg de DPPH dans 100 ml de
méthanol. 50μl
μl des solutions d’extraits phénoliques
phénoliques ou standards sont ajoutés à 2 ml
de DPPH. Le mélange est laissé à l’obscurité pendant 1 heure et la décoloration par
rapport au contrôle négatif qui contient uniquement la solution de DPPH est mesurée
à 517 nm.
Le contrôle positif est représenté par une solution d’acide ascorbique comme un
antioxydant standard.
I.3.1.1.2. Expression des résultats :
L’évaluation de l’activité antiradicalaire en utilisant la méthode DPPH est exprimée

en pourcentage selon la relation suivante :
% d’activité antiradicalaire = [(Abs contrôle-Abs
contrôle échantillon) //Abs contrôle]
×100.
51
I.3.2. Activité antibactérienne :
Cette activité est réalisée au sein du laboratoire de microbiologie de l’établissement

hospitalier d'Ain Fakroun, Oum el Bouaghi. L’activité antibactérienne des extraits a
été déterminée par la méthode de diffusion en milieu gélosé standardisée par NCCLS,
(2003).
Les bactéries sont des micro-organismes

micro organismes que l’on rencontre pratiquement partout.
Leur présence est souvent manifeste : les blessures s’infectent, le lait surit, la viande
se putréfie, mais, on ne peut les voir qu’au microscope.
Ils sont généralement unicellulaires et leurs cellules sont des cellules de type
procaryote.
La classification de Bergey sépare les bactéries en 4 divisions, selon la présence

ou non d’une paroi et selon la nature de cette
cette paroi, que l’on peut déterminer grâce à
la coloration de GRAM :
 Les bactéries à GRAM négatif
 Les bactéries à GRAM positif
 Les mycoplasmes (bactéries sans paroi)
 Les archaebactéries
Figure 18 : Organisation cellulaire d’une bactérie
52
I.3.2.1. Souches bactériennes :
8 souches bactériennes ont été choisies pour leur pathogénicité et leur

implication fréquente dans plusieurs infections.
- Trois souches de références : Les souches bactériennes utilisées sont des

souches de référence obtenues de l’American Type Culture Collection (ATCC), il
s’agit de : Escherichia coli (ATCC25922), Staphylococcus aureus (ATCC25923) et
Pseudomonas aeruginosa (ATCC27853) provenant du laboratoire de bactériologie de
l’hôpital « Hamouda amour » d’Ain Fakroun
- Cinq souches cliniques :Morganilla, Acinitobacter, E.coli Blse+, Proteus

microbulis, Klebsiella,
Tableau 5 : caractéristiques des souches bactériennes testées :
La souche et
Code référence Quelques propriétés des souches testées
E. coli est un bacille à gram négatif (Berche et al., 1988), de forme non sporulée,
de type anaérobie facultative, généralement mobile grâce aux flagelles, sa longueur
varie de 2 à6 μm, alors que sa largeur est de 1,1 à 1,5 μm (Steven et al., 2004).
Escherichia coli Cette dernière constitue la majeure partie de la flore microbienne aérobie du tube
(ATCC 25922) digestif de l’homme et nombreux animaux. Certaines souches sont virulentes,
capables de déclencher spécifiquement chez l’homme ou certaines espèces
animales des infections spontanées des voies digestives ou urinaires ou bien encore
des méningites néo-natales (Berche et al., 1988).
Les espèces P. aeruginosa sont des bacilles à Gram négatif, ces bactéries finassant
de 1.5 à 3 μm de long et 0.5 à 0.8 μm de large. Elles sont mobiles grâce à une
Pseudomonas ciliature de type polaire monotriche, ce type de bactéries possède un aspect de vol
aeruginosa moucheron. P. aeruginosa ne forme ni des spores ni sphéroplastes. Elle est
(ATCC 27853) responsable de 10 % de l’ensemble des infections nosocomiales, occupant le 3ème
rang après E.coli et S.aureus, mais le 1èr rang pour les infections pulmonaires
basses et le 3ème rang pour les infections urinaires (Richard et Kiredjian, 1995).
Les espèces S.aureus sont des cocci à Gram positif, de forme sphérique, avec un
53
diamètre de 0.8 à 1 μm. Elles sont regroupées en diplocoques ou en petits amas

Staphylococcus (grappe de raisin). Ce type de bactéries est immobile, asporulé, habituellement
aureus sans capsule. De nombreuses souches de S.aureus produisent un pigment jaune
(ATCC 25923) doré (Berche et al., 1988). elle est la cause de méningite, ostéomyélite et diarrhée
(Steven et al., 2004).
Acinetobacter baumannii est un bacille gram négatif aérobie pléomorphe
(semblable à l'Haemophilus influenzae sur la coloration de Gram) couramment
isolé dans l'environnement hospitalier et chez les patients hospitalisés. Un
baumannii est un organisme aquatique et colonise préférentiellement les milieux
Acinetobacter
aquatiques. Cet organisme est souvent cultivé à partir de crachats ou de sécrétions
respiratoires, de plaies et d'urine des patients hospitalisés. En milieu hospitalier,
Acinetobacter colonise couramment les solutions d'irrigation et les solutions
intraveineuses.
Proteus mirabilis Proteus mirabilis est une bactérie de type bacille à Gram négatif appartenant aux
entérobactéries et au genre Proteus, Elle entraîne principalement des infections
cutanées et urinaires. Le diagnostic peut être confirmé grâce à des analyses d'urine.
En laboratoire, la bactérie dégage une forte odeur qui rappelle celle du poisson
pourri. Elle présente une grande résistance aux antibiotiques.
Bacille a Gram négatif, La Klebsiella est une espèce de bactérie dont la plus
connue est la Klebsiella pneumonie. Elle est naturellement présente au niveau de
certains organes comme le tube digestif ou les poumons, mais son action est
Klebsiella généralement bien contrôlée par le corps, d'où l'absence d'infection. Cette bactérie
pneumoniae peut toutefois devenir « agressive » dans certaines conditions, notamment lorsque
l'organisme est immunodéprimé, c'est-à-dire quand les défenses immunitaires sont
diminuées. Elle peut ainsi être responsable d'angines, d'infections pulmonaires,
parfois d'infections urinaires ou d'infections plus généralisées.
Morganellamorganii est une bactérie à Gram négative qui se loge dans le tractus
digestif de certains mammifères, oiseaux et reptiles. Caractérisée par sa forme de
bacilles allant de 0,6 à 1μm de diamètre, Morganellamorganii fait partie de la
famille des entérobactéries et présente la spécificité de fermenter le glucose. Les
souches du biogroupe A de Morganellamorganii occasionnent des infections
Morganella opportunistes chez des patients immunodéprimés. On peut citer des cas
d'infections urinaires, d'infections extra-intestinales ou encore d'infection materno-
54
fœtales. La bactérie est réputée pour être sensible aux aminosides et aux
chloramphénicols mais résistante à la pénicilline et l'ampicilline.
Escherichia coli est l’espèce bactérienne la plus concernée par l’émergence de
bêta-lactamase à spectre élargi (BLSE) dans le monde depuis le début des années
2000. La production de BLSE entraine une résistance acquise (R) à la majorité des
bêta-lactamines disponibles par voie orale en ville, à l’exception du céfixime en
E. Coli BLSE+ théorie et parfois du mécillinam (Eucast et al., 2012).
L’apparition de la résistance aux antibiotiques chez E. coli par production de
BLSE est à mettre en perspective avec l’augmentation de la R aux
fluoroquinolones, autre famille d’antibiotiques de référence pour le traitement des
infections urinaires (ECDC, 2012).
I.3.2.2. Milieux de culture :
Nous avons utilisé comme milieux de culture les milieux suivants :
 Gélose nutritive pour Escherichia coli et Pseudomonas aeruginosa.
 Milieux sélectifs : Chapman pour Staphylococcus aureus et Hecton pour Klebsilla

pneumoniae.
 Gélose Muller Hinton pour la réalisation de l’antibiogramme et l’activité anti-

bactérienne.
I.3.2.3. Préparation d’une solution :
Les extraits ont été repris avec le Dimethylsulfoxide (DMSO). Une série de
concentration de l’ordre de 10 mg/ml, 5 mg/ml pour l’extrait aqueux, 2.5 mg/ml, et
1.25 mg/ml pour l’extrait méthanoïque a été ensuite réalisé.
I.3.2.4. Méthode de diffusion en milieux gélose :
 Principe
Préparation de l’inoculum bactérien :
Chaque souche a été ensemencée en stries sur les milieux gélosés pour obtenir des
colonies isolées. Après incubation de 24h à 37°C, on a choisi 4 à 5 colonies bien
isolées qu’on a transféré à l’aide d’une anse de platine dans un tube de solution d’eau
physiologique afin d’avoir une densité cellulaire initiale ou une turbidité voisine à
55
celle de Mc Farland 0,5 (106 UFC/ml). Cette comparaison est mesurée à l’aide d’un
étalon Mc Farland.
Ensemencement :
Dans les 15min suivant l’ajustement de la turbidité de la suspension

d’inoculum, on a trempé un écouvillon dans la suspension et on a étalé la surface
entière de la gélose Muller Hinton à trois reprises, en tournant la boite à environ 60°
après chaque application dont le but d’avoir une distribution égale de
l’inoculum.Enfin, on a écouvillonné partout autour du bord de la surface de la gélose.
Des disques stériles de papier Wattman N° 3 ont été déposés stérilement à

l’aide d’une pince stérile et sont imprégnés de différentes solutions d’extraits à des
concentrations croissantes. Les boites sont ensuite incubées pendant 24h à 37° C.
Des disques standards contenant les antibiotiques : Nali-dixic acid, Cefotaxime,
Ampicillin , Nitrofurantoin , Ceftazidime, Penicillin , Oxacillin , Fosfomcin , Fusidic
acide ; servent de contrôles positifs.
Lecture des antibiogrammes :
Après l’incubation l’effet des extraits se traduit par l’apparition autour de

disque d’une zone circulaire transparente correspondant à l’absence de la croissance.
Plus le diamètre de cette zone est grand plus la souche est sensible (Choi et al., 2006).
L’activité antibactérienne a été déterminée en mesurant à l’aide d’une règle le

diamètre de la zone d’inhibition, déterminée par les différentes concentrations des
différents extraits autour des disques.
I.4.Analyse statistique :
Les résultats des tests effectués in vitro : dosage quantitatif des polyphénols
ainsi que les flavonoïdes sont exprimés en moyenne ± écart type Excel 2007
56
Partie expérimentale Chapitre II : Résultats et discussion
Chapitre II : Résultats et discussion :

I. Analyse qualitative :
I.1.Screening phytochimique :
Le screening phytochimique nous a permis de mettre en évidence la présence
de quelques métabolites secondaires (alcaloïdes, tanins, flavonoïdes, coumarines,
saponines, stérols et les tritepènes, composés réducteurs, anthraquinones libres et
terpenoïdes) au niveau des tissus végétaux des plantes étudiées. La détection de ces
composés chimiques est basée sur des essais de solubilité des constituants, des
réactions de précipitation, un changement de couleur ou un examen sous la lumière
ultraviolette.
Les résultats de ce criblage phytochimique effectués sur les différents extraits

sont résumés dans le tableau suivant :
Tableau 6 : les composés phytochimiques détectés dans tecrium polium de la région

Ouled gacem (W. Oum el Bouaghi).
Les composants phytochimiques Résultats
Les huiles essentielles +++

Stérols et triterpenes ++ des traces
Flavones et aglycone +
Anthocyanosides -
Les coumarines +++ l’évènement d’une fluorescence intense
sous UV
Polyuronides +++
Tanins +++ vert d’âtre
Les saponosides ++
Les alcaloïdes ++ précipitation
(+) : Résultat positif (-) : Résultat négatif
Le nombre de « + » est fonction de l’intensité de la coloration et/ou des précipités.
59
Les résultats expérimentaux des tests phytochimiques réalisés sur de la partie

aérienne de la plante Tecrium polium de la région ouled gacem, montrent la présence
de l’huile essentielle par son odeur.
Les résultats expérimentaux des tests phytochimiques dans la recherche des
stérols et triterpènes réalisé ont montré la présence des stérols et triterpene dans
l’extrait N-hexane de la plante avec une apparition d’un anneau rouge.
La mise en évidence des flavones aglycone dans l’extrait méthanoïque de la
plante est confirmée par l’apparition d’une couleur rouge.
L’apparition d’une fluorescence intense sous une lumière ultra-violette indique
la présence des coumarines.
Les tests phytochimiques réalisés ont montré la présence des polyuronides,
confirmée par la formation d’une précipitation.
La recherche des tanins s’est montrée fortement positive confirmés par
l'apparition d'un vert d’âtre lors de l’ajout des gouttes de solution diluée de chlorure
ferrique à l’extrait aqueux.
On remarque aussi la présence des saponosides avec une mousse
persistante, stable et très visible (1cm).
Les tests des alcaloïdes sont marqués fortement positifs dans les extraits de la parties
aériennes de la plante, lors de l’addition du réactif de dragondroff.
Les résultats de Screening phytochimique sont représentés dans la figure 19
60
Les huiles essentielles + Stérols et triterpenes Flavones et aglycone
Anthocyanosides Polyuronides
Tanins Saponine Les alcaloïdes
Figure 19 : les résultats de Screening phytochimique
61
I.1.1. Etude comparative sur la plante Teucrium polium :

Tableau 7 : travaux antérieurs dans différentes régions en Algérie sur la plante
Teucrium polium
Teucrium polium dans différentes régions

Métabolites secondaires
Beni Snous
Ouled Gacem Tamanrasset (DjbelMelel) –
Tlemcen
Stérols et triterpenes + + -
Flavones aglycone + + +
Anthocyanosides - / /
Les coumarines + - -
Les heuiles + + +
Tanins + + +
Les saponosides + + +
Les alcaloïdes + + -
Au vu de ces résultats, nous déduisons que la plante Teucrium polium de la

région Tamanrasset, comme d’autres espèces de la famille Lamiacée, est riche en
divers métabolites secondaires.
Les résultats phytochimiques pour l’espèce Teucrium polium révèle la
présence de tous les métabolites secondaires à l’exception des anthocyanosides, ces
résultats sont comparables à ceux trouvés dans la région de Tamanrast (Hammoudi,
Hadj Mahammed et al., 2012).
La même espèce dans la région de Beni snous (DjbelMelel) de Tlemcen
(Belmekki, 2009) contient moins de métabolites secondaires.
Est les mêmes résultats ont été trouvé pour les Tecrium polium L. Capitatum dans
l’Est algérien (Malki et Yahia, 2014), les extraits de cette espèce sont riches en
flavonoïdes, anthocyanines, tannins galliques, terpènes, saponosides, glycosides et O-
hétérosides à génines réduites, C-hétérosides et des huiles essentielles.
62
II.2. Résultat de la chromatographie sur couche mince

mi :
Les différents extraits obtenus, ont été analysés par chromatographie sur
couche mince afin d’identifier les polyphénols présents.
Les chromatogrammes résultants comportent une série de spots (f
(figure
21,22,23),
), l’identification des composés était basée sur la comparaison des Rf et les
couleurs observés sous lampe UV des taches apparues sur CCM avec ceux de la
littérature.
Le tableau suivant comporte les Rf des différents spots apparus, ainsi que la
couleur révélée sous une lampe UV.
Rf = Distance entre l’origine (le dépôt) et la tâche du produit (b)
(b)\ Distance
entre l’origine (le dépôt) et le front du solvant (a) : Rf = b/a (Figure 20
20).
La comparaison des Rf entre les taches d’extrait avec des témoins connus
permet l’identification de la nature des composés (Hainque, 2008).
Figure 20 : Méthode de calcul du Rf

Tableau 8 :
Numéro (RF) Extrait La

Les Systèmes
Des Couleur
Solvants Méthanol N- Chloroforme Des
spots
hexane Taches
Sous
UV
I (1:1) 1 0.087 0.08 0.08 Rose

N-hexane/diéthyléther
diéthyléther 2 0.13 0.12 0.15 Rouge
3 0.18 0.18 0.18 Violet
63
Dépôt 0.00 0.00 0.00 Jaune
II (7 :4 :1) 1 0.22 / 0.
0.21 Violette
N- 2 0.38 / 0.
0.36 Violet
hexane/chloroforme/MeOH 3 055 0.55 0.55 Rose
4 0.59 0.59 0.
0.59 Rouge
Dépôt 0.00 0.00 0.00 Jaune
1 0.08 0.08 0.08 violette
III (9 :1) 2 0.12 0.12 0.12 violette
MeOH/chloroforme 3 0.18 0.18 0.18 Rose
4 / 0.81 / Rouge
5 1 1 1 Rose
Dépôt 0.00 0.00 0.00 Jaune
Les photos ci-dessous

dessous représentent les résultats de la chromatographie sur
couche mince de la plante Teucrium :
E1 E2 E3
Figure 21 : les résultats de Chromatogramme photographié CCM sous lampe UV à

254 (Système I)
64
E1 E2 E3 E1 E2 E3

254 et 365nm (Système II)
E1 E2 E3

365nm (Système III)
E1 : Extrait Méthanoïque, E2
E : Extrait n-hexane, E3 : Extrait chloroforme
65
Les résultats de l’analyse chromatographique ont permis de mettre en

évidence :
Les extraits méthanoïques et aqueux semblent avoir des composés en commun
avec des profils, en partie, similaires, mais différents par la concentration en
flavonoïdes (Intensité des taches) et une nette différence de ces extraits par rapport
aux Rf et qui ne semblent pas présenter les mêmes composés.
L’étude des différentes CCM, a montré qu’à l’instar des extraits semblent
contenir des tanins (révélés en rouge à la vanilline sulfurique) (Lhuillier, 2007)
Les composés apolaires, présentant dans méthanoïques et aqueux, présentent
des colorations Violettes et une coloration rouge- rose en UV avec des valeurs des Rf
plus élevés.
Les bandes de fluorescence jaune correspondraient aux flavonols selon
(Markham, 1982).
Les bandes de fluorescence violette correspondraient aux flavones selon
(Markham, 1982).
Il n’est pas possible de comparer un Rf obtenu avec les valeurs signalées dans
la littérateur car les valeurs de Rf observées sont difficilement reproductibles, elles
sont influencées par de nombreux facteurs (température, humidité, la phase
stationnaire, et la phase mobile…) qui sont difficiles à contrôler (Ribereau-Gayon,
1968).
Enfin, nous pouvons conclure que les résultats de la CCM confirment la

présence des composés phénolique et des flavonoïdes dans les différents extraits de la
plante étudiée.
II. Analyse quantitative :
II.1. Rendement d’extraction :
L’extraction des polyphénols de la plante Teucrium polium par macération

dans le mélange (MeOH / H2O : 8 /2, V/V) (500ml) permet de déterminé le
rendement qui a été calculé par la formule suivante :
R (%) = 100 Mext / M éch
66
L’extrait obtenu a une couleur

coule verte foncée et d’aspect pâteux.
Les résultats obtenus sont présents dans le tableau suivant :
0 : rendement de la plante Teucrium polium

Tableau 09
Matériel végétal Extrait M(g) Rendement%

Teucrium polium Aqueux 50 7,2
Méthanol 50 17,8
18,00%
16,00%
14,00%
12,00%
10,00%
8,00%
6,00%
4,00%
2,00%
0,00%
Aqueux Methanolique
rendement
Figure 24 : Rendements des extraits methanolique et aqueux de Teucrium polium
Les résultats obtenus lors de cette étude montrent que le rendement d’extrait
méthanoïque obtenu est de l’ordre de 17,8%, et celui de l’extrait
’extrait aqueux est de 7,2%.
Donc le rendement de l’extrait méthanoïque est élevé par rapport à celui de ll’extrait
aqueux. en effet, les solvants alcooliques sont capables d’augmenter la perméabilité
des parois cellulaires en facilitant l’extraction d’un ou plus grand nombre de
molécules polaires, de moyenne et de faible polarité (Seid et al., 2014) .
Des résultats semblables ont été trouve par (Belmekki, 2009) avec un rendement de
18.7% par rapport à 100 g de la matière végétale sèche, rendu en poudre.
Nos résultats sont supérieurs à ceux trouvé par (Hammoudi, 2015)
2015), dont les
résultats d'extraction de la plante Teucrium polium ont montré un rendement très
67
faible de l’ordre de (4.81 ± 0.96%) pour l'extrait méthanolique, suivie d'extrait de

l'Acétone (3.11 ± 0.17%) et celui de l'éthanol (2.80 ± 1.00%).
Ainsi l’extraction méthanolique a donné un rendement de 6.45 % pour Teucrium

communis et 8.24 % pour Teucrium polium dans l’étude de (Krache, 2006).
Ceci indique que le rendement le plus élevé a été obtenu par la méthode d’extraction
par macération dans le méthanol, la variation de rendement est dépendante du type de
solvant utilisé (la méthode) ainsi que l’origine de la plante et la taille d’échantillon
étudié, ainsi que la présence de substances interférentes (Stalikas, 2005). Donc la
technique d’extraction est une étape très importante dans l’isolement et la
récupération des composés phytochimiques existants dans le matériel végétal (Quy
Diem Do et al., 2014).
En effet, Naima et al., (2005) ont observé que le solvant le plus efficace pour extraire
les polyphénols à partir de la plante marocaine Acacia mollissima est le méthanol
aqueux (80%) suivie par l'éthanol aqueux (80%) et enfin l'eau. Ainsi Quy Diem Do et
al., (2014), confirment que l’utilisation combinée de l'eau et du solvant organique
peut faciliter l'extraction des substances chimiques qui sont solubles dans l'eau et / ou
dans le solvant organique.
II.1.2. Quantification des composés phénoliques :
II.1.2.1. Résultats de dosage des composés phénoliques totaux :
Les polyphénols totaux ont été déterminés par la méthode de Folin-Ciocalteu ;

l'une des méthodes les plus anciennes conçue. En utilisant comme standard l'acide
gallique, dont sa courbe d'étalonnage est représentée dans la (figure25). L’absorbance
a été mesuré à 765 nm, les teneurs en polyphénols sont exprimées en μg EAG/mg
d'extrait.
68
Figure 25 : Courbe d'étalonnage de l'acide gallique.
Les résultats de dosage des polyphénols totaux dans les échantillons de

Teucrium polium analysés sont rapportés dans le tableau 10.
Tableau 10 : Teneur en polyphénols d’extrait MeOH de la plante Teucrium

polium
Extrait MeOH (mg / ml) Teneur en polyphénols(a)

10 157,999 ± 0,7999
5 104,504 ±1,8144
2,5 91,097 ± 2,2528
1,25 71,805 ± 0,7509
Les teneurs en phénols totaux de la plante Teucrium polium d’extrait MeOH

est ainsi estimée au cours de notre analyse présentent une variation de 71,805 ±
0,7509 μg EAG/mg d'extrait à 157,999 ± 0,7999 μg EAG/mg d'extrait. Ceci indique
que la plante Teucrium polium est riche en polyphénols.
Les résultats obtenus durant cette étude sont différents de ceux trouvés par quelques
auteurs qui ont travaillé sur la même variété. En effet, (Krache, 2006) a trouvé une
valeur significativement inferieure de notre résultat avec une teneur en polyphénols de
18.63 ± 3.51 mg EAG / ml d'extrait methanolique. Ainsi que (Djeridane et al., 2006 ;
69
Belmekki, 2009), ont trouvés la teneur phénolique totale de Teucrium polium de 4.91
(mg équivalent d'acide gallique / g du matériel végétal sec), et 3.81 mg équivalent
d'acide gallique /g du matériel végétal sec) respectivement.
Tableau 11 : Teneur en polyphénols d’extrait aqueux de la plante Teucrium

polium
Extrait aqueux (mg / ml) Teneur en polyphénols(a)

10 103,220 ± 0,1251
5 102,07 ± 0,2503
2,5 68,486 ± 2,815
1,25 67,203 ± 0,6257
(a)
 : μg d’équivalent d’acide gallique par mg d’extrait.
 Les valeurs représentent la moyenne de 2 mesures± écart type.
Les teneurs en phénols totaux de la plante Teucrium polium d’extrait aqueux

est ainsi estimée au cours de notre analyse présentent une variation de 67,203 ±
0,6257 μg EAG/mg d'extrait à 103,220 ± 0,1251 μg EAG/mg d'extrait.
Les résultats obtenus durant cette étude indiquent que les teneurs en polyphénols
totaux des extraits méthanoïques varient entre 71,805 à 157,999 µg EAG/mg d’extrait
et entre 67,203 à 103,220 µg EAG/mg pour l’extrait aqueux. Ceci indique que la
teneur en polyphénols d’extrait méthanoïque est élevée par rapport à celle de l’extrait
aqueux.
Cette différence dans les teneurs peut être expliquée par la méthode d'extraction et la
méthode de quantification peuvent également influencer l'estimation de la teneur des
phénols totaux. Il a été prouvé que les teneurs en phenols totaux et en flavonoïdes sont
élevées lorsque le milieu de vie de la plante n'est pas adéquat, dans ce cas la plante
favorise la synthèse des métabolites secondaires afin de s'adapter et de survivre (Apak
et al., 2007).
70
160
140
Teneur en polyphenols
120
100
80 Extrait aqueux
60 Extrait MeOH
40
20
0
10 5 2,5 1,25
Concentration (mg/ml)
Figure 26 : Histogramme comparatif de teneurs des polyphénols de l’extrait aqueux

et méthanoïque.
II.1.2.2. Résultats de dosage des flavonoïdes :
La teneur en flavonoïdes est déterminée par la méthode de trichlorure

d’alumiunm (AlCl3) pour chaque extrait a été rapportée
rapp en μg équivalent de
quercetine/mg d’extrait. Les résultats de la courbe d’étalonnage de quercetine sont
représentés dans la Figure.
Le taux des flavonoïdes a été obtenu à partir de la courbe d’étalonnage qui suit une
équation de type : y = 0.0299x+0.0979
0.0299x+0. sachant que R² = 0.9746.
Figure 27 : Courbe d'étalonnage de la quercétine.
71
Les tableux ci-dessous représente les résultats de dosage des flavonoïdes :
Tableau 12 : Teneur en flavonoïdes d’extrait MeOH de la plante Teucrium

polium
Extrait MeOH (mg / ml) Teneur flavonoïdes en (a)

10 39,3005 ± 1,7967
5 28,247 ± 0,4963
2,5 16,575 ± 0,1654
1,25 12,762 ± 2,3886
(a)
 μg d’équivalent de la quercétine par mg d’extrait.
Tableau 13 : Teneur en flavonoïdes d’extrait Aqueux de la plante Teucrium

polium
Extrait Aqueux (mg / ml) Teneur flavonoïdes en (a)

10 19,216 ± 1,1589
5 12,946 ± 0,2361
2,5 6,341 ± 0,5911
1,25 4,768 ± 0,5431
(a)
 μg d’équivalent de la quercétine par mg d’extrait.
Dans cette étude on a obtenu des quantités en flavonoïdes qui varient entre
12,762 ± 2,3886 μg EQ/mg à 39,3005 ± 1,7967 μg EQ/mg d’extraits méthanoïques et
entre 4,7685 ± 0,5431 μg EQ/mg à 19,2165 ± 1,1589 μg EQ/mg d’extraits aqueux.
Ceci indique que la teneur en flavonoïdes de l’extrait methanolique est élevée par
rapport à celle de l’extrait aqueux.
Les résultats obtenus dans la présente étude, montre des teneurs très élevées par
rapport à ceux menés par l’étude de (Krache, 2006) ou elle a trouvée une teneur de
l’ordre de 9.14 ± 2.39 μg EQ/mg d’extraits méthanoïque.
72
Alors que, (Djeridane

Djeridane et al., 2006 ; Belmekki, 2009), ont révélés des teneurs de
l’ordre de 4.63 (mg équivalent d'acide gallique / g du matériel végétal sec), et 3.2
mg/g).
Cette différence dans les teneurs peut être expliquée par les conditions
environnementales, climatiques et période de collecte ainsi que par les facteurs
génétiques et les conditions expérimentales.
40
35
Teneur en flavonoides
30
25
20 Extrait Aqueux
15 Extrait methanolique
10
5
0
10 5 2,5 1,25
Figure 28 : Histogramme comparatif de teneurs des flavonoïdes de l’extrait

méthanolique et aqueux des feuilles de Teucrium.
Corrélation entre la teneur en polyphénols totaux et le pouvoir anti

anti-radicalaire :
En établissant la relation entre les teneurs en phénols totaux, en flavonoïdes et la
capacité anti-oxydant d’extrait méthanoïque et aqueux de la plante étudiée, pour cela,
on a établi des courbes de corrélation représentées
représenté dans les figures suivantes (figures
29) :
73
Extrait Aqueux
120
teneurs en flavonoides (μg/mg) 100

R² = 0,8616
80
60
40
20
0
0 5 10 15 20 25
teneurs en flavonoides (μg/mg)
Figure 29 : Relation entre les teneurs en phénols totaux, flavonoïdes.
Extrait MeOH
180
teneurs en flavonoides (μg/mg)
160
140 R² = 0,9284
120
100
80
60
40
20
0
0 10 20 30 40 50
Teneurs en flavonoides (μg/mg)
Figure 30 : Relation entre les teneurs en phénols totaux, flavonoïdes.
Les figures 29,30 nous montrent qu’il y a une corrélation forte entre les
teneurs en flavonoïdes et en phénols totaux (R2=0.8616, R2= 0.9284) respectivement
pour l’extrait aqueux et méthanoïque.
74
Extrait aqueux
80
79,5
pourcentage d'inhibition 79
R² = 0,9731
78,5
78
77,5
77
76,5
76
75,5
75
74,5
0 20 40 60 80 100 120
Figure 31 : Relation entre l’activité anti-radicalaire et les teneurs en polyphénols
Extrait MeOH
90
80
pourcentage d'inhibition
R² = 0,9535
70
60
50
40
30
20
10
0
0 20 40 60 80 100 120
Figure 32 : Relation entre l’activité anti-radicalaire et les teneurs en polyphénols
On remarque que l’activité anti-radicalaire est fortement liée à la teneur en

2
polyphénols avec (R =0.9731, R2= 0.9535) respectivement pour l’extrait aqueux et
méthanoïque.
75
Extrait aqueux
80
79,5
R² = 0,9998
78,5
78
77,5
77
76,5
76
75,5
75
74,5
0 2 4 6 8 10 12 14
Figure 33 : Relation entre l’activité anti-radicalaire et les teneurs en flavonoïdes.
Extrait MeOH
80
79,5
79 R² = 0,9983
78,5
78
77,5
77
76,5
76
75,5
75
74,5
0 5 10 15 20 25 30
Figure 34 : Relation entre l’activité anti-radicalaire et les teneurs en flavonoïdes.
Ainsi que l’activité anti-radicalaire est fortement liée à la teneur en flavonoides avec
2
(R =0.9998, R2= 0.9983) respectivement pour l’extrait aqueux et méthanoïque. Donc
l'activité anti-radicalaire dépend de la nature des composés phénoliques disponibles
(Hong Chen et Tang Ho, 1997).
76
II.2. L’activité biologique :

II.2.1. L’activité antioxydante :
II. 2.1.1. Le pouvoir réducteur des composés phénoliques :
Test de piégeage du radical libre DPPH :
L’activité antioxydante des
de extraits méthanoïque et aqueux de la partie aérienne de
Teucrium polium et de l’antioxydant standard (acide ascorbique) vis-
vis-à-vis du radical
DPPH est évaluée à l’aide d’un spectrophotomètre en suivant la réduction de ce
radical qui s’accompagne par son passage de la couleur violette (DPPH) à la couleur
jaune (DPPH-H)
H) mesurable
mesurable à 517nm. Cette capacité de réduction est déterminée par
une diminution de l’absorbance induite par des substances antiradicalaires
(Bougandoura et Bendimerad, 2012).
Figure 35 : Réaction d’un antioxydant avec le radical DPPH (kouamé et al., 2009).
Les résultats de l’activité antioxydante de notre plante en utilisant les deux extraits
méthanoïque et aqueux sont représentés dans le tableau14.
Tableau 14 : Pourcentages d’inhibition des deux extraits de Teucrium

polium comparativement à celui de l’acide ascorbique.
Concentration 10 mg/ml 5 mg/ml 2,5 mg/ml

Extrait aqueux (%) 79,29 75,84 74,94
Extrait 81,63 77,73 63,25
méthanoïque (%)
Vit c (%) 91,09 90,86 90,75
77
100
90
80
70
60
50 Extrait méthanolique (%)
40
Vit c (%)
30
20
10
0
10 mg/ml 5 mg/ml 2,5 mg/ml
Concentration
Figure 36 : Histogramme
istogramme comparatif de pourcentage d’inhibition de l’extrait
méthanoïque et vit C
Histogrammes comparatifs illustrés dans la figure 36, montre que le pourcentage
d’inhibition de l’extrait méthanoïque de la partie aérienne de Teucrium (81.63%,
77.73%, 63.25%) est inférieur à celui de la vitamine C (91.09%,
91.09%, 90.86%, 90.75%
90.75%)
pour toutes les concentrations respectivement (10mg/ml, 5mg/ml, 2.5mg/ml).
100
90
80
70
60
50 Extrait aqueux (%)
40
Vit c (%)
30
20
10
0
Concentration
Figure 37 : histogramme comparatif de pourcentage d’inhibition de l’extrait aqueux

et vit C
Histogrammes comparatifs illustrés dans la figure 37, montre que le pourcentage

d’inhibition de l’extrait aqueux de la partie aérienne de Teucrium (79.29%,
79.29%, 75.84%,
78
74.94%) est inférieur à celui de la vitamine C (91.09%, 90.75%) pour

91.09%, 90.86%, 90.75%
toutes les concentrations respectivement (10mg/ml, 5mg/ml, 2.5mg/ml).
100
90
80
70
60
extrait aqueux
50
40 extrait méthanoique
30 vit c
20
10
0
10 5 2,5
istogramme comparatif de pourcentage d’inhibition des extraits
méthanoïque et aqueux ainsi que la vit C.
Le tableau 14 et la figure 38montrent

38 que les pourcentages d’inhibition des deux
extraits méthanoïque (81.63%, 63.25% et aqueux (79.29%,
81.63%, 77.73%, 63.25%) 79.29%, 75.84%,
74.94%) de notre plante étudiée sont inférieurs à ceux du standard (91.09%,
91.09%, 90.86%,
90.75%).
La figure ci-dessus
us montre les résultats de mesure de pourcentage d’inhibition du
radical DPPH●
● en fonction de la concentration des composés testés. On constate que
le pourcentage d’inhibition du radical libre augmente avec l’augmentation de la
concentration soit pour les extraits méthanoïques ou aqueux de Teucrium
ucrium polium ou
pour l’acide ascorbique.
79
90
80
60
50
Extrait aqueux (%)
40
30 Extrait méthanolique (%)
20
10
0
concentration
istogramme comparatif de pourcentage d’inhibition des extraits
méthanoïque et aqueux.
L'extrait méthanoïque a présenté l'activité anti-radicalaire la plus élevée avec un

pourcentage de l’ordre de 81.63%, suivie par l’extrait aqueux avec un pourcentage
d’inhibition de 79.29%. Le pourcentage d’inhibition de l’acide ascorbique est
supérieur à celui des extraits étudiés 91.09%.
Au vu des courbes illustrées précédemment,

précédemment onn remarque que le pourcentage
d’activité anti-oxydant augmente avec l’augmentation de la concentration soit pour la
vitamine C ou pour les extraits méthanoïques et aqueux de Teucrium.. Il semble que
l’activité anti-radicalaire
radicalaire est fortement dépendante aux concentrations des extraits,
Plus l’extrait est concentré,
concentré plus le pourcentage d'activité est élevé.
L’activité anti-radicalaire
radicalaire des extraits est donc relativement dépendante de la teneur
en polyphénols totaux et en flavonoïdes (Naczk et Shahidi, 2004).. En effet, Damaket
al., (2008) ont rapporté que la concentration en polyphénols totaux est corrélée
significativement avec la capacité antioxydante évaluée
valuée généralement par le test
DPPH.
Les résultats de l'activité anti-radicalaire

anti radicalaire obtenus sont en accord avec ceux de
(Sharififar et al., 2009 ; De Marino et al., 2012). En effet, dee nombreuses études
différents extraits de T. polium
ont montré un effet antioxydant significatif de différents
80
(Ljubuncic et al., 2006 ; Ardestani et Yazdanparast, 2007). Des études

supplémentaires sont nécessaires pour caractériser les composés bioactifs
responsables de l’activité.
Determination d’IC50 :
L’IC50 est inversement proportionnel à la capacité antioxydante d'un composé, parce
qu’il exprime la quantité d'antioxydant requise pour diminuer la concentration du
radical libre de 50%. Plus la valeur d’IC50 est petite, plus l'activité antioxydante d'un
composé est grande.
Cette activité est mesurée comparativement à l’acide ascorbique (antioxydant
standard).
Tableau 15 : les valeurs d’IC50 des extraits MeOH et aqueux de Teucrium polium et
de l’acide ascorbique
Extraits et standard IC50 (mg/ml)

Extrait MeOH 1.976
Extrait Aqueux 1.668
Vit C 1.377
D’après le tableau15, l’extrait aqueux des feuilles représente l’extrait le plus actif
avec un IC50 de l’ordre de (1.668 mg/ml) suivi par l’extrait méthanoïque
1.976mg/ml. Une activité qui reste toujours, inférieure à celle du standard (l’acide
ascorbique) avec l’IC50 de 1.377 mg/ml.
81
2
1,8
1,6
1,4
1,2
IC50
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
Extrait MeOH Extrait Aqueux Vit C
antioxydant
Figure 40 : Valeurs d’IC50.
III.3.2. L’activité antibactérienne

anti :
L’évaluation de l’activité antibactérienne des flavonoïdes de Tecrium

ecrium poliuma
a été réalisée par la technique de diffusion en puits en utilisant le milieu gélosé sol
solide
(Muller-Hinton).
Hinton). L’activité antibactérienne est déterminée en termes de diamètre de
zone d’inhibition produite autour des puits après 24h d’incubation à la température
adéquate pour le développement du germe. Lors de cette étude, l’action de deux
extraits aqueux et méthanoïque de la plante vis-à-vis les huit souches bactériennes es
est
testé. Les résultats de l'évaluation antibactérienne des extraits sont repris ci
ci-dessous :
Figure: A Figure: B Figure:

Figure:C
Pseudomonas aeruginosa Acinito E. Coli. BLSE+
82
Figure:D Figure : E
Klebsiella Mourganilla
Figure:F Figure :G Figure : H

R. Escherichia coli R.Staphylococcus aureus R.Pseudomonas aeurinosa
(ATCC 25922) (ATCC 25923) (ATCC 27853)
Figure 41 : Effet de deux extraits de Teucrium polium sur les

différentes souches bactériennes testées.
L’étude de l’activité antibactérienne de l’extrait méthanoïque et aqueux de Teucrium

polium de Ouled gacem, sur différents germes (Gram (+) et Gram (-)) par la méthode
de l’antibiogramme donne des diamètres qui varient en fonction de la souche testée.
Les diamètres des zones d'inhibition des extraits contre les microorganismes testés
sont présentés dans le tableau (16).
83
Tableau 16 : Diamètre des zones d’inhibition de la croissance microbienne testés par
Les deux extraits de Teucrium polium (en mm).
Zone d'inhibition en mm
Extrait méthanoïque Extrait aqueux
Souches Bactériennes 4mg/ml 16mg/ml 8mg/ml 24mg/ml
Staphylococcus aureus (ATCC

R 15.5 R R
25923)
Escherichia coli (ATCC

R 8 R R
25922)
Pseudomonas aeruginosa
15 21 10 13
(ATCC 27853)
Klebsiella
9 15 12 16
E. Coli BlSE+
R 8 R 7
Proteus mirabilis
7 7 8 8
Morganilla
R 7 8 8
Acinitobacter
7 8 9 10
R : Résistante
84
Concentration mg/ml
21
4
15,5 15 15 16
8 8 9
7 7 7 7 8
0 0 0 0
Souche Bac
Figure 42 : Zones d'inhibition (en

( mm) des souches bactériennes testées en fonction
de deux concentrations d'extraits méthanoïque.
Les résultats révèlent des réponses variables en fonction des souches testées et de la
concentration de l’extrait étudié.
Tous les extraits ont réagi positivement au moins sur une des souches microbiennes
d Teucrium polium est douée de propriétés
testées ce qui confirme que la plante de
antimicrobiennes.
il apparait que l’extrait méthanoïque est plus efficace sur les bactéries Gram négatif
que les grams positifs,, Il exerce une action inhibitrice élevée sur la souche de
référence : Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) avec un diamètre d’inhibition de
l’ordre de 21mm à la concentration 16mg/ml,, comparativement à celle constatée sur
les autres souches testées : Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Klebsiella, E. coli
BLSE+, Escherichia coli (ATCC
( 25922), Acinitobacter et Morganilla avec des zones
d’inhibition de 15.5mm, 15mm, 8mm, 8mm, 8mm, 7mm respectivement pour la
même concentration d’extrait methanolique.
methanolique
Nos résultats obtenus lors de cette étude, révèlent que les deux souches cliniques : E.
Coli BLSE+, Morganilla ainsi que les deux souches de références : Staphylococcus
85
aureus (ATCC 25923),

), Escherichia coli (ATCC 25922), semblent résistantes pour la
concentration 4mg/ml d’extrait methanolique.
methanolique
Alors que une zone d’inhibition à large spectre pour Pseudomonas aeruginosa
(ATCC 27853) avec 15mm de diamètre à 4mg/ml d’extrait comparativement à
Klebsiella, Acinitobacter et P. mirabilis avec des zones d’inhibition qui varient entre
7 à 9mm, pour la même concentration.
La figure ci-dessous
dessous represente les zones
z d'inhibition (en mm) des souches
bactérienne testées en fonction de deux concentrations d'extraits aqueux.
16
8
concentration mg/ml
13
12
24
10 10
9
8 8 8 8
7
0 0 0 0 0
Souche Bac
Figure 43 : Zones d'inhibition (en

( mm) des souches bactériennes testées en fonction
de deux concentrations d'extraits aqueux.
Les deux souches de références : Staphylococcus aureus (ATCC

ATCC 225923) et
Escherichia coli (ATCC
ATCC 25922)
25922 se révèlent résistantes pour toutes concentrations
d’extraits aqueux.
En effet, les résultats les plus intéressants et les plus saillants sont enregistrés sur la
souche clinique Klebsiella avec une zone de diamètre de l’ordre de 166 mm à 24mg/ml
d’extrait aqueux, suivie par la souche de référence Pseudomonas aeruginosa (ATCC
27853) avec 13mm de diamètre,
diamètre Acinitobacter 10mm. Et pour Morganilla et P.
86
mirabilis présentent le même diamètre d’inhibition pour les deux concentrations

testées.
En revanche, la souche clinique E. coli BLSE+ à 8mg/ml d’extrait montre résistante
résistante.
21
15,5 16 15 15
12 13
8 8 8 8 9 10 9 10
7 7 7 8 8 8 7 7
0 0 0 0 0 0 0 0 0
8E,Aq 24E,Aq 4E,M 16E,M
Figure 43 : Effet des deux extraits de Teucrium polium sur les différentes souches
bactériennes testées.
D’après le tableau
ableau et l’histogramme de la figure 43. On peut montrer l’effet
antibactérien de la plante Teucrium polium sur différentes souches bactériennes de
gram positif et négatif. Cette efficacité est due à la présence des flavonoïdes et les
huiles essentielles qui
ui sont des métabolites secondaires réputés
réputés pour effets
antibactériens (Havsteen,, 2002 ; Sosa
S et Tonn, 2006).
Les résultats montrent clairement l’effet significatif de l'extrait m

méthanoïque du
Teucrium polium sur les huit souches étudiées, avec un maximum d’inhibition 21 mm
de diamètre sur Pseudomonas aeruginosa.
aeruginosa
Seulement l’extrait
extrait méthanoïque à 16mg/ml exerce un effet inhibiteur contre les deux
souches de références : Staphylococcus aureus (ATCC 25923) et Escherichia coli
(ATCC 25922).
Une étude similaire faite par Oganesyan et al., en (1992) montre l’effet
antimicrobien de l’extrait méthanoïque de Teucrium polium sur les souches suivantes
: Klebsiella pneumonie,, Enterobactere, et Escherichia coli.
87
Pour l’extrait aqueux, montre une efficacité importante sur Klebsiella et P

P. aeruginosa
Il accuse des taux de sensibilité de (16mm, et 13mm) respectivement. Son effet
antibactérien est relativement moyen sur P. mirabilis et E coli BLSE+
+ avec (8mm ; 7
mm) de diamètre.
Les mêmes résultats

résultat que ceux de la présente étude concernant l’extrait aaqueux,
pour les souches P. aeuginosa,
aeuginosa S. auresus et P. mirabilis ont été trouvé par (Fertout-
Mouri et al., 2016).
D’après ces résultats,

résultats il semble que la variabilité de l’activité antibactérienne
est probablement due à une sensibilité relativement différente des bactéries et/ou la
présence d’une sélectivité vis-à-vis
vis vis les extraits des plantes. Ce qui explique que
l’activité antibactérienne varie d’une plante à une autre et d’un germe à l’autre
(Yameogo, 2003). Les travaux de Weber et al., (1996), ont indiqué que les composés
phénoliques sont reconnus toxiques et auraient pour cible les enveloppes des
microorganismes telles que la membrane plasmique et la paroi.
Nos résultats de l’extrait

l’extrait méthanoïque sont en accord avec ceux de
(Darabpour et al., 2010 ; Darwish et Aburjai, 2010 ; Belmekki et al., 2013) qui
ont prouvé que l’extrait éthanolique de Teucrium polium s’est avéré montrer un
pouvoir antimicrobien acceptable.
III.3.2.1. Résultats de l’antibiogramme :
L’antibiogramme permet de mesurer la capacité d’un antibiotique à inhiber la

croissance bactérienne. Les résultats obtenus
o sont représentés dans la figure 44.
E coli ATCC 25922 Pseudomonas ATCC Staphylocoques Klebsiella

27853 aureus ATCC25223
88
E coli BLSE + Proteus mirabilis Acinitobacter Morganilla
BMR
Figure 44 : représentent l’effet des antibiotiques sur les souches bactériennes.
Le tableau ci-dessous reporte les valeurs en mm des zones d’inhibitions atteintes avec
les différentes souches étudiées par les antibiotiques.
Tableau 16 : Antibiogramme des germes étudiés en présence des différents
antibiotiques
Penicillin Oxacillin Fosfomcin Fusidicacid

staphylocoques R 21 39.2 20
aureus ATCC-25223
L’antibiogramme a été réalisé sur trois souches de référence des bactéries et deux
souche clinique vis-à-vis les 9 antibiotiques de différentes familles. La mesure du
diamètre des zones d’inhibition de chaque souche pour chacun des antibiotiques testés
Permet de caractériser les souches comme étant sensibles ou résistantes.
89
cephotaxime dixicaci n n
d
E coli ATCC 25 27 18.5 21.5 /
25922
Pseudomonas 22 12 26 20 20
ATCC 27853
Klebsiella R R R 16 /
Serratia 38 37 17 20 /
Proteus 44.2 R 23 15 /
mirabilis BMR
Le tableau 16 montrent que les deux souches de référence : Escherichia coli (ATCC
25921) et Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), sont des bactéries sensibles
possèdent des zones d’inhibition de diamètre de: (25, 27, 18.5, 21, 5 mm) et (22, 12,
26, 20 mm) respectivement pour Cefotaxime « cephotaxime », Nali-dixicacid,
Ampicillin, Nitrofurantoin.
Il apparait que parmi les souches étudiées, Staphylococcus aureus (ATCC 25923), est
très sensible aux trois antibiotiques testés notamment l’Oxacillin, Fosfomcin et
Fusidicacid avec des zones d’inhibition de diamètres qui varie entre 21, 39.2, 20mm
respectivement.
Par contre, la même souche se révèle résistante à l’antibiotique étudié : pénicilline.
Il s’est avéré aussi que la souche clinique Serratia est très sensible à la Cefotaxime et
Nali-dixic acide avec des zones d’inhibition de diamètre qui varient entre 38 et 37mm
respectivement. Alors que la même souche est sensible moyennement aux deux autres
antibiotiques utilisés avec des zones d’inhibition estimée par 20 mm contre
Nitrofurantoin et 17 mm contre l’ampicillin.
Alors que la souche clinique klebsiela se révèle résistante pour les trois antibiotiques
testés notamment Cefotaxime « cephotaxime », Nali-dixicacid, Ampicillin, et sensible
pour Nitrofurantoin avec un diamètre de 16mm.
Le résultat obtenu montre que la souche Proteus mirabilis BMR est très sensibles aux
trois antibiotiques testés notamment Cefotaxime, Ampicillin, Nitrofurantoin avec des
zones d’inhibition de diamètres qui varie entre 44.2, 23, 15mm respectivement.
90
D’après nos résultats de l’antibiogramme, on peut dire que, les antibiotiques

réagissent différemment selon le type de bactérie, et chaque composé a sa propre
efficacité.
91
Conclusion
Conclusion :
Dans le but de la valorisation d’une des plantes de la famille Lamiacées issue
de la région d’Oum El Bouaghi en l’occurrence Teucrium polium.
L’étude bibliographique et ethnobotanique a montré que Teucrium poliuma été

reconnue depuis longtemps en médecine populaire dans le traitement de
physiopathologiques de nombreuses conditions, telles que les inflammations et les
rhumatismes. Il serait donc très intéressant de l’exploiter pour la recherche de ses
principes actifs, responsables de ces propriétés pharmacologiques.
Le screening phytochimique avait mis en évidence divers métabolites

secondaires : tanins, saponosides, terpènes et coumarine, alcaloïdes, les huiles
essentielles, Stérols et triterpenes, flavonoïdes et polyphénols.
La plante Teucrium polium a été soumise à deux types d’extraction des

composés phénoliques, la première s’est faite par macération à froid avec un mélange
méthanol/eau 80/20 : v/v, et la seconde est l’extraction aqueuse.
Chaque extrait a été caractérisé par sa couleur et son rendement par rapport à
la matière sèche. L'analyse semi quantitative des phénols totaux et des flavonoïdes des
extraits adoptant la méthode de Folin-Ciocalteu, révèle la présence des quantités
importantes en polyphénols. De même nous avons dosé les flavonoïdes par la
méthode d’AlCl3 qui nous mène à conclure que cette plante contient une quantité
considérable de flavonoïdes dans les deux extraits testés.
Les chromatogrammes (CCM) des deux extraits, ont montré sous UV à 254
nm la présence d’une multitude de variétés de composés phénoliques et flavonoïdes.
Alors que, le potentiel antiradicalaire de l’extrait méthanoïque et aqueux de

Tecrium polium est déterminé par la méthode de DPPH, présente un pouvoir
antioxydant inferieur avec un pourcentage de (81,63%, 79,29%) à celui de la vitamine
C (91,09%). Cette activité anti-radicalaire des extraits est donc relativement
dépendante de la teneur en polyphénols totaux et en flavonoïdes, donc ces molécules
sont considérées comme des agents antioxydants de première classe et peuvent être
employées pour des applications thérapeutiques, sachant que les antioxydants
contribuent de manière très efficace à la prévention des maladies telles que le cancer,
et les maladies cardiovasculaires.
93
Conclusion
Les tests biologiques effectués dans ce travail ont montré que l’effet
antibactérien de la plante Teucrium polium sur différentes souches bactériennes de
gram positif et négatif est significatif. Cette efficacité est due à la présence des
flavonoïdes et les constituants des huiles essentielles qui sont des métabolites
secondaires réputés pour leurs effets antibactériens.
En conclusion, ce travail nous a permis de nous initier à un nombre de

techniques expérimentales au même titre que la méthodologie à suivre pour mener à
bien une étude phytochimique d’une plante. Ce travail constituera une base de départ
pour des recherches plus approfondies, sur les plantes médicinales Algériennes.
94
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Annexe
Annexes :
Annexe 1 : matériels et solvants utilisés
Equipements : Verreries et Solvants et réactifs :

autres matériels :
Rota vapeur Becher Solvants : méthanol

Spectrophotomètre Etuve Erlenmeyer . Chloroforme, hexane,
Micropipettes lampe UV Fioles éther di
agitateur magnétique Pipette pasteur Éthylique, éthanol.
autoclave Micropipette Acides : HCl, AC.
Lyophilisateur Tubes. Sulfurique, acide acétique
Papier filtre Réactifs : folin-Ciocalteu
Plaque CCM dragondorff
Eprouvette 1diphenyl-2-
Ampoule à décante picrylhydrazyl
Boite de pétri (DPPH)
Ance de platine Carbonate de sodium
Les écouvillons Na2CO3
Chlorure d’aluminium
AlCl3
Ammoniaque,Mc Farland
Eau physiologique,
Le Dimethylsulfoxide
(DMCO)
Annexe 2 : préparation du réactif de dragondroff des alcaloïdes.
Le réactif de dragondroff formé de deux solutions A et B.

Solution A : la préparation de ce premier s’effectue comme suit :
 Dissoudre 8.5 g de nitrate bismith dans 40 ml d’eau

 Ajouter 10ml acide acétique
Solution B a été préparé comme suit :

 Dissoudre 8 g de KI dans 20 ml d’eau Pour la révélation des alcaloïdes on mélange
(5ml) de solution A et même volume pour la solution B et on ajoute (20ml) acide
acétique ensuite ajuster le volume total à (100ml) d’eau. La révélation d’un précipite
indique la présence des alcaloïdes.
Annexe
Annexe 3 : Dosage des Polyphénols pour les extrait aqueux : Blanc=0.113
conctration 10 mg 5 mg 2.5 mg 1.25 mg

Répétition N°1 1,236 1,248 0,865 0,823
Répétition N°2 1,234 1,224 0,820 0,733
X1 103,309 101 ,893 70,477 66,761
X2 103,132 102,247 66,495 58 ,796
Annexe 4 : Dosage des Flavonoïdes pour les extrait aqueux : Blanc=0.048
10 mg 5 mg 2.5 mg 1.25 mg
Répétition N°1 0.648 0.480 0.300 0.252
Répétition N°2 0.697 0.490 0.275 0.229
Y1 18,397 12,779 6,759 5,153
Y2 20,036 13,113 5,923 4,384
Annexe 5 :Dosage des Polyphénols pour les extrait Méthanoïque :
Blanc=0.087
contraction 10 mg 5 mg 2.5 mg 1.25 mg
Répétition N°1 2.028 1.264 1.116 0.886

Répétition N°2 1.858 1.235 1.080 0.874
Y1 173.398 105.787 92.690 72.336
Y2 158.353 103.221 89.504 71.274
Annexe 6 :Dosage des Flavonoïdes pour les extrait Méthanoïque :
Blanc=0.057
contraction 10 mg 5 mg 2.5 mg 1.25 mg
Répétition N°1 1.235 0.932 0.597 0.429

Répétition N°2 1.311 0.953 0.590 0.530
Y1 38.030 27.896 16.692 11.073
Y2 40.571 28.598 16.458 14.451
Annexe
Activité antiradicalaire : Blanc=0.898

Annexe 7 :Activité
concertation 10 5 2,5
DO1 Extrait
xtrait 0,186 0,217 0,225
aqueux
DO2 Extrait
méthanoïque 0,165 0,200 0,330
Y1 79,287 75,835 74,944
Y2 81,625 77,728 63,251
Annex8 :antibactérienne
RESUME
Teucrium polium est une plante médicinale aromatique à la famille lamiacée, utilisée
depuis longtemps dans la médicine traditionnelle Algérienne.
L’objectif de cette étude était de quantifier les substances bioactifs contenus dans T
polium, particulièrement les polyphénols et les flavonoïdes et d’en évaluer leur propriété
antioxydante et antibactérienne ; extraite de la partie aérienne qui a été récoltée de la région
Ouled-gasm.
L’échantillon a été soumis à une macération dans le méthanol, et le rendement obtenu

de la partie aérienne est de 17,8%.
Dans une première partie on a concerné de la quantification des phénols totaux et des
flavonoïdes en utilisant deux extraits méthanoïques et aqueux. Les résultats sont variés entre
71,805 ± 0,7509 à 157,9997 ± 0,799 μg EAG/mg d'extrait méthanoïques, et entre 67,2035 ±
0,625 à 103,220 ± 0,125 μg EAG/mg d'extrait aqueux pour les polyphénols et entre 12,762 ±
2,388 à 39,3 ± 1,796 μg EQ/mg d’extraits méthanoïques et entre 4,768 ± 0,54 μg EAG/mg à
19,216 ± 1,158 μg EQ/mg pour les flavonoïdes respectivement. Ces résultats montrent la
richesse de Teucrium polium étudiée en composés phénoliques pour différents extrait,
différentes classes de ces derniers ont été identifiés par CCM avec les systèmes solvant :
Chloroforme / Méthanol (9:1), et n-hexane / diéthyléther (1:1), et n-
hexane/chloroforme/MeOH (7 :4 :1) dont les classes les plus répandu sont les flavonols,
flavones, anthocyanidine 3-glycosides et l’acide phénol.
Les extraits méthanoïque et aqueux ont aussi été testés pour leur potentiel biologique en
évaluant leur activité antioxydante, à l'aide du DPPH. L’extrait méthanoïque a présenté
l'activité anti-radiculaire la plus élevée avec un pourcentage de l’ordre de 81.63%, suivie par
l'extrait aqueux avec 79.29%. Une activité qui reste toujours inferieure de l’acide ascorbique
91.09%. On constate que l’activité réductrice est fortement liée à la teneur en polyphénols
avec (R2=0.9731, R2= 0.9535) et en flavonoïdes (R2=0.9998, R2= 0.9983).
L'activité antibactérienne a également testé sur huit souches bactériennes (Gram+ et Gram-)
selon la méthode de diffusion de disque, tous les extraits ont réagi positivement au moins sur
une des souches microbiennes testées ce qui confirme que la plante de Teucrium polium est
douée de propriétés antimicrobiennes.
Dans l’ensemble, les résultats obtenus sont prometteurs et ouvrent de nouvelles

perspectives dans le domaine des applications naturelles qui peuvent être une alternative
valable pour remplacer les produits chimiques.
Mots clés : Teucrium polium, screening phytochimique, Polyphénols, Flavonoïdes, Activité

Antioxydante et Antibactérienne.
‫اﻟﻣﻠﺧص‪:‬‬
‫اﻟﺧﯾﺎطﺔ ‪ Teucrium polium‬ﻧﺑـﺎت طﺑـﻲ وﻣﻌطـر ﯾﺳـﺗﺧدم ﻣﻧـذ زﻣـن طوﯾـل ﻓـﻲ اﻟطـب‬
‫اﻟﻘــدﯾم اﻟﺟ ازﺋــري ﺣﯾــث ﯾوﺻــﻲ اﻟﺧﺑ ـراء ﺑﺎﺳــﺗﺧدام اﻟﺧﯾﺎطــﺔ ﻟﻌــﻼج اﻟﻌدﯾــد ﻣــن اﻷﻣ ـراض ﻣﺛ ــل‬
‫اﺣﺗﺑﺎس اﻟﺑول واﻟﺟروح‪.‬‬
‫ﻧﻬدف ﻣن ﺧﻼل ﻫذﻩ اﻟدراﺳﺔ إﻟﻰ ﺗﺣدﯾد ﻛﻣﯾﺔ ﻛل ﻣـن اﻟﻔﯾﻧـوﻻت واﻟﻔﻼﻓوﻧﯾـدات اﻟﻣﺗواﺟـدة‬
‫ﻓــﻲ ﻧﺑــﺎت اﻟﺧﯾﺎطــﺔ ‪ Teucrium Polium‬اﻟﺟ ازﺋــري إﺿــﺎﻓﺔ إﻟــﻰ ﺗﻘﯾــﯾم ﺧﺻﺎﺋﺻــﻪ اﻟﻣﺿــﺎدة‬
‫ﻟﻸﻛﺳدة ﻛﻣﺎ ﺗم اﻟﺑﺣث ﻋـن ﻓﻌﺎﻟﯾﺗـﻪ اﻟﻣﺿـﺎدة ﻟـﺑﻌض أﻧـواع اﻟﺑﻛﺗﯾرﯾـﺎ اﻧطﻼﻗـﺎ ﻣـن ﻋﯾﻧـﺔ ﺟﻣﻌـت‬
‫ﻣن ﻣﻧطﻘﺔ أوﻻد ﻗﺎﺳم وﻻﯾﺔ أم اﻟﺑواﻗﻲ‪.‬‬
‫ﺗراوح ﻣردود اﺳﺗﺧﻼص اﻟﻣرﻛﺑﺎت اﻟﻔﯾﻧوﻟﯾـﺔ ﺑـﺎﻟﻧﻘﻊ ﻓـﻲ اﻟﻣﯾﺛـﺎﻧول إﻟـﻰ ‪ % 17.8‬أﻣـﺎ ﺑـﺎﻟﻧﻘﻊ‬
‫ﻓ ــﻲ اﻟﻣ ــﺎء ‪ %7.2‬ﻟﺣﺳ ــﺎب ﻛﻣﯾ ــﺔ اﻟﻔﯾﻧ ــوﻻت واﻟﻔﻼﻓوﻧوﯾ ــدات اﻟﻣﺗواﺟ ــدة ﻓ ــﻲ ﻫ ــذا اﻟﻣﺳ ــﺗﺧﻠص‬
‫اﺳــﺗﻌﻣﻠﻧﺎ ﻛــل ﻣــن اﻟﻣﺳﺗﺧﻠﺻــﯾن اﻟﻣﯾﺛــﺎﻧوﻟﻲ واﻟﻣــﺎﺋﻲ واﺳــﺗﻌﻣﻠﻧﺎ ﻛــل ﻣــن ‪Folin Ciocalteu‬‬
‫و‪ AlCl3‬ﻋﻠ ــﻰ اﻟﺗرﺗﯾ ــب‪ ،‬وﺗﺣﺻ ــﻠﻧﺎ ﻋﻠ ــﻰ ﻧﺗ ــﺎﺋﺞ ﺗراوﺣ ــت ﻣ ــﺎ ﺑ ــﯾن ‪ 70.805‬و ‪157.9997‬‬
‫ﻣﯾﻛروﻏـ ـرام ﻣﻛ ــﺎﻓﺊ ﻟﺣﻣ ــض اﻟﻐﺎﻟﯾ ــك‪/‬ﻣ ــﻎ ﺑﺎﻟﻧﺳ ــﺑﺔ ﻟﻠﻣﺳ ــﺗﺧﻠص اﻟﻣﯾﺛ ــﺎﻧوﻟﻲ وﻣ ــﺎ ﺑ ــﯾن ‪12.762‬‬
‫و‪ 39.3005‬ﺑﺎﻟﻧﺳ ــﺑﺔ ﻟﻠﻣﺳ ــﺗﺧﻠص اﻟﻣ ــﺎﺋﻲ‪ ،‬ﻫ ــذا ﺑﺎﻟﻧﺳ ــﺑﺔ ﻟﻌدﯾ ــدات اﻟﻔﯾﻧ ــول ﻓ ــﻲ ﺣ ــﯾن وﺟ ــدﻧﺎ‬
‫‪ 4.7685‬و ‪ 19.2165‬ﻣﯾﻛروﻏرام‪ ،‬ﺑﺎﻟﻧﺳﺑﺔ ﻟﻠﻔﻼﻓوﻧوﯾدات وﻫذا ﯾﺑﯾن أن ﻧﺑـﺎت اﻟﺧﯾﺎطـﺔ ﻏﻧـﻲ‬
‫ﺑﻌدﯾدات اﻟﻔﯾﻧول واﻟﺗﻲ ﺗم ﺗﺣدﯾد اﻟﺑﻌض ﻣﻧﻬﺎ ﺑﺎﺳﺗﻌﻣﺎل اﻟﻛروﻣﺎﺗوﻏراﻓﯾﺎ اﻟطﺑﻘﺔ اﻟرﻗﯾﻘﺔ‪.‬‬
‫ﻛﻣــﺎ ﺗــم اﺧﺗﺑــﺎر اﻟﻣﺳﺗﺧﻠﺻــﺎت اﻟﻣﯾﺛﺎﻧوﻟﯾــﺔ واﻟﻣﺎﺋﯾــﺔ ﻹﻣﻛﺎﻧﺎﺗﻬــﺎ اﻟﺑﯾوﻟوﺟﯾــﺔ ﻣــن ﺧــﻼل ﺗﻘﯾــﯾم‬
‫ﻧﺷﺎطﻬﺎ اﻟﻣﺿﺎد ﻟﻸﻛﺳدة ‪ ،‬ﺑﺎﺳﺗﺧدام ‪ .DPPH‬أظﻬـر اﻟﻣﺳـﺗﺧﻠص ‪ methanoic‬أﻋﻠـﻰ ﻧﺷـﺎط‬
‫ﻣﺿﺎد ﻟﻠﺟذور ﺑﻧﺳﺑﻪ ‪ ، ٪81.63‬ﯾﻠﯾﻪ ﻣﺳﺗﺧﻠص ﻣﺎﺋﻲ ﺑﻧﺳـﺑﺔ ‪ .٪79.29‬ﻧﺷـﺎط ﻻ ﯾـزال داﺋﻣـﺎ‬
‫أﻗــل ﻣــن ﺣﻣــض اﻻﺳــﻛورﺑﯾك ‪ .٪ 91.09‬وﺗﺟــدر اﻹﺷــﺎرة إﻟــﻰ أن ﻫــذا اﻟﻧﺷــﺎط ﺧﻔــض ﻣ ـرﺗﺑط‬
‫ﺑﻘـوة ﻟﻣﺣﺗـوى اﻟﺑوﻟﯾﻔﯾﻧـول ﻣـﻊ )‪ (R2 = 0.9535 ،R2 = 0.9731‬وﻓﻼﻓوﻧﯾـدات ) = ‪R2‬‬
‫‪.(R2 = 0.9983 ،0.9998‬‬
‫ﺗـ ــم اﺧﺗﺑـ ــﺎر اﻟﻧﺷـ ــﺎط اﻟﻣﺿـ ــﺎد ﻟﻠﺑﻛﺗﯾرﯾـ ــﺎ أﯾﺿـ ــﺎ ﻋﻠـ ــﻰ ﺛﻣﺎﻧﯾـ ــﺔ ﺳـ ــﻼﻻت ﺑﻛﺗﯾرﯾـ ــﺔ )‪+Gram‬‬
‫و‪ (-Gram‬وﻓﻘــﺎ ﻟطرﯾﻘــﺔ اﻟﻘــرص ﻧﺷــرﻫﺎ‪ ،‬وﻛــﺎن رد ﻓﻌــل ﺟﻣﯾــﻊ اﻟﻌﯾﻧــﺎت ﺑﺷــﻛل إﯾﺟــﺎﺑﻲ واﺣــد‬
‫‪ tecrium‬ﻣﺻـ ــﻧﻊ‬ ‫ﻋﻠ ــﻰ اﻷﻗـ ــل ﻣ ــن ﺳـ ــﻼﻻت ﻣﯾﻛروﺑﯾـ ــﺔ اﺧﺗﺑ ــرت ﻣﻣـ ــﺎ ﯾؤﻛ ــد أن ‪polium‬‬
‫ﺧﺻﺎﺋص ﻣﺿﺎدة ﻟﻠﻣﯾﻛروﺑﺎت‪.‬‬
‫وﻋﻣوﻣﺎ ‪ ،‬ﻓﺈن اﻟﻧﺗﺎﺋﺞ واﻋـدة وﻓـﺗﺢ آﻓـﺎق ﺟدﯾـدة ﻓـﻲ ﻣﺟـﺎل اﻟﺗطﺑﯾﻘـﺎت اﻟطﺑﯾﻌﯾـﺔ اﻟﺗـﻲ ﯾﻣﻛـن‬
‫أن ﺗﻛون ﺑدﯾﻼ ﺻﺎﻟﺣﺎ ﻟﯾﺣل ﻣﺣل اﻟﻣواد اﻟﻛﯾﻣﯾﺎﺋﯾﺔ‪.‬‬
‫ﻛﻠﻣـ ــﺎت ﻣﻔﺗﺎﺣﯾـ ــﺔ‪ ،Tecrium Polium :‬وﻓﺣـ ــص اﻟﻛﯾﻣﯾـ ــﺎﺋﻲ اﻟﻧﺑـ ــﺎﺗﻲ‪ ،‬ﻣـ ــﺎدة اﻟﺑوﻟﯾﻔﯾﻧـ ــول‪،‬‬
‫اﻟﻔﻼﻓوﻧوﯾد‪ ،‬اﻟﻧﺷﺎط اﻟﻣﺿﺎد ﻟﻸﻛﺳدة وﻣﺿﺎد ﻟﻠﺑﻛﺗﯾرﯾﺎ‪.‬‬

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REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE

Evaluation du contenu phénolique et des

Ounis Roumaissa et Bouma

Présidente : Mme Adjel Farah MCB Univ.OEB

Rapporteur : Mme Karouche Saida MCB Univ.OEB

Examinatrice : Mme Amokrane Assia MAA Univ.OEB

Co -Rapporteur : Dr. khaldi sofiane médecin microbiologiste

Année universitaire : 2017-2018

A mes amis et collègues : Salah, Abla, Meryem, maryouma

A ma chéré mère qui était la source d’amour

Mon sœur zoubida

A mes chers frères

A mes amis et collègues : amel, kanza , rime,

rayhana ,ilham , lamia,rahma

Sa validité, ses grandes qualités scientifiques et humaines ont contribué

Nous remercions les membres du jury d’avoir accepté de juger notre

Dr la présidente Mme Adjel Farah et l'examinatrice Mme Amokrane

Nous remercions également tous les membres de laboratoire de

Nous voudrons aussi exprimer toute notre gratitude

Nous remercions également le médecin Spécialiste en microbiologie Dr.

Merci à mes parents sans qui tout cela

Chapitre II : Métabolites secondaires

Chapitre III: les antioxydants

I.1.1. Screening phytochimique…………………………………………………..41

I.2.analyse quantitative …………………………………………………..……….46

L’Algérie recèle d’un patrimoine végétal important par sa richesse et sa

Parmi la diversité de plantes méditerranéennes, se trouvent de nombreuses

Les plantes médicinales contiennent un grand nombre de molécules actives

La plante choisie dans notre travail est de la famille Lamiaceae, nommée

Le présent manuscrit, s’articule autour de trois parties :

I. La famille des lamiaceae :

Ce sont généralement des plantes herbacées odorantes, à tiges quadrangulaires feuilles

I.1.1. Famille des lamiaceae :

La famille des Lamiacées (Lamiaceae) ou Labiées (Labiatae) est une importante

Cette famille comporte de nombreuses plantes exploitées pour les essences ou

Cette famille est donc caractérisée par :

- une corolle gamopétale irrégulière à deux lèvres, la supérieure formée de

- quatre étamines dont deux plus longues ;

- des feuilles opposées et, souvent, une tige de section carrée.

I.2. Systématique des lamiacées :

Le fruit sec se séparant en quatre articles contenants chacun une graine

La classification des lamiacées selon Quezel et Santa, en (1963) :

I.3.Intérêt nutritionnel et pharmacologique :

Cette famille est l'une des principales sources de légumes et de plantes

Notons également que plusieurs espèces de cette famille sont utilisées en

I.4.Chimie des Lamiaceae

Les huiles essentielles sont des mélanges complexes constitués de plusieurs

antibactériennes et antifongiques appartiennent à la famille des Lamiaceae : thym,

terpénoïdes, de courte chaîne, d’huiles essentielles sont responsables de l'odeur et

goût dans ces plantes (Harborne et al., 1986 ; Bruneton, 1999).

Plusieurs études sur l’effet bactériostatique, spasmolytique et anti-

inflammatoire de Teucrium sont rapportées dans la littérature. Cet effet est

probablement dû à la présence de plusieurs monoterpènes du cyclopentanoide dans

majoritaires suivants : L’oxyde de pipéritone et l’oxyde de piperiténone (Brada et al.,

Le nom générique des germandrées désigne en Latin "teucrion" en grec

Un grand nombre de travaux ont été publiés récemment sur la taxonomie de ce

Nom scientifique : Teucrium polium L.

Nom commun : mountain germander (Anglais), pouliot de montagne, germandrée

Tomenteuse, germandrée blanc-grisâtre (Français) ; poliot, camendrio di montagna,